JP2013515727A - 抗菌剤としてのキブデロスポランギウム（ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）由来抽出物 - Google Patents

Abstract

本発明は、ヒトおよび動物の細菌感染および関連する疾患および状態の治療および／または予防に有用な式（Ｉ）および式（ＩＩ）の新規化合物ならびにそれらの薬学的に許容される塩；このような化合物を含有する組成物；発酵および単離、部分合成ならびに全合成によるこのような化合物の誘導；細菌増殖の阻害法；細菌感染の治療法、予防法または制御法；このような化合物が生成し得る細菌株の生物学的に純粋な培養物；ならびにこのような化合物を含有する組成物の調製法に関する。

Description

本発明は、新規化合物およびそれらの薬学的に許容される塩；このような化合物を含有する組成物；発酵および単離、部分合成および全合成によるこのような化合物の誘導；細菌増殖の阻害法；細菌感染の治療法、予防法または制御法；このような化合物が生成し得る細菌株の生物学的に純粋な培養物；ならびにこのような化合物を含有する組成物の調製法に関する。本開示の新規化合物、それらの薬学的に許容される塩、およびこのような化合物と薬学的に許容される塩とを含む組成物は、細菌感染ならびに関連する疾患および状態の治療および／または予防に有用である。

細菌病原体の多くが様々な汎用抗生物質に耐性となったため、細菌に起因する感染への医学的関心が高まっている。このような微生物は、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、スタフィロコッカス・エピデルミディス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）、スタフィロコッカス・ヘモリティクス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）、ストレプトコッカス・ピオゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、エンテロコッカス・フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）、エンテロコッカス・フェシウム（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃｉｕｍ）、ヘモフィルス・インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、シュードモナス・エルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、アシネトバクテル・カルコアセチクス（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）、エスチェリキア・コライ（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、ステノトロフォモナス・マルトフィリア（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ ｍａｌｔｏｐｈｉｌｉａ）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）および他の病原細菌を含む。Ｆ．Ｄ．Ｌｏｗｙ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ｔｈｅ ｅｘａｍｐｌｅ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，１１１（９）Ｊ．ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮ１２６５（２００３）；Ｇｅｏｒｇｅ Ｔａｌｂｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｄ Ｂｕｇｓ Ｎｅｅｄ Ｄｒｕｇｓ：Ａｎ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ Ｔａｓｋ Ｆｏｒｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，４２ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ ＤＩＳＥＡＳＥＳ ６５７（２００６）；Ｂｒａｄ Ｓｐｅｌｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ａ Ｃａｌｌ ｔｏ Ａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，４６ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ ＤＩＳＥＡＳＥＳ １５５（２００７）を参照のこと。このような多剤耐性生物に対して有効な新規抗菌化合物の必要性、および本分野への懸命な取り組みにもかかわらず、ＦＤＡに承認された新規な抗生物質化合物はほとんどない。

従って、既知の抗生物質に耐性のある細菌を含む細菌の増殖を阻害する強力な抗生物質剤が依然必要である。

Ｆ．Ｄ．Ｌｏｗｙ，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ：ｔｈｅ ｅｘａｍｐｌｅ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，１１１（９）Ｊ．ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩＯＮ１２６５（２００３） Ｇｅｏｒｇｅ Ｔａｌｂｏｔ ｅｔ ａｌ．，Ｂａｄ Ｂｕｇｓ Ｎｅｅｄ Ｄｒｕｇｓ：Ａｎ Ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｐｉｐｅｌｉｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ Ｔａｓｋ Ｆｏｒｃｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，４２ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ ＤＩＳＥＡＳＥＳ ６５７（２００６） Ｂｒａｄ Ｓｐｅｌｌｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−Ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ：Ａ Ｃａｌｌ ｔｏ Ａｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，４６ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＮＦＥＣＴＩＯＵＳ ＤＩＳＥＡＳＥＳ １５５（２００７）

本発明は、式Ｉおよび式ＩＩの化合物：

ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される化合物に関し、式中：
Ｒ^１およびＲ^２は水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；
Ｒ^３は水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキル基から成る群から選択される。

これらの化合物は、広範囲の活性をもつ強力な抗生物質剤であり、ヒトおよび動物の細菌感染に関連する病原体に対して使用できる。

本発明のさらなる態様は、本発明の化合物の混合物を含む組成物ならびに本発明の化合物を含む医薬組成物および製剤に関する。さらに、本発明の態様は、本発明の化合物の調製法、細菌増殖の阻害法、本発明の化合物を用いたヒトおよび動物の細菌感染の治療法および予防法、ならびに本発明の化合物を用いたヒトおよび動物の細菌感染の制御法に関する。

図１は化合物Ａの^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。 図２は化合物Ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。 図３は化合物Ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルである。

本発明の第一実施形態は、式Ｉ：

の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される精製化合物に関し、式中：Ｒ^１およびＲ^２は水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；Ｒ^３は水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキルから成る群から選択される。該実施形態のあらゆる態様において、全ての他の変形は一般式で上述される通りである。

本発明の第二実施形態は、式ＩＩ：

の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩から選択される精製化合物に関し、式中：Ｒ^１およびＲ^２は水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；Ｒ^３は水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキルから成る群から選択される。該実施形態のあらゆる態様において、全ての他の変形は一般式で上述される通りである。

本発明の第三実施形態において、Ｒ^１は水素および塩素から成る群から選択される。該実施形態のあらゆる態様において、全ての他の変形は一般式または第一および第二の１以上の実施形態で上述される通りである。

本発明の第四実施形態において、Ｒ^２は水素および塩素から成る群から選択される。この実施形態のあらゆる態様において、全ての他の変形は一般式または第一から第三の１以上の実施形態で上述される通りである。

本発明の第五実施形態において、Ｒ^３は水素、メチルおよびエチルから成る群から選択される。この実施形態の特定態様において、Ｒ^３は水素およびメチルから成る群から選択される。この実施形態のあらゆる態様において、全ての他の変形は一般式または第一から第四の１以上の実施形態で上述される通りである。

本発明の第六実施形態において、精製化合物は、

ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。

本発明の第六実施形態の第一態様において、精製化合物は、

ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。この第一態様の第一例において、精製化合物は、

およびそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。この第一態様の第二例において、精製化合物は、

およびそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。

本発明の第六実施形態の第二態様において、精製化合物は、

ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。この第二態様の第一例において、精製化合物は、

およびそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。この第二態様の第二例において、精製化合物は、

およびそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される。

本発明の第七実施形態は、一般式または第一から第六の１以上の実施形態で上述した１以上の化合物を含む精製または部分精製の細菌抽出物を対象とする。

本発明の他の実施形態は、下記を含む：
（ａ）一般式または第一から第六の１以上の実施形態で上述した１以上の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
（ｂ）細菌増殖の阻害法であって、一般式または第一から第六の１以上の実施形態で上述した１以上の有効量の化合物を用いて治療する工程を含む方法。
（ｃ）哺乳類被験体における細菌感染の治療法および予防法であって、一般式または第一から第六の１以上の実施形態で上述した１以上の治療有効量の化合物を該被験体に投与する工程を含む方法。
（ｄ）上記（ｃ）の方法であって、該細菌感染が、バチルス・サブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエ、ヘモフィルス・インフルエンザ、またはスタフィロコッカス・ヘモリティクス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、シュードモナス・エルギノサ、アシネトバクテル・カルコアセチクス、ステノトロフォモナス・マルトフィリア、もしくはクロストリジウム・ディフィシルを含む他の細菌により引き起こされる方法。
（ｅ）哺乳類被験体における細菌感染の制御法であって、一般式または第一から第六の１以上の実施形態で上述した１以上の治療有効量の化合物を該被験体に投与する工程を含む方法。
（ｆ）上記（ｅ）の方法であって、該細菌感染が、バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、スタフィロコッカス・エピデルミディス、エンテロコッカス・フェカリス、エンテロコッカス・フェシウム、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエ、ヘモフィルス・インフルエンザ、またはスタフィロコッカス・ヘモリティクス、ストレプトコッカス・ピオゲネス、シュードモナス・エルギノサ、アシネトバクテル・カルコアセチクス、ステノトロフォモナス・マルトフィリアもしくはクロストリジウム・ディフィシルを含む他の細菌により引き起こされる方法。
（ｇ）ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−１０３５４としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されたシュードノカルディアシエ（Ｐｓｅｕｄｏｎｏｃａｒｄｉａｃｅａｅ）科キブデロスポランギウム（Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）属種（ＭＡ７３８５）の細菌株の生物学的に純粋な培養物、またはそれらに由来する生物学的に純粋な培養物。
（ｈ）第六実施形態で上述した組成物を調製するプロセスであって、ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−１０３５４としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されたシュードノカルディアシエ科キブデロスポランギウム属種（ＭＡ７３８５）の細菌株の培養物またはそれらに由来する生物学的に純粋な培養物を培養および発酵する工程を含むプロセス。

本発明は、（ａ）細菌増殖の阻害、または（ｂ）細菌による感染の予防もしくは治療に、（ｉ）使用するため、（ｉｉ）薬剤として使用するため、または（ｉｉｉ）薬剤の調製で使用するための本発明の化合物も含む。これらの使用において、本発明の化合物は、β−ラクタム類、キノロン類、オキサゾリジノン類、バンコマイシン、サルファ剤およびダプトマイシンなどの臨床上有用な剤から選択される少なくとも１つの独立的に選択される追加治療剤と組み合わせて使用してもよい。

本発明のさらなる実施形態は、上記（ａ）から（ｈ）に記載の医薬組成物、組み合わせ、および方法、ならびに前段落に記載の使用を含み、そこで使用される本発明の化合物は、上記化合物の実施形態、態様、種類、下位種類、または特徴の１つの化合物である。これらの実施形態の全てにおいて、化合物は、必要に応じて、薬学的に許容される塩の形態で使用されてもよい。

上記で提供される実施形態において、式Ｉおよび式ＩＩの化合物は、遊離塩基、遊離酸、薬学的に許容される塩、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の水和物または溶媒和物が安定化合物を提供し且つ実施形態の記載と一致する範囲で、該遊離塩基、遊離酸もしくは薬学的に許容される塩の形態で、または該水和物もしくは溶媒和物として提供されてもよいと解釈されるべきである。

従って、本明細書の「式Ｉの化合物」および／または「式ＩＩの化合物」についてのいかなる言及も、遊離塩基形態または遊離酸形態、ならびに任意の薬学的に許容される塩、水和物または溶媒和物が安定な化合物を表し且つ実施形態の記載と一致するという条件で、これらの形態についての言及も含む。それぞれの実施形態は、具体的に記載または列挙されていなくとも、１以上の他の実施形態との組み合わせが安定な化合物を提供し且つ実施形態の記載と一致する範囲で、該実施形態と組み合わせてよいとも解釈されるべきである。「安定な」化合物とは、その構造および性質が残存したまま調製および単離できる化合物、または本明細書に記載の目的で（例えば、被験体への治療投与または予防投与）化合物を使用できる十分な期間本質的に不変のままでいられる化合物である。

さらに、上記（ａ）から（ｈ）として提供される組成物および方法の実施形態は、実施形態の組み合わせによる結果としての実施形態を含む、化合物のあらゆる実施形態を含むと解釈されるべきである。

本明細書で用いられるように、他に指摘がない限り、下記の用語は表示の意味を有する。

本明細書で用いられるように、必ずしも明確に記載される必要なしに、全ての範囲は包括的であり、全ての下位範囲はこのような範囲内に含まれる。その上、本明細書で用いられるように、「または」という用語は、適切な場合には組み合わせてもよい選択肢を意味し、即ち、「または」という用語は、列挙される各選択肢を個別でも組み合わせでも含む。

本明細書で用いられるように、「アルキル」という用語は、指定範囲で幾つかの炭素原子を有する任意の直鎖または分枝鎖のアルキル基を指す。従って、例えば、「Ｃ_１−６アルキル」（または「Ｃ_１−Ｃ_６アルキル」）とは、ヘキシルアルキルおよびペンチルアルキルのあらゆる異性体ならびにｎ−、イソ−、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−およびイソプロピル、エチルおよびメチルを指す。他の例として、「Ｃ_１−４アルキル」とは、ｎ−、イソ−、ｓｅｃ−およびｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−およびイソプロピル、エチルおよびメチルを指す。

「ハロゲン」、「ハロゲン原子」および「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を指す（あるいはフルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードと呼ばれる）。

置換基および置換様式の選択の結果として、本発明のある化合物は、不斉中心を有し、立体異性体の混合物として、または個々のジアステレオマーとして、またはエナンチオマーとして存在し得る。特許請求される化合物の全ての異性体形態は、単離または混合にかかわらず、本発明の範囲内である。

式Ｉおよび式ＩＩの化合物において、原子はその天然同位体存在度を示してもよく、または、同一の原子番号を有するが天然で主に見出される原子質量または質量数と異なる原子質量または質量数を有する特定の同位体が１以上の原子に人為的に濃縮されていてもよい。本発明は一般式Ｉおよび一般式ＩＩの化合物のあらゆる適切な同位体変型を含むことを意味する。例えば、水素（Ｈ）の異なる同位体型はプロチウム（^１Ｈ）および重水素（^２Ｈ）を含む。プロチウムは天然で見出される主な水素同位体である。重水素の濃縮は、インビボ半減期の増加もしくは必要用量の減少など、特定の治療上の利点を提供し、または生体試料の特性化用の基準として有用な化合物を提供し得る。一般式Ｉおよび一般式ＩＩにおける同位体濃縮化合物は、過度の実験を行うことなく、当業者に周知の従来技術により、または適切な同位体濃縮試薬および／または中間体を用いて本明細書の実施例に記載するプロセスと類似のプロセスにより、調製できる。

当業者に認識されているように、本発明のある化合物は互変異性体として存在し得る。本発明の目的上、式Ｉおよび式ＩＩの化合物についての言及は、該化合物それ自体、またはその互変異性体それ自体のいずれか１つ、または２以上の互変異性体の混合物についての言及である。

本明細書で用いられるように、「組成物」という用語は、指定成分を含む製品、ならびに指定成分の組み合わせに直接的または間接的に起因する任意の製品を包含することを意図する。

本発明の化合物は、以下に記載するように、生体試料から得られてもよく、生体試料から得られる化合物の化学修飾により生成されてもよく、または化学合成されてもよい。本発明の化合物は、天然に存在する化合物および化合物の混合物として提供されてもよく、または「精製」化合物を生成するために単離および精製されてもよい。本発明の化合物は、天然に存在する化合物および化合物の混合物を含有する組成物として提供されてもよく、または「精製」組成物を生成するために単離および精製されてもよい。

本明細書で用いられるように、「精製」という用語は、最初または天然の状態で式Ｉおよび式ＩＩの所望化合物に通常付随する１以上の成分を欠く環境の化合物または組成物を指す。「精製」についての言及は化合物の環境を指し、必ずしも精製を要しない。精製化合物または精製組成物は、例えば産生株からの単離により、合成手段により、精製段階により、または手段の組み合わせにより生成できる。例えば、式Ｉおよび式ＩＩの化合物の混合物を含む組成物は、特許請求された混合物以外の任意の発酵成分を実質的に欠く形態で提供される場合には、「精製」組成物と呼ばれ得る。同様に、細菌株の生物学的に純粋な試料から単離される組成物は、１以上の成分が単離プロセスまたは精製プロセスにより除去される場合には、「精製」組成物であり得る。実施形態において、「精製」とは、存在する総質量に対して、所望する化合物または組成物の質量の百分率として定義される、５０％〜９９％の純度を有する化合物または組成物を指し得る。特定の実施形態において、化合物または組成物は、５０％の純度、６０％の純度、７５％の純度、９０％の純度、９５％の純度、９８％の純度または９９％の純度を有し得る。

本明細書で用いられるように、細菌株の「生物学的に純粋な試料」という用語は、天然で見出されない形態で提供される対象の細菌株試料を指し、即ち、細菌株の生物学的に純粋な試料は対象の細菌株を含有するが、細菌株、細菌物質および／または他の生体物質を実質的に欠く。

本明細書で用いられる「被験体」（あるいは本明細書で「患者」と呼ばれる）という用語は、動物、好ましくは治療、観察または実験の対象であった哺乳類を指す。本明細書で用いられる「哺乳類」という用語は、最も好ましくはヒト、ならびにネコ、イヌ、家畜類などの家畜動物を含む温血動物を含むことを意図する。

式Ｉおよび式ＩＩの化合物ならびにそれらの薬学的に許容される塩は、本明細書で「活性成分」とも呼ばれ、従来の医薬配合技術に従って、薬学的に許容される担体を用いて組成物または製剤に調合される場合に最も効果的に利用される。「組成物」という用語は、「医薬組成物」と同様に、担体を構成する１以上の活性成分および不活性成分を含む製品を包含することを意図する。「組成物」という用語は、任意の２以上の活性成分および／または不活性成分の組み合わせ、錯体形成、凝集または他の相互作用に直接的または間接的に起因する任意の製品；１以上の活性成分および／または不活性成分の解離に直接的または間接的に起因する任意の製品；ならびに１以上の活性成分および／または不活性成分の反応の任意の他の型に起因する任意の製品を包含することも意図する。

医薬組成物は、少なくとも活性成分の治療上有効な抗生物質量を含有する。本明細書で用いられる「治療有効量」とは、所望する治療効果を生じるのに十分な活性成分の量を指す。例えば、化合物の治療上有効な抗生物質量とは、抗生物質活性を立証しならびに／または１以上の細菌株の増殖を阻害するのに十分な量である。医薬組成物における活性成分の治療上有効な抗生物質量は、患者の体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇの活性成分から患者の体重１ｋｇ当たり約１０００ｍｇの活性成分までの範囲で提供されてもよい。

「薬学的に許容される」とは、医薬組成物の成分が互いに適合性でなければならないこと、およびその服用者に有害でないことを意味する。

本発明の化合物は、薬学的に許容される塩の形態で投与されてもよい。「薬学的に許容される塩」という用語は、親化合物の有効性を所有する塩、および生物学的にまたは他に有害ではない塩（例えば、その服用者に毒性でもなく、さもなければ有害でもない）を指す。式Ｉおよび式ＩＩの化合物の適切な薬学的に許容される塩は、例えば、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩およびカリウム塩）などの無機塩基塩、アンモニウム塩、および有機塩基塩を含む。適切な有機塩基塩は、アミン塩、例えばテトラ−アルキル−アンモニウム塩（例えば、テトラブチルアンモニウムおよびトリメチルセチルアンモニウム）、トリアルキルアミン塩（例えば、トリエチルアミン）、ジアルキルアミン塩（ジシクロヘキシルアミン）、置換されていてもよいベンジルアミン（例えば、フェニルベンジルアミンおよびパラ−ブロモベンジルアミン）、エタノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルグルコサミン、Ｎ−メチルピペリジン、ピリジン、置換ピリジン（例えば、コリジン、ルチジンおよび４−ジメチルアミノピリジン）、ならびにトリ（ヒドロキシメチル）メチルアミン塩；ならびにアミノ酸塩（例えば、リシンまたはアルギニン塩）を含む。

本発明の化合物に関して「投与」という用語およびその変形（例えば、化合物を「投与する」）は、治療の必要性がある個体への化合物、または化合物のプロドラッグの提供を意味する。本発明の化合物またはそのプロドラッグが１以上の他の活性剤（例えば、細菌感染の治療に有用な剤）と組み合わせて提供される場合、「投与」およびその変形はそれぞれ化合物、塩、水和物または溶媒和物、および他の剤の同時供給および連続供給を含むと解釈される。

本明細書で用いられる「有効量」という用語は、研究者、獣医、医師または他の臨床医により探求されている組織、系、動物またはヒトの生物学的応答または医薬応答を引き起こす活性化合物または医薬剤の量を意味する。一実施形態において、有効量は治療される疾患または状態の症状緩和に「治療有効量」である。他の実施形態において、有効量とは、発生の可能性または重症度が減少する疾患または状態の症状予防に「治療有効量」である。該用語は本明細書において細菌増殖を阻害することにより探求されている応答を引き起こすのに十分な活性化合物の量も含む（即ち、「阻害に有効な量」）。活性化合物（即ち、活性成分）が塩として投与される場合、活性成分の量についての言及は化合物の遊離酸または遊離塩基の形態についてである。

医薬組成物は、１以上の活性成分と担体とを念入りに混合することにより調製してもよく、担体の成分は所望の媒体を提供するように選択してもよい。例えば、調合されたクリームまたはローションは、約０．０１％から約９９％の活性成分濃度を提供するために、活性成分を適切に選択されたクリームまたはローション成分に混合することにより提供され得る。

本発明の態様による医薬組成物は、経口、局所、非経口（腹腔内（Ｉ．Ｐ．）、皮下、筋内および静脈内（Ｉ．Ｖ．）を含む）、鼻腔および坐薬投与、または吹送による投与に適した組成物として製剤されてもよい。

経口投与用に、実施形態の医薬組成物は液体または固体の組成物として製剤されてもよい。液体組成物は、活性成分と薬学的に許容される液体担体、例えば水、グリコール、油、アルコール等と組み合わせることにより調製してもよい。固体組成物用に、活性成分は、薬学的に許容される固体担体、例えば、デンプン、糖類、カオリン、エチルセルロース、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウム、タルクおよびラクトースと組み合わせてもよい。これらの固体担体は、ステアリン酸カルシウムなどの潤滑剤と、および／または結合剤−崩壊剤などと組み合わせてもよい。錠剤およびカプセルは投与し易いため、これらの剤形はある状況では最も有利な経口剤形を表し得る。単位剤形の組成物は、本発明の態様も構成する。

注射による投与用に、実施形態の医薬組成物は、懸濁液、溶液または乳濁液として製剤されてもよい。注射組成物用に薬学的に許容される担体は、油性賦形剤または水性賦形剤、例えば０．８５％塩化ナトリウム水または５％デキストロース水であってもよい。さらに、注射組成物は、配合剤、例えば緩衝剤、可溶化剤、懸濁剤および／または分散剤を含んでもよい。緩衝剤、ならびに生理食塩水またはグルコースなどの添加剤は、溶液を等張にするために添加してもよい。点滴用に、活性成分はアルコール／プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールに可溶化され得る。注射組成物は、液体組成物として、アンプルの単位剤形または複数回用量の容器で提供されてもよく、添加保存剤を含有してもよい。あるいは、活性成分は粉末形態で提供されてもよく、投与前に適切な液体賦形剤で再構成してもよい。

明細書および特許請求の範囲で用いられる「単位剤形」という用語は、物理的に個別の単位を指し、それぞれが、許容される担体とともに、所望する治療効果を生じるように計算された所定量の活性成分を含有する。このような単位剤形の例としては、錠剤、カプセル、ピル、粉末包、ウェハース、アンプルまたは複数回用量の容器の測定単位などが挙げられる。

本明細書に記載される化合物は、シュードノカルディアシエ科キブデロスポランギウム属種（ＭＡ７３８５）の細菌株、またはそれらに由来する細菌株およびそれらに由来する細菌株の生物学的に純粋な培養物の発酵、ならびに溶媒抽出により調製してよい。具体的には、本発明の化合物は、キブデロスポランギウム種（ＭＡ７３８５）の発酵またはキブデロスポランギウム種（ＭＡ７３８５）の子孫、後代もしくは突然変異体の細菌株の発酵により調製してもよい。実施形態において、細菌株の発酵および溶媒抽出により得られる化合物はさらに合成修飾され、追加の本発明の化合物を得てもよい。さらに、本発明の化合物は合成で調製してもよい。

キブデロスポランギウム種（ＭＡ７３８５）は、当初はストレプトマイセス株として同定されていたが、現在はキブデロスポランギウム株であると確認されており、中央アフリカ共和国の森林で収集された土壌試料から単離された。キブデロスポランギウム種（ＭＡ７３８５）は、ブダペスト条約の下、２００９年９月２３日にバージニア州２０１１０−２２０９マナサスのブールバード大学１０８０１でアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションの培養株保存施設に寄託され、ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−１０３５４と指定された。
［実施例］

発酵手順
キブデロスポランギウム種（ＭＡ７３８５）の発酵は、菌糸の付いた幾つかの寒天プラグをシード・ブロス・フラスコ（２５０ｍＬバッフル・フラスコ中５０ｍＬ培地）に植菌することにより遂行した。シード・ブロスの製剤は下記の通りである（指定しない限り、１リットル当たりのｇｍ）。

可溶性デンプン ２０．０
デキストロース １０．０
ＮＺアミンＥ型 ５．０
牛肉抽出物 ３．０
ペプトン ５．０
酵母抽出物 ５．０
ＣａＣ０_３ １．０
蒸留Ｈ_２０ １リットルまで
ｐＨは、ＣａＣ０_３の添加前にＮａＯＨで７．０に調整する。フラスコは、２８℃、８０％相対湿度でインキュベートし、回転式振とう機で２２０ｒｐｍで振とうした。

種段階（ｓｅｅｄ ｓｔａｇｅ）フラスコを３日間増殖する場合、１ｍＬのアリコートは、各フラスコのＦＲ２３産生培地（２５０のバッフル付でない（ｕｎｂａｆｆｌｅｄ）フラスコ中５０ｍＬ培地）に植菌するために用いる。配合は：
グルコース ５．０
可溶性デンプン ３０．０
甘蔗糖蜜 ２０．０
ファルマメディア（Ｐｈａｒｍａｍｅｄｉａ） ２０．０
蒸留Ｈ_２０ １リットルまで
から成る（１リットル当たりｇｍ）。

ｐＨは、滅菌前にＮａＯＨで７．０に調整した。フラスコは、２８℃、８０％相対湿度、回転式シェーカーで２２０ｒｐｍで７日間インキュベートした。

単離手法
１２Ｌの発酵培養液は、往復シェーカーで１時間有余振とうすることにより１２Ｌのアセトンで抽出した。菌糸内容物はセライト（ＣＥＬＩＴＥ）で濾過し、濾過物は減圧下で濃縮し、大半のアセトンを除去した。水性抽出物（１２Ｌ）は、それぞれ１２Ｌのメチルエチルケトン（ＭＥＫ）で３回抽出した。ＭＥＫ抽出物は混合し、減圧下で濃縮し、乾燥し、ゴムを得た。これは少量のメタノール（〜２０ｍＬ）に溶解し、４５０ｃｃセファデックス（ＳＥＰＨＡＤＥＸ）ＬＨ２０カラムでクロマトグラフを行った。カラムはメタノールで溶出し、化合物を含有する画分は収集し、減圧下で濃縮し乾燥した。ＬＨ２０画分の３分の１部分は、最小体積のメタノールに溶解し、９０部の塩化メチレンと１０部のメタノールの割合で塩化メチレンで希釈した。次いで、この溶液は、３５ｃｃ（１０ｇ）のシリカゲル・カートリッジに充填し、３〜４カラム体積で１０、２０、３０％メタノールを含む塩化メチレンを用いて洗浄した。対象の化合物は１０〜２０％メタノール画分に溶出した。このプロセスは残りの材料を用いて２回反復し、３カラムから収集した画分は減圧下で濃縮し、茶色のゴムを得た。シリカゲルからの濃縮物質は１０ｍＬのメタノールに溶解した。５分の１（２ｍＬ）は、１インチ逆相ＰＲＰ−１（ハミルトンのｐＨ安定ＨＰＬＣカラム、２５０×２１．５ｍｍ）で６０：４０から８０：２０のメタノール：０．２５Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７）の勾配溶出を用いて、４０分間１０ｍＬ／分の流速でクロマトグラフを行った。クロマトグラフィーは残りの材料を用いて４回反復した。５回のクロマトグラフ走行のそれぞれから３５〜３８、３９〜４０および４１〜４４で溶出する画分が収集された。これらの画分は４〜６ｍＬメタノールで３回粉砕した。該溶液は該化合物を含有し、緩衝液の大半は固体として残った。３５〜３８および４１〜４４の画分からのメタノール溶液は濃縮し、ゾルバックス（ＺＯＲＢＡＸ）ＲＸ Ｃ８（２５０ｘ２１．５ｍｍ）カラムで再クロマトグラフを行い、５０分の５０〜１００％水性メタノールの直線勾配で溶出した。各クロマトグラフィーからの主成分は凍結乾燥し、無色の粉末として下記の組成物を得た。

組成物Ａ
式Ｉの化合物Ａ−Ｉ

３−Ｏ−アセチル−１，５アンヒドロ−４−０−カルバモイル−６−デオキシ−１−［（４Ｚ）−４−［（５−｛［２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−（ｌ−｛［（３，４−ジクロロ−５−メチル−ｌＨ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝エチル）ヘキソピラノシル］オキシ｝−２−メチル−８−メチリデン−１，２，４ａ，５，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−１−イル）（ヒドロキシ）メチリデン］−５−オキソ−６−（プロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−１，３−オキサジン−２−イル］−２−０−メチルヘキシトール。

式ＩＩの化合物Ａ−ＩＩ

５−［（Ｚ）−［ｌ−（３−Ｏ−アセチル−４−０−カルバモイル−６−デオキシ−２−０−メチルヘキソピラノシル）−２，４−ジオキソ−５−（プロパン−２−イル）ピロリジン−３−イリデン］（ヒドロキシ）メチル］−６−メチル−４−メチリデン−ｌ，２，３，４，４ａ，５，６，８ａ−オクタヒドロナフタレン−ｌ−イル２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−（ｌ−｛［（３，４−ジクロロ−５−メチル−ｌＨ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝エチル）ヘキソピラノシド。

組成物Ａの物理特性は下記の通りに測定した：
図１は組成物Ａの炭素−１３（^１３Ｃ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである；特性ピークは表１に要約するように観測される。^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルはヴァリアン・イノヴァ（ＶＡＲＩＡＮ ＩＮＯＶＡ）５００または６００ＭＨｚ分光計のいずれかで収集し、^１３Ｃ原子核については１２５または１５０ＭＨｚのいずれかで操作した。化学シフトは残留ＣＤ_３ＯＤ（δｃ４９．０ｐｐｍ）を参照した。データは２５℃で３ｍｍＮＭＲ管で均一に収集した。ノルラック（ＮＯＲＬＡＣ）３ｍｍＨ｛ＣＮ｝間接Ｚ勾配プローブが全試料に用いられた。ヴァリアン標準パルス系列は全てのデータ収集に用いた。

図２は組成物Ａの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルである；特性ピークは表１に要約するように観測される。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルはヴァリアン・イノヴァ５００または６００ＭＨｚ分光計のいずれかで収集し、^１Ｈ原子核については５００または６００ＭＨｚのいずれかで操作した。化学シフトは残留ＣＨＤ_２ＯＤ（δ_Ｈ３．３０ｐｐｍ）を参照した。データは均一に２５℃で３ｍｍのＮＭＲ管で収集した。ノルラック３ｍｍＨ｛ＣＮ｝間接Ｚ勾配プローブが全試料に用いられた。ヴァリアン標準パルス系列は全てのデータ収集に用いた。

組成物Ａの紫外線（ＵＶ）吸収スペクトルは、ＭｅＯＨで採取し、λ_ｍａｘ（ｌｏｇε）＝２４８ｎｍ（ｓｈ）および２７６ｎｍ（４．４２）の特性吸収帯を示した。ＵＶスペクトルはパーキン・エルマー・ラムダ（ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲ ＬＡＭＢＤＡ）３５ＵＶ／Ｖｉｓ分光計で記録した。

組成物Ａの赤外（ＩＲ）吸収スペクトルは、ＺｎＳｅを用いて採取し、ｖ_ｍａｘ＝３４１７，２９３２，１７３２，１６１１，１５３７，１４５４，１３７６，１３１３，１２３３，１１５９，１０７９，１００４，８９３，８３０，７８９，７４５ｃｍ^−１の特性吸収帯を示した。ＩＲスペクトル・データは、パーキン・エルマー・スペクトラム・ワン（ＳＰＥＣＴＲＵＭ ＯＮＥ）分光計を用いてメタノールに溶解した少アリコートの組成物ＡをＺｎＳｅプレートに移すことにより得られた。

組成物Ａの高分解能質量スペクトルはＨＲＥＳＩＦＴＭＳ（ｍ／ｚ）を生成した：Ｍ＋Ｈの観測値＝９３９．３５６２、Ｃ_４４Ｈ_６０Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_１４ ^＋Ｈの計算値＝９３９．３５６１。高分解能質量スペクトルは、サーモ・フィニガン（ＴＨＥＲＭＯ ＦＩＮＮＩＧＡＮ）ＬＴＱ−ＦＴ分光計で、エレクトロスプレー・イオン化および１８ボルトに相当するソース・フラグメンテーションを備えたフィニガン・イオン・マックス（ＦＩＮＮＩＧＡＮ ＩＯＮ ＭＡＸ）源を用いて得られた。

組成物Ｂ
式Ｉの化合物Ｂ−Ｉ

３−Ｏ−アセチル−１，５−アンヒドロ−４−Ｏ−カルバモイル−６−デオキシ−１−［（４Ｚ）−４−［（５−｛［２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−（ｌ−｛［（３，４−ジクロロ−ｌＨ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝エチル）ヘキソピラノシル］オキシ｝−２−メチル−８−メチリデン−１，２，４ａ，５，６，７，８，８ａ−オクタヒドロナフタレン−１−イル）（ヒドロキシ）メチリデン］−５−オキソ−６−（プロパン−２−イル）−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−ｌ，３−オキサジン−２−イル］−２−Ｏ−メチルヘキシトール。

式ＩＩの化合物Ｂ−ＩＩ

５−［（Ｚ）−［ｌ−（３−Ｏ−アセチル−４−０−カルバモイル−６−デオキシ−２−０−メチルヘキソピラノシル）−２，４−ジオキソ−５−（プロパン−２−イル）ピロリジン−３−イリデン］（ヒドロキシ）メチル］−６−メチル−４−メチリデン−ｌ，２，３，４，４ａ，５，６，８ａ−オクタヒドロナフタレン−ｌ−イル２，６−ジデオキシ−３−Ｃ−（ｌ−｛［（３，４−ジクロロ−ｌＨ−ピロール−２−イル）カルボニル］アミノ｝エチル）ヘキソピラノシド。

図３は組成物Ｂの^１Ｈ ＮＭＲスペクトルであり；特性ピークは表１に要約するように観測される。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、ヴァリアン・イノヴァ５００または６００ＭＨｚ分光計のいずれかで収集し、^１Ｈ原子核については５００または６００ＭＨｚのいずれかで操作した。化学シフトは残留ＣＨＤ_２ＯＤ（δ_Ｈ３．３０ｐｐｍ）を参照した。データは均一に２５℃で３ｍｍのＮＭＲ管に収集した。ノルラック３ｍｍＨ｛ＣＮ｝間接Ｚ勾配プローブが全試料に用いられた。ヴァリアン標準パルス系列は全てのデータ収集に用いた。

組成物Ｂの高分解能質量スペクトルは、ＨＲＥＳＩＦＴＭＳ（ｍ／ｚ）を生成した：Ｍ＋Ｈの観測値＝９２５．３４１０、Ｃ_４３Ｈ_５８Ｃ_１２Ｎ_４０_１４ ^＋Ｈの計算値＝９２５．３４０５。高分解能質量スペクトルは、サーモ・フィニガンＬＴＱ−ＦＴ分光計で、エレクトロスプレー・イオン化および１８ボルトに相当するソース・フラグメンテーションを備えたフィニガン・イオン・マックス源を用いて得られた。

組成物Ａは、バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエおよびヘモフィルス・インフルエンザの株に対する抗菌活性について試験し、組成物ＡおよびＢはカンジダ・アルビカンスの制御に対して試験した。組成物Ｂはスタフィロコッカス・アウレウス株に対する抗菌活性について試験した。

培地および培地調製
下記の材料は組成物ＡおよびＢの試験に使用した：ＭＩＣサブロー（ＳＡＢＯＵＲＡＵＤ）デキストロース寒天プレート（ＢＢＬ）；マイクロバンク・ビーズ（ＭＩＣＲＯＢＡＮＫ Ｂｅａｄｓ）クレイマー・サイエンティフィック（ＫＲＡＭＥＲ ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ）；２０００マイクロタイター（ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ）プレート接種器；９６−ウェル・マイクロタイター・プレート、蓋、接種トレー（ダイネックス・ラボラトリーズ（ＤＹＮＥＸ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＩＥＳ）；および８−チャネル・フィン・マルチチャネル・ピペッター（８−ＣＨＡＮＮＥＬ ＦＩＮＮ ＭＵＬＴＩＣＨＡＮＮＥＬ）、０．５〜１０μＬ体積。全ての寒天プレートは製造業者から調製されて受理した。

下記の培地は組成物ＡおよびＢの試験に使用した：陽イオン調整ミューラー・ヒントン・ブロス（ＣＡＴＩＯＮ−ＡＤＪＵＳＴＥＤ ＭＵＥＬＬＥＲ ＨＩＮＴＯＮ ＢＲＯＴＨ）（ＭＨ；ＢＢＬ）；５０％溶解ウマ血（ＬＨＢ；ＢＢＬ）（凍結保存）；ＲＰＭＩ１６４０（バイオウィッタカー（ＢＩＯ ＷＨＩＴＴＡＫＥＲ））；ヒト血清（ペル−フリーズ（ＰＥＬ−ＦＲＥＥＺ））；ＲＰＭＩ１６４０（バイオウィッタカー）；ヘモフィルス試験培地（ＨＴＭ、レメル（ＲＥＭＥＬ））；トリプチケース・ソイ・ブロス（ＴＲＹＰＴＩＣＡＳＥ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ）（ＴＳＢ、５ｍＬ／管；ＢＢＬ）；０．９％塩化ナトリウム（生理食塩水；バクスター（ＢＡＸＴＥＲ））；トリプチケース・ソイ＋５％ヒツジ血寒天プレート（ＴＳＡ；ＢＢＬ）；チョコレート寒天プレート（ＢＢＬ）；２Ｘスキムミルク（レメル）；および２Ｘトリプチケース・ソイ・ブロス（ＴＳＢ、ＢＢＬ）＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清。培地は下記の通りに調製した：
陽イオン調整ミューラー・ヒントン・ブロス：製造業者の取扱説明書（２２ｇを１０００ｍＬの水に溶解；２２分オートクレーブ）に従って調製した。冷凍保存した。使用前にコーニング（ＣＯＲＮＩＮＧ）０．４５Ｔｍ酢酸セルロース・フィルターを用いて濾過滅菌した。

５０％溶解ウマ血：ウマ脱線維素血は滅菌蒸留水で１：１に希釈し、凍結し、解凍しおよび再凍結し（少なくとも７回）、次いで遠心分離した。−２０℃で凍結保存した。

陽イオン−調整ミューラー・ヒントン＋２．５％溶解ウマ血：５ｍＬの５０％溶解ウマ血を１００ｍＬ陽イオン−調整ミューラー・ヒントン・ブロスに無菌で添加した。使用前にコーニング０．４５Ｔｍ酢酸セルロース・フィルターを用いて濾過滅菌した。

陽イオン−調整ミューラー・ヒントン＋５０％ヒト血清：５０ｍＬのヒト血清を５０ｍＬの２Ｘ陽イオン−調整ミューラー・ヒントン・ブロスに無菌で添加した。使用前にコーニング０．４５Ｔｍ酢酸セルロース・フィルターを用いて濾過滅菌した。

ヘモフィルス試験培地：製造業者から調製され受理した。使用前にコーニング０．４５Ｔｍ酢酸セルロース・フィルターを用いて濾過滅菌した。

０．９％塩化ナトリウム：製造業者から調製され受理した。

２Ｘスキムミルク：製造業者から調製され受理した。

分離株の選択および維持管理
使用する株は、メルク・カルチャー・コレクション（Ｍｅｒｃｋ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）からの分離株である；これらの培養物は、−８０℃の凍結保存として、ａ）マイクロバンク・ビーズまたはｂ）２Ｘトリプチケース・ソイ・ブロス＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清で保存する。具体的には、株は下記の通りであった。

使用したバチルス・サブチリス株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＭＢ９６４として同定される。培養物は−８０℃でマイクロバンク・ビーズに凍結保存した。

使用したスタフィロコッカス・アウレウス株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＭＢ２８６５およびＭＢ５９５７として同定される。培養物は−８０℃でマイクロバンク・ビーズに凍結保存した。

使用したエンテロコッカス・フェカリス株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＣＬ８５１６として同定される。培養物は−８０℃でマイクロバンク・ビーズに凍結保存した。

使用したエスチェリキア・コライｅｎｖＡ１ ｔｏｌＣ株は、メルク・カルチャー・コレクションから入手した細胞壁透過性株であり、ΜＢ５７４６として同定される。培養物は−８０℃でマイクロバンク・ビーズに凍結保存した。

使用したストレプトコッカス・ニューモニエ株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＣＬ２８８３として同定される。培養物は−８０℃で２Ｘトリプチケース・ソイ・ブロス＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清に凍結保存した。

使用したヘモフィルス・インフルエンザ株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＭＢ４５７２として同定される。培養物は−８０℃で２Ｘトリプチケース・ソイ・ブロス＋１５％グリセロール／５０％ウマ血清に凍結保存した。ヘモフィルス・インフルエンザの株はメルクのインビボ試験に使用されるマウス病原体である。

使用したカンジダ・アルビカンス対照株はメルク・カルチャー・コレクションから入手し、ＭＹ１０５５として同定される。培養物は−８０℃でマイクロバンク・ビーズに凍結保存した。

接種材料の調製
選別された分離株は、トリプチケース・ソイ＋５％ヒツジ血寒天プレート（バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライおよびストレプトコッカス・ニューモニエ）、チョコレート寒天プレート（ヘモフィルス・インフルエンザ）またはサブロー・デキストロース寒天（カンジダ）のいずれかで継代培養し、３５℃でインキュベートした。ストレプトコッカス・ニューモニエおよびヘモフィルスは、５％ＣＯ_２でインキュベートし；他の全ての分離株は大気中でインキュベートした。分離株は検定前に２回継代培養した。

コロニーはプレートから選別し、トリプチケース・ソイ・ブロスの０．５Ｍｃファーランド（Ｆａｒｌａｎｄ）標準と同等の密度を有する接種材料を調製するために使用した；１．０Ｍｃファーランド標準と同等の密度の接種材料はストレプトコッカス・ニューモニエ用に調製した。全培養物の接種密度は、〜１０^８ＣＦＵ／ｍＬ・ＴＳＢであった。このＴＳＢ接種材料は、滅菌食塩水（４ｍＬ接種材料＋３６ｍＬ生理食塩水；〜１０^７ＣＦＵ／ｍＬと同等）で１：１０に希釈し、マイクロタイター・プレートに植菌するために使用するまで氷上で保った。

プレート充填
薬剤の原液および希釈
試験プレートはそれぞれの株について下記の通りに調製した。９６ウェル・プレート（１−１２縦列およびＡ−Ｈ横列）の各ウェルに、１００μＬの適切な試験培地（バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライ−陽イオン調整ミューラー・ヒントン・ブロス・プレート；ストレプトコッカス・ニューモニエ−陽イオン調整ミューラー・ヒントン・ブロス＋５％溶解ウマ血プレート；ヘモフィルス・インフルエンザ−ヘモフィルス試験培地プレート；カンジダ・アルビカンス−ＲＰＭＩ１６４０）をサーマル・ラボシステムズ・マルチドロップ（商標）ディスペンサーを用いて添加した。臨床検査標準協会（ＣＬＳＩ）（以前は国立臨床検査標準委員会（ＮＣＣＬＳ））の公式は、標準溶液に必要な希釈量を計算するために用いた。

組成物調製
試験組成物は重量ベースで調製した。試験組成物は、２ｍｇ／ｍＬを含む１００％ＤＭＳＯに調製した後、ＤＭＳＯ／２ｘＣＡＭＨＢ（最終濃度＝５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢ）の１：１希釈で１ｍｇ／ｍＬに希釈した。試験組成物は５０％ＤＭＳＯ／５０％ＣＡＭＨＢで１：１にＢＤバイオサイエンス・ディープ・ウェル・ポリプロピレン９６ウェル・プレート（出発濃度１ｍｇ／ｍＬ）に下記の通り連続希釈した：
各横列の第一ウェルに、１００μＬの化合物原液（１ｍｇ／ｍＬ）をマルチチャネル・マトリックス・ピペットで添加した。化合物は、パーキン・エルマー・セタス・プロ／ペッテ（ＣＥＴＵＳ ＰＲＯ／ＰＥＴＴＥ）（商標）希釈装置またはテカン（ＴＥＣＡＮ）（商標）で２倍に連続希釈し（各横列の第一ウェルから１００μＬ採取し、第二ウェルに入れて混合し、各横列の第二ウェルの１００μＬを採取し、第三ウェルに入れて混合する等）、縦列１１までプレートを横切って（縦列１２は増殖対照ウェル−無薬剤であった）、最後の１００μＬは廃棄し、６４〜０．００００４ｕｇ／ｍＬ濃度の化合物を得た。対照化合物のペニシリンＧおよびクラリスロマイシンは１０ｍｇ／ｍＬのＤＭＳＯ原液として調製し、マイクロタイター・プレートで上記のように試験化合物について調製した。シプロフロキサシンは対照として血清タンパク質結合アッセイに含まれた。

微量液体（Ｍｉｃｒｏｂｒｏｔｈ）希釈検定
フィン自動マルチチャネル・ピペットを用いて、６．４μＬの試験溶液（０．５〜１０μＬ体積）を充填マイクロタイター・プレートのウェルに添加した（第一ウェルの抗菌剤濃度＝６４μｇ／ｍＬ；ＤＭＳＯ濃度＝３．２％）。抗菌剤はこの様式で添加し、各ウェルのＤＭＳＯ量を一定に保った（化合物を可溶化に保ち、ＤＭＳＯによる非特異的殺菌の可能性を説明するため）。最後の横列は３．２％ＤＭＳＯの増殖対照を含んだ。

プレート植菌および活性測定
マイクロタイター・プレートの全てのウェルは、１ウェル当たり１．５ＴＬの接種材料を送達する自動プレート植菌装置であるＭＩＣ２０００システムを用いて、（生理食塩水で希釈した）培養物で植菌された。プレートは３５℃で環境大気中でインキュベートした。未植菌プレートも無菌検査としてインキュベートした。結果は１８〜２４時間のインキュベーション後に記録した。プレートは無増殖と読み取られた。

全化合物の最小阻害濃度（ＭＩＣ−１００）は、２２から２４時間のインキュベーション期間後に測定されるように、薬剤を含まない増殖対照と比較して可視増殖のない化合物の最低濃度であると決定された。ＭＩＣはＣＬＳＩガイドラインに従って得られた。

組成物Ａは、バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエおよびヘモフィルス・インフルエンザの様々な株に対する抗菌活性を立証した。組成物Ｂはスタフィロコッカス・アウレウスの様々な株に対する抗菌活性を立証した。最小阻害濃度（ＭＩＣ）値は、０．１から６４μｇ／ｍＬまでの範囲にわたり、組成物Ａおよび組成物Ｂについて下記の通りに観測された。

組成物Ａも組成物Ｂも、メチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス（ＭＲＳＡ）、バンコマイシン耐性エンテロコッカス種（ＶＲＥ）、多剤耐性エンテロコッカス・フェシウム、マクロライド耐性スタフィロコッカス・アウレウスおよびスタフィロコッカス・エピデルミディス、ならびにリネゾリド耐性スタフィロコッカス・アウレウスおよびエンテロコッカス・フェシウムなど、多数の既知抗生物質に耐性のある様々な種に対する抗菌活性を立証した。

組成物Ａはクロストリジウム・ディフィシルの株に対する抗菌活性について試験した。薬剤希釈および薬剤補給寒天プレートは手動で調製した。

培地及び培地調製
増殖培地および試験培地は、臨床検査標準協会（ＣＬＳＩ）により推奨される嫌気性生物の増殖試験および感受性試験用の培地であった。臨床検査標準協会（ＣＬＳＩ）を参照のこと。Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ａｎａｅｒｏｂｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍｌ１−Ａ７［ＩＳＢＮ１−５６２３８−６２６−３］。Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，９４０Ｗｅｓｔ Ｖａｌｌｅｙ Ｒｏａｄ，Ｓｕｉｔｅ１４００，Ｗａｙｎｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ１９０８７−１８９８ＵＳＡ，２００７。

寒天希釈ＭＩＣ検定に使用した培地は、ヘミン（シグマ（Ｓｉｇｍａ）＃Ｈ９０３９−１Ｇ、Ｌｏｔ＃０３９Ｋ１１２１）、ビタミンＫ_１（シグマ、Ｌｏｔ＃１０６Ｋ１５２３）および５％溶解ヒツジ血（クリーブランド・サイエンティフィック（Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、Ｌｏｔ４１１１３−６）（１）を補足したブルセラ寒天（ベクトン・ディッキンソン（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）、スパークス（Ｓｐａｒｋｓ）、ＭＤ＃２１１０８６、Ｌｏｔ＃９０２０００９）であった。この培地は補足ブルセラ寒天（ＳＢＡ）と称する。

培地は下記の通りに調製した：ブルセラ寒天は重量を量り、ヘミン、ビタミンＫおよび溶解ヒツジ血の体積を差し引いた最終体積まで水を添加した。寒天は煮沸により溶解した。ヘミン（５μｇ／ｍｌ）およびビタミンＫ（１μｇ／ｍｌ）を寒天に添加し、１２１℃で２３分間オートクレーブした。寒天は５０℃まで冷却し、１８．５ｍｌを滅菌ガラス管に分注した。プレートに注ぐ直前に、１ｍｌの溶解ヒツジ血および０．５ｍｌの適切な薬剤希釈を該管に添加した。管の反転により管の内容物を静かに混合し、薬剤を補足した寒天をペトリ皿に注いだ。該薬剤を補足したプレートは、固体になるまで実験台で静置させた後、バクトロン（Ｂａｃｔｒｏｎ）ＩＩ嫌気性チャンバー（シェルダン製作所（Ｓｈｅｌｄｏｎ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ Ｉｎｃ．）、コルネリウス（Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ）、ＯＲ；５％水素の大気、５％二酸化炭素、９０％窒素）に移し、植菌前の２時間前還元させた。

分離株の選別および維持管理
使用する株はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手した臨床分離株または対照株である。具体的には、株は、クロストリジウム・ディフィシル４３８１（ＡＴＣＣ７０００５７）およびクロストリジウム・ディフィシル４８２２（ＡＴＣＣ４３５９６）であった。培養物は、−８０℃で、５μｇ／ｍｌのヘミン、１μｇ／ｍｌのビタミンＫ、５％溶解ウマ血、および２０％グリセロールを含有するブルセラ培養液に凍結保存した。

接種材料の調製
分離株は、補足ブルセラ寒天（ＳＢＡ）プレート（レメル、カンザス州レネキサ；カタログ番号Ｒ０１２５５）でバクトロンＩＩ嫌気性チャンバー（シェルダン製作所、コルネリウス、ＯＲ）で継代培養し、ＭＩＣ検定で使用する前に３５〜３６℃のバクトロンＩＩインキュベーターで４８時間インキュベーションした。

プレート充填
薬剤の原液および希釈
試験プレートはそれぞれの株について下記の通りに調製した。９６ウェル・プレート（１−１２縦列およびＡ−Ｈ横列）の各ウェルに、１００μＬの適切な試験培地をサーマル・ラボシステムズ・マルチドロップ（商標）・ディスペンサーを用いて添加した。臨床検査標準協会（ＣＬＳＩ）（以前は国立臨床検査標準委員会（ＮＣＣＬＳ））の公式は標準溶液に必要な希釈量を計算するために用いた。

組成物の調製
試験組成物は重量ベースで調製した。組成物Ａは、ＤＭＳＯに溶解し、保存濃度は２５６０μｇ／ｍＬであり、試験に用いた。メトロニダゾールおよびバンコマイシン（両方ともシグマ社、セントルイス、ＭＯ）、対照化合物は、１２８０μｇ／ｍＬの保存濃度で１００％ＤＭＳＯに調製した。

プレート植菌および活性測定
検定は、ＣＬＳＩにより記載される参照寒天希釈法によって行った。臨床検査標準協会（ＣＬＳＩ）を参照のこと。Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ａｎａｅｒｏｂｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ−Ｓｅｖｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ。ＣＬＳＩ ｄｏｃｕｍｅｎｔ Ｍ１１−Ａ７［ＩＳＢＮ１−５６２３８−６２６−３］。

試験および参照の分離株は市販のＳＢＡ寒天プレート（カタログ番号Ｒ０１２５５；レメル、カンザス州レネキサ）でバクトロンＩＩ嫌気性チャンバーで継代培養し、３５℃で４８時間（バクトロンＩＩ嫌気性チャンバー内で）インキュベーションした。

ＭＩＣ検定の接種材料はバクトロンＩＩ嫌気性チャンバー内で下記の通りに調製した。コロニーを綿棒で集菌し、細胞懸濁液は、０．５Ｍｃファーランド標準の濁度と等しくなるよう前還元ブルセラ培養液で調製した。それぞれの細胞懸濁液は接種複製装置（メルロース・マシン・ショップ（Ｍｅｌｒｏｓｅ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｓｈｏｐ）、ウッドリン、ＰＡ）のウェルに充填し、該装置は１スポット当たり約１０^４から１０^５のコロニー形成単位を接種するため、１スポット当たり約１から２μＬを寒天表面上に送達する。接種複製装置の充填、およびプレートの植菌は嫌気性チャンバー内で行われた。植菌された寒天プレートは、接種材料が寒天内に吸収されるまで寒天を上に向けて静置させた。次に、プレートは反転させ、３５℃で４８時間バクトロンＩＩの嫌気性環境（５％水素、５％二酸化炭素、９０％窒素）でインキュベーションした。ＭＩＣはＣＬＳＩガイドラインによって読み取られた。

植菌後、薬剤を補足したプレートは、３５℃で４８時間バクトロンＩＩの嫌気性環境（５％水素、５％二酸化炭素、９０％窒素）でインキュベーションした。プレートは無増殖と読み取られた。

全化合物の最小阻害濃度（ＭＩＣ−１００）は、２２から２４時間のインキュベーション期間後に測定されるように、薬剤を含まない増殖対照と比較して可視増殖のない化合物の最低濃度であると決定された。ＭＩＣはＣＬＳＩガイドラインに従って得られた。

ＭＩＣ検定手順
組成物Ａはクロストリジウム・ディフィシルの様々な株に対する抗菌活性を立証した。表３に示されるように、組成物Ａについて０．１２μｇ／ｍｌのＭＩＣ値が観測された。ＣＬＳＩ品質管理基準が存在する生物−薬剤組み合わせについて、導き出されるＭＩＣ値は公開された品質管理範囲内であった。

上記および他の様々な特性および機能、またはそれらの代替手段は、望ましくは、多数の他の異なるシステムまたは適用と組み合わされてもよいと理解される。上述した内容および本明細書で請求される内容について、現在予見または予期せぬ様々な代替手段、改変、変形または改良も後に当業者によってなされてもよく、下記の特許請求の範囲に包含されることも意図する。

Claims (28)

1. 式Ｉおよび式ＩＩの化合物：
   

   

   ならびにそれらの薬学的に許容される塩から選択される精製化合物であって、式中：
   Ｒ^１およびＲ^２が水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；
   Ｒ^３が水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキルから成る群から選択される化合物。
2. 前記精製化合物が、式Ｉ：
   

   

   またはその薬学的に許容される塩であって、式中：
   Ｒ^１およびＲ^２が水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；
   Ｒ^３が水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキルから成る群から選択される、請求項１に記載の精製化合物。
3. 前記精製化合物が、式ＩＩ：
   

   

   またはその薬学的に許容される塩であって、式中：
   Ｒ^１およびＲ^２が水素およびハロゲンから成る群から独立して選択され；
   Ｒ^３が水素およびＣ_１−Ｃ_６アルキルから成る群から選択される、請求項１に記載の精製化合物。
4. Ｒ^１が水素および塩素から成る群から選択される、請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の精製化合物。
5. Ｒ^２が水素および塩素から成る群から選択される、請求項１から請求項４のいずれか一項に記載の精製化合物。
6. Ｒ^３が水素、メチルおよびエチルから成る群から選択される、請求項１から請求項５のいずれか一項に記載の精製化合物。
7. Ｒ^３が水素およびメチルから成る群から選択される、請求項６に記載の精製化合物。
8. 前記精製化合物が、
   

   

   ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される、請求項１に記載の精製化合物。
9. 前記化合物が、
   

   

   ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される、請求項８に記載の精製化合物。
10. 前記化合物が、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項９に記載の精製化合物。
11. 前記化合物が、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項９に記載の精製化合物。
12. 前記化合物が、
    

    

    ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される、請求項８に記載の精製化合物。
13. 前記化合物が、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の精製化合物。
14. 前記化合物が、
    

    

    またはその薬学的に許容される塩である、請求項１２に記載の精製化合物。
15. 前記化合物がＣ_４４Ｈ_６０ＣＩ_２Ｎ_４Ｏ_１４の分子式、約９３９．３５の分子量を有し、ならびに前記化合物の^１３Ｃ ＮＭＲスペクトルが１５２．２；３５．６；３５．３；７９．６；４９．９；１２６．５；１３３．７；３２．１；４８．０ｂｒ；３９．５；１９８．０ｂｒ；１０５．２ｂｒ；１９６．６ｂｒ；６９．７ｂｒ；３２．０ｂｒ；１７．８；１７．７；１０６．１；１８．９；１７８．１ｂｒ；７７．５ｂｒ；７５．６；６９．９；６９．８；７１．４；１４．５；９６．８；３８．５；７６．４；７４．９；７１．７；１８．５；５２．４；１６．２；１６１．７；１２０．０；１１２．４；１１０．６；１２９．４；１０．８；１５８．４；１７２．０；２１．０；および５７．５の特性ピークを有し、ならびに前記化合物の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルが、２．２６，ｍ（ｅｑ）；２．１２，ｍ（ａｘ）；２．２５，ｍ（ｅｑ）；１．２６，ｍ（ａｘ）；３．５６，ｄｔ，４，１１；１．８２，ｄｔ，２．５，１１；５．９２，ｄｔ，１０，２；５．６２，ｄｄｄ，１０，４．５，３；２．６５，ｍ；４．３３，ｍ；２．２６，ｍ；３．５２，ｄ，２．５；２．１４，ｍ；０．９７，ｄ，７；１．０７，ｄ，７；４．５７，ｓ；４．４４，ｓ；０．８０，ｄ，７；５．０２，ｂｒｄ，９；４．３３，ｍ；５．８８，ｔ，３；４．９１，ｄｄ，６，３；４．３０，ｐｅｎｔ，７；１．３９，ｄ，７；４．９４，ｄｄ，１０，２；１．７９，ｄｄ，１３．５，２（ｅｑ）；１．５７，ｄｄ，１３．５，１０（ａｘ）；３．１７，ｄ，９；３．６７，ｄｑ，９，６；１．２６，ｄ，６；４．３７，ｑ，７；１．２４，ｄ，７；２．２１，ｓ；２．１１，ｓ；および３．２８，ｓの特性ピークを有する、請求項１または請求項８に記載の精製化合物。
16. 前記化合物がＣ_４３Ｈ_５８Ｃｌ_２Ｎ_４０_１４の分子式、約９２５．３４の分子量を有し、ならびに化合物の^１Ｈ ＮＭＲスペクトルが２．２６，ｍ；２．１５，ｍ；２．２５，ｍ；１．２８，ｍ；３．５６，ｍ；１．７９，ｍ；５．９３，ｄｔ，１０，２．；５．６２，ｄｄｄ，１０，４．５，３；２．６５，ｂｒｍ；４．３６，ｍ；２．２６，ｍ；３．５２，ｄ，２．５；２．１５，ｍ；０．９８，ｄ，７；１．０７，ｄ，７；４．５８，ｂｒｓ；４．４４，ｂｒｓ；０．８０，ｄ，７．５；５．０１，ｂｒｄ，９．５；４．３３，ｍ；５．８９，ｔ，３；４．９１，ｄｄ，６，３．５；４．３０，ｐｅｎｔ，７；１．３９，ｄ，７；；４．９５，ｂｒｄ，１０；１．８０，ｂｒｄ，１３．５；１．５８，ｄｄ，１３．５，９．５；３．１８，ｄ，９；３．６７，ｄｄ，９，６；１．２７，ｄ，６；４．３８，ｑ，６．５；１．２５，ｄ，７；６．９８，ｓ；２．１０，ｓ；および３．３４，ｓの特性ピークを有する、請求項１または請求項８に記載の精製化合物。
17. 請求項１に記載の化合物の群から選択される１以上の化合物を含む精製または部分精製の細菌抽出物。
18. 前記抽出物が、
    

    

    ならびにそれらの薬学的に許容される塩から成る群から選択される１以上の化合物を含む、請求項１７に記載の抽出物。
19. 請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載の１以上の化合物および薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
20. 細菌の増殖を阻害する方法であって、請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載される１以上の有効量の化合物で治療する工程を含む方法。
21. 哺乳類被験体の細菌感染を治療または予防する方法であって、請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載される１以上の治療有効量の化合物を前記被験体に投与する工程を含む方法。
22. 前記細菌感染が、バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエまたはヘモフィルス・インフルエンザにより引き起こされる、請求項２１に記載の方法。
23. 前記細菌感染がクロストリジウム・ディフィシルにより引き起こされる、請求項２１に記載の方法。
24. 哺乳類被験体の細菌感染を制御する方法であって、請求項１から請求項１６のいずれか一項に記載される１以上の治療有効量の化合物を前記被験体に投与する工程を含む方法。
25. 前記細菌感染が、バチルス・サブチリス、スタフィロコッカス・アウレウス、エンテロコッカス・フェカリス、エスチェリキア・コライ、ストレプトコッカス・ニューモニエまたはヘモフィルス・インフルエンザにより引き起こされる、請求項２４に記載の方法。
26. 前記細菌感染がクロストリジウム・ディフィシルにより引き起こされる、請求項２４に記載の方法。
27. ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−１０３５４としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されたシュードノカルディアシエ科キブデロスポランギウム属種（ＭＡ７３８５）の細菌株の生物学的に純粋な培養物、またはそれらに由来する生物学的に純粋な培養物。
28. 請求項１４から請求項１７のいずれか一項に記載の組成物を調製するプロセスであって、ＡＴＣＣ特許寄託番号ＰＴＡ−１０３５４としてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに寄託されたシュードノカルディアシエ科キブデロスポランギウム属種（ＭＡ７３８５）の細菌株の培養物、またはそれらに由来する生物学的に純粋な培養物を培養および発酵する工程を含むプロセス。

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