JP2013515506A - 低級アルキルアルコールの発酵生産に有用なアルコールデヒドロゲナーゼ(adh) - Google Patents
低級アルキルアルコールの発酵生産に有用なアルコールデヒドロゲナーゼ(adh) Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013515506A JP2013515506A JP2012547274A JP2012547274A JP2013515506A JP 2013515506 A JP2013515506 A JP 2013515506A JP 2012547274 A JP2012547274 A JP 2012547274A JP 2012547274 A JP2012547274 A JP 2012547274A JP 2013515506 A JP2013515506 A JP 2013515506A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- polypeptide
- host cell
- isobutanol
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/16—Butanols
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Botany (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
上記の問題は、本明細書に記載されるとおり、様々な候補ADH酵素の評価に好適なスクリーニング戦略を考案及び使用することにより解決される。このスクリーニング戦略を用いて、望ましい特徴を有するADH酵素を同定することができる。これらの同定されたADH酵素を使用して、イソブタノールなどの低級アルキルアルコールの生物学的生産を増進することができる。また、同定された望ましいADH酵素を発現する組換え宿主細胞、及びそれを使用した低級アルキルアルコールの生成方法も提供される。
本発明で使用されるADH酵素は、ポリペプチド及びその断片を含む。本明細書で使用されるとき、用語「ポリペプチド」は単数形「ポリペプチド」並びに複数形「ポリペプチド」を包含することが意図され、アミド結合(ペプチド結合としても知られる)により直鎖状に連結された単量体(アミノ酸)から構成される分子に関する。用語「ポリペプチド」は2個以上のアミノ酸の任意の1つ又は複数の鎖を指し、特定の長さの生成物を指すものではない。従って、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、又は2個以上のアミノ酸の1つ若しくは複数の鎖を指して用いられる任意の他の用語は「ポリペプチド」の定義の範囲内に含まれ、用語「ポリペプチド」はこれらの用語のいずれの代わりとしても、又はそのいずれとも同義的に、使用され得る。用語「ポリペプチド」はまた、ポリペプチドの発現後修飾の生成物を指すことも意図され、そのような修飾としては、限定なしに、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基/ブロック基による誘導体化、タンパク質分解切断、又は天然に存在しないアミノ酸による修飾が挙げられる。
アルコールデヒドロゲナーゼ(ADH)は、細胞環境内の様々な経路の一部としてアルデヒドのアルコールとの相互変換を触媒する広範な酵素クラスである。ADH酵素は汎用的であり、アミノ酸配列の長さ又はそれらが使用する金属補因子の種類のいずれかに基づき複数のファミリーに分類される。
本発明の一態様は、上記に概説した活性を有するADH酵素を発現する組換え宿主細胞に関する。本発明で使用される宿主細胞の非限定的な例としては、細菌、シアノバクテリア、糸状菌及び酵母が挙げられる。
本発明の別の態様は、低級アルキルアルコールの生成方法に関する。これらの方法は、主に本発明の組換え宿主細胞を用いる。一実施形態において、本発明の方法は、上記に考察されるとおりの組換え宿主細胞を提供するステップと、低級アルキルアルコールが生成される条件下で発酵培地において組換え宿主細胞を発酵性炭素基質と接触させるステップと、低級アルキルアルコールを回収するステップとを含む。
M値が、配列番号26のアミノ酸配列を有する対照ポリペプチドと比べて高いこと;及び
1−ブタノール生合成経路(Donaldson et al.,米国特許出願公開第20080182308A1号明細書、参照により本明細書に援用される)、2−ブタノール生合成経路(Donaldson et al.,米国特許出願公開第20070259410A1号明細書及び同第20070292927号明細書、及び同第20090155870号明細書、全て参照により本明細書に援用される)、及びイソブタノール生合成経路(Maggio−Hall et al.,米国特許出願公開第20070092957号明細書、参照により本明細書に援用される)を発現する組換え微生物生成宿主は、当該技術分野において記載がなされている。それらには、指示される基質から生成物への変換の触媒能を有する特定の好適なタンパク質が記載され、及び当該技術分野では他の好適なタンパク質が記載されている。当業者は、かかる経路ステップの活性を有するポリペプチドを様々な供給源から単離することができ、本明細書に開示される組換え宿主細胞に使用し得ることを理解するであろう。例えば、米国特許出願公開第20080261230号明細書及び同第20090163376号明細書、同第20100197519号明細書、及び米国特許出願第12/893077号明細書は、アセトヒドロキシ酸イソメロレダクターゼについて記載し;米国特許出願公開第20070092957号明細書及び同第20100081154号明細書は、好適なジヒドロキシ酸デヒドラターゼについて記載している。
イソブタノールは、炭水化物源から組換え微生物によって様々な生合成経路を介して生成され得る。ピルベートをイソブタノールに変換する好適な経路には、図6に示す4つの完全な反応経路が含まれる。好適なイソブタノール経路(図6、ステップa〜e)は、以下の基質から生成物への変換を含む:
1−ブタノールの生成に好適な生合成経路の一例が、米国特許出願公開第2008/0182308 A1号明細書に開示される。この文献に開示されるとおり、開示される1−ブタノール生合成経路のステップは以下の変換を含む:
2−ブタノールの生成に好適な生合成経路の一例が、Donaldson et al.により米国特許出願公開第20070259410A1号明細書及び同第20070292927A1号明細書、並びに国際公開第2007/130521号パンフレット(これらは全て、参照により本明細書に援用される)に記載されている。好適な2−ブタノール生合成経路のステップは、以下の基質から生成物への変換を含む:
本明細書に提供される細胞において有用であり得る追加的な修飾として、米国特許出願公開第20090305363号明細書(参照により本明細書に援用される)に記載されるとおりの、ピルビン酸デカルボキシラーゼ活性及び/又はグリセロール−3−リン酸デヒドロゲナーゼ活性を還元する修飾、米国特許出願公開第20100120105号明細書(参照により本明細書に援用される)に記載されるとおりの、エントナー・ドゥドロフ経路又は還元等価物の平衡を介した炭素フラックスの増加をもたらす宿主細胞に対する修飾が挙げられる。その活性にFe−Sクラスターの結合を必要とする異種タンパク質の活性が増加した酵母株が、米国特許出願公開第20100081179号明細書(参照により本明細書に援用される)に記載されている。他の修飾としては、米国仮特許出願第61/290,639号明細書に記載される、二元的役割のヘキソキナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする内因性ポリヌクレオチドにおける修飾、米国仮特許出願第61/380563号明細書に記載される、ピルビン酸を利用する生合成経路のステップを触媒するポリペプチドをコードする少なくとも1つのポリヌクレオチドの組込み(参照される仮出願は、双方とも全体として参照により本明細書に援用される)が挙げられる。本明細書の実施形態に好適であり得るさらなる修飾が、米国特許出願第12/893089号明細書に記載される。
本発明は、イソブタノール生産用に改変した宿主生物におけるイソブチルアルデヒドからイソブタノールへの変換に関して戦略を考案し、及び優れた特性を有するいくつかのADH酵素を同定することに関する。ADH候補選択の過程には、自然界に存在する酵素における検索が関わる。酵素の同定は、その性質、すなわち好ましい基質としてアルデヒドを利用し、且つそのアルデヒドをそれぞれのアルコールへと、文献例により実証されるとおりの、対応するアルデヒド基質に対する適度に高いkcat値及び/又は低いKM値で変換する性質に基づき行われる。一組の候補が同定されると、この戦略には、その一組を用いて近縁関係にある相同体をバイオインフォマティクス解析により分離することが関わる。従って一実施形態において、本発明のスクリーニング方法は、候補ADH酵素に対してバイオインフォマティクス又は文献検索を行うステップを含む。一実施形態において、バイオインフォマティクス探索には系統発生解析が用いられる。
に提供される配列と少なくとも約95%の同一性を有するADH酵素が含まれる。
子を酸化する候補ポリペプチドのみを選択するステップ。一実施形態において、(b)は、低級アルキルアルコールの存在下又は非存在下のいずれにおいても対照ポリペプチドより速く補因子を酸化する候補ポリペプチドのみを選択することを含む。一実施形態において、補因子はNADHである。別の実施形態において、補因子はNADPHである。さらに別の実施形態において、対照ポリペプチドは配列番号21のアミノ酸配列を有するHLADHである。さらに別の実施形態において、対照ポリペプチドは、配列番号26のアミノ酸配列を有するアクロモバクター・キシロスオキシダンス(Achromobacter xylosoxidans)SadBである。別の実施形態において、ステップ(a)はA340nmの変化を観察することを含む。
本実施例で用いられる標準的な組換えDNA技術及び分子クローニング技術は当該技術分野において公知であり、Sambrook et al.(Sambrook,J.,Fritsch,E.F.and Maniatis,T.(Molecular Cloning:A Laboratory Manual;Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,1989,本明細書ではManiatisと称する)及びAusubel et al.(Ausubel et al.,Current Protocols in Molecular Biology,発行元Greene Publishing Assoc.and Wiley−Interscience,1987)により記載されている。
可能性のあるスクリーニング用イソブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼの選択
この例は、効率的なイソブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼを同定するためのいくつかのADH候補酵素の選択基準について記載する。文献のエビデンスに基づき、分析用にクロストリジウム・アセトブチリカム(Clostridium acetobutylicum)ブタノールデヒドロゲナーゼA及びB(BdhA及びBdhB)を選択した。1−ブタノールを含有する培地上で環境スラッジ試料を濃縮することにより、アクロモバクター・キシロスオキシダンス(Achromobacter xylosoxidans)を選択した。次に生物を培養して、ブタノールデヒドロゲナーゼ活性を含むタンパク質画分の精製に使用し、それに続いて米国特許出願公開第2009−0269823 A1号明細書に記載されるとおり、第二級アルコールデヒドロゲナーゼB(SadB)に対応する遺伝子をクローニングした。ウマ肝臓ADH酵素(HLADH)は市販されており、及びそれはイソブタノール酸化活性を有することが、Green et al.によりJ.Biol.Chem.268:7792(1993)に報告された。
た。同様に、複数の選択したADH酵素についてMSA及び系統樹を個別に生成し、各酵素の近縁関係にある相同体を同定し、ここでアラインメントは、標的酵素を問い合わせ配列として使用して得られたBLASTヒットのみからなった。それらの酵素には、アクロモバクター・キシロスオキシダンス(Achromobacter xylosoxidans)SadB、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)ADH6、及びサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)ADH7が含まれた。これらの分析に基づき、能力評価用のいくつかの候補を選択した(表3)。
クローニング、タンパク質発現及び精製、並びに好適なイソブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼのスクリーニング
この例は、過剰発現/精製用のADH遺伝子コンストラクトの調製及び経時変化アッセイを用いた酵素活性の計測について記載する。ウマ肝臓ADH(HLADH;A−6128)をSigmaから購入した。アクロモバクター・キシロスオキシダンス(Achromobacter xylosoxidans)SadB(SadB)、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)ADH6(ScADH6)及びADH7(ScADH7)、赤痢アメーバ(Entamoeba histolytica)ADH1(EhADH1)、ウシ(Bos taurus)アルデヒドレダクターゼ(BtARD)、ベイジェリンキア・インディカ・サブエスピー・インディカ(Beijerinckia indica subsp.Indica)ATCC 9039(BiADH)、クロストリジウム・ベイジェリンキ(Clostridium beijerinckii)ADH(CbADH)、ラナ・ペレジ(Rana perezi)ADH8(RpADH8)、ドブネズミ(Rattus norvegicus)ADH1(RnADH1)、サーマス・エスピー(Thermus sp.)ATN1 ADH(TADH)、フェニロバクテリウム・ズシネウム(Phenylobacterium zucineum)HLK1 ADH(PzADH)、メチロセラ・シルベストリス(Methylocella silvestris)BL2 ADH(MsADH)、アシネトバクター・バウマンニ(Acinetobacter baumannii)AYE ADH(AbADH)、ゲオバチルス・エスピー(Geobacillus sp.)WCH70 ADH(GbADH)、バンデルワルトジマ・ポリスポラ(Vanderwaltozyma polyspora)DSM 70294 ADH(VpADH)、ムコール・シルシネロイデス(Mucor circinelloides)ADH(McADH)、及びロドコッカス・エリスロポリス(Rhodococcus erythropolis)PR4 ADH(ReADH)が、タンパク質発現及び精製用にサブクローンを調製する候補であった。
大腸菌(Escherichia coli)での発現用にコドンを最適化した後、EhADH1、BtARD、CbADH、BiADH、及びRpADH8の遺伝子コード領域をDNA 2.0(Menlo Park,CA)により合成し、RnADH1、TADH、PzADH、MsADH、AbADH、GbADH、VpADH、McADH、及びReADHの遺伝子コード領域をGENEART AG(独国)により合成した。これらの候補のアミノ酸配列はGenbankタンパク質データベースから入手し、コドン最適化のためDNA 2.0又はGeneart AGに提供した。各コード領域には、コード配列の5’末端及び3’末端でそれぞれXhoI部位及びKpnI部位が隣接した。これらのコンストラクトをクローニングし、DNA 2.0のベクターpJ201又はGeneartのpMAベクターのいずれかに供給した。
示されるデータについては、ADH酵素の過剰発現にBL21−CodonPlus(Invitrogen;230240)又は私有の大腸菌(E.coli)株のいずれかを用いた。しかしながら、市販の株、例えばBL21−codon plusが、ADH酵素の過剰発現に好適であると考えられる。
上記に記載する手順に従い1リットル培養物から調製した無細胞抽出物を直接使用して、発現した様々なADH酵素をIMAC(固定化金属アフィニティークロマトグラフィー)アフィニティークロマトグラフィーによって5mL HisTrap FFカラム(GE Healthcare Life Sciences;175255−01)で精製した。手順全体はAKTAexplorer 10 S(GE Healthcare Life Sciences;18−1145−05)FPLCシステムを使用して実施した。抽出物を30mMのイミダゾールと混合し、HisTrapカラムに負荷した。負荷後、30mMイミダゾールを含む50mMのリン酸ナトリウム緩衝液、pH8.0(約10〜20カラム容量)でカラムを洗浄し、未結合のタンパク質及び非特異的に結合したタンパク質を除去した。次に30mM〜500mMイミダゾール勾配により20カラム容量でADHタンパク質を溶出した。ピーク画分を10%Bis−Tris SDS−PAGEゲル(Invitrogen;NP0301)においてInvitrogenのXCell SureLock Mini−Gel装置(EI0001)を使用して電気泳動した。クーマシー染色及び脱染を行うと、それらの画分は95%超の純度であり、ADHタンパク質のみを含むことを確かめることができた。活性アッセイを実施して精製したタンパク質が活性であることを確認した。
様々なADH候補を特徴付けて比較する理想的な方法は、完全な一組の反応速度定数、すなわちアルデヒド還元及びアルコール酸化についてのkcat値、イソブチルアルデヒド、イソブタノール、NAD(P)及びNAD(P)Hに対するKM値、及びイソブチルアルデヒド及びイソブタノールに対するKI値を計算して比較することであり得る。多数の候補を詳細に特徴付けるとなれば、多大な時間、労力及び費用をかけることが必要となる。従って、いくつかの候補の迅速で効率的な比較を可能にする定性的アッセイを開発した。様々な酵素の能力を比較する準生理学的アッセイを設計した。こうしたアッセイは、全ての反応を一定量の各酵素で開始することを伴う。この場合、1ugの各酵素を使用して、イソブチルアルデヒド及びNADHをそれぞれ1mM及び200μMの濃度で含む反応を開始した。各反応の経時変化は、反応が平衡に向かって進むときの340nm吸光度の低下を計測することにより、10分間追跡した。高いkcatの酵素は、低いkcatの酵素と比べて反応を平衡に向かってより速く駆動し得る。並行アッセイもまた、同じ条件下で、但し321mMのイソブタノール(24g/L)を反応に含めて実施した。この濃度のイソブタノールにより比較的阻害されない酵素は、イソブタノールが存在しない場合の経時変化に近似した経時変化を有し得る。図1は、これらのアッセイにおいてADH
候補酵素が示した経時変化を比較する。
イソブチルアルデヒドに対するkcatが高く、且つKMが低いベイジェリンキア・インディカ(Beijerinckia indica)ADHの同定
ADH酵素の反応速度定数を計算して比較することにより、イソブタノール生成用に人工的に改変した経路の最終ステップにおけるイソブチルアルデヒドからイソブタノールへの変換に最も望ましい特性を有する候補ADH酵素を同定した。上記に記載するアッセイからの初速度を使用して、反応速度定数を決定するためのアッセイを実施した。NADHの減少は消費されるアルデヒドと相関し得る(Biochemistry by Voet and Voet,John Wiley & Sons,Inc.)。しかしながら、反応に使用される所与の酵素の量は0.1〜5μgの範囲であった。所与の酵素の濃度は、1分間の時間経過にわたり初速度の計測をもたらす濃度であった。各酵素について、広範囲の基質濃度でミカエリス・メンテンプロットを生成した。KMの概算を求め、それに基づき、そのKM値の0.5〜10倍の範囲の基質濃度を用いるようにアッセイを設計し直して、適切な反応速度定数を得ることができるようにした。イソブチルアルデヒド(イソブタナール)還元反応を、200μMのNADHを含有する100mMリン酸カリウム緩衝液、pH7.0において30℃で実施した。イソブタノールに対するKIを計算するときには、反応において様々な濃度のイソブタノールの存在下で(概して0〜535mM)同じ反応を実施した(例えば図7を参照のこと)。イソブタノール基質との反応は、7.5mMのNADを含有する50mMリン酸ナトリウム緩衝液、pH8.8において30℃で実施した。SigmaPlot 11(Systat Software,Inc.)の酵素反応速度モジュール(バージョン1.3)を使用してデータをミカエリス−メンテン式にフィットさせ、反応速度定数を計算した。指示されるADH酵素について得られた反応速度定数を表7に示す。kcat/KMはkcat及びKMの個別の数値から得られるもので、実験的に決定される値ではない。SadBについての同じパラメータと比較したときの各候補酵素のKM、KI、及びkcat/KMの比を表9に示す。
実施例2に記載されるものなどの方法に従い7つのさらなる候補ADH酵素を合成し、発現させてアッセイした。指示されるADH酵素(フェニロバクテリウム・ズシネウム(Phenylobacterium zucineum)HLK1 ADH(PzADH)、メチロセラ・シルベストリス(Methylocella silvestris)BL2 ADH(MsADH)、アシネトバクター・バウマンニ(Acinetobacter baumannii)AYE ADH(AbADH)、ゲオバチルス・エスピー(Geobacillus sp.)WCH70 ADH(GbADH)、及びムコール・シルシネロイデス(Mucor circinelloides)ADH(McADH))について得られた反応速度定数を表8に示す。SadBについての同じパラメータと比較したときの各候補酵素についてのKM、KI、及びkcat/KMの比較を、SadBについて決定された値(表7)に対する割合として表9に示す。100未満の割合は、SadBについて決定された値より低い値を示す;100より高い割合は、SadBについて決定された値より高い値を示す。これらのアッセイにおいて、ロドコッカス・エリスロポリス(Rhodococcus erythropolis)PR4 ADH(ReADH)では発現がなく、バンデルワルトジマ・ポリスポラ(Vanderwaltozyma polyspora)DSM 70294 ADH(VpADH)では検出可能な活性がなかった。
S.セレビシエ(S.cerevisiae)PNY2211株の構築
2010年9月7日に出願された米国仮特許出願第61/380,563号明細書及び以下の段落に記載されるとおり、S.セレビシエ(S.cerevisiae)PNY1507株からいくつかのステップでPNY2211を構築した。最初にこの株を、ホスホケトラーゼ(phosophoketolase)遺伝子を含むように修飾した。ホスホケトラーゼ遺伝子カセット及び組込み株の構築は、2010年6月18日に出願された米国仮特許出願第61/356,379号明細書に過去に記載がある。次に、過去に米国仮特許出願第61/308,563号明細書に記載された組込みベクターを使用して、この株にアセト乳酸シンターゼ遺伝子(alsS)を加えた。最後に、相同組換えを使用してホスホケトラーゼ遺伝子及び組込みベクター配列を除去すると、pdc1Δ::ilvD(過去に記載された、米国仮特許出願第61/308,563号明細書におけるPDC1 ORFの欠失/挿入)と染色体XIIの天然TRX1遺伝子との間の遺伝子間領域にalsSのスカーレスな挿入が得られた。PNY2211の得られた遺伝子型は、MATa ura3Δ::loxP his3Δ pdc6Δ pdc1Δ::P[PDC1]−DHAD|ilvD_Sm−PDC1t−P[FBA1]−ALS|alsS_Bs−CYC1t pdc5Δ::P[PDC5]−ADH|sadB_Ax−PDC5t gpd2Δ::loxP fra2Δ adh1Δ::UAS(PGK1)P[FBA1]−kivD_Ll(y)−ADH1tである。
サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)PNY1540株の構築
この例の目的は、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)PNY1540株のPNY2211株からの構築について記載することである。この株はCEN.PK 113−7D(CBS 8340;Centraalbureau voor Schimmelcultures(CBS)Fungal Biodiversiry Centre,オランダ)から得たもので、上記の実施例5に記載される。PNY1540はアクロモバクター・キシロスオキシダンス(Achromobacter xylosoxidans)由来の、PNY2211のPDC5遺伝子座に組み込まれていたsadB遺伝子の欠失を含む。この欠失はコード配列全体が完全に取り除かれたもので、標的遺伝子の上流及び下流の相同性領域及び形質転換体選択用のURA3遺伝子を含むPCR断片による相同組換えにより設けられた。URA3遺伝子を相同組換えにより取り除き、スカーレス欠失を作成した。
スカーレスsadB欠失のためのPCRカセット用の4つの断片は、Phusion High Fidelity PCR Master Mix(New England BioLabs;Ipswich,MA)を使用し、及び断片Uの鋳型としてCEN.PK 113−7DゲノムDNAを、且つ断片A、B、及びCの鋳型としてPNY1503ゲノムDNAを使用して増幅した。ゲノムDNAはGentra Puregene Yeast/Bactキット(Qiagen;Valencia,CA)で調製した。sadB断片Aは、プライマーoBP540(配列番号63)、及びsadB断片Bの5’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP835(配列番号64)で増幅した。sadB断片Bは、sadB断片Aの3’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP836(配列番号65)、及びsadB断片Uの5’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP837(配列番号66)で増幅した。sadB断片Uは、sadB断片Bの3’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP838(配列番号67)、及びsadB断片Cの5’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP839(配列番号68)で増幅した。sadB断片Cは、sadB断片Uの3’末端と相同性を有する5’テールを含むプライマーoBP840(配列番号69)、及びプライマーoBP841(配列番号70)で増幅した。PCR産物をPCR精製キット(Qiagen)で精製した。オーバーラッピングPCRによりsadB断片AとsadB断片Bとを混合し、プライマーoBP540(配列番号63)及びoBP837(配列番号66)で増幅して、sadB断片ABを作成した。オーバーラッピングPCRによりsadB断片UとsadB断片Cとを混合し、プライマーoBP838(配列番号67)及びoBP841(配列番号70)で増幅して、sadB断片UCを作成した。得られたPCR産物を、アガロースゲルと、続いてゲル抽出キット(Qiagen)で精製した。オーバーラッピングPCRによりsadB断片ABとsadB断片UCとを混合し、プライマーoBP540(配列番号63)及びoBP841(配列番号70)で増幅して、sadB ABUCカセットを作成した。PCR産物をPCR精製キット(Qiagen)で精製した。
B.インディカ(B.indica)ADHをコードする遺伝子を保有する酵母シャトルベクター及び陰性対照ベクターの構築
米国特許出願公開第2009/0305363 A1号明細書に記載されるとおりのプラスミドpLH468(配列番号75)は、イソブタノール生成経路の一部を含む酵素(ジヒドロキシ酸デヒドラターゼ、αKIVデカルボキシラーゼ及びイソブタノールデヒドロゲナーゼ)をコードする3つのキメラ遺伝子を保有する大腸菌(E.coli)/酵母シャトルベクターである。ギャップ修復クローニング法を用いて既存のイソブタノールデヒドロゲナーゼ遺伝子をB.インディカ(B.indica)ADHに置き換えた。最初に、好適な5’及び3’隣接配列を含むB.インディカ(B.indica)ADHコード領域を、酵母コドン最適化を伴うDNA合成(DNA2.0、Menlo Park,CA)によって得た。この配列は提供される(配列番号76)。ベクターpLH468をBsu36Iで直鎖化し、B.インディカ(B.indica)ADH(供給業者のクローニングベクターからEcoRI及びBamHIで放出される)と共に酵母BY4741株に形質転換した。形質転換体をヒスチジン不含合成完全培地(Teknova カタログ番号C3020)に播いた。いくつかの形質転換体からZymoprep(商標)酵母プラスミドミニプレップキット(Zymo Research カタログ番号D2004)を使用してプラスミドを調製した。PCR(プライマーN1092及びN1093、配列番号77及び78による)及び制限酵素消化(KpnIによる)を用いてBiADHが意図した位置に組み込まれたことを確認した。このプラスミドをpLH468::BiADHと称する。
BiADHを保有するイソブタノロゲン(Isobutanologen)株は対照株と比べてより良好なグルコース依存性成長、より高いグルコース消費並びにより高いイソブタノール力価及び収率を示す。
プラスミドpLH468::BiADH及びpLH468ΔhADHを、各々、第2のイソブタノール経路プラスミド(pYZ090ΔalsS、米国仮特許出願第61/380,563号明細書)と共にPNY1540に形質転換した。形質転換物を、1%エタノールを炭素源として含むヒスチジン及びウラシル不含合成完全培地に播いた。いくつかの形質転換体を新鮮なプレートにパッチした。48時間後、パッチ(各株から3つ)を使用して、0.3%グルコース及び0.3%エタノールを炭素源として含む合成完全培地(ヒスチジン及びウラシル不含)を接種した。24時間後、この培地での成長は、双方の株の全てのレプリケートについて同様であった。次に培養物を、2%グルコース及び0.05%エタノールを炭素源として含む合成完全培地(ヒスチジン及びウラシル不含)に継代培養した。培養物(開始時の600nm光学濃度(OD)は0.2であった、培養容量は125mlの密栓フラスコ中に20mlであった)を48時間インキュベートした。HPLC分析のための試料を継代培養時及びさらに48時間後に回収した。最終ODもまた決定した。BiADH株の48時間平均ODは3.3(±0.1)であり、それに対してADH無し対照は2.37(±0.07)であった。従ってBiADHを含めると、この条件下ではODが39%上昇した。同様に、グルコース消費(継代培養の直後に回収した試料と比較してHPLCにより評価される)は69%上昇した(81±1mM、それに対して47.9±0.6mM)。以下の表に示すとおり、イソブタノール力価は4倍高く、及びモル収率(すなわち消費されたグルコース1モル当たりのイソブタノールの収率)は2倍であった。ADH無し対照株では、イソブタノール経路からの多量の炭素がイソブチレートとして蓄積したことから、アルデヒドデヒドロゲナーゼがイソブチルアルデヒドに作用したことが示される。
Claims (24)
- 低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路を含む組換え微生物宿主細胞であって、
生合成経路が、アルコールデヒドロゲナーゼ活性と、以下の特徴:
(a)イソブチルアルデヒドに対するKM値が、ポリペプチドについて、配列番号26のアミノ酸配列を有する対照ポリペプチドと比べて低いこと;
(b)該ポリペプチドについてのイソブタノールに対するKI値が、配列番号26のアミノ酸配列を有する対照ポリペプチドと比べて高いこと;及び
(c)該ポリペプチドについてのイソブチルアルデヒドに対するkcat/KM値が、配列番号26のアミノ酸配列を有する対照ポリペプチドと比べて高いこと;
のうちの1つ又はそれ以上とを有する該ポリペプチドにより触媒される基質から生成物への変換を含む、組換え微生物宿主細胞。 - 低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、ブタノール、プロパノール、イソプロパノール、又はエタノール生合成経路である、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号21、22、23、24、25、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有する、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが配列番号31のアミノ酸配列を有する、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号1、2、3、4、5、6、11、12、14、15、16、又は17のヌクレオチド配列と少なくとも85%の同一性を有するポリヌクレオチドによりコードされる、請求項1に記載の組換え宿主細胞。
- アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドがNADHを補因子として選択的に使用する、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが、少なくとも約15g/Lの濃度のイソブタノールの存在下でイソブチルアルデヒドからイソブタノールへの変換を触媒する、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- 低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路がブタノール生合成経路である、請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞。
- 請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞であって、
低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、以下のステップ:
(a)ピルベートからアセトラクテートへのステップ;
(b)アセトラクテートから2,3−ジヒドロキシイソバレレートへのステップ;
(c)2,3−ジヒドロキシイソバレレートからα−ケトイソバレレートへのステップ;
(d)α−ケトイソバレレートからイソブチルアルデヒドへのステップ;及び
(e)イソブチルアルデヒドからイソブタノールへのステップ;
の各ステップについての基質から生成物への変換を触媒するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含むイソブタノール生合成経路であり、
ここで、上記微生物宿主細胞がイソブタノールを生成する、上記微生物宿主細胞。 - 請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞であって、
低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、以下のステップ:
(a)ピルベートからアセトラクテートへのステップ;
(b)アセトラクテートから2,3−ジヒドロキシイソバレレートへのステップ;
(c)2,3−ジヒドロキシイソバレレートからα−ケトイソバレレートへのステップ;
(d)α−ケトイソバレレートからイソブチリルCoAへのステップ;
(e)イソブチリルCoAからイソブチルアルデヒドへのステップ;及び
(f)イソブチルアルデヒドからイソブタノールへのステップ;
の各ステップについての基質から生成物への変換を触媒するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含むイソブタノール生合成経路であり、
ここで、上記微生物宿主細胞がイソブタノールを生成する、上記微生物宿主細胞。 - 請求項1に記載の組換え微生物宿主細胞であって、
低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、以下のステップ:
(a)ピルベートからアセトラクテートへのステップ;
(b)アセトラクテートから2,3−ジヒドロキシイソバレレートへのステップ;
(c)2,3−ジヒドロキシイソバレレートからα−ケトイソバレレートへのステップ;
(d)α−ケトイソバレレートからバリンへのステップ;
(e)バリンからイソブチルアミンへのステップ;
(e)イソブチルアミンからイソブチルアルデヒドへのステップ;及び
(f)イソブチルアルデヒドからイソブタノールへのステップ;
の各ステップについての基質から生成物への変換を触媒するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含むイソブタノール生合成経路であり、
ここで、上記微生物宿主細胞がイソブタノールを生成する、上記微生物宿主細胞。 - 低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路と、配列番号21、22、23、24、25、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも85%の同一性を有するアルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドとを含む組換え微生物宿主細胞。
- 請求項12に記載の組換え微生物宿主細胞であって、
低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、以下のステップ:
(a)ピルベートからα−アセトラクテートへのステップ;
(b)α−アセトラクテートからアセトインへのステップ;
(c)アセトインから2,3−ブタンジオールへのステップ;
(d)2,3−ブタンジオールから2−ブタノンへのステップ;及び
(e)2−ブタノンから2−ブタノールへのステップ;
の各ステップについての基質から生成物への変換を触媒するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含む2−ブタノール生合成経路であり、
ここで、上記微生物宿主細胞が2−ブタノールを生成する、上記微生物宿主細胞。 - 請求項12に記載の組換え微生物宿主細胞であって、
低級アルキルアルコールを生成するための生合成経路が、以下のステップ:
(a)アセチルCoAからアセトアセチルCoAへのステップ;
(b)アセトアセチルCoAから3−ヒドロキシブチリルCoAへのステップ;
(c)3−ヒドロキシブチリルCoAからクロトニルCoAへのステップ;
(d)クロトニルCoAからブチリルCoAへのステップ;
(e)ブチリルCoAからブチルアルデヒドへのステップ;及び
(f)ブチルアルデヒドから1−ブタノールへのステップ;
の各ステップについての基質から生成物への変換を触媒するポリペプチドをコードする異種ポリヌクレオチドを含む1−ブタノール生合成経路であり、
ここで、上記微生物宿主細胞が1−ブタノールを生成する、上記微生物宿主細胞。 - 前記アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号21、22、23、24、25、27、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項12に記載の組換え宿主細胞。
- 前記アルコールデヒドロゲナーゼ活性を有するポリペプチドが、配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項12に記載の組換え宿主細胞。
- 前記宿主細胞の属が、サッカロミセス属(Saccharomyces)、ピキア属(Pichia)、ハンゼヌラ属(Hansenula)、ヤロウイア属(Yarrowia)、アスペルギルス属(Aspergillus)、クルイベロミセス属(Kluyveromyces)、パキソレン属(Pachysolen)、ロドトルラ属(Rhodotorula)、ザイゴサッカロミセス属(Zygosaccharomyces)、ガラクトミセス属(Galactomyces)、シゾサッカロミセス属(Schizosaccharomyces)、トルラスポラ属(Torulaspora)、デバリオミセス属(Debayomyces)、ウィリオプシス属(Williopsis)、デッケラ属(Dekkera)、クロエケラ属(Kloeckera)、メチニコウイア属(Metschnikowia)、イサチェンキア属(Issatchenkia)、及びカンジダ属(Candida)からなる群から選択される、請求項1又は12に記載の組換え宿主細胞。
- イソブタノールの生産方法であって、
(a)イソブタノール生合成経路を含む組換え微生物宿主細胞を備えるステップが、その経路がイソブチルアルデヒドからイソブタノールへの基質から生成物への変換を触媒する異種ポリペプチドを含み、ポリペプチドが配列番号21、22、23、24、25、27、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有する、該ステップと、
(b)イソブタノールが生成される条件下で(a)の宿主細胞を炭素基質と接触させるステップと、
を含む、上記方法。 - イソブチルアルデヒドからイソブタノールへの基質から生成物への変換を触媒する異種ポリペプチドが、配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有する、請求項18に記載の方法。
- イソブチルアルデヒドからイソブタノールへの基質から生成物への変換を触媒する異種ポリペプチドが、配列番号31のアミノ酸配列を有する、請求項18に記載の方法。
- 2−ブタノールの生産方法であって、
(a)2−ブタノール生合成経路を含む組換え微生物宿主細胞を備えるステップが、その経路が配列番号21、22、23、24、25、27、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有する異種ポリペプチドを含む、該ステップと、
(b)2−ブタノールが生成される条件下で(a)の宿主細胞を炭素基質と接触させるステップと、
を含む、上記方法。 - 異種ポリペプチドが、配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有する、請求項21に記載の方法。
- 1−ブタノールの生産方法であって、
(a)1−ブタノール生合成経路を含む組換え微生物宿主細胞を備えるステップが、その経路が配列番号21、22、23、24、25、27、31、32、34、35、36、37、又は38のアミノ酸配列と少なくとも90%の同一性を有する異種ポリペプチドを含む、該ステップと、
(b)1−ブタノールが生成される条件下で(a)の宿主細胞を炭素基質と接触させるステップと、
を含む、上記方法。 - 異種ポリペプチドが、配列番号31のアミノ酸配列と少なくとも95%の同一性を有する、請求項23に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29063609P | 2009-12-29 | 2009-12-29 | |
US61/290,636 | 2009-12-29 | ||
PCT/US2010/062390 WO2011090753A2 (en) | 2009-12-29 | 2010-12-29 | Alcohol dehydrogenases (adh) useful for fermentive production of lower alkyl alcohols |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013515506A true JP2013515506A (ja) | 2013-05-09 |
JP5947219B2 JP5947219B2 (ja) | 2016-07-06 |
Family
ID=43735744
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012547274A Expired - Fee Related JP5947219B2 (ja) | 2009-12-29 | 2010-12-29 | 低級アルキルアルコールの発酵生産に有用なアルコールデヒドロゲナーゼ(adh) |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8765433B2 (ja) |
EP (1) | EP2519628A2 (ja) |
JP (1) | JP5947219B2 (ja) |
KR (1) | KR20120115349A (ja) |
CN (1) | CN102762722B (ja) |
AU (1) | AU2010343048A1 (ja) |
BR (1) | BR112012016042A2 (ja) |
CA (1) | CA2784903A1 (ja) |
MX (1) | MX2012007583A (ja) |
NZ (1) | NZ600509A (ja) |
WO (1) | WO2011090753A2 (ja) |
ZA (1) | ZA201204375B (ja) |
Families Citing this family (44)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9303225B2 (en) | 2005-10-26 | 2016-04-05 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Method for the production of isobutanol by recombinant yeast |
US8945899B2 (en) | 2007-12-20 | 2015-02-03 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Ketol-acid reductoisomerase using NADH |
NZ579780A (en) | 2007-04-18 | 2012-07-27 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentive production of isobutanol using highly active ketol-acid reductoisomerase enzymes |
US8188250B2 (en) | 2008-04-28 | 2012-05-29 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Butanol dehydrogenase enzyme from the bacterium Achromobacter xylosoxidans |
EP2337856A1 (en) | 2008-09-29 | 2011-06-29 | Butamax Advanced Biofuels Llc | INCREASED HETEROLOGOUS Fe-S ENZYME ACTIIVTY IN YEAST |
BR112012006939A2 (pt) * | 2009-09-29 | 2015-09-08 | Butamax Tm Advanced Biofuels | célula hospedeira de produção de levedura recombinante e método para a produção de um produto selecionado do grupo que consiste em 2,3-butanodiol, isobutanol, 2-butanol, 1-butanol, 2-butanona, valina, leucina, ácido lático, ácido málico, álcool, isoampilico e isoprenoides |
EP2519628A2 (en) | 2009-12-29 | 2012-11-07 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Alcohol dehydrogenases (adh) useful for fermentive production of lower alkyl alcohols |
AU2011218090B2 (en) | 2010-02-17 | 2016-06-23 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Improving activity of Fe-S cluster requiring proteins |
WO2011140386A2 (en) * | 2010-05-05 | 2011-11-10 | Mascoma Corporation | Detoxification of biomass derived acetate via metabolic conversion to ethanol, acetone, isopropanol, or ethyl acetate |
US8871488B2 (en) | 2010-06-18 | 2014-10-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Recombinant host cells comprising phosphoketolases |
EP3269806B1 (en) | 2010-09-07 | 2020-05-27 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Integration of a polynucleotide encoding a polypeptide that catalyzes pyruvate to acetolactate conversion |
US8765425B2 (en) | 2011-03-23 | 2014-07-01 | Butamax Advanced Biofuels Llc | In situ expression of lipase for enzymatic production of alcohol esters during fermentation |
US8759044B2 (en) | 2011-03-23 | 2014-06-24 | Butamax Advanced Biofuels Llc | In situ expression of lipase for enzymatic production of alcohol esters during fermentation |
US9790521B2 (en) | 2011-03-24 | 2017-10-17 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Host cells and methods for production of isobutanol |
WO2012173660A2 (en) | 2011-06-17 | 2012-12-20 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Co-products from biofuel production processes and methods of making |
JP6093764B2 (ja) | 2011-07-28 | 2017-03-08 | ビュータマックス・アドバンスド・バイオフューエルズ・エルエルシー | ケトイソ吉草酸デカルボキシラーゼ酵素およびその使用方法 |
EP2788096A2 (en) | 2011-12-09 | 2014-10-15 | Butamax Advanced Biofuels LLC | Process to remove product alcohols from fermentation broth |
AU2012362144A1 (en) | 2011-12-30 | 2014-07-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Genetic switches for butanol production |
EP2798072A2 (en) | 2011-12-30 | 2014-11-05 | Butamax Advanced Biofuels LLC | Fermentative production of alcohols |
WO2013102554A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Firmenich Sa | Genetically engineered yeast cells |
WO2013142338A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Acetate supplemention of medium for butanologens |
CA2873109A1 (en) | 2012-05-11 | 2013-11-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Ketol-acid reductoisomerase enzymes and methods of use |
US20140024064A1 (en) | 2012-07-23 | 2014-01-23 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Processes and systems for the production of fermentative alcohols |
US9593349B2 (en) | 2012-08-22 | 2017-03-14 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentative production of alcohols |
MX2015003073A (es) | 2012-09-12 | 2015-07-14 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Procesos y sistemas para la produccion de productos de fermentacion. |
US9840724B2 (en) | 2012-09-21 | 2017-12-12 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Production of renewable hydrocarbon compositions |
WO2014052670A1 (en) | 2012-09-26 | 2014-04-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Polypeptides with ketol-acid reductoisomerase activity |
EP2900825A1 (en) | 2012-09-28 | 2015-08-05 | Butamax Advanced Biofuels LLC | Production of fermentation products |
US9273330B2 (en) | 2012-10-03 | 2016-03-01 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Butanol tolerance in microorganisms |
CA2887574A1 (en) | 2012-10-11 | 2014-04-17 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Processes and systems for the production of fermentation products |
WO2014106107A2 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Dhad variants for butanol production |
WO2014105840A1 (en) | 2012-12-31 | 2014-07-03 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentative production of alcohols |
HUE045200T2 (hu) | 2013-03-14 | 2019-12-30 | Du Pont | Glicerin-3-foszfát dehidrogenáz butanol elõállítására |
BR112015020685A2 (pt) | 2013-03-15 | 2017-07-18 | Butamax Advanced Biofuels Llc | método para a recuperação do butanol, composição, métodos para a extração de álcool e de secagem |
US9580705B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | DHAD variants and methods of screening |
WO2014151645A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Process for maximizing biomass growth and butanol yield by feedback control |
WO2014144210A2 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Competitive growth and/or production advantage for butanologen microorganism |
WO2014144643A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Method for producing butanol using extractive fermentation |
WO2014157185A1 (ja) * | 2013-03-28 | 2014-10-02 | 株式会社カネカ | 改変型カルボニル還元酵素およびその遺伝子 |
WO2015002913A1 (en) | 2013-07-03 | 2015-01-08 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Partial adaptation for butanol production |
DE102013113719A1 (de) | 2013-12-09 | 2015-06-11 | Oxea Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Pentanderivaten und Derivaten α,β-ungesättigter Decenale |
CA2957920A1 (en) | 2014-08-11 | 2016-02-18 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Yeast preparations and methods of making the same |
CN110358745B (zh) * | 2019-08-22 | 2022-04-19 | 苏州科宁多元醇有限公司 | 4-木糖醇脱氢酶突变体及其用途 |
CN114480444B (zh) * | 2021-12-13 | 2024-05-14 | 内蒙古农业大学 | 用于扩增微生物醇脱氢酶基因片段的简并引物及所述简并引物的应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009513136A (ja) * | 2005-10-26 | 2009-04-02 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 四炭素アルコールの発酵性生産 |
WO2009086423A2 (en) * | 2007-12-23 | 2009-07-09 | Gevo, Inc. | Yeast organism producing isobutanol at a high yield |
US20090269823A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-10-29 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Butanol dehydrogenase enzyme from the bacterium achromobacter xylosoxidans |
Family Cites Families (126)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS54129189U (ja) | 1978-02-28 | 1979-09-07 | ||
JPS54129189A (en) | 1978-03-31 | 1979-10-06 | Fuji Zoki Seiyaku | Redox enzyme for alcohol and ferichytochrome and production |
US4266034A (en) | 1978-04-14 | 1981-05-05 | Exxon Research And Engineering Company | Method for producing microbial cells and use thereof to produce oxidation products |
CS197080B1 (cs) | 1978-06-06 | 1980-04-30 | Ladislav Skursky | Směs k fotometrickému stanovení aktivity alkoholdéhydrogenasy v biologickém materiálu |
US4241184A (en) | 1979-03-27 | 1980-12-23 | Exxon Research & Engineering Co. | Secondary alcohol dehydrogenase enzyme and use thereof |
CA1189807A (en) | 1982-06-28 | 1985-07-02 | Ching-Tsang Hou | Microbiological process for oxidation of alkanes, vinyl compounds and secondary alcohols |
CA1211728A (en) | 1982-06-28 | 1986-09-23 | Exxon Research And Engineering Company | Primary and secondary alcohol dehydrogenase enzymes and use thereof |
SE454330B (sv) | 1984-03-28 | 1988-04-25 | Santrade Ltd | Vendsker for spanavskiljande bearbetning |
US5162516A (en) | 1988-05-31 | 1992-11-10 | University Of Florida | Cloning and sequencing of the alcohol dehydrogenase II gene from Zymomonas mobilis |
US5487989A (en) | 1988-08-31 | 1996-01-30 | Bioenergy International, L.C. | Ethanol production by recombinant hosts |
US7192772B1 (en) | 1988-08-31 | 2007-03-20 | The University Of Florida Research Foundations, Inc. | Recombinant cells that highly express chromosomally-integrated heterologous gene |
US5000000A (en) | 1988-08-31 | 1991-03-19 | University Of Florida | Ethanol production by Escherichia coli strains co-expressing Zymomonas PDC and ADH genes |
US5821093A (en) | 1988-08-31 | 1998-10-13 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Recombinant cells that highly express chromosomally-integrated heterologous genes |
US5028539A (en) | 1988-08-31 | 1991-07-02 | The University Of Florida | Ethanol production using engineered mutant E. coli |
US5385833A (en) | 1992-02-26 | 1995-01-31 | The Scripps Research Institute | Pseudomonas sp. ATCC No. 49794 alcohol dehydrogenase |
US6011199A (en) | 1992-12-15 | 2000-01-04 | Commonwealth Scientific | Method for producing fruiting plants with improved fruit flavour |
AU690530B2 (en) | 1992-12-15 | 1998-04-30 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | DNA molecules encoding inducible plant promoters and tomato ADH2 enzyme |
FR2706906A1 (en) | 1993-06-21 | 1994-12-30 | Ifremer | Alcohol dehydrogenase, microorganism producing it and its uses |
JP3574682B2 (ja) | 1993-09-24 | 2004-10-06 | ダイセル化学工業株式会社 | 新規な酵素、該酵素を製造する方法、該酵素をコードするdna、該dnaを含む形質転換体、該酵素による光学活性アルコール等の製造方法 |
US5855881A (en) | 1996-02-22 | 1999-01-05 | Loike; John D. | Mammalian alcohol dehydrogenase and aldehyde dehydrogenase production in plants |
US20020064847A1 (en) | 1996-10-22 | 2002-05-30 | Daicel Chemical Industries, Ltd. | Novel secondary alcohol dehydrogenase, process for preparing said enzyme, and process for preparing alcohols and ketones using said enzyme |
JPH11127883A (ja) | 1997-10-28 | 1999-05-18 | Meidensha Corp | 生物学的プロパン生産方法 |
US6737257B2 (en) | 1998-05-18 | 2004-05-18 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Hyperthermophilic enzymes for industrial chemical redox reactions: a method for biofuel ethanol production |
JP2000078969A (ja) | 1998-09-04 | 2000-03-21 | Unitika Ltd | アルコール脱水素酵素及びその製造方法 |
EP1020515A3 (en) | 1999-01-18 | 2002-08-07 | DAICEL CHEMICAL INDUSTRIES, Ltd. | Amino alcohol dehydrogenase, its production and use |
TWI275645B (en) | 2000-02-16 | 2007-03-11 | Daicel Chemical Industries Ltd. | (R)-2-octanol dehydrogenases, methods for producing the enzymes, DNA encoding the enzymes, and methods for producing alcohols using the enzymes |
ES2339638T3 (es) | 2000-06-16 | 2010-05-24 | Research Institute Of Innovative Technology For The Earth | Proceso para producir etanol usando bacteria corineforme recombinante. |
GB0024554D0 (en) | 2000-10-06 | 2000-11-22 | Agrol Ltd | Ethanol production |
US6440711B1 (en) | 2000-12-08 | 2002-08-27 | Board Of Trustees Southern Illinois University, The | Dehydrogenase enzymatic synthesis of methanol |
DE10112401A1 (de) | 2001-03-13 | 2002-09-19 | Degussa | Alkohol-Dehydrogenase und deren Verwendung |
DE10119274A1 (de) | 2001-04-20 | 2002-10-31 | Juelich Enzyme Products Gmbh | Enzymatisches Verfahren zur enantioselektiven Reduktion von Ketoverbindungen |
JP4630486B2 (ja) | 2001-05-28 | 2011-02-09 | ダイセル化学工業株式会社 | 新規な(r)−2,3−ブタンジオール脱水素酵素、その製造方法、及びこれを利用した光学活性アルコールの製造方法 |
CA2474905A1 (en) | 2002-03-18 | 2003-09-25 | Ciba Specialty Chemicals Holding Inc. | Alcohol dehydrogenases with high solvent and temperature stability |
DE10218689A1 (de) | 2002-04-26 | 2003-11-20 | Degussa | ADH aus Rhodococcus erythropolis |
JP4160417B2 (ja) | 2003-02-25 | 2008-10-01 | 株式会社カネカ | 2級アルコール脱水素酵素及びその製法 |
CN100376677C (zh) | 2003-03-12 | 2008-03-26 | 株式会社味滋集团公司 | 醋酸菌的乙醇脱氢酶基因 |
KR100532627B1 (ko) | 2003-05-27 | 2005-12-02 | 엔자이텍 주식회사 | 알코올탈수소효소 생산능을 가지는 미생물과 이를 이용한 광학활성 2-페닐-1-프로파놀의 제조방법 |
KR20040104076A (ko) | 2003-06-03 | 2004-12-10 | 엔자이텍 주식회사 | 에틸 벤조일아세테이트로부터 광학활성 에틸 3-히드록시-3-페닐프로피오네이트를 합성하는 알코올 탈수소효소 생산능을 가지는 미생물 |
CA2535710A1 (en) | 2003-09-18 | 2005-03-24 | Ciba Specialty Chemicals Holding Inc. | Alcohol dehydrogenases with increased solvent and temperature stability |
JP2005102511A (ja) | 2003-09-26 | 2005-04-21 | Kaneka Corp | 新規アルコール脱水素酵素、その遺伝子 |
SE526429C2 (sv) | 2003-10-24 | 2005-09-13 | Swedish Biofuels Ab | Metod för att framställa syreinnehållande föreningar utgående från biomassa |
KR100543115B1 (ko) | 2003-11-04 | 2006-01-20 | 주식회사한국야쿠르트 | 에탄올과 아세트알데하이드 분해효소 활성과 감소능이 우수한 젖산균 |
AT413541B (de) | 2004-05-10 | 2006-03-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur herstellung von 2-butanol |
DE102004038054A1 (de) | 2004-08-05 | 2006-03-16 | Maxens Gmbh | Verfahren zur Herstellung primärer Alkohole |
WO2006016432A1 (ja) | 2004-08-12 | 2006-02-16 | Marine Biotechnology Institute Co., Ltd. | 新規な芳香族デヒドロゲナーゼ遺伝子及び芳香族カルボン酸の製造法 |
AT501928B1 (de) | 2004-10-27 | 2010-09-15 | Iep Gmbh | Verfahren zur herstellung von chiralen alkoholen |
DE102004055508A1 (de) | 2004-11-17 | 2006-06-01 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung optisch aktiver Alkohole |
EP1869197A2 (en) | 2005-04-12 | 2007-12-26 | E.I. Dupont De Nemours And Company | Treatment of biomass to obtain ethanol |
JP4704814B2 (ja) | 2005-06-15 | 2011-06-22 | 神戸天然物化学株式会社 | 新規な芳香族アルコール酸化酵素遺伝子及び芳香族カルボン酸の製造法 |
CN101278044A (zh) | 2005-06-24 | 2008-10-01 | 诺维信公司 | 适用于制备重组多肽的突变体细胞 |
US8652817B2 (en) | 2005-07-01 | 2014-02-18 | Univeristy Of Florida Research Foundation, Inc. | Recombinant host cells and media for ethanol production |
US9297028B2 (en) | 2005-09-29 | 2016-03-29 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentive production of four carbon alcohols |
US8945899B2 (en) | 2007-12-20 | 2015-02-03 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Ketol-acid reductoisomerase using NADH |
US20080274526A1 (en) * | 2007-05-02 | 2008-11-06 | Bramucci Michael G | Method for the production of isobutanol |
US8956850B2 (en) | 2008-06-05 | 2015-02-17 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Enhanced pyruvate to acetolactate conversion in yeast |
US8273558B2 (en) | 2005-10-26 | 2012-09-25 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Fermentive production of four carbon alcohols |
US9303225B2 (en) | 2005-10-26 | 2016-04-05 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Method for the production of isobutanol by recombinant yeast |
DE102006009744A1 (de) | 2006-03-02 | 2007-09-06 | Wacker Chemie Ag | Herstellung von (S)-2-Butanol durch oxidative Racematspaltung |
DE102006010994A1 (de) | 2006-03-09 | 2007-09-13 | Wacker Chemie Ag | Verfahren zur enzymatischen Herstellung von chiralen Alkoholen |
US8828704B2 (en) | 2006-05-02 | 2014-09-09 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentive production of four carbon alcohols |
US8206970B2 (en) | 2006-05-02 | 2012-06-26 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Production of 2-butanol and 2-butanone employing aminobutanol phosphate phospholyase |
US7659104B2 (en) | 2006-05-05 | 2010-02-09 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation |
US7541173B2 (en) | 2006-06-15 | 2009-06-02 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Solvent tolerant microorganisms and methods of isolation |
WO2008006038A2 (en) | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Integrated Genomics, Inc. | Methods and compositions for butanol production |
WO2008013996A2 (en) | 2006-07-27 | 2008-01-31 | Gevo Inc. | Engineered microorganisms for increasing product yield in biotransformations, related methods and systems |
WO2008013949A2 (en) | 2006-07-28 | 2008-01-31 | Michigan State University | Molecular design of thermostable alcohol dehydrogenase for synthesis for chiral aromatic alcohols |
US20080293086A1 (en) | 2006-09-18 | 2008-11-27 | Cobalt Technologies, Inc. A Delaware Corporation | Real time monitoring of microbial enzymatic pathways |
WO2008035187A2 (en) | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Dow Global Technologies Inc. | Alcohol dehydrogenase from agromyces sp. and a method of producing a chiral secondary alcohol using same |
US7973214B2 (en) | 2006-09-25 | 2011-07-05 | Ut-Battelle, Llc | Designer organisms for photosynthetic production of ethanol from carbon dioxide and water |
CA2665448A1 (en) | 2006-10-31 | 2008-05-08 | Metabolic Explorer | Process for the biological production of 1,3-propanediol from glycerol with high yield |
EP2097528A2 (en) | 2006-10-31 | 2009-09-09 | DSMIP Assets B.V. | Butanol production in a eukaryotic cell |
SG177149A1 (en) | 2006-11-29 | 2012-01-30 | Kaneka Corp Jp | Novel alcohol dehydrogenase, gene for the alcohol dehydrogenase, vector, transformant, and method for production of optically active alcohol by using them |
DE102006056526A1 (de) | 2006-11-30 | 2008-06-05 | Archimica Gmbh | Verfahren zur stereoselektiven Synthese von chiralen Epoxiden durch ADH-Reduktion von alpha-Abgangsgruppen-substituierten Ketonen und Cyclisierung |
US8017364B2 (en) | 2006-12-12 | 2011-09-13 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Solvent tolerant microorganisms |
EP2102351A4 (en) | 2006-12-15 | 2010-01-06 | Biofuelchem Co Ltd | PROCESS FOR THE PREPARATION OF BUTANOL THROUGH BACTERIA USING BUTYRYL-COA AS INTERMEDIATE |
WO2008074794A1 (en) | 2006-12-19 | 2008-06-26 | Dsm Ip Assets B.V. | Butanol production in a prokaryotic cell |
EP2121949B1 (en) | 2006-12-21 | 2013-05-08 | GEVO, Inc. | Butanol production by metabolically engineered yeast |
AU2008212799A1 (en) | 2007-02-09 | 2008-08-14 | The Regents Of The University Of California | Biofuel production by recombinant microorganisms |
NZ579780A (en) | 2007-04-18 | 2012-07-27 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Fermentive production of isobutanol using highly active ketol-acid reductoisomerase enzymes |
EP2222841B1 (en) | 2007-12-20 | 2015-08-26 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Ketol-acid reductoisomerase using nadh |
US8372612B2 (en) | 2007-12-21 | 2013-02-12 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Production of four carbon alcohols using improved strain |
US8518678B2 (en) | 2007-12-21 | 2013-08-27 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Strain comprising increased expression of a CFA coding region for butanol production |
US8389252B2 (en) | 2008-05-12 | 2013-03-05 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Yeast strain for production of four carbon alcohols |
WO2009143455A2 (en) | 2008-05-22 | 2009-11-26 | Microbia, Inc. | Engineering resistance to aliphatic alcohols |
US20110281314A1 (en) * | 2008-08-04 | 2011-11-17 | Lynch Michael D | Methods, systems and compositions related to microbial bio-production of butanol and/or isobutanol |
AU2009296227A1 (en) | 2008-09-29 | 2010-04-01 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Enhanced pyruvate to 2,3-butanediol conversion in lactic acid bacteria |
WO2010037119A1 (en) | 2008-09-29 | 2010-04-01 | Butamax™ Advanced Biofuels LLC | Enhanced iron-sulfur cluster formation for increased dihydroxy-acid dehydratase activity in lactic acid bacteria |
ES2521675T3 (es) | 2008-09-29 | 2014-11-13 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Identificación y uso de [2Fe-2S]-dihidroxi-ácido deshidratasas bacterianas |
US8637281B2 (en) | 2008-09-29 | 2014-01-28 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Enhanced dihydroxy-acid dehydratase activity in lactic acid bacteria |
EP2337856A1 (en) | 2008-09-29 | 2011-06-29 | Butamax Advanced Biofuels Llc | INCREASED HETEROLOGOUS Fe-S ENZYME ACTIIVTY IN YEAST |
EP2350298A1 (en) | 2008-10-27 | 2011-08-03 | ButamaxTM Advanced Biofuels LLC | Carbon pathway optimized production hosts for the production of isobutanol |
CA2779262C (en) | 2008-10-31 | 2021-09-07 | Gevo, Inc. | Engineered microorganisms capable of converting pyruvate to isobutanol under anaerobic conditions |
US8828694B2 (en) | 2008-11-13 | 2014-09-09 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Production of isobutanol in yeast mitochondria |
US8465964B2 (en) | 2008-11-13 | 2013-06-18 | Butamax (TM) Advanced Biofules LLC | Increased production of isobutanol in yeast with reduced mitochondrial amino acid biosynthesis |
US8652823B2 (en) | 2008-12-03 | 2014-02-18 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Strain for butanol production with increased membrane unsaturated trans fatty acids |
US8455225B2 (en) | 2008-12-29 | 2013-06-04 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Yeast with increased butanol tolerance involving high osmolarity/glycerol response pathway |
US8795992B2 (en) | 2008-12-29 | 2014-08-05 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Yeast with increased butanol tolerance involving cell wall integrity pathway |
US8557562B2 (en) | 2008-12-29 | 2013-10-15 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Yeast with increased butanol tolerance involving filamentous growth response |
US8614085B2 (en) | 2009-02-27 | 2013-12-24 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Yeast with increased butanol tolerance involving a multidrug efflux pump gene |
US20120058541A1 (en) | 2009-05-22 | 2012-03-08 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Engineering resistance to aliphatic alcohols |
WO2010151525A1 (en) | 2009-06-22 | 2010-12-29 | Gevo, Inc. | Yeast organisms for the production of isobutanol |
BR112012006939A2 (pt) * | 2009-09-29 | 2015-09-08 | Butamax Tm Advanced Biofuels | célula hospedeira de produção de levedura recombinante e método para a produção de um produto selecionado do grupo que consiste em 2,3-butanodiol, isobutanol, 2-butanol, 1-butanol, 2-butanona, valina, leucina, ácido lático, ácido málico, álcool, isoampilico e isoprenoides |
IN2012DN02396A (ja) | 2009-09-29 | 2015-08-21 | Butamax Tm Advanced Biofuels | |
BR112012007168A2 (pt) * | 2009-09-29 | 2019-09-24 | Butamax Advanced Biofuels Llc | "célula de levedura, célula microbiana que produz isobutanol, célula hospedeira microbiana, método para conversão de acetolacto em diidróxi-isovalerato, método para a produção de isobutanol e plasmídeo" |
US20110195505A1 (en) | 2009-10-08 | 2011-08-11 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Bacterial strains for butanol production |
EP2519628A2 (en) | 2009-12-29 | 2012-11-07 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Alcohol dehydrogenases (adh) useful for fermentive production of lower alkyl alcohols |
BR112012016043A2 (pt) * | 2009-12-29 | 2015-11-24 | Butamax Advanced Biofuels Llc | ''célula hospedeira de levedura recombinante, métodos para reproduzir isobutanol, para aumentar o consumo de glicose, para aumentar a formação de um produto de uma via biossintética e para melhorar o balanço de redox" |
CA2789583C (en) | 2010-02-12 | 2017-01-17 | Gevo, Inc. | Yeast microorganisms with reduced by-product accumulation for improved production of fuels, chemicals, and amino acids |
AU2011218090B2 (en) | 2010-02-17 | 2016-06-23 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Improving activity of Fe-S cluster requiring proteins |
WO2011159894A1 (en) | 2010-06-17 | 2011-12-22 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Yeast production culture for the production of butanol |
US8871488B2 (en) | 2010-06-18 | 2014-10-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Recombinant host cells comprising phosphoketolases |
EP3269806B1 (en) * | 2010-09-07 | 2020-05-27 | Butamax (TM) Advanced Biofuels LLC | Integration of a polynucleotide encoding a polypeptide that catalyzes pyruvate to acetolactate conversion |
US9790521B2 (en) | 2011-03-24 | 2017-10-17 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Host cells and methods for production of isobutanol |
US20120258873A1 (en) | 2011-04-06 | 2012-10-11 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Reduction of 2,3-dihydroxy-2-methyl butyrate (dhmb) in butanol production |
US20130035515A1 (en) | 2011-06-17 | 2013-02-07 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Lignocellulosic hydrolysates as feedstocks for isobutanol fermentation |
JP6093764B2 (ja) | 2011-07-28 | 2017-03-08 | ビュータマックス・アドバンスド・バイオフューエルズ・エルエルシー | ケトイソ吉草酸デカルボキシラーゼ酵素およびその使用方法 |
AU2012362144A1 (en) | 2011-12-30 | 2014-07-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Genetic switches for butanol production |
EP2798072A2 (en) | 2011-12-30 | 2014-11-05 | Butamax Advanced Biofuels LLC | Fermentative production of alcohols |
WO2013142338A1 (en) | 2012-03-23 | 2013-09-26 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Acetate supplemention of medium for butanologens |
CA2873109A1 (en) | 2012-05-11 | 2013-11-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Ketol-acid reductoisomerase enzymes and methods of use |
WO2014052670A1 (en) | 2012-09-26 | 2014-04-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Polypeptides with ketol-acid reductoisomerase activity |
US9273330B2 (en) | 2012-10-03 | 2016-03-01 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Butanol tolerance in microorganisms |
WO2014106107A2 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Butamax (Tm) Advanced Biofuels Llc | Dhad variants for butanol production |
US20140186911A1 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Butamax Advanced Biofuels Llc | Recombinant host cells and methods for producing butanol |
HUE045200T2 (hu) | 2013-03-14 | 2019-12-30 | Du Pont | Glicerin-3-foszfát dehidrogenáz butanol elõállítására |
US9580705B2 (en) | 2013-03-15 | 2017-02-28 | Butamax Advanced Biofuels Llc | DHAD variants and methods of screening |
-
2010
- 2010-12-29 EP EP10798705A patent/EP2519628A2/en not_active Withdrawn
- 2010-12-29 BR BR112012016042-7A patent/BR112012016042A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2010-12-29 AU AU2010343048A patent/AU2010343048A1/en not_active Abandoned
- 2010-12-29 MX MX2012007583A patent/MX2012007583A/es active IP Right Grant
- 2010-12-29 CN CN201080062567.1A patent/CN102762722B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-12-29 JP JP2012547274A patent/JP5947219B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2010-12-29 WO PCT/US2010/062390 patent/WO2011090753A2/en active Application Filing
- 2010-12-29 CA CA2784903A patent/CA2784903A1/en not_active Abandoned
- 2010-12-29 NZ NZ600509A patent/NZ600509A/en not_active IP Right Cessation
- 2010-12-29 KR KR1020127019867A patent/KR20120115349A/ko not_active Application Discontinuation
- 2010-12-29 US US12/980,597 patent/US8765433B2/en active Active
-
2012
- 2012-06-14 ZA ZA2012/04375A patent/ZA201204375B/en unknown
-
2014
- 2014-05-20 US US14/282,722 patent/US9410166B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009513136A (ja) * | 2005-10-26 | 2009-04-02 | イー・アイ・デュポン・ドウ・ヌムール・アンド・カンパニー | 四炭素アルコールの発酵性生産 |
WO2009086423A2 (en) * | 2007-12-23 | 2009-07-09 | Gevo, Inc. | Yeast organism producing isobutanol at a high yield |
US20090269823A1 (en) * | 2008-04-28 | 2009-10-29 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Butanol dehydrogenase enzyme from the bacterium achromobacter xylosoxidans |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
JPN6015007365; 'Alcohol dehydrogenase GroES domain protein' Database UniProtKB/TrEMBL Accession No. B2IGW3, Version No. 11, 20091215 * |
JPN6015053113; RecName: Full=Alcohol dehydrogenase E chain, Database UniProt [online], Accession No.P00327, 2009.12 * |
JPN6015053116; RecName: Full=Alcohol dehydrogenase 1, Database UniProt [online], Accession No.P06757, 2009.12.15, [ * |
JPN6015053117; SubName: Full=Alcohol dehydrogenase, zinc-binding, Database UniProt [online], Accession No.B4RIA4, 2 * |
JPN6015053120; SubName: Full=Alcohol dehydrogenase GroES domain protein, Database UniProt [online], Accession No.B8 * |
JPN6015053122; SubName: Full=Alcohol dehydrogenase GroES domain protein, Database UniProt [online], Accession No.C5 * |
JPN6015053125; RecName: Full=Alcohol dehydrogenase [NADP+], Database UniProt [online], Accession No.Q3ZCJ2, 2009.12 * |
JPN6015053126; SubName: Full=Alcohol dehydrogenase GroES domain protein, Database UniProt [online], Accession No.B2 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP5947219B2 (ja) | 2016-07-06 |
US8765433B2 (en) | 2014-07-01 |
WO2011090753A3 (en) | 2011-10-13 |
CN102762722A (zh) | 2012-10-31 |
US20110269199A1 (en) | 2011-11-03 |
CA2784903A1 (en) | 2011-07-28 |
EP2519628A2 (en) | 2012-11-07 |
US9410166B2 (en) | 2016-08-09 |
WO2011090753A2 (en) | 2011-07-28 |
BR112012016042A2 (pt) | 2020-09-15 |
ZA201204375B (en) | 2014-08-27 |
NZ600509A (en) | 2014-08-29 |
MX2012007583A (es) | 2012-07-30 |
KR20120115349A (ko) | 2012-10-17 |
AU2010343048A1 (en) | 2012-06-28 |
US20140377824A1 (en) | 2014-12-25 |
CN102762722B (zh) | 2015-05-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5947219B2 (ja) | 低級アルキルアルコールの発酵生産に有用なアルコールデヒドロゲナーゼ(adh) | |
JP6371427B2 (ja) | ケトイソ吉草酸デカルボキシラーゼ酵素およびその使用方法 | |
US9689004B2 (en) | Acetate supplemention of medium for butanologens | |
US10604774B2 (en) | Production of renewable hydrocarbon compositions | |
JP6099623B2 (ja) | イソブタノール生成のための宿主細胞及び方法 | |
US20180179557A1 (en) | Yeast organism producing isobutanol at a high yield | |
JP6321631B2 (ja) | ケトール酸レダクトイソメラーゼ酵素及び使用方法 | |
EP2346998B1 (en) | Engineered microorganisms capable of producing target compounds under anaerobic conditions | |
JP2016511010A (ja) | ブタノール製造用のグリセロール3−ホスフェートデヒドロゲナーゼ | |
US20140170731A1 (en) | Methods, systems and compositions related to microbial bio-production of butanol and/or isobutanol | |
JP2015503350A (ja) | アルコールの発酵生産 | |
JP2014522634A (ja) | イソブタノール発酵の原料としてのリグノセルロース加水分解物 | |
US9593349B2 (en) | Fermentative production of alcohols | |
EP2446043A1 (en) | Yeast organisms for the production of isobutanol | |
WO2015002916A1 (en) | Post-transcriptional regulation of biosynthetic pathways | |
WO2023285294A1 (en) | Recombinant yeast cell | |
WO2015002919A2 (en) | Regulation of production pathways in host cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131227 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150224 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20150522 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150821 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160105 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160325 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160510 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160602 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5947219 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |