JP2013502402A - 製造性の向上した変異免疫グロブリン - Google Patents

Abstract

本発明は、凝集しやすいＶＨおよびＶＬ ＦＲ領域ならびにＣＤＲ３ドメインおよび／またはＣＨ１ドメイン内の特定の重要なポジションにおける免疫グロブリン分子のアミノ酸配列の改変に関する。本明細書に記載されている改変された免疫グロブリンは、製造性の向上、例えば、凝集傾向の減少および／または産生レベルの増加を示し得る。
【選択図】なし

Description

本発明は、抗体分子の発現および特に、製造性の向上した抗体分子の製造に関する。

「凝集」という用語は、細胞培養および発酵から、単離、精製および製剤化プロセスまでの多種多様な環境において起こり得るタンパク質自己会合にすべて関連する幅広い現象を説明する。例えば、「凝集」は、封入体の形成；細胞分画後の「不溶性」画分におけるタンパク質の蓄積；試料中での混濁の出現、タンパク質沈殿もしくは粒子の形成；またはとりわけ低分子可溶性オリゴマーの形成を説明する場合に使用されることが多い。この状況において、ポリペプチド鎖の「異常な自己会合」として理解されるタンパク質凝集は、関与している分子の性質と、ポリペプチドが産生、単離、保存および投与される環境との両方に大きく依存する多種多様な起源および徴候を有し得る。

ポリペプチドの３次元構造は、その天然の生理学的機能を決定する。タンパク質は典型的には、リボソーム中で合成された後にそのネイティブな構造を獲得する。タンパク質フォールディングのプロセスは、根本的にはタンパク質のアミノ酸配列中にコードされている。しかしながら、フォールディングはまた、多数の支援分子およびポリペプチドがそれらの意図された生物学的に活性な構造を確実に達成するようにする品質管理機構によって、インビボで援助され、プロセスにおいて異常型のコンフォメーションの集団を回避することができる。そのような外部補助因子および品質管理要素は、シャペロン、ジスルフィドイソメラーゼ、翻訳後修飾（すなわち、タンパク質分解プロセシング、アシル化、グリコシル化など）、およびユビキチン−プロテアソーム系を含む。

加えて、タンパク質凝集は、溶液中でタンパク質の本来備わっている安定性によって促進される。タンパク質は、溶液中でごくわずかに安定であり、この比較的低い安定性は、良好な制御機構を提供してそれらの作用を調節しながら特定の生物学的特性を付与するために非常に重要である。しかしながら、例えば、それらを薬物として開発するために、ポリペプチドをそれらの自然な環境の外に出すと、ポリペプチドの安定性および凝集挙動に対して大きな影響を有する可能性があるポリペプチドの製造、単離および製剤化において多数の厳密な制限が課される。

特に、特定の製造またはプロセス要件のために、所与のタンパク質のネイティブな環境に与える変更は、溶液中でのその収率および安定性に対して劇的な影響を有する可能性がある。この問題は、収率を増加させるためのプロセス要件、例えば、人工的合成、異種発現（すなわち、哺乳動物タンパク質の原核生物での発現）、非分泌経路に対する分泌経路の使用、タンパク質合成機構の飽和、またはポリペプチド断片または融合体などの非天然タンパク質により引き起こされるさらなる障害によって悪化する。例えば、異種系における哺乳動物タンパク質の発現は、非常に多くの危険性を提起する。これは、そのような系は通常、「ネイティブな」フォールディングおよびプロセシングを保証するために適切な分子環境を欠くという事実のためである。

Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら、２００９ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．Ａｐｒ；９８（４）：１２０１〜５ Ｔａｎｈａら Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００６ Ｎｏｖ；１９（１１）：５０３〜９ Ｇａｂｒｉｅｌｓｏｎ ＪＰら Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００７ ９６（２）：２６８〜７９ Ｈａｗｅ，Ａ．ら Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８ ２５（７）１４８７〜９９ Ｄｅｍｅｕｌｅ，Ｂら、２００７ Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ３２９：３７〜４５ Ｄｅｍｅｕｌｅ，Ｂら ｍＡｂｓ ２００９ １（２）：１４２〜１５０ Ｌｉｕ Ｊら、ＡＡＰＳ Ｊ ２００６ ８：５８０〜９ Ａｒｖｉｎｔｅ Ｔ．、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」ＡＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ、２００５：６６１〜６ Ｋｉｅｓｅ Ｓら Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００８ ９７（１０）：４３４７〜６６ Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１、５４４〜５４６（１９８９） Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２、４２３〜４２６、１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、８５、５８７９〜５８８３、１９８８ Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０ ６４４４〜６４４８、１９９３ Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １４ １２３９〜１２４５ １９９６ Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６ ３０５５〜３０６１ １９９６ Ｋｎａｐｐｉｋら Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）２９６、５７〜８６ Ｋｒｅｂｓら Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４ ２００１ ６７〜８４ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．、Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．、Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．ＳおよびＦｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２、米国保健社会福祉省 Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，ＡおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ．（２００１）、Ｙｅｔ Ａｎｏｔｈｅｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ：Ａｎ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ３０９、６５７〜６７０ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｇ．Ｓｃｈｕｌｚ＆Ｒ．Ｓｃｈｉｒｍｅｒ、（１９７９）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ ＮＹ Ｉｎｃ ＵＳＡ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２ Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５〜５５１（１９９１） Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３〜５７６ Ｔｒｉｌｌ Ｊ．Ｊ．ら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ６：５５３〜５６０ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ら（１９９１）Ｉｎｔ Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９〜６６４ Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ら（１９９１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５〜９２２ Ｒｉｅｃｈｍａｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２ ３２３〜３２７ ＱｕｅｅｎらＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９８９）８６ １００２９〜１００３３ Ｐａｄｌａｎら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２８ ４８９〜４９８

ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５ ＷＯ９４／１３８０４ ＥＰ−Ａ−０１２０６９４ ＥＰ−Ａ−０１２５０２３ ＥＰ−Ａ−１８４１８７ ＧＢ２１８８６３８Ａ ＥＰ−Ａ−２３９４００ ＷＯ９２／０１０４７

本発明は、特定の重要なポジションにおいて免疫グロブリン分子のアミノ酸配列を改変することが、製造性の向上、特に凝集傾向の減少および／または産生レベルの増加をもたらすという発見に関する。

本発明の一態様は、変異免疫グロブリンを製造する方法であって、
親免疫グロブリンを提供するステップ、
親免疫グロブリンのＶＬドメインフレームワーク領域および／またはＶＬ ＣＤＲ３の易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ、および／または
ＶＨ フレームワーク領域および／またはＶＨ ＣＤＲ３の易凝集性セグメント中に置換を挿入するステップ、および／または
親免疫グロブリンの重鎖（ＣＨ）のＣＨ１定常領域ドメインの易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ
を含み、それにより変異免疫グロブリンを製造する方法を提供する。

変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して製造性の向上を有し得る。例えば、変異免疫グロブリンは、発現時に、親免疫グロブリンに対して凝集傾向の減少、および／または生産性の増加を示し得る。

例えば、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％の生産性の増加および／または親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９９％の凝集の減少（すなわち、凝集しているネイティブな状態の集合体の分子の割合の減少）を示し得る。変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して１００％までの凝集の減少（すなわち、凝集の完全な消失）を示し得る。

製造性の向上は、親免疫グロブリンに対する凝集傾向の減少に完全にまたは部分的に起因し得る。

凝集傾向は、免疫グロブリンの、組換え系において発現後に不溶性凝集物を形成する傾向に関する。凝集傾向の減少は、凝集した形態で存在する免疫グロブリンのネイティブな状態の集合体の分子の割合を減少させる（Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら、２００９ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．Ａｐｒ；９８（４）：１２０１〜５）。言い換えると、凝集したまたは不溶性の形態で存在する変異免疫グロブリンのネイティブな状態の集合体中の分子の割合は、親免疫グロブリンのネイティブな状態の集合体中の割合より低い。

変異免疫グロブリンは、ネイティブな条件下または高温（例えば、６０℃）（すなわち、免疫グロブリンの抗原結合部位がアンフォールディングしない条件）下のいずれかで、親免疫グロブリンと比較してより少ない自己会合または凝集を示し得る。好ましくは、変異免疫グロブリンは、ネイティブな条件（例えば、免疫グロブリンのアンフォールディングをもたらさない条件）下で、親免疫グロブリンよりも少ない自己会合または凝集を示す。

本明細書に記載されている凝集傾向は、熱変性の後に正しくリフォールディングするタンパク質の能力に関する熱リフォールディング効率（ＴＲＥ）とは異なり、典型的には、円二色性（ＣＤ）を使用して測定される（Ｔａｎｈａら Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２００６ Ｎｏｖ；１９（１１）：５０３〜９）。本明細書に記載されている免疫グロブリンの凝集傾向の減少は、免疫グロブリンの熱リフォールディング効率にはほとんどまたは全く影響を有さないであろう。熱リフォールディング効率はしたがって、凝集傾向とは無関係であり、免疫グロブリンの製造性に対して顕著な影響を有さない。

凝集は、従来の方法によって測定することができる。適した技術は、ＧＰ−ＨＰＬＣ、ＨＰＬＣおよびＡＵＣ（Ｇａｂｒｉｅｌｓｏｎ ＪＰ ら Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００７ ９６（２）：２６８〜７９）、濾過後のタンパク質損失；濁度；蛍光色素結合（例えば、ナイルレッド、チオフラビンＴまたは８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸；例えば、Ｈａｗｅ，Ａ．ら Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８ ２５（７）１４８７〜９９またはＤｅｍｅｕｌｅ，Ｂら、２００７ Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ ３２９：３７〜４５を参照されたい）、フィールドフローフラクショネーション（ＦＦＦ；Ｄｅｍｅｕｌｅ，Ｂら ｍＡｂｓ ２００９ １（２）：１４２〜１５０）、および分析用超遠心分離（ＡＵ／ＡＵＣ；Ｌｉｕ Ｊら、ＡＡＰＳ Ｊ ２００６ ８：５８０〜９）を含む。

別の適した方法は、Ａｒｖｉｎｔｅ Ｔ．、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ」ＡＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ、２００５：６６１〜６およびＫｉｅｓｅ Ｓら Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００８ ９７（１０）：４３４７〜６６において記載されている。

製造性の向上は、親免疫グロブリンに対する生産性の増加に完全にまたは部分的に起因し得る。

変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンよりも増加した生産性を示し得る。例えば、変異免疫グロブリンは、組換え系、例えば細菌または哺乳動物細胞において発現される場合に、親免疫グロブリンと比較して増加した収率または力価を示し得る。生産性は、ブラッドフォードアッセイ、分光光度法およびＥＬＩＳＡなどの標準的な技術を使用して測定することができる。

変異免疫グロブリンはまた、親免疫グロブリンに対する精製収率の向上、製剤化の問題の減少、免疫原性の減少およびバイオアベイラビリティの増加のうちの１つまたは複数を示し得る。

好ましい実施形態において、製造性の向上は、親免疫グロブリンに対する凝集傾向の減少および生産性の増加の両方に起因し得る。

好ましくは、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンと同じまたは実質的に同じ活性（すなわち、抗原結合活性）を示す。

免疫グロブリンは、抗原結合部位を含むポリペプチドまたはタンパク質である。抗原結合部位は、抗原の部分またはすべてに特異的に結合する、および抗原の部分またはすべてに空間的に相補的である、免疫グロブリンの部分である。抗原が大きい場合、免疫グロブリンは、抗原の特定の部分のみに結合してもよく、その部分はエピトープと称される。好ましくは、抗原結合ドメインは、同じまたは異なるポリペプチド鎖上にあってもよい免疫グロブリン軽鎖可変領域（ＶＬ）および免疫グロブリン重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。

免疫グロブリンの例は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＭおよびＩｇＥなどの抗体アイソタイプならびにＩｇＧ１およびＩｇＧ４などのそれらのアイソタイプのサブクラスを含む完全な抗体；抗体断片；ならびに、小免疫タンパク質（ＳＩＰ）、小型化抗体、ラクダ科動物ＶＨＨドメインおよびダイアボディなどの遺伝子工学により作製された抗体誘導体を含む。

抗体断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片；（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｉｉ）単一の抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片；（ｉｖ）ＶＨまたはＶＬドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１、５４４〜５４６（１９８９））；（ｖ）単離されたＣＤＲ領域；（ｖｉ）２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片であるＦ（ａｂ’）２断片（ｖｉｉ）ＶＨドメインおよびＶＬドメインが、２つのドメインが会合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーによって結合されている、単鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２、４２３〜４２６、１９８８；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、８５、５８７９〜５８８３、１９８８）；（ｖｉｉｉ）二重特異性単鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）遺伝子融合によって構築された多価または多特異性断片である「ダイアボディ」（ＷＯ９４／１３８０４；Ｐ．Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０ ６４４４〜６４４８、１９９３）を含む。Ｆｖ、ｓｃＦｖまたはダイアボディ分子は、ＶＨおよびＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋の組み込みによって安定化することができる（Ｙ．Ｒｅｉｔｅｒら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １４ １２３９〜１２４５ １９９６）。ＣＨ３ドメインに結合されたｓｃＦｖを含むミニボディもまた作製することができる（Ｓ．Ｈｕら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６ ３０５５〜３０６１ １９９６）。

免疫グロブリンは、天然であってもよく、または完全にまたは部分的に合成であってもよい。キメラ免疫グロブリンは、抗原結合ドメインを含んでもよく、したがってまたは別のポリペプチドと融合した等価物が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は、ＥＰ−Ａ−０１２０６９４およびＥＰ−Ａ−０１２５０２３において記載されている。例えば、Ｆａｂ_２、Ｆａｂ_３、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディおよびミニボディを含む、１つまたは複数の抗原結合部位を含む様々な人工免疫グロブリンが遺伝子工学により作製されている。

いくつかの好ましい実施形態において、本明細書に記載されている親および変異免疫グロブリンは、ＶＨおよびＶＬドメインの両方を含む完全な抗体または抗体断片である。

免疫グロブリンは、天然の供給源からの精製によって単離するまたは得ることができ、または他に、本明細書において記載されているように、遺伝子組み換えによって、もしくは化学合成によって得ることができる。例えば、合成免疫グロブリンは、Ｋｎａｐｐｉｋら Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２０００）２９６、５７〜８６またはＫｒｅｂｓら Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４ ２００１ ６７〜８４によって記載されているように、適した発現ベクター内で合成およびアセンブルされたオリゴヌクレオチドによって作製された遺伝子からの発現によって作出されてもよい。

免疫グロブリンは、例えば、異種真核生物細胞系（例えば、ＣＨＯ細胞）を使用して、天然に、インビトロで、またはエクスビボでのいずれかでグリコシル化されていてもよく、またはグリコシル化されていなくてもよい（例えば、原核生物細胞における発現によって製造される場合）。好ましくは、グリコシル化された免疫グロブリンは、フコースを含まない。

適した親免疫グロブリンは、既知のアミノ酸配列を有する任意の免疫グロブリンとすることができ、異種発現系における組み換え発現によって製造される。異種発現系は、ＣＨＯ細胞などの哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞および特に抗体断片では大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）などの細菌細胞を含み、下記により詳細に記載されている。

本明細書に記載されている改変に適した親免疫グロブリンは、最適でない製造性を示し得る。言い換えると、親免疫グロブリンは、組み換えにより製造規模で異種系において発現される場合、対照免疫グロブリンに対して凝集の増加および／または生産性の減少などの１つまたは複数の望ましくない製造特性を示し得る。

適した対照免疫グロブリンは、同じ異種系において十分な製造性を示す同じタイプの免疫グロブリンを含む。哺乳動物系において製造規模で発現される場合、適した親免疫グロブリンは、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定して１ｇ／Ｌ以下の可溶性物質の収率、および／またはＧＰ−ＨＰＬＣによって測定して５％以上の凝集をもたらすことができる。細菌系において製造規模で発現される場合、親免疫グロブリンは、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定して０．５ｇ／Ｌ以下の可溶性物質の収率、および／またはＧＰ−ＨＰＬＣによって測定して５％以上の凝集をもたらすことができる。

方法は、例えば、本明細書に記載されている通り産生レベルおよび凝集傾向を測定することによって、親免疫グロブリンの製造性を決定するステップを含んでいてもよい。低い収率（例えば、哺乳動物系において１ｇ／Ｌ以下の可溶性物質）および／または高い凝集傾向（例えば、５％以上の凝集）をもたらす親免疫グロブリンは、最適ではない製造性を示すと特定することができる。

本明細書に記載されている親免疫グロブリンの配列の改変は、その製造性を増大させるまたは最適化するために有用であり得る。

好ましい実施形態において、親免疫グロブリンは、治療用抗体、すなわち、治療上関連する抗原に結合して有益な治療効果を達成する抗体であってもよい。治療用抗体の非常に多くの例が、当技術分野において知られている。

変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンと同じ標的抗原に結合するが異なるアミノ酸配列をもつ、天然に存在しない免疫グロブリンである。例えば、変異免疫グロブリンの配列は、親免疫グロブリンの配列に対して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０以上のアミノ酸残基が異なっていてもよい。好ましくは、変異免疫グロブリンの配列は、本明細書において記載されているように、易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換によってのみ、親免疫グロブリン配列と異なる。言い換えると、本明細書において記載されている１つまたは複数の置換を除いて、変異免疫グロブリンの配列は、親免疫グロブリンのアミノ酸配列と同一であることが好ましい。

変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンと同じエピトープに結合し、抗原への結合に関して親免疫グロブリンと競合する。免疫グロブリン間の競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して、および／または一方の免疫グロブリンに、他方のタグの付いていない免疫グロブリンの存在下において検出することができる特異的なレポーター分子をタグ付けすることによって、インビトロで容易にアッセイすることができる。親免疫グロブリンが治療用抗体である場合、変異免疫グロブリンは、同じ有益な治療効果を達成することが好ましい。

本明細書に記載されている免疫グロブリンの抗原結合ドメインは、好ましくは、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む。免疫グロブリンＶＨおよびＶＬドメインはそれぞれ、フレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）によって隔てられている３つのＣＤＲ（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３）を含む。ＣＤＲは、抗体が認識する抗原またはエピトープに対する抗体の特異的結合に関与するアミノ酸残基の大部分を含有する可変ドメイン内の超可変領域である。ＣＤＲの長さは、特定の基礎フレームワークが適応することができる長さに応じて、２から２６アミノ酸まで様々であり得る。

好ましくは、本明細書に記載されている使用のための免疫グロブリンは、ＣＤＲ内またはＣＤＲ間ジスルフィド連結を欠く。

本明細書に記載されている使用のために適した親免疫グロブリンＣＨ１、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の生殖系列または再配列したヒト可変ドメインから得ることができ、または、既知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列に基づく合成可変ドメインであってもよい。いくつかの実施形態では、製造される変異免疫グロブリンのＶＨおよびＶＬドメインは、下記に記載されているように、例えば、抗体エンジニアリングにおいて使用するために、１つまたは複数のＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）を欠いていてもよい。

変異免疫グロブリンは、組み換えにより製造規模で異種系において発現される場合、親免疫グロブリンに対する凝集の減少および／または生産性の増加などの製造性の向上を示し得る。製造規模で哺乳動物系において発現される場合、変異免疫グロブリンは、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定して１ｇ／Ｌを超える可溶性物質の収率、および／またはＧＰ−ＨＰＬＣによって測定して５％未満の凝集をもたらし得る。好ましくは、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンは、１ｇ／Ｌを超える可溶性物質の収率ももたらし、５％未満の凝集も示す。製造規模で細菌系において発現される場合、変異免疫グロブリンは、例えば、ＥＬＩＳＡによって測定して０．５ｇ／Ｌを超える可溶性物質の収率、および／またはＧＰ−ＨＰＬＣによって測定して５％未満の凝集をもたらし得る。好ましくは、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンは、０．５ｇ／Ｌを超える可溶性物質の収率ももたらし、５％未満の凝集も示す。

易凝集性セグメントは、周囲の配列に比べて高い凝集傾向を有し、免疫グロブリンの製造性に悪影響を及ぼす、免疫グロブリンの軽鎖または重鎖配列内のアミノ酸残基の短い配列である。易凝集性セグメントは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０アミノ酸残基からなり得る。

易凝集性セグメントは、例えば、免疫グロブリンのＣＨ１、ＶＨまたはＶＬドメイン中に位置していてもよい。ＶＨもしくはＶＬドメインまたはＣＨ１ドメインのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４またはＣＤＲ３領域などの免疫グロブリンの単一のドメインまたは領域は、その配列内に多数の易凝集性セグメントをもっていることがある。本明細書に記載されているこれらの易凝集性セグメントのうちの１つまたは複数における１つまたは複数の残基の置換は、本明細書に記載されているように、免疫グロブリンの製造性を向上させることができる。

下記に記載されている免疫グロブリン残基ポジションは、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．、Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．、Ｐｅｒｒｙ，Ｈ．Ｍ．、Ｇｏｔｔｅｓｍａｎｎ，Ｋ．ＳおよびＦｏｅｌｌｅｒ，Ｃ．（１９９１）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ公開番号９１−３２４２、米国保健社会福祉省（Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）において述べられているスキームに従って番号を付けている。

適切な場合、置換のポジションは、免疫グロブリン配列において不変のＫａｂａｔ番号の残基に対して記載されてもよい。

代替の抗体番号付けスキームは、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，ＡおよびＰｌｕｃｋｔｈｕｎ Ａ．（２００１）、Ｙｅｔ Ａｎｏｔｈｅｒ Ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｄｏｍａｉｎｓ：Ａｎ Ａｕｔｏｍａｔｉｃ Ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｔｏｏｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ ３０９、６５７〜６７０において記載されている。表１ａおよび１ｂは、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ番号付けスキームとＫａｂａｔ番号付けスキームとの間の対応を示す。

本明細書に記載されている易凝集性セグメント中に置換されるアミノ酸は、好ましくは、２０種の天然に存在するアミノ酸のうちの１つである。天然に存在するアミノ酸およびそれらの標準的な１文字および３文字省略形は、当技術分野においてよく知られている（Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｇ．Ｓｃｈｕｌｚ＆Ｒ．Ｓｃｈｉｒｍｅｒ、（１９７９）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ ＮＹ Ｉｎｃ ＵＳＡ）。

置換は、親免疫グロブリンのＶＬドメインフレームワーク領域内の易凝集性セグメント中に導入されてもよい。ＶＬドメインフレームワーク領域の適した易凝集性セグメントは、ポジション２０易凝集性セグメント、ポジション３７易凝集性セグメント、ポジション４５易凝集性セグメントおよびポジション７４易凝集性セグメントからなる群から選択することができる。

ポジション２０易凝集性セグメントは、ＶＬフレームワーク領域１中に位置し、ＶＬドメインのポジション１５からポジション２３にまでわたっている。

ポジション２０易凝集性セグメント内の置換は、ＶＬドメインのポジション１８に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１８のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１８の残基は、Ｒ、ＳまたはＶで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション１８のアミノ酸残基は、Ｔであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｔ１８Ｒ、Ｔ１８ＳまたはＴ１８Ｖ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ポジション２０易凝集性セグメント内の置換は、ＶＬドメインのポジション２０に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション２０のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション２０の残基は、Ｋ、Ｒ、ＳまたはＶで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション２０のアミノ酸残基は、Ｔであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｔ２０Ｋ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ２０ＳまたはＴ２０Ｖ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ポジション３７易凝集性セグメントは、ＶＬフレームワーク領域２中に位置し、ＶＬドメインのポジション３６からポジション３８にまでわたっている。

ポジション３７易凝集性セグメント内の置換は、ポジション３７に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション３７のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション３７の残基は、ＱまたはＮで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション３７のアミノ酸残基は、Ｌであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｌ３７Ｑ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ポジション４５易凝集性セグメントは、ＶＬフレームワーク領域２中に位置し、ＶＬドメインのポジション４２からポジション４９にまでわたっている。

ポジション４５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション４５に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション４５のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション４５の残基は、Ｅ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション４５のアミノ酸残基は、Ｔであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｔ４５Ｅ、Ｔ４５Ｋ、Ｔ４５Ｒ、Ｔ４５ＱまたはＴ４５Ｖ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。親免疫グロブリン中のポジション４５のアミノ酸残基は、Ｑであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｑ４５Ｅ、Ｑ４５ＫまたはＱ４５Ｒ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ポジション４５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション４６に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション４６のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション４６の残基は、Ｌ、Ｙ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＦまたはＳで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション４６のアミノ酸残基は、Ｔであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｔ４６ＬまたはＴ４６Ｙ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。親免疫グロブリン中のポジション４６のアミノ酸残基は、Ｌであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｌ４６Ｋ、Ｌ４６Ｒ、Ｌ４６Ｈ、Ｌ４６ＦまたはＬ４６Ｓ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ポジション７４易凝集性セグメントは、ＶＬフレームワーク領域３中に位置し、ＶＬドメイン配列のポジション７１からポジション７７にまでわたっている。

ポジション７４易凝集性セグメント内の置換は、ポジション７４に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション７４のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション７４の残基は、Ｖで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション７４のアミノ酸残基は、Ｔであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｔ７４Ｖ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

置換は、親免疫グロブリンのＶＬ ＣＤＲ３内の易凝集性セグメント中に導入されてもよい。適した易凝集性セグメントは、ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントおよびＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメントからなる群から選択することができる。

ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントは、ＶＬドメイン配列中の不変残基Ｃ８８から残基Ｃ８８の８アミノ酸Ｃ末端側のポジションにまでわたっている。例えば、ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントは、ＶＬドメインのポジション８８からポジション９５ａにまでわたっていてもよい。

親免疫グロブリン中のポジション８８（Ｃ８８）、８９（Ｃ８８＋１；すなわち、残基Ｃ８８の１残基Ｃ末端側）、９０（Ｃ８８＋２）、９１（Ｃ８８＋３）、９２（Ｃ８８＋４）、９３（Ｃ８８＋５）、９４（Ｃ８８＋６）、９５（Ｃ８８＋７）および９５ａ（Ｃ８８＋８）のうちの１つまたは複数のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。不変Ｋａｂａｔ残基Ｃ８８に対して番号を付けたＶＬ ＣＤＲ３ポジションは、括弧内に示す。

ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９１（Ｃ８８＋３）に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション９１のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション９１の残基は、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、またはＷで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション９１のアミノ酸残基は、Ｙであってもよい。変異免疫グロブリンは、Ｙ９１Ａ、Ｙ９１Ｆ、Ｙ９１Ｌ、Ｙ９１Ｒ、Ｙ９１ＳまたはＹ９１Ｗ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９３（Ｃ８８＋５）に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション９３のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション９３の残基は、Ｄ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション９３のアミノ酸残基は、Ｐであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｐ９３Ｄ、Ｐ９３Ｆ、Ｐ９３Ｌ、Ｐ９３Ｑ、Ｐ９３Ｓ、Ｐ９３Ｔ、Ｐ９３ＷまたはＰ９３Ｙ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

ＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメントは、ＶＬドメイン配列中の不変残基Ｆ９８の３アミノ酸Ｎ末端側のポジション（すなわち、ポジションＦ９８−３または９５）からポジション９９にまでわたっている。

親免疫グロブリン中のポジション９５（Ｆ９８−３）、９６（Ｆ９８−２）、９７（Ｆ９８−１）、９８または９９のうちの１つまたは複数のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。

ＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９６（Ｆ９８−２）に存在してもよい。Ｋａｂａｔ残基Ｆ９８に近接していることによって番号を付けたＶＬ ＣＤＲ３ポジションは、括弧内に示す。

親免疫グロブリン中のポジション９６のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション９６の残基は、Ｅ、Ｌ、ＶまたはＷで置換されている。

例えば、親免疫グロブリン中のポジション９６のアミノ酸残基は、Ｒであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｒ９６Ｅ、Ｒ９６Ｌ、Ｒ９６ＶまたはＲ９６Ｗ置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。

置換は、親免疫グロブリンのＶＨドメインフレームワーク領域内の易凝集性セグメント中に導入されてもよい。ＶＨドメインフレームワーク領域の適した易凝集性セグメントは、ＦＲ１易凝集性セグメント、ポジション７５易凝集性セグメント、ポジション９５易凝集性セグメント、およびポジション１０２易凝集性セグメント（またはＣＤＲ３易凝集性セグメント）からなる群から選択することができる。

ＦＲ１易凝集性セグメントは、ＶＨフレームワーク領域１中に位置し、例えば、ＶＨドメイン配列のポジション１からポジション２１にまでわたっていてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントは、ポジション１〜３、ポジション４〜６、ポジション１１〜１３、およびポジション１６〜２１からなる群から選択される易凝集性セグメントを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントは、ＶＨドメイン配列のポジション１からポジション３にまでわたっていてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１の残基は、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＡまたはＶで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１のアミノ酸残基は、Ｅであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｅ１Ｑ、Ｅ１Ｄ、Ｅ１ＡまたはＥ１Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよく、または親免疫グロブリン中のポジション１のアミノ酸残基は、Ｑであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｑ１Ｅ、Ｑ１Ｄ、Ｑ１ＡまたはＱ１Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントは、ＶＨドメインのポジション４からポジション６にまでわたっていてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ＶＨドメインのポジション５に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション５のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション５の残基は、Ｖで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション５のアミノ酸残基は、Ｌであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｌ５Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントは、ＶＨドメインのポジション１１からポジション１３にまでわたっていてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ＶＨドメインのポジション１２に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１２のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１２の残基は、Ｖで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１２のアミノ酸残基は、Ｌであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｌ１２Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントは、ＶＨドメインのポジション１６からポジション２１にまでわたっていてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１７に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１７のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１７の残基は、Ｒで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１７のアミノ酸残基は、Ｇであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｇ１７Ｒ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１９に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１９のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１９の残基は、ＴまたはＶで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１９のアミノ酸残基は、Ｌであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｌ１９ＴまたはＬ１９Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント内の置換は、ポジション２０に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション２０のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション２０の残基は、Ａ、Ｋ、ＳまたはＴで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション２０のアミノ酸残基は、Ｒであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｒ２０Ａ、Ｒ２０Ｋ、Ｒ２０ＳまたはＲ２０Ｔ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ポジション７５易凝集性セグメントは、ＶＨドメインのポジション６０からポジション８５にまでわたっていてもよい。

ポジション７５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション６１に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション６１のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。例えば、ポジション６１の残基は、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｅ、Ｄ、ＮまたはＡで置換されている。好ましくは、ポジション６１の残基は、Ｒで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション６１のアミノ酸残基は、Ｐであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｐ６１Ｒ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ポジション７５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション８５に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション８５のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。例えば、ポジション８５の残基は、Ｅ、ＤまたはＡで置換されている。好ましくは、ポジション８５の残基は、Ｅで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション８５のアミノ酸残基は、Ｖであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｖ８５Ｅ、Ｖ８５ＤまたはＶ８５Ａ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨポジション９５易凝集性セグメントは、ＶＨフレームワーク領域３中に位置し、ポジション９１からポジション９９または１００にまでわたっていてもよい。

親免疫グロブリンのＶＨドメイン中のポジション９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９および／または１００のうちの１つまたは複数のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。

ＶＨポジション９５の易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９４に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション９４のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。例えば、ポジション９４の残基は、Ｒ、ＫまたはＴで置換されていてもよい。好ましくは、ポジション９４の残基は、Ｒで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション９４のアミノ酸残基は、Ｋであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｋ９４Ｒ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよく、または親免疫グロブリン中のポジション９４のアミノ酸残基は、Ｈであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｈ９４Ｒ、Ｈ９４ＫまたはＨ９４Ｔ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨポジション９５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９５に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション９５のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。例えば、ポジション９５の残基は、ＥまたはＤで置換されていてもよい。好ましくは、ポジション９５の残基は、Ｄで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション９５のアミノ酸残基は、Ｒであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｒ９５ＥまたはＲ９５Ｄ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨポジション９５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション９６に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション９６のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション９６の残基は、Ａで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション９６のアミノ酸残基は、Ｇであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｇ９６Ａ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨポジション９５易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１００に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１００のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。ポジション１００の残基は、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰで置換されていてもよい。好ましくは、ポジション１００の残基は、Ｆで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１００のアミノ酸残基は、Ｖであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｖ１００Ｆ、Ｖ１００Ｇ、Ｖ１００Ｌ、Ｖ１００ＭまたはＶ１００Ｐ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

置換は、親免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に導入されてもよい。

ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメントは、ポジション１００ｃ（すなわち、不変残基Ｄ１０１の２アミノ酸Ｎ末端側またはＫａｂａｔ残基Ｄ１０１に対して番号を付けた場合Ｄ１０１−２）からポジション１０２またはポジション１０３にまでわたっている。

親免疫グロブリンのＶＨドメイン中のポジションＤ１０１−２、Ｄ１０１−１（残基Ｄ１０１の２または１アミノ酸Ｎ末端側）、１０１、１０２および１０３のうちの１つまたは複数のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。

ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント内の置換は、ポジションＤ１０１−２（残基Ｄ１０１の２アミノ酸Ｎ末端側）に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジションＤ１０１−２のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジションＤ１０１−２の残基は、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジションＤ１０１−２のアミノ酸残基はＡであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｄ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｅ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｆ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｇ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｐ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｓ、Ａ（Ｄ１０１−２）Ｔ、またはＡ（Ｄ１０１−２）Ｗ、またはＡ（Ｄ１０１−２）Ｙ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。言い換えると、Ｄ１０１の２アミノ酸Ｎ末端側のポジションにおけるＡからＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹへの置換、例えば、Ａ１００ｃ。

ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント内の置換は、ポジションＤ１０１−１（Ｄ１０１の１アミノ酸Ｎ末端側）に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジションＤ１０１−１のアミノ酸残基が、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジションＤ１０１−１の残基は、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＰまたはＭで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジションＤ１０１−１のアミノ酸残基はＳであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｓ（Ｄ１０１−１）Ｆ、Ｓ（Ｄ１０１−１）Ｇ、Ｓ（Ｄ１０１−１）Ｌ、Ｓ（Ｄ１０１−１）ＰまたはＳ（Ｄ１０１−１）Ｍ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、残基Ｓ（Ｄ１０１−１）は、Ｓ１００ｄに相当する。

ＶＨ ＣＤＲ３の易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１０２に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１０２のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１０２の残基は、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１０２のアミノ酸残基は、Ｐであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｐ１０２Ａ、Ｐ１０２Ｆ、Ｐ１０２Ｈ、Ｐ１０２Ｉ、Ｐ１０２Ｌ、Ｐ１０２ＹまたはＰ１０２Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよく、または親免疫グロブリン中のポジション１０２のアミノ酸残基は、Ｓであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｓ１０２Ａ、Ｓ１０２Ｆ、Ｓ１０２Ｈ、Ｓ１０２Ｉ、Ｓ１０２Ｌ、Ｓ１０２ＹまたはＳ１０２Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１０３に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１０３のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１０３の残基は、Ｉ、ＬまたはＶで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１０３のアミノ酸残基は、Ｗであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｗ１０３Ｉ、Ｗ１０３ＬまたはＷ１０３Ｖ置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＣＨ１易凝集性セグメントは、ポジション１５０からポジション１５６にまでわたっている。

ＣＨ１易凝集性セグメント内の置換は、ポジション１５３に存在してもよい。

親免疫グロブリン中のポジション１５３のアミノ酸残基は、変異免疫グロブリンにおいて異なるアミノ酸残基によって置き換えられていてもよい。好ましくは、ポジション１５３の残基は、Ｖで置換されている。例えば、親免疫グロブリン中のポジション１５３のアミノ酸残基は、Ｓであってもよく、変異免疫グロブリンは、Ｓ１５３Ｖ置換を含むＣＨ１ドメインを含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリン配列に対して１０個までの本明細書に記載されている置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個までの置換を含んでいてもよい。

すべての置換が、同じ易凝集性セグメント中または異なる易凝集性セグメント中にあってよい。例えば、変異免疫グロブリンは、本明細書に記載されているように、１、２、３、４個以上の異なる易凝集性セグメント中に置換を含んでいてもよい。変異免疫グロブリンは、ＶＨドメイン、ＶＬドメイン中および／またはＣＨ１領域中に置換を含んでいてもよい。

本明細書において記載されている置換の任意の組合せを用いることができる。置換の適した組合せの例を、表３ａおよび３ｂにおいて示す。

いくつかの実施形態において、変異免疫グロブリンは、ＶＬ ＦＲ１および／またはＦＲ２ドメイン中の２個の置換；ＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＬ ＦＲ２ドメイン中の２個の置換およびＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＬ ＦＲ１ドメイン中の２個の置換、ＶＬ ＦＲ２ドメイン中の２個の置換およびＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＨ ＦＲ１ドメイン中の２個の置換；ＶＨ ＦＲ１ドメイン中の１個の置換およびＶＨ ＣＤＲ３ドメイン中の１個の置換；ＶＨ ＣＤＲ３ドメイン中の２個の置換；またはＣＨ１ドメイン中の１個の置換およびＶＨ ＦＲ１ドメイン中の１個の置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション２０易凝集性セグメント中の２個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１８および２０の両方に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１８および２０の両方の残基が、Ｒで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｔ１８ＲおよびＴ２０Ｒ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション２０易凝集性セグメント中の置換およびポジション７４易凝集性セグメント中の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１８および７４の両方に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１８の残基が、Ｒで置換されていてもよく、ポジション７４の残基が、Ｖで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｔ１８ＲおよびＴ７４Ｖ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション４５易凝集性セグメント中に２個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション４５および４６の両方に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション４５の残基が、ＫまたはＲで置換されていてもよく、ポジション４６の残基が、Ｌで置換されていてもよい。ＶＬドメインが、例えば、Ｔ４５Ｋ（またはＴ４５Ｒ）およびＴ４６Ｌ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション２０易凝集性セグメント中の２個の置換およびポジション４５易凝集性セグメント中の２個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１８、２０、４５および４６に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１８および２０の両方の残基が、Ｒで置換されていてもよく、ポジション４５の残基が、ＫまたはＲで置換されていてもよく、ポジション４６の残基が、Ｌで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｔ１８Ｒ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ４５ＫおよびＴ４６Ｌ置換、またはＴ１８Ｒ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ４５ＲおよびＴ４６Ｌ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメント中の２個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション９１（Ｃ８８＋３）、９３（Ｃ８８＋５）、および９６（Ｆ９８−２）に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション９１の残基が、Ｗで置換されていてもよく、ポジション９３の残基が、Ｑで置換されていてもよく、ポジション９６の残基が、Ｖで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｙ９１Ｗ（Ｃ８８＋３）、Ｐ９３Ｑ（Ｃ８８＋５）、およびＲ９６Ｖ（Ｆ９８−２）置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション４５易凝集性セグメント中の２個の置換、およびＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメント中の２個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション４５、４６、９１（Ｃ８８＋３）、９３（Ｃ８８＋５）、および９６（Ｆ９８−２）に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション４５の残基が、ＫまたはＲで置換されていてもよく、ポジション４６の残基が、Ｌで置換されていてもよく、ポジション９１の残基が、Ｗで置換されていてもよく、ポジション９３の残基が、Ｑで置換されていてもよく、ポジション９６の残基が、Ｖで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｔ４５Ｋ、Ｔ４６Ｌ、Ｙ９１Ｗ（Ｃ８８＋３）、Ｐ９３Ｑ（Ｃ８８＋５）、およびＲ９６Ｖ（Ｆ９８−２）置換またはＴ４５Ｒ、Ｔ４６Ｌ、Ｙ９１Ｗ（Ｃ８８＋３）、Ｐ９３Ｑ（Ｃ８８＋５）、およびＲ９６Ｖ（Ｆ９８−２）置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ポジション２０易凝集性セグメント中の２個の置換、ポジション４５易凝集性セグメント中の２個の置換、およびＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメント中の２個または３個の置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１８、２０、４５、４６、９１（Ｃ８８＋３）、９３（Ｃ８８＋５）、および９６（Ｆ９８−２）に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１８および２０の両方の残基が、Ｒで置換されていてもよく、ポジション４５の残基が、ＫまたはＲで置換されていてもよく、ポジション４６の残基が、Ｌで置換されていてもよく、ポジション９１の残基が、Ｗで置換されていてもよく、ポジション９３の残基が、Ｑで置換されていてもよく、ポジション９６の残基が、Ｖで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｔ１８Ｒ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ４５Ｋ、Ｔ４６Ｌ、Ｙ９１Ｗ（Ｃ８８＋３）、Ｐ９３Ｑ（Ｃ８８＋５）、およびＲ９６Ｖ（Ｆ９８−２）置換またはＴ１８Ｒ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ４５Ｒ、Ｔ４６Ｌ、Ｙ９１Ｗ（Ｃ８８＋３）、Ｐ９３Ｑ（Ｃ８８＋５）、およびＲ９６Ｖ（Ｆ９８−２）置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬポジション３７易凝集性セグメントおよびＶＬポジション４５易凝集性セグメント中に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション３７および４５に置換を含むＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション３７の残基が、ＱまたはＮで置換されていてもよく、ポジション４５の残基が、Ｅ、ＫまたはＲで置換されていてもよい。ＶＬドメインが、例えば、Ｌ３７ＱおよびＱ４５Ｒ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントおよびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。

例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１および１０２の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１の残基が、Ｑ、Ａ、ＥまたはＶで置換されていてもよく、ポジション１０２の残基が、Ｙで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ｑ１ＡおよびＰ１０２Ｙ置換、Ｑ１ＥおよびＰ１０２Ｙ置換、Ｑ１ＶおよびＰ１０２Ｙ置換、Ｅ１ＡおよびＰ１０２Ｙ置換、Ｅ１ＱおよびＰ１０２Ｙ置換、またはＥ１ＶおよびＰ１０２Ｙ置換を含んでいてもよい。

別の例において、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１および１０３の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１の残基が、Ｑ、Ａ、Ｄ、ＥまたはＶで置換されていてもよく、ポジション１０３の残基が、Ｌで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ｑ１ＡおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｑ１ＥおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｑ１ＤおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｑ１ＶおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｅ１ＡおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｅ１ＱおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｅ１ＤおよびＷ１０３Ｌ置換、またはＥ１ＶおよびＷ１０３Ｌ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に２個の置換を含んでいてもよい。

例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１００ｃ（Ｄ１０１−２）および１００ｄ（Ｄ１０１−１）の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１００ｃの残基が、Ｗで置換されていてもよく、ポジション１００ｄの残基が、Ｆで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ａ１００ｃＷおよびＳ１００ｄＦ置換を含んでいてもよい。

別の例において、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１００ｄ（Ｄ１０１−１）および１０２の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１００ｄの残基が、ＦまたはＭで置換されていてもよく、ポジション１０２の残基が、ＶまたはＹで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｙ置換、またはＳ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｙ置換を含んでいてもよい。

別の例において、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション１０２および１０３の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１０２の残基が、ＶまたはＹで置換されていてもよく、ポジション１０３の残基が、Ｌ、ＩまたはＶで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ｐ１０２ＹおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｐ１０２ＹおよびＷ１０３Ｉ置換、Ｐ１０２ＹおよびＷ１０３Ｖ置換、Ｐ１０２ＶおよびＷ１０３Ｌ置換、Ｐ１０２ＶおよびＷ１０３Ｉ置換、またはＰ１０２ＶおよびＷ１０３Ｖ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＨポジション９５易凝集性セグメントおよびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述した通りポジション９５および１０２の両方に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション９５の残基が、ＥまたはＤで置換されていてもよく、ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換されていてもよい。ＶＨドメインが、例えば、Ｒ９５ＤおよびＳ１０２Ｖ置換を含んでいてもよい。任意選択により、ＶＨドメインは、上述したようにポジション９４および１００の両方に置換をさらに含んでいてもよい。例えば、ポジション９４の残基が、Ｒ、ＫまたはＴで置換されていてもよく、ポジション１００の残基が、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰで置換されていてもよい。ＶＨドメインは、例えば、Ｈ９４Ｒ、Ｒ９５Ｄ、Ｖ１００ＦおよびＳ１０２Ｖ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＣＨ１易凝集性セグメントおよびＶＨポジション１９易凝集性セグメント中に置換を含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、上述したようにポジション１５３に置換を含むＣＨ１ドメインおよびポジション１９に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１５３の残基が、Ｖで置換されていてもよく、ポジション１９の残基が、Ｔで置換されていてもよい。免疫グロブリンは、例えば、ＣＨ１ドメイン中にＳ１５３Ｖ置換およびＶＨドメイン中にＬ１９Ｔ置換を含んでいてもよい。

別の例において、変異免疫グロブリンは、上述したようにポジション１５３に置換を含むＣＨ１ドメインおよび上述したようにポジション２０に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、ポジション１５３の残基が、Ｖで置換されていてもよく、ポジション２０の残基が、Ａで置換されていてもよい。変異免疫グロブリンは、例えば、Ｓ１５３ＶおよびＲ２０Ａ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬポジション２０易凝集性セグメント中に置換を含むＶＬドメインおよびＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント中に置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、ポジション２０に置換を有するＶＨドメインおよびポジション１８に置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション２０の残基が、Ａで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション１８の残基が、Ｖで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｔ１８Ｖ置換を有するＶＬドメインおよびＲ２０ＡまたはＲ２０Ｖ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬポジション４５易凝集性セグメント中に置換を含むＶＬドメインおよびＶＨポジション７５易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、ポジション６１および８５に置換を有するＶＨドメインおよびポジション４６に置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション６１の残基が、Ｋ、Ｒ、Ｑ、Ｅ、Ｄ、ＮおよびＡ、好ましくはＲで置換されていてもよく、ＶＨドメイン中のポジション８５の残基が、Ｅ、Ｄ、またはＡ、好ましくはＥで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション４６の残基が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｆ、またはＳ、好ましくはＲで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｌ４６Ｒ置換を有するＶＬドメインおよびＰ６１ＲおよびＶ８５Ｅ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬポジション４５易凝集性セグメント中の置換を含むＶＬドメインならびにＶＨポジション９５易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換およびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、ポジション９５および１０２の置換を有するＶＨドメインおよびポジション３７および４５の置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション９５の残基が、ＥまたはＤ、好ましくはＤで置換されていてもよく、ＶＨドメイン中のポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＹで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション３７の残基が、ＱまたはＮ、好ましくはＱで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション４５の残基が、Ｒ、ＫまたはＥ、好ましくはＲで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｌ３７ＱおよびＱ４５Ｒ置換を有するＶＬドメインおよびＲ９５ＤおよびＳ１０２Ｖ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ＶＬポジション４５易凝集性セグメント中に置換を含むＶＬドメインおよびＶＨポジション９５易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含むＶＨドメインを含んでいてもよい。例えば、変異免疫グロブリンは、ポジション９４および９５に置換を有するＶＨドメインおよびポジション４６に置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション９４の残基が、Ｒ、ＫまたはＴ、好ましくはＲで置換されていてもよく、ＶＨドメイン中のポジション９５の残基が、ＥまたはＤ、好ましくはＤで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション４６の残基が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｆ、またはＳ、好ましくはＲで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｌ４６Ｒ置換を有するＶＬドメインおよびＨ９４ＲおよびＲ９５Ｄ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

ＶＨ、ＶＬおよびＣＨ１ドメインの易凝集性セグメントのアミノ酸配列内で置換を行うために必要とされる技術は、当技術分野において一般に利用可能である。例えば、１つまたは複数の置換を含む変異免疫グロブリンをコードしている核酸は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２またはＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓにおいて記載されているように、ＤＮＡ操作および突然変異誘発の標準的な技術を使用して製造することができる。次いで、下記に記載されている通り、核酸を発現させて変異免疫グロブリンを製造することができる。

親免疫グロブリンの標的抗原に結合するおよび／またはそれを中和する能力について、および／または製造性の向上について、変異体配列を試験することができる。

上記に述べた置換の１つまたは複数の導入は、その親免疫グロブリンに対して変異免疫グロブリンの発現時の生産性を増大させることおよび凝集傾向を減少させることの両方によって、その親免疫グロブリンに対して変異免疫グロブリンの製造性を増大させ得る。

例えば、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％の生産性の増加および親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９９％の凝集の減少を示し得る。変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して１００％までの凝集の減少（すなわち、凝集の完全な消失）を示し得る。

本明細書に記載されている変異免疫グロブリンを製造する方法は、親免疫グロブリンを提供するステップ、ＶＬドメイン中のＶＬポジション３７易凝集性セグメントおよび／またはＶＬポジション４５易凝集性セグメントに置換を導入するステップ、および／または
ＶＨドメイン中のＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント、ＶＨポジション９５易凝集性セグメント、およびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を導入するステップ
を含むことができ、それにより、変異免疫グロブリンを製造し、前記変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して生産性の増加および凝集の減少の両方を示す。

例えば、変異免疫グロブリンを製造する方法は、
親免疫グロブリンを提供するステップ、
ＶＨドメインのポジション１のＡ、Ｄ、Ｅ、ＱまたはＶ、ポジション１７のＲ、ポジション９４のＲ、ポジション９５のＤ、ポジション９６のＡ、ポジション１００のＦ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰ、好ましくはＦまたはＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＶまたはＹの１つまたは複数の置換を導入するステップ、および／または
ＶＬドメインのポジション３７のＱ、ポジション４５のＥ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶ、好ましくはＫまたはＲ、ポジション４６のＬまたはＹ、好ましくはＬの置換を導入するステップ
を含むことができ、それにより、変異免疫グロブリンを製造し、前記変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して生産性の増加および凝集の減少の両方を示す。

例えば、適したＶＨドメインは、任意選択によりさらにポジション９４および１００の置換とともに、上述したようにポジション９４および１０２に置換を有していてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション９５の残基が、Ｄで置換されていてもよく、ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＶまたはＹで置換されていてもよく、任意選択により、ポジション９４の残基はまた、Ｒで置換されていてもよく、ポジション１００の残基はＦで置換されていてもよい。

適したＶＬドメインは、上述したようにポジション３７および４５に置換を有していてもよい。例えば、ポジション３７の残基は、Ｑで置換されていてもよく、ポジション４５の残基は、Ｅ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶ、好ましくはＫまたはＲで置換されていてもよい。ＶＬドメインは、例えば、Ｌ３７ＱおよびＱ４５Ｒ置換を含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、上述したようにポジション９４および９５に置換を有するＶＨドメインおよびポジション４６に置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション９４および９５の残基が、それぞれＲおよびＤで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション４６の残基が、Ｒで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｌ４６Ｒ置換を有するＶＬドメインおよびＨ９４ＲおよびＲ９５Ｄ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

別の変異免疫グロブリンは、上述したようにポジション９５および１０２の置換を有するＶＨドメインおよびポジション３７および４５の置換を有するＶＬドメインを含んでいてもよい。例えば、ＶＨドメイン中のポジション９５および１０２の残基は、それぞれＤおよびＶで置換されていてもよく、ＶＬドメイン中のポジション３７および４５の残基は、それぞれＱおよびＲで置換されていてもよい。例えば、免疫グロブリンは、Ｌ７３ＱおよびＱ４５Ｒ置換を有するＶＬドメインならびにＲ９５ＤおよびＳ１０２Ｖ置換を有するＶＨドメインを含んでいてもよい。

本明細書に記載されている易凝集性セグメントの存在は、低下したまたは最適ではない製造性を示す免疫グロブリンを特定するために役立ち得る。

免疫グロブリンの製造性を評価する方法は、免疫グロブリンのＶＬドメイン中のポジション１８、２０、４５、４６、７４、９１、９３および９６ならびに免疫グロブリンのＶＨドメイン中のポジション１、５、１２、１７、１９、２０、９４、９６、１００ｃ、１００ｄ、１０２、１０３、ならびにＣＨ１ドメイン中のポジション１５３からなる群から選択される１つまたは複数のポジションのアミノ酸残基を同定するステップを含むことができ、
免疫グロブリンのＶＬドメイン中の、ポジション１８のＲ、ＳもしくはＶ、好ましくはＲもしくはＶ以外、ポジション２０のＫ、Ｒ、ＳもしくはＶ、好ましくはＲもしくはＶ、ポジション４５のＥ、Ｋ、Ｒ、ＱもしくはＶ、好ましくはＫもしくはＲ、ポジション４６のＬもしくはＹ、好ましくはＬ、ポジション７４のＶ、ポジション９１のＡ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、もしくはＷ、好ましくはＷ、ポジション９３のＤ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷもしくはＹ、好ましくはＱ、および／またはポジション９６のＥ、Ｌ、ＶもしくはＷ、好ましくはＶの残基の存在、および／または
免疫グロブリンのＶＨドメイン中の、ポジション１のＡ、Ｄ、Ｅ、ＱもしくはＶ以外、ポジション５もしくはポジション１２のＶ、ポジション１７のＲ、ポジション１９のＴもしくはＶ、好ましくはＴ、ポジション２０のＡ、Ｋ、ＳもしくはＴ、好ましくはＡ、ポジション９４のＲ、ポジション９６のＡ、ポジション１００ｃのＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、もしくはＹ、好ましくはＷ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＭもしくはＰ、好ましくはＦもしくはＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶもしくはＹ、好ましくはＶもしくはＹ、ポジション１０３のＩ、ＬもしくはＶ、および／またはＣＨ１ドメイン中のポジション１５３のＶの残基の存在
が、その免疫グロブリンが最適ではない製造性を有するという指標になる。

いくつかの実施形態において、免疫グロブリンのＶＨドメイン中の、ポジション１００ｄおよび／または１０２のアミノ酸残基の同一性が決定され得る。ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰ、好ましくはＦまたはＭ以外の残基、および／またはポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＶまたはＹ以外の残基の存在は、その免疫グロブリンの製造性が最適ではないという指標となる。

その製造性が、対照免疫グロブリンに対して低下しているまたは最適ではないと特定される免疫グロブリンは、製造性の向上を示す変異免疫グロブリンを製造するための上記の方法による改変の候補とすることができる。

特に、製造性に対して有害な影響を有する免疫グロブリン配列内の１つまたは複数の残基を特定することができる。次いで、特定された残基を本明細書に記載されている通り変更または改変して、製造性を向上させることができる。

本発明の別の態様は、上記に述べた方法によって製造される親免疫グロブリンの変異体を提供する。

本発明の別の態様は、
親免疫グロブリンの配列に対してフレームワーク易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含むＶＬドメイン、
親免疫グロブリンの配列に対してフレームワーク凝集しやすい領域および／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含むＶＨドメイン、および／または、
親免疫グロブリンの配列に対してＣＨ１凝集しやすい領域に置換を含むＣＨ１ドメイン
を含む親免疫グロブリンの変異体を提供する。

適した易凝集性セグメントおよび置換は、上記に説明されている。

ＶＬ、ＶＨ、またはＣＨ１ドメイン中のポジションの置換は、親配列中のそのポジションの残基の、異なる残基、好ましくは上記に述べた残基との置換を含む。親免疫グロブリンが、上記に述べた残基をアミノ酸配列中の適切なポジションにすでに含有する場合、これは本明細書に記載されている置換または置換された残基ではない。したがって、親または生殖系列免疫グロブリンは、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンではない。

上述したように、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンと同様のまたは同一の生物活性をもち得るが、製造性の向上、例えば、異種発現系における凝集傾向の減少、および／または生産性の増加を示す。

例えば、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも１００％、少なくとも２００％、または少なくとも５００％の生産性の増加および／または親免疫グロブリンに対して少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９９％の凝集の減少（すなわち、凝集しているネイティブな状態の集合にある分子の割合の減少）を示し得る。変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対して１００％までの凝集の減少（すなわち、凝集の完全な消失）を示し得る。

上述したように、変異免疫グロブリンは、親免疫グロブリンに対してバイオアベイラビリティの向上および／または免疫原性の減少を示し得る。

本発明の別の態様は、上述した変異免疫グロブリンまたはそのＣＨ１、ＶＨもしくはＶＬドメインをコードしている単離された核酸を提供する。

核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよく、完全にまたは部分的に合成であってもよい。本明細書において述べられるヌクレオチド配列への言及は、文脈上異なる解釈を要する場合を除き、指定された配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＵがＴで置換されている、指定された配列を有するＲＮＡ分子を包含する。

本明細書に記載されている変異免疫グロブリン分子またはそのＣＨ１、ＶＨドメインおよび／もしくはＶＬドメインは、その変異免疫グロブリン分子またはそのＣＨ１、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインの産生をもたらす条件下で核酸を発現させるステップ、および、それを回収するステップを含む方法によって調製することができる。

下記により詳細に記載されているように、核酸は、１つまたは複数のＣＤＲを欠く変異免疫グロブリンまたはそのＶＨもしはＶＬドメインをコードしていてもよい。ドナー免疫グロブリンから取り出した１つまたは複数のＣＤＲは、ＣＤＲ（複数可）をコードしている適した核酸を、変異免疫グロブリンまたはそのＶＨもしくはＶＬドメインをコードしている核酸中に挿入することによって、変異免疫グロブリンのフレームワーク中に組み込むことができる。

変異免疫グロブリンおよびコードしている核酸は、単離されることが好ましい。免疫グロブリンおよび核酸は、そのような調製がインビトロでまたはインビボで実施される組み換えＤＮＡ技術によるものである場合、それらが調製される（例えば、細胞培養）環境においてともに見出される別のポリペプチドまたは核酸などのそれらに付随する物質を含まない、または実質的に含まないはずである。

本発明の別の態様は、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンまたはそのＣＨ１、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインをコードしている少なくとも１つの核酸を含む、プラスミド、ベクター、転写または発現カセットの形態の核酸構築物を提供する。

構築物は、上述したように免疫グロブリンを発現させるために、発現系において使用することができる。

様々な異なる宿主細胞における免疫グロブリンのクローニングおよび発現のための系は、よく知られている。適した宿主細胞は、細菌、哺乳動物細胞、酵母およびバキュロウイルス系を含む。異種ポリペプチドの発現のために当技術分野において利用可能である哺乳動物細胞系は、チャイニーズハムスター卵巣細胞、Ｈｅｌａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、ＮＳＯマウスメラノーマ細胞および他多数を含む。一般的な、低分子免疫グロブリン分子のための好ましい細菌宿主は、大腸菌である。

抗体および抗体断片などの免疫グロブリンの、大腸菌などの原核生物細胞における発現は、当技術分野において十分に確立されている。総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５〜５５１（１９９１）を参照されたい。培養下の真核生物細胞における発現もまた、免疫グロブリンの製造のための選択肢として当業者に利用可能であり、最近の総説に関しては、例えば、Ｒｅｆ，Ｍ．Ｅ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ．４：５７３〜５７６；Ｔｒｉｌｌ Ｊ．Ｊ．ら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ ６：５５３〜５６０を参照されたい。抗体および抗体断片などの免疫グロブリンはまた、無細胞系において発現されてもよい。

プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子および別の配列を必要に応じて含む適切な調節配列を含有する免疫グロブリンの発現のために適したベクターを、選択または構築することができる。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、ウイルス、例えば、ファージ、またはファージミドとすることができる。さらなる詳細に関しては、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい。例えば、核酸構築物の調製、突然変異誘発、シーケンシング、細胞中へのＤＮＡの導入および遺伝子発現、およびタンパク質の解析における、核酸の操作のための多くの既知の技術およびプロトコールは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版 Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２において詳細に記載されている。

変異免疫グロブリンまたはそのＣＨ１、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインをコードしている核酸は、宿主細胞中に含有されてもよい。なおさらなる態様は、そのような核酸を宿主細胞中に導入するステップを含む方法を提供する。導入は、任意の利用可能な技術を用いることができる。真核生物細胞に関して、適した技術は、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソームに媒介されるトランスフェクションおよびレトロウイルスまたは別のウイルス、例えば、ワクチニア、または、昆虫細胞についてはバキュロウイルスを使用する形質導入を含み得る。核酸を宿主細胞、特に、真核生物細胞中に導入するステップは、ウイルスまたはプラスミドベースの系を使用することができる。プラスミド系は、エピソームに維持されてもよく、または宿主細胞中または人工染色体中に組み込まれてもよい。組み込みは、単一のまたは複数の遺伝子座における１つまたは複数のコピーのランダムな組み込みまたは標的化した組み込みのいずれかによって行うことができる。細菌細胞について、適した技術は、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーションおよびバクテリオファージを使用したトランスフェクションを含み得る。

導入は、例えば、遺伝子の発現のための条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの発現を引き起こした後または可能にした後に行ってもよい。

変異免疫グロブリンまたはそのＣＨ１、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインをコードしている核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）中に組み込まれてもよい。組み込みは、標準的な技術に従うゲノムとの組み換えを促進する配列を含めることによって促進することができる。

発現による製造の後、変異免疫グロブリンまたはそのＣＨ１、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメインは、任意の適した技術を使用して単離および／または精製し、次いで、必要に応じて使用することができる。例えば、製造方法は、生成物を、薬学的に許容される賦形剤などの少なくとも１つのさらなる成分を含む組成物に製剤化するステップをさらに含んでいてもよい。

変異免疫グロブリンは、ヒト患者に有効量の変異免疫グロブリンを投与するステップを含む、前記患者における疾患または障害の治療方法（予防的治療を含んでいてもよい）などの、ヒトまたは動物の身体の治療または診断方法において使用されてもよい。

本発明の別の態様は、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンを含む医薬組成物、医薬または医薬組成物を製造する方法であって、変異免疫グロブリンを薬学的に許容される賦形剤とともに製剤化するステップを含む方法、および投与するための医薬の製造における変異免疫グロブリンの使用を提供する。

変異免疫グロブリンに加えて、医薬組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤または当業者によく知られている別の物質を含んでいてもよい。そのような物質は、非毒性であるべきであり、活性成分の有効性を妨げるべきではない。担体または別の物質の正確な性質は、経口、または、例えば静脈内の注入によるものであってもよい投与経路に依存するであろう。

静脈内注入、または患部での注入では、活性成分は、発熱物質を含まず、適したｐＨ、等張性および安定性を有する非経口的に許容できる水溶液の形態であるだろう。関連分野の当業者は、当然、例えば、塩化ナトリウム注入、リンゲル注入、乳酸リンゲル注入などの等張ビヒクルを使用して、適した溶液を調製することができる。防腐剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤および／または別の添加剤が、必要とされる場合、含まれてもよい。

組成物は、治療される状態に応じて、単独でまたは別の治療と組み合わせて、同時にまたは逐次的に投与されてもよい。別の治療は、非ステロイド系抗炎症剤（例えば、アスピリン、パラセタモール、イブプロフェンまたはケトプロフェン）もしくはモルヒネなどの麻酔薬などの鎮痛薬、または制吐剤などの適した用量の投与を含み得る。

変異免疫グロブリンを使用して治療的利益をもたらし得る臨床的適応は、親免疫グロブリンが有用であり得る任意の状態または障害を含む。

本発明に従って、提供される組成物を個体に投与することができる。投与は、患者にとっての利益を示すために十分な「治療的に有効な量」であることが好ましい。そのような利益は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善とすることができる。投与される実際の量、ならびに投与の割合および経時変化は、治療されているものの性質および重症度に依存するであろう。例えば、投薬量についての決定などの治療の処方箋は、一般医および別の医師の責任の範囲内である。抗体の適切な用量は、当技術分野においてよく知られており、Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ら（１９９１）Ｉｎｔ Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９〜６６４；Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ら（１９９１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５〜９２２を参照されたい。

正確な用量は、抗体が診断用であるかまたは治療用であるか、治療される領域の大きさおよび位置、抗体の正確な性質（例えば、完全な抗体、断片またはダイアボディ）、ならびに任意の検出可能な標識または抗体に結合している別の分子の性質を含む多数の因子に依存するであろう。典型的な抗体用量は、典型的には、全身の適用では０．５ｍｇ〜１ｇ、および局所的な適用では１０μｇ〜１ｍｇの範囲であるだろう。典型的には、抗体は、完全な抗体、好ましくは、ＩｇＧ４アイソタイプであるだろう。これは成人患者の１回の治療についての用量であり、小児および乳幼児では比例して調節されてもよく、また別の抗体フォーマットでは分子量に比例して調節されてもよい。治療は、毎日、週に２回、週に１回または月１回間隔で、医師の裁量で繰り返されてもよい。

易凝集性セグメント内に置換を含み、本明細書に記載されている核酸をコードしている変異免疫グロブリンは、製造性の向上した免疫グロブリンを製造するための抗体エンジニアリングの方法において有用であり得る。

組み換えＤＮＡ技術を使用して、向上した製造性をもつ変異免疫グロブリンを製造することができる。そのような技術は、ドナー抗体の１つまたは複数のＣＤＲ配列をコードしているＤＮＡを、本明細書に記載されている変異免疫グロブリンの可変領域に導入することを含み得る。例えば、ＥＰ−Ａ−１８４１８７、ＧＢ２１８８６３８ＡまたはＥＰ−Ａ−２３９４００、および多数のその後の文献を参照されたい。代替として、免疫グロブリンを産生するハイブリドーマまたは別の細胞を、製造される免疫グロブリンの製造性を向上させる、免疫グロブリンの易凝集性セグメントをコードしている配列内の遺伝子突然変異に供してもよい。これは、組み換え産生に適した製造性を有する抗体のエンジニアリングまたは再フォーマット化において有用であり得る。

いくつかの実施形態において、変異免疫グロブリンのＶＨおよびＶＬドメインは、１つまたは複数のＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）を欠いていてもよい。異種のまたは合成のＣＤＲを、組み換えＤＮＡ技術を使用して、対応するＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）を欠いている変異免疫グロブリンＶＨおよび／またはＶＬドメイン中に導入してもよい。このことにより、製造性に影響を及ぼすことなく変異免疫グロブリンの結合特性を変更することができる。

例えば、ドナー免疫グロブリン由来の１つまたは複数のＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）を使用して、本明細書に記載されている変異免疫グロブリン中の対応するＣＤＲ配列を置き換えることができる。本明細書に記載されているヒト変異免疫グロブリンの１、２、３、４、５、またはすべての６個のＣＤＲ配列を、マウス免疫グロブリンなどの非ヒトドナー免疫グロブリンから取り出されたＣＤＲ配列によって置き換えて、ヒト化免疫グロブリンを製造してもよい。ヒト化免疫グロブリンは、非ヒトドナー免疫グロブリンと同じ結合活性をもち得るが、ヒトにおいて免疫原性の減少を示し、したがって、治療上の有用性を有し得る。

標的抗原に結合するハイブリッド免疫グロブリンを調製する方法は、
前記標的抗原に結合するドナー免疫グロブリンを提供するステップ、
上述した変異免疫グロブリンを提供するステップ、および
前記変異免疫グロブリンの１、２、３、４、５または６個のＣＤＲ配列を、前記ドナー免疫グロブリンの対応するＣＤＲ配列と置き換えるステップ
を含むことができ、それにより、前記標的抗原に結合するハイブリッド免疫グロブリンを製造する。

好ましくは、変異免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３および／またはＶＬ ＣＤＲ３は、ドナー免疫グロブリンの対応するＶＨ ＣＤＲ３および／またはＶＬ ＣＤＲ３と置き換えられている。

変異免疫グロブリンはヒト免疫グロブリンとすることができ、ドナー免疫グロブリンは非ヒト免疫グロブリンとすることができる。

ＣＤＲ移植によって免疫グロブリンをヒト化するために適した技術は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３２ ３２３〜３２７；ＱｕｅｅｎらＰＮＡＳ ＵＳＡ（１９８９）８６ １００２９〜１００３３を参照されたい）。

ハイブリッド免疫グロブリンのＶＬ ＣＤＲ３は、上述したようにＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントまたはＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメント中の置換を含んでいてもよい。

ハイブリッド免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３は、上述したようにＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を含んでいてもよい。

適した変異免疫グロブリンは、上述したようにフレームワークまたは定常領域中に１つまたは複数の置換を含んでいてもよい。

いくつかの実施形態において、置換は、ドナーＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ３配列中に導入されていてもよい。置換は、標準的な技術を使用した変異免疫グロブリン中への挿入の前または後になされてもよい。

本明細書に記載されている変異免疫グロブリンはまた、ＣＤＲ移植以外のヒト化の方法においても有用であり得る。本明細書に記載されている１つまたは複数の置換を、ヒト化抗体の製造中に免疫グロブリン中に導入して、その製造性を向上させることができる。用いることができるヒト化技術は、当技術分野においてよく知られている（例えば、Ｐａｄｌａｎら、Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９１）２８ ４８９〜４９８を参照されたい）。

本明細書に記載されている変異免疫グロブリンは、結合特異性を単離するためのライブラリーまたはレパートリーの製造において有用であり得る。

変異免疫グロブリンライブラリーを調製する方法は、
上述した変異免疫グロブリンの集団を提供するステップ、
前記変異免疫グロブリンの集団の１、２、３、４、５または６個のＣＤＲ配列を、ＣＤＲ配列のレパートリーと置き換えるステップ
を含むことができ、それにより、変異免疫グロブリンライブラリーを製造する。

変異免疫グロブリンライブラリーは、同じ変異免疫グロブリンバックグラウンドにおいて多様なレパートリーの置換ＣＤＲ配列を含有するはずである。

ライブラリーは、標的抗原に対して特異的な変異免疫グロブリンについてスクリーニングすることができる。

いくつかの好ましい実施形態において、変異免疫グロブリン集団のＶＨ ＣＤＲ３は、ＶＨ ＣＤＲ３配列のレパートリーによって置き換えることができる。例えば、標的抗原に結合する変異免疫グロブリンを調製する方法は、
（ａ）置き換えられるＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３をコードしている領域を欠くＶＨドメインをコードしている核酸の出発集団を提供するステップであって、前記ＶＨドメインが、上述した１つまたは複数の易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含むステップ、
（ｂ）前記ＶＨドメイン集団をＶＨ ＣＤＲ３アミノ酸配列のレパートリーをコードしているドナー核酸の集団と合わせて、その結果、前記ドナー核酸が、ＶＨドメイン集団中のＣＤＲ３領域中に挿入されるようなステップであって、前記ＶＨ ＣＤＲ３配列を含むＶＨドメインのレパートリーをコードしている核酸の生成集団を提供するためのステップ、
（ｃ）前記生成集団の核酸を発現させるステップ、
（ｄ）標的抗原に特異的な免疫グロブリンを選択するステップ、および
（ｅ）前記免疫グロブリンまたはそれをコードしている核酸を回収するステップ
を含むことができる。

ＶＨドメインをコードしている核酸の集団は、上述したようにＣＨ１易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含むＣＨ１ドメインをコードしているヌクレオチド配列をさらに含んでいてもよい。

同じように、ＶＬ ＣＤＲ３配列のレパートリーを、本明細書に記載されている易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含み、置き換えられるＶＬ ＣＤＲ３を含むか、またはＶＬ ＣＤＲ３をコードしている領域を欠くＶＬドメインをコードしている核酸の集団と合わせてもよい。

ＣＤＲ３に加えて、ＣＤＲ１およびＣＤＲ２配列のレパートリーをまた、本明細書に記載されている易凝集性セグメント中に１つまたは複数の置換を含むＶＨおよび／またはＶＬドメインの集団中に移植して、次いでこれを、標的抗原に特異的な変異免疫グロブリンについてスクリーニングしてもよい。

ＣＤＲ由来配列のレパートリーは、対応するＣＤＲ配列を欠く本明細書に記載されているＶＨまたはＶＬドメインの集団とシャッフルすることができ、シャッフルされた完全なＶＨまたはＶＬドメインを、同起源のＶＬまたはＶＨドメイン（これはまた本明細書に記載されている１つまたは複数の置換を含んでいてもよい）と合わせて、遺伝子工学的に作製された変異免疫グロブリンを提供することができる。次いで、レパートリーは、向上した製造性をもつ適した免疫グロブリンが選択され得るように、ＷＯ９２／０１０４７のファージディスプレイ系などの適した宿主系において提示することができる。レパートリーは、１０^４個々のメンバーより多い任意のもの、例えば、１０^６から１０^８または１０^１０までのメンバーからなっていてもよい。

ＣＤＲシャッフリングおよび抗体エンジニアリングの技術は、当技術分野においてよく知られており、当業者は、そのような技術を使用して、常法に従う方法を使用して製造性の向上した免疫グロブリンを提供することができるであろう。

ＣＤＲ配列のレパートリーは、ＣＤＲ配列内の１つまたは複数のポジションに多様な残基を含み得る。例えば、ＣＤＲ配列のレパートリーは、ＣＤＲ配列内の１、２、３、４、５個以上のポジションに多様な残基を含み得る。

ＣＤＲ配列のレパートリーは、ＣＤＲ配列内に１つまたは複数の可変ポジションを含んでいてもよい。例えば、ＣＤＲ配列のレパートリーは、ＣＤＲ配列内に１、２、３、４、５個以上の可変ポジションを含むことができる。各可変ポジションの残基は、レパートリーの異なるメンバー間で異なっていてもよい。可変ポジションの残基は、ランダムであってもよく（例えば、等しい確率を有する任意の天然に存在するアミノ酸であってもよい）、または、アミノ酸の所定の群または部分集合から選択されてもよい。例えば、変異免疫グロブリンのＶＬ ＣＤＲ３は、ポジション９１のＡ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、ＳおよびＷ、ポジション９３のＤ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷおよびＹ、ならびに／またはポジション９６のＥ、Ｌ、ＶおよびＷを含む、ドナーＶＬ ＣＤＲ３配列のレパートリーによって置き換えられていてもよい。変異免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３は、ポジション１００ｃのＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、およびＹ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＰおよびＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶおよびＹ、ならびに／またはポジション１０３のＩ、ＬおよびＶを含む、ドナーＶＨ ＣＤＲ３配列のレパートリーによって置き換えられていてもよい。

ＣＤＲ３レパートリーをこれらのポジションにおいてこれらの残基に偏らせることは、製造性を向上させるのに役立ち得る。

１つまたは複数の可変ポジションに加えて、ＣＤＲ配列のレパートリーはまた、１つまたは複数の非可変ポジションを含んでいてもよい。各非可変ポジションの残基は、レパートリーの各メンバーにおいて同じであってもよい。

ＣＤＲ配列のレパートリーのレシピエント変異免疫グロブリン中への組み込みは、ライブラリーの各メンバーが本明細書に記載されている１つまたは複数の易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換を含む、多様な結合特性を有する変異免疫グロブリンのライブラリーを製造するために有用であり得る。

変異免疫グロブリンライブラリーは、
上述したようにフレームワーク易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３凝集しやすい領域に置換を含むＶＬドメイン、
上述したようにフレームワーク凝集しやすい領域および／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含むＶＨドメイン、および／または
上述したようにＣＨ１凝集しやすい領域に置換を含むＣＨ１ドメイン
を含むことができ、ライブラリーのメンバーは、１つまたは複数のＣＤＲ配列が異なる。

変異免疫グロブリンのライブラリーは、標的抗原に結合することができる、製造性の向上した免疫グロブリンを特定するために有用であり得る。標的抗原に結合する１つまたは複数の免疫グロブリンを得る方法は、上述した免疫グロブリンのライブラリーと前記抗原とを接触させるステップ、および前記抗原に結合することができるライブラリーの１つまたは複数の免疫グロブリンを選択するステップを含み得る。

ライブラリーは、例えば、各粒子が、その表面に提示される抗体ＶＨ可変ドメイン、および任意選択により存在する場合には提示されるＶＬドメインもまたコードしている核酸を含有する、バクテリオファージ粒子の表面上に提示させることができる。

抗原に結合することができ、バクテリオファージ粒子上に提示される免疫グロブリンの選択後、核酸を、前記免疫グロブリンを提示しているバクテリオファージ粒子から取り出してもよい。そのような核酸は、前記免疫グロブリンを提示しているバクテリオファージ粒子から取り出した核酸配列を有する核酸からの発現によって、免疫グロブリンまたはその抗体ＶＨ可変ドメインおよび／またはＶＬドメインのその後の製造において使用することができる。

免疫グロブリンは、抗原に結合する能力、抗原への結合について別の免疫グロブリンと競合する能力および／または抗原を中和する能力について試験することができる。異なる免疫グロブリンの結合親和性および中和力は、適切な条件下で比較することができる。免疫グロブリンの製造性もまた試験することができる。

本発明の様々なさらなる態様および実施形態は、本開示を考慮して当業者に明らかであるであろう。本明細書において言及されているすべての文書は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

本明細書において使用される「および／または」は、別のものの有無にかかわらず２つの述べられた特徴または構成要素のそれぞれの明確な開示として解釈されるべきである。例えば「Ａおよび／またはＢ」は、それぞれが本明細書において個々に述べられている場合と全く同様に、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂおよび（ｉｉｉ）ＡおよびＢのそれぞれの明確な開示と解釈されるべきである。

文脈により別途規定されない限り、上記に述べた特徴の説明および定義は、本発明の任意の特定の態様または実施形態に限定されるものではなく、記載されているすべての態様および実施形態に等しく適用される。

本発明の特定の態様および実施形態を、例として、以下に記載されている表を参照して以下に説明する。

表１ａおよび１ｂは、免疫グロブリンＶＨおよびＶＬドメインについてのＫａｂａｔ番号付けスキームとＨｏｎｅｇｇｅｒ番号付けスキームとの間の対応を示す。

表２ａおよび２ｂは、製造性を向上させる易凝集性セグメント内のアミノ酸置換の例を示す。好ましい置換もまた示す。アミノ酸に関する標準的なＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ ＪＣＢＮ１文字命名法を使用する。

表３ａおよび３ｂは、製造性を向上させる易凝集性セグメント内の置換の組合せの例を示す。

表４は、変異免疫グロブリンの例の製造性を示す。
実験
遺伝子合成
配列は、市販用の供給業者によって最適化および合成され、ｐＥＥ６．４およびｐＥＥ１２．４中にサブクローニングされた。Ｔｏｐ１０細胞中へ形質転換し、ＬＢ培養液中でＯ／Ｎ培養し、ＱＩＡＧＥＮ Ｅｎｄｏｆｒｅｅプラスミド精製キットを使用して精製することによって、ＤＮＡストックを調製した。ＤＮＡをＴＥ緩衝液中に再懸濁し、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を使用して濃度を決定した。
常法に従う細胞培養
ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を、３〜４日間ごとに１５ｍＭのＬ−グルタミンを添加したＣＤ−ＣＨＯ培地中で継代培養し、振とう式ＣＯ_２インキュベーター（１４０ｒｐｍ）中で、３６．５℃、１０％ＣＯ_２、８５％湿度でインキュベートした。
一過性トランスフェクション
ＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を、リポフェクタミン（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ）２０００を使用してトランスフェクトした。トランスフェクションの７２時間後、上清を回収し、遠心分離にかけ、分析の前に４℃で保存した。
安定なトランスフェクション
大規模発現を、ＭＳＸ選択下で、安定にトランスフェクトされたＣＨＯＫ１ＳＶ細胞を使用して行った。回収したら、上清は、精製の前に４℃で保存した。
精製
上清を、ＨｉＴｒａｐカラム（ＧＥ）を使用してプロテインＡ精製し、濃縮および緩衝液交換の前に４℃で保存した。
抗体濃縮および緩衝液交換
試料を、２０００ｇで１５〜２０分間の遠心分離によって濃縮した。材料を、製剤化緩衝液（５０ｍＭ リン酸、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４）を使用して４〜５回緩衝液交換した。緩衝液を交換したら、試料を製剤化緩衝液中で適切な使用濃度まで希釈した。
ＧＰ−ＨＰＬＣ
２連の試料を、Ａｇｉｌｅｎｔ１２００シリーズＨＰＬＣシステムにおいてＧＰ−ＨＰＬＣによって分析した。１ｍｇ／ｍｌ試料の８０μｌアリコート（４℃に保った）を注入し、１ｍｌ／分で１５分間流した。結果は、ｃｈｅｍｓｔａｔｉｏｎソフトウェアを使用して解析した。
ＩｇＧ力価
抗体発現収率は、サンドイッチＥＬＩＳＡを使用して決定した。力価は、軽鎖特異的対照に対して標準化した。
チオフラビンＴ結合
チオフラビンＴを使用して、凝集をモニタリングすることができる。１ｍｇ／ｍｌの精製抗体を、６０°で１時間インキュベートし、次いで、３０ｍＭの最終濃度のチオフラビンＴと混合し、蛍光発光をＥｘ＝３０５ Ｅｍ＝５０８ｎｍで測定した（Ｈａｗｅ，Ａ．、Ｓｕｔｔｅｒ，ＭおよびＪｉｓｋｏｏｔ，Ｗ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８ ２５（７）１４８７〜９９）。
ＡＮＳ結合
８−アニリノ−１−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）を使用して、凝集をモニタリングすることができる。１ｍｇ／ｍｌの精製抗体を、６０°で１時間インキュベートし、次いで、３０ｍＭの最終濃度のＡＮＳと混合し、蛍光発光をＥｘ＝３６０ Ｅｍ／５０８ｎｍで測定した（Ｈａｗｅ，Ａ．、Ｓｕｔｔｅｒ，ＭおよびＪｉｓｋｏｏｔ，Ｗ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２００８ ２５（７）１４８７〜９９）。
結果
免疫グロブリン配列を、インシリコ法およびインビトロ法によって分析して、易凝集性セグメントを特定した。特定された易凝集性セグメントを、表２に示す。

凝集傾向を減少させた配列番号１および２において示されるＶＨおよびＶＬドメインの特定された易凝集性セグメント内の置換を、設計し、合成した（表２）。免疫グロブリンの発現、安定性および凝集に対する置換の影響を試験した（表３および４）。

特定された易凝集性セグメント内の残基の置換は、製造性の向上、特に、凝集傾向の減少、および／または産生レベルの向上をもたらすことが見出された。
追加の番号付き発明の記述（Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ Ｎｕｍｂｅｒｅｄ Ｓｔａｔｅｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｉｎｖｅｎｔｉｏｎ）
１．フレームワーク（ＦＲ）易凝集性セグメントおよび／または相補性決定領域３（ＣＤＲ３）易凝集性セグメントに置換を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、
フレームワーク領域易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または、
ＣＨ１易凝集性セグメントに置換を含む重鎖定常領域１（ＣＨ１）ドメイン
を含む、変異免疫グロブリン。

２．免疫グロブリンの製造性を向上させる方法であって、
親免疫グロブリンを同定するステップ、
前記親免疫グロブリンのＶＬドメイン中のフレームワーク易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ、および／または
前記親免疫グロブリンのＶＨドメイン中のフレームワーク領域易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ、および／または
前記親免疫グロブリンのＣＨ１ドメイン中の定常領域易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ
を含み、それにより、前記親免疫グロブリンに対して製造性の向上を示す、変異免疫グロブリンを製造する方法。

３．変異免疫グロブリンが、親免疫グロブリンに対して発現時の凝集傾向の減少および／または生産性の増加を有する、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４．ＶＬドメインフレームワーク易凝集性セグメントが、ポジション２０易凝集性セグメント、ポジション４５易凝集性セグメントおよびポジション７４易凝集性セグメントからなる群から選択される、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５．ポジション２０易凝集性セグメントが、ＶＬドメインのポジション１５から２３にまでわたっている、記述４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６．ＶＬドメインが、ＶＬドメインのポジション１８の置換を含む、記述５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７．ポジション１８の残基が、Ｒ、ＳまたはＶで置換される、記述６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８．ＶＬドメインが、Ｔ１８Ｒ、Ｔ１８ＳまたはＴ１８Ｖを含む、記述７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９．ＶＬドメインが、ＶＬドメインのポジション２０の置換を含む、記述５から８のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１０．ポジション２０の残基が、Ｋ、Ｒ、ＳまたはＶで置換される、記述９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１１．ＶＬが、Ｔ２０Ｋ、Ｔ２０Ｒ、Ｔ２０ＳまたはＴ２０Ｖ置換を含む、記述１０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１２．ポジション４５易凝集性セグメントが、ＶＬドメインのポジション４２からポジション４９にまでわたっている、記述４から１１のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１３．ＶＬドメインが、ポジション４５の置換を含む、記述１２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１４．ポジション４５の残基が、Ｅ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶで置換される、記述１３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１５．ＶＬドメインが、Ｔ４５Ｅ、Ｔ４５Ｋ、Ｔ４５Ｒ、Ｔ４５ＱまたはＴ４５Ｖ置換を含む、記述１４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１６．ＶＬドメインが、ポジション４６の置換を含む、記述１２から１５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１７．ポジション４６の残基が、ＬまたはＹで置換される、記述１６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１８．ＶＬドメインが、Ｔ４６ＬまたはＴ４６Ｙ置換を含む、記述１７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

１９．ポジション７４易凝集性セグメントが、ＶＬドメイン配列のポジション７１からポジション７７にまでわたっている、記述４から１８のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２０．ＶＬドメインが、ポジション７４の置換を含む、記述１９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２１．ポジション７４の残基が、Ｖで置換される、記述２０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２２．ＶＬドメインが、Ｔ７４Ｖ置換を含む、記述２１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２３．ＶＬドメインＣＤＲ３易凝集性セグメントが、ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントおよびＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメントからなる群から選択される、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２４．ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントが、ＶＬドメイン配列中の残基Ｃ８８から残基Ｃ８８の８アミノ酸Ｃ末端側のポジションにまでわたっている、記述２３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２５．ＶＬドメインが、ポジション８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５または９５ａの１つまたは複数の置換を含む、記述２４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２６．ＶＬドメインが、ポジション９１の置換を含む、記述２５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２７．ポジション９１の残基が、Ａ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、ＳまたはＷで置換される、記述２６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２８．ＶＬドメインが、Ｙ９１Ａ、Ｙ９１Ｆ、Ｙ９１Ｌ、Ｙ９１Ｒ、Ｙ９１ＳまたはＹ９１Ｗ置換を含む、記述２７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

２９．ＶＬドメインが、ポジション９３の置換を含む、記述２４から２９のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３０．ポジション９３の残基が、Ｄ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹで置換される、記述２９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３１．ＶＬドメインが、Ｐ９３Ｄ、Ｐ９３Ｆ、Ｐ９３Ｌ、Ｐ９３Ｑ、Ｐ９３Ｓ、Ｐ９３Ｔ、Ｐ９３ＷまたはＰ９３Ｙ置換を含む、記述３０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３２．ＶＬのＣ末端のＣＤＲ３易凝集性セグメントが、ＶＬドメイン配列中の残基Ｆ９８の３アミノ酸Ｎ末端側のポジションからポジション９９にまでわたっている、記述２３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３３．ＶＬドメインが、ポジション９５、９６、９７、９８または９９の１つまたは複数の置換を含む、記述３２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３４．ＶＬドメインが、ポジション９６の置換を含む、記述３３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３５．ポジション９６の残基が、Ｅ、Ｌ、ＶまたはＷで置換される、記述３４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３６．ＶＬドメインが、Ｒ９６Ｅ、Ｒ９６Ｌ、Ｒ９６ＶまたはＲ９６Ｗ置換を含む、記述３５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３７．ＶＨドメインフレームワーク易凝集性セグメントが、ＦＲ１易凝集性セグメント、ポジション９５易凝集性セグメントおよびポジション１０２易凝集性セグメントからなる群から選択される、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３８．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ＶＨドメイン配列のフレームワーク領域１中に位置している、記述３７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

３９．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ポジション１〜３；ポジション４〜６、ポジション１１〜１３，およびポジション１６〜２１からなる群から選択される易凝集性セグメントである、記述３８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４０．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ポジション１からポジション３にまでわたっている、記述３９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４１．ＶＨドメインが、ＶＨドメインのポジション１の置換を含む、記述４０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４２．ポジション１の残基が、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＡまたはＶで置換される、記述４１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４３．ＶＨドメインが、Ｑ１Ｅ、Ｑ１Ｄ、Ｑ１ＡまたはＱ１Ｖ置換またはＥ１Ｑ、Ｅ１Ｄ、Ｅ１ＡまたはＥ１Ｖ置換を含む、記述４２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４４．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ＶＨドメインのポジション４からポジション６にまでわたっている、記述３９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４５．ＶＨドメインが、ＶＨドメインのポジション５の置換を含む、記述４４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４６．ポジション５の残基が、Ｖで置換される、記述４５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４７．ＶＨドメインが、Ｌ５Ｖを含む、記述４６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４８．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ＶＨドメインのポジション１１からポジション１３にまでわたっている、記述３９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

４９．ＶＨドメインが、ＶＨドメインのポジション１２の置換を含む、記述４８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５０．ポジション１２の残基が、Ｖで置換される、記述４９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５１．ＶＨドメインが、Ｌ１２Ｖを含む、記述５０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５２．ＦＲ１易凝集性セグメントが、ＶＨドメインのポジション１６からポジション２１にまでわたっている、記述３９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５３．ＶＨドメインが、ポジション１７の置換を含む、記述５２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５４．ポジション１７の残基が、Ｒで置換される、記述５３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５５．ＶＨドメインが、Ｇ１７Ｒ置換を含む、記述５４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５６．ＶＨドメインが、ポジション１９の置換を含む、記述５２から５５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５７．ポジション１９の残基が、ＴまたはＶで置換される、記述５６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５８．ＶＨドメインが、Ｌ１９ＴまたはおよびＬ１９Ｖ置換を含む、記述５７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

５９．ＶＨドメインが、ポジション２０の置換を含む、記述５２から５８のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６０．ポジション２０の残基が、Ａ、Ｋ、ＳまたはＴで置換される、記述５９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６１．ＶＨドメインが、Ｒ２０Ａ、Ｒ２０ＫまたはＲ２０ＳまたはＲ２０Ｔ置換を含む、記述６０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６２．ポジション９５易凝集性セグメントが、ポジション９１からポジション９９にまでわたっている、記述３７から６１のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６３．ＶＨドメインが、ポジション９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８および／または９９の１つまたは複数の置換を含む、記述６２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６４．ＶＨドメインが、ポジション９４の置換を含む、記述６３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６５．ポジション９４の残基が、Ｒで置換される、記述６４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６６．ＶＨドメインが、Ｋ９４Ｒ置換を含む、記述６５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６７．ＶＨドメインが、９６の置換を含む、記述６３から６６のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６８．ポジション９６の残基が、Ａで置換される、記述６７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

６９．ＶＨドメインが、Ｇ９６Ａ置換を含む、記述６８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７０．ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメントが、ポジション１００ｃからポジション１０３にまでわたっている、記述１から６９のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７１．ＶＨドメインが、ポジション１００ｃ、１００ｄ、１０１、１０２および１０３の１つまたは複数の置換を含む、記述７０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７２．ＶＨドメインが、ポジション１００ｃの置換を含む、記述７１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７３．ポジション１００ｃの残基が、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、ＷまたはＹで置換される、記述７２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７４．ＶＨドメインが、Ａ１００ｃＤ、Ａ１００ｃＥ、Ａ１００ｃＦ、Ａ１００ｃＧ、Ａ１００ｃＰ、Ａ１００ｃＳ、Ａ１００ｃＴまたはＡ１００ｃＷまたはＡ１００ｃＹを含む、記述７３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７５．ＶＨドメインが、ポジション１００ｄの置換を含む、記述７０から７４のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７６．ポジション１００ｄの残基が、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＰまたはＭで置換される、記述７５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７７．ＶＨドメインが、Ｓ１００ｄＦ、Ｓ１００ｄＧ、Ｓ１００ｄＬ、Ｓ１００ｄＰまたはＳ１００ｄＭ置換を含む、記述７６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７８．ＶＨドメインが、ポジション１０２の置換を含む、記述７０から７７のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

７９．ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換される、記述７８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８０．ＶＨドメインが、Ｐ１０２Ａ、Ｐ１０２Ｆ、Ｐ１０２Ｈ、Ｐ１０２Ｉ、Ｐ１０２Ｌ、Ｐ１０２ＹまたはＰ１０２Ｖ置換を含む、記述７９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８１．ＶＨドメインが、ポジション１０３の置換を含む、記述７０から８０のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８２．ポジション１０３の残基が、Ｉ、ＬまたはＶで置換される、記述８１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８３．ＶＨドメインが、Ｗ１０３Ｉ、Ｗ１０３Ｌ、Ｗ１０３Ｖ置換を含む、記述８２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８４．ＣＨ１易凝集性セグメントが、ポジション１５０からポジション１５６にまでわたっている、記述１から８３のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８５．ＣＨ１ドメインが、ポジション１５３の置換を含む、記述８４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８６．ＣＨ１ドメインが、ポジション１５３の置換を含む、記述８５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８７．ポジション１５３の残基が、Ｖで置換される、記述８６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８８．ＶＨドメインが、Ｓ１５３Ｖ置換を含む、記述８７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

８９．変異免疫グロブリンの配列が、親免疫グロブリン配列に対して１０個までのアミノ酸置換を有する、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９０．変異免疫グロブリンの配列が、ＶＬ ＦＲ１および／またはＦＲ２ドメイン中の２個の置換；ＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＬ ＦＲ２ドメイン中の２個の置換およびＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＬ ＦＲ１ドメイン中の２個の置換、ＶＬ ＦＲ２ドメイン中の２個の置換およびＶＬ ＣＤＲ３ドメイン中の３個の置換；ＶＨ ＦＲ１ドメイン中の２個の置換；ＶＨ ＦＲ１ドメイン中の１個の置換およびＶＨ ＣＤＲ３ドメイン中の１個の置換；ＶＨ ＣＤＲ３ドメイン中の２個の置換；またはＣＨ１ドメイン中の１個の置換およびＶＨ ＦＲ１ドメイン中の１個の置換を含む、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９１．ＶＨドメインの配列が、１００ｄ（Ｄ１０１−１）および１０２置換を含む、記述９０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９２．ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換され、ポジション１００ｄの残基が、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＰまたはＭで置換される、記述９１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９３．ＶＨドメインが、Ｐ１０２Ａ、Ｐ１０２Ｆ、Ｐ１０２Ｈ、Ｐ１０２Ｉ、Ｐ１０２Ｌ、Ｐ１０２ＹまたはＰ１０２Ｖ置換およびＳ１００ｄＦ、Ｓ１００ｄＧ、Ｓ１００ｄＬ、Ｓ１００ｄＰまたはＳ１００ｄＭ置換を含む、記述９２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９４．ＶＨドメインが、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｙ置換またはＳ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｙ置換を含む、記述９３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９５．変異免疫グロブリンがヒト化されている、前記記述のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたは方法。

９６．免疫グロブリンの製造性を評価する方法であって、
免疫グロブリンのＶＬドメイン中のポジション１８、２０、４５、４６、７４、９１、９３および９６、ＶＨドメイン中のポジション１、５、１２、１７、１９、２０、９４、９６、１００ｃ、１００ｄ、１０２，および１０３、ならびに免疫グロブリンのＣＨ１ドメイン中のポジション１５３からなる群から選択される１つまたは複数のポジションのアミノ酸残基を同定するステップ
を含み、
免疫グロブリンのＶＬドメイン中の、ポジション１８のＲ、ＳもしくはＶ、好ましくはＲもしくはＶ以外、ポジション２０のＫ、Ｒ、ＳもしくはＶ、好ましくはＲもしくはＶ、ポジション４５のＥ、Ｋ、Ｒ、ＱもしくはＶ、好ましくはＫもしくはＲ、ポジション４６のＬもしくはＹ、好ましくはＬ、ポジション７４のＶ、ポジション９１のＡ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、Ｓ、もしくはＷ、好ましくはＷ、ポジション９３のＤ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷもしくはＹ、好ましくはＱ、および／またはポジション９６のＥ、Ｌ、ＶもしくはＷ、好ましくはＶの残基の存在、および／または
免疫グロブリンのＶＨドメイン中の、ポジション１のＡ、Ｄ、Ｅ、ＱまたはＶ以外、ポジション５またはポジション１２のＶ、ポジション１７のＲ、ポジション１９のＴまたはＶ、好ましくはＴ、ポジション２０のＡ、Ｋ、ＳまたはＴ、好ましくはＡ、ポジション９４のＲ、ポジション９６のＡ、ポジション１００ｃのＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹ、好ましくはＷ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰ、好ましくはＦまたはＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＶまたはＹ、ポジション１０３のＩ、ＬまたはＶの残基の存在、および／または
免疫グロブリンのＣＨ１ドメイン中のポジション１５３のＶ以外の残基の存在
が、その免疫グロブリンの製造性が最適ではないという指標になる方法。

９７．免疫グロブリンの製造性を評価する方法であって、免疫グロブリンのＶＨドメイン中のポジション１００ｄおよび／または１０２のアミノ酸残基を同定するステップを含み、
ポジション１００ｄのＳおよび／またはポジション１０２のＰの存在が、その免疫グロブリンが最適ではない製造性を有するという指標になる方法。

９８．前記置換の１つまたは複数を含む、記述１から９５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンまたはそのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＣＨ１ドメインをコードしている単離された核酸。

９９．記述９８に記載の単離された核酸を含む発現ベクター。

１００．記述９９に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。

１０１．変異免疫グロブリンを調製する方法であって、記述９８に記載の核酸を、前記変異免疫グロブリンまたはそのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＣＨ１ドメインの産生をもたらす条件下で発現させるステップ、および、それを回収するステップを含む方法。

１０２．変異免疫グロブリンを、薬学的に許容される賦形剤を含む組成物に製剤化するステップを含む、記述１０１に記載の方法。

１０３．記述１から９５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンおよび薬学的に許容される賦形剤を含む医薬組成物。

１０４．医薬として使用するための記述１から９５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリン。

１０５．標的抗原に結合するハイブリッド免疫グロブリンを調製する方法であって、
前記標的抗原に結合するドナー免疫グロブリンを提供するステップ、
記述１から８９のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンを提供するステップ、
前記変異免疫グロブリンの１つまたは複数のＣＤＲ配列を、前記ドナー免疫グロブリンの対応するＣＤＲ配列と置き換えるステップ
を含み、それにより、前記標的抗原に結合するハイブリッド免疫グロブリンを製造する方法。

１０６．ハイブリッド免疫グロブリンのＶＬ ＣＤＲ３が、ＶＬ ＣＤＲ３のＮ末端の易凝集性セグメントまたはＶＬ ＣＤＲ３のＣ末端の易凝集性セグメント中の置換を含む、記述１０５に記載の方法。

１０７．ハイブリッド免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３が、ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中の置換を含む、記述１０５または記述１０６に記載の方法。

１０８．変異免疫グロブリンライブラリーを調製する方法であって、
記述１から９５のいずれか１つに記載の変異免疫グロブリンを提供するステップ、
前記変異免疫グロブリンの１つまたは複数のＣＤＲ配列を、その中の１つまたは複数のポジションにランダムな残基を含むＣＤＲ配列と置き換えるステップ
を含み、それにより、多様な変異免疫グロブリンのライブラリーを製造する方法。

１０９．変異免疫グロブリンのＶＬ ＣＤＲ３が、ポジション９１のＡ、Ｆ、Ｌ、Ｒ、ＳもしくはＷ、ポジション９３のＤ、Ｆ、Ｌ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、ＷもしくはＹ、および／またはポジション９６のＥ、Ｌ、ＶもしくはＷを含むランダムなＣＤＲ３配列によって置き換えられる、記述１０８に記載の方法。

１１０．変異免疫グロブリンのＶＨ ＣＤＲ３が、ポジション１００ｃのＤ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｗ、またはＹ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＰまたはＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、および／またはポジション１０３のＩ、ＬまたはＶを含むランダムなＣＤＲ３配列によって置き換えられる、記述１０８または記述１０９に記載の方法。

１１１．ライブラリーの各メンバーが、
フレームワーク易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含むＶＬドメイン、
フレームワーク領域易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含むＶＨドメイン、および／または
ＣＨ１易凝集性セグメントに置換を含むＣＨ１ドメイン
を含み、ライブラリーのメンバーが、１つまたは複数のＣＤＲ配列が異なる、変異免疫グロブリンライブラリー。

１１２．記述１１１に記載の変異免疫グロブリンライブラリーをコードする核酸の集団。

１１３．標的抗原に結合する、製造性の向上した１つまたは複数の免疫グロブリンを得る方法であって、
記述１１１に記載の変異免疫グロブリンライブラリーと前記抗原とを接触させるステップ、および
前記抗原に結合することができるライブラリーの１つまたは複数の免疫グロブリンを選択するステップ
を含む方法。

Claims (58)

1. 免疫グロブリンの製造性を向上させる方法であって、
   ＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する親免疫グロブリンを同定するステップ、
   前記親免疫グロブリンのＶＬドメイン中のフレームワーク易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ、および／または
   前記親免疫グロブリンのＶＨドメイン中のフレームワーク領域易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ、および／または
   前記親免疫グロブリンのＣＨ１ドメイン中の定常領域易凝集性セグメント中に置換を導入するステップ
   を含み、それにより、前記親免疫グロブリンに対して製造性の向上を示す、ＶＬドメインおよびＶＨドメインを有する変異免疫グロブリンを製造する方法。
2. フレームワーク（ＦＲ）易凝集性セグメントおよび／または相補性決定領域３（ＣＤＲ３）易凝集性セグメントに置換を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、
   フレームワーク領域易凝集性セグメントおよび／またはＣＤＲ３易凝集性セグメントに置換を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、および／または、
   重鎖定常領域１（ＣＨ１）易凝集性セグメントに置換を含むＣＨ１ドメイン
   を含む、変異免疫グロブリン。
3. 変異免疫グロブリンが、発現時に親免疫グロブリンに対して凝集傾向の減少および生産性の増加の両方を示す、請求項１に記載の方法または請求項２に記載の変異免疫グロブリン。
4. 変異免疫グロブリンが、親免疫グロブリンに対して少なくとも２０％の生産性の増加および少なくとも３０％の凝集傾向の減少を示す、請求項３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
5. 置換が、親免疫グロブリンのＶＬドメイン中のＶＬポジション３７易凝集性セグメントおよび／またはＶＬポジション４５易凝集性セグメントに導入される、および／または
   置換が、親免疫グロブリンのＶＨドメイン中のＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメント、ＶＨポジション９５易凝集性セグメント、およびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメントに導入される、請求項３または請求項４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
6. 前記置換が、ＶＨドメイン配列の１、１７、９４、９５、９６、１００、１００ｄおよび１０２からなる群から選択されるポジションおよび／またはＶＬドメイン配列の３７、４５および４６からなる群から選択されるポジションに導入される、請求項５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
7. ＶＬドメイン配列中のポジション３７の残基が、ＱまたはＮで置換される、請求項６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
8. ＶＬドメインが、Ｌ３７Ｑ置換を含む、請求項７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
9. ＶＬドメイン配列中のポジション４５の残基が、Ｅ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶで置換される、請求項６から８のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
10. ＶＬドメインが、Ｔ４５Ｅ、Ｔ４５Ｋ、Ｔ４５Ｒ、Ｔ４５ＱまたはＴ４５Ｖ置換を含む、請求項９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
11. ＶＬドメイン配列中のポジション４６の残基が、ＬまたはＹで置換される、請求項６から１０のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
12. ＶＬドメインが、Ｔ４６ＬまたはＴ４６Ｙ置換を含む、請求項１１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
13. ＶＨドメイン配列中のポジション１の残基が、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＡまたはＶで置換される、請求項６から１２のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
14. ＶＨドメインが、Ｑ１Ｅ、Ｑ１Ｄ、Ｑ１ＡもしくはＱ１Ｖ置換、またはＥ１Ｑ、Ｅ１Ｄ、Ｅ１ＡもしくはＥ１Ｖ置換を含む、請求項１３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
15. ＶＨドメイン配列中のポジション１７の残基が、Ｒで置換される、請求項６から１４のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
16. ＶＨドメインが、Ｇ１７Ｒ置換を含む、請求項１５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
17. ＶＨドメイン配列中のポジション９４の残基が、Ｒで置換される、請求項６から１６のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
18. ＶＨドメインが、Ｈ９４Ｒ置換を含む、請求項１７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
19. ＶＨドメイン配列中のポジション９５の残基が、Ｄで置換される、請求項６から１８のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
20. ＶＨドメインが、Ｒ９５Ｄ置換を含む、請求項１９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
21. ＶＨドメイン配列中のポジション９６の残基が、Ａで置換される、請求項６から２０のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
22. ＶＨドメインが、Ｇ９６Ａ置換を含む、請求項２１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
23. ＶＨドメイン配列中のポジション１００ｄの残基が、Ｆ、Ｇ、Ｌ、ＰまたはＭで置換される、請求項６から２２のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
24. ＶＨドメインが、Ｓ１００ｄＦ、Ｓ１００ｄＧ、Ｓ１００ｄＬ、Ｓ１００ｄＰまたはＳ１００ｄＭ置換を含む、請求項２３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
25. ＶＨドメイン配列中のポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換される、請求項６から２４のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
26. ＶＨドメインが、Ｐ１０２Ａ、Ｐ１０２Ｆ、Ｐ１０２Ｈ、Ｐ１０２Ｉ、Ｐ１０２Ｌ、Ｐ１０２Ｙ、Ｐ１０２ＶまたはＳ１０２Ｖ置換を含む、請求項２５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
27. 変異免疫グロブリンの配列が、親免疫グロブリン配列に対して１０個までのアミノ酸置換を有する、請求項３から２６のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
28. ＶＨドメインの配列が、ＶＨ ＦＲ１易凝集性セグメントおよびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を含む、請求項３から２７のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
29. ＶＨドメインの配列が、ポジション１およびポジション１０２の置換を含む、請求項２８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
30. ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換され、ポジション１の残基が、Ｅ、Ｑ、Ｄ、ＡまたはＶで置換される、請求項２９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
31. ＶＨドメインが、Ｐ１０２Ｙ置換およびＱ１ＡまたはＱ１Ｅ置換を含む、請求項３０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
32. ＶＨドメインの配列が、ＶＨポジション９５易凝集性セグメントおよびＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中に置換を含む、請求項３から３１のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
33. ＶＨドメインの配列が、ポジション９５およびポジション１０２の置換を含む、請求項３２に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
34. ポジション１０２の残基が、Ａ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹで置換され、ポジション９５の残基が、ＥまたはＤで置換される、請求項３３に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
35. ＶＨドメインが、Ｓ１０２Ｖ置換およびＲ９５Ｄ置換を含む、請求項３４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
36. ＶＨドメインが、ポジション９４および１００の置換をさらに含む、請求項３３から３５のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
37. ポジション９４の残基が、Ｒで置換され、ポジション１００の残基が、Ｆで置換される、請求項３６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
38. ＶＨドメインが、Ｈ９４Ｒ置換およびＶ１００Ｆ置換を含む、請求項３７に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
39. 変異免疫グロブリンのＶＬドメインの配列が、ポジション３７易凝集性セグメントおよびポジション４５易凝集性セグメント中に置換を含む、請求項３から３８のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
40. 変異免疫グロブリンのＶＬドメインの配列が、ポジション３７およびポジション４５の置換を含む、請求項３９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
41. ポジション３７の残基が、ＱまたはＮで置換され、ポジション４５の残基が、Ｒ、ＫまたはＥで置換される、請求項４０に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
42. ＶＬドメインが、Ｌ３７Ｑ置換およびＱ４５Ｒ置換を含む、請求項４１に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
43. ＶＬドメインが、Ｓ１０２Ｖ置換およびＲ９５Ｄ置換を含み、ＶＬドメインが、Ｌ３７Ｑ置換およびＱ４５Ｒ置換を含む、請求項３から４２のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
44. ＶＨドメインが、ＶＨポジション９５易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換を含み、ＶＬドメインが、ポジション４５易凝集性セグメント中の１つまたは複数の置換を含む、請求項３から４３のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
45. ＶＨドメインが、ポジション９４および９５の置換を含み、ＶＬドメインが、ポジション４６の置換を含む、請求項４４に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
46. ＶＨドメイン中のポジション９４の残基が、Ｒ、ＫまたはＴで置換され、ＶＨドメイン中のポジション９５の残基が、ＥまたはＤで置換され、ＶＬドメイン中のポジション４６の残基が、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＦまたはＳで置換される、請求項４５に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
47. ＶＨドメインが、Ｈ９４ＲおよびＲ９５Ｄ置換を含み、ＶＬドメインが、Ｌ４６Ｒ置換を含む、請求項４６に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
48. 変異免疫グロブリンのＶＨドメインが、ＶＨ ＣＤＲ３易凝集性セグメント中の２つ以上の置換を含む、請求項３から４７のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
49. ＶＨドメインが、ポジション１００ｄおよび１０２の置換を含む、請求項４８に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
50. ＶＨドメインが、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｖ置換、Ｓ１００ｄＦおよびＰ１０２Ｙ置換、またはＳ１００ｄＭおよびＰ１０２Ｙ置換を含む、請求項４９に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
51. 変異免疫グロブリンがヒト化されている、前記請求項のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
52. 変異免疫グロブリンが、組換え系において発現される、前記請求項のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
53. 変異免疫グロブリンが、発現後に単離および／または精製される、前記請求項のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
54. 変異免疫グロブリンが、薬学的に許容される賦形剤とともに製剤化される、前記請求項のいずれか一項に記載の変異免疫グロブリンまたは方法。
55. 免疫グロブリンの製造性を評価する方法であって、
    免疫グロブリンのＶＬドメイン中のポジション３７、４５および４６、ＶＨドメイン中のポジション１、１７、９４、９５、９６、１００、１００ｄおよび１０２からなる群から選択される１つまたは複数のポジションのアミノ酸残基を同定するステップ
    を含み、
    前記免疫グロブリンのＶＬドメインにおける、ポジション３７のＱ以外の残基、ポジション４５のＥ、Ｋ、Ｒ、ＱまたはＶ、好ましくはＫまたはＲ、ポジション４６のＬまたはＹ、好ましくはＬの存在、および／または
    前記免疫グロブリンのＶＨドメインにおける、ポジション１のＡ、Ｄ、Ｅ、ＱまたはＶ以外の残基、ポジション１７のＲ、ポジション９４のＲ、ポジション９６のＡ、ポジション１００ｄのＦ、Ｇ、Ｌ、ＭまたはＰ、好ましくはＦまたはＭ、ポジション１０２のＡ、Ｆ、Ｈ、Ｉ、Ｌ、ＶまたはＹ、好ましくはＶまたはＹの存在
    が、前記免疫グロブリンの製造性が最適ではないという指標となる方法。
56. 免疫グロブリンの製造性が最適ではないこと、および請求項１および３から５４のいずれか一項に記載の方法によって前記免疫グロブリンの製造性を向上させるステップを含む、請求項５５に記載の方法。
57. 製造性の向上した免疫グロブリンを調製する方法であって、
    請求項１および３から４６のいずれか一項に記載の方法によって製造される変異免疫グロブリンをコードしている核酸を製造するステップ、
    前記核酸を、前記変異免疫グロブリンの産生をもたらす条件下で発現させるステップ、および、それを回収するステップ
    を含む方法。
58. 変異免疫グロブリンを、薬学的に許容される賦形剤を含む組成物に製剤化するステップを含む、請求項５７に記載の方法。