JP2013246064A - 検体希釈浮遊液およびそれを含む容器 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】イムノアッセイに適用するために、検体を浮遊または希釈する検体希釈浮遊液を用いるが、その検体希釈浮遊液を酸性条件下に保ち、検体中の含まれるプロテアーゼ等による被験物質の分解等を抑制する安定剤を加えることによって、検体中の被験物質の変化を抑制し、正確な測定結果を得ることが可能となる。
【選択図】なし
Description
(1)安定剤を含有し、緩衝液により酸性に保たれているイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(2)前記検体希釈浮遊液のpHがpH4.8〜7.0の範囲である(1)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(3)前記緩衝液が、クエン酸緩衝液、MES緩衝液、Bis−Tris緩衝液、ADA緩衝液から選ばれる少なくとも1である、(1)または(2)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(4)前記安定剤が、グリセリン、ポリビニルピロリドン、モノクローナル抗体、プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも1である、(1)〜(3)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(5)前記検体が、糞便、嘔吐物、唾液、尿、血液から選ばれる少なくとも1である、(1)〜(4)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(6)前記検体が、糞便である、(1)〜(4)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(7)前記検体が、ノロウイルスを検出、測定するために調製される、(1)〜(6)記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
(8)(1)〜(7)記載の検体希釈浮遊液を用いることによる検体中のノロウイルスの安定化方法。
(9)(1)〜(7)記載の検体希釈浮遊液を含む容器。
(10)(9)記載の検体希釈浮遊液を含む容器を用いることによる検体中のノロウイルスの安定化方法。
抗ノロウイルス抗原モノクローナル抗体A(栄研化学製)を磁性粒子に固定化し、0.2%の抗体固相化磁性粒子を作製した。一方、抗ノロウイルス抗原モノクローナル抗体B(栄研化学製)を用いてルシフェラーゼ結合体を作製した。
検体希釈浮遊液として、pH4.8、pH5.8、pH7.0、pH7.4、およびpH8.2の100mMのクエン酸緩衝液に10mM EDTA・2Na、0.1% BSA、0.1% ProClin300(SUPELCO製)、および0.05% Triton X−100を溶解した溶液を作製した。
検体希釈浮遊液として、酸性領域であるpH5.6、pH5.8、pH6.0、pH6.2、pH6.4、pH6.6、およびpH6.8の100mMのクエン酸緩衝液に10mM EDTA・2Na、0.1% BSA(オリエンタル酵母製)、0.1% ProClin300(SUPELCO製)、および0.05% Triton X−100を溶解した溶液を作製した。
実施例1に記載の検体希釈浮遊液の緩衝液を、100mM クエン酸緩衝液(pH6.0)、10mM MES(2−Morpholinoethanesulfonic acid:同仁化学製)緩衝液(pH6.0)、10mM Bis(Bis(2−hydroxyethyl)iminotris(hydroxymethyl)methane:同仁化学製)−Tris緩衝液(pH6.0)、および10mM ADA(N−(2−Acetamido)iminodiacetic acid:同仁化学製)緩衝液(pH6.0)に変えて検体浮遊液を作製した。
実施例3に記載の10mM MES緩衝液(pH6.0)を用いた検体希釈浮遊液に、ウシ胎児血清(FBS)二種類(ライフテクノロジージャパン製およびニチレイ製)、ウマ血清(ENS:ライフテクノロジージャパン製)、およびウシ血清(CS:ライフテクノロジージャパン製)二ロットを各々添加して、5%の血清含有検体希釈浮遊液を作製した。
実施例3に記載の10mM MES緩衝液(pH6.0)を用いた検体希釈浮遊液に、1%、5%、および10%のFBS(ニチレイ製)を添加して、FBS含有検体希釈浮遊液を作製した。なお、対照はFBSを含まない検体希釈浮遊液とした。
実施例5に記載の5% FBSを添加した10mM MES緩衝液(pH6.0)を用いた検体希釈浮遊液に、50% グリセリン(キシダ化学製)、10% ポリビニルピロリドンK30(PVP:和光純薬製)、1% Mucin from porcine stomach TypeIII(Mucin:シグマ アルドリッチ ジャパン製)、10μg/mL 抗ノロウイルス抗原マウスモノクローナル抗体C(モノクローナル抗体C:栄研化学製)、1tablet/10mL cOmplete ULTRA Tablets, Mini EASY pack(Roche Tablets:ロシュ・ダイアグノスティックス製)、および4mg/mL Trypsin inhibitor from Glycine max(soybean)(SIGMA TI:シグマ アルドリッチ ジャパン製)を各々添加して、検体希釈浮遊液を作製した。
従来の検体希釈浮遊液である、10mM リン酸緩衝液(pH7.2)に10mM EDTA・2Na、0.1% BSA、0.1% ProClin300、および0.05% Triton X−100を溶解した溶液(検体希釈浮遊液A)ならびに本発明の一例である10mM MES緩衝液(pH6.0)に10mM EDTA・2Na、1.5% BSA、0.1% ProClin300、0.05% Triton X−100、5% FBS、0.01% Mucin、および0.1μg/mL 抗ノロウイルスモノクローナル抗体Cを溶解した溶液(検体希釈浮遊液B)を作成した。
Claims (10)
- 安定剤を含有し、緩衝液により酸性に保たれているイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記検体希釈浮遊液のpHがpH4.8〜7.0の範囲である請求項1記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記緩衝液が、クエン酸緩衝液、MES緩衝液、Bis−Tris緩衝液、ADA緩衝液から選ばれる少なくとも1である、請求項1または2記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記安定剤が、グリセリン、ポリビニルピロリドン、モノクローナル抗体、プロテアーゼ阻害剤から選ばれる少なくとも1である、請求項1〜3記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記検体が、糞便、嘔吐物、唾液、尿、血液から選ばれる少なくとも1である、請求項1〜4記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記検体が、糞便である、請求項1〜4記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 前記検体が、ノロウイルスを検出、測定するために調製される、請求項1〜6記載のイムノアッセイ用の検体希釈浮遊液。
- 請求項1〜7記載の検体希釈浮遊液を用いることによる検体中のノロウイルスの安定化方法。
- 請求項1〜7記載の検体希釈浮遊液を含む容器。
- 請求項9記載の検体希釈浮遊液を含む容器を用いることによる検体中のノロウイルスの安定化方法。
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