JP2013192470A - 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 - Google Patents
生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013192470A JP2013192470A JP2012060310A JP2012060310A JP2013192470A JP 2013192470 A JP2013192470 A JP 2013192470A JP 2012060310 A JP2012060310 A JP 2012060310A JP 2012060310 A JP2012060310 A JP 2012060310A JP 2013192470 A JP2013192470 A JP 2013192470A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- lactobacillus
- lactobacillus gasseri
- gasseri
- ferm
- lactic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 235000013305 food Nutrition 0.000 title claims abstract description 60
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 title claims abstract description 56
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 18
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 23
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 212
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 151
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 claims description 120
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 106
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 106
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 99
- 241001468157 Lactobacillus johnsonii Species 0.000 claims description 82
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 27
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 claims description 15
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 15
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 6
- 101100439426 Bradyrhizobium diazoefficiens (strain JCM 10833 / BCRC 13528 / IAM 13628 / NBRC 14792 / USDA 110) groEL4 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101100138542 Cupriavidus necator (strain ATCC 17699 / DSM 428 / KCTC 22496 / NCIMB 10442 / H16 / Stanier 337) phbH gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101100006766 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) clpX gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101100278084 Nostoc sp. (strain PCC 7120 / SAG 25.82 / UTEX 2576) dnaK1 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101100117145 Synechocystis sp. (strain PCC 6803 / Kazusa) dnaK2 gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150035600 atpD gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150099875 atpE gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150048329 atpH gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150113622 clpC gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150052825 dnaK gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150054895 ftsH gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150077981 groEL gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150071774 mscL gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150045242 ptsH gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150076849 rpoS gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101150005573 uvrA gene Proteins 0.000 claims description 5
- 101001076687 Lactobacillus gasseri Inulosucrase Proteins 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 67
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 64
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 26
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 26
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 23
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 23
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 13
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 13
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 13
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 11
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 11
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 10
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 10
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 9
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 6
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 6
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 6
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 6
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 6
- 241000186840 Lactobacillus fermentum Species 0.000 description 5
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- 229940012969 lactobacillus fermentum Drugs 0.000 description 5
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 4
- 108010009004 proteose-peptone Proteins 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 2
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 2
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 2
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 2
- 241000186605 Lactobacillus paracasei Species 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 2
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 2
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 1
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 239000012163 TRI reagent Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001765 catechin Chemical class 0.000 description 1
- ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N catechin Natural products OC1Cc2cc(O)cc(O)c2OC1c3ccc(O)c(O)c3 ADRVNXBAWSRFAJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005487 catechin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006353 environmental stress Effects 0.000 description 1
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013572 fruit purees Nutrition 0.000 description 1
- 210000004211 gastric acid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- -1 superoxide ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 1
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000019149 tocopherols Nutrition 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N γ-tocopherol Chemical class OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1 QUEDXNHFTDJVIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Dairy Products (AREA)
Abstract
【課題】生存率が高い乳酸菌を含み、生きた乳酸菌を多く摂取できる飲食品を提供する。
【解決手段】乳酸菌が増殖しない条件で保存することによって、乳酸菌にとってストレスの高い条件下であっても生存率が高い乳酸菌を得ることにより、該乳酸菌を含み、生きた乳酸菌を多く摂取できる飲食品を提供する。
【選択図】なし
【解決手段】乳酸菌が増殖しない条件で保存することによって、乳酸菌にとってストレスの高い条件下であっても生存率が高い乳酸菌を得ることにより、該乳酸菌を含み、生きた乳酸菌を多く摂取できる飲食品を提供する。
【選択図】なし
Description
本発明は、乳酸菌、乳酸菌の製造方法、該乳酸菌を含む飲食品等に関する。さらに詳しくは、生存率が高い乳酸菌を含む飲食品、または該飲食品の製造方法等に関する。
健康への意識の高まりから、プロバイオティクス乳酸菌入りの飲食品が各種製造・販売されている。プロバイオティクスとは、宿主の腸内菌叢のバランスを改善することにより宿主にとって有益な作用をもたらす生きた微生物のことであり、整腸作用、免疫賦活作用、メタボリックシンドロームの改善作用等の幅広い効果が期待されるようなってきた。
プロバイオティクスとされる乳酸菌（以下、単に乳酸菌と示す場合がある）には、様々な菌が知られており、乳酸桿菌に限定して列挙した場合でも、ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）、ラクトバチルス・ロイテリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｒｅｕｔｅｒｉ）、ラクトバチルス・プランタラム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）、ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ブルガリカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）、等の複数の菌が挙げられる。これらの菌の機能については、多くの知見が得られている。
このようなプロバイオティクス乳酸菌の一つである、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）やラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、ヒト腸内の常在細菌として知られており、小腸からの検出例が報告されている。
中でもラクトバチルス・ガセリＳＢＴ２０５５株は、生きて腸内に届き、腸管内で長く留まることから、多面的・長期的な効果が期待できると考えられる。
このようなプロバイオティクス乳酸菌を含む飲食品において、製品中の菌数を維持することが重要であり、流通段階や家庭での保存期間において飲食品中の菌数が減少することは、その飲食品が示し得る健康効果の低下に繋がり問題となる。
飲食品にプロバイオティクス乳酸菌を添加する場合は、製品中の菌数を高めるため、凍結濃縮菌体や濃縮乾燥菌体を製品に直接添加する方法や、前培養工程を設けて菌体を増やした後にその培養物を添加する方法、また製品中で菌体を増殖させる方法等が考えられる。
前培養工程を設ける場合には、乳酸菌を増殖させるために、窒素源やビタミン・ミネラル、糖類等の炭素源を含んだ培地で培養することが必要とされる。例えば、脱脂乳に酵母エキスを添加したものや、食品添加物で構成されたものを培地とし、必要に応じて好適なｐＨを維持しながら、嫌気条件で培養する。この培養によって増殖した乳酸菌が、必要に応じて洗浄や濃縮工程を経た後、飲食品に添加される。
添加された乳酸菌は、飲食品中に炭素源や窒素源が好適に含まれ、温度条件が合致した場合に、さらに増殖する。しかし、この増殖に伴い、乳酸菌自身が乳酸や酢酸を生成し、飲食品のｐＨを下げたり、溶存酸素や酸素由来のスーパーオキシドイオン、過酸化水素またはヒドロキシラジカルを生成したりする。これによって、乳酸菌がストレスを受け、耐性の弱い菌株については保存中に減少してしまうことが知られている（非特許文献１、非特許文献２）。
前培養工程を設ける場合には、乳酸菌を増殖させるために、窒素源やビタミン・ミネラル、糖類等の炭素源を含んだ培地で培養することが必要とされる。例えば、脱脂乳に酵母エキスを添加したものや、食品添加物で構成されたものを培地とし、必要に応じて好適なｐＨを維持しながら、嫌気条件で培養する。この培養によって増殖した乳酸菌が、必要に応じて洗浄や濃縮工程を経た後、飲食品に添加される。
添加された乳酸菌は、飲食品中に炭素源や窒素源が好適に含まれ、温度条件が合致した場合に、さらに増殖する。しかし、この増殖に伴い、乳酸菌自身が乳酸や酢酸を生成し、飲食品のｐＨを下げたり、溶存酸素や酸素由来のスーパーオキシドイオン、過酸化水素またはヒドロキシラジカルを生成したりする。これによって、乳酸菌がストレスを受け、耐性の弱い菌株については保存中に減少してしまうことが知られている（非特許文献１、非特許文献２）。
以上のように、プロバイオティクス乳酸菌は、製品の製造・保存中の環境ストレスにより減少することが知られているが、糖を含んだ飲食品中でも代謝による酸生成や浸透圧等の強いストレスを受けることが知られている。そのため、このようなストレス条件下において、プロバオイティクス乳酸菌の生存率を向上させる方法が望まれている。
そこで、プロバイオティクス乳酸菌を含む食品において、生存率を高めるための様々な技術が、これまでに数多く報告されている。例えば、発酵乳製品中のプロバイオティクス乳酸菌の生存率を高める方法として、パーオキシダーゼを添加して保存中の酸度上昇を抑制する方法（特許文献１）、カテキン類及び／またはトコフェロール類を添加する方法（特許文献２）、ビフィズス菌と共生関係を持つ乳酸菌を添加する方法（特許文献３）、着色フィルムにより遮光性を高める方法（特許文献４）等がある。また、摂取後の生体内での生存率を高める方法については、乳酸菌を腸溶性カプセルに封入することで胃酸の影響を抑えて腸内に到達させる方法（特許文献５）が報告されている。また、乳酸菌が資化できる炭素源が存在しない環境下におかれた乳酸菌は、凍結や凍結乾燥工程において生存率が高まることが知られている（非特許文献３）。
そこで、プロバイオティクス乳酸菌を含む食品において、生存率を高めるための様々な技術が、これまでに数多く報告されている。例えば、発酵乳製品中のプロバイオティクス乳酸菌の生存率を高める方法として、パーオキシダーゼを添加して保存中の酸度上昇を抑制する方法（特許文献１）、カテキン類及び／またはトコフェロール類を添加する方法（特許文献２）、ビフィズス菌と共生関係を持つ乳酸菌を添加する方法（特許文献３）、着色フィルムにより遮光性を高める方法（特許文献４）等がある。また、摂取後の生体内での生存率を高める方法については、乳酸菌を腸溶性カプセルに封入することで胃酸の影響を抑えて腸内に到達させる方法（特許文献５）が報告されている。また、乳酸菌が資化できる炭素源が存在しない環境下におかれた乳酸菌は、凍結や凍結乾燥工程において生存率が高まることが知られている（非特許文献３）。
日本乳酸菌学会誌， Ｖｏｌ． ２１ （２０１０） Ｎｏ． １ ｐｐ．３−９
日本食品微生物学会雑誌， Ｖｏｌ． ２６ （２００９） Ｎｏ． ２ ｐｐ．８１−８５
Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ， Ｖｏｌ．６８， Ｎｒ．８，２００３ ｐｐ．２５３８−２５４１
特許文献１〜３は、乳酸菌の生存率を向上させるために添加物を必要とするため、添加方法の煩雑さの点で課題があり、また、添加物による風味への影響も問題となる場合がある。
非特許文献１，２には、乳酸菌の生存率に影響する要因が開示されているが、乳酸菌自身がストレス源を生成してしまうため、飲食品に含まれる乳酸菌の死滅を完全に防ぐことは難しく、死滅を抑制する方法は開示されていない。
また、非特許文献３には、乳酸菌が資化できる炭素源が存在しない環境下におかれた乳酸菌は、凍結や凍結乾燥工程において生存率が高まることが開示されているが、糖を含む飲食品中において乳酸菌の生存率が向上することについての示唆や記載はない。
よって、本発明者らは、糖等によるストレス条件下で生存率が高い乳酸菌を含み、生きた乳酸菌を多く摂取できる飲食品を提供することを目的とする。
非特許文献１，２には、乳酸菌の生存率に影響する要因が開示されているが、乳酸菌自身がストレス源を生成してしまうため、飲食品に含まれる乳酸菌の死滅を完全に防ぐことは難しく、死滅を抑制する方法は開示されていない。
また、非特許文献３には、乳酸菌が資化できる炭素源が存在しない環境下におかれた乳酸菌は、凍結や凍結乾燥工程において生存率が高まることが開示されているが、糖を含む飲食品中において乳酸菌の生存率が向上することについての示唆や記載はない。
よって、本発明者らは、糖等によるストレス条件下で生存率が高い乳酸菌を含み、生きた乳酸菌を多く摂取できる飲食品を提供することを目的とする。
すなわち、本発明は、次の（１）〜（１３）に示される乳酸菌、乳酸菌の製造方法、該乳酸菌を含む飲食品、飲食品の製造方法および乳酸菌の生存率を向上する方法等に関する。
（１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
（２）次の１）〜１５）から選ばれるいずれか一種以上の遺伝子の発現が抑制されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
（３）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする上記（１）または（２）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
（４）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
（５）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が、次の１）〜１５）から選ばれるいずれか１種以上の遺伝子の発現が抑制されていることを特徴とする上記（４）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
（６）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする上記（４）または（５）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
（７）上記（１）〜（３）のいずれかに記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を含有させることを特徴とする飲食品。
（８）前記飲食品が乳製品であることを特徴とする上記（７）に記載の飲食品。
（９）前記乳製品が発酵乳または乳酸菌飲料であることを特徴とする上記（８）に記載の飲食品。
（１０）次の１）および２）の工程を含むことを特徴とする飲食品の製造方法。
１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存し、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を製造する工程。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
２）上記１）の工程によって保存した乳酸菌を、飲食品または飲食品の原料に添加する工程。
（１１）前記飲食品が乳製品である上記（１０）に記載の飲食品の製造方法。
（１２）前記乳製品が発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、または乳酸菌飲料である上記（１１）に記載の飲食品の製造方法。
（１３）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したことを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を向上させる方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
（１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
（２）次の１）〜１５）から選ばれるいずれか一種以上の遺伝子の発現が抑制されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
（３）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする上記（１）または（２）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
（４）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
（５）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が、次の１）〜１５）から選ばれるいずれか１種以上の遺伝子の発現が抑制されていることを特徴とする上記（４）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
（６）前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする上記（４）または（５）に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
（７）上記（１）〜（３）のいずれかに記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を含有させることを特徴とする飲食品。
（８）前記飲食品が乳製品であることを特徴とする上記（７）に記載の飲食品。
（９）前記乳製品が発酵乳または乳酸菌飲料であることを特徴とする上記（８）に記載の飲食品。
（１０）次の１）および２）の工程を含むことを特徴とする飲食品の製造方法。
１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存し、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を製造する工程。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
２）上記１）の工程によって保存した乳酸菌を、飲食品または飲食品の原料に添加する工程。
（１１）前記飲食品が乳製品である上記（１０）に記載の飲食品の製造方法。
（１２）前記乳製品が発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、または乳酸菌飲料である上記（１１）に記載の飲食品の製造方法。
（１３）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したことを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を向上させる方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
本発明により、乳酸菌がストレスを受けうる飲食品においても、生菌数を維持できる乳酸菌を得ることが可能となった。
本発明におけるラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）（以下、「ラクトバチルス・ガセリ」という場合がある。）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）（以下、「ラクトバチルス・ジョンソニー」という場合がある。）の保存条件とは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存することをいう（以下、本保存条件を「増殖しない条件」という場合がある）。
この保存条件における保存培地とは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が資化できる炭素源を含まない培地や生理食塩水、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、水等をあげることができる。また、例えば、市販のＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ製）の組成において、グルコース等のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が資化できる炭素源を除いたものや、ＰＢＳ（−）等のバッファーにパン酵母エキスもしくはビール酵母エキス等の酵母エキス、当該乳酸菌が資化しない糖類等の炭素源、ペプトン、ミネラル、ビタミン、アミノ酸等を一種または二種以上、それぞれ０．１％〜２０％等、適宜添加したものも、本発明の保存培地として用いることができる。
ここで、添加する酵母エキスは、メーカーや規格を特に指定するものではなく、食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。ペプトンに関しても、原料や処理方法を限定するものではなく、食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。当該乳酸菌が増殖しない糖類等の炭素源、ミネラル、ビタミン、アミノ酸等についても同様に食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。
この保存条件における保存培地とは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が資化できる炭素源を含まない培地や生理食塩水、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液、酒石酸緩衝液、トリス緩衝液、水等をあげることができる。また、例えば、市販のＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ製）の組成において、グルコース等のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が資化できる炭素源を除いたものや、ＰＢＳ（−）等のバッファーにパン酵母エキスもしくはビール酵母エキス等の酵母エキス、当該乳酸菌が資化しない糖類等の炭素源、ペプトン、ミネラル、ビタミン、アミノ酸等を一種または二種以上、それぞれ０．１％〜２０％等、適宜添加したものも、本発明の保存培地として用いることができる。
ここで、添加する酵母エキスは、メーカーや規格を特に指定するものではなく、食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。ペプトンに関しても、原料や処理方法を限定するものではなく、食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。当該乳酸菌が増殖しない糖類等の炭素源、ミネラル、ビタミン、アミノ酸等についても同様に食品に利用できるものであれば限定されず、いずれの物を用いてもよい。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、上記のような保存培地で２０〜４５℃で１〜１６時間保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以である菌株を選択することにより得ることができる。本発明の保存条件（増殖しない条件）における保存温度および保存時間は、２０〜４５℃で１〜１６時間であればよい。２０℃〜４５℃で１時間以上保存することが好ましく、同温度で１時間〜１６時間保存することがより好ましく、同温度で４時間〜１６時間保存することがさらに好ましい。また、３０℃〜４２℃で１時間以上保存することが好ましく、同温度で１時間〜１６時間保存することがより好ましく、同温度で４時間〜１６時間保存することがさらに好ましい。３７℃で１６時間保存することが、さらにより好ましい。
この保存は、例えば、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）等の乳酸菌を０．１％〜１０％、保存培地に接種することで行うことができる。なお、本発明の保存条件（増殖しない条件）において、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍を超えてしまうと、保存後の菌体の生存率が向上しないため、該範囲が１０倍以内であることが本発明において重要である。
この保存は、例えば、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）等の乳酸菌を０．１％〜１０％、保存培地に接種することで行うことができる。なお、本発明の保存条件（増殖しない条件）において、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍を超えてしまうと、保存後の菌体の生存率が向上しないため、該範囲が１０倍以内であることが本発明において重要である。
上述した保存条件で保存することにより、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を高めることができる。ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）菌体自体の生存率が向上するし、通常の組成物や飲食品中における生存率も向上する。
例えば、保存条件（増殖しない条件）で保存した後の乳酸菌を、糖を含む組成物、その一例として糖濃度が０．０１〜６０％の飲食品中に保存した場合でも、乳酸菌の生存率を大きく低下させる要因として知られる糖を含む条件下であるにもかかわらず、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を高めることができる。
糖を含む組成物や飲食品としては、例えば、グルコースを０．０１％〜６０％のいずれかに該当する濃度で含有する組成物、上白糖等の糖質を含む乳原料に乳酸菌スターターを加えて発酵させた発酵乳、および、これにフルーツプレザーブ等を混合したフルーツ入り発酵乳の組成物等を例示することができる。
本発明で述べる「生存率」とは、乳酸菌にとって高ストレスの環境下で保存した場合において、保存開始時の菌数に対し、死滅せずに生き残っている菌数の割合のことをいう。
本発明において、上述した保存条件（増殖しない条件）で保存されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、例えば、糖濃度が０．０１〜６０％の飲食品に添加され、添加後１０℃で１０日間保存された場合に、増殖しない条件で保存されない菌と比較して、保存前の菌数に対して１０倍以上、好ましくは３０倍以上生存率の向上が認められるものであることが好ましい。
例えば、保存条件（増殖しない条件）で保存した後の乳酸菌を、糖を含む組成物、その一例として糖濃度が０．０１〜６０％の飲食品中に保存した場合でも、乳酸菌の生存率を大きく低下させる要因として知られる糖を含む条件下であるにもかかわらず、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を高めることができる。
糖を含む組成物や飲食品としては、例えば、グルコースを０．０１％〜６０％のいずれかに該当する濃度で含有する組成物、上白糖等の糖質を含む乳原料に乳酸菌スターターを加えて発酵させた発酵乳、および、これにフルーツプレザーブ等を混合したフルーツ入り発酵乳の組成物等を例示することができる。
本発明で述べる「生存率」とは、乳酸菌にとって高ストレスの環境下で保存した場合において、保存開始時の菌数に対し、死滅せずに生き残っている菌数の割合のことをいう。
本発明において、上述した保存条件（増殖しない条件）で保存されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、例えば、糖濃度が０．０１〜６０％の飲食品に添加され、添加後１０℃で１０日間保存された場合に、増殖しない条件で保存されない菌と比較して、保存前の菌数に対して１０倍以上、好ましくは３０倍以上生存率の向上が認められるものであることが好ましい。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、上述した保存条件（増殖しない条件）で保存することにより、次の１）〜１５）から選ばれるいずれか一種以上の遺伝子の発現が抑制されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）となる。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
ここで、遺伝子の発現が抑制されたとは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を通常用いる培地で保存した場合の遺伝子の発現量に比べて、その遺伝子の転写レベルが１０分の１から１０，０００分の１程度に低下していることをいう。
例えば、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を本発明の保存条件（増殖しない条件）で保存した場合の上記遺伝子の発現が、ＭＲＳ培地で３７℃、１６時間保存した場合と比べて、その転写レベルにおいて１０分の１から１０，０００分の１程度に低下している時に、本発明において遺伝子の発現が抑制されたという。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ
ここで、遺伝子の発現が抑制されたとは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を通常用いる培地で保存した場合の遺伝子の発現量に比べて、その遺伝子の転写レベルが１０分の１から１０，０００分の１程度に低下していることをいう。
例えば、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を本発明の保存条件（増殖しない条件）で保存した場合の上記遺伝子の発現が、ＭＲＳ培地で３７℃、１６時間保存した場合と比べて、その転写レベルにおいて１０分の１から１０，０００分の１程度に低下している時に、本発明において遺伝子の発現が抑制されたという。
本発明におけるラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）は、いずれの菌株を用いてもよく、例えば、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）もしくはＪＣＭ１１３１Ｔから選ばれるいずれか一種以上の菌株等をあげることができるが、特に限定されるものではない。
また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）もいずれの菌株を用いても良く、例えば、ＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）もしくはＪＣＭ２０１０Ｔから選ばれるいずれか一種以上の菌株等をあげることができるが特に限定されるものではない。
また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）もいずれの菌株を用いても良く、例えば、ＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）もしくはＪＣＭ２０１０Ｔから選ばれるいずれか一種以上の菌株等をあげることができるが特に限定されるものではない。
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を上述した保存条件（増殖しない条件）で保存することにより、生存率の向上したラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を製造することができる。
この製造方法は、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が増殖しない条件で保存する工程以外に、本発明の乳酸菌の製造にあたり必要とされるその他の工程を含んでいても良い。
また、このようなラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法には、一般的な乳酸菌の培養や製造に利用できる機器であれば、従来知られるいずれの機器を用いても良い。
この製造方法は、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が増殖しない条件で保存する工程以外に、本発明の乳酸菌の製造にあたり必要とされるその他の工程を含んでいても良い。
また、このようなラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法には、一般的な乳酸菌の培養や製造に利用できる機器であれば、従来知られるいずれの機器を用いても良い。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）は、飲食品等に含有させることもできる。飲食品としては、発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、乳酸菌飲料、チーズ、バター、クリーム等の乳製品、乳清飲料、乳入り飲料、清涼飲料等の飲料等をあげることができるが特に限定されるものではない。例えば、市販の乳酸菌スターターを添加して発酵させることによって得られた発酵乳、乳酸菌飲料等の乳製品に本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を添加することができる。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を発酵乳や乳酸菌飲料に含有させた場合、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の飲食品中での生存率が高く、これによって、生きた乳酸菌を多く摂取することが可能な発酵乳等の飲食品を製造することが可能となる。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を発酵乳や乳酸菌飲料に含有させた場合、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の飲食品中での生存率が高く、これによって、生きた乳酸菌を多く摂取することが可能な発酵乳等の飲食品を製造することが可能となる。
本発明におけるラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を向上させる方法とは、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存することを特徴とする。
本方法により、飲食品中のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生菌数を高く維持することができるため、長期保存後も高い健康効果が期待できる。
本方法により、飲食品中のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生菌数を高く維持することができるため、長期保存後も高い健康効果が期待できる。
以下に、本発明の実施例等をあげて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の飲食品中での生存率向上効果を確認するために、モデルとして異性化糖溶液を用いたが、これに限定されるものではない。
１．試料の調製
１）保存培地の調製
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の保存培地として、グルコースを含まないＭＲＳ培地（以下、「ＭＲＳ（糖無し）培地」とする場合がある）を調製した。表１に示した各成分を１Ｌの水に溶解し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷して用いた。
また、対照として、乳酸菌が増殖する保存培地として、グルコースを含む通常のＭＲＳ培地（以下、「ＭＲＳ（グルコース）培地」とする場合がある）を調製した。表１に示した各成分を１Ｌの水に溶解し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷して用いた。
１）保存培地の調製
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の保存培地として、グルコースを含まないＭＲＳ培地（以下、「ＭＲＳ（糖無し）培地」とする場合がある）を調製した。表１に示した各成分を１Ｌの水に溶解し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷して用いた。
また、対照として、乳酸菌が増殖する保存培地として、グルコースを含む通常のＭＲＳ培地（以下、「ＭＲＳ（グルコース）培地」とする場合がある）を調製した。表１に示した各成分を１Ｌの水に溶解し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷して用いた。
２）使用した乳酸菌株
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）に属する以下の菌株を使用した。
（１）ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）
（２）ＪＣＭ １１３１Ｔ
（３）ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）
（４）ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）
また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）に属する以下の菌株も使用した。
（１）ＪＣＭ２０１０Ｔ
ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）に属する以下の菌株を使用した。
（１）ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）
（２）ＪＣＭ １１３１Ｔ
（３）ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）
（４）ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）
また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）に属する以下の菌株も使用した。
（１）ＪＣＭ２０１０Ｔ
上記の乳酸菌株をＭＲＳ培地（Ｄｉｆｃｏ製）に接種し、３７℃で１６時間、２回継代培養を行なった後、試験に用いた。培養液を遠心分離して菌体を回収した後、ＰＢＳ（−）溶液（ニッスイ製）で２回洗浄し、初発の培養液と等量のＰＢＳ（−）溶液に再懸濁した。これを菌体懸濁液１として試験に用いた。この菌体懸濁液１をＰＢＳ（−）で段階希釈し、１．５％寒天入りＭＲＳプレートに適量塗抹して、３７℃でアネロパック嫌気（三菱化学製）を用いて３日間、嫌気培養した。生育したコロニーを計測し、懸濁液中の菌数を算出した（以下、菌数の測定は同様に行った）。
３）糖組成物の調製
異性化糖溶液（王子コンスターチ製）３５０ｇに、イオン交換水６５０ｍｌを添加し、１２１℃で１５分間滅菌した。その後、溶液中の糖濃度をＢｒｉｘ計（デジタル糖度計、アタゴ製）で測定したところ、糖濃度は２６．５％であった。
異性化糖溶液（王子コンスターチ製）３５０ｇに、イオン交換水６５０ｍｌを添加し、１２１℃で１５分間滅菌した。その後、溶液中の糖濃度をＢｒｉｘ計（デジタル糖度計、アタゴ製）で測定したところ、糖濃度は２６．５％であった。
２．増殖しない条件での保存（以下、「保存（１）」という場合がある。）
乳酸菌を以下の工程により、保存した。
１）上記１．２）で調製した菌体懸濁液１を、上記１．１）で調製したＭＲＳ（糖無し）培地に１％（ｖ／ｖ）接種した。この時の保存前の培地中の乳酸菌数（菌体懸濁液１の１／１００）を初発菌数１（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
２）上記１）の乳酸菌を接種した培地を３７℃のインキュベーター内で１６時間保存した。その後、菌数を測定し、到達菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
上記と同様に、上記１．１）で調製したＭＲＳ（グルコース）培地を用いて（増殖する条件）乳酸菌を保存した。
乳酸菌を以下の工程により、保存した。
１）上記１．２）で調製した菌体懸濁液１を、上記１．１）で調製したＭＲＳ（糖無し）培地に１％（ｖ／ｖ）接種した。この時の保存前の培地中の乳酸菌数（菌体懸濁液１の１／１００）を初発菌数１（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
２）上記１）の乳酸菌を接種した培地を３７℃のインキュベーター内で１６時間保存した。その後、菌数を測定し、到達菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
上記と同様に、上記１．１）で調製したＭＲＳ（グルコース）培地を用いて（増殖する条件）乳酸菌を保存した。
３．増殖しない条件での保存（保存（１））後の乳酸菌の菌数の確認
上記２．にて測定した、初発菌数１に対する到達菌数の割合を、到達菌数／初発菌数１として算出し、増殖しない条件、または増殖する条件での保存後の乳酸菌の割合を培養倍率としてそれぞれ調べた。
その結果、図１に示したように、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）のいずれの菌株も、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合、菌数が３０倍以上に増加した。一方、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合は、いずれの菌株においても菌数の増加は１０倍以内であった。また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＪＣＭ２０１０Ｔ株についても同様の結果が得られた。
上記２．にて測定した、初発菌数１に対する到達菌数の割合を、到達菌数／初発菌数１として算出し、増殖しない条件、または増殖する条件での保存後の乳酸菌の割合を培養倍率としてそれぞれ調べた。
その結果、図１に示したように、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）のいずれの菌株も、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合、菌数が３０倍以上に増加した。一方、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合は、いずれの菌株においても菌数の増加は１０倍以内であった。また、ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）ＪＣＭ２０１０Ｔ株についても同様の結果が得られた。
４．糖溶液での保存（以下、「保存（２）」という場合がある。）
上記２．にて保存した各乳酸菌を、以下の工程により、糖濃度２６．５％溶液に保存した。
１）上記２．２）において、到達菌数を測定した後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）して上清を廃棄した。その後、等量のＰＢＳ（−）溶液を添加し、十分に攪拌した後、再度遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）を行ない、上清を廃棄した。この操作を再度繰り返した後、等量のＰＢＳ（−）溶液に菌体を懸濁し、菌体懸濁液２として菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）を測定した。
２）上記１．３）において調製した糖水溶液９０ｍｌに、上記１）の菌体懸濁液２を１０ｍｌ添加し、十分に攪拌して保存液とした。この時の保存液中の乳酸菌数（菌体懸濁液２の１／１０）を初発菌数２（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
３）上記２）の保存液を１０℃のインキュベーター内に入れ、１０日間保存した。保存開始から１０日後の保存液の菌数を測定し、保存後の生残菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
上記２．にて保存した各乳酸菌を、以下の工程により、糖濃度２６．５％溶液に保存した。
１）上記２．２）において、到達菌数を測定した後、遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）して上清を廃棄した。その後、等量のＰＢＳ（−）溶液を添加し、十分に攪拌した後、再度遠心分離（３０００ｒｐｍ、１０分間）を行ない、上清を廃棄した。この操作を再度繰り返した後、等量のＰＢＳ（−）溶液に菌体を懸濁し、菌体懸濁液２として菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）を測定した。
２）上記１．３）において調製した糖水溶液９０ｍｌに、上記１）の菌体懸濁液２を１０ｍｌ添加し、十分に攪拌して保存液とした。この時の保存液中の乳酸菌数（菌体懸濁液２の１／１０）を初発菌数２（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
３）上記２）の保存液を１０℃のインキュベーター内に入れ、１０日間保存した。保存開始から１０日後の保存液の菌数を測定し、保存後の生残菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）とした。
５．糖溶液での保存（保存（２））後の乳酸菌の菌数の確認
上記４．にて測定した、初発菌数２に対する生残菌数の割合（生残率）を、保存後の生残菌数／初発菌数２として算出し、糖溶液での保存後の乳酸菌の生存率を求めた。
その結果、図２に示したように、ラクトバチルス・ガセリのいずれの菌株も、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合と比較して、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合の方が、保存（２）における乳酸菌の生存率は１００倍以上高かった。ラクトバチルス・ジョンソニーのＪＣＭ２０１０Ｔ菌株についても同様の結果が得られた。
増殖しない条件で保存したことにより、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率が向上し、よって、乳酸菌にとってストレス環境である糖溶液における乳酸菌の生存率が向上することが明らかとなった。
上記４．にて測定した、初発菌数２に対する生残菌数の割合（生残率）を、保存後の生残菌数／初発菌数２として算出し、糖溶液での保存後の乳酸菌の生存率を求めた。
その結果、図２に示したように、ラクトバチルス・ガセリのいずれの菌株も、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合と比較して、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合の方が、保存（２）における乳酸菌の生存率は１００倍以上高かった。ラクトバチルス・ジョンソニーのＪＣＭ２０１０Ｔ菌株についても同様の結果が得られた。
増殖しない条件で保存したことにより、ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率が向上し、よって、乳酸菌にとってストレス環境である糖溶液における乳酸菌の生存率が向上することが明らかとなった。
菌種の検討
以下の１）〜４）の乳酸菌を用いて、実施例１と同様の試験を行った。
１）ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＪＣＭ １１３２Ｔ
２）ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ） ＪＣＭ １１７３Ｔ
３）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ） ＪＣＭ １１２０Ｔ
４）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ） ＪＣＭ １１３１Ｔ
以下の１）〜４）の乳酸菌を用いて、実施例１と同様の試験を行った。
１）ラクトバチルス・アシドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＪＣＭ １１３２Ｔ
２）ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ） ＪＣＭ １１７３Ｔ
３）ラクトバチルス・ヘルベティカス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ） ＪＣＭ １１２０Ｔ
４）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ） ＪＣＭ １１３１Ｔ
保存（１）後の乳酸菌の菌数の割合を培養倍率として図３に示した。図３に示されるように、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチルス・ヘルベティカスおよびラクトバチルス・ガセリのいずれの菌株も、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合、菌数が３０倍以上に増殖した。
一方で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合には、ラクトバチルス・ファーメンタムの菌数が２０倍まで増加したが、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ヘルベティカスおよびラクトバチルス・ガセリの菌数の増加は１０倍以内であった。
一方で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合には、ラクトバチルス・ファーメンタムの菌数が２０倍まで増加したが、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ヘルベティカスおよびラクトバチルス・ガセリの菌数の増加は１０倍以内であった。
また、糖溶液での保存（保存（２））後の乳酸菌の生存率を図４に示した。図４に示したように、ラクトバチルス・ガセリでは、増殖しない条件での保存（保存（１））においてＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した場合と比較して、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した場合に、保存（２）における乳酸菌の生存率が１０，０００倍以上と大きく向上した。
一方、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ファーメンタム、およびラクトバチルス・ヘルベティカスでは、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地で保存した場合も、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存した場合も、保存（２）における乳酸菌の生存率に大きな変化は見られなかった。
一方、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ファーメンタム、およびラクトバチルス・ヘルベティカスでは、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地で保存した場合も、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存した場合も、保存（２）における乳酸菌の生存率に大きな変化は見られなかった。
したがって、この結果より、ラクトバチルス・アシドフィラス， ラクトバチルス・ファーメンタムおよびラクトバチルス・ヘルベティカスにおいては、乳酸菌が増殖しない条件で保存することにより、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存した場合の乳酸菌の生存率に影響を与えない（保存（１）により保存（２）の生存率が向上しない）ことが明らかとなった。
一方で、ラクトバチルス・ガセリおよびラクトバチルス・ジョンソニーにおいては、実施例１に示されたように、該乳酸菌が増殖しない条件で保存することにより、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存した場合の乳酸菌の生存率に影響を与える（保存（１）により保存（２）の生存率が顕著に向上する）ことから、このような特性は菌種に依存することが示唆された。
一方で、ラクトバチルス・ガセリおよびラクトバチルス・ジョンソニーにおいては、実施例１に示されたように、該乳酸菌が増殖しない条件で保存することにより、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存した場合の乳酸菌の生存率に影響を与える（保存（１）により保存（２）の生存率が顕著に向上する）ことから、このような特性は菌種に依存することが示唆された。
保存培地の検討
１．保存培地の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いて、表２に示した保存培地を調製し、実施例１と同様の試験を行った。
ＰＢＳ（−）に、表２に示した各成分（グルコース、プロテオース ペプトンＮｏ．３および酵母エキス）を添加し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷したものを保存培地１〜３および保存培地５として調製した。また、乳酸菌が資化できる炭素源を含まない培地として、ＭＲＳ（糖無し）培地を実施例１のとおり調製し、保存培地４とした。
１．保存培地の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いて、表２に示した保存培地を調製し、実施例１と同様の試験を行った。
ＰＢＳ（−）に、表２に示した各成分（グルコース、プロテオース ペプトンＮｏ．３および酵母エキス）を添加し、１２１℃で１５分間滅菌した後、放冷したものを保存培地１〜３および保存培地５として調製した。また、乳酸菌が資化できる炭素源を含まない培地として、ＭＲＳ（糖無し）培地を実施例１のとおり調製し、保存培地４とした。
糖濃度が２６．５％の組成物中で保存した後（保存（２）後）の乳酸菌の生存率を図５に示した。図５に示されるように、保存培地１（ＰＢＳ（−）に何も添加していない培地）においては、保存培地４のＭＲＳ（糖無し）培地と同等の生存率を示した。また、プロテオース ペプトンＮｏ．３のみを添加した保存培地２、酵母エキスのみを添加した保存培地３も同等の生存率であった。一方、グルコースのみを添加した保存培地５では、著しく低い生存率を示した。これは、実施例１において示したＭＲＳ（グルコース）培地の結果と同様の傾向を示した。
したがって、これらの結果から、保存培地として、ＰＢＳ（−）のみの培地、ＰＢＳ（−）にプロテオース ペプトンＮｏ．３、または、酵母エキスを添加した溶液を保存培地として用いることができることが分かった。
また、この結果において、プロテオース ペプトンＮｏ．３、酵母エキスを添加した場合でも、ラクトバチルス・ガセリの生存率が高まることから、飲食品の製造工程において必要な成分を、食品添加物等として添加することが可能であることも確認できた。
したがって、これらの結果から、保存培地として、ＰＢＳ（−）のみの培地、ＰＢＳ（−）にプロテオース ペプトンＮｏ．３、または、酵母エキスを添加した溶液を保存培地として用いることができることが分かった。
また、この結果において、プロテオース ペプトンＮｏ．３、酵母エキスを添加した場合でも、ラクトバチルス・ガセリの生存率が高まることから、飲食品の製造工程において必要な成分を、食品添加物等として添加することが可能であることも確認できた。
保存（１）の保存条件の検討
１．試料の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ １１３１Ｔおよびラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）を用いて、実施例１の保存（１）の保存時間を０，４，８，１２，１６時間とする以外は実施例１と同様に試験を行った。
１．試料の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ １１３１Ｔおよびラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）を用いて、実施例１の保存（１）の保存時間を０，４，８，１２，１６時間とする以外は実施例１と同様に試験を行った。
結果を図６に示した。保存０時間の生存率は、１×１０-7（ＣＦＵ／ｍｌ）と低い値であったが、増殖しない条件で４時間以上保存を行った場合、その後の該乳酸菌の生存率は著しく向上することが明らかとなった。
保存（２）における糖濃度条件の検討
１．各糖濃度組成物の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いて、実施例１の１．３）の糖組成物の糖濃度を変えた以外は、実施例１と同様の試験を行った。なお、糖濃度を変えた糖組成物は以下のように調製した。
異性化糖溶液（王子コンスターチ製）に、イオン交換水を表３に示した所定の濃度となるように添加し、十分混合した後、１２１℃で１５分間滅菌した。その後に溶液中の糖濃度をＢｒｉｘ計（デジタル糖度計、アタゴ製）で測定したところ、表３に示したように、Ｂｒｉｘ濃度は設定濃度とほぼ一致した。これらの糖水溶液を、糖濃度が０．０％〜３５％の組成物として用いた。
１．各糖濃度組成物の調製
ラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いて、実施例１の１．３）の糖組成物の糖濃度を変えた以外は、実施例１と同様の試験を行った。なお、糖濃度を変えた糖組成物は以下のように調製した。
異性化糖溶液（王子コンスターチ製）に、イオン交換水を表３に示した所定の濃度となるように添加し、十分混合した後、１２１℃で１５分間滅菌した。その後に溶液中の糖濃度をＢｒｉｘ計（デジタル糖度計、アタゴ製）で測定したところ、表３に示したように、Ｂｒｉｘ濃度は設定濃度とほぼ一致した。これらの糖水溶液を、糖濃度が０．０％〜３５％の組成物として用いた。
結果を図７に示した。
図には示していないが、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地で保存したラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを糖濃度が２６．５％の組成物中で保存した場合は、生存率が１．０×１０-6以下であった。
これに対し、保存（１）においてＭＲＳ（糖無し）培地で保存したラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いた場合、糖濃度が０．０％〜３５％のいずれの組成物中で保存した場合でも生存率が１．０×１０-3以上であった。
したがって、この結果より、保存（１）においてＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した乳酸菌は、保存（２）において、いずれの糖濃度の組成物中で保存された場合でも、生存率が１，０００倍以上に向上することが確認できた。
図には示していないが、保存（１）においてＭＲＳ（グルコース）培地で保存したラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを糖濃度が２６．５％の組成物中で保存した場合は、生存率が１．０×１０-6以下であった。
これに対し、保存（１）においてＭＲＳ（糖無し）培地で保存したラクトバチルス・ガセリ ＪＣＭ１１３１Ｔを用いた場合、糖濃度が０．０％〜３５％のいずれの組成物中で保存した場合でも生存率が１．０×１０-3以上であった。
したがって、この結果より、保存（１）においてＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存した乳酸菌は、保存（２）において、いずれの糖濃度の組成物中で保存された場合でも、生存率が１，０００倍以上に向上することが確認できた。
乳酸菌の遺伝子発現特性の検討
実施例１の２．と同様の方法で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）について、次の１、２の工程により、菌体からｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成し、ＲＴ−ｑＰＣＲ法によって遺伝子の転写量を調べた。対照として、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）についても同様に、遺伝子の転写量を調べた。
実施例１の２．と同様の方法で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）について、次の１、２の工程により、菌体からｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成し、ＲＴ−ｑＰＣＲ法によって遺伝子の転写量を調べた。対照として、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）についても同様に、遺伝子の転写量を調べた。
１．保存（１）後のＭＲＳ（糖無し）培地、またはＭＲＳ（グルコース）培地の各２ｍｌを回収し、それぞれ８ｍｌの氷冷したＰＢＳ（−）を添加して混合した後、遠心分離（４℃、５０００Ｇ、１分間）した。その後、ＴＲＩ ｒｅａｇｅｎｔ（Ａｍｂｉｏｎ製）および菌体破砕機（Ｍｕｌｔｉ−Ｂｅａｄｓ ｓｈｏｃｋｅｒ， 安井器械製）を用い菌体破砕、ＴＵＲＢＯ ＤＮＡ−ｆｒｅｅ ｋｉｔ（Ａｍｂｉｏｎ製）を用いて菌体からｍＲＮＡを取得し、ｃＤＮＡ合成キット（ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＴＭ ＩＩＩ Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ， ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）によりｃＤＮＡを合成した。
２．調製したｃＤＮＡと表４に示したラクトバチルス・ガセリ用のプライマーセット、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用い、Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＶｉｉＡ ＴＭ７ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（ライフテクノロジーズジャパン製）にて定量的ＰＣＲを行った。１６ＳｒＲＮＡの発現量を内部標準とした。
２．調製したｃＤＮＡと表４に示したラクトバチルス・ガセリ用のプライマーセット、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ（登録商標） Ｇｒｅｅｎ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を用い、Ａｐｐｌｉｅｄ ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＶｉｉＡ ＴＭ７ Ｒｅａｌ−Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（ライフテクノロジーズジャパン製）にて定量的ＰＣＲを行った。１６ＳｒＲＮＡの発現量を内部標準とした。
表５に、各遺伝子がコードするタンパク質および機能を示した。また、図８に、ＭＲＳ（グルコース）培地で保存されたラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）の遺伝子の転写レベルを１として、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存されたラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）の遺伝子の転写レベルの相対比較値を示した。
その結果、ＭＲＳ（グルコース）培地で保存された場合と比較して、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存されたことにより、遺伝子の転写レベルが、いずれの遺伝子も１０分の１から１０，０００分の１まで、著しく低下することが確認できた。
その結果、ＭＲＳ（グルコース）培地で保存された場合と比較して、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存されたことにより、遺伝子の転写レベルが、いずれの遺伝子も１０分の１から１０，０００分の１まで、著しく低下することが確認できた。
糖溶液中で保存した前後のガセリ菌体の遺伝子発現状態の比較
実施例１の２．と同様の方法で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存（保存（１））した後、さらに、実施例１の４．と同様の方法で、糖濃度が２６．５％の組成物で、１０℃で５日間保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）について、実施例６の２と同様の工程において、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成し、ＲＴ−ｑＰＣＲ法を用いることにより、遺伝子の転写量を調べた。
対照として、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した後、さらに、実施例１の４．と同様の方法で、糖濃度が２６．５％の組成物で、１０℃で５日間保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）についても遺伝子の転写量を調べた。
実施例１の２．と同様の方法で、ＭＲＳ（糖無し）培地（増殖しない条件）で保存（保存（１））した後、さらに、実施例１の４．と同様の方法で、糖濃度が２６．５％の組成物で、１０℃で５日間保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）について、実施例６の２と同様の工程において、ｍＲＮＡを抽出し、ｃＤＮＡを合成し、ＲＴ−ｑＰＣＲ法を用いることにより、遺伝子の転写量を調べた。
対照として、ＭＲＳ（グルコース）培地（増殖する条件）で保存した後、さらに、実施例１の４．と同様の方法で、糖濃度が２６．５％の組成物で、１０℃で５日間保存したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）についても遺伝子の転写量を調べた。
その結果、図９に示したように、ＭＲＳ（グルコース）培地で保存（保存（１））された後、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存（保存（２））したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）の遺伝子の転写レベルは、ＭＲＳ（グルコース）培地で保存（保存（１））されたものと同等か、やや高かった。
一方で、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存（保存（１））され、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存（保存（２））したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）の遺伝子の転写レベルは、ＭＲＳ（グルコース）培地で培養された（保存（１））ものと比較して著しく低く、これは保存（２）の前の各種遺伝子の発現レベルの状態を維持していると考えられた。
これらの結果より、乳酸菌が増殖しない条件で保存されたラクトバチルス・ガセリは、糖濃度が高い組成物中で保存した後も、各種遺伝子の発現レベルが保存前の低い状態で維持されていた。従って、この結果より、これらの遺伝子の発現を調べることにより、乳酸菌の生存率が向上した状態で保存されたことを確認できることが示唆された。
一方で、ＭＲＳ（糖無し）培地で保存（保存（１））され、糖濃度が２６．５％の組成物中でさらに保存（保存（２））したラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）の遺伝子の転写レベルは、ＭＲＳ（グルコース）培地で培養された（保存（１））ものと比較して著しく低く、これは保存（２）の前の各種遺伝子の発現レベルの状態を維持していると考えられた。
これらの結果より、乳酸菌が増殖しない条件で保存されたラクトバチルス・ガセリは、糖濃度が高い組成物中で保存した後も、各種遺伝子の発現レベルが保存前の低い状態で維持されていた。従って、この結果より、これらの遺伝子の発現を調べることにより、乳酸菌の生存率が向上した状態で保存されたことを確認できることが示唆された。
乳酸菌を含有する飲食品の製造（１）
１）９５℃で９０分殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）１０ｇにラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）基準株ＪＣＭ ８１３０のスターターを３％添加し、３０℃で７６時間発酵した。
２）上記１）にて得られた発酵物１０ｇ、異性化糖１０ｇおよびイオン交換水を３５ｇ、実施例１と同様の方法で０．８９％生理食塩水で保存した（保存（１））ラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）を５ｇ添加して、ＢＲＩＸ １５％の乳製品乳酸菌飲料を製造した。
３）この乳製品乳酸菌飲料を１０℃で１０日間保存したところ、１０日間保存後のラクトバチルス・ガセリの菌数は、７．５×１０6（ＣＦＵ／ｍｌ）と高い値を示し、生存率は２．５×１０-1であった。
１）９５℃で９０分殺菌した発酵ミックス（１６％脱脂粉乳＋３％グルコース）１０ｇにラクトバチルス・パラカゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐａｒａｃａｓｅｉ）基準株ＪＣＭ ８１３０のスターターを３％添加し、３０℃で７６時間発酵した。
２）上記１）にて得られた発酵物１０ｇ、異性化糖１０ｇおよびイオン交換水を３５ｇ、実施例１と同様の方法で０．８９％生理食塩水で保存した（保存（１））ラクトバチルス・ガセリ ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）を５ｇ添加して、ＢＲＩＸ １５％の乳製品乳酸菌飲料を製造した。
３）この乳製品乳酸菌飲料を１０℃で１０日間保存したところ、１０日間保存後のラクトバチルス・ガセリの菌数は、７．５×１０6（ＣＦＵ／ｍｌ）と高い値を示し、生存率は２．５×１０-1であった。
乳酸菌を含有する飲食品の製造（２）
１）脱脂粉乳９．５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０．５ｋｇ、水７７ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ2 で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用の市販乳酸菌スターター４重量％を添加した後、 １００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０．７５％になったところで５℃まで冷却して発酵乳を得た。
２）上記１）にて調製した発酵乳６８ｇ、実施例１と同様の方法で２．５％酵母エキス溶液で保存した（保存（１））ラクトバチルス・ジョンソニー ＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）２ｇとフルーツプレザーブ１２ｇとを混合してフルーツ入り発酵乳を製造した。
３）このフルーツ入り発酵乳を１０℃で１０日間保存したところ、１０日間保存後のラクトバチルス・ジョンソニーの菌数は５．３×１０5（ＣＦＵ／ｍｌ）と高い値を示し、生存率は７．２×１０-1であった。
１）脱脂粉乳９．５ｋｇ、無塩バター３ｋｇ、上白糖１０．５ｋｇ、水７７ｋｇをホモミキサーで混合し、原料ミックスを調製した。
この原料ミックスを５０℃まで加温し、８０ｋｇ／ｃｍ2 で均質処理した後、プレート式殺菌機で９０℃、１０分間加熱殺菌し、プレート式熱交換機で４２℃まで冷却した。そして、発酵乳製造用の市販乳酸菌スターター４重量％を添加した後、 １００ｍｌ容の容器に充填し、４２℃で発酵を行い、乳酸酸度が０．７５％になったところで５℃まで冷却して発酵乳を得た。
２）上記１）にて調製した発酵乳６８ｇ、実施例１と同様の方法で２．５％酵母エキス溶液で保存した（保存（１））ラクトバチルス・ジョンソニー ＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）２ｇとフルーツプレザーブ１２ｇとを混合してフルーツ入り発酵乳を製造した。
３）このフルーツ入り発酵乳を１０℃で１０日間保存したところ、１０日間保存後のラクトバチルス・ジョンソニーの菌数は５．３×１０5（ＣＦＵ／ｍｌ）と高い値を示し、生存率は７．２×１０-1であった。
乳酸菌にとってストレスの高い環境下においても生存でき、乳酸菌が死滅しやすい飲食品においても、生菌数を維持できる乳酸菌を製造することにより、この乳酸菌を含む飲食品を、高い健康効果が期待される、プロバイオティクス乳酸菌入り飲食品として提供することが可能となる。
［寄託生物材料への言及］
（１）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ２０５５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東１丁目１番１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成８年３月２７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３
（２）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ２０５６
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
上記（１）に同じ
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
昭和６１年４月２２日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８
（３）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ１０２４１
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１２年３月１５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６
（４）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ１０２３９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１０年２月１７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９
（５）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ１８３９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成８年３月２７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４
（６）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０５０
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成７年３月１４日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４
（１）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ２０５５
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
独立行政法人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センター
日本国茨城県つくば市東１丁目１番１中央第６（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成８年３月２７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３
（２）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ２０５６
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
上記（１）に同じ
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
昭和６１年４月２２日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８
（３）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ１０２４１
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１２年３月１５日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６
（４）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ ＳＢＴ１０２３９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成１０年２月１７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９
（５）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ１８３９
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成８年３月２７日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４
（６）Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ ＳＢＴ２０５０
イ 当該生物材料を寄託した寄託機関の名称及び住所
工業技術院生命工学技術研究所
日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号（郵便番号３０５−８５６６）
ロ イの寄託機関に生物材料を寄託した日付
平成７年３月１４日
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号
ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４
Claims (13)
- ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。 - 次の１）〜１５）から選ばれるいずれか一種以上の遺伝子の発現が抑制されたラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ - 前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３）、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする請求項１または２に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）。
- ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したときに、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。 - 前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）が、次の１）〜１５）から選ばれるいずれか１種以上の遺伝子の発現が抑制されていることを特徴とする請求項４に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
１）ａｔｐＤ、２）ｃｆａ、３）ｃｌｐＣ、４）ｄｎａＫ、５）ｆｔｓＨ、６）ｇｒｏＥＬ、７）ｈｓｐ２０、８）ｌｄｈ、９）ｍｓｃＬ、１０）ｎｐｒ、１１）ｏｐｕＡ、１２）ｐｔｓＨ、１３）ｒｐｏＳ、１４）ｔｒｘ、１５）ｕｖｒＡ - 前記ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）が、ＳＢＴ２０５５（ＦＥＲＭ ＢＰ−１０９５３））、ＳＢＴ２０５６（ＦＥＲＭ ＢＰ−１１０３８）、ＳＢＴ１０２４１（ＦＥＲＭ Ｐ−１７７８６）、ＳＢＴ１０２３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１６６３９）、ＪＣＭ１１３１Ｔ、前記ラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）がＳＢＴ１８３９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５５３４）、ＳＢＴ２０５０（ＦＥＲＭ Ｐ−１４８２４）、ＪＣＭ２０１０Ｔのいずれかであることを特徴とする請求項４または５に記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の製造方法。
- 請求項１〜３のいずれかに記載のラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を含有させることを特徴とする飲食品。
- 前記飲食品が乳製品であることを特徴とする請求項７に記載の飲食品。
- 前記乳製品が発酵乳、乳製品乳酸菌飲料、または乳酸菌飲料であることを特徴とする請求項８に記載の飲食品。
- 次の１）および２）の工程を含むことを特徴とする飲食品の製造方法。
１）ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存し、保存後の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）が保存前の菌数（ＣＦＵ／ｍｌ）の１０倍以内であることを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を製造する工程。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
２）上記１）の工程によって保存した乳酸菌を、飲食品または飲食品の原料に添加する工程。 - 前記飲食品が乳製品である請求項１０に記載の飲食品の製造方法。
- 前記乳製品が発酵乳または乳酸菌飲料である請求項１１に記載の飲食品の製造方法。
- ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を下記条件で保存したことを特徴とするラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）の生存率を向上させる方法。
条件；ラクトバチルス・ガセリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｇａｓｓｅｒｉ）および／またはラクトバチルス・ジョンソニー（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｊｏｈｎｓｏｎｉｉ）を保存培地で２０〜４５℃、１〜１６時間保存する。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012060310A JP6117474B2 (ja) | 2012-03-16 | 2012-03-16 | 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2012060310A JP6117474B2 (ja) | 2012-03-16 | 2012-03-16 | 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2013192470A true JP2013192470A (ja) | 2013-09-30 |
| JP6117474B2 JP6117474B2 (ja) | 2017-04-19 |
Family
ID=49392164
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2012060310A Active JP6117474B2 (ja) | 2012-03-16 | 2012-03-16 | 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP6117474B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019135408A1 (ja) * | 2018-01-05 | 2019-07-11 | 株式会社明治 | 発酵乳及び乳酸菌スターターの製造方法 |
| WO2022224642A1 (ja) * | 2021-04-19 | 2022-10-27 | 日清ヨーク株式会社 | 抗酸化作用を有する乳酸菌飲料 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1072493A (ja) * | 1996-06-25 | 1998-03-17 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 蛋白質及びその製造方法 |
| JP2003306436A (ja) * | 2002-02-15 | 2003-10-28 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 血清コレステロール上昇抑制剤 |
| JP2004504050A (ja) * | 2000-07-21 | 2004-02-12 | ソシエテ デ プロデユイ ネツスル ソシエテ アノニム | 卵をベースとした粉末およびこれを含む食品 |
| WO2011027719A1 (ja) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | 明治乳業株式会社 | ラクトバチルス属乳酸菌の増殖促進剤及び／又は生残性向上剤 |
| JP2011516402A (ja) * | 2008-03-07 | 2011-05-26 | 雪印乳業株式会社 | アディポネクチン分泌促進及び／又は減少抑制剤 |
-
2012
- 2012-03-16 JP JP2012060310A patent/JP6117474B2/ja active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1072493A (ja) * | 1996-06-25 | 1998-03-17 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 蛋白質及びその製造方法 |
| JP2004504050A (ja) * | 2000-07-21 | 2004-02-12 | ソシエテ デ プロデユイ ネツスル ソシエテ アノニム | 卵をベースとした粉末およびこれを含む食品 |
| JP2003306436A (ja) * | 2002-02-15 | 2003-10-28 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 血清コレステロール上昇抑制剤 |
| JP2011516402A (ja) * | 2008-03-07 | 2011-05-26 | 雪印乳業株式会社 | アディポネクチン分泌促進及び／又は減少抑制剤 |
| WO2011027719A1 (ja) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | 明治乳業株式会社 | ラクトバチルス属乳酸菌の増殖促進剤及び／又は生残性向上剤 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BIOTECHNOL. PROG.,, vol. 27, JPN6016002588, 2011, pages 342 - 350, ISSN: 0003509703 * |
| INTERNATIONAL DAIRY JOURNAL, vol. 12, JPN6016002589, 2002, pages 201 - 208, ISSN: 0003509704 * |
| JOURNAL OF APPLIED MICROBIOLOGY, vol. 90, JPN6016002587, 2001, pages 343 - 352, ISSN: 0003242209 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019135408A1 (ja) * | 2018-01-05 | 2019-07-11 | 株式会社明治 | 発酵乳及び乳酸菌スターターの製造方法 |
| JP2019118311A (ja) * | 2018-01-05 | 2019-07-22 | 株式会社明治 | 発酵乳及び乳酸菌スターターの製造方法 |
| JP7131913B2 (ja) | 2018-01-05 | 2022-09-06 | 株式会社明治 | 発酵乳及び乳酸菌スターターの製造方法 |
| WO2022224642A1 (ja) * | 2021-04-19 | 2022-10-27 | 日清ヨーク株式会社 | 抗酸化作用を有する乳酸菌飲料 |
| JP2022165341A (ja) * | 2021-04-19 | 2022-10-31 | 日清ヨーク株式会社 | 抗酸化作用を有する乳酸菌飲料 |
| JP7340560B2 (ja) | 2021-04-19 | 2023-09-07 | 日清ヨーク株式会社 | 抗酸化作用を有する乳酸菌飲料 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP6117474B2 (ja) | 2017-04-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4772131B2 (ja) | 新規乳酸菌を用いた発酵乳の製造方法 | |
| JP4862053B2 (ja) | 新規乳酸菌 | |
| JP6535285B2 (ja) | シトルリンの調製方法 | |
| CA2799101C (en) | Synergistic fermentation of lactobacillus rhamnosus and lactobacillus paracasei subsp paracasei | |
| JP5774517B2 (ja) | ビフィドバクテリウム属細菌含有発酵食品の製造方法 | |
| Guzel-Seydim et al. | Kefir and koumiss: microbiology and technology | |
| WO2017018440A1 (ja) | 乳酸菌組成物、発酵乳及びその製造方法、並びに発酵乳製造キット | |
| JP2016189709A (ja) | 発酵乳の製造方法 | |
| Panda et al. | Kefir and koumiss origin, health benefits and current status of knowledge | |
| JP6117474B2 (ja) | 生存率が高い乳酸菌を含む飲食品および該飲食品の製造方法 | |
| Matejčeková et al. | Fermentation of milk-and water-based amaranth mashes | |
| Ray et al. | Fermented Foods | |
| JP5561642B2 (ja) | ヨーグルト | |
| JP4794592B2 (ja) | 新規乳酸菌 | |
| Mahrous et al. | Production of a functional frozen yoghurt fortified with omega-3 and vitamin E | |
| JP4794593B2 (ja) | 新規乳酸菌を用いた発酵乳の製造方法 | |
| JP2019010073A (ja) | 凍結乳酸菌の解凍方法 | |
| WO2023038072A1 (ja) | 乳酸菌、乳酸菌スターター、発酵乳、発酵乳の製造方法、及び乳酸菌のスクリーニング方法 | |
| JP5686336B2 (ja) | 新規発酵食品 | |
| Ayad et al. | Stimulating the Viability of Bifidobacterium spp. in Synbiotic Fermented Milk by Co-culturing with Lactobacillus paracasei 441 and Inulin | |
| JP6966275B2 (ja) | 乳酸菌の生残性向上方法 | |
| TWI589227B (zh) | 加氏乳酸桿菌的存活性高的飲食品及其製造方法 | |
| Mahrous et al. | Production of a functional frozen yoghurt fortified with Omega-3 and Vitamin E | |
| JP6084576B6 (ja) | ガセリ菌の生残性の高い飲食品およびその製造方法 | |
| JP2020137471A (ja) | 発酵乳 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20150303 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160127 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160328 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20160817 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20161017 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20170308 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170323 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6117474 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |