JP2013190443A - 疾患に関連するチオール化合物の迅速な測定のためのデバイス - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための1回用使い捨て物品であって、その物品は(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができる、マトリックス;および(b)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる、検出試薬を備える、物品を提供する。
【選択図】なし
Description
本願に記載される発明は、いずれの連邦支援の研究または開発によるものでなかった。
ごく最近まで、口腔の健康と全身の健康との間には、密接な関係があるとあまり理解されず、その関係は広く見落とされてきた。しかしながら、現在、膨大な数の証拠から、歯根膜炎などの口腔の疾病が、全身を冒す障害(例えば、循環器疾患、II型糖尿病および早産)に密接に関連することが明らかにされている。
歯根膜炎の診断は、患者が歯科医の椅子に長時間座っている間ずっと、各歯の周りの歯周ポケットにおける空間を複数回にわたってプロービングしなければならない骨の折れるプロセスである。従来の診断手順に関わる時間および苦痛のせいで、患者が思いとどまり、この重篤であるが治療可能な状態の診断が全体的に不十分になる。
例えば、本発明は以下の項目を提供する。
(項目1)
流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための1回用使い捨て物品であって、該物品は:
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができる、マトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が、該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該サンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる、検出試薬を備える、物品。
(項目2)
前記物品が、試験片である、項目1に記載の物品。
(項目3)
前記流体サンプルが、生理学的流体のサンプルである、項目1または項目2に記載の物品。
(項目4)
前記生理学的流体が、口腔液である、項目3に記載の物品。
(項目5)
前記口腔液が、唾液および/または歯肉溝滲出液および/または歯肉線バイオフィルムおよび/または舌バイオフィルムおよび/または舌擦過物および/または息を含む、項目4に記載の物品。
(項目6)
前記少なくとも1つの吸収材料が、ポリアミド材料を含む、項目1から5のいずれか1項に記載の物品。
(項目7)
前記検出試薬が:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含む、項目1から6のいずれか1項に記載の物品。
(項目8)
前記検出試薬が、5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)である、項目7に記載の物品。
(項目9)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約1秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約10分後に終了する、項目1から8のいずれか1項に記載の物品。
(項目10)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約5秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約5分後に終了する、項目1から8のいずれか1項に記載の物品。
(項目11)
前記シグナルが、電磁シグナルを含む、項目1から10のいずれか1項に記載の物品。
(項目12)
前記電磁シグナルが、可視シグナルを含む、項目11に記載の物品。
(項目13)
前記可視シグナルと比較するための少なくとも1つの色見本を含むコンパレーター領域をさらに備える、項目12に記載の物品。
(項目14)
流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための方法であって、該方法は:
(a)(i)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができるマトリックス、および(ii)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が、該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該サンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる検出試薬、を備える1回用使い捨て物品を提供する工程;
(b)該マトリックスを該サンプルと接触させる工程;
(c)該量の検出試薬によって提供されるシグナルを観察する工程;
(d)該量の検出試薬によって提供されるシグナルを1つ以上の参照値と比較する工程であって、該参照値の各々は、チオール化合物の濃度を示唆する、工程
を包含し、それにより該サンプル中のチオール化合物の濃度を測定する、方法。
(項目15)
前記流体が、生理学的流体である、項目14に記載の方法。
(項目16)
前記生理学的流体が、口腔液である、項目15に記載の方法。
(項目17)
前記口腔液が、唾液および/または歯肉溝滲出液および/または歯肉線バイオフィルムおよび/または舌バイオフィルムおよび/または舌擦過物および/または息を含む、項目16に記載の方法。
(項目18)
前記物品が、試験片である、項目14から17のいずれか1項に記載の方法。
(項目19)
前記少なくとも1つの吸収材料が、ポリアミド材料を含む、項目14から18のいずれか1項に記載の方法。
(項目20)
前記検出試薬が:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含む、項目14から19のいずれか1項に記載の方法。
(項目21)
前記検出試薬が、5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)である、項目20に記載の方法。
(項目22)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約1秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約10分後に終了する、項目14から21のいずれか1項に記載の方法。
(項目23)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約5秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約5分後に終了する、項目14から21のいずれか1項に記載の方法。
(項目24)
前記シグナルが、電磁シグナルを含む、項目14から23のいずれか1項に記載の方法。
(項目25)
前記電磁シグナルが、可視シグナルを含む、項目24に記載の方法。
(項目26)
前記1つ以上の参照値の各々が、(a)色見本と(b)チオール化合物の濃度との対になった組み合わせとして提供される、項目14から25のいずれか1項に記載の方法。
(項目27)
前記観察工程および/または比較工程のうちの少なくとも1つが、自動読み取り装置によって行われる、項目14から26のいずれか1項に記載の方法。
(項目28)
哺乳動物被験体が特定の疾病に罹患しているリスクを判定するための方法であって、該方法は:
(a)(i)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができるマトリックス、および(ii)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が、該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該サンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる検出試薬、を備える1回用使い捨て物品を提供する工程;
(b)該マトリックスを、該被験体由来の1つ以上の生理学的流体を含むサンプルと接触させる工程;
(c)該量の検出試薬によって提供されるシグナルを観察する工程;
(d)該量の検出試薬によって提供されるシグナルを1つ以上の参照値と比較する工程であって、該参照値の各々は、被験体が該特定の疾病に罹患しているリスクを示唆する、工程
を包含し、それにより該被験体が該特定の疾病に罹患しているリスクを判定する、方法。
(項目29)
前記流体が、生理学的流体である、項目28に記載の方法。
(項目30)
前記生理学的流体が、口腔液である、項目29に記載の方法。
(項目31)
前記口腔液が、唾液および/または歯肉溝滲出液および/または歯肉線バイオフィルムおよび/または舌バイオフィルムおよび/または舌擦過物および/または息を含む、項目30に記載の方法。
(項目32)
前記物品が、試験片である、項目28から31のいずれか1項に記載の方法。
(項目33)
前記少なくとも1つの吸収材料が、ポリアミド材料を含む、項目28から32のいずれか1項に記載の方法。
(項目34)
前記検出試薬が:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含む、項目28から33のいずれか1項に記載の方法。
(項目35)
前記検出試薬が、5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)である、項目34に記載の方法。
(項目36)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約1秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約10分後に終了する、項目28から35のいずれか1項に記載の方法。
(項目37)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約5秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約5分後に終了する、項目28から35のいずれか1項に記載の方法。
(項目38)
前記シグナルが、電磁シグナルを含む、項目28から37のいずれか1項に記載の方法。
(項目39)
前記電磁シグナルが、可視シグナルを含む、項目38に記載の方法。
(項目40)
前記1つ以上の参照値の各々が、(a)色見本と(b)被験体が前記特定の疾病に罹患しているリスクとの対になった組み合わせとして提供される、項目28から39のいずれか1項に記載の方法。
(項目41)
前記観察工程および/または比較工程のうちの少なくとも1つが、自動読み取り装置によって行われる、項目28から40のいずれか1項に記載の方法。
(項目42)
前記特定の疾病が、歯根膜炎である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目43)
前記特定の疾病が、歯肉炎である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目44)
前記特定の疾病が、口臭である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目45)
前記特定の疾病が、循環器疾患である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目46)
前記特定の疾病が、II型糖尿病である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目47)
前記特定の疾病が、早産である、項目28から41のいずれか1項に記載の方法。
(項目48)
(a)流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための少なくとも1つの1回用使い捨て物品であって、該物品は:
(i)少なくとも1つの吸収材料を備える第1マトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができる、第1マトリックス;および
(ii)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が、該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該サンプル中のチオール化合物の濃度を示唆する可視シグナルを提供することができる、検出試薬、
を備える1回用使い捨て物品;
(b)以下:
(i)該可視シグナルと比較するための少なくとも1つの色見本;および
(ii)各色見本に関して、該色見本と対応づけられるチオール化合物の相対的濃度を示す英数字の識別子
が印刷されたおよび/または添付された、コンパレーター;
(c)必要に応じて、該物品および該コンパレーターを入れるのに適した包装;
(d)必要に応じて、該物品および該コンパレーターを使用するための指示書
を備える、キット。
(項目49)
哺乳動物被験体由来の流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための1回用使い捨て試験片であって、該試験片は:
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができる、マトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が、該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該サンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる、検出試薬
を備える、試験片。
(項目50)
前記流体が、唾液および/または歯肉溝滲出液および/または歯肉線バイオフィルムおよび/または舌バイオフィルムおよび/または舌擦過物および/または息を含む、項目49に記載の試験片。
(項目51)
前記検出試薬が:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含む、項目49または50に記載の試験片。
(項目52)
前記検出試薬が、5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)である、項目51に記載の試験片。
(項目53)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約1秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約10分後に終了する、項目49から52のいずれか1項に記載の試験片。
(項目54)
前記期間が、前記ある量の検出試薬の少なくとも一部が前記サンプルの少なくとも一部と接触した約5秒後に始まり、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した約5分後に終了する、項目49から52のいずれか1項に記載の試験片。
(項目55)
前記シグナルが、電磁シグナルを含む、項目49から54のいずれか1項に記載の試験片。
(項目56)
前記電磁シグナルが、可視シグナルを含む、項目55に記載の試験片。
(項目57)
哺乳動物被験体が特定の疾病に罹患しているリスクを判定するための1回用使い捨て試験片であって、該試験片は:
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、該マトリックスは、該サンプルを吸収することができるマトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、該量の検出試薬は、該量の検出試薬の少なくとも一部が該サンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、該被験体が該特定の疾病に罹患しているリスクを示唆するシグナルを提供することができ、ここで
(i)該検出試薬は:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含み;そして
(ii)該特定の疾病は:歯根膜炎、歯肉炎、口臭、循環器疾患、II型糖尿病、早産のうちの少なくとも1つである、
検出試薬
を備える、1回用使い捨て試験片。
(項目58)
前記検出試薬が、5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸)を含む、項目57に記載の試験片。
(項目59)
前記特定の疾病が、歯根膜炎である、項目57または58に記載の試験片。
(項目60)
前記特定の疾病が、歯肉炎である、項目57または58に記載の試験片。
(項目61)
前記特定の疾病が、口臭である、項目57または58に記載の試験片。
(項目62)
前記特定の疾病が、循環器疾患である、項目57または58に記載の試験片。
(項目63)
前記特定の疾病が、II型糖尿病である、項目57または58に記載の試験片。
(項目64)
前記特定の疾病が、早産である、項目57または58に記載の試験片。
(項目65)
緩衝液、5,5’−ジチオビス(2−ニトロ安息香酸)(DTNB)および湿潤剤を含む、試薬液。
(項目66)
前記緩衝液が、約5mMから200mMの濃度のリン酸ナトリウム緩衝液である、項目65に記載の試薬液。
(項目67)
前記緩衝液が、約20mMから150mMの濃度のリン酸ナトリウム緩衝液である、項目65に記載の試薬液。
(項目68)
前記緩衝液が、約100mMの濃度のリン酸ナトリウム緩衝液である、項目65に記載の試薬液。
(項目69)
前記緩衝液が、約6.5から8.5のpHである、項目65から68のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目70)
前記緩衝液が、約6.5から7.5のpHである、項目65から68のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目71)
前記緩衝液が、約7.0のpHである、項目65から68のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目72)
前記DTNBが、約10mg/Lから150mg/Lの濃度で存在する、項目65から71のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目73)
前記DTNBが、約80mg/Lから120mg/Lの濃度で存在する、項目65から71のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目74)
前記DTNBが、約100mg/Lの濃度で存在する、項目65から71のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目75)
前記湿潤剤が、グリセロール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールまたはプロピレングリコールを含む、項目65から74のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目76)
前記湿潤剤が、グリセロールを含む、項目75に記載の試薬液。
(項目77)
前記グリセロールが、約0.1体積%から5.0体積%の濃度で存在する、項目76に記載の試薬液。
(項目78)
前記グリセロールが、約0.5体積%の濃度で存在する、項目76に記載の試薬液。
(項目79)
前記湿潤剤が、キシリトールを含む、項目75に記載の試薬液。
(項目80)
前記キシリトールが、約2重量%から10重量%の濃度で存在する、項目79に記載の試薬液。
(項目81)
前記キシリトールが、約4重量%の濃度で存在する、項目79に記載の試薬液。
(項目82)
香味料または芳香をさらに含む、項目65から81のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目83)
前記香味料または芳香が、ペパーミントである、項目82に記載の試薬液。
(項目84)
アルコールをさらに含む、項目65から83のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目85)
前記アルコールが、イソプロパノールまたはエタノールである、項目84に記載の試薬液。
(項目86)
アルカリ土類金属または遷移金属をさらに含む、項目65から85のいずれか1項に記載の試薬液。
(項目87)
前記金属が、マンガン、マグネシウムまたはコバルトを含む、項目86に記載の試薬液。
(項目88)
検出領域を含む固体基材を備える検出デバイスであって、該検出領域は、項目65〜87のいずれかに記載の試薬液に含浸されている、検出デバイス。
(項目89)
前記試薬液を前記固体基材上で乾燥させた、項目88に記載の検出デバイス。
(項目90)
前記固体基材が、不活性繊維のパッドである、項目88または89に記載の検出デバイス。
(項目91)
前記繊維が、米国特許第7,290,668号に記載されている少なくとも1つの材料を含む、項目90に記載の検出デバイス。
(項目92)
前記繊維が、R−27378またはR28445D#4345と呼ばれているTRANSORB(登録商標)ブランド材料を含む、項目90に記載の検出デバイス。
(項目93)
前記固体基材が、長方形であるか、または代表的には最大約8mm×8mmかつ約1.0mmの厚さの打抜き形から構成される、項目88から92のいずれか1項に記載の検出デバイス。
(項目94)
前記固体基材が、1つ以上の標準領域をさらに含む、項目88〜93のいずれか1項に記載の検出デバイス。
(項目95)
前記1つ以上の標準領域が、所定の色および強度の比色標準を含む、項目94に記載の検出デバイス。
(項目96)
チオール化合物検出デバイスを製造する方法であって:固体基材を項目65〜87のいずれかに記載の試薬液と接触させる工程、および該デバイスを乾燥させることにより該検出デバイスを形成する工程を包含する、方法。
(項目97)
項目96に記載の方法によって製造される、検出デバイス。
(項目98)
被験体における口臭を検出する方法であって、該方法は、該被験体の口腔から採取された生理学的流体を、項目88から95または項目97のいずれか1項に記載の検出デバイスと接触させることにより、生理学的流体と接触したデバイスを形成する工程、および該生理学的流体と接触したデバイスにおいてチオール化合物の濃度レベルを検出する工程を包含し、ここで、少なくとも約40μmol/Lのチオールのレベルが、口臭を示唆する、方法。
(項目99)
被験体における歯肉炎を検出する方法であって、該方法は、該被験体の口腔から採取された生理学的流体を、項目88から95または項目97のいずれか1項に記載の検出デバイスと接触させることにより、生理学的流体と接触したデバイスを形成する工程、および該生理学的流体と接触したデバイスにおいてチオール化合物の濃度レベルを検出する工程を包含し、ここで、少なくとも約80μmol/Lのチオールのレベルが、歯肉炎を示唆する、方法。
(項目100)
被験体における歯周病を検出する方法であって、該方法は、該被験体の口腔から採取された生理学的流体を、項目88から95または項目97のいずれか1項に記載の検出デバイスと接触させることにより、生理学的流体と接触したデバイスを形成する工程、および該生理学的流体と接触したデバイスにおいてチオール化合物の濃度レベルを検出する工程を包含し、ここで、少なくとも約160μmol/Lのチオールのレベルが、歯根膜炎を示唆する、方法。
(項目101)
前記検出工程が、(a)前記生理学的流体と接触したデバイスの色の強度または吸光度を(b)標準と比較することによって行われる、項目98、99または100のいずれか1項に記載の方法。
(項目102)
前記検出工程が、眼によって行われる、項目101に記載の方法。
(項目103)
前記検出工程が、機械によって行われる、項目101に記載の方法。
(項目104)
前記検出工程が、分光光度計によって行われる、項目101に記載の方法。
(項目105)
前記検出工程が、定量化されたシグナルまたは半定量化されたシグナルを提供する、項目101から104のいずれか1項に記載の方法。
(項目106)
前記生理学的流体が、GCF、舌擦過物、舌バイオフィルム、歯肉線バイオフィルム、唾液または息である、項目98から105のいずれか1項に記載の方法。
(項目107)
項目65に記載の試薬液および項目88に記載の検出デバイスまたは項目97に記載の検出デバイスを備える、口内チオール化合物の検出に有用な試験キット。
本発明は、流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための1回用使い捨て物品を提供する。
局面1.流体サンプル中のチオール化合物の濃度を測定するための1回用使い捨て物品であって、その物品は:
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができる、マトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる、検出試薬を備える、物品。
(a)(i)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができるマトリックス、および(ii)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる検出試薬、を備える1回用使い捨て物品を提供する工程;
(b)そのマトリックスをそのサンプルと接触させる工程;
(c)その量の検出試薬によって提供されるシグナルを観察する工程;
(d)その量の検出試薬によって提供されるシグナルを1つ以上の参照値と比較する工程であって、その参照値の各々は、チオール化合物の濃度を示唆する、工程
を包含し、それによりそのサンプル中のチオール化合物の濃度を測定する、方法。
(a)(i)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができるマトリックス、および(ii)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる検出試薬、を備える1回用使い捨て物品を提供する工程;
(b)そのマトリックスを、その被験体由来の1つ以上の生理学的流体を含むサンプルと接触させる工程;
(c)その量の検出試薬によって提供されるシグナルを観察する工程;
(d)その量の検出試薬によって提供されるシグナルを1つ以上の参照値と比較する工程であって、その参照値の各々は、被験体がその特定の疾病に罹患しているリスクを示唆する、工程
を包含し、それによりその被験体がその特定の疾病に罹患しているリスクを判定する、方法。
(i)少なくとも1つの吸収材料を備える第1マトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができる、第1マトリックス;および
(ii)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆する可視シグナルを提供することができる、検出試薬、
を備える1回用使い捨て物品;
(b)以下:
(i)その可視シグナルと比較するための少なくとも1つの色見本;および
(ii)各色見本に関して、その色見本と対応づけられるチオール化合物の相対的濃度を示す英数字の識別子
が印刷されたおよび/または添付された、コンパレーター;
(c)必要に応じて、その物品およびそのコンパレーターを入れるのに適した包装;
(d)必要に応じて、その物品およびそのコンパレーターを使用するための指示書
を備える、キット。
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができる、マトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部が、そのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、そのサンプル中のチオール化合物の濃度を示唆するシグナルを提供することができる、検出試薬
を備える、試験片。
(a)少なくとも1つの吸収材料を備えるマトリックスであって、そのマトリックスは、そのサンプルを吸収することができるマトリックス;および
(b)ある量の検出試薬であって、その量の検出試薬は、その量の検出試薬の少なくとも一部がそのサンプルの少なくとも一部と接触した後のある期間の間に、その被験体がその特定の疾病に罹患しているリスクを示唆するシグナルを提供することができ、ここで
(i)その検出試薬は:5,5’−ジチオビス−(2−ニトロ安息香酸);5−(2−アミノエチル)−ジチオ−2−ニトロ安息香酸;N,N’−ビス(4−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(3−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2−ニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(2,4−ジニトロベンジリデン)−4,4’−ジチオジアニリン;N,N’−ビス(4−ニトロシンナマルイリデン)−4,4’−ジチオジアニリンのうちの少なくとも1つを含み;そして
(ii)その特定の疾病は:歯根膜炎、歯肉炎、口臭、循環器疾患、II型糖尿病、早産のうちの少なくとも1つである、
検出試薬
を備える、1回用使い捨て試験片。
緩衝液(リン酸ナトリウム,USP)−100mM,pH7.0
DTNB,100mg/L
グリセロール(USP),0.5体積%
キシリトール(食品/製薬グレード),4重量%
さらなる実施例2.試薬液を以下のとおり調剤した:
成分および量(溶液1Lに対して)脱イオン水(DI H2O;摂取に好適)約800mL+1Lまで適量リン酸二ナトリウム七水和物,USP 3.093g(3.060〜3.120g)リン酸一ナトリウム,USP 1.015g(1.010〜1.020g)グリセロール,USP 5.0mL(4.9〜5.1mL)キシリトール,食品/製薬グレード 40.0g(39.6〜40.4g)DTNB 0.100g(0.099〜0.101g)70%イソプロピルアルコール(またはUSPグレードIPA,70%希釈物)100mL(随意)次いで、PESフィルター(0.2ミクロンのポアサイズ)を用いて試薬液を濾過した。50mgまたは100mgDTNB/L溶液を用いて作製された片は、白色パッドに適度に適していることが見出された。なぜなら、乾燥させた際、そのレベルのDTNBは、たとえあったとしてもパッドに対して目立つ色をほとんど与えないからである。
目的:口臭および歯周病は、微生物による揮発性硫黄化合物(VSC)、主に、硫化水素およびメチルメルカプタンの産生が関与することが非常に多い。歴史的には、微生物のバイオフィルム内ではなく呼気中の微生物の存在を検出する試みに焦点が当てられていた。本発明者らの目的は、溶解されたチオールを標的にする試験片を開発することであり、その試験片は、迅速で視覚的な結果を提供し、簡単に使用でき、そして口腔組織に対して非刺激性である。
口の悪臭(口臭)および慢性歯周病は、一般に、それぞれ、舌背の上、または歯と歯肉組織との間の溝の中のいずれかにおける細菌の存在を特徴とする。これらの舌および歯肉バイオフィルムに生息する多くのグラム陰性嫌気性菌は、硫黄含有アミノ酸を有するタンパク質を代謝するとき、システインおよびメチオニンから末端の硫黄含有基を除去することにより、それぞれ硫化水素およびメチルメルカプタンを生成する能力を有する。
パッド材料のスクリーニング
様々な多孔性の吸収材料を入手し、サンプルパッドとして使用するための適合性についてスクリーニングした。所望の材料は、ある特定の固有の資質を有し、ならびにある特定の性能特性を達成しなればならなかった。それらは、以下であった:
・最初の呈色から最終的な呈色まで、許容可能な色の彩度または色調変化を提供すること・迅速にプラトーの(最終的な)呈色に達すること
・妥当な長さの時間にわたってプラトーの呈色を維持すること
・十分な厚さおよび耐久性を有すること(製造可能性)
・光沢の少ない外観を有すること
・乾燥時にTDRの均一な分布を達成すること
・試薬および生物学的(口腔液)サンプルに対して十分な収容能力を提供すること
・[サンプルによる]再水和の際に均一かつ非移動性のTDR分布を達成すること
・サンプルを可能な限り速くかつ均等に吸収すること
・口腔組織と生体適合性を示すこと;微粒子の脱落が最少であること
・プラスチック(支持体)裏材に付着すること。
パッドは、いったんTDRで処理されると口腔組織に対して刺激性でなくなるという論拠の一部として、本発明者らは、使用する時間枠(口腔組織と接触するせいぜい数秒間)において、TDRがパッドからかなりの程度浸出しなかったことを証明した。このことは、まず、乾燥パッドからTDRを洗い流そうとし、次いで、チオールを用いて、すすぎ流体を調べ、パッド内の全TDRに基づいて、溶液に放出されたパーセンテージを逆算することによって、達成された。
刺激試験に対する第2アプローチとして、本発明者らは、この目的のために確立された細胞株を用いたインビトロ試験のために、TDRを含む溶液を無関係の研究室に送付した。厳密な品質管理手順を使用し、既存の口腔ケア製剤と比較して、この試薬液に対する相対的な刺激性の徴候を判定することができた。
実現可能段階の試作品の安定性を証明するために、実時間劣化と加速劣化(高温での保存)の両方を用いる短期間の安定性研究に着手した。そのような研究は、開発プロセスの早い段階で懸念を引き起こし得るか、またはその後の試作品(最終的には、製造される製品自体)が適度に長い保存期間に必要な安定性を示し得るという信頼感を提供し得る。片を、包装し、様々な温度において保存し、次いで、実験経過中の所定の時点において標準的なチオール溶液を用いて調べた。これらの結果から、アレニウスモデル(Anderson,G.,and M.Scott(1991)Clin Chem 37:398−402)を用いることにより、安定性に関する現実的な見積もりと控えめな見積もりの両方を得ることができる。
異なるプラトーの(最終的な)試験呈色が達成され得るか否かを判定するために、本発明者らは、TDR濃度が律速となるようにその濃度を低下させた。試験の最終的な色を規定することができることにより、異なるカットオフ濃度を示す類似タイプのデバイスを考案することができることが証明され得る。
パッド材料のスクリーニング
興味深いことに、(TDR+チオールの)色素生産性反応産物は、チオール溶液の適用点からパッドマトリックスを通過して移動することが多かった。代表的には、標準チオールとして2−メルカプトエタノール(2−ME)を用いて新たに作製される水性チオール希釈物を試験の直前に調製する。これらをピペットで乾燥パッド上に垂らし、色の変化の挙動をある時間にわたってモニターした。液体の最前線における色の移動は、乾燥TDRがおそらく再水和の際にその液体によって自由に運ばれたことを示唆した。所望される結果は、(色の変化の)均一な領域であるので、そのような材料は、良好なパッドにはならない。
パッドを250μLの水(キュベット内)の中で最大3分間撹拌した後、パッドから溶液に浸出した再水和されたTDRを、25μLの1mMシステインを用いて調べた。生成された黄色を、t=30秒において分光光度法によって読み出した。これらのシグナルは、最大理論値(すなわち、各パッド上で乾燥された液体TDRの量を用いることによって生成されるシグナルに基づく)のパーセンテージとして表された。図12は、水和されたときに最大理論量の約1/3だけがパッドから出ること;およびキュベット内での撹拌の約1分後にその浸出レベルに達することを証明している。しかしながら、パッドに対する口の接触時間は、たった約5秒間である。10秒後(図中の矢印)でさえも、パッドから出る試薬の量が全体のおよそ5%であることが分かり、これは、粘膜組織との少しの表面接触ではなく比較的多い液量中での撹拌を想定している(この間における流体の移動は、パッドからの移動ではなくパッドへの移動であり得る)。
試験は、MatTek Corporation(Ashland,MA)によって着手された。液体TDRを、MatTekに送付し、細胞培養システム「EpiOral」ORL−200を用いるその標準的な試験アルゴリズムにおいてアッセイした。刺激の可能性を、培養された細胞の死亡率が50%に達する時点として定義される「ET−50」として評価した。試験結果を下記の表1に示す。
下記の表に報告される安定性研究の結果は、安定性の「現実的な」見積もり(Q10=3.00)と「控えめな」見積もり(Q10=2.00)の両方を提供する。この研究における試作パッドは、MatTek研究(すぐ上に記載の研究)に存在した活性なTDRの約1/4量を含んでおり、密閉された箔の小袋(乾燥剤を含まない)内に1つずつ試験片として保存された。45℃で保存された試験物のサブセットにおいても適切な反応性が見られ、実験の終わりには十分に試験された。この場合、安定性の「現実的な」見積もりは、2.4年(Q10=3.00)であり、「控えめな」見積もりは、1.13年(Q10=2.00)だった。
十分量のTDRが与えられると、パッド中のTDRを限定することによって、さらなる色の変化を別途もたらし得るチオール濃度に対しても「最大の」色の変化を規定することができるはずである。
ここで提示された、選択されたデザインの局面に基づいて、本発明者らは、「溶解されたチオール」口腔液試験に対するパッドとして機能する候補材料を特定した(標本の収集および反応の段階)。最初のパッドスクリーニング研究の後、パッドタイプ#4よりもさらに優れた特徴を示すパッド材料をさらに調べた(示さず)。
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