JP2012529505A

JP2012529505A - メラノコルチン受容体特異的ペプチド

Info

Publication number: JP2012529505A
Application number: JP2012514921A
Authority: JP
Inventors: ドッド，ジョン・エイチ; シ，イー−キュン; ヤン，ウェイ
Original assignee: アストラゼネカアクチボラグ
Priority date: 2009-06-08
Filing date: 2010-06-07
Publication date: 2012-11-22
Anticipated expiration: 2030-06-07
Also published as: ZA201200128B; US20130237473A1; CA2764797A1; NZ596556A; PE20150878A1; JP5615353B2; AR077011A1; EP2440569A4; TW201102082A; SG176127A1; IL216451A0; CO6480936A2; HN2011003218A; US20150252077A1; DOP2011000380A; AU2010259278B2; NI201100213A; US20100311648A1; CU23939B1; MX2011013173A

Abstract

本発明は、式（Ｉ）のメラノコルチン受容体特異的な環状ペプチドまたはその医薬的に許容できる塩に関するものであり、式中のＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂ、Ｒ_４ｃ、Ｒ_５、ｘおよびｙは明細書中に定めたものである。これらの化合物は、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態の処置に特に有用であり、これには肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームが含まれる。

【選択図】なし

Description

本発明は、メラノコルチン（melanocortin）受容体特異的環状ペプチドに関するものであり、これらはメラノコルチン受容体が仲介する疾患、適応症、状態および症候群、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態の処置に使用でき、これには肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームが含まれる。

以下の記載では、（著者および公開年による）多数の刊行物に言及するが、公開日が新しいためいくつかの刊行物は本発明に対する先行技術とはみなされない。そのような刊行物について本明細書中で考察するのは、背景をより完全にするためであって、そのような刊行物が特許性を判断する際の先行技術であると認めたものと解釈すべきではない。

メラノコルチン受容体タイプおよびサブタイプのファミリーが同定され、これには下記のものが含まれる：正常ヒトメラニン細胞およびメラノーマ細胞に発現するメラノコルチン−１受容体（ＭＣ１−Ｒ）、副腎の細胞に発現するＡＣＴＨ（アドレノコルチコトロピン）に対するメラノコルチン−２受容体（ＭＣ２−Ｒ）、主に視床下部、中脳および脳幹の細胞に発現するメラノコルチン−３受容体およびメラノコルチン−４受容体（ＭＣ３−ＲおよびＭＣ４−Ｒ）、ならびに広範囲の末梢組織に発現するメラノコルチン−５受容体（ＭＣ５−Ｒ）。ＭＣ１−Ｒは毛髪および皮膚の色素産生および炎症に関連することが示唆され、ＭＣ２−Ｒはステロイド産生を仲介すると考えられ、ＭＣ３−Ｒはエネルギー恒常性、摂食および炎症に関連することが示唆され、ＭＣ４−Ｒは摂食行動、エネルギー恒常性および性的機能（たとえば勃起機能）を制御すると考えられ、ＭＣ５−Ｒは外分泌腺系に関与することが示唆されている。

メラノコルチン受容体の構造決定において、受容体をコードする核酸配列および受容体を構成するアミノ酸配列の両方を含めた多くの研究が行なわれた。ＭＣ４−Ｒは、主に脳に発現すると考えられるＧタンパク質共役型の７回膜貫通受容体である。

ＭＣ４−Ｒの不活性化は肥満症を生じることが示された(Hadley, 1999, Ann N Y Acad Sci., 885: 1-21)。アグーチ関連タンパク質（agouti-related protein）（ＡｇＲＰ）は、ＭＣアンタゴニストまたはＭＣ４−Ｒに対するインバースアゴニストであることが示唆されている内在性化合物である。αメラニン細胞刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）は主要な内在性ＭＣ４−Ｒアゴニストであると考えられる。

末梢に位置するＭＣ４−Ｒ受容体はエネルギー恒常性にに関与することも示唆され、迷走神経におけるＭＣ４−Ｒシグナル伝達の役割ならびにそれと肥満症および糖尿病の処置との関連がGautron et al, The Journal of Comparative Neurology, 518: 6-24 (2010)により考察されている。

ＭＣ４−Ｒに対して特異的なペプチド、およびそれに次いでＭＣ３−Ｒに対して特異的なペプチドは、哺乳動物のエネルギー恒常性の調節に有用であると考えられ、これには食物摂取量および体重増加を低減させるための薬剤としての用途が含まれる。ＭＣ４−Ｒアゴニストペプチドは、雄性勃起機能障害を含めた性的機能障害の処置、ならびに食物摂取量および体重増加の減少、たとえば肥満症の処置に有用であると考えられる。そのようなペプチドは、随意エタノール摂取量の減少、薬物嗜癖の処置などにも使用できる。ＭＣ４
−ＲアゴニストペプチドはＭＣ３−Ｒアゴニストペプチドと同様に、さらに循環性ショック、虚血、出血性ショック、炎症性疾患、ならびに関連する疾患、適応症、状態および症候群の処置に使用できる。これに対しＭＣ４−Ｒアンタゴニストペプチドは、体重増加の補助、たとえば悪液質、筋肉減少症、消耗症候群または消耗性疾患、および食欲不振症の処置に使用するために有用であると考えられる。そのようなペプチドは、うつ病および関連障害の処置にも使用できる(Wikberg et al, Nature Reviews, Drug Discovery, 7, 307, (2008); Adan et al, British J. Pharm., 149, 815-827 (2006); Nogueiras et al, J. Clin., Invest., 117(11): 3475-3488 (2007); Maaser et al, Ann. N.Y. Acad. Sci.,
1072, 123-134 (2006); Giuliani et al, British J. Pharm., 150, 595-603 (2007); Balbani, Expert Opin. Ther. Patents, 17(3), 287-297 (2007);およびNavarro et al, Alcohol. Clin. Exp. Res., 29(6), 949-957 (2005))。メラノコルチン受容体特異的ペプチドには、環状α−ＭＳＨ類似ペプチド、たとえばAc-Nle-cyclo(-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-NH₂ (SEQ ID NO:1)(参照：米国特許s. 5,674,839および5,576,290)およびAc-Nle-cyclo(-Asp-His-D-Phe-Arg-Trp-Lys)-OH (SEQ ID NO:2) (参照：米国特許s. 6,579,968および6,794,489)が含まれる。これらおよび他のメラノコルチン受容体特異的ペプチドは、一般に天然α−ＭＳＨの中心テトラペプチド配列、His⁶-Phe⁷-Arg⁸-Trp⁹ (SEQ ID NO:3)、またはPhe⁷をD-Pheで置換したものを含むその模倣配列もしくは変異配列を含む。１種類以上のメラノコルチン受容体に対して特異的であると主張された他のペプチドまたはペプチド様化合物が、下記に開示されている：米国特許公報5,731,408、6,054,556、6,350,430、6,476,187、6,600,015、6,613,874、6,693,165、6,699,873、6,887,846、6,951,916、7,008,925、および7,176,279；公開された米国特許公開公報 2001/0056179、2002/0143141、2003/0064921、2003/0105024、2003/0212002、2004/0023859、2005/0130901、2005/0187164、2005/0239711、2006/0105951、2006/0111281、2006/0293223、2007/0027091、2007/0105759、2007/0123453、2007/0244054、および2008/0039387;ならびに国際特許出願番号WO 98/27113、WO 99/21571、WO 00/05263、WO 99/54358、WO 00/35952、WO 00/58361、WO 01/30808、WO 01/52880、WO 01/74844、WO 01/85930、WO 01/90140、WO 02/18437、WO 02/26774、WO 03/006604、WO 2004/099246、WO 2004/046166、WO 2005/000338、WO 2005/000339、WO 2005/000877、WO 2005/030797、WO 2005/060985、WO 2006/048449、WO 2006/048450、WO 2006/048451、WO 2006/048452、WO 2006/097526、WO 2007/008684、WO 2007/008704、およびWO 2007/009894。科学文献中の多数の報文ならびに多数の特許出願および交付された特許により証明されたメラノコルチン受容体特異的ペプチドにおける科学および医薬上の強い関心(Nozawa et al, Expert Opin. Ther. Patents 18(4): 403-427 (2008); Bednarek et al, Expert Opin. Ther. Patents 14(3): 327-336 (2004); Todorovic et al, Peptides, 26, 2026-2036 (2005);およびUjjainwalla et al, Current Topics
in Med. Chem., 7, 1068-1084 (2007))にもかかわらず、いずれの療法効能についても薬物として承認されたメラノコルチン受容体特異的ペプチドはない。実際に、いずれの療法効能についても第ＩＩ相臨床試験を通過したメラノコルチン受容体特異的ペプチドの報告はない。医薬用途に使用するためのメラノコルチン受容体特異的ペプチドに対する著しい実質的な要望が依然としてある。本発明を行なったのは、この背景に対するものである。

米国特許5,674,839 米国特許5,576,290 米国特許6,579,968 米国特許6,794,489 米国特許5,731,408 米国特許6,054,556 米国特許6,350,430 米国特許6,476,187 米国特許6,600,015 米国特許6,613,874 米国特許6,693,165 米国特許6,699,873 米国特許6,887,846 米国特許6,951,916 米国特許7,008,925 米国特許7,176,279 米国特許公開2001/0056179 米国特許公開2002/0143141 米国特許公開2003/0064921 米国特許公開2003/0105024 米国特許公開2003/0212002 米国特許公開2004/0023859 米国特許公開2005/0130901 米国特許公開2005/0187164 米国特許公開2005/0239711 米国特許公開2006/0105951 米国特許公開2006/0111281 米国特許公開2006/0293223 米国特許公開2007/0027091 米国特許公開2007/0105759 米国特許公開2007/0123453 米国特許公開2007/0244054 米国特許公開2008/0039387 WO 98/27113 WO 99/21571 WO 00/05263 WO 99/54358 WO 00/35952 WO 00/58361 WO 01/30808 WO 01/52880 WO 01/74844 WO 01/85930 WO 01/90140 WO 02/18437 WO 02/26774 WO 03/006604 WO 2004/099246 WO 2004/046166 WO 2005/000338 WO 2005/000339 WO 2005/000877 WO 2005/030797 WO 2005/060985 WO 2006/048449 WO 2006/048450 WO 2006/048451 WO 2006/048452 WO 2006/097526 WO 2007/008684 WO 2007/008704 WO 2007/009894

Hadley, 1999, Ann N Y Acad Sci., 885: 1-21 Gautron et al, The Journal of Comparative Neurology, 518: 6-24 (2010) Wikberg et al, Nature Reviews, Drug Discovery, 7, 307, (2008) Adan et al, British J. Pharm., 149, 815-827 (2006) Nogueiras et al, J. Clin., Invest., 117(11): 3475-3488 (2007) Maaser et al, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1072, 123-134 (2006) Giuliani et al, British J. Pharm., 150, 595-603 (2007) Balbani, Expert Opin. Ther. Patents, 17(3), 287-297 (2007) Navarro et al, Alcohol. Clin. Exp. Res., 29(6), 949-957 (2005) Nozawa et al, Expert Opin. Ther. Patents 18(4): 403-427 (2008) Bednarek et al, Expert Opin. Ther. Patents 14(3): 327-336 (2004) Todorovic et al, Peptides, 26, 2026-2036 (2005) Ujjainwalla et al, Current Topics in Med. Chem., 7, 1068-1084 (2007)

したがって本発明の目的は、ＭＣ４−Ｒおよび／またはＭＣ３−Ｒの調節（活性化を含む）に応答する疾患、障害および／または状態の処置、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランス関連、ならびに体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものの処置に有用な新規化合物を提供することである。

１観点において、本発明は式（Ｉ）の環状ペプチド：

に関するものであり、その鏡像異性体、立体異性体もしくはジアステレオ異性体、または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩をすべて含む；
式中：
Ｒ_１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択され；
Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃは、それぞれ独立して水素、ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ジハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−トリハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、またはアルコキシ−カルボニルから選択され、ただし、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは水素ではなく；
Ｒ_５は、−ＯＨまたは−Ｎ（Ｒ_６ａ）（Ｒ_６ｂ）であり；
Ｒ_６ａおよびＲ_６ｂは、それぞれ独立してＨ、またはＣ_１−Ｃ_４線状、分枝または環状アルキル鎖であり；
Ｒ_７は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２であり；
ｗは、それぞれの場合、独立して０〜５であり；
ｘは、１〜５であり；
ｙは、１〜５であり；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５である。

他の観点において本発明は、式（ＩＩ）：

のものである式（Ｉ）の環状ペプチドまたはその医薬的に許容できる塩に関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３である、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｘは３であり、ｙは２である、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、
Ｒ_２は−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択され；
ｗはそれぞれの場合、独立して０〜５から選択され；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５から選択される；
式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）の環状ペプチドに関する；これらにおいて、。

他の観点において本発明は、Ｒ_２はＨであり、Ｒ_３は

から選択される、式Ｉ、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_２は−ＣＨ_２−であり、Ｒ_３は−（ＣＨ_２）_２−であり、Ｒ_２とＲ_３は一緒に非置換ピロリジン環を形成している、式Ｉ、特に式（ＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは

から選択される、式Ｉ、特に式（ＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_４ａは４位にあって−Ｃ≡Ｎであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨである、式Ｉ、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の環状ペプチドに関する。

他の観点において本発明は、Ｒ_４ａは４位にあって−Ｆであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨである、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の環状ペプチドに関する。

本発明によるペプチドは、１種類以上のメラノコルチン受容体のリガンド、特にＭＣ４−Ｒのリガンド、より特別にはＭＣ４−Ｒのアゴニスト（完全および部分アゴニストを含む）である。本明細書中で用いる用語“リガンド”には、前記のいずれかひとつの受容体の活性部位に結合するペプチドおよび１以上のアロステリック部位に結合するペプチドが含まれる。

したがって本発明のペプチドは、特にＭＣ３−Ｒおよび／またはＭＣ４−Ｒの調節に応答する障害、疾患または状態、特にＭＣ４−Ｒの活性化に応答する障害、疾患または状態の処置のための医薬として使用できる。より詳細には、本発明のペプチドは食物摂取量、体重および／または体重増加を低減させると考えられ、したがってその必要がある患者において、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症および過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを処置するのに有用であると考えられる。患者はヒトまたはヒト以外の動物であってもよく、特にヒトである。

本発明のペプチドは、先行技術のペプチドと比較して有利な特性、特に増大した力価および／または増大した選択性をもつ可能性がある。これらの利点は、実用に際して対応する有用な特性を提供することができる。たとえば、医薬として用いる場合、本発明のペプチドはより低い臨床１日量で使用でき、より長い作用持続時間および／または改善された副作用プロフィールをもつ可能性がある。

本発明の他の観点において、療法有効量の本発明のペプチドをその必要がある患者に投与することにより、ＭＣ３−Ｒおよび／またはＭＣ４−Ｒの調節に応答する障害、疾患おまたは状態、たとえばＭＣ４−Ｒの活性化に応答する障害、疾患または状態、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症および過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを処置する方法が提供される。

本発明のさらに他の観点によれば、薬理学的有効量の本発明のペプチドをその必要がある個体、たとえばヒトに投与することにより、食物摂取量、体重および／または体重増加を低下させる方法が提供される。

本発明のさらに他の観点によれば、薬理学的有効量の本発明のペプチドをその必要がある個体、たとえばヒトに投与することにより、減量後の再増量を阻止する方法が提供される。

本発明のさらに他の観点において、ＭＣ４−Ｒの活性化に応答する障害、疾患および／または状態、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および
／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症および過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものの処置のための医薬の製造における、式Ｉのペプチドの使用が提供される。

他の観点において、本発明は、メラノコルチン受容体が仲介する疾患、適応症、状態および症候群、特にＭＣ４−Ｒの調節、たとえばＭＣ４−Ｒの活性化に応答する疾患、障害、状態おおよび／または症候群の処置に使用するための、式Ｉのペプチドおよび医薬的に許容できるキャリヤーを含む、メラノコルチン受容体特異的なペプチドをベースとする医薬組成物を提供する。

他の観点において、本発明は、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものの処置に使用するための、式Ｉのペプチドおよび医薬的に許容できるキャリヤーを含む、ペプチドをベースとするメラノコルチン受容体特異的な医薬組成物を提供し、その際、ペプチドは選択的ＭＣ４−Ｒリガンドである。

他の観点において、本発明は、ＭＣ４−Ｒに対して特異的であり、ＭＣ４−Ｒにおける部分または完全アゴニストであるペプチドを提供する。特に、本発明は、ＭＣ４−Ｒに対して特異的であり、ＭＣ４−Ｒにおける部分アゴニストであるペプチドを提供する。

他の観点において、本発明は、かなりの用量範囲にわたって有効である特異的ＭＣ４−Ｒ環状ペプチドを提供する。

本発明の他の観点および新規な特徴、ならびにさらに他の適用範囲は、一部は以下の詳細な記述に示され、一部は以下を調べると当業者に明らかになり、あるいは本発明の実施により分かるであろう。本発明の観点は、特に特許請求の範囲に示す手段および組合わせにより実現および達成できる。

１．０定義
本発明の記述を続ける前に、特定の用語をここに述べるように定義する。

本発明によるペプチドについて示す配列において、アミノ酸残基はChapter 2400, Manual of Patent Examining Procedure, 8^th Ed.に示されるように、それらの一般的な意味をもつ。したがって、“Ala”はアラニンであり、“Asn”はアスパラギンであり、“Asp”はアスパラギン酸であり、“Arg”はアルギニンであり、“Cys”はシステインであり、“Gly”はグリシンであり、“Gln”はグルタミンであり、“Glu”はグルタミン酸であり、“His”はヒスチジンであり、“Ile”はイソロイシンであり、“Leu”はロイシンであり、“Lys”はリジンであり、“Met”はメチオニンであり、“Phe”はフェニルアラニンであり、“Pro”はプロリンであり、“Ser”はセリンであり、“Thr”はトレオニンであり、“Trp”はトリプトファンであり、“Tyr”はチロシンであり、“Val”はバリンである、など。“D”異性体は３文字コードまたはアミノ酸名称の前の“D-”により表示され、たとえばD-PheはD-フェニルアラニンである。以上に含まれないアミノ酸残基は下記の定義をもつ：

用語“アシル”には基Ｒ（Ｃ＝Ｏ）−が含まれ、その際、Ｒは有機基、たとえばアルキル、アリール、ヘテロアリール、カルボサイクリルまたはヘテロサイクリルである。したがって、本明細書中で置換アシル基と述べる場合、それはその有機基（Ｒ）が置換されていることを意味する。一例はアセチル基ＣＨ_３−Ｃ（＝Ｏ）−であり、本明細書中で“Ａｃ”と表示する。前記に定めたアルキル基または置換アルキル基が１以上のカルボニル｛−（Ｃ＝Ｏ）−｝基により結合している場合、ペプチドまたは脂肪族部分は“アシル化”されている。ペプチドは最も普通の場合はＮ末端でアシル化されている。

用語“アルカン”には、線状または分枝した飽和炭化水素が含まれる。線状アルカン基の例には、メタン、エタン、プロパンなどが含まれる。分枝した、または置換されたアルカン基の例には、メチルブタンまたはジメチルブタン、メチルペンタン、ジメチルペンタンまたはトリメチルペンタンなどが含まれる。一般に、いかなるアルキル基もアルカンの置換基となることができる。

用語“アルケン”には、１以上の炭素−炭素二重結合を含む不飽和炭化水素が含まれる。そのようなアルケン基の例には、エチレン、プロペンなどが含まれる。

用語“アルケニル”には、少なくとも１つの二重結合を含む、炭素原子２〜６個の線状一価炭化水素基、または炭素原子３〜６個の分枝した一価炭化水素基が含まれる；その例には、エテニル、２−プロペニルなどが含まれる。

用語“アルキル”には、直鎖または分枝鎖の飽和脂肪族炭化水素基が含まれる。Ｃ_１−１０アルキルは、１〜１０個の炭素原子をもつアルキルを意味する。そのようなアルキル基の限定ではない例には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどが含まれる。

用語“アルキン”には、少なくとも１つの三重結合を含む、炭素原子２〜６個の線状一価炭化水素基、または炭素原子３〜６個の分枝した一価炭化水素基が含まれる；その例には、エチン、プロピン、ブチンなどが含まれる。

用語“アリール”には、環原子６〜１２個の単環式または二環式芳香族炭化水素基が含まれ、場合により、独立してアルキル、ハロアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、ハロ、ニトロ、アシル、シアノ、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、またはアルコキシ−カルボニルから選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。用語“アリール”には、一方の環が芳香族であり、一方の環が非芳香族（飽和または部分飽和環を含む）である、二環式芳香族環系も含まれる。二環式芳香族環系においては、２個以上の環炭素が２つの隣接環に共通である（これらの環は“縮合環”である）。アリール基の例には、フェニル、ビフェニル、インダニル、ナフチ
ル、１−ナフチルおよび２−ナフチル、その誘導体などが含まれる。

用語“アラルキル”には、基Ｒ^ａＲ^ｂが含まれ、その際、Ｒ^ａはアルキレン（二価アルキル）基であり、Ｒ^ｂは前記に定めたアリール基である。アラルキル基の例には、ベンジル、フェニルエチル、３−（３−クロロフェニル）−２−メチルペンチルなどが含まれる。

用語“脂肪族”には、炭化水素鎖をもつ化合物、たとえばアルカン、アルケン、アルキン、およびその誘導体が含まれる。

本明細書中で用いる用語“アミド”には、カルボニル基に結合した三価窒素をもつ化合物、すなわち−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２（すなわち第一級アミド）、−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨＲ_ｃおよび−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＲ_ｃＲ_ｄが含まれ、その際、Ｒ_ｃおよびＲ_ｄはそれぞれ独立して有機基を表わす。本明細書中で置換アミド基と述べる場合、それはそれらの有機基（Ｒ_ｃおよびＲ_ｄ）のうち少なくとも１つが置換されていることを意味する。アミドの例には、メチルアミド、エチルアミド、プロピルアミドなどが含まれる。

用語“アミン”には、−ＮＨ_２（すなわちアミノ基）、−ＮＨＲ_ａおよび−ＮＲ_ａＲ_ｂが含まれ、その際、Ｒ_ａおよびＲ_ｂはそれぞれ独立して有機基を表わす。本明細書中で置換アミン基と述べる場合、それはそれらの有機基（Ｒ_ａおよびＲ_ｂ）のうち少なくとも１つが置換されていることを意味する。

用語“ニトリル”には、官能基−Ｃ≡Ｎが含まれる。

用語“ハロゲン”（または“ハロ”）には、ハロゲン原子であるフッ素、塩素、臭素およびヨウ素が含まれるものとする。

用語“アルキル−ハロ”には、１個のハロゲン原子で置換されたアルキル、たとえば−ＣＨ_２Ｆが含まれる。用語“アルキル−ジハロ”には、２個のハロゲン原子で置換されたアルキル、たとえば−ＣＨＦ_２が含まれる。用語“アルキル−トリハロ”には、３個のハロゲン原子で置換されたアルキル、たとえば−ＣＦ_３が含まれる。

用語“アルキルチオ”には、−Ｓ−アルキルが含まれ、その際、アルキルは前記に定めたものである。Ｃ_１−Ｃ_１０アルキルチオの限定ではない例には、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソ−プロピルチオ、およびｎ−ブチルチオが含まれる。

用語“ニトロ”には、−ＮＯ_２が含まれるものとする。

用語“ヒドロキシ”には、−ＯＨが含まれるものとする。

用語“アルコキシ”には、−Ｏ−アルキルが含まれ、その際、アルキルは前記に定めたものである。Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシは、１〜１０個の炭素原子をもつアルキルを含む。Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシの限定ではない例には、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロピルオキシ、イソ−プロピルオキシ、および２−メチル−１−プロピルオキシが含まれる。

用語“アリールオキシ”には、−Ｏ−アリールが含まれ、その際、アリールは前記に定めたものである。

用語“アルコキシカルボニル”には、−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｒが含まれ、その際、Ｒは前記に定めたアルキルである。Ｃ_１−Ｃ_１０アルコキシカルボニルの限定ではない例には、
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソ−プロポオキシ−カルボニル、およびイソペントキシカルボニルが含まれる。

用語“カルボキシ”には、−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨが含まれる。

用語“オキソ”には、＝Ｏが含まれる。

用語“スルホンアミド”には、アミン基に結合したスルホニル基、すなわち−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨ_２、−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＨＲ_ａ、および−Ｓ（＝Ｏ）_２ＮＲ_ａＲ_ｂが含まれ、その際、Ｒ_ａおよびＲ_ｂはそれぞれ独立して有機基を表わす。本明細書中で置換スルホンアミド基と述べる場合、それはそれらの有機基（Ｒ_ａおよびＲ_ｂ）のうち少なくとも１つが置換されていることを意味する。

たとえば医薬組成物における用語“組成物”は、活性成分（単数または複数）およびキャリヤーを構成する不活性成分（単数または複数）を含む製品、ならびに直接または間接的に、いずれか２種類以上の成分の組合わせ、複合体形成もしくは凝集から得られる、または１種類以上の成分の解離から得られる、または１種類以上の成分の他のタイプの反応もしくは相互作用から得られる、いずれかの製品を包含するものとする。したがって、本発明に用いる医薬組成物は、活性成分と１種類以上の医薬的に許容できるキャリヤーを混和することにより調製した、いずれかの組成物を包含する。

メラノコルチン受容体“アゴニスト”とは、メラノコルチン受容体と相互作用して、メラノコルチン受容体の特徴であるアデニルシクラーゼ活性化を含めた（これに限定されない）薬理学的応答を開始することができる、内在性物質、薬物または化合物を意味し、これには本発明のペプチドのような化合物が含まれる。

“α−ＭＳＨ”とは、ペプチドAc-Ser-Tyr-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH₂(SEQ ID NO:4)ならびにその類似体および同族体を意味し、これには限定ではないがＮＤＰ−α−ＭＳＨが含まれる。

“ＮＤＰ−α−ＭＳＨ”とは、ペプチドAc-Ser-Tyr-Ser-Nle-Glu-His-D-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH₂(SEQ ID NO:5)ならびにその類似体および同族体を意味する。

“ＥＣ_５０”とは、そのアゴニストについて可能な最大応答の５０％を発生したアゴニスト（部分アゴニストを含む）のモル濃度を意味する。たとえば、ＭＣ４−Ｒ細胞発現系におけるｃＡＭＰアッセイにおいて測定してその化合物について可能な最大応答の５０％を７２ｎＭの濃度で発生する被験化合物は、７２ｎＭのＥＣ_５０をもつ。別途特定しない限り、ＥＣ_５０測定に関連するモル濃度はリットル当たりのナノモル数（ｎＭ）である。

“Ｋｉ（ｎＭ）”とは、平衡状態で放射性リガンドまたは他の競合物質の不存在下において受容体の結合部位の半分に結合する競合性化合物のモル濃度を表わす、平衡状態での阻害物質解離定数を意味する。一般に、Ｋｉの数値は受容体に対するその化合物の親和性に逆相関し、したがってＫｉが低ければ親和性は高い。ＫｉはChengおよびPrusoffの方程式を用いて決定できる(Cheng Y., Prusoff W. H., Biochem. Pharmacol. 22: 3099-3108,
1973):
Ｋｉは、特異的受容体（たとえば、ＭＣ１−Ｒ、ＭＣ３−Ｒ、ＭＣ４−ＲまたはＭＣ５−Ｒ）と特異的リガンド（たとえば、α−ＭＳＨまたはＮＤＰ−α−ＭＳＨ）に関して表わすことができる。

“阻害率”とは、競合阻害アッセイにおいて既知の標準物質と比較した受容体結合の減
弱または低下のパーセントを意味する。したがって、“１μＭ（ＮＤＰ−α−ＭＳＨ）における阻害率”は、たとえば後記のアッセイ条件下での、一定量の被験化合物、たとえば１μＭの被験化合物の添加による、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合の低下率を意味する。たとえば、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合を阻害しない化合物は０％の阻害率をもち、ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合を完全に阻害する化合物は１００％の阻害率をもつ。一般に後記のように、競合阻害試験には、たとえばＩ^１２５標識ＮＤＰ−α−ＭＳＨによる放射アッセイ、またはたとえばＥｕ−ＮＤＰ−α−ＭＳＨによるランタニドキレート蛍光アッセイを用いる。しかし、放射性同位体以外の標識系またはタグ系の使用を含めて、競合阻害を試験するための他の方法が知られており、一般に、競合阻害を試験するための当技術分野で知られているいずれの方法も本発明に使用できる。したがって、“阻害”は被験化合物がメラノコルチン受容体へのα−ＭＳＨの結合を減弱させるかどうかを判定するためのひとつの手段であることが分かるであろう。

“結合親和性”とは、化合物または薬物がそれの生物学的ターゲットに結合する能力を意味し、本明細書中ではＫｉ（ｎＭ）として表わす。

“固有活性（intrinsic activity）”は、特定のメラノコルチン受容体発現細胞系において化合物により達成される最大刺激（機能活性）、たとえばアデニリルシクラーゼの最大刺激を意味する。α−ＭＳＨまたはＮＤＰ−α−ＭＳＨにより達成される最大刺激を固有活性１．０（または１００％）と表示し、α−ＭＳＨまたはＮＤＰ−α−ＭＳＨの最大活性の半分を刺激しうる化合物は０．５（または５０％）の固有活性をもつと表示される。本明細書に記載するアッセイ条件下で０．７（７０％）以上の固有活性をもつ本発明化合物はアゴニストと分類され、０．１（１０％）と０．７（７０％）の間の固有活性をもつ化合物は部分アゴニストと分類され、０．１（１０％）未満の固有活性をもつ化合物は不活性または固有活性をもたないと分類される。１観点において、本発明の環状ペプチドは、一般にα−ＭＳＨまたはＮＤＰ−α−ＭＳＨに関してＭＣ４−Ｒにおける部分アゴニストとして特徴づけることができる。

一般に“機能活性”は、化合物によって活性化された際の受容体、たとえばメラノコルチン受容体、特にＭＣ４−ＲまたはｈＭＣ４−Ｒのシグナル伝達の尺度、または受容体関連シグナル伝達の変化の尺度である。メラノコルチン受容体は、ヘテロ三量体Ｇタンパク質の活性化によりシグナル伝達を開始する。１観点において、メラノコルチン受容体は、アデニリルシクラーゼによるｃＡＭＰの産生を触媒するＧα_Ｓを介してシグナルを伝達する。したがって、アデニリルシクラーゼの刺激の測定、たとえばアデニリルシクラーゼの最大刺激の測定は、機能活性の尺度のひとつであり、本明細書に例示する主な尺度である。しかし、本発明の実施に際して機能活性の別の尺度を採用でき、それらは本発明の範囲において明確に考慮および包含されることを理解すべきである。たとえば、一例では細胞内遊離カルシウムを測定することができる；たとえば、Mountjoy K.G. et al., Melanocortin receptor-medicated mobilization of intracellular free calcium in HEK293 cells. Physiol Genomics 5: 11-19, 2001、またはKassack M.U. et al., Functional screening of G protein-coupled receptors by measuring intracellular calcium with a fluorescence microplate reader. Biomol Screening 7: 233-246, 2002に報告されたように、それらに示された方法を使用。ホスファトジルイノシトール４，５−二リン酸からのイノシトール三リン酸またはジアシルグリセロールの産生をたとえば放射アッセイの使用により測定することによって、活性化を測定することもできる。機能活性のさらに他の尺度は、調節経路の活性化から生じる受容体インターナリゼーションである；たとえば、Nickolls S.A. et al., Functional selectivity of melanocortin 4 receptor peptide and nonpeptide agonists: evidence for ligand specific conformational states. J Pharm Exper Therapeutics 313: 1281-1288, 2005に示された方法を使用。機能活性のさらに他の尺度は、Ｇタンパク質受容体に関連するヌクレオチドの交換および交換率、たとえば
Ｇタンパク質αサブユニット上のＧＤＰ（グアノシン二リン酸）からＧＴＰ（グアノシン三リン酸）への交換であり、これは多数の手段のいずれかにより測定でき、これにはグアノシン５’−（γ−［^３５Ｓ］チオ）−三リン酸を用いる放射アッセイが含まれる；Manning D.R., Measures of efficacy using G proteins as endpoints: differential engagement of G proteins through single receptors. Mol Pharmacol 62: 451-452, 2002に示されるもの。Ｇ−共役型タンパク質の活性化を測定するために多様な遺伝子ベースのアッセイ法が開発された；たとえば、Chen W. et al., A colorimetric assay from measuring activation of Gs- and Gq-coupled signaling pathways. Anal Biochem 226: 349-354, 1995; Kent T.C. et al., Development of a generic dual-reporter gene assay for screening G-protein-coupled receptors. Biomol Screening, 5: 437-446, 2005;またはKotarsky K. et al., Improved receptor gene assays used to identify ligands acting on orphan seven-transmembrane receptors. Pharmacology & Toxicology 93: 249-258, 2003に示されるもの。Chenらの比色アッセイ法は、メラノコルチン受容体活性化を測定する際に使用するために、Hruby V.J. et al., Cyclic lactam α-melanocortin analogues of Ac-Nle⁴-cyclo[Asp⁵,D-Phe⁷,Lys^10]α-melanocyte-stimulating hormone-(4-10)-NH₂ with bulky aromatic amino acids at position 7 shows high antagonist potency and selectivity at specific melanocortin receptors. J Med Chem 38: 3454-3461, 1995に示されるように応用された。一般に機能活性は、Ｇ−共役型受容体の活性化および／またはシグナル伝達を測定する方法を含めた、さらに今後開発または報告される可能性のある方法を含めた、いずれかの方法により測定できる。本明細書中で用いる用語“処置する（treat）”、“処置すること（treating）”および“処置（treatment）”は、患者が特定の疾患、障害および／または状態に罹患している間に起きる作用であって、その疾患、障害および／または状態の重症度を低下させる作用を表わす。さらに、用語“処置する”、“処置すること”および“処置”は、指示した疾患、障害および／または状態の治療（治癒）処置、予防（阻止）処置、抑制処置および対症処置を含むものとする。

本明細書中で用いる用語“薬理学的に有効な量”（“療法有効量”を含む）は、希望する療法効果または生物学的効果を誘導するのに十分である本発明ペプチドの量を意味する。

本明細書中で用いる用語“療法有効量”は、医師または他の臨床医により処置される哺乳動物において生物学的応答または医学的応答を誘発するであろう本発明ペプチドの量を意味する。

本明細書中で用いる用語“予防に有効な”または“予防的”は、患者が特定の疾患または障害を患う前に、医師または他の臨床医が予防、阻害または緩和を試みている病的状態に哺乳動物が罹病するのを阻止もしくは阻害し、または罹病を緩和する、本発明ペプチドの量を意味する。

用語“糖尿病”には下記のものが含まれる：１型糖尿病、すなわちインスリン依存性糖尿病：Report of the Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitus (Diabetes Care, Vol. 24, Supp. 1, January 2001)に公表された基準に従って診断されたものであり、これによれば空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄｌ以上で、その主因は膵ベータ細胞の破壊である；２型糖尿病、すなわちインスリン非依存性糖尿病：Report of the Expert Committee on the Diagnosis and Classification of Diabetes Mellitusに公表された基準に従って診断されたものであり、これによれば空腹時血糖値が１２６ｍｇ／ｄｌ以上である；および成人潜在性自己免疫性糖尿病（latent autoimmune diabetes mellitus of adults）（ＬＡＤＡ）。

用語“メタボリックシンドローム”は、代謝障害、特にグルコースおよび脂質の調節障
害を表わし、これにはインスリン抵抗性、および膵ベータ細胞によるインスリン分泌の障害が含まれ、さらに腹部脂胖症、異脂肪血症、高血圧症、グルコース不耐症または血栓形成性状態などの症状および状態を含む場合があり、これらがさらに高脂血症、肥満症、糖尿病、インスリン抵抗性、グルコース不耐症、高血糖症、および高血圧症などの障害を生じる可能性がある。

２．０臨床適応症および有用性
本明細書に開示する組成物および方法は、医学的用途および酪農または獣医学的用途の両方に使用できる。一般に、これらの方法はヒトに用いられるが、他の哺乳動物にも使用できる。用語“患者”は、哺乳動物個体を表わすものとし、本明細書全体および特許請求の範囲においてそのように用いられる。本発明の主な用途はヒト患者に関するものであるが、本発明は実験室、農場、動物園、野生動物、ペット、スポーツその他の動物にも適用できる。臨床適応症および具体的な有用性には下記のものが含まれる。

２．１肥満症および関連のメタボリックシンドローム
式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは、ＭＣ４受容体のリガンドであることが見出された。特に、式（Ｉ）のペプチドは、ＭＣ４−Ｒ機能の調節、より詳細にはＭＣ４−Ｒの活性化に応答する疾患、障害および／または状態、すなわちＭＣＲ−４におけるアゴニズム（完全または部分アゴニズムを含む）が有益となるであろう疾患、障害および／または状態の処置に有用であると考えられ、これにはエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば、糖尿病、特に２型糖尿病；異脂肪血症；脂肪肝；高コレステロール血症；高トリグリセリド血症；高尿酸血症；グルコース耐性障害；空腹時血糖障害；インスリン抵抗性症候群；およびメタボリックシンドローム）、摂食関連（たとえば、過食症；暴食；大食症；および強迫性摂食）、ならびに／あるいはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態、より詳細には過体重および／または過剰摂食を特徴とする疾患、障害および／または状態が含まれる。

式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは特に、過体重を特徴とする体重関連の疾患、障害および／または状態の処置のために有用であると考えられ、これには下記のものが含まれる：肥満症および過体重（減量の促進、減量の維持、および／または投薬誘発性の体重増加もしくは禁煙後の体重増加を含めた体重増加の阻止による）ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえばインスリン抵抗性；グルコース耐性障害；２型糖尿病；メタボリックシンドローム；異脂肪血症（高脂血症を含む）；高血圧症；心障害（たとえば、冠性心疾患、心筋梗塞）；心血管障害；非アルコール性脂肪肝疾患（非アルコール性脂肪肝炎を含む）；関節障害（続発性骨関節炎を含む）；胃食道逆流；睡眠無呼吸；アテローム性硬化症；発作；大血管および小血管疾患；脂肪症（たとえば肝臓における）；胆石；および胆嚢障害。

式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは特に、肥満症および２型糖尿病、より特別には肥満症の処置のために有用であると考えられる。

肥満症および過体重の医薬的に受け入れられている定義があることは理解されるであろう。患者はたとえば、体重（キログラム）を身長（メートル）の二乗で割ることにより計算される肥満指数（ＢＭＩ）を測定し、結果を定義と比較することにより同定される。ヒトのＢＭＩについて推奨される分類法であって、Expert Panel on the Identification, Evaluation and Treatment of Overweight and Obesity in Adultsが採用し、主要な保健専門機関が承認しているものは下記のとおりである：低体重＜１８．５ｋｇ／ｍ^２、正常体重１８．５〜２４．９ｋｇ／ｍ^２、過体重２５〜２９．９ｋｇ／ｍ^２、肥満症（クラス１）３０〜３４．９ｋｇ／ｍ^２、肥満症（クラス２）３５〜３９．９ｋｇ／ｍ^２、超肥満症（クラス３）≧４０ｋｇ／ｍ^２(Practical Guide to the Identification, Evaluation
, and Treatment of Overweight and Obesity in Adults, The North American Association for the Study of Obesity (NAASO) and the National Heart, Lung and Blood Institute (NHLBI) 2000)。特殊な人種および小児にはこの分類法を改変したものを採用できる。過体重および肥満症を評価するための他の別法は、胴囲を測定することによるものである。人種に基づくカットオフには、提唱された幾つかの分類法および識別法がある。たとえば、International Diabetes Federationからの分類法によれば、９４ｃｍを超える胴囲をもつ男性（欧州人についてのカットオフ）および８０ｃｍを超える胴囲をもつ女性（欧州人についてのカットオフ）は、腹部脂肪過剰のため糖尿病、高血圧症、異脂肪血症および心血管疾患のリスクがより高い。他の分類法はAdult Treatment Panel IIIからの推奨に基づくものであり、その場合は推奨カットオフは男性について１０２ｃｍ、女性について８８ｃｍである。しかし、式（Ｉ）のペプチドは、自己診断による過体重を低減させるために、またライフスタイル、遺伝的理由、遺伝および／または他の要因が原因で肥満症になるリスクを低下させるためにも使用できる。

式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは、ヒトを含む動物に投与すると、その動物において食物摂取量、体重および／または体重増加を低減させるであろうと考えられる。

何らかの理論により拘束されるわけではないが、式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは、食欲および／または満腹感を調節し、代謝速度を増大させ、脂肪および／または炭水化物の摂取および／またはそれらに対する欲求を低下させることにより作用すると考えられる。

何らかの理論により拘束されるわけではないが、式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは、グルコース耐性を増強し、および／またはインスリン抵抗性を低下させることにより作用すると考えられる。したがって、式（Ｉ）のペプチドは、過体重および肥満症の個体と同様に、低体重および正常体重の個体においても２型糖尿病の処置に使用できる。

本発明のペプチドは、（ｉ）血管閉塞（たとえば血栓症による）による低潅流、出血、外傷、外科処置、出血性ショック、心原性ショック、毒素ショックもしくは敗血症性ショックにより起きる、臓器もしくは組織の損傷の阻止、または（ｉｉｉ）雄性および雌性性的機能障害、たとえば雄性勃起機能障害もしくは雌性性的刺激機能障害の処置にも使用できる。

本発明のさらに他の観点によれば、医薬として使用するための、前記に定めた式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドが提供される。

他の観点において、本発明は、ＭＣ４−Ｒの調節に応答する障害、疾患および／または状態、たとえばＭＣ４−Ｒの活性化に応答する障害、疾患および／または状態、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを処置するための、式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドの使用を提供する。

さらに他の観点において、本発明は、ＭＣ４−Ｒの調節、たとえばＭＣ４−Ｒの活性化に応答する障害、疾患および／または状態、特にエネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に
関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを処置するための医薬の製造における、式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドの使用を提供する。

本発明のペプチドは、有利には、ＭＣ１−Ｒ、ＭＣ２−ＲおよびＭＣ５−Ｒ、特にＭＣ１−Ｒに対するより、ＭＣ４−Ｒおよび／またはＭＣ３−Ｒに対して、より選択的（すなわち、より高い親和性および／またはより高い特異性）である。特に、本発明のペプチドは、有利には、ＭＣ３−ＲおよびＭＣ１−Ｒに対するよりＭＣ４−Ｒに対して、より選択的である。本発明のペプチドは、適切には、ＭＣ１−Ｒ、ＭＣ２−Ｒ、ＭＣ３−ＲおよびＭＣ５−Ｒのいずれかに対するよりＭＣ４−Ｒに対して、少なくとも３倍、特に１０倍、より特別には３０倍、選択的である。本発明のあるペプチドは、７．１に記載する受容体結合アッセイで測定して、ＭＣ１−ＲよりＭＣ４−Ｒに対して、さらに１００倍以上、たとえば約１５０倍すら、選択的である。この選択性プロフィールは、これらのペプチドを投与した際に得られるインビボ安全性および副作用に影響を及ぼす可能性があることが注目される。

エネルギー恒常性および代謝関連、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態を処置する際には、ＭＣ４−Ｒの活性化から生じる可能性がある望ましくない副作用、たとえばペニス勃起を含む性的副作用および血圧作用を低減または排除することが望ましい。

本発明のペプチドは、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを、実質的な血圧上昇を含む実質的な有害心血管作用を引き起こすことなく処置するために有用であると考えられる。

本発明のペプチドは、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含むものを、ＭＣ４−Ｒの活性化から生じる実質的な望ましくない性的作用、たとえばペニス勃起を引き起こすことなく処置するために有用であると考えられる。

式（Ｉ）、および特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドは、満足すべき薬理学的プロフィールおよび有望な生物医薬特性、たとえば毒性プロフィール、代謝および薬物動態特性、溶解性および透過性をもつと考えられる。適切な生物医薬特性が当業者の知識内のものであることは理解されるであろう。

３．０特定の適応症のための併用療法
本発明のペプチド、組成物および方法は、１種類以上の他の医薬活性化合物と組み合わせて投与することにより、以上のいずれかの疾患、適応症、状態もしくは症候群、またはメラノコルチン受容体が仲介するいずれかの疾患、適応症、状態もしくは症候群を処置するために使用できる。そのような組合わせ投与は、本発明のペプチドおよび１種類以上の他の医薬活性化合物の両方を含有する単一剤形により行なうことができ、そのような単一剤形には錠剤、カプセル剤、スプレー剤、吸入用粉末剤、注射用液剤などが含まれる。あるいは、組合わせ投与は、一方の剤形が本発明のペプチドを含有し、他方の剤形が他の医薬活性化合物を含有する、２つの異なる剤形の投与により行なうことができる。この場合、これらの剤形は同一でも異なってもよい。併用療法を限定する意味ではなく、以下は使
用できる特定の併用療法を例示する。

３．１肥満症および関連のメタボリックシンドロームのための併用療法
１種類以上の本発明のペプチドを、体重および摂食関連の種々の障害、たとえば肥満症および／または過体重の処置に有用な１種類以上の他の薬理活性薬剤、特にエネルギー支出、解糖、糖新生（gluconeogenesis）、糖原分解（glucogenolysis）、脂肪分解、脂肪新生、脂肪吸収、脂肪蓄積、脂肪排出、飢餓および／または満腹感および／または欲求の機序、食欲／動機付け、摂食、または胃腸の運動性に作用する他の肥満症薬と組み合わせることができる。エネルギー摂取量を低下させる薬物には、一部は、減量プログラムの行動療法に対する補助剤として用いられる、食欲抑制剤と呼ばれる種々の薬理作用剤が含まれる。

一般に、後記の肥満症抑制剤または抑制薬の全投与量は、１種類以上の本発明のペプチドと併用する場合、０．１から３，０００ｍｇ／日まで、好ましくは約１から１，０００ｍｇ／日まで、より好ましくは約１から２００ｍｇ／日までの範囲の、１回量または２〜４回の分割量であってもよい。ただし、厳密な用量は担当医が決定し、投与する化合物の力価、患者の年齢、体重、状態および応答などの要因に依存する。

１種類以上の本発明のペプチドを、糖尿病の処置に有用な１種類以上の他の薬理活性薬剤、たとえば他の抗糖尿病薬と組み合わせることができる。

１種類以上の本発明のペプチドは、そのほか、またはさらに、肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえばインスリン抵抗性；グルコース耐性障害；２型糖尿病；メタボリックシンドローム；異脂肪血症（高脂血症を含む）；高血圧症；心障害（たとえば、冠性心疾患、心筋梗塞）；心血管障害；非アルコール性脂肪肝疾患（非アルコール性脂肪肝炎を含む）；関節障害（続発性骨関節炎を含む）；胃食道逆流；睡眠無呼吸；アテローム性硬化症；発作；大血管および小血管疾患；脂肪症（たとえば肝臓における）；胆石；および胆嚢障害の処置に有用な１種類以上の他の薬理活性薬剤、たとえば他の抗糖尿病薬と組み合わせることができる。

本発明のさらに他の観点によれば、薬理学的有効量の本発明によるペプチドまたはその医薬的に許容できる塩を、場合により医薬的に許容できる希釈剤またはキャリヤーと一緒に、下記から選択される１種類以上の薬剤と同時、逐次または個別に投与することを含む、併用処置が提供される：
−インスリンおよびインスリン類似体；
−インスリン分泌促進薬：下記を含む：スルホニル尿素（たとえばグリピジド（glipizide））および食事グルコース調節薬（時には“短時間作用性分泌促進薬”と呼ばれる；たとえばメグルチニド類（たとえばレパグリニド（repaglinide）およびナテグリニド（nateglinide））；
−インクレチン作用を改善する薬剤、たとえばジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−４）阻害薬（たとえば、ビルダグリプチン（vildagliptin）、サキサグリプチン（saxagliptin）およびシタグリプチン（sitagliptin））、およびグルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）アゴニスト（たとえばエキセナチド（exenatide））；
−インスリン増感薬：下記を含む：ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト、たとえばチアゾリジンジオン類（たとえばピオグリタゾン（pioglitazone）およびロシグリタゾン（rosiglitazone））、ならびにＰＰＡＲアルファ、ガンマおよびデルタいずれかの活性の組合わせをもつ薬剤；
−肝グルコースバランスを調節する薬剤、たとえばビグアニド類（たとえばメトホルミン（metformin））、フルクトース１，６−ビスホスファターゼ阻害薬、グリコーゲンホスホリラーゼ阻害薬、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害薬、およびグルコキナーゼ活
性化薬；
−腸からのグルコース吸収を減少／遅延させるために設計された薬剤、たとえばアルファ−グルコシダーゼ阻害薬（たとえばミグリトール（miglitol）およびアカルボース（acarbose））；
−グルカゴンの作用に拮抗し、またはその分泌を減少させる薬剤、たとえばアミリン類似体（たとえばプラムリンチド（pramlintide））；
−腎臓によるグルコース再吸収を阻害する薬剤、たとえばナトリウム依存性グルコース輸送因子２（ＳＧＬＴ−２）阻害薬（たとえばダパグリフロジン（dapagliflozin））；
−持続性高血糖症の合併症を処置するために設計された薬剤、たとえばアルドースレダクターゼ阻害薬（たとえばエパルレスタット（epalrestat）およびラニレスタット（ranirestat））；ならびに微小血管障害に関連する合併症を処置するために用いられる薬剤；
−抗異脂肪血症薬、たとえばＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬（スタチン類、たとえばロスバスタチン（rosuvastatin））および他のコレステロール低下薬；ＰＰＡＲαアゴニスト（フィブレート類、たとえばゲムフィブロジル（gemfibrozil）およびフェノフィブレート（fenofibrate））；胆汁酸封鎖薬（たとえばコレスチラミン（cholestyramine））；コレステロール吸収阻害薬（たとえば植物ステロール（すなわちフィトステロール類）、合成阻害薬）；コレステリルエステル伝達タンパク質（cholesteryl ester transfer protein）（ＣＥＴＰ）阻害薬；回腸胆汁酸輸送系（ileal bile acid transport system）の阻害薬（ＩＢＡＴ阻害薬）；胆汁酸結合樹脂；ニコチン酸（ナイアシン）およびその類似体；抗酸化薬、たとえばプロブコール（probucol）；ならびにオメガ−３脂肪酸；
−抗高血圧症薬：下記を含む：アドレナリン受容体アンタゴニスト、たとえばベータ遮断薬（たとえばアテノロール（atenolol））、アルファ遮断薬（たとえばドキサゾシン（doxazosin））、および混合アルファ／ベータ遮断薬（たとえばラベタロール（labetalol））；アドレナリン受容体アゴニスト：アルファ−２アゴニスト（たとえばクロニジン（clonidine））を含む；アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬（たとえばリシノプリル（lisinopril））、カルシウムチャンネル遮断薬、たとえばジヒドロピリジン類（たとえばニフェジピン（nifedipine））、フェニルアルキルアミン類（たとえばベラパミル（verapamil））、およびベンゾチアゼピン類（たとえばジルチアゼム（diltiazem））；アンギオテンシンＩＩ受容体アンタゴニスト（たとえばカンデサルタン（candesartan））；アルドステロン受容体アンタゴニスト（たとえばエプレレノン（eplerenone））；中枢作用性アドレナリン作動薬、たとえば中枢性アルファアゴニスト（たとえばクロニジン（clonidine））；ならびに利尿薬（たとえばフロセミド（furosemide））；
−止血調節薬：下記を含む：抗血栓薬、たとえばフィブリン溶解の活性化薬；トロンビンアンタゴニスト；ＶＩＩａ因子阻害薬；抗凝固薬、たとえばビタミンＫアンタゴニスト（たとえばワルファリン（warfarin））、ヘパリンおよびその低分子量類似体、Ｘａ因子阻害薬、および直接的トロンビン阻害薬（たとえばアルガトロバン（argatroban））；抗血小板薬、たとえばシクロオキシゲナーゼ阻害薬（たとえばアスピリン）、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体阻害薬（たとえばクロピドグレル（clopidogrel））、ホスホジエステラーゼ阻害薬（たとえばシロスタゾール（cilostazol））、糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＡ阻害薬（たとえばチロフィバン（tirofiban））、ならびにアデノシン再取込み阻害薬（たとえばジピリダモール（dipyridamole））；
−抗肥満症薬、たとえば食欲抑制薬（たとえばエフェドリン）：下記を含む：ノルアドレナリン作動薬（たとえばフェンテルミン（phentermine））およびセロトニン作動薬（たとえばシブトラミン（sibutramine））、膵リパーゼ阻害薬（たとえばオルリスタット（orlistat））、ミクロソーム伝達タンパク質（ＭＴＰ）調節薬、ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ（ＤＧＡＴ）阻害薬、ならびにカンナビノイド（ＣＢ１）受容体アンタゴニスト（たとえばリモナバント（rimonabant））；
−摂食行動調節薬、たとえばオレキシン受容体調節薬およびメラミン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）調節薬；
−グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）受容体調節薬；
−神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）／ＮＰＹ受容体調節薬；
−ピルビン酸デヒドロゲナーゼキナーゼ（ＰＤＫ）調節薬；
−セロトニン受容体調節薬；
−レプチン／レプチン受容体調節薬；
−グレリン／グレリン受容体調節薬；または
−モノアミン透過調節薬、たとえば選択的セロトニン再取込み阻害薬（ＳＳＲＩ）（たとえばフルオキセチン（fluoxetine））、ノルアドレナリン再取込み阻害薬（ＮＡＲＩ）、ノルアドレナリン−セロトニン再取込み阻害薬（ＳＮＲＩ）、トリプルモノアミン再取込み遮断薬（たとえばテソフェンシン（tesofensine））、およびモノアミンオキシダーゼ阻害薬（ＭＡＯＩ）（たとえばトロキサトン（toloxatone）およびアミフラミン（amiflamine））；
あるいはその医薬的に許容できる塩、溶媒和物、塩の溶媒和物、またはプロドラッグを、場合により医薬的に許容できるキャリヤーと一緒に、そのような療法処置を必要とする哺乳動物、たとえばヒトに投与する。

本発明のさらに他の観点によれば、薬理学的有効量の本発明によるペプチドまたはその医薬的に許容できる塩を、場合により医薬的に許容できる希釈剤またはキャリヤーと一緒に、超低カロリー食（very low calorie diet）（ＶＬＣＤ）または低カロリー食（ＬＣＤ）と同時、逐次または個別に投与することを含む、併用処置が提供される。

４．０製造方法
一般に、本発明のペプチドは当技術分野で既知の方法に従って固相合成により合成し、そして精製することができる。多様な樹脂および試薬を使用する周知の多数の方法のいずれかを用いて、本発明のペプチドを製造できる。

本発明の環状ペプチドは、アミノ酸間のペプチド結合を形成するための既知の一般的な方法によって容易に合成できる。そのような一般的方法には、たとえば、それのカルボキシル基その他の反応性基が保護されたアミノ酸またはその残基の遊離アルファアミノ基とそれのアミノ基その他の反応性基が保護された他のアミノ酸またはその残基の遊離第一級カルボキシルとを縮合させることができる、いずれかの液相法が含まれる。好ましい一般的方法において、本発明の環状ペプチドは当技術分野で既知の方法に従って固相合成により合成し、そして精製することができる。多様な樹脂および試薬を使用する周知の多数の方法のいずれかを用いて、本発明のペプチドを製造できる。

環状ペプチドを合成するための方法は、目的とする配列中の各アミノ酸を一度に１つずつ他のアミノ酸またはその残基に連続的に付加する方法により、あるいは目的とするアミノ酸配列をもつペプチドのフラグメントをまず合成し、次いで縮合させて目的とするペプチドを得る方法により実施できる。得られたペプチドを次いで環化して、本発明の環状ペプチドを得ることができる。

固相ペプチド合成法は当技術分野で周知であり、実用化されている。そのような方法において、本発明のペプチドの合成は、固相法の一般原理に従って、生長しつつあるペプチド鎖中へ希望するアミノ酸残基を一度に１つずつ連続的に取り込ませることにより実施できる。これらの方法は下記を含めた多数の参考文献に示されている：Merrifield, R.B., Solid phase synthesis (Nobel lecture). Angew Chem 24: 799-810 (1985)、およびBarany et al., The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross, E. and Meienhofer, J., Eds. Academic Press 1-284 (1980)。

ペプチドの化学合成に際して、各種アミノ酸残基の反応性側鎖基を適切な保護基で保護し、これによりその保護基を除去するまでその部位で化学反応が起きるのを阻止する。同
様に一般的なものは、アミノ酸の残基またはフラグメントがカルボキシル基において反応している間はそれのアルファアミノ基を保護しておき、続いてアルファアミノ保護基を選択的に除去して、その部位で後続反応を行なわせるものである。具体的な保護基は、固相合成法および液相合成法において開示されており、既知である。

アルファアミノ基は、下記を含めた適切な保護基で保護することができる：ウレタンタイプ保護基、たとえばベンジルオキシカルボニル（Ｚ）および置換ベンジルオキシカルボニル、たとえばｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、ｐ−ビフェニル−イソプロポキシカルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）およびｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル（Ｍｏｚ）、ならびに脂肪族ウレタンタイプの保護基、たとえばｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、およびアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）。アルファアミノの保護にはＦｍｏｃが好ましい。

グアニジノ基は、適切な保護基、たとえばニトロ、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、Ｚ、ペンタメチルクロマンスルホニル（Ｐｍｃ）、アダマンチルオキシカルボニル、ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）およびＢｏｃにより保護することができる。ＰｂｆおよびＰｍｃはＡｒｇに好ましい保護基である。

本明細書に記載する本発明のペプチドは、固相合成法を用いて、たとえばSymphony Multiplex Peptide Synthesizer (Rainin Instrument Company/Protein Technologies Inc)自動ペプチド合成装置により、製造業者が提供するプログラミングモジュールを用いて製造業者のマニュアルに示されるプロトコルに従って製造された。

固相合成は、保護されたアルファアミノ酸を適切な樹脂にカップリングさせることにより、ペプチドのＣ末端から開始される。そのような出発物質は、アルファアミノ保護されたアミノ酸をアミド結合により４−（２’、４’−ジメトキシルフェニル−アミノメチル−フェノキシ（Rink Amide）樹脂、４−（２’、４’−ジメトキシルフェニル−アミノメチル）−フェノキシアセトアミド−ノルロイシル−ＭＢＨＡ樹脂、アミノ−キサンテン−３−イルオキシ−メリフィール樹脂(Sieber Amide)などの樹脂に、またはエステル結合によりｐ−ベンゾイルオキシベンジルアルコール（Wang）樹脂、２−クロロトリチルクロリド樹脂に付着させることによって、あるいは当技術分野で周知の他の手段で製造される。Ｆｍｏｃ−リンカー−ＢＨＡ樹脂支持体は市販されており、実用可能であれば一般に使用できる。樹脂は必要に応じてアミノ酸を連続的に付加する反復サイクル全体を通して維持される。アルファアミノＦｍｏｃ保護基は塩基性条件下で除去される。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のピペリジン、ピペラジン、ジエチルアミンまたはモルホリン（２０〜４０％ｖ／ｖ）をこの目的に使用できる。

アルファアミノ保護基を除去した後、後続の保護されたアミノ酸を希望する順序で段階的にカップリングさせて、中間体である保護されたペプチド−樹脂を得る。ペプチドの固相合成に際してアミノ酸をカップリングさせるために用いる活性化剤は当技術分野で周知である。ペプチドを合成した後、所望により、ペプチドをさらに誘導体化するために、オルトゴナル（orthogonal）保護された側鎖保護基を当技術分野で周知の方法により除去することができる。

一般に、オルトゴナル保護基は適宜使用される。たとえば本発明のペプチドは、アミノ基を含む側鎖をもつ多数のアミノ酸を含有する。１観点において、それらの側鎖によりラクタム橋を形成するアミノ酸についてはアリル−Ａｌｌｏｃ保護スキームを用い、アミノ基を含む側鎖をもつ他のアミノ酸については異なる反応条件下で開裂しうるオルトゴナル
保護基を用いる。したがって、たとえば環化に際してラクタム橋を形成する位置についてはＦｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨおよびＦｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）−ＯＨアミノ酸（Ｇｌｕ（ＯＡｌｌ）はグルタミン酸５−アリルエステルを表わす）を使用でき、一方、アミノ基を含む側鎖をもつ他のアミノ酸は、Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｐｂｆ）−ＯＨ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｂ（Ｐｂｆ）−ＯＨなどのように、異なるオルトゴナル保護基をもつ。他の保護基も使用できる：たとえば限定ではなく、環化に際してラクタム橋を形成する側鎖についてはＭｔｔ／ＯＰｐ（４−メチルトリチル／２−フェニルイソプロピル）を使用でき、Ｍｔｔ／ＯＰｐの開裂に適切な条件を用いて開裂されない他の位置についてはオルトゴナル保護基を用いる。

ペプチド中の反応性基を、固相合成の途中または樹脂から分離した後で選択的に修飾できる。たとえば、樹脂上にある間にペプチドを修飾してＮ末端修飾、たとえばアセチル化することができ、あるいは開裂試薬の使用により樹脂から分離し、次いで修飾することができる。アミノ酸の側鎖を修飾するための方法もペプチド合成の当業者に周知である。ペプチド上に存在する反応性基に対して行なう修飾の選択は、一部はそのペプチドに望まれる特性により決定されるであろう。

本発明のペプチドにおいて、１態様ではＮ−アセチル基の導入によりＮ末端基を修飾する。１観点において、Ｎ末端の保護基を除去した後、樹脂結合したペプチドをＤＭＦ中で有機塩基、たとえばピリジンの存在下に無水酢酸と反応させる方法を用いる。液相アセチル化を含めた他のＮ末端アセチル化法が当技術分野で既知であり、それらを使用できる。

１態様において、ペプチドをペプチド樹脂から開裂させる前に環化することができる。反応性側鎖部分による環化のために、希望する側鎖を脱保護し、そのペプチドを適切な溶媒に懸濁し、環状カップリング剤を添加する。適切な溶媒には、たとえばＤＭＦ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）または１−メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）が含まれる。適切な環状カップリング試薬には、たとえば下記のものが含まれる：２−（１Ｈ−ベンドトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、２−（１Ｈ−ベンドトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ）、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス（ピロリジノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、２−（７−アザ−１Ｈ−ベンドトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＡＴＵ）、２−（２−オキソ−１（２Ｈ）−ピリジル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＰＴＵ）またはＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＤＣＣＩ／ＨＯＢｔ）。カップリングは一般に適切な塩基、たとえばＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、ｓｙｍ−コリジンまたはＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）の使用により開始される。

いずれか適切な試薬、たとえばＤＣＭ中のエチルアミン、または種々の組合わせの作用剤、たとえばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、トリ−イソプロピルシラン（ＴＩＳ）、ジメトキシベンゼン（ＤＭＢ）、水などを用いて、環化ペプチドを次いで固相から開裂させることができる。得られた粗製ペプチドを乾燥させ、残留するアミノ酸側鎖保護基があればそれらをいずれか適切な試薬、たとえば水の存在下でのＴＦＡ、ＴＩＳ、２−メルカプトエタン（ＭＥ）、および／または１，２−エタンジチオール（ＥＤＴ）を用いて開裂させる。最終生成物を冷エーテルの添加により沈殿させ、濾過により採集する。最終精製は逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）により、適切なカラム、たとえばＣ_１８カラムを用いて行なわれ、あるいは分離または精製のための他の方法、たとえばペプチドのサイズまたは電荷に基づく方法も採用できる。精製されると、ペプチドを多数の方法
のいずれか、たとえば高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、アミノ酸分析、質量分析などにより特性解明することができる。

Ｃ末端置換されたアミド誘導体またはＮ−アルキル基をもつ本発明のペプチドについては、ペプチドのＣ末端から開始する固相合成により、保護されたアルファアミノ酸を適切な樹脂にカップリングさせることによって合成を進めることができる。固相合成において置換アミド誘導体を製造するためのそのような方法は当技術分野で記載されている。たとえば、Barn D.R. et al., Synthesis of an array of amides by aluminum chloride assisted cleavage on resin bound esters. Tetrahedron Letters, 37: 3213-3216 (1996);
DeGrado W.F. and Kaiser E.T., Solid-phase synthesis of protected peptides on a polymer bound oxime: Preparation of segments comprising the sequences of a cytotoxic 26-peptide analogue. J. Org. Chem., 47: 3258-3261 (1982)を参照。そのような出発物質は、アルファアミノ保護されたアミノ酸をエステル結合によりｐ−ベンゾイルオキシベンジルアルコール(Wang)樹脂に、またはアミド結合により４−（２’，４’−ジメトキシルフェニル−アミノメチル−フェノキシ(Rink Amide)樹脂に、周知の手段で付着させることによって製造できる。希望する配列のアミノ酸でペプチド鎖を生長させる。開裂前に、ペプチドを固相で環化させる。ｐ−ベンゾイルオキシベンジルアルコール(Wang)樹脂を用いたペプチドはＤＣＭ中の塩化アルミニウムにより樹脂から開裂でき、Rink Amide樹脂を用いたペプチドはＴＦＡ、ＴＩＳおよび水の混合物により開裂できる。

主に固相Ｆｍｏｃ化学に関して合成を記載したが、本発明の環状ペプチドを製造するために他の化学および合成法を採用できることを理解すべきである：たとえば例示であって限定ではないが、Ｂｏｃ化学、溶液化学、ならびに他の化学および合成法を用いる方法。

５．１本発明の環状ペプチドの塩形態
本明細書中で用いる本発明によるペプチドという表記はすべて、具体的な化学式または名称を含めて、そのすべての医薬的に許容できる塩類、溶媒和物、水和物、多型、プロドラッグ、代謝産物、立体異性体、および互変異性体を含むものであることを理解すべきである。

本発明の環状ペプチドは、医薬的に許容できるいずれかの塩の形態であってもよい。用語“医薬的に許容できる塩”は、無機塩基または有機塩基および無機酸または有機酸を含めた医薬的に許容できる無毒性の塩基または酸から調製される塩類を表わす(参照：“Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use”, P. H. Stahl, P. G. Wermuth, IUPAC, Wiley-VCH, 2002)。無機塩基から誘導される塩類には、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、銅塩、鉄（ＩＩＩ）塩、鉄（ＩＩ）塩、リチウム塩、マグネシウム塩、マンガン（ＩＩＩ）塩、マンガン（ＩＩ）塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩などが含まれる。特に好ましいものは、アンモニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、およびナトリウム塩である。医薬的に許容できる有機無毒性塩基から調製される塩類には、第一級、第二級および第三級アミン、天然置換アミンを含む置換アミン、環状アミン、および塩基性イオン交換樹脂、たとえばアルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ’−ジペンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチル−モルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン類、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどの塩が含まれる。本発明の環状ペプチドが塩基性である場合、無機酸および有機酸を含めた医薬的に許容できる無毒性酸から酸付加塩を調製できる。そのような酸には下記のものが含まれる：酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸
、カルボン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、ギ酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、マロン酸、ムチン酸、硝酸、パモ酸、パントテン酸、リン酸、プロピオン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリフルオロ酢酸など。本発明のペプチドの酸付加塩は、そのペプチドに適切な溶媒、および過剰の酸、たとえば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、コハク酸またはメタンスルホン酸中で調製できる。酢酸塩、酢酸アンモニウム塩およびトリフルオロ酢酸塩の形態が特に有用である。

本発明のペプチドが酸性部分を含む場合、適切な医薬的に許容できる塩類には、アルカリ金属塩、たとえばナトリウム塩もしくはカリウム塩、またはアルカリ土類金属塩、たとえばカルシウム塩もしくはマグネシウム塩を含めることができる。特定の式（Ｉ）のペプチドは、遊離ペプチドの溶媒和物または前記化合物の塩の溶媒和物を含めた溶媒和形態、および非溶媒和形態で存在する可能性があることも、理解すべきである。用語“溶媒和物”は、本明細書中で本発明の化合物および１以上の医薬的に許容できる溶媒分子、たとえばエタノールを含む、分子複合体を記載するために用いられる。用語“水和物”は、その溶媒が水である場合に用いられる。異なる多型の混合物を含めてすべての多型が特許請求の範囲のペプチドの範囲に含まれることを理解すべきである。

５．２医薬組成物
本発明は、１種類以上の本発明の環状ペプチドおよび医薬的に許容できるキャリヤーを含有する、医薬組成物を提供する。医薬的に許容できるキャリヤーと共に配合する場合、本発明の化合物は医薬組成物中に全組成物の０．１から９９．５重量％まで、たとえば０．５から９５重量％までの濃度で存在することができる。キャリヤーの選択は当業者の知識の範囲内にあり、たとえば投与様式、剤形、および活性化合物の物理的特性、たとえば溶解性および安定性に依存する。本明細書中で用いる用語“キャリヤー”は、療法不活性成分に関する。剤形は固体、半固体または液体系であってもよい。配合物は即時放出および／または改変放出であってよく、これには遅延放出、持続放出、パルス放出、制御放出、ターゲティッド放出およびプログラムド放出配合物が含まれる。

キャリヤーは液体配合物であってもよく、好ましくは緩衝化された等張水溶液である。医薬的に許容できるキャリヤーには、以下に記載する賦形剤、たとえば希釈剤、キャリヤーなど、および添加剤、たとえば安定剤、保存剤、可溶化剤、緩衝剤なども含まれる。

本発明の環状ペプチド組成物は、少なくとも１種類の本発明の環状ペプチドを、所望により賦形剤、たとえば希釈剤、キャリヤーなど、および添加剤、たとえば安定剤、保存剤、可溶化剤、緩衝剤などを含めた１種類以上の医薬的に許容できるキャリヤーと一緒に含有する医薬組成物中に、配合または混和することができる。配合物賦形剤には、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウムおよびクエン酸ナトリウムを含めることができる。注射その他の液体投与用配合物には、少なくとも１種類またはそれ以上の緩衝成分を含有する水が好ましく、安定剤、保存剤および可溶化剤も使用できる。固体投与用配合物には、多様な増粘剤、増量剤、充填剤およびキャリヤー添加剤のいずれか、たとえばデンプン、糖類、セルロース誘導体、脂肪酸などを使用できる。局所投与用配合物については、多様なクリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、ローション剤などのいずれかを使用できる。大部分の医薬配合物について、不活性成分が製剤のより大きな重量％または容量％を構成するであろう。医薬配合物について、多様な計量放出（measured-release）、徐放または持続放出型の配合物および添加剤のいずれかを使用できることも考慮され、したがって剤形は本発明のペプチドを一定時間にわたって送達するように配合することができる。

一般に、患者に投与する本発明の環状ペプチドの実際の量は、投与様式、使用する配合物、および希望する応答に応じてかなり広範に変動するであろう。

実際に使用する際、本発明の環状ペプチドを活性成分として、一般的な医薬配合技術に従って医薬的に許容できるキャリヤーとの混合物中に混和することができる。キャリヤーは、たとえば経口、非経口（静脈内を含む）、尿道、膣、鼻腔、口腔、舌下などの投与に望ましい剤形に応じて多様な形態をとることができる。経口剤形のための組成物を調製する際には、通常の医薬媒質のいずれかを使用できる：たとえば、経口液体製剤、たとえば懸濁液剤、エリキシル剤および液剤の場合には、水、グリコール類、油、アルコール類、着香剤、保存剤、着色剤など；または経口固体製剤、たとえば散剤、硬および軟カプセル剤、ならびに錠剤の場合には、キャリヤー、たとえばデンプン、糖類、微結晶性セルロース、希釈剤、造粒剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤など。

錠剤およびカプセル剤はそれらの投与が容易であるので有利な経口単位剤形である。所望により、錠剤を標準的な水性または非水性の方法でコートすることができる。そのような療法有用組成物中の活性ペプチドの量は、有効用量が得られる量である。他の単位剤形において、舌下構築体、たとえばシート、ウェハー、錠剤などを使用できる。

錠剤、丸剤、カプセル剤などは、結合剤、たとえばポビドン、トラガントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプンまたはゼラチン；希釈剤；増量剤、たとえば微結晶性セルロース；賦形剤、たとえばリン酸二カルシウム；崩壊剤、たとえばトウモロコシデンプン、バレイショデンプンまたはアルギン酸；保存剤；着色剤；滑沢剤、たとえばステアリン酸マグネシウム；および甘味剤、たとえばショ糖、乳糖またはサッカリンも含有することができる。単位剤形がカプセル剤である場合、それは前記タイプの材料のほかに、液体キャリヤー、たとえば脂肪油を含有することができる。他の多様な材料を、コーティングとして、または単位剤形の物理的形状を改変するために使用できる。たとえば、錠剤をセラック、糖または両者でコートすることができる。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性成分のほかに甘味剤としてのショ糖、保存剤としてのメチルおよびプロピルパラベン、色素および着香剤、たとえばチェリーまたはオレンジのフレーバーを含有することができる。

経口送達用に配合する場合、ペプチドが腸溶保護剤中に封入されるように、より好ましくは錠剤またはカプセル剤が胃を通過し、場合によりさらに小腸の部分を通過するまでペプチドが放出されないように、ペプチドを配合および作成することが好ましい。この適用に関して、腸溶コーティングまたは腸溶材料という用語は、本質的に無傷で胃を通過するけれども胃を通過した後に崩壊して活性薬物を放出するコーティングまたは材料を表わすことは理解されるであろう。使用できる材料には、酢酸フタル酸セルロース、コハク酸ヒドロキシプロピルメチル−エチルセルロース、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルアセテートフタレート、およびメタクリル酸−メタクリル酸メチルコポリマーが含まれる。使用する腸溶コーティングは主に胃以外の部位での剤形の溶解を促進し、腸溶コーティングが少なくとも約５．５のｐＨ、より好ましくは約６．０から約８．０までのｐＨで溶解するように選択できる。

腸溶コーティングが溶解した際の腸での取込みを増大させるために、多様な透過増強剤のいずれかを使用できる。１観点において、透過増強剤は傍細胞または経細胞輸送系のいずれかを高める。そのような透過増強剤の限定ではない代表的例には、カルシウムキレート化剤、胆汁酸塩（たとえばコール酸ナトリウム）および脂肪酸が含まれる。ある態様において、腸プロテアーゼの基質として作用するペプチドまたはポリペプチドをさらに添加する。環状ペプチドを非経口投与することもできる。たとえばこれらの活性ペプチドの液
剤または懸濁液剤は、たとえばヒドロキシプロピルセルロースと混合した水中に調製することができる。分散液剤は、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、および油中におけるその混合物中に調製することもできる。これらの製剤は、微生物の増殖を防ぐために、場合により保存剤を含有することができる。

注射用に適した医薬剤形には、無菌の水性液剤または分散液剤、および無菌の水性液剤または分散液剤を即時調製するための無菌散剤が含まれる。すべての場合、剤形は無菌でなければならず、かつ注射器で投与できる程度の流体でなければならない。剤形は製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、かつ細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して防腐されなければならない。キャリヤーは溶媒または分散媒質であってもよく、これにはたとえば水、エタノール、ポリオール、たとえばグリセロール、プロピレングリコールまたは液体ポリエチレングリコール、その適切な混合物、および植物油が含まれる。

本発明の環状ペプチドは、鼻腔投与により療法適用することができる。“鼻腔投与”は、いずれかの本発明の環状ペプチドのいずれかの鼻腔内投与剤形を意味する。これらのペプチドは、水溶液、たとえば塩類、クエン酸または他の一般的な賦形剤もしくは保存剤を含有する溶液中にあってもよい。これらのペプチドは、乾燥配合物または粉末配合物中にあってもよい。

水溶液状である場合、環状ペプチドは塩類、アセテート、ホスフェート、シトレート、アセテートまたは他の緩衝剤によって適宜緩衝化されてもよく、それらは生理的に許容できるいずれかのｐＨ、たとえば薬ｐＨ４から約ｐＨ７までであってよい。緩衝剤の組合わせ、たとえばリン酸緩衝化生理食塩水、生理食塩水および酢酸緩衝液なども使用できる。塩類溶液の場合、０．９％塩類溶液を使用できる。アセテート、ホスフェート、シトレートなどの場合、５０ｍＭ溶液を使用できる。緩衝剤のほかに、細菌および他の微生物の増殖を阻止または制限するために適切な保存剤を使用できる。使用できるそのような保存剤のひとつは、０．０５％塩化ベンザルコニウムである。

別態様において、本発明の環状ペプチドを肺に直接投与できる。肺内投与は、計量式インヘラー、すなわち患者が吸入中に作動させた際に計量されたボーラス量の本発明のペプチドを自己投与することができる器具により実施できる。乾燥粉末微粒子を調製するために多種多様な技術のいずれかを使用でき、これにはミクロミリング、噴霧乾燥、および急速凍結エアゾール化に続く凍結乾燥が含まれるが、これらに限定されない。

本発明の環状ペプチドは、持続放出配合物の注射により療法投与することができる。一般に、多数の注入可能な生体侵食性ポリマーのいずれかを注射用持続放出配合物中に使用できる。あるいは、皮下注射できる配合物を含めた他の持続放出配合物を使用でき、これら他の配合物は１種類以上のナノ／マイクロスフェア、リポソーム、エマルジョン（たとえば、油中水型エマルジョン）、ゲル、不溶性塩類、または油中の懸濁液を含有することができる。この配合物は、環状ペプチドの濃度および量、使用する材料の持続放出速度、および当業者に既知の他の要因に応じて、毎日１回、毎週１回、毎月１回、または他の周期基準での注射を必要とするものであってもよい。

５．３投与経路
１種類以上の本発明のペプチドを含有する組成物を注射により投与する場合、注射は静脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、または当技術分野で既知の他の手段であってもよい。

本発明のペプチドは、錠剤、カプセル剤、カプレット、懸濁液剤、散剤、凍結乾燥製剤、坐剤、点眼剤、皮膚パッチ、経口可溶性配合物、スプレー剤、エアゾール剤などの配合
物を含めた（これらに限定されない）当技術分野で既知のいずれかの手段で配合することができ、緩衝剤、結合剤、賦形剤、安定剤、抗酸化剤、および当技術分野で既知の他の作用剤と混合および配合することができる。一般に、本発明のペプチドが表皮層の細胞を通って導入されるいずれかの投与経路を使用できる。したがって投与手段には、粘膜を通した投与、口腔投与、経口投与、皮膚投与、吸入投与、鼻腔投与、尿道投与、膣投与などを含めることができる。

５．４療法有効量
一般に、患者に投与する本発明の環状ペプチドの実際の量は、投与様式、患者（体重、性別、健康状態および食事を含む）、使用する配合物、および希望する応答に応じてかなり広範囲で変動するであろう。処置のための用量は、以上のいずれかの手段、または当技術分野で既知の他のいずれかの手段により、希望する療法効果をもたらすのに十分な量で投与される。本発明の環状ペプチドは有効性が高い。たとえば、環状ペプチドは、選択する個々のペプチド、希望する療法応答、投与経路、配合物、および当業者に既知の他の要因に応じて、約０．１、０．５、１、５、５０、１００、５００、１０００または５０００μｇ／ｋｇ体重で投与できる（１回量として、または分割した１日量で）。

６．０本発明のペプチド
１観点において、本発明は式（Ｉ）の環状ペプチド：

に関するものであり、そのすべての鏡像異性体、立体異性体もしくはジアステレオ異性体、または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩を含む；
式中：
Ｒ_１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

他の観点において、本発明は、式（ＩＩ）のものである式（Ｉ）の環状ペプチド：

またはその医薬的に許容できる塩に関する。

他の観点において、本発明は、式（ＩＩＩ）のものである式（Ｉ）の環状ペプチド：

またはその医薬的に許容できる塩に関する。

１観点において、本発明は、環状部分内のHis-Phe-Arg-Trpから誘導されたコア配列を含み、最初の位置のアミノ酸がＡｒｇであって環状部分の外側にある、環状ヘプタペプチドを提供する。何らかの理論により拘束されるわけではないが、このＡｒｇ残基はＭＣ１−Ｒにおける活性が低いことに大きく寄与すると考えられる。

さらに、式Ｉのペプチドのコア配列は置換Ｄ−Ｐｈｅを含む。何らかの理論により拘束されるわけではないが、本発明によるペプチド内に置換Ｄ−Ｐｈｅを用いることにより、実質的に力価を維持した状態で固有活性を低下させることができると考えられる。表１中で参考例１と呼ばれるペプチド（非置換Ｄ−Ｐｈｅを含む）を実施例１〜５、９〜１１、１７、２６および２７のうち１以上と比較することができる。表１は平均値を含むことを指摘できる。

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち１以上はそれぞれ独立して水素、ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ジハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−トリハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルコキシ、フェニル、ニトロ、ニトリル、アミノまたはヒドロキシから選択され、ただし、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは水素ではないペプチドが提供される。

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち１以上はそれぞれ独立して

から選択されるペプチドが提供される。

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち１以上はそれぞれ独立して水素、ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ジハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−トリハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルコキシ、ニトロ、ニトリル、アミノまたはヒドロキシから選択され、ただし、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは水素ではないペプチドが提供される。

から選択されるペプチドが提供される。

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａは下記のものから選択され：

Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨであるペプチドが提供される。

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａは−Ｃ≡Ｎまたは−Ｆから選択され、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨであるペプチドが提供される。

本発明の特定の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａは４位にあって−Ｃ≡Ｎであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨであるペプチドが提供される。

本発明の特定の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドであって、Ｒ_４ａは４位にあって−Ｆであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨであるペプチドが提供される。

式（Ｉ）に包含されるペプチドは、１個以上の非対象要素、たとえばステレオジェン（stereogenic）中心、ステレオジェン軸などを含み、したがって式（Ｉ）に包含されるペプチドは種々の立体異性体形態で存在する可能性がある。式（Ｉ）に包含されるペプチドを含めて個別および一般的に記載したペプチドの両方について、鏡像異性体およびジアステレオマーを含めてすべてのキラル中心その他の異性体中心におけるすべての形態の異性体が本発明に包含されるものとする。本発明のペプチドはそれぞれ多数のキラル中心を含み、鏡像異性体純粋な調製物での本発明のペプチドの使用のほかに、ラセミ混合物または鏡像異性体富化混合物として使用できる。一般に、本発明のペプチドはキラル純粋試薬、たとえば特定したＬ−またはＤ−アミノ酸の使用により、鏡像異性体純度が維持される試薬、条件および方法を用いて合成されるであろうが、ラセミ混合物が製造される場合も可能であり、かつ考慮される。そのようなラセミ混合物は場合により周知の方法を用いて分離でき、個々の鏡像異性体を単独で使用できる。ペプチドが互変異性体形態で存在しうる場合、ならびにそのような温度、溶媒およびｐＨの特殊な条件下では、平衡状態で存在するかまたは主に１形態で存在するかにかかわらず、それぞれの互変異性体形態が本発明に含まれるものとする。したがって、光学活性形態である式（Ｉ）のペプチドの単一鏡像異性体は、不斉合成、光学的に純粋な前駆物質からの合成、またはラセミ体の分割により得ることができる。

式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のペプチドは式（Ｉ）のペプチドの特定の立体異性体形態であるが、本発明は式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）に包含される立体異性体形態に限定されると解釈すべきではない。

本発明はさらに本発明のペプチドのプロドラッグを含むものとし、これらは投与されると代謝プロセスにより化学変換を受けた後に薬理活性ペプチドになる。一般に、そのよう
なプロドラッグは本発明のペプチドの機能性誘導体であり、それらはインビボで容易に式（Ｉ）のペプチドに変換できる。プロドラッグはいずれかの共有結合した化合物であり、それらはインビボで式（Ｉ）の活性親ペプチド薬物を放出する。適切なプロドラッグ誘導体を選択および調製するための一般法は、たとえば“Design of Prodrugs”ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985に記載されている。典型的なプロドラッグの例は、たとえばヒドロキシル、カルボキシルまたはアミノ官能基のエステル化により、官能基部分に生物学的に不安定な保護基をもつ。たとえば例示であって限定ではないが、プロドラッグにはエステルプロドラッグ形態を採用した式（Ｉ）のペプチド、たとえばＲが−ＯＨである場合に式（Ｉ）のＲ基の低級アルキルエステル（低級アルキルエステルは、アルキル基中に１〜８個の炭素原子を含むことができる）、またはアラルキルエステル（アラルキル基中に６〜１２個の炭素原子をもつ）が含まれる。おおまかに言うと、プロドラッグには、インビボで酸化、還元、アミノ化、脱アミノ、ヒドロキシル化、脱ヒドロキシル、加水分解、脱加水分解、アルキル化、脱アルキル、アシル化、脱アシル、リン酸化または脱リン酸されて式（Ｉ）の活性親ペプチド薬物を生成しうる化合物が含まれる。

ペプチドの半減期を延長するために、式Ｉのペプチドの特定の修飾を行なうことができる(参照：G. Pasuta and F. M. Veronese (2007) “Polymer-drug conjugation, recent achievements and general strategies” Progress in Polymer Science 32 (8-9): 933-961)。

本発明には、式（Ｉ）に示したものと同一であるが、実際には式（Ｉ）に描かれた１個以上の原子が自然界で通常みられる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数をもつ原子で交換されたペプチドも含まれる。本発明のペプチドに取り込ませることができる同位体の例には、水素、炭素、窒素および酸素の同位体、たとえばそれぞれ^２Ｈ、^３Ｈ、^１３Ｃ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^１８Ｏおよび^１７Ｏが含まれる。上記の同位体および／または他の原子の同位体を含む本発明のペプチドおよびそのペプチドの医薬的に許容できる塩類または溶媒和物は、本発明の範囲に含まれる。本発明の特定の同位体標識ペプチド、たとえば放射性同位体、たとえば^３Ｈおよび^１４Ｃを取り込ませたものは、多様なアッセイ、たとえば薬物および／または基質の組織分布アッセイに有用である。より重い同位体による置換、たとえばジュウテリウム（^２Ｈ）による１個以上の水素原子の置換は、場合により代謝安定性の増大を含めた薬理学的利点を提供できる。同位体標識した式（Ｉ）のペプチドは一般に、同位体標識した試薬を同位体標識していない試薬の代わりに用いて製造できる。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの１態様において、Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３である。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの他の態様において、Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは１であり、ｙは４である。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの他の態様において、Ｒ_１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｘは３であり、ｙは２である。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドのさらに他の態様において、Ｒ_１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｘは４であり、ｙは１である。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの特定の態様において、Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３であるか、あるいはＲ_１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｘは３であり、ｙは２である。より特別には、Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３である。意外にも予想外に、ラクタム橋をも
つ本発明によるペプチドであってアミド結合がＧｌｕ（環状部分のＮ末端にある）の側鎖およびＯｒｎ（環状部分のＣ末端にある）の側鎖により配置されたものは一般に、特に本明細書に記載する低密度ｈＭＣ４−Ｒ系におけるＥＣ_５０により測定して、アミド結合がＡｓｐおよびＬｙｓにより配置されているけれども他の点では同一のものと比較して、改善された力価をもたらすことが見出された。この知見は、メラノコルチン受容体特異的ペプチドのラクタム橋のアミド結合の位置および方向は活性にとってほとんど重要ではなく受容体と相互作用しないという先行技術における主張に反する。たとえば、Bednarek MA et al., Potent and selective peptide agonists of α-melanotropin action at human
melanocortin receptor 4: their synthesis and biological evaluation in vitro. Biochem. Biophys. Res. Comm. 286: 641-645 (2001)を参照。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの態様において、
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択され；
ｗは、それぞれの場合、独立して０〜５から選択され；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５から選択される。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの態様において、Ｒ_２はＨである。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの態様において、
Ｒ_２は、Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択される。

何らかの理論により拘束されるわけではないが、Ｈｉｓを、非芳香族アミノ酸、特に非極性の小分子脂肪族アミノ酸、たとえばＰｒｏもしくはＡｌａ、または極性の非荷電もしくは荷電アミノ酸、たとえばＬｙｓ、Ａｓｐ、ＧｌｎおよびＡｓｎにより置き換えることは、血圧作用の減弱に寄与すると考えられる。したがって、コア配列中のＨｉｓの位置を、たとえばＤａｂ、Ｄａｂ（アセチル）、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ（Ｏ）、Ｍｅｔ（Ｏ_２）、Ｔｈｒ、Ｈｙｐ、Ｇｌｎ、Ｐｒｏ、Ａｌａ、Ａｓｎ、Ｃｉｔ、Ｏｒｎ、Ｄａｐ、Ｌｙｓ、またはＡｒｇ、特にＰｒｏ、ＡｓｎまたはＧｌｎにより置き換えることができる。

したがって、本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の下記のペプチドが提供される：
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

本発明のさらに他の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の下記のペプチドが提供される：
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

本発明の特定の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の下記のペプチドが提供される：
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択され；
ｗは、それぞれの場合、独立して０〜５、特に０〜２、たとえば０から選択され；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５、特に１〜４から選択される。

本発明のさらに他の特定の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の下記のペプチドが提供される：
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドのさらに他の態様において、
Ｒ_２は、Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は

から選択される。

本発明の他の態様において、Ｒ_２はＨであり、Ｒ_３は

から選択される、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドが提供される。

本発明の他の態様において、Ｒ_２はＨであり、Ｒ_３は

本発明の他の態様において、Ｒ_２は−ＣＨ_２−であり、Ｒ_３は−（ＣＨ_２）_２−であり、Ｒ_２とＲ_３は一緒に非置換ピロリジン環を形成している、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドが提供される。

本発明のさらに他の態様において、Ｒ_２は−ＣＨ_２−であり、Ｒ_３は−（ＣＨ_２）_２−であり、Ｒ_２とＲ_３は一緒に−ＯＨで置換されたピロリジン環を形成している、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のペプチドが提供される。式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドのさらに他の態様において、Ｒ_５は−ＮＨ_２または−ＯＨである。

式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）によるペプチドの特定の態様において、Ｒ_５は−ＮＨ_２である。

前記の１以上の態様を組み合わせて、本発明によるペプチドのさらに他の特定の態様を提供することができる。

したがって、本発明の特定の態様において、式（Ｉ）、特に式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）による下記のペプチドが提供される：
Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３であり；
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は

から選択され；
ｗは、それぞれの場合、独立して０〜５から選択され；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５から選択され；
Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち１以上はそれぞれ独立して

から選択され；
Ｒ_５は、−ＮＨ_２または−ＯＨである。

本発明の若干の具体的ペプチドは

または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩である。

特に、本発明は

または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩に関する。

特に、本発明は

または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩にも関する。

特に、本発明は

本発明のさらに他の若干の具体的ペプチドは

または以上のいずれかの医薬的に許容できる塩である。

６．１具体的ペプチド
下記の構造のペプチドは前記の一般法により合成され、指示した場合以外、各ペプチドのＭＣ１−ＲＫｉおよびＭＣ４−ＲＫｉ値は後記の７．１に記載する［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨを用いる競合結合アッセイ法で測定された。すべてのペプチドをＴＦＡ塩の形態で製造し、ただし、実施例４３、４６および６７のペプチドは酢酸塩の形態で製造された。

本発明の若干の具体的ペプチドの合成を以下に示す。これらのペプチドは、Symphony Multiplex Peptide Synthesizer (Rainin Instrument Company/Protein Technologies Inc)自動ペプチド合成装置により固相合成を用いて製造された。

工程１：Ｏｒｎのカップリング
Sierber樹脂９−Ｆｍｏｃ−アミノキサンテン−３−イルオキシ−ポリスチレン樹脂（
０．３９ｍｏｌ／ｇ，ChemPep Inc., #151902)を、３×５ｍＬのＤＭＦ中で１０分間、膨潤させた。その後、２×５ｍＬのＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて１０分間、Ｆｍｏｃを脱保護した。次いで樹脂を６×５ｍＬのＤＭＦ中で３０秒間、洗浄した。５ｍＬのＤＭＦ中２００ｍＭＦｍｏｃ−Ｏｒｎ（Ａｌｌｏｃ）−ＯＨおよび５ｍＬのＤＭＦ中２００ｍＭＨＢＴＵ（４００ｍＭＮＭＭを含有）を添加し、３０分後に樹脂を３×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、洗浄した。

工程２：次の６つのアミノ酸（ＡＡ）のカップリング
工程１からの樹脂をまず３×５ｍＬのＤＭＦ中で３０秒間、膨潤させ、２×５ｍＬのＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて１０分間、Ｆｍｏｃを脱保護し、次いで６×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、洗浄した。５ｍＬの２００ｍＭＦｍｏｃ−ＡＡ−ＯＨ溶液および５ｍＬのＤＭＦ中２００ｍＭＨＢＴＵ（４００ｍＭＮＭＭを含有）を添加し、３０分後に樹脂を３×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、洗浄した。

この工程を各アミノ酸（ＡＡ）について繰り返した。

工程３：アセチル化
２×５ｍＬのＤＭＦ中２０％ピペリジンを用いて１０分間、Ｆｍｏｃを脱保護し、次いで樹脂を３×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、洗浄した。その後、５ｍＬの５０％Ａｃ_２Ｏ／ＤＭＦ溶液を添加し、３０分後にペプチド樹脂を３×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、および６×５ｍＬのＤＭＦで３０秒間、洗浄した。

工程４：アリル／Ａｌｌｏｃ脱保護
ペプチド樹脂（０．６ｍｍｏｌ）とフェニルシラン(Oakwood Chemical, #S13600)（２０当量）を２０ｍＬのＤＣＭ中で混合し、窒素を５分間、吹き込んだ。

テトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（０）(Strem Chemicals, Inc., #46-2150)（０．２当量）を添加し、混合物を窒素と共に１時間、撹拌した。新鮮な試薬を用いて、この操作を１回１時間、さらに１回３０秒間、繰り返した。処理したペプチド樹脂を、次いでＤＣＭ×３およびＤＭＦ×３で洗浄した。

工程５：ラクタム形成
ＴＢＴＵ（２当量）およびエチルジイソプロピルアミン（ＤＩＥＡ）（４当量）を用いて２０ｍＬのＤＭＦ中で１時間、ペプチド樹脂上でラクタム環を形成した。陽性のKaiserニンヒドリン試験がみられた場合には、２回目のカップリングが必要な可能性がある。

工程６：ペプチド開裂
ペプチド樹脂（０．６ｍｍｏｌ）と２０ｍＬの５％ジエチルジチオ−カルバミン酸ナトリウム３水和物(ＮａＣＳ_２ＮＥｔ_２，Aldrich, #228680)をＤＭＦ中で２０分間、混合し、次いでＤＭＦ×３、ＤＣＭ×３およびジエチルエーテル×２で洗浄した。

次いで樹脂（０．６ｍｍｏｌ）を２５ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ_２Ｏ（９０：５．０：５．０ｖ／ｖ／ｖ）中で２．５時間、撹拌した。樹脂を濾過した。濾液を約１０ｍＬの体積まで真空濃縮し、約１４０ｍＬの冷ジエチルエーテル（約０℃に予冷）を添加した。

混合物をボルテックス撹拌し、次いで冷蔵庫（約−４℃）に１時間入れておき、２８００ｒｐｍで５分間、遠心し、エーテル層をデカントした。

ペプチドを９０ｍＬの冷ジエチルエーテル（約０℃に予冷）で洗浄し、ボルテックス撹拌し、２８００ｒｐｍで５分間、遠心し、エーテル層をデカントした。

得られた固体を５０％ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏに溶解し、室温で一夜保存した。

粗製ペプチド溶液を濃縮して、ＨＰＬＣ精製用の固体粗製ペプチドを得た。

ＨＰＬＣ精製後、イオン交換（×１００当量）を用いてペプチドＴＦＡ塩をペプチド酢酸塩に変換した。用いた陰イオン交換樹脂は、Dowex SBR LC NG, OH形(Supelco, Cat# 14036-U)であった。

実施例４６：Ac-Arg-cyclo(Glu-Gln-D-Phe(4-CN)-Arg-Trp-Orn)-NH ₂ (SEQ ID NO:51)
表題ペプチドの製造に際して、前記の方法に従った。

工程２で添加したアミノ酸は、カップリングさせた順に、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Phe(4-CN)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、およびFmoc-Arg(Pbf)-OHであった。

得られたペプチドをＨＰＬＣ（カラム: Atlantis dC18 OBD（商標）１９×１００ｍｍ（５μ, Waters part # 186001367）により、１０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ，０．１％ＴＦＡを含有（溶媒Ａ）および９０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ，０．１％ＴＦＡを含有（溶媒Ｂ）を用いて精製した。０％−５％の溶媒Ｂで５分間、そして５％−３５％の溶媒Ｂで３０分間の勾配を用いた。

ペプチドの収率は１０％であった。

実施例６７：Ac-Arg-cyclo(Glu-Pro-D-Phe(4-F)-Arg-Trp-Orn)-NH ₂ (SEQ ID NO:72)
表題ペプチドの製造に際して、前記の方法に従い、ただし、１５ｍＬのＤＭＦ中５％ジエチルジチオ−カルバミン酸ナトリウム３水和物、１６ｍＬのＴＦＡ／ＴＩＳ／Ｈ_２Ｏ、および９０ｍＬ＋６０ｍＬのジエチルエーテルを工程６で用いた。さらに、濾液を５ｍＬに濃縮した。

工程２で添加したアミノ酸は、カップリングさせた順に、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-D-Phe(4-F)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Glu(OAll)-OH、およびFmoc-Arg(Pbf)-OHであった。

得られたペプチドをＨＰＬＣ（カラム: Atlantis dC18 OBD（商標）１９×１００ｍｍ（５μ, Waters part # 186001367）により、１０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ，０．１％ＴＦＡを含有（溶媒Ａ）および９０％ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏ，０．１％ＴＦＡを含有（溶媒Ｂ）を用いて精製した。５％−１０％の溶媒Ｂで５分間、そして１０％−４０％の溶媒Ｂで３０分間の勾配を用いた。

ペプチドの収率は１６％であった。

７．０本発明のペプチドの評価に用いた試験法およびアッセイ法
本発明のメラノコルチン受容体特異的ペプチドは、結合、機能状態および有効性を判定するための多様なアッセイ系および動物モデルにより試験することができる。

７．１［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨを用いる競合阻害アッセイ
例示したペプチドにつき、本発明に従い、組換えｈＭＣ４−Ｒ、ｈＭＣ３−ＲまたはｈＭＣ５−Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞から、およびＢ−１６マウスメラノーマ細胞（内在性ＭＣ１−Ｒを含む）から調製した膜ホモジェネートを用いて、競合阻害結合アッセイを実施した。若干の例では、組換えｈＭＣ１−Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞を用いた。０．５％ウシ血清アルブミン（フラクションＶ）で予めコートした９６ウェルGF/B Milliporeマルチスクリーン濾過プレート(MAFB NOB10)中でアッセイを実施した。膜ホモジェネートを下記のものと共にインキュベートした：０．２ｎＭ（ｈＭＣ４−Ｒについて）、０．４ｎＭ（ＭＣ３−ＲおよびＭＣ５−Ｒについて）または０．１ｎＭ（マウスＢ１６
ＭＣ１−ＲまたはｈＭＣ１−Ｒについて）［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨ（Perkin
Elmer)、ならびに漸増濃度の本発明の被験ペプチド：１００ｍＭのＮａＣｌ、２ｍＭのＣａＣｌ_２、２ｍＭのＭｇＣｌ_２、０．３ｍＭの１，１０−フェナントロリンおよび０．２％のウシ血清アルブミンを含む２５ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）中。３７℃で６０分間のインキュベーション後、アッセイ混合物を濾過し、膜を氷冷緩衝液で３回洗浄した。フィルターを乾燥させ、結合した放射能につきガンマ計数管で計数した。１μＭのＮＤＰ−α−ＭＳＨの存在下での［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨの結合の阻害により、非特異的結合を測定した。最大特異的結合（１００％）を、１μＭのＮＤＰ−α−ＭＳＨの不存在下と存在下で細胞膜に結合した放射能（ｃｐｍ）の差として定義した。被験ペプチドの存在下で得られた放射能（ｃｐｍ）を１００％特異的結合に対して正規化して、［Ｉ^１２５］−ＮＤＰ−α−ＭＳＨ結合の阻害率パーセントを決定した。各アッセイを三重に実施し、実際の平均値を記載し、０％未満の結果を０％として報告した。本発明の被験ペプチドのＫｉ値は、Graph-Pad Prism（登録商標）曲線フィッティングソフトウェアを用いて決定された。このアッセイからの結果を本明細書に提示する（６．１を参照）
。若干のペプチドについては、２より多い数値の平均値を提示する。

７．２アゴニスト活性のアッセイ
ＭＣ４−Ｒを発現するＨＥＫ−２９３細胞において本発明のペプチドが機能性応答を誘発する能力の尺度として、細胞内ｃＡＭＰの蓄積を調べた。組換えｈＭＣ４−Ｒを発現する集密状態のＨＥＫ−２９３細胞を、無酵素の細胞解離用緩衝液中でのインキュベーションにより培養プレートから剥離した。分散した細胞を、Earleの平衡塩類溶液に懸濁した：１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、１ｍＭのグルタミン、０．５％のアルブミンおよび０．３ｍＭの３−イソブチル−１−メチル−キサンチン（ＩＢＭＸ）（ホスホジエステラーゼ阻害剤）を含有。細胞を９６ウェルプレートにウェル当たり０．５×１０^５細胞の密度で播種し、１０分間プレインキュベートした。細胞を３７℃で１５分間、ＤＭＳＯ（最終ＤＭＳＯ濃度１％）に濃度範囲０．０５〜５０００ｎＭで溶解した全アッセイ体積２００μＬｋ本発明のペプチドに曝露した。ＮＤＰ−α−ＭＳＨを標準アゴニストとして用いた。ｃＡＭＰレベルを、HTRF（登録商標）ｃＡＭＰ細胞ベースアッセイ系（Cisbio Bioassaysから）により、クリプテート標識抗ｃＡＭＰおよびｄ２標識ｃＡＭＰを用いて測定し、プレートをPerkin-Elmer Victorプレート読取装置により６６５および６２０ｎＭで読み取った。データ分析をGraph-Pad Prism（登録商標）ソフトウェアで非線形回帰分析により行なった。本発明の被験ペプチドの最大有効性を、これに関して完全アゴニスト基準として用いた標準メラノコルチンアゴニストＮＤＰ−α−ＭＳＨにより達成されたものと比較した。

７．３高密度および低密度ｈＭＣ４−Ｒ機能アッセイ
ヒトＭＣ４−Ｒ（Palatin Technologies, US, University of Michiganからのライセンスをもつ)で形質転換したＨＥＫ２９３細胞系を用いた。ヒトＭＣ４−ＲはT-REx（商標）System, Invitrogenを用いてＨＥＫ２９３に導入された。T-REx（商標）Systemは、大腸菌（E. coli）Ｔｎ１０エンコードしたテトラサイクリン（Ｔｅｔ）耐性オペロン由来の調節エレメントを用いたテトラサイクリン調節された哺乳動物発現系を用いている。T-REx（商標）Systemの使用により、目的遺伝子であるヒトＭＣ４−Ｒ遺伝子の発現が、テトラサイクリンまたはドキシサイクリンの不存在下では抑制され、テトラサイクリンまたはドキシサイクリンの存在下では誘導される(参照：T-REx（商標） System Manual, Invitrogen発行)。

ＨＥＫ２９３−Ｔ−ＲＥｘ−ＭＣ４−Ｒ細胞を、Ｌ−グルタミン(Gibco 25030)、１０％のウシ胎仔血清（ＦＢＳ）、２００μｇ／ｍＬのゼオシン（Zeocin）(Invitrogen 46-0072)および６μｇ／ｍＬのブラスチサイジン(Invitrogen 46-1120)を補充したＤＭＥＭ（Gibco 11965)中で、５％ＣＯ_２および湿度９５％において３７℃で培養した。７５％集密状態の細胞のＴ−１５０フラスコを、２種類の濃度のドキシサイクリン（低密度ｈＭＣ４−Ｒ系を提供する０．１ｎｇ／ｍＬ、および高密度ｈＭＣ４−Ｒ系を提供する１０ｎｇ／ｍＬ）と共に、５％ＣＯ_２において３７℃で１６〜１８時間インキュベートして、ＭＣ４−Ｒ発現を誘導した。アッセイ当日、細胞をＰＢＳ(Gibco 14190)で洗浄し、細胞解離用緩衝液(Gibco 13150-016)を用いて収穫し、次いで遠心し、ハンクス平衡塩類溶液（＋Ｃａ，＋Ｍｇ）(Gibco 14025)、１０ｍＭの４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．４）(Sigma H0887)、１ｍＭのＬ−グルタミン(Gibco 25030)、１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）(Sigma A3311)および０．３ｍＭの３−イソブチル−１−メチル−キサンチン（ＩＢＭＸ）に再懸濁した。次いで細胞を計数し、体積を２．５×１０^５細胞／ｍｌに調整した。

次いで細胞を９６ウェルプレート(BD 353916)に１９８μＬ（約５×１０^４）細胞／ウェルで分配し、３７℃で１０分間インキュベートした。被験化合物をＤＭＳＯで最終濃度１ｍＭに希釈した。系列希釈液をポリプロピレン製の取出し可能な１２ウェルライブラリ
ーチューブストリップ(VWR cat# 83009-682)内で調製した。１２０μＬの１ｍＭ化合物原液をプレートの第２列にピペット添加した。Janusリキッドハンドラー（liquid handler）を用いて化合物を１：１０に系列希釈して（２５μＬの化合物＋２２５μＬのＤＭＳＯ）、合計９種類の濃度にした（１０^−５〜１０^−１３Ｍの範囲の最終アッセイ濃度となる）。

２μＬの標準物質［Ｎｌｅ^４，Ｄ−Ｐｈｅ^７］−アルファ−メラノコルチン刺激ホルモン（ＮＤＰ−α−ＭＳＨ）、または化合物を、９６ウェルプレートにJanusロボットシステムを用いて添加した。すべてのアッセイ試料を二重に試験した（すなわち、各試料がそれぞれ２つの低ドキシサイクリンプレートおよび２つの高ドキシサイクリンプレート内にあった）。プレートを穏やかに振とうし、３７℃で１５分間インキュベートした。ウェル当たり１５μＬの溶解用緩衝液の添加により反応を停止し、プレートを室温で３０分間、振とうした。

ＭＣ４−Ｒのアゴニスト刺激はアデニル酸シクラーゼを活性化する；これはアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）からの３’，５’−サイクリックアデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）形成を刺激する酵素である。したがって、ＭＣ４−Ｒのアゴニスト刺激はｃＡＭＰのレベルを上昇させる。ｃＡＭＰレベルをcAMP dynamic 2 HTRFキット(CisBio cat# 62AM4PEC; CisBioが発行したマニュアルを参照)で測定した。ｃＡＭＰレベルをプレート対照（０％について１％ＤＭＳＯ，１００％について４００ｎＭＮＤＰ−α−ＭＳＨ）および７１２ｎＭから０．０４ｎＭまでのｃＡＭＰの範囲の検量曲線に対して正規化した（本質的にCisBio HTRFキットの記載に従った）。プレートを振とう機上で室温において１時間インキュベートし、Perkin-Elmer Victorプレート読取装置により６６５および６２０ｎｍで読み取った。次いでCisBio HTRFキットの記載に従って蛍光比を計算し、GraphPad Prismソフトウェアを用いて蛍光パーセント値の変化をｃＡＭＰ濃度に対してプロットし、この変動勾配用量応答曲線を利用し、かつ計算したｃＡＭＰ濃度に基づいて、ＥＣ_５０値および活性化率パーセントを決定した。このアッセイからの結果を本明細書に提示する（８．０を参照）。

７．４食物摂取量および体重の変化
皮下注射経路で投与した選択したペプチドについて、食物摂取量および体重の変化を評価した。雄Sprague-DawleyラットをHilltop Lab Animals, Inc. (ペンシルベニア州スコットデール)から入手した。動物を一般的なポリスチレン製ハンギングケージ内に個別に収容し、管理された１２時間オン／オフ照明サイクルで飼育した。水およびペレット状飼料（ProLab RMH 2500, W.F. Fisher & Son Inc.）を適宜与えた。ラットにビヒクル（３．２％マンニトール／５０ｍＭＴｒｉｓ緩衝液）または選択したペプチド（１．０ｍｇ／ｋｇ）を皮下投与した。投与後４および２４時間の期間の食物摂取量の変化、ならびに投与後２４時間の期間の体重の変化を測定した。投与後４８および７２時間の期間の体重および食物摂取量の変化も測定して、体重および食物摂取量の変化のベースラインレベルへの復帰を判定した（示していない）。

１．０ｍｇ／ｋｇの実施例４３、４６および６７の皮下注射による試験ならびに平行した対応するビヒクル対照試験からの食物摂取量（ＦＩ，０〜４時間および０〜２４時間）および体重（ＢＷ，０〜２４時間）の結果を下記の表２に示す；平均値±ＳＥＭ（ｎ＝８〜１０）として表示。

７．５ペニス勃起の誘導
本発明のペプチドが雄ラットにおいてペニス勃起（ＰＥ）を誘導する能力を、選択したペプチドについて評価した。体重２５０〜３００ｇの雄Sprague-Dawleyラットを１２時間オン／オフ照明サイクルで、食物および水を適宜与えて飼育した。すべての行動試験を９ａ．ｍ．と４ｐ．ｍ．の間に行なった。ラット６〜８匹のグループに、ペプチドを種々の用量で皮下注射経路により投与した。投与の直後、ラットを一般に遠隔ビデオモニタリング(ハイスピードデジタルビデオ記録システムEVS-DSX-16000DVD-H, CCDカメラ付き, Epic
Systems Inc., 米国ミズーリ州セントルイス)による行動観察のために個別のポリスチレン製ケージ（長さ２７ｃｍ、幅１６ｃｍ、および高さ２５ｃｍ）に入れ、続いてビデオ記録を盲検法でオフラインスコアリングした。ラットを１時間観察し、あくび、毛づくろい動作およびＰＥを１０分間のビン（bin）で記録した。

１．０〜３．０ｍｇ／ｋｇの実施例４３、４６および６７の皮下注射による試験からのＰＥ結果を、参考例２と共に下記の表３に示す；ＰＥの総数／ラットの平均値±ＳＥＭ（ｎ＝７〜１１）、および試験期間中に少なくとも１回の勃起を示したラット数／グループ（レスポンダー％）として表示。対応するビヒクル対照（３．２％マンニトール／５０ｍＭＴｒｉｓ緩衝液）を平行して試験した。

８．０高密度および低密度ｈＭＣ４−Ｒ機能アッセイの結果
例示したペプチドを、前記のセクション７．３に記載した高密度および低密度ｈＭＣ４−Ｒ機能アッセイにより試験し、下記の表４に示す結果を得た。表４は単一点値および平均値の両方を含む。

前記の高密度ｈＭＣ４−Ｒ系（すなわち、１０ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンで処理したＨＥＫ２９３ＴＲｅｘＭＣ４Ｒ細胞）において、α−ＭＳＨまたはＮＤＰ−α−ＭＳＨにより達成される最大刺激を１．０（１００％）の固有活性と表示した場合に、同じ高密度ｈＭＣ４−Ｒ系でその化合物により達成されるアデニリルシクラーゼの最大刺激に基づいて、約０．１（１０％）以上、たとえば０．２（２０％）以上、または約０．３（３０％）以上、または約０．４（４０％）以上、または約０．５（５０％）以上、または約０．６（６０％）以上、または約０．７（７０％）以上、または約０．８（８０％）以上、または約０．９（９０％）以上、または約１．０（１００％）以上の固有活性を示す本発明のペプチドは、ＭＣ４受容体に対するアゴニスト（完全または部分的）活性を備えていると考えられる。

前記の高密度ｈＭＣ４−Ｒ系（すなわち、１０ｎｇ／ｍｌのドキシサイクリンで処理したＨＥＫ２９３ＴＲｅｘＭＣ４Ｒ細胞）で試験した実施例のペプチドの大部分が、そのアッセイにおいてｃＡＭＰ産生に関して０．０５μＭ未満、たとえば０．０１μＭ未満、特に０．００１μＭ未満のＥＣ_５０値を与えた。

表４から分かるように、本発明のペプチドは低密度ｈＭＣ４−Ｒ系では固有活性を欠如し、高密度ｈＭＣ４−Ｒ系では完全アゴニストである場合がある。

表４からさらに分かるように、本発明のペプチドは前記の低密度ｈＭＣ４−Ｒ系では部分アゴニストであり、前記の高密度ｈＭＣ４−Ｒ系では完全アゴニストである場合がある。

表４からさらに分かるように、本発明のペプチドは低密度ｈＭＣ４−Ｒ系と高密度ｈＭＣ４−Ｒ系の両方で完全アゴニストである場合がある。

何らかの理論により拘束されるわけではないが、前記の低密度ｈＭＣ４−Ｒ系では固有活性を欠如するか、あるいは部分アゴニストであり（すなわち、低密度ｈＭＣ４−Ｒ系で０から７０％までの固有活性をもつペプチド）、かつ前記の高密度ｈＭＣ４−Ｒ系では部分または完全アゴニストであるペプチド（すなわち、高密度ｈＭＣ４−Ｒ系で１０％以上また７０％以上の固有活性をもつペプチド）は、低密度と高密度の両方のｈＭＣ４−Ｒ系で完全アゴニストであるペプチドと比較して、ＭＣ４受容体活性化から生じる性的作用、たとえばペニス勃起作用をもたないか、あるいはそれが低レベルであると考えられる。前記に説明したように、これらの性的作用は、エネルギー恒常性および代謝関連、摂食関連
、および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態の処置に際しては望ましくない副作用であると考えられる。

したがって、本発明によるペプチドは、ＭＣ４受容体の活性化に応答する疾患、障害および／または状態、特に、エネルギー恒常性および代謝関連（たとえば糖尿病）、摂食関連、および／またはエネルギーバランスおよび体重関連の疾患、障害および／または状態であって、肥満症、過体重、ならびに肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態、たとえば２型糖尿病およびメタボリックシンドロームを含めたものの処置に有用であるための有望なＭＣ４受容体親和性、有効性および力価をもつと考えられる。

本発明を特にこれらの好ましい態様に関して詳述したが、他の態様も同じ結果を達成できる。本発明の変更および改変は当業者に明らかであり、そのような態様および均等物はすべて包含されるものとする。

Claims

式（Ｉ）の環状ペプチド：
またはその医薬的に許容できる塩
［式中：
Ｒ_１は、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−または−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり；
Ｒ_２は、−Ｈまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は
から選択され；
Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃは、それぞれ独立して水素、ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−ジハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル−トリハロ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルコキシ、（Ｃ_１−Ｃ_１０）アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ニトロ、ニトリル、スルホンアミド、アミノ、モノ置換アミノ、ジ置換アミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、またはアルコキシ−カルボニルから選択され、ただし、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは水素ではなく；
Ｒ_５は、−ＯＨまたは−Ｎ（Ｒ_６ａ）（Ｒ_６ｂ）であり；
Ｒ_６ａおよびＲ_６ｂは、それぞれ独立してＨ、またはＣ_１−Ｃ_４線状、分枝または環状アルキル鎖であり；
Ｒ_７は、−Ｈまたは−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ_２であり；
ｗは、それぞれの場合、独立して０〜５であり；
ｘは、１〜５であり；
ｙは、１〜５であり；
ｚは、それぞれの場合、独立して１〜５である］。
式（ＩＩ）：
またはその医薬的に許容できる塩である、請求項１に記載の環状ペプチド。
Ｒ_１は−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−であり、ｘは２であり、ｙは３である、請求項１または請求項２に記載の環状ペプチド。
Ｒ_１は−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−であり、ｘは３であり、ｙは２である、請求項１または請求項２に記載の環状ペプチド塩。
Ｒ_２はＨまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合にはＲ_３は
から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_２はＨまたは−ＣＨ_２−であり、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合にはＲ_３と共にピロリジン環を形成し、そのピロリジン環は場合により−ＯＨで置換されていてもよく；
Ｒ_３は、Ｒ_２が−ＣＨ_２−である場合には−（ＣＨ_２）_２−であり、そうでない場合に
はＲ_３は
から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_２はＨであり、Ｒ_３は
から選択される、請求項１〜４のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_２は−ＣＨ_２−であり、Ｒ_３は−（ＣＨ_２）_２−であり、Ｒ_２とＲ_３は一緒に非置換ピロリジン環を形成している、請求項１〜４のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは独立して
から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは独立して水素、ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−ハロ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−ジハロ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル−トリハロ、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、ニトロ、ニトリル、アミノまたはヒドロキシから選択され、ただし、Ｒ_４ａ、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃのうち少なくとも１つは水素ではない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_４ａは４位にあって−Ｃ≡Ｎであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
Ｒ_４ａは４位にあって−Ｆであり、Ｒ_４ｂおよびＲ_４ｃはそれぞれＨである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の環状ペプチド。
から選択される環状ペプチドまたは前記のいずれかの医薬的に許容できる塩。
請求項１〜１３のいずれか１項に記載の環状ペプチドまたはその医薬的に許容できる塩および医薬的に許容できるキャリヤーを含む医薬組成物。
医薬として使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチド。
ＭＣ４受容体の活性化に応答する疾患、障害および／または状態の処置に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチド。
糖尿病；肥満症；過体重；ならびに／あるいは肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態であって、インスリン抵抗性；グルコース耐性障害；２型糖尿病；メタボリックシンドローム；異脂肪血症；高脂血症；高血圧症；心障害；心血管障害；非アルコール性脂肪肝疾患；関節障害；続発性骨関節炎；胃食道逆流；睡眠無呼吸；アテローム性硬化症；発作；大血管および小血管疾患；脂肪症；胆石；および胆嚢障害を含むものの処置に使用するための、請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチド。
ＭＣ４受容体の活性化に応答する疾患、障害および／または状態を処置する方法であって、療法有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドをその必要がある患者に投与することを含む方法。
糖尿病、肥満症、過体重、ならびに／あるいは肥満症および／または過体重に関連する疾患、障害および／または状態であって、インスリン抵抗性；グルコース耐性障害；２型糖尿病；メタボリックシンドローム；異脂肪血症；高脂血症；高血圧症；心障害；心血管障害；非アルコール性脂肪肝疾患；関節障害；続発性骨関節炎；胃食道逆流；睡眠無呼吸；アテローム性硬化症；発作；大血管および小血管疾患；脂肪症；胆石；および胆嚢障害を含むものを処置する方法であって、療法有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドをその必要がある患者に投与することを含む方法。
食物摂取量、体重および／または体重増加を低下させる方法であって、薬理学的有効量の請求項１〜１３のいずれか１項に記載のペプチドをその必要がある個体に投与することを含む方法。