CZ2003788A3 - Ligandy melanokortinového receptoru - Google Patents

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká nových ligandů melanokortinového (MC) receptorů. Tyto ligandy jsou cyklické peptidové analogy, které s výhodou vykazují selektivitu na re* ceptory MC-4 a/nebo MC-3 vzhledem k jiným melanokortinovým receptorům (zvláště receptorů MC-1).

Dosavadní stav techniky

Melanokortinové peptidy (melanokortiny) jsou přírodní peptidové hormony u zvířat a člověka, které se vážou na MC-receptory a stimulují je. Příklady melanokortinů jsou α-MSH (melanocyt stimulující hormon), β-MSH, gama-MSH, ACTH (adrenokortikotropní hormon) a jejich peptidové fragmenty. MSH je hlavně znám svojí schopností regulovat periferní pigmentaci (Eberle 1988), zatímco ACTH je znám při indukci steroidoneogenese (Simpson a Waterman 1988). Melanokortinové peptidy zprostředkují také četné další fyziologické účinky. Je o nich uváděno, že ovlivňují motivaci, učení, paměť, chování, zánět, tělesnou teplotu, pocit bolesti, krevní tlak, srdeční tep, vaskulární tonus, natriuresis, krevní tok v mozku, růst a opravu nervů, placentální vývoj, syntézu a uvolňování aldosteronu, uvolňování thyroxinu, spermatogenesu, hmotnost vaječníků, sekreci prolaktinu a FSH, děložní krvácení u žen, sekreci _f kožního mazu a feromonů, pohlavní aktivitu, erekci penisu, hladinu glukosy v krvi, nitroděložní růst plodu, chování motivované potravou a také další události související s > porodem.

ACTH a různé MSH peptidy sdílejí tetrapeptidové jádro His-Phe-Arg-Trp.

Všechny tyto peptidy jsou odvozeny od proteolytického zpracování propeptidu preopiomelanokortinu (POMC). V několika minulých letech bylo identifikováno pět rozdílných subtypů melanokortinových receptorů. Tyto MC receptory patří do skupiny 7 receptorů kondenzovaných s G-proteinem transmebránové domény. Pět MC receptorů,

I • · • · · · • · · · · · • · · · · · · • · · · ···· • · · • · · ··· · · · · ···· ·· ···· ·· ·· ·* · · nazvaných MC-1, MC-2, MC-3, MC-4 a MC-5, jsou všechny kondenzovány stimulačním způsobem na cAMP. Z těchto receptorů MC-2 receptor je ACTH receptor, zatímco ostatní představují subtypy MSH receptorů. MC-1 receptor je přítomen na melanocytech a melanomu. MC-2 receptor je přítomen převážně v nadledvince. Bylo zjištěno, že mRNA pro MC-3 receptor je v mozku stejně jako placentové a střevní tkáni (Gantz a spol, 1993a, Desarnaud aspol. 1994, Roselli Rehfuss a spol. 1993). MC-receptor byl primárně nalezen v mozku (Gantz a spol. 1993b, Mountjoy a spol. 1994). MC-5 receptor je exprimován v mozku stejně jako v některých periferních tkáních (Chhajlani a spol. 1993, Gantz a spol. 1994, Griffon a spol. 1994, Labbu a spol. 1994, Barrett a spol. 1994, Fathi a spol. 1995). Nedávná data získaná od lidí ukazují, že všechny klonované MCreceptory mají širší distribuci v tkáních (Chhajlani, 1996) než se původně myslelo.

Jak bylo shora diskutováno, členové skupiny melanokortinových receptorů mohou být odlišeni na základě jejich distribuce v tkáních. Jak MC-4 tak MC-3 receptory jsou lokalizovány v hypotalamu, oblasti mozku, o které se předpokládá, že je zahrnuta v modulaci chování při jídle. Bylo ukázáno, že sloučeniny vykazující selektivitu na MC4/MC-3 receptory mění příjem potravy po intracerebroventrikulámí a periferní injekci u hlodavců. Konkrétně u agonistů bylo ukázáno, že snižují krmení, zatímco antagonisté vykázaly zvýšení krmení. Viz Fan W. a spol.: Role of Melanocotrinergic Neurons in Feeding and the Agouti Obesity Syndrome, Nátuře, 1997 (9. ledna), 385 (6612), 165 až 168.

Role subtypu MC-4 receptoru byla jasněji definována při regulaci jedení a regulaci tělesné hmotnosti u savců. Viz např. Huszer D. a spol.: Targeted Disruption of the Melanocortin-4 Receptor Results in Obesity in Mice, Cell/1997, vol 88, str. 131 až 141; Klebig M. L. a spol.: Ectopic Expression of the Agouti Gene in Transgenic Mice Causes Obesity, Features of Type II Diabetes, and Yellow Fur, Proč. Nati. Acad. Sci. 1995, 92, 4728 až 4732; Karbon W. a spol: Expression and Function of Argt, a Novel Gene Related to Agouti, Abstract from the Nineteenth Annua Winter Neuropeptide Conference 1998; Fan W. a spol.: Role of Melanocortinergic Neurons in Feeding and the Agouti Obesity Syndrome, Nátuře 1997, 385, str. 165 až 168; Seely R. J.:

Melanocortin Receptors in Leptin Effects, Nátuře 1997, 390, str. 349; Comuzzie A. G.: A Major Quantitative Trait Locus Determining Sérum Leptin Levels and Fat Mass is Located on Human Chromosome 2, Nat. Gen. 1997, 15, str. 273 až 276; Chagnon Y.

C. a spol.: Linkage and Association Studies Between the Melanocortin Receptor4 and 5 Genes and Obesity-Related Phenotypes in the Quebec Family Study, Mol. Med.

1997, 3 (10), str. 663 až 673; Lee F. a Huszar D: Screening Methods for Compounds > Useful in the Regulation of Body Weight, Mezinárodní patentová publikace WO

97/47316 (1997), a Shutter J. R. a spol.: Hypothalamic Expression of ART, a Novel Gene Related to Agouti, is Up-Regulated in Obese and Diabetic Mutant Mice, Gen & Dev. 1997, 11, str. 593 až 602. Stimulace MC-4 receptorů jeho endogenním ligandem, aMSH, poskytuje signál pocitu sytosti a může znamenat downstream mediátor leptinového signálu pocitu sytosti. Předpokládá se, že získáním účinných agonistů MC-4 receptorů lze potlačit chuť a lze tak dosáhnout příznivých vlastností, pokud jde o ztrátu hmotnosti.

Úloha subtypového receptorů MC3 byla nedávno definována při kontrole regulace tělesné hmotnosti a rozdělení energie. Viz. například Chen, A.S. a kol., „Inactivation of the mouše melanocortin-3 receptor results in increased fat mass and reduced lean body mass“, Nátuře Genetics, díl 26, str 97-102 (2000); Butler, A.A. a kol., „A Unique Metabolic Syndrome Causes Obesity in the Melanocortin-3 ReceptorDeficient Mouše“, Endocrinology, díl 141, str. 3518-3521 (2000). Má se za to, že agonisté receptorů MC-3 mohou modulovat rozdělení energie a tím může být dosaženo uspokojivé ztráty hmotnosti.

» Tyto studie zahrnují neredundantní úlohu receptorů MC-3 ve srovnání s receptorem MC-4 při energetice homeostáz. Proto sloučeniny, které stimulují jak receptory MC-3, tak MC-4 mohou zvyšovat ztrátu hmotnosti ve srovnání se sloučeninami, které jsou selektivní buď k subtypovému receptorů MC-3 nebo MC-4.

Přihlašovatelé objevili skupinu sloučenin, která překvapivě má vysokou afinitu pro podtypy receptorů MC-4 a/nebo MC-3 a které jsou typicky selektivní pro tyto MC • · receptory vzhledem k jiným podtypům melanokrotinových receptorů. zvláště podtypu MC-1. Předmětem tohoto vynálezu je tedy získání chemických sloučenin, které mají afinitu na podtypy MC-4 a/nebo MC-3 receptorů. Dalším předmětem tohoto vynálezu je získat prostředky pro podávání uvedených sloučenin zvířatům nebo člověku. Ještě další předměty tohoto vynálezu budou zřejmé z následujícího popisu vynálezu.

Podstata vynálezu

Vynález se týká třídy sloučenin, které jsou ligandy podtypů receptorů MC-4 a/nebo MC-3. Zejména se vynález týká sloučeniny mající strukturu obecného vzorce I:

kde

(A) X ze vybere ze souboru, který tvoří vodík, fluor, aryloxy, acyloxy, OR¹, SR¹, -NR¹R¹ a -CHR¹R¹, kde R¹ a R¹ jsou nezávisle vybrány ze souboru který tvoří vodík, alkyl a acyl;

(B) (1) každé R² se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, halogen a heteroalkyl; nebo (2) (a) dvě po sobě jdoucí R² části nebo po sobě jdoucí R² a R³ části mohou spolu spojené tvořit 3 až 8 členný karbocyklický nebo heterocyklický kruh; nebo (b) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán k X a Z¹ a R⁵ část mohou být případně spojeny za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu, který je kondenzován kfenylovému kruhu J; nebo (c) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán ke kruhu Ar může po spojení s R⁷ tvořit kruh kondenzovaný ke kruhu Ar; nebo • · • · (d) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který se váže k Z² a Z³ může případně po spojení s R⁸ tvořit karbocyklický nebo heterocyklický kruh;

(e) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán k Z³ a D může případně po spojení s R¹⁰ tvořit karbocyklický nebo heterocyklický kruh;

(C) každé Z¹, Z² a Z³ se nezávisle vybere z -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -S(O)aC(R³)(R^3a)-, kde a je 0, 1 nebo 2; -C(R³)(R^3a)S(O)b- kde b je 0, 1 nebo 2; -N(R^3e)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -N(R^3d)C(O)-; -C(O)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)C(O)-; -C(R³)(R^3a) (R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -C=C ; -SO2N(R^3d)-; -N(R^3d)SO2-; -C(R³)(R^3a)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-; -N(R^3d)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(OR^3f)N(R^3d)-; -P(=O)(OR^3f)O-; -O-P(=O)(OR^3f)-; cykloalkyl obsahující 3 až 8 atomů uhlíku a heterocykloalkyl obsahující 4 až 8 atomů v kruhu; kde (1) každé R³, R^3a, R^3b a R^3c, pokud je přítomné, se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy, acyloxy, thiol, alkylthio, acylthio, arylthio, amino, alkylamino, acylamino a alkyl;

(2) R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu a arylu;

(3) R^3e, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu, arylu a acylu; a (4) R^3f, pokud je přítomné se vybere z vodíku a alkylu;

(D) p je 0, 1,2,3,4 nebo 5; kde (1) když p je větší než 0, každé R⁴ a R⁴ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, arylu, halogenu, hydroxy, alkoxy, amino a acylamino;

(2) když p je větší než 1, dvě části R⁴, mohou spolu s atomy uhlíku, ke kterým jsou vázány, tvořit heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když p je větší než 1, části R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁴ a R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

(E) R⁵ představuje pět substituentů (t.j polohy 2-6) na fenylovém kruhu J, kde každé R⁵ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, halo, thiol, -OR¹², -SR¹², -SO₂N(R¹²)(R¹²), -N(R¹²)(R¹²'), alkyl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; kde každé R¹² a R¹²' se nezávisle • · vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík, alkyl, acyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; nebo dvě části R⁵ případně spolu tvoří karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který je kondenzován k fenylovému kruhu J;

(F) q je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde (1) když q je větší než O, každé R⁶ a R⁶ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen, hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino;

(2) když q je větší než 1, dvě části R⁶, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když q je větší než 1, mohou být části R^e na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁶ a R⁶ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

(G) Ar je arylový nebo heteroarylový kruh vybraný ze skupiny, kterou tvoří fenyl, thiofen, furan, oxazol, thiazol, pyrrol a pyridin;

(H) R⁷ představuje všechny substituenty na kruhu Ar, kde každé R⁷ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, halogen, -NR¹³R¹³, alkyl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; kde každé R¹³ a R¹³ se nezávisle vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík, alkyl, acyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; nebo dvě části R⁷ mohou případně po spojení tvořit karbocyklický nebo heterocyklický kruh, kondenzovaný ke kruhu Ar;

(I) r je 0, 1,2, 3, 4, 5, 6 nebo 7; kde (1) každé R⁸ a R⁸ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, halogenu, hydroxy, alkoxy a aminoskupiny;

(2) když r je větší než 1, dvě části R⁸, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když r je větší než 1, mohou být části R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁸ a R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

(J) B se vybere ze souboru, který tvoří -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵), =0 nebo =SNR¹⁶R¹⁷, -NR²⁰R²¹, kyano (-CN), heteroarylový kruh, například thiofen, alkyl nebo • · dialkylamin, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu, kde R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R²⁰ a R²¹ se nezávisle vyberou z vodíku, alkylu, alkenu a alkynu; kde dále kombinace dvou nebo více R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ s atomy, ke kterým jsou vázány, může vést ke vzniku monocyklického nebo bicyklického kruhu; výhodně je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, kyano, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodněji je

-N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, kyano, triazol a imidazol;

(K) s je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde (1) když s je větší než 0, každé R⁹ a R⁹ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen, hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino;

(2) když s je větší než 1, dvě části R⁹, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když s je větší než 1, mohou být části R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁹ a R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

(L) R¹⁰ se vybere ze skupiny, kterou tvoří případně substituovaný bicyklický arylový kruh a případně substituovaný bicyklický heteroarylový kruh; a (M) D se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří, vodík, fluor, hydroxy, thiol, acylthio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, acyloxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹; kde R¹¹ se vybere ze skupiny, kterou tvoří hydroxy; alkoxy; amino; alkylamino; -NHOR¹⁸, kde R¹⁸ se vybere ze souboru, který tvoří vodík a alkyl;

-N(R¹⁹)CH2C(O)NH2, kde R¹⁹ je alkyl; -NHCH2CH₂OH; -N(CH₃)CH₂CH₂OH; a -NHNHC(=Y)NH₂, kde Y se vybere z O, S a NH; a (N) kde jestliže alespoň jedno ze Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d)- nebo -N(R^3d)C(O)-, potom X a D mohou být případně spolu vázány přes vazebnou část L, která obsahuje všechny kovalentní vazby nebo kovalentní vazby a iontovou vazbu, takže vznikne cyklický peptidový analog nebo jeho optický izomer, diastereomer nebo enantiomer; nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl, ·· ·· ·· • 0 · · 0 0 0 0 0 • 0 ········· · • · · 0 · · · · · · · ··»· ·· ·· ·· *· hydrát nebo biodegradovatelný ester, amid nebo imid.

Tento vynález se týká farmaceutických prostředků obsahujících shora uvedené sloučeniny a způsobů léčení onemocnění vyvolaných MC-3 nebo MC-4 receptorem podáváním těchto sloučenin.

V následující části popisu je vynález podrobně popsán.

Aminokyselina znamená alanin (Ala; A), arginin (Arg; R), asparagin (Asn; N), kyselinu aspartovou (Asp; D), cystein (Cys; C), kyselinu glutamovou (Glu; Q), glutamin (Gin; E), glycin (Gly; G), histidin (His; H), isoleucin (Ile; I), leucin (Leu; L), lysin (Lys; K), methionin (Met; M), fenylalanin (Phe; F), prolin (Pro; P), serin (Ser; S), threonin (Thr; T), tryptofan (Trp; W), tyrosin (Tyr; Y) a valin (Val; V). Obvyklé třípísmenkové a jednopísmenkové zkratky jsou uvedeny v závorkách. Užitečné jsou také následující modifikované aminokyseliny (třípísmenkové zkratky pro každou skupinu jsou uvedeny v závorkách): p benzoylfenylalanin (Bpa); p-(1-naftyl)alanin (1-Nal); p-(2-naftyl)alanin (2-Nal); β-cyklohexylalanin (Cha); 3,4-dichlorfenylalanin (3,4-Dcp); 4-fluorfenylalanin (4-Fpa); 4-nitrofenylalanin (4-Npa); 2-thienylalanin (Tha); 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-karboxylová kyselina (Tic); 3-benzothienylalanin (3-Bal); 4-kyanfenylalanin (4-Ypa); 4-jodfenylalanin (4-lpa); 4-bromfenylalanin (4-Rpa); 4,4'-bifenylalanin (Bip); omitin (Orn); sarcosin (Sar); pentafluorfenylalanin (Pfp) a β,β-difenylalanin (Dip). Pokud jde o skupiny uvedené na v obecném vzorci I a obecném vzorci A, skupiny, které jsou označeny jedním písmenem, mají význam jak jsou definovány a nevztahují se kjednopísmenovým aminokyselinám, které odpovídají těmto písmenům.

Písmeno D předcházející shora uvedené třípísmenkové zkratky, např. v D-Nal nebo D-Phe, označuje D-formu aminokyseliny. Písmeno L předcházející shora uvedené třípísmenové zkratky znamená přírodní L-formu aminokyseliny. Pro účely tohoto popisu, pokud není jinak uvedeno, nepřítomnost označení D nebo L znamená, že zkratka se týká jak D- tak L -formy. Kde se používá obvyklá jednopísmenková zkratka, velká písmena označují L-formu a označení malými písmeny znamenají Dformu, pokud není jinak uvedeno.

„Ac“ znamená acetyl (tj. CH3C(=O)-).

„Acylamino“ znamená skupinu R-C(=O)N„Acyloxy“ znamená skupinu R-C(=O)O-.

„Acylthio“ znamená skupinu R-C(=O)S-.

„Alkoxyskupina“ znamená kyslíkovou skupinu, která jako substituent nese uhlovodíkový řetězec, kde uhlovodíkový řetězec znamená alkyl nebo alken (tj. -O-alkyl nebo -O-alken). Mezi výhodné alkoxyskupiny patří (například) methoxyskupina (MeO), ethoxyskupina, propoxyskupina a allyloxyskupina.

„Alkylskupina“ znamená nasycený uhlovodíkový řetězec s 1 až 15 atomy uhlíku, s výhodou s 1 až 10, výhodněji s 1 až 4 atomy uhlíku. „Alken“ znamená uhlovodíkový řetězec s alespoň jednou (s výhodou pouze jednou) dvojnou vazbou atom uhlíku-atom uhlíku a se 2 až 15 atomy uhlíku, s výhodou se 2 až 10, výhodněji se 2 až 4 atomy uhlíku. „Alkyn“ znamená uhlovodíkový řetězec s alespoň jednou (s výhodou pouze jednou) trojnou vazbou mezi atomy uhlíku a se 2 až 15 atomy uhlíku, s výhodou se 2 až 10, výhodněji se 2 až 4 atomy uhlíku. Alkylové, alkenové a alkynové řetězce (zde dále souhrnně označované jako „uhlovodíkové řetězce“) mohou být přímé nebo rozvětvené a mohou být substituované nebo nesubstituované. Výhodné rozvětvené alkylové, alkenové a alkynové řetězce mají jednu nebo dvě větve, s výhodou jednu větev. Výhodnými řetězci jsou alkyly. Každý alkylový, alkenový a alkynový uhlovodíkový řetězec buď není substituován nebo je substituován 1 až 4 substituenty; jestliže jsou substituovány jsou s výhodou mono-, di- nebo tri-substituovány. Každý alkylový, alkenový a alkynový uhlovodíkový řetězec může být substituován atomem halogenu, hydroxyskupinou, aryloxyskupinou (např.

fenoxyskupinou), heteroaryloxyskupinou, acyloxyskupinou (např. acetoxyskupinou), karboxyskupinou, arylem (např. fenylem), heteroarylem, cykloalkylem, heterocykloalkylem, spirocyklickou skupinou, aminovou, amidovou, acylaminovou, ketonovou, thioketonovou nebo kyanovou skupinou nebo jakoukoliv jejich kombinací. Mezi výhodné ·· ·· ♦ · · · uhlovodíkové skupiny patří methyl (Me), ethyl, propyl, izopropyl, butyl, vinyl, allyl a butenyl.

„Nižší“ alkylová, alkenová nebo alkynová skupina, jak jsou zde označovány, (např. „nižší alkyl“) znamená řetězec s 1 až 6, s výhodou s 1 až 4 atomy uhlíku v případě alkylu a se 2 až 6, s výhodou se 2 až 4 atomy uhlíku v případě alkenu nebo alkynu.

„Alkylthioskupina“ znamená skupinu síry, která nese jako substituent uhlovodíkový řetězec, kde uhlovodíkový řetězec znamená alkyl nebo alken (tj. -S-alkyl nebo -S-alken). Mezi výhodné alkylthioskupiny patří (například) methylthioskupina (MeS) a ethylthioskupina.

„Arylskupina“ znamená aromatický uhlovodíkový kruh. Arylové kruhy znamenají monocyklický nebo kondenzovaný bicyklický kruhový systém. Monocyklické arylové kruhy obsahují 6 atomů uhlíku v kruhu. Monocyklické arylové kruhy jsou také nazývány fenylové kruhy. Bicyklické arylové kruhy obsahují od 8 do 17 atomů uhlíku, s výhodou 9 až 12 atomů uhlíku v kruhu. Mezi bicyklické arylové kruhy patří kruhové systémy, v nichž jeden kruh znamená aryl a druhý kruh znamená aryl, cykloalkyl nebo heterocykloalkyl. Výhodné bicyklické arylové kruhy obsahují 5-, 6- nebo 7 -členné kruhy kondenzované s 5-, 6- nebo 7 -člennými kruhy. Arylové kruhy bud’ nejsou substituovány nebo mohou být substituovány 1 až 4 substituenty na kruhu. Aryl může být substituován atomem halogenu, kyanovou skupinou, nitroskupinou, hydroxylem, karboxyskupinou, aminovou, acylaminovou, alkylovou, heteroalkylovou, halogenalkylovou, fenylovou skupinou, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo jakoukoliv jejich kombinací. Mezi výhodné arylové kruhy patří naftyiový, tolylový, xylylový a fenylový kruh. Nejvýhodnější skupinou arylového kruhu je feny!.

„Aryloxyskupina“ znamená atom kyslíku, který nese arylový substituent (tj. -0aryl). Mezi výhodné aryloxyskupiny patří (například) fenoxyskupina, naftyloxyskupina, methoxyfenoxyskupina a methylendioxyfenoxyskupina.

• · 4 44 4 • 444 #·· 44 4

4 4 · 444 44 4 • 4 4 44 44 444 4 4 • · · 4444 4444

4444 44 44 4· 44 „Bazické aminokyseliny“, jak se zde používají, znamenají His, Lys a Arg.

„Bc“ znamená butyryl (tj. CH₃CH2CH2C(=O)-).

„Cykloalkyl“ znamená nasycený nebo nenasycený uhlovodíkový kruh. Cykloalkylové kruhy nejsou aromatické. Cykloalkylová kruhy znamenají monocyklické nebo kondenzované systémy, spirosystémy nebo můstkové bicyklické kruhové systémy. Monocyklické cykloalkylové kruhy obsahují od 3 do 9 atomů uhlíku, s výhodou od 3 do 7 atomů uhlíku v kruhu. Bicyklické cykloalkylové kruhy obsahují od 7 do 17 atomů uhlíku, s výhodou od 7 do 12 atomů uhlíku v kruhu. Výhodné bicyklické cykloalkylové kruhy obsahují 4-, 5-, 6- nebo 7 -členné kruhy kondenzované s 5-, 6- nebo 7 -člennými kruhy. Cykloalkylové kruhy jsou buď nesubstituované nebo mohou být substituovány 1 až 4 substituentu na kruhu. Cykloalkyl může být substituován atomem halogenu, kyanovou skupinou, alkylem, heteroalkylem, halogenalkylem, fenylem, ketoskupinou, hydroxylem, karboxyskupinou, aminovou skupinou, acylaminovou skupinou, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo jakoukoliv jejich kombinací. Mezi výhodné cykloalkylové kruhy patří cyklopropyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

„Kondenzovaný“ znamená cyklické skupiny s alespoň dvěma společnými atomy kruhů, výhodný maximální počet kondenzovaných cyklů jsou tři.

„Atom halogenu“ znamená atom fluoru (F), chloru (Cl), bromu (Br) nebo jodu (I).

Heteroatom znamená atom dusíku, síry nebo kyslíku, na který může být vázána jedna nebo více skupin podle valence heteroatomu; v případech atomu dusíku může být na něj popřípadě vázán jeden atom kyslíku koordinační kovalentní vazbou, takže se vytvoří N-oxid. Skupiny, které obsahují více než jeden heteroatom, mohou obsahovat různé heteroatomy.

„Heteroalkyl“ znamená nasycený nebo nenasycený řetězec obsahující atom φφ ·Φ ·· ·· φ φ φ · · · · φ φ φ φ · ··· • · 9 9 9 9 9 • 99 ΦΦΦ

ΦΦ ΦΦΦ· ·· ·· φ φ ΦΦΦ· uhlíku a alespoň jeden heteroatom, při čemž žádné dva heteroatomy neleží vedle sebe. Heteroalkylové řetězce obsahují od 2 do 15 atomů (atomů uhlíku a heteroatomů) v řetězci, s výhodou 2 až 10, výhodněji 2 až 5. Mezi heteroalkyly patří například alkoxyskupiny (tj. -O-alkyl nebo -O-heteroalkyl). Heteroalkylové řetězce mohou být přímé nebo rozvětvené. Výhodné rozvětvené heteroalkyly mají jednu neb dvě větve, s výhodou jednu větev. Výhodný heteroalkyl je nasycený. Nenasycený heteroalkyl má jednu nebo více dvojných vazeb (zde také označovaný jako „heteroalkenyl“) a/nebo jednu nebo více trojných vazeb (zde také označovaný jako heteroalkynyl). Výhodné nenasycené heteroalkyly mají jednu nebo dvě dvojné vazby nebo jednu trojnou vazbu, výhodněji jednu dvojnou vazbu. Heteroalkylové řetězce mohou být nesubstituované nebo substituované ale mohou být substituované jedním až čtyřmi substituenty.

Výhodné substituované heteroalkyly jsou mono-, di- nebo tri-substituovány. Heteroalkyl může být substituován nižším alkylem, atomem halogenu, hydroxylem, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, acyloxyskupinou, karboxyskupinou, monocyklickou arylovou skupinou, heteroarylem, cykloalkylem, heterocykloalkylem, spirocyklem, aminovou skupinou, acylaminovou skupinou, amidovou skupinou, ketoskupinou, thioketoskupinou, kyanovou skupinou nebo jakoukoliv jejich kombinací.

„Heterocykloalkyl“ znamená nasycený nebo nenasycený, nearomatický kruh obsahující atomy uhlíku a 1 až 4 (s výhodou 1 až 3) heteroatomy v kruhu, pň čemž žádné dva heteroatomy neleží v kruhu vedle sebe a žádný atom uhlíku, který má vedle sebe heteroatom, nemá k sobě vázanou hydroxylovou, aminovou nebo thiolovou skupinu. Heterocykloalkylové kruhy jsou monocyklické nebojsou kondenzované, mústkové nebo spirobicyklické kruhové systémy. Monocyklické heterocykloalkylové kruhy obsahují od 4 do 9 atomů (atomů uhlíku nebo heteroatomů), s výhodou od 5 do 7 atomů v kruhu. Bicylické heterocykloalkylové kruhy obsahují od 7 do 17 atomů, s výhodou 7 až 12 atomů v kruhu. Bicyklické heterocykloalkylové kruhy mohou být kondenzované systémy, spirosystémy nebo mústkové kruhové systémy. Výhodné bicyklické heterocykloalkylové kruhy obsahují 5-, 6- nebo 7 -členné kruhy kondenzované s 5-, 6- nebo 7 -člennými kruhy. Heterocyklické kruhy mohou být nesubstituovány nebo mohou být na kruhu substituovány jedním až čtyřmi substituenty na kruhu .

·· «φ ΦΦΦΦ φ φ φ · · φ · φφφ φφφ · •φ ΦΦΦΦ • φ • φ φ φφφ φ φ φ φ φ φ φ φ · ·φφ φ

HeterocykloalkyI může být substituován atomem halogenu, kyanovou skupinou, hydroxylem, karboxyskupinou, ketoskupinou, thioketoskupinou, aminovou skupinou, acylaminovou skupinou, acylovou skupinou, amidovou skupinou, alkylem, heteroalkylem, halogenalkylem, fenylem, fenoxyskupínou nebo jakoukoliv jejich kombinací. Mezi výhodné substituenty na heterocykloalkylu patří atom fluoru a alkyl.

„Heteroaryl“ znamená aromatický kruh obsahující atomy uhlíku a 1 až 4 heteroatomy v kruhu. Heteroarylové kruhy znamenají monocyklické nebo kondenzované bicyklické kruhové systémy. Monocyklické heteroarylové kruhy obsahují od 5 do 9 atomů (atomů uhlíku a heteroatomů), s výhodou 5 nebo 6 atomů, v kruhu. Bicyklické heteroarylové kruhy obsahují od 8 do 17 atomů, s výhodou od 8 do 12 atomů v kruhu. Mezi bicyklické heteroarylové kruhy patří kruhové systémy, v nichž jeden kruh znamená heteroaryl a další kruh znamená aryl, heteroaryl, cykloalkyl nebo heterocykloalkyl. Výhodné bicyklické heteroarylové kruhové systémy obsahují 5-, 6- nebo 7 -členné kruhy kondenzované s 5-, 6- nebo 7 -člennými kruhy. Heteroarylové kruhy mohou být nesubstituované, nebo mohou být substituované jedním až čtyřmi substituenty na kruhu. Heteroaryl může být substituován atomem halogenu, kyanovou skupinou, nitroskupinou, hydroxylem, karboxyskupinou, aminovou skupinou, acylaminovou skupinou, alkylem, heteroalkylem, halogenalkylem, fenylem, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo jakoukoliv jejich kombinací. Mezi výhodné heteroarylové kruhy patří thienyl, thiazolo, imidazyl, purinyl, pyrimídyl, pyridyl a furanyl.

„MC-4 agonista“ a „MC-3 agonista“, jak se zde používají, znamenají sloučeninu s afinitou na MC-4 receptor nebo MC-3 receptor, která vede k měřitelné biologické aktivitě v buňkách, tkáních nebo organismech, které obsahují MC-4 nebo MC-3 receptor. Výraz „MC-4/MC-3 agonista“, jak se zde používá, znamená sloučeninu, která je jak MC-4 agonista, tak MC-3 agonista, jak se tyto výrazy používají v tomto dokumentu. Testy, které ukazují MC-4 a/nebo MC-3 agonistickou aktivitu sloučenin jsou ve stavu techniky dobře známé. Jedním zvláště užitečným testem je BioTrak TM cAMP přímý enzymový imunotestovací systém (EIA) od Amersham Pharmacia Biotech, který kvantitativně vyhodnocuje cAMP odpověď buněk na MC ligandy. Další užitečná zkouška je Tropix

4444

444 4 4 4 cAMP Screen™, který je dostupný od Tropixy. Tyto systémy umožňují jednoduché kvantitativní stanovení celkového buněčného cAMP měření v buňkách vystavených působení selektivních ligandů. Stručně shrnuto: HEK buňky stabilně transfektované MC-1, MC-3 nebo MC-4 receptory se plátují na mikrotitrační desky s 96 jamkami a nechají se na nich růst přes noc. Buňky se uvedou do kontaktu s příslušným MC ligandem 1 hodinu a potom se lyžují. Frakce lyžovaného buněčného extraktu se přenese na testovací desku. Podle instrukcí sestavy se provede ELISA test. Každá deska obsahuje řady cAMP standardů pro výpočet standardní křivky a rovněž plného MC agonisty jako positivní kontrolu pro každý MC receptor. cAMPA aktivita se vypočte jako % z maximální cAMP aktivity plné MC agonistové kontroly.

„MC-4 antagonista a „MC-3 antagonista“, jak se zde používají, znamenají sloučeninu s afinitou na MC-4 receptor nebo MC-3 receptor, a blokuje stimulaci známým MC agonistem. Výraz „MC-4/MC-3 antagonista“, jak se zde používá, znamená sloučeninu, která je jak MC-4 antagonista, tak MC-3 antagonista, jak se tyto výrazy používají v tomto dokumentu. Testy, které ukazují MC-4 a/nebo MC-3 antagonistickou aktivitu sloučenin jsou ve stavu techniky dobře známé. Jedním zvláště užitečným testem je kompetitivní vazba za použití europiem značené NPD-MSH. Stručně shrnuto: HEK buňky stabilně transfektované MC-1, MC-3, MC-4 nebo MC-5 receptory se plátují na mikrotitrační desky s 96 jamkami a nechají se na nich růst přes noc. Buňky se uvedou do kontaktu s příslušným MC ligandem po dobu 60 minut v přítomnosti europiem značeného NDP-MSH a poté se promyjí několikrát, přidá se zvýrazňovací roztok a měří se fluorescence. Hodnoty IC50 a Ki se počítají na každém receptoru pro každou MC ligandu za použití grafického programu, jako je GraphPad PrismTM (GraphPad Software lne., San Diego, CA).

„MC-3 receptor“ a „MC-4 receptor“, jak se zde používají, znamenají známé MC-3 a MC-4 receptory, jejich připojené varianty a nepopsané receptory. MC-3 receptory jsou popsány Gantzem a spol., viz shora (lidský MC-3); Desarnaudem a spol., viz shora (myší MC-3) a L. Reyfussem a spol.: „Identification of a Receptor for Gamma Melanotropin and Other Proopiomelanocortin Peptides in the Hypothalamus and Limbic φφ φφ φφ φφ φφφφ

System“, Proč. Nati. Acad. Sci., USA 1993, 90, str. 8856 až 8860 (krysí MC-3). MC-4 receptory jsou popsány Gantzem a spol, viz shora (lidský MC-4), J. D, Alvarem a spol.: „Morphine Down-Regulates Melanocortin-4 Receptor Expression in brain Regions that Mediate Opiáte Addiction“, Mol-Pharmacol., září 1966, 50 (3), str. 583 - 591 (krysí MC-4), a Takeuchi, S. a Takahashi, S.: „Melanocortin Receptor Genes in the ChickenTissue Distributions“, Gen-Comp-Endocrínol. 1998, listopad, 112 (2), str. 220 -231 (kuřecí MC-4).

„Měřitelný“, jak se zde používá, znamená, že biologický účinek je jak reprodukovatelný, tak významně odlišný od variability nulové hodnoty testu.

„Farmaceuticky přijatelná sůl“ znamená kationtovou sůl tvořenou na jakékoliv kyselinové skupině (např. karboxylové kyselině) nebo aniontovou sůl vytvořenou na jakékoliv bazické (např. aminové) skupině. V oblasti techniky jsou známy mnohé takové soli, jak je popsáno ve Mezinárodní patentové publikaci 87/05297 (Johnston a spol.), publikované 11. září 1987, která je zde zahrnuta jako odkaz. Mezi výhodné kationtové soli patří soli alkalických kovů (jako je sodná a draselná), soli kovů alkalických zemin (jako je hořčík a vápník) a organické soli. Mezi výhodné aniontové soli patří halogenidy (jako jsou chloridové soli), sulfonáty, karboxyláty, fosfáty, trifluoracetáty a podobné. U těchto solí si lze představit takové soli, které vnesou optickou aktivitu u sloučenin, kde původně nebyla. Například chirální vinanová sůl se může připravit ze sloučenin podle tohoto vynálezu a tato definice zahrnuje také chirální soli.

Takové soli jsou dobře pochopitelné odborníkům z oblasti techniky a zručný odborník je schopen připravit jakýkoliv počet solí na základě znalostí z oblasti techniky. Dále si je třeba uvědomit, že zručný odborník může preferovat jednu sůl před jinou z důvodů rozpustnosti, stability, snadnosti sestavování do prostředku a podobných. Stanovení a optimalizace takových solí je v rozsahu schopností a praxe odborníka.

„Selektivní“, jak se zde používá, znamená, že má aktivační preferenci pro specifický receptor před jinými receptory, která může být kvantitativně vyhodnocena ·« ···· ·· ♦· ·· ·· • * ' · ··· · • · · · · ··· · • · · · · · · · · · • · · · · · · · • · · ·* · · * ·· testy na celých buňkách, tkáni nebo organismu, které demonstrují receptorovou aktivitu, jako je shora uvedený systém cAMP enzymového imunotestu (EIA). Selektivita sloučenin se stanoví ze srovnání její hodnoty EC50 k relevantním receptorům, na které se odkazuje. Pojem „selektivní na jiné MC receptory“, jak se zde používá, znamená selektivní ke všem melanokortinovým receptorům, včetně MC-1, MC-2 a MC-5 receptorů. Například sloučenina, která má EC50 8 nM na MC-4 receptor a ECso> 80 nM na MC-1, MC-2 a MC-5 receptory, má poměr selektivity MC-4 receptorů k jiným MC receptorům alespoň 1:10. Dále šije třeba uvědomit, že selektivita může být vztažena také na jeden z receptorů MC-1, MC-2 nebo MC-5 samostatně. Například sloučenina, která má EC50 8 nM na MC-4 receptor a EC50 80 nM na MC-1 receptor, má poměr selektivity MC-4 receptorů k MC-1 receptorů 1:10. Taková sloučenina je selektivní vůči MC-1 receptorů bez ohledu na hodnotu EC50 pro MC-2 nebo MC-5. Selektivita je popsána podrobněji níže a může být stanovena například pomocí programu Prism v 2.0, který je dostupný od GraphPad, lne.

„Solvát“ znamená komplex vytvořený kombinací rozpuštěné látky (např. MC4/MC-3 receptorového ligandu podle předloženého vynálezu) a rozpouštědla (např. vody). Viz J. Honig a spol.: The Van Nostrand Chemisťs Dictionary, strana 650 (1953). Mezi farmaceuticky přijatelná rozpouštědla používaná podle tohoto vynálezu patří ta rozpouštědla, která neinterferují s biologickou aktivitou sloučeniny (např. voda, ethanol, kyselina octová, Ν,Ν-dimethylformamid a další známá rozpouštědla nebo rozpouštědla snadno stanovitelná zručným odborníkem).

Spirocyklus znamená alkylový nebo heteroalkylový diradikálový substituent alkylu nebo heteroalkylu, v němž je uvedený diradikálový substituent připojen geminálně a uvedený diradikálový substituent tvoří kruh, uvedený kruh obsahuje 4 až 8 atomů (uhlíku nebo heteroatomů), s výhodou 5 nebo 6 atomů.

II. Sloučeniny:

Sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou ligandy MC-4 a nebo MC-3 •» ··»» ·· ·* ř · ·

I * ♦··

I · · <

» · « <

99 receptoru obecného vzorce I,

v němž R², R⁴, R⁴, R⁵, R⁶, R⁶, R⁷, R⁸, R⁸, R⁹ R⁹, R¹⁰, znamenají jak je popsáno shora v části popis vynálezu.

Ar, Z¹, Z², Z³, X, B, D, p,q, ras

Vedle sloučenin popsaných obecným vzorcem I se předpokládá, že zbytky peptidového jádra mohou být pegylovány, aby se dosáhly zvýšené terapeutické příznivé vlastnosti, jako je například zvýšená účinnost prodloužením poločasu in vivo. Způsoby pegylace peptidů jsou v oblasti techniky dobře známy. Například pegylace peptidů je popsána v následujících odkazech, jejichž popis je zde zahrnut jako odkaz: Lu, Y. A. a spol.: „Pegylated peptides. II. Solid-phase synthesis of amino-, carboxy- and side-chain pegylated peptides“, Int. J. Pept. Protein Res. 1994, 43 (2), str. 127 až136; Lu, Y. A. a spol.: „Pegylated peptides. I. Solid-phase synthesis of N-alpha-pegylated peptides using Fmoc stratégy“, Pept. Res. 1993, 6(3), str. 140 až 146; Felix A. M. a spol.: „Pegylated peptides. IV. Enhanced biological activity of site-directed pegylated GRF analogs.“, Int.

J. Pept. Protein Res. 1995,46 (3 až 4), str. 253 až 264; Gaertner, H. F. a spol.: Sitespecific attachment of functionalized poly(ethylen glycol) to the amino terminus of proteins“, Bioconjug Chem. 1996, 7 (1), str. 38 až 44; Tsutsumi Y. a spol.: „PEGylation of interleukin-6 effectively increases its thrombopoietic potency“, Thromb Haemost.

1997, 77(1), str. 168 až 173; Francis G. E. a spol.: „PEGylation of cytokines and other therapeutic proteins and peptides; the importance of biological optimisation of coupling techniques“, Int. J. Hematol. 1998, 68 (1), 1 až 18; Roberts, M. J. a spol.: „Attachment of degradable poly(ethylen glycol) to proteins has the potential to increase therapeutic efficiacy“, J. Pharm. Sci. 1998, 87 (11), str.1440 až 1445, aTan, Y. a spol.:

„Polyethylene glycol conjugation of recombinant methioninase for cancer therapy“, ·♦ ··«* ·· <*« *· · Λ • · 9 · * · · • · · · · »*· « Φ · · · · · · Φ • · · * » · *>

• Φ ·»· · *· ·*

Protein Expr. Purif. 1998, 12 (1), str. 45 až 52. Sloučeniny obecného vzorce I mohou být pegylovány přímo nebo může být ke sloučeninám přidáno vazebné raménko, aby se pegylace usnadnila.

S odkazem na sloučeninu obecného vzorce I, uvádí se následující neomezující seznam výhodných substituentů:

X se vybere ze souboru, který tvoří vodík, fluor, aryloxy, acyloxy, OR¹, SR¹, -NR¹R¹ a -CHR¹R¹. Výhodně je vodík (když D není také vodík), -NR¹R¹ a -CHR¹R¹. Výhodněji je -NR¹R¹ a -CHR¹R¹. Ještě výhodněji je -NR¹R¹.

R¹ a R¹ se nezávisle vyberou ze souboru, který tvoří vodík, alkyl a acyl. Výhodně je R¹ vodík nebo alkyl a R¹ je acyl.

R² se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, halogen a heteroalkyl. Výhodně je vodík. Alternativně, dvě po sobě jdoucí části R² nebo dvě po sobě jdoucí části R² a R³ mohou být spojeny za vzniku 3 až 8 členného karbocyklického nebo heterocyklického kruhu. V další alternativě R² vázané k atomu uhlíku, který je vázán k X a Z¹ a R⁵ mohou být případně spojeny za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu, který je kondenzován k fenylovému kruhu J. V další alternativě, R² vázané k atomu uhlíku, který je vázán ke kruhu A, může být spojené s R⁷ za vzniku kondenzovaného kruhu Ar. V další alternativě, R² vázané k atomu uhlíku, který je vázán k Z² a Z³ může být případně spojené s R⁸ za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu. Ještě v další alternativě R² vázané na atom uhlíku, který se váže k Z³ a D může být případně spojené s R¹⁰ za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu. S ohledem na shora uvedené, výhodné je když R² netvoří kruh s jiným R² a kde R² netvoří kruh s R³, R⁷ nebo R⁸ Výhodné kruhy tvořené mezi R² a jinou částí budou mít 5 až 8 členů v kruhu.

Každé Z¹, Z² a Z³ se nezávisle vybere z -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -S(O)aC(R³)(R^3a)-, kde a je 0, 1 nebo 2; -C(R³)(R^3a)S(O)b, kde b je 0, 1 nebo 2; -N(R^3e)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -N(R^3d) C(O)-; -C(O)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)C(O)-; -C(R³)(R^3a)C (R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -OC-; -SO2N(R^3d)-; -N(R^3d)SO2-; -C(R³)(R^3a)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-; -N(R^3d)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(O^3f)N(R^3d)-; -P(=O)(OR^3f)O-; -O-P(=O)(OR^3f)-; cykloalkyl obsahující 3 až 8 atomů •0 0000

«0 00 ·· **

0 0 0 · * · • 0 « 0 0 00·

0 0 0 ··«

0 0 · · · Μ • 0 0400 ·· ·· uhlíku v kruhu a heterocykloalkyl obsahující 4 až 8 atomů v kruhu. Výhodně jsou -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -S(O)aC(R³)(R^3a)-, kde a je 2; -C(R³)(R^3a)S(O)b, kde b je 2; -N(R^3e)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -N(R^3d) C(O)-;

-C(R³)(R^3a)C(R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -OC-; -SO2N(R^3d)-; -N(R^3d)SO2-;

-C(R³)(R^3a)P(=O)(OR^3f)- a -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-. Výhodněji jsou OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -C(R³)(R^3a)C(R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a); -CAC-; -SO₂N(R^3d)-; a -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-. Nejvýhodněji jsou -C(R³)(R^3a)O-; -C(O)N(R^3d)- a -C(R³)(R^3a)C(R^3b)(R^3c)-. V dalším aspektu jsou výhodné ty sloučeniny, kde alespoň jedno ze Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d). Výhodnější jsou sloučeniny, kde alespoň jedno ze Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d)-. Výhodnější jsou také sloučeniny, kde (i) alespoň jedno Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d)- a (ii)(a) X je jiné než -NR¹R¹', kde R¹'je acyl a/nebo (b) D je jiné než -C(O)R¹¹.

Každé R³, R^3a, R^3b a R^3c, pokud jsou přítomné, se nezávisle vyberou ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy, acyloxy, thiol, alkylthio, acylthio, arylthio, amino, alkylamino, acylamino a alkyl. Výhodně jsou vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy a alkyl. Nejvýhodněji je každé z R³, R^3a, R^3b a R^3c vodík.

R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu a arylu. Výhodně je R^3d vodík nebo alkyl.

R^3e, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu, arylu a acylu. Výhodně je ^3e vodík nebo alkyl.

R^3f se vybere z vodíku a alkylu. Když je R^3f alkyl, výhodně je rozvětvený alkyl, výhodně izopropyl.

p je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5. Výhodně je p 1 nebo 2, výhodněji je 1.

Když p je větší než 0, každé R⁴ a R⁴ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, arylu, halogenu (výhodně fluoru), hydroxy, alkoxy, amino a acylamino. Když p je větší než 1, dvě části R⁴, mohou spolu s atomy uhlíku, ke kterým jsou vázány, tvořit heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh. Když p je větší než 1, části R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁴ a R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba. Výhodně, každé R⁴, když je přítomné, je vodík a každé R⁴ když je • · • · přítomné je vodík nebo alkyl. Nejvýhodnější případ je, když není přítomná žádná nenasycená vazba v řetězci, vázající J ke X-obsahujícímu atomu uhlíku sloučeniny vzorce I.

R⁵ představuje pět substituentů (tj. polohy 2-6) na fenylovém kruhu J, kde každé R⁵ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, halo, thiol, -OR¹², -SR¹², -SO₂N(R¹²)(R¹²), -N(R¹²)(R¹²'), alykl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl. Každé R¹² a R¹²' se nezávisle vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík, alkyl, acyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; nebo dvě části R⁵ případně spolu tvoří karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který je kondenzován k fenylovému kruhu J.

Výhodně jsou části R⁵ vodík, hydroxy, halogen, thiol, -OR¹², kde R¹²je nižší alkyl nebo acyl, -SO2N(R¹²)(R¹²), -N(R¹²)(R¹²'), alkyl, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl. Výhodněji jsou R⁵ části vodík, hydroxy, halogen, thiol, SO₂N(R¹²)(R¹²'), kde obě R¹² a R¹²' jsou vodík, -N(R¹²)(R¹²'), kde každé R¹² a R¹²'jsou vodík nebo alkyl. Ještě výhodněji jsou části R⁵ vodík, hydroxy, chlor, fluor, -N(R¹²)(R¹²'), kde R¹² a R¹² jsou každé vodík nebo alkyl. Nejvýhodněji jsou části R⁵ vodík, hydroxy, chlor, fluor a nitro.

S ohledem na kruh J, výhodné je když jsou čtyři části R⁵ vodík. Také je výhodné, když 4-poloha je jiná než vodík. Nejvýhodněji je, když 4-poloha je jiná než vodík a zbývající čtyři polohy jsou vodík.

q je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5. Výhodně je q 0, 1 nebo 2, nejvýhodněji je q 1.

Když q je větší než 0, každé R⁶ a R⁶ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen (výhodně fluor), hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino. Když q je větší než 1, dvě části R⁶, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh. Když q je větší než 1, mohou být části R⁶ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁶ a R⁶ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba. Výhodně je každé R⁶, pokud je přítomné vodík, a každé R⁶ pokud je přítomné, je vodík nebo alkyl. Nejvýhodněji případ nastává, když není žádná nenasycená vazba v řetězci vázající kruh Ar k atomu uhlíku vzorce I, který je vázán k Z¹ to to • to • to a Z².

Ar je arylový nebo heteroarylový kruh vybraný ze skupiny, kterou tvoří fenyl, thiofen, furan, oxazol, thiazol, pyrrol a pyridin. Ar je výhodně fenyl, thiofen nebofuran. Ar je nejvýhodněji fenyl.

R⁷ představuje substituenty na kruhu Ar, kde každé R⁷ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík; halogen; -NR¹³R¹³, kde každé R¹³ a R¹³ se nezávisle vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík nebo alkyl; alkyl; acyl; alken; alkyn; kyano; nitro; aryl; heteroaryl; cykloalkyl a heterocykloalkyl. Případně mohou být dvě části R⁷ spojeny za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu kondenzovaného ke kruhu Ar.

Když je Ar fenyl, výhodně jsou čtyři z pěti částí R⁷ vodík nebo všech pět částí R⁷ je vodík. Rovněž je výhodné, když dvě z částí R⁷ se vyberou ze souboru, který tvoří fluor, chlor, kyano, brom, jod, nitro, alkoxy a alkyl; nebo dvě z částí R⁷ se spojí za vzniku heterocyklického kruhu kondenzovaného k fenylovému kruhu. Výhodněji, 4-poloha fenylového kruhu je vodík, fluor, chlor, kyano, brom, jod, nitro a alkyl a zbývající čtyři polohy jsou vodík. Nejvýhodněji 4-poloha fenylového kruhu je vodík nebo fluor a zbývající čtyři substituenty jsou vodík.

Když jsou obě skupiny Z¹ a Z² skupina -C(O)N(R^3d), výhodné sloučeniny jsou kde atom uhlíku, který je vázán k Z¹ a Z² je v R konfiguraci podle Cahn-Ingold-Prelogových pravidel nomenklatury.

r je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 nebo 7. Výhodně je r 2, 3, 4 nebo 5. Výhodněji rje 2, 3 nebo

5. Nejvýhodněji je r rovno 3.

Každé R⁸ a R⁸ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, halogenu (výhodně fluoru), hydroxy, alkoxy a aminoskupiny. Případně, když rje větší než 1, dvě části R⁸, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh. Výhodně každé R⁸ a R⁸ se nezávisle vybere z vodíku a alkylu. Nejvýhodněji jsou každé R⁸ a R⁸ vodík. Případně, když rje větší než 1, mohou být části R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁸ a R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba.

B se vybere ze souboru, který tvoří -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵), =0 nebo =SNR¹⁶R¹⁷, -NR^2oR²¹, kyano (-CN), heteroarylový kruh, například thiofen, alkyl nebo dialkylamin, • · • · • 4 heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodně je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodněji je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, kyano, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodněji je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, kyano, triazol a imidazol.

R¹⁴ a R¹⁵ se nezávisle vyberou z vodíku, alkylu, alkenu a alkynu. Výhodně jsou vodík a alkyl. R¹⁶ a R¹⁷ se nezávisle vyberou z vodíku, alkylu, alkenu nebo alkynu. Výhodně jsou vodík a alkyl. R²⁰ a R²¹ se nezávisle vyberou z vodíku, alkylu, alkenu nebo alkynu. Výhodně jsou vodík a alkyl.

Alternativně, kombinace dvou nebo více R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ vytváří monocyklický nebo bicyklický kruh. Například R¹⁴ a R¹⁵ mohou společně s atomy ke kterým jsou vázány tvořit heterocykloalkyl nebo heteroaryl. Rovněž R¹⁴ a R¹⁶ mohou společně s atomy ke kterým jsou vázány tvořit heterocykloalkyl nebo heteroaryl. Rovněž R¹⁵ a R¹⁶ mohou společně s atomy ke kterým jsou vázány tvořit kruh. Rovněž R¹⁶ a R¹⁷ mohou případ společně s atomy ke kterým jsou vázány tvoňt heterocykloalkyl nebo heteroaryl. Výhodné je, když R¹⁵ a R¹⁶ jsou spojeny a tvoří kruh.

s je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5. Výhodně je s 1 nebo 2, výhodněji 1.

Když s je větší než 0, každé R⁹ a R⁹ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen (výhodně fluor), hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino. Výhodně každé R⁹, když je přítomné, je vodík a každé R⁹ , když je přítomné je vodík nebo alkyl. Případně když s je větší než 1, dvě části R⁹, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh.

Také, když s je větší než 1, mohou být části R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba. Také když s je větší než 1, obě části R⁹ a R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba. Nejvýhodnější je případ, kdy není přítomná žádná nenasycená vazba v řetězci vázající R¹⁰ k atomu uhlíku obsahující D sloučeniny obecného vzorce I.

R¹⁰ se vybere ze skupiny, kterou tvoří případně substituovaný bicyklický arylový ·· ···· • 4 kruh a případně substituovaný bicyklický heteroarylový kruh. Výhodně bicyklické arylové kruhy zahrnují 1-naftyl, 2-naftyl, indan, 1H-inden, benzocyklobutan a benzocyklobuten. Výhodně bicyklické heteroarylové kruhy zahrnují indol, indolin, pyridin, dihydropyridin, oktahydropyridin, benzothiofen, benzofuran, benzimidazol, benzopyran, chinolin, chinolon a izochinolin. Výhodněji R¹⁰ je 1-naftyl, 2-naftyl, indol, indan, 1H-inden, benzothiofen, benzofuran a benzopyran. Nejvýhodněji je R¹⁰ 1-naftyl, 2-naftyl nebo indol (zejména 3-indol).

D se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří, vodík, fluor, hydroxy, thiol, alkoxy, aryloxy, alkylthio, acyloxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a-C(S)R¹¹. Výhodně je fluor, hydroxy, thiol, alkoxy, aryloxy, alkylthio, acyloxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹. Výhodněji je alkoxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹. Ještě výhodněji je -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹. Nejvýhodněji je -C(O)R¹¹.

R¹¹ se vybere ze skupiny, kterou tvoří amino; alkylamino; -NHOR¹⁸, kde R¹⁸ se vybere ze souboru, který tvoří vodík a alkyl; -N(R¹⁹)CH2C(O)NH2, kde R¹⁹ je alkyl (výhodně nižší alkyl); -NHCH2CH₂OH; -N(CH₃)CH₂CH₂OH; a -NHNHC(=Y)NH₂, kde Y se vybere z O, S a NH. Výhodně je R¹¹ amino; alkylamino; -NHOR¹⁸, kde R¹⁸ se vybere z vodíku a alkylu (výhodně vodíku); -N(R¹⁹)CH2C(O)NH2, kde R¹⁹ je alkyl (výhodně nižší alkyl); -NHCH2CH₂OH; a -N(CH3)CH₂CH₂OH. Výhodně je R¹¹ amino; alkylamino; -NHOR¹⁸, kde R¹⁸se vybere z vodíku a alkylu (výhodně vodíku); a - N(R¹⁹)CH₂C(O)NH₂, kde R¹⁹ je alkyl. Nejvýhodněji je amino a alkylamino.

Jak je uvedeno vzhledem k obecnému vzorce I, jestliže alespoň jedno ze Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d)- nebo -N(R^3d)C(O)-, potom X a D mohou být případně spolu vázány přes vazebnou část L, která obsahuje kovalentní vazby nebo kovalentní vazby a iontovou vazbu, takže vznikne cyklický peptidový analog. Takové peptidy mají strukturu následujícího obecného vzorce II:

·4 ··

4 4 4

44

Pokud jde o cyklické sloučeniny obsahující vazebnou část L, můstek spojující X a D může být ve formě kovalentních vazeb nebo alternativně může zahrnovat solný můstek pocházející z vytvoření iontových vazeb. Vazebná část může být svoji povahou zcela peptidická (tj. obsahující pouze aminokyseliny), nepeptidická (tj. neobsahující žádnou aminokyselinu) nebo může zahrnovat jak peptidickou tak nepeptidickou část zavedené dobře známou chemií. Vazebná část může obsahovat alifatické skupiny, aromatické skupiny nebo heteroaromatické skupiny nebo jakoukoliv jejich kombinaci.

V jednom provedení vazebná část s výhodou bude obsahovat omega-aminokyseliny s dlouhým řetězcem, v nichž jsou aminová a karboxylové skupina odděleny 4 až 24 methylenovými skupinami, nebo kombinaci uvedených omega-aminokyselin a aminobenzoových kyselin.

V jiném provedení, které je výhodným provedením, bude vazebná část obsahovat všechny kovalentní vazby, jako je amidová vazba. Například vazebná část bude obsahovat amid vytvořený chemickým zkondenzováním aminové skupiny na postranním řetězci aminokyselin, jako je Lys nebo Orn a karboxylové skupiny na postranním řetězci aminokyselinové skupiny, jako je Asp nebo Glu. Vazebná část může také obsahovat amid vytvořený mezi aminovou a karboxylovou skupinou napojenými na α-atom uhlíku můstkové části aminokyselin (zde dále označované jako „α-aminová“ část aminokyseliny nebo „α-karboxylová“ část aminokyseliny). V jiné alternativě vazebná část může obsahovat amid vytvořený mezi jakoukoliv kombinací aminové skupiny v postranním řetězci nebo karboxylovou skupinou v postranním řetězci a α-aminovou a α-karboxylovou skupinou. Vazebné zbytky mohou znamenat struktury obsahující aminovou nebo karboxylovou skupinu jinou než přírodní aminokyseliny, mezi které patří např. 6-aminohexanová kyselina, jako zbytek obsahující aminovou skupinu, a kyselina jantarová, jako zbytek obsahující karboxylovou skupinu. Dále pak tento vynález umožňuje také vázání za použití jiných typů funkčních skupin. V tomto případě vazebné zbytky mohou obsahovat rozmanité skupiny a substituenty, mezi které patří alifatické, heteroalkylové, aromatické a heterocyklické skupiny. Jestliže je kovalentně navázána, může vazebná část obsahovat, nikoliv však s omezením, amid, ester, ether, thioether, aminoalkyl, aminoaryl, alkyl, jiný heteroalkyl, alken, alkyn, heterocykloalkyl, aryl a *· ·* ·· ···· • 0

heteroaryl. Výhodné může vazebná část zahrnovat ether, aminoalkyl, aminoaryl, alkyl, jiný heteroalkyl, alken, alkyn, heterocykloalkyl, aryl a heteroaryl. Výhodněji může vazebná část zahrnovat ether, aminoalkyl, alkyl, alken, a alkyn. Pokud L obsahuje kovalentní vazby, výhodné jsou sloučeniny obsahující 12 až 32 atomů v kruhu, výhodnější jsou sloučeniny obsahující 22 až 28 atomů v kruhu.

Vazebná část může alternativně znamenat iontovou vazbu/asociaci, které zvýhodňuje cyklickou strukturu. Tento „iontový“ můstek obsahuje bazické nebo kyselé funkce tvořící sůl. Například tento můstek může obsahovat iontovou vazbu vytvořenou mezi aminoskupinou na postranním řetězci aminokyselin, jako je Lys nebo Om a karboxylovou skupinou na postranním řetězci aminokyselinového zbytku, jako je Asp nebo Glu. Vazebná část může také alternativně obsahovat iontovou vazbu vytvořenou mezi aminovou a karboxylátovou skupinou vázanou na α-atom uhlíku vazebné části aminokyselin. V jiné alternativě vazebná skupina může obsahovat amid vytvořený mezi jakoukoliv kombinací aminové skupiny na postranním řetězci nebo karboxylové skupiny na postranním řetězci a a-aminoskupinou a α-karboxylovou skupinou. Jestliže L obsahuje iontovou vazbu, vzniklý kruh bude výhodně obsahovat od 22 do 28 atomů uhlíku.

Je třeba si uvědomit, že jakékoliv volné peptidové α-karboxyskupiny a a-aminové skupiny (tj. α-karboxyskupina a α-aminová skupina aminokyseliny), které nejsou zahrnuty v tvorbě kruhu, mohou být popřípadě zahrnuty v tvorbě karboxyamidové nebo acylaminové skupiny. Nejvýhodnější sloučeniny obsahující L jsou analogy, kde X a D tvoří kovalentně vázané cyklické struktury.

Pokud se týká předkládaných sloučenin obecně, i když alkylové, heteroalkylové, cykloalkylová a heterocykloalkylové skupiny mohou být substituovány hydroxy, amino a amidovými skupinami, jak je uvedeno shora, následující skupiny nejsou v předkládaném vynálezu:

1. Enoly (OH skupina vázaná k atomu uhlíku nesoucímu dvojnou vazbu).

2. Aminoskupiny vázané k atomu uhlíku nesoucímu dvojnou vazbu (s výjimkou • 9 99··

9· • ·

4 · ··· • 4 4 ·· 44* 4 • * · • 4 444

4 «4

4 4

44 vinylogózních amidů).

3. Více než jedna hydroxy, amino nebo amidoskupina vázaná k jednomu atomu uhlíku (s výjimkou kde jsou dva atomy dusíku vázané k jednomu atomu uhlíku a všechny tři atomy jsou atomy v heterocyklickém kruhu).

4. Hydroxy, amino nebo amidoskupina je vázaná k sp³-hybridizovanému uhlíku, ke kterému je dále vázán heteroatom.

5. Hydroxy, amino nebo amidoskupina vázaná k atomu uhlíku, ke kterému je dále vázán atom halogenu.

Výhodná podtřída sloučenin obecného vzorce I, kde žádná vazebná část L netvoří makrocyklický kruh jsou sloučeniny mající následující obecný vzorec A:

\ i

1'Z

O O O

II II II „

- Z — CH— C- NH- CH- C- NH- CH- C- R¹¹ (CRV)^ (CR⁶R⁶')_ň

ch₂

Rio (A)

V této výhodné dílčí rodině sloučenin, části R¹, R¹, Z¹, R⁴, R⁴', R⁵, R⁶, R⁶, R⁷, B, R¹⁰ a R¹¹ mají význam jako v případě sloučeniny obecného vzorce I. Pokud se týká sloučeniny obecného vzorce I, sloučeniny obecného vzorce A jsou ty sloučeniny, kde kruh J vzorce je fenylový kruh, kde všechny polohy 2, 3, 5 a 6 jsou vodík, takže kruh je substituován pouze v poloze 4 skupinou R⁵, která je definována v obecném vzorci I. Podobně popisu obecného vzorce I, kruhová část R⁵ a substituent R² mohu být případně spojeny za vzniku kruhu kondenzovanému k zobrazenému fenylovému kruhu. V takovém provedení může být kondenzovaný kruh spojen s fenylovým kruhem v poloze jiné než 4-poloze. V obecném vzorci A, kruh Ar obecného vzorce I je fenylový kruh, kde všechny polohy 2', 3', 5' a 6'jsou vodík a poloha 4'je R⁷, které je definováno shora.

Z tohoto hlediska se R⁷ výhodně vybere z vodíku a fluoru.

Pokud se jedná o sloučeninu vzorce A, p a q jsou nezávisle 1 nebo 2, výhodně je q 1. Rovněž výhodné jsou sloučeniny, kde R⁴, R⁴, R⁶ a R⁶, jsou vždy vodík. Rovněž

99··

9« 9·*· <« 94

9 * · 494 • · · · ·

9 · · • 9 49 » · · 1

9 ·9 jsou výhodné sloučeniny kde B je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷ nebo -NR²⁰R²¹. Výhodná podtřída sloučenin obecného vzorce II jsou sloučeniny mající následující strukturu obecného vzorce B:

kde X, Z¹, Z², Z³, D, R⁴, R⁴, R⁵, R⁶, R⁶, R⁷, R⁸, R⁸, R⁹, R⁹ a R¹⁰mají význam uvedený shora a p je 1 nebo 2. Výhodné sloučeniny jsou ty, kde R⁶ a R⁶' jsou v obou případech vodík. Rovněž jsou výhodné sloučeniny, kde B je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷ nebo NR²⁰R²¹. Rovněž výhodné sloučeniny jsou kde R⁸, R⁸ , R⁹ a R⁹ jsou vždy vodík. Výhodně se R⁷ vybere z vodíku a fluoru. Výhodně je B -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷,kyano, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodněji je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, kyano, triazol a imidazol.

Dále je uveden neomezující seznam výhodných sloučenin obecného vzorce I. Pokud se týká sloučenin znázorněných chemickými strukturami, zahrnuty jsou jak „lineární“ sloučeniny (tj. sloučeniny, kde vazebná část L není přítomna k poskytnutí makrolidové sloučeniny), tak makrocyklické sloučeniny obecného vzorce II.

V následujícím seznamu se používají jedno- a/nebo třípísmenné zkratky pro aminokyseliny diskutované shora.

YfRW-NH₂

Y(2-Nal)RW-NH₂

Y(l-Nal)RW-NH₂

Ac-a[DYfRWK]-NH₂

Ac-Y(2-Nal)RW-NH₂

Ac-Y(D-2-Nal)RW-NH₂

Ac-Y(2-Nal)RW

Ac-(Phe(4-F))fRW-NHCH₃

Ac-(Phe(4-Cl))fRW-NHCH₃

Ac-YfK(2-Nal)-NH₂

Ac-YfR(2 Nal)-NHCH₃

Ac-YfR(l-Nal)-NH₂

Ac-TICfRW-NHCH₃

Ac-(Phe(4-NO₂))fRW-NH₂

Ac—(Phe(4-C1))(D-Phe(4-F))RW- NHCH₃

Ac-(Phe(4~Cl))fR(2-Nal)-NHCH₃

Ac-YfHW-NH₂

Ac-(Phe(4-Cl))(Phe(4-F)R(2-Nal)-NHCH₃

Ac-F£RW-NH₂

Ac-yfRW-NH₂

Ac-YyRW-NH₂

Ac-Y(D-Phe(4-I))HW- NH₂

Ac-WfRW-NH₂

Ac-Y(D-Phe(4Br))RW-NH₂

A.c-F(D-Phe(4-I))KW] -NH₂

Ac-YfR(Trp(5-Br)-NH₂

Ac-a[D YfR(Trp(6-F)GK] -NH₂

Ac-a[DYfR(Trp(4-F)GK]-NH₂

Ac-a[DYfR(Trp(7-Me)GK]-NH₂

Ac-Y£R(Trp(6-0H)) -NH₂

Ac-YfRW-NH₂

Ac-YfRW

Ac-Y(D-l-Nal)RW-NH₂ Ac-a[DY(D-Phe(4-Cl))RWK] -NH₂ Ac-[EYfRWGK]-NH₂ Ac-YFRW-NH₂

Ac-Y(D-Phc(4-F))RW-NH₂

Ac-(Phe(4-Cl))fRW-NH₂

Ac-YfKW-NH₂

Ac-YfK(2-Nal)-NHCH₃

Ac-YfR(2-Nal)-NH₂ (des- NH₂Tyr)YfR(2-Nai)-NHCH₃

Ac-a[BYfRWGK]-NH₂

Ac—(Phe(4-C1))(D-Phe(4-F))RW-NH₂

Bc-YfRW(Sar)-NH₂

Bc-(Phe(4-CI))(fRW(Sar)-NH₂

Ac-Yf(homo-His)W-NH₂

Ac-Y(Phe(4-F)R(2-Nal)-NHCH₃

Ac-F£R(2-Nal)-NHCH₃ yťRW-NH₂

Ac-Y(D-Phe(4-I))KW-NH₂

Ac-Y(D-Phe(4-I))RW-NH_Z

Ac-YfR(Trp(5-F)-NH₂,

Ac-(D-Phe(3-OH))fRW-NH₂.

Ac-YfR(Tip(5-OMe)-NH₂

Ac-YfR(Trp(5-Me)-NH₂

Ac-YfR(Trp{ 1-Me)-NH₂

Ac-YfR(Trp(6-Br) -NH₂

Ac-YřR(Tip(5-OH))-NH₂

Ac-YfR(Trp(6-CI))-NH₂

Ac-(Tyr(CH₂Ph))fRW-NH₂

Ac(Tyr(3-a))fRW-NH₂

Ac-Y(D-Phe(5-F))RW-NH₂

Ac-(Tyr(Me))fRWG-NH₂

Ac-(Tyr(3-NH₂))fRW-NH₂

Ac-(Tyr(3-MeO))fR-NH₂

NH

0' • · • · ···· · · · · · · ·· · ····· · · · ·· · · · · · · · · ·· · · · · · · ·· ·· ··

Ο' • ·

• · · ·

HO «··· · · · ·· • · · ····· ·· • · · ···· ·· ·· ···· ·· · · ··

• · «« ·· ·· · · «··· · · · · · · • · · · · · · · ·· · • · · · · · · · • · ···· · · · · · ·

III. Syntéza sloučenin:

Sloučeniny podle předloženého vynálezu se mohou vyrábět rozmanitými postupy, včetně technik v pevné fázi a v roztoku. Obecný popis jak pro techniku v pevné fázi, tak v roztoku je uveden dále. V sekci VII jsou uvedeny reprezentativní příklady pro každou z těchto syntetických technik.

A. Syntéza v pevné fázi

Syntéza lineárního peptidu: Sloučeniny se připraví manuálně (stručný popis je uveden v sekci Vll-C dále) nebo automaticky buď automatickým syntetizátorem PerkinElmer Applied Biosystem Divison (PE-ABD) Model 433 nebo SyntraPrep Reaction Station (od SyntraChem, Charlottesville, VA). Všechna reakční činidla použitá pro syntézu peptidu byla získána od PE-ABD. Používá se standardní 0,25 mmolámí FastMoc systém monitorování vodivosti s automatickým syntetizérm PE-ABD. Obecný postup Fmoc chemie pro SPPS (syntéza peptidů v pevné fázi) zahrnuje: 1) štěpení Fmoc chránících skupin pyridinem, 2) aktivaci karboxylové skupiny aminokyselin a 3) kondenzaci aktivovaných aminokyselin na aminovém konci peptidového řetězce • φ φ φ φφφφ • φ φ φ φφφφ φφφ φφφφ φφ φφ φφφφ φφ φφ φ · navázaného na pryskyřici za vzniku peptidových vazeb. FastMoc cykly, v nichž jsou aminokyseliny aktivovány 2-(1 H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluortosfátem (HBTU). 1,0 mmolu vysušené chráněné aminokyseliny v zásobníku se rozpustí v roztoku HBTU a přidá se Ν,Ν-diisopropylethylamin (DIEA) a 1-hydroxybenzotriazol (HOBt) v N,N-dimethylformamidu (DMF) s dalším N-methylpyrrolidonem (NMP). Téměř okamžitě se vytvoří aktivovaná Fmoc kyselina a tento roztok se přenese přímo do reakční nádoby. Stupeň odstranění chránění Fmoc se sleduje a reguluje měřením vodivosti. Peptidový řetězec se vystaví na pryskyřici Rink Amide, protože je nutný C-koncový amid. Na N-terminální stranu peptidů se po výrobě peptidového řetězce plné délky přidá acetylová skupina nebo butylová skupina. To se provede reakcí anhydridu kyseliny octové nebo anhydridu kyseliny butanové (4,75 % (objem./objem.) anhydridu kyseliny octové nebo anhydridu kyseliny butanové, 0,2 % (hmotn./objem.) HOBt, 2,25 % DIEA v NMP) s α-aminovou skupinou na N-koncové straně zbytku. Konečný produkt syntézy se intenzivně promyje NMP a dichlormethanem (DCM). Když se použije pro syntézu peptidů SyntraChem reaction station, použije se jako aktivační činidlo, které nahradí HBTU O-(7-azabenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorfosfát (HATU).

Odstranění chránící skupiny: Pryskyřice, které obsahují syntetizované peptidy, se vyjmou ze syntetizátoru a krátce se vysuší na vzduchu. Z pryskyřice se použitím 4,0 až 10,0 ml štěpícího koktailu (91 % kyseliny trifluoroctové (TFA), 2,3 % ethandithiolu, 2,3 % thioanisolu a 2,3 % fenolu (hmotnost/objem) ve vodě) během 1,5 až 3 hodin za teploty místnosti odštěpí peptidy a ve stejné době se za podmínek deprotekce odstraní chránící skupiny na postranním řetězci [O-terc-butyl (OtBu) u Asp, Glu, Tyr a Ser, pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl (Pbf) u Arg, terc-butoxykarbonyl (Boc) u Trp, Orn, Lys], Štěpící roztok se od pryskyřice oddělí filtrací. Peptid ve filtrátu se poté vysráží přidáním 40 ml studeného etheru. Vysrážený peptid se filtruje a promyje se 4 x 40 ml studeného etheru. V případě peptidů, které se nesráží v etherovém roztoku v důsledku své hydrofobicity se k odpaření etheru zavede proud dusíku. Peptidy se poté zmrazí a lyofylizují po dobu více než 24 hodin. Peptidy se převedou do roztoku přidáním kyseliny octové.

• · · ·

Čištění a charakterizace: Peptidový prášek spolu s dalšími vedlejší produkty se znovu rozpustí v 50% roztoku kyseliny octové a injekčně se pro vyčištění nanese na kolonu Vydac (o vnitřním průměru 1,0 cm, délce 25 cm, s náplní C-8, velikost částic 5 μίτι a velikost póru 300 Á. Používá se HPLC systém Beckman System Gold HPLC s duálním UF detektorem. Naprogramuje se lineární gradient acetonitrilu, který se zavádí na kolonu, aby se cyklický peptid oddělil od dalších látek. Eluát se zachycuje ve sběrači frakcí Pharmacia. Jednotlivé rozdělené frakce se analyzují jak analytickou HPLC tak ESMS pro chrakterizaci identity a čistoty.

B. Syntéza v roztoku

Rozpouštědla a reakční složky, získané komerčně se použijí bez dalšího čištění. Reakční směsi se míchají magneticky a jsou sledovány analyticky za použití HPLC nebo TLC. Roztoky se běžným způsobem koncentrují za použití rotačního odpařováku Bůchi při 15-25 mm Hg. TLC se provádí za použití silikagelu 60 F254 předem povlečeného vrstvou s fluorescenčním indikátorem. Vizualizace se provádí rutinně UV světlem (254 nm). Mžiková chromatografie se provádí na silikagelu 60 E. Merck (230-400 mesh), za použití indikovaných eluentů; chromatografické oddělení se sleduje TLC analýzou. Analytická HPLC se provádí buď na 4,6 x 250 mm MetaChem Kromasil C₄- nebo na koloně Polaris CisS reverzními fázemi (velikost částic 3,5 μ nebo 3,0 μ pro C₄, respektive Cis) za použití 0,1% kyseliny fosforečné ve vodě (A)/acetonitril (B) s gradientem (5 % B pro C₄ nebo 20 % B pro C₁₈až 100 % během 20 minut, udržováno 5 minut) s průtokem 1,0 ml/minutu; detekce je UV světlem, jak 214, tak 254 nm. Preparativní HPLC se provádí buď na koloně 50 x 250 mm Polaris Cw s reverzními fázemi (velikost částic 10 μ, velikost pórů 100 A) nebo na koloně Rainin Dynamax C₄ s reverzními fázemi (velikost částic 8 μ, velikost pórů 300 A) za použití 0,1% kyseliny fosforečné ve vodě (A)/acetonitril (B) s gradientem (5 % B až 100 % B během 55 minut, udržováno 10 minut); detekce je UV světlem 214.

C. Obecně • · ···· • 4 ·· 4 4 4 4

4444 444 44 4

4 4 44444 44 4

444 4444 4444

4444 44 44 44 44

Je třeba si uvědomit, že je výhodné použít chránící skupinu pro jakoukoliv reaktivní funkční skupinu, jako je karboxyl, hydroxyl a podobně. To je standardní praxe, která je v rámci normální zkušenosti zručného odborníka.

Uvedené stupně se mohou pozměnit, aby se zvýšil výtěžek žádaného produktu. Zručný odborník si uvědomí, že rozumný výběr reakčních činidel, rozpouštědel a teplot je důležitou složkou při jakékoliv úspěšné syntéze. Stanovení optimálních podmínek atd je rutinní. Zručný odborník z oblasti techniky může vyrobit rozmanité sloučeniny použitím shora uvedeného obecného popisu jako návodu, společně s popisem příkladů v sekci VII.

Je třeba si uvědomit, že zručný odborník z oblasti techniky snadno provede standardní manipulace organických sloučenin bez dalšího návodu; to znamená, že je v rozsahu a zkušeností zručného odborníka provádět takové manipualce. Mezi ně patří, ale bez omezení na ně, redukce karbonylových sloučenin na jejich odpovídající alkoholy, oxidace hydroxylových skupin a podobně, acylace, aromatické substituce, jak elektrofilní tak nukleofilní, etherifikace, esterifikace a zmýdelnění a podobné. Příklady těchto manipulací jsou diskutovány ve standardních textech, jako je March: Advanced Organic Chemistry (Wiley), Carey a Sundberg: Advanced Organic Chemistry (díl 2) a další z oblasti techniky, kterých si jsou odborníci vědomi.

Zručný odborník si také ihned uvědomí, že některé reakce je nejlépe provádět tehdy, jestliže jsou potenciálně reaktivní funkční skupině na molekule maskovány nebo chráněny, čímž se lze vyhnout nežádoucím vedlejším reakcím a/nebo dojde ke zvýšení výtěžku reakce. Zručný odborník často používá chránící skupiny, aby se dosáhlo takových zvýšených výtěžků nebo aby se zabránilo nežádoucím reakcím. Tyto reakce lze nalézt v literatuře a jsou v rozsahu zručného odborníka. Příklady mnoha těchto manipulací lze nalézt například v T. Greene: Protecting Groups in Organic Synthesis. Ovšem, že aminokyseliny s reaktivními postranními řetězci, používané jako výchozí materiály, se s výhodou chrání, aby se předešlo nežádoucím vedlejším reakcím.

··

IV. Melanokortinová funkční aktivita a selektivita

Funkční aktivita může být vyhodnocována použitím různých způsobů známých v oblasti techniky. Příklady takových způsobů jsou měření odpovědí druhého mesengeru, zvláště cAMP, použití modifikovaných buněčných systémů k zajištění barevné reakce po akumulaci prvků druhého mesengeru, jako je cAMP, např. jak je popsáno Chenem a spol.: Anal. Biochem. 1995, 226, str. 349 až 354. Mohou se použít techniky Cytosensor Microphysiometer (viz Boyfield a spol. 1996) nebo studie fysiologických účinků způsobených sloučeninami podle předloženého vynálezu použitím sloučenin podle vynálezu samotných nebo v kombinaci s přírodními nebo syntetickými MSH-peptidy.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu budou preferenčně (tj. selektivně) interagovat s MC-4 a/nebo MC-3 při srovnání s jinými melanokortinovými receptory. Selektivita je zvláště důležitá, jestliže se sloučeniny podávají lidem nebo jiným živočichům, aby se minimalizovaly vedlejší účinky související s jejich podáváním. MC3/MC-4 selektivita sloučeniny je zde definována jako poměr EC50 pro MC-1 receptor („EC50-MC-I“) k ECsoSloučeniny pro MC-3 (ECso-MC-3)/MC-4 (ECso-MC-4) receptor, přičemž hodnoty EC50 jsou měřeny jak je popsáno shora. Vzorce jsou následující:

MC-3 selektivita = [EC₅o-MC-1]/[EC₅o-MC-3]

MC-4 selektivita = [EC₅o-MC-1]/[EC₅o-MC-4]

Sloučenina je definována jako sloučenina, která je „selektivní pro MC-3 receptor“, když shora uvedený poměr „MC-3 selektivity“ je alespoň 10, výhodně alespoň 100 a výhodněji alespoň 500.

Sloučenina je definována jako sloučenina, která je „selektivní pro MC-4 receptor“, když shora uvedený poměr „MC-4 selektivity“ je alespoň 10, výhodně alespoň 100 a výhodněji alespoň 500.

V. Způsoby použití a prostředky

Na základě schopnosti agonizovat nebo antagonizovat MC-4 a/nebo MC-3

I » 4 ·* receptor, předkládaný vynález se týká také použití ligandů popsaných v tomto dokumentu při způsobech léčení obezity stejně jako dalších poruchách tělesné hmotnosti, mezi něž patří anorexie a kachexie. Sloučeniny podle vynálezu mohou být také použity k léčení chorob, které jsou výsledkem chorob souvisejících s tělesnou hmotností, zahrnující, nikoliv však s omezením, odolnost vůči insulinu, nesnášenlivost glukózy, diabet mellitus typu 2, nemoc koronární artérie, zvýšený krevní tlak, hypertenzi, dyslipidemii, rakovinu (například endometriální, cervikální rakovina, rakovina vaječníků, prsu, prostaty, žlučníku, střeva), nepravidelnosti v menstruaci, hirtusismus, neplodnost, nemoci žlučníku, restriktivní plicní nemoc, krátkodobého zastavení dýchání ve spánku, dny, osteoartritidy a tromboembolické nemoci. Tento vynález se dále týká léčení poruch souvisejících s chováním, pamětí (včetně učení), kardiovaskulární funkcí, zánětem, aseptickým, kardiogenním a hypovolemickým šokem, pohlavní disfunkcí, erekcí penisu, atrofií svalů, růstem a opravou nervů, intrauteriním růstem plodu a podobně.

Pojmy ošetření a léčení jsou zde používány tak, že znamenají, minimálně, podávání sloučeniny podle předloženého vynálezu k zmírnění stavu onemocnění působením na MC-3 nebo MC-4 receptor. Tento pojem tedy zahrnuje: předcházení stavu onemocnění před tím, aby se vyskytoval u savců, zvláště tehdy, když savec je predisponován k získání takového onemocnění, ale ještě u něho nebylo diagnostikováno, inhibování progrese stavu onemocnění a/nebo zmírnění nebo reversi stavu onemocnění.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být formulovány do farmaceutických prostředků pro použití při léčení nebo prolyfaxi těchto stavů. Používají se standardní farmaceutické přípravky, jako jsou ty, které jsou uvedeny v Remingtonů Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa, poslední vydání, a Peptide and Protein Drug Delivery, Marcel Dekker, NY, 1991.

Prostředky podle vynálezu obsahují:

a) bezpečné a účinné množství sloučeniny obecného vzorce I a

• · · ·

• ·· ·

b) farmaceuticky přijatelnou pomocnou látku.

„Bezpečné a účinné množství“ sloučeniny obecného vzorce I znamená také množství, které je účinné pří interakci s MC-4 a/nebo MC-3 receptorem v živočichovi, s výhodou v savci, výhodněji v člověku, bez nepatřičných vedlejších účinků (jako je toxicita, dráždění nebo alergická odpověď), souměřitelně s odůvodněným poměrem příznivé účinky/riziko, jestliže se používá způsobem podle předloženého vynálezu. Specifické „bezpečné a účinné množství“ se bude zřejmě měnit podle takových faktorů, jako je příslušný stav, který je léčen, fyzikální stav pacienta, trvání léčení, povaha současně probíhající terapie (pokud nějaká existuje), specifická použitá dávková forma, použité pomocné látky, rozpustnost sloučeniny obecného vzorce I a režim dávkování pro daný prostředek.

Vedle předmětné sloučeniny prostředky podle předloženého vynálezu obsahují jednu nebo více farmaceuticky přijatelných pomocných látek. Pojem „farmaceuticky přijatelné pomocné látky“, jak je zde používán, znamená jednu nebo více slučitelných pevných nebo kapalných složek, které jsou vhodné pro podávání živočichům, zvláště savcům, výhodněji člověku. Pojem slučitelný, jak se zde používá, znamená, že složky prostředku jsou schopny být smíchány s předmětnou sloučeninou a navzájem takovým způsobem, že neexistuje žádná interakce, která by podstatně snížila farmaceutickou účinnost prostředku za podmínek obvyklého používání. Farmaceuticky přijatelná pomocná musí mít ovšem dostatečně vysokou čistotu a dostatečně nízkou toxicitu, aby byla vhodná pro podávání živočichovi, s výhodou savci, výhodněji člověku, který je léčen.

Některé příklady látek, které se mohou používat jako farmaceuticky přijatelná pomocná látka nebo jejich složky jsou cukry, jako je laktóza, glukóza a sacharóza, škroby, jako je kukuřičný škrob a bramborový škrob, celulósa a její deriváty, jako je sodná sůl karboxymethylcelulózy, ethylcelulósa a methylcelulosa, práškovaný tragant, slad, želatina, talek, pevná mazadla, jako je kyselina stearová a stearát hořečnatý, rostlinné oleje, jako je podzemnicový olej, bavlníkový olej, sezamový olej, olivový olej, • 4

44 44 44 4444

4 4 4 4 4 4

4 44444 44 4

444 4444 4444

4444 44 44 4 · 44 kukuřičný olej a kakaový olej, polyoly, jako je propylenglykol, glycerin, sorbitol, mannitol a polyethylenglykol, agar, kyselina alginová, smáčecí činidla a mazadla, jako je laurylsulfát sodný, barvící činidla, ochucovací činidla, tabletovací činidla, stabilizátory, antioxidační činidla, ochranná činidla, apyrogenní voda, isotonický solný roztok a pufry, jako je fosforečnan, citrát a acetát.

Výběr farmaceuticky přijatelných pomocných látek, které se používají spolu s předmětnou sloučeninou, je v podstatě dán sloučeninou, která se má podávat. Jestliže se předmětná sloučenina podává injekčně, výhodnou farmaceuticky přijatelnou pomocnou látkou je sterilní voda, fyziologický solný roztok nebo jejich směs, jejichž pH se upraví na 4 až 10 farmaceutickým pufrem; může být žádoucí také slučitelné suspendační činidlo.

Zejména mezi farmaceuticky přijatelné pomocné látky pro systémové podávání patří cukry, škroby, celulóza a její deriváty, slad, želatina, mastek, síran vápenatý, laktóza, rostlinné oleje, syntetické oleje, polyoly, kyselina alginová, fosforečnanové, acetátové a citrátové pufrovací roztoky, emulgační činidla, isotonický solný roztok a apyrogenní voda. Mezi výhodné pomocné látky pro parenterální podávání patří propylenglykol, ethyloleát, pyrrolidon, ethanol a sezamový olej. Farmaceuticky přijatelná pomocná látka je v prostředcích pro parenterální podávání s výhodou obsaženo v množství alespoň 90 % hmotn. z hmotnosti celého prostředku.

Prostředky podle předloženého vynálezu se s výhodou připravují v jednotkové dávkové formě. „Jednotková dávková forma“, jak se zde používá, znamená prostředek podle předloženého vynálezu obsahující takové množství sloučeniny obecného vzorce I, které je vhodné pro podávání živočichovi, s výhodou savci, výhodněji člověku, v jediné dávce, podle dobré lékařské praxe. Tyto prostředky s výhodou obsahují od 1 mg do 750 mg, výhodněji od 3 mg do 500 mg, ještě výhodněji od 5 mg do 300 mg sloučeniny obecného vzorce I.

Prostředky podle předloženého vynálezu mohou existovat v rozmanitých formách • ·· · • ··· ··· «··· ···» ·· ···· Μ ·· ·· vhodných (například) pro orální, rektální, místní, nazální, oční, transdermální, pulmonární nebo parenterální podávání. Podle příslušného žádaného způsobu podávání se mohou používat rozmanité farmaceuticky přijatelné pomocné látky, dobře známé ve stavu techniky. Patří mezi ně pevná nebo kapalná plnidla, ředidla, hydrotropní činidla, povrchově aktivní činidla a zapouzdřovací látky. Mohou zde být zahrnuty případné farmaceuticky aktivní materiály, které v podstatě neinterferují s inhibiční aktivitou sloučeniny obecného vzorce I. Množství pomocné látky používané společně se sloučeninou obecného vzorce I by mělo být dostatečné, aby bylo dosaženo praktického množství materiálu pro podávání jednotkové dávky sloučeniny obecného vzorce I. Způsoby a prostředky pro výroby dávkových forem užitečných ve způsobech podle vynálezu jsou popsány v následujících odkazech, které jsou zde všechny zahrnuty jako citace: ModernPharmaceutics, kapitola 9 a 10 (Bankéř & Rhodes, red., 1979),

Lieberman a spol.: Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets (1981) a Ansel: Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, druhé vydání (1976).

Mohou se používat různé orální dávkové formy, mezi které patří takové pevné formy, jako jsou tablety, tobolky, granule a objemné prášky. Tyto orální formy obsahují bezpečné a efektivní množství, obvykle alespoň 5 %, s výhodou od 25 % do 50 % hmotn. sloučeniny obecného vzorce I. Tablety mohou být lisovány, může jít o tablety pro rozetření na prášek, mohou být entericky potaženy, potaženy cukrem, potaženy filmem nebo násobně vylisovány, při čemž obsahují vhodná pojivá, mazadla, ředidla, dezitegrační činidla, barvící činidla, ochucovací činidla, činidla indukující sypkost a tavící činidla. Mezi kapalné orální dávkové formy patří vodné roztoky, emulze, suspenze, roztoky a/nebo suspenze rekonstituované z ne-efervescentních granulí a efervescentní přípravky rekonstituované z efervescentních granulí obsahující vhodná rozpouštědla, ochranná činidla, emulgační činidla, suspendační činidla, ředidla, sladidla, tavící činidla, barvící činidla a ochucovací činidla.

Farmaceuticky přijatelné nosiče vhodné pro přípravu jednotkových dávkových forem pro perorální podávání jsou dobře známy v oblasti techniky. Tablety typicky obsahují konvenční farmaceuticky slučitelné pomocné látky, jako inertní ředidla, jako je ·· «· ·· 4· ·· ···· • · · · · · · 9 9 · ·· Β Β Β 9 9 · 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 99 uhličitan vápenatý, uhličitan sodný, mannitol, laktóza a celulóza, pojivá, jako je škrob, želatina, polyvinylpyrrolidon a sacharóza, dezintegrační činidla, jako je škrob, kyselina alginová a kroskarmelóza, mazadla, jako je stearát hořečnatý, kyselina stearová a mastek. Kluzná činidla, jako je oxid křemičitý, se mohou používat pro zlepšení sypkosti práškované směsi. Kvůli vzhledu se mohou přidávat barvící činidla, jako jsou barviva FD&C. Jako pomocné látky pro žvýkatelné tablety jsou užitečná sladidla a ochucovací činidla, jako je aspartam, sacharin, menthol, máta pepmá a ovocné příchutě. Tobolky typicky obsahují jedno nebo více shora popsaných pevných ředidel. Výběr složek nosiče závisí na sekundárních úvahách, jako je chuť, cena a stabilita v balení, které nejsou rozhodující pro účely předloženého vynálezu, a mohou se snadno vyrábět zručným odborníkem z oblasti techniky.

Mezi perorální prostředky patří také kapalné roztoky, emulze, suspenze a podobné. Farmaceuticky přijatelné pomocné látky vhodné pro přípravu takových prostředků jsou dobře známé v oblasti techniky. Mezi typické složky pomocných látek pro sirupy, elixíry, emulze a suspenze patří ethanol, glycerol, propylenglykol, polyethylenglykol, kapalná sacharóza, sorbitol a voda. U suspenzí mezi typická suspendační činidla patří methylcelulóa, sodná sůl karboxymethylcelulózy, Avicel® RC591 , tragant a alginát sodný; mezi typická smáčecí činidla patří lecithin a polysorbát 80; a mezi typická ochranná činidla patří methylparaben, propylparaben a benzoát sodný. Perorální kapalné prostředky mohou obsahovat také jednu nebo více složek, jako jsou shora uvedená sladidla, ochucovací činidla a barviva.

Tyto prostředky mohou být také konvenčními způsoby potaženy, typicky potahy závislými na pH nebo čase, takže předmětná sloučenina se uvolňuje v gastrointestináiním traktu v blízkosti žádané místní aplikace nebo v rozmanitých dobách tak, aby se prodloužil žádaný účinek. Tyto dávkové formy typicky zahrnují, ale bez omezení, jednu nebo více z následujících složek: acetátftalát celulózy, ftalát polyvinylacetátu, ftalát hydroxypropylmethylcelulózy, ethylcelulózu, Eudragitové® potahy, vosky a šelak.

Protože sloučeniny podle předloženého vynálezu jsou peptidické povahy, výφφ ·φ · φφφφ · • · φ φ φφφφ φφφ φφφ φφ φφφφ φφ φφ ·φ » φ φ φ · • φ φ φ Φ Φ φ · · φ φ · · φ hodným způsobem podávání je parenterální (výhodněji intravenózní injekce) nebo nazální podávání ve formě jednotkové dávkové formy. Mezi výhodné jednotkové formy patří suspenze a roztoky, které obsahují bezpečné a účinné množství sloučeniny obecného vzorce I. Jestliže se podává parenterálně, tato jednotková dávková forma bude typicky obsahovat od 1 mg do 3 g, výhodněji od 10 mg do 1 g sloučeniny obecného vzorce I, ačkoliv množství podané sloučeniny bude závislé na relativní afinitě pro subtypy receptorů MC-4/MC-3, jejich selektivitě vůči jiným receptorům, včetně jiných melanokortínových receptorů, atd.

Prostředky podle předloženého vynálezu mohou popřípadě obsahovat jiná účinná léčiva.

Mezi další prostředky užitečné pro dosažení systémového dodávání předmětných sloučenin patří sublinguální a bukální dávkové formy. Takové prostředky typicky obsahují jednu nebo více rozpustných plnících látek, jako je sacharóza, sorbitol a mannitol, a pojivá, jako je akácie, mikrokrystalická celulóza, karboxymethylcelulóza a hydroxypropylmethylcelulóza. V prostředcích mohou být obsažena také shora popsaná kluzná činidla, mazadla, sladidla, barviva, antioxidační činidla a ochucovací činidla.

VI. Způsoby podávání:

Prostředky podle tohoto vynálezu se mohou podávat místně nebo systémově. Mezi systémové aplikace patří jakýkoliv způsob zavádějící sloučeninu obecného vzorce I do tkání těla, např. intraartikulámí, intratekální, epidurální, intramuskulámí, transdermální, intravenózní, intraperitoneální, subkutánní, sublinguální, rektální, nazální, pulmonámí a orální podávání. Sloučeniny obecného vzorce I podle předloženého vynálezu se s výhodou podávají systémově, výhodněji parenterálně a nejvýhodněji intravenózní injekcí.

Specifické dávkování sloučeniny, která se podává, stejně jako trvání léčení a to, jestli léčení je místní nebo systémové, jsou na sobě nezávislé. Dávkování a režim léčení

0« ··»« *0 *«

0000 «00 «0 0 00 4 « 0 · · « 00 0

000000000 0 000 000« 0000 00 0000 00 00 0« *· bude záviset také na takových faktorech, jako je specifická použitá sloučenina obecného vzorce I, indikace léčení, osobní vlastnosti subjektu (jako je hmotnost), slučitelnost s režimem léčení a přítomnost a intenzita jakýchkoliv vedlejších účinků léčení.

Typicky se dospělému člověku (o hmotnosti 70 kg) podává od 1 mg do 6 g, výhodně od 100 mg do 3 g sloučeniny obecného vzorce I za den při systémovém podávání. Tomu je třeba rozumět tak, že tato rozmezí dávkování jsou jenom pouhé příklady a že denní podávání může být upraveno podle shora uvedených faktorů.

Jak je známo a praktikováno v oblasti techniky, všechny prostředky pro parenterální podávání musí být sterilní. U savců, zvláště u člověka (za předpokladu přibližné tělesné hmotnosti 70 kg) je výhodné jednotkové dávkování od 0,001 mg do 100 mg.

Výhodným způsobem systémového podávání je intravenózní podávání. Jednotlivé dávky od 0,01 mg do 100 mg, s výhodou do 0,1 mg do 100 mg jsou výhodné, jestliže se používá tento způsob podávání.

Ve všech předcházejících způsobech se sloučeniny podle předloženého vynálezu ovšem mohou podávat samotné nebo jako směsi a prostředky mohou dále obsahovat další léčiva nebo pomocné látky, jak je to vhodné pro danou indikaci.

Sloučenina podle předloženého vynálezu se může podávat na výhodné místo v těle vhodným systémem pro dodávání léčiva. Systémy pro dodávání léčiva jsou dobře známy v oblasti techniky. Například způsobem dodávání léčiva užitečným pro sloučeniny podle předloženého vynálezu je konjugace sloučeniny s aktivní molekulou schopnou být transportována biologickou barierou (viz např. Zlokovic Β. V.: Pharmaceutical Research 1995, 12, str. 1395 až 1406). Specifický příklad představuje kondenzování sloučeniny podle vynálezu s fragmenty insulinu, aby se dosáhl transport přes krevní barieru v mozku (Fukuta M. a spol: Pharmaceutical Res. 1994, 11, str. 1681 až 1688.). Pro obecný přehled technologií dodávání léčiv vhodných pro sloučeniny podle vynálezu viz Zlokovic Β. V.: Pharmaceutical Res. 1995, 12, str. 1395 až1406, a • 4 04 <4 4

4 ·

44

4 9

4 499

4444

9 4 >44

4 4 >4 *···

4 4 «

49

4 > ·

44

Pardridge W. M.: Pharmacol. Toxicol. 1992, 71, str.3 až 10.

V následující části budou popsány příklady podle vynálezu podrobněji odkazem na četná výhodná provedení, která jsou dána jenom pro účely ilustrace a neměla by být považována za žádným způsobem omezující vynález.

V příkladech se používají následující zkratky:

Ac. acetyl [-C(O)CH₃]

Aun: aminoundekanový

Atc: (D,L)-2-aminotetralin-2-karboxylová kyselina

Bc: butanoyl [-C(O)(CH2)2CH₃]

Boc: terc-butyloxykarbonyl

DCM: dichlormethan

DEA: diethylamin

DMF: N,N-dimethylformamid

DMAP: 4-dimethylaminopyridin

DME: 1,2-dimethoxyethan

DIEA: diizopropylethylamin

DPPA: difenylfosforylazid

EtOAc: ethylacetát

EDCI: hydrochlorid 1 -ethyl-3-(3'-dimethylaminopropyl)karbodiimidu

Fmoc: 9-fluorenylmethoxykarbonyl

HOBt: monohydrát N-hydroxybenzotriazolu

HOAt: 1-hydroxy-7-azabenzotriazol i-PrOH: 2-propanol

MeOH: methanol

NMM: N-methylmorfolin

OtBu: terc-butoxy [-O-C(CH₃)₃]

Pbf: 2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonylPmc: 2,2,5,7,8-pentamethyl-6-chromansulfonyl46 ·· ···· ·· ·· ·· ·· p-TSA-: p-toluensulfonát

PyBOP: benzotriazol-1-yloxytrispyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát

PyBroP: brom-tris-pyrrolidinofosfoniumhexafluorfosfát tBu: tec-butyl [-C(CH₃)]

TEA: triethylamin

TFA: kyselina trifluoroctové

THF: tetrahydrofuran

Příklady provedení vynálezu

A. Automaizovaná syntéza v pevné fázi

Příklad 1

Syntéza Ac-YfRW-NH₂

Na základě poměru 0,55 mmol/g substituce u pryskyřice Rink Amide, se pro 0,25 mmolámí syntézu odváží 0,45 g pryskyřice. Provedení peptidového syntetizátoru PEABD 433 se zkontroluje různými průtokovými testy, aby se zajistilo přesné dodávání reakčního činidla. Fmoc aminokyseliny (Tyr-OtBu, Arg-Pmc a Trp-Boc) byly komerčně dostupné v náplních s obsahem 1 mmol. Odměří se Fmoc-phe (387 mg, 1 mmol) a přidá se do syntetických náplní. Čerstvě připravený roztok anhydridu kyseliny octové se naplní do zařízení do láhve v poloze 4. Další reakční činidla a roztoky se získají komerčně a naplní se do zařízení podle pokynů zařízení. Pro syntetizování peptidu se použije chemický program nazvaný NAc-0,25 mmole MonPrePk. Sleduje se odstranění chránící skupiny Fmoc a reguluje se měřením vodivosti s nastaveným kriteriem 5 nebo méně % pro vodivost při srovnání s předcházejícím cyklem, při kterém se odstraňuje chránící skupina.

Pryskyřice se vysuší na vzduchu a přenese se do skleněné ampulky. Přidá se čerstvě připravené štěpící činidlo (10 ml). Reakce odstraňující chránící skupinu se nechá probíhat 2 hodiny za teploty místnosti za konstantního míchání. Supernatant se • · pak od pryskyřice oddělí odfiltrováním. Připravený peptid se poté vysráží v etherové vrstvě přidáním 40 ml ledového etheru. Peptidové sraženiny se odstředí (Heraeus Labofuge 400, Rotor #8179) při 3500 otáčkách/minutu po dobu 4 minut. Ether se odstraní a přidá se 40 ml čerstvého studeného etheru, aby se promyly sraženiny peptidu. Promývací stupně se opakují třikrát, aby se odstranily vedlejší produkty vzniklé při odstraňování chránící skupiny. Finální sraženiny peptidů se suší vymrazováním přes noc. Identita lineárního peptidu se stanoví jak MS tak HPLC. Detekuje se očekávaná molekulová hmotnost peptidu.

Peptid se opětovně rozpustí v 50% kyselině octové a vyčistí se HPLC na koloně C8 s reverzními fázemi použitím lineárního gradientu 0 až 70 % rozpouštědla B s rozpouštědlem A po dobu 70 minut při průtoku 3 ml/min. Složení rozpouštědel A a B je následující: A: 0,1 % TFA, 2 % acetonitrilu ve vodě, a B: 0,1 % TFA v 95% acetonitrilu. Frakce se odebírají každé 0,25 minuty. Podíly každé frakce se analyzují jak MS tak analytickou RP-HPLC. Frakce, které obsahují jediné UF absorpční maximum 220 nm s očekávanou hmotnostní jednotkou pro peptid se spojí a lyofilizují se. Konečná čistota peptidu se stanoví analytickou RP-HPLC spojených frakcí.

Peptidy popsané v příkladech 2 až 54 dále se snadno syntetizují podle stejného postupu jako v příkladu 1, ale s jistými úpravami, jak je uvedeno.

Příklad 2

Příprava Ac-YFRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Phe místo Fmoc-D-Phe.

Příklad 3

Příprava Ac-FfRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Phe místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 4 • · · ·

Příprava Ac-PFRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Pro místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 5

Příprava Ac-AfRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Ala místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 6

Příprava Ac-(2-Nal)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-(2-Nal) místo Fmoc-LTyr(OtBu).

Příklad 7

Příprava Ac-YfR(2-Nal)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-(2-Nal) místo Fmoc-LTrp(Boc).

Příklad 8

Příprava Ac-YfR(1-Nal)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-(l-Nal) místo Fmoc-LTrp(Boc).

Příklad 9

Příprava Ac-YfHW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-His(Trt) místo Fmoc-LArg(Pmc).

Příklad 10

Příprava Ac-Y(D-2-Nal)RW-NH₂ • · • · • · · · • · a

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-(2-Nal) místo Fmoc-DPhe.

Příklad 11

Příprava Ac-Y(L-N-Me-Phe)RW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-N-Me-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 12

Příprava Ac-A(D-N-Me-Phe)RW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-N-Me-Phe místo FmocL-Phe, a Fmoc-L-Ala místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 13

Příprava Ac-YF(L-N-Me-Arg)W-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-N-Me-Arg(Mtr) místo Fmoc-L-Arg(Pmc), a Fmoc-L-Phe místo of Fmoc-D-Phe.

Příklad 14

Příprava Ac-Yf(L-N-Me-Arg)W-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-N-Me-Arg(Mtr) místo Fmoc-L-Arg(Pmc).

Příklad 15

Příprava Ac-(L-N-Me-Tyr)fRW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-N-Me-Tyr(Bzl) místo Fmoc-L-Tyr(OtBu), a Fmoc-L-Phe místo Fmoc-D-Phe.

Příklad 16

Příprava Ac-(L-N-Me-Tyr)fRW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-N-Me-Tyr(Bzl) místo

Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 17

Příprava Ac-Y(D-4-Chlor-Phe)RW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-Chlor-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 18

Příprava Ac-Y(D-4-Fluor-Phe)RW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-Fluor-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 19

Příprava Ac-Y(D-3,4-Dichlor-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-3,4-Dichlor-Phe místo Fmoc-D-Phe.

Příklad 20

Příprava Ac-Y(D-4-Me-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-Me-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 21

Příprava Ac-Y(D-4-nitro-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-nitro-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 22

Příprava Ac-Y(D-fenylglycin)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-fenylglycin místo FmocD-Phe.

• · · · · · · ···· ·· ···· ·· ·· ·· ··

Příklad 23

Příprava Ac-Y(D-4-homo-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-homo-Phe místo Fmoc-D-Phe.

Příklad 24

Příprava Ac-Y(D-strylryalanin)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-strylryalanin místo FmocD-Phe.

Příklad 25

Příprava Ac-Y(D-4-thienylalanin)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-4-thienylalanin místo Fmoc-D-Phe.

Příklad 26

Příprava Ac-Y(D-3-fluor-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-3-fluor-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 27

Příprava Ac-(L-4-Fluor-Phe)(D-4-fluor-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-fluor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), a Fmoc-D-4-Fluor-Phe místo of Fmoc-D-Phe.

Příklad 28

Příprava Ac-Y(D-2-fluor-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-2-fluor-Phe místo FmocD-Phe.

• · • · · ·

Příklad 29

Příprava Ac-(L-4-chlor-Phe)(D-4-fluor-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-chlor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), a Fmoc-D-4-fluor-Phe místo of Fmoc-D-Phe.

Příklad 30

Příprava Ac-(L-4-chlor-Phe)(D-4-fluor-Phe)RW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-chlor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), Fmoc-D-4-fluor-Phe místo of Fmoc-D-Phe, a použije se další Fmoc-N-MeGly.

Příklad 31

Příprava Ac-(L-4-chlor-Phe)fRW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-chlor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), a použije se další Fmoc-N-Me-Gly.

Příklad 32

Příprava Ac-(L-4-chlor-Phe)(D-4-fluor-Phe)R-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-chlor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), Fmoc-D-4-fluor-Phe místo Fmoc-D-Phe, a Fmoc-L-Trp(Boc) se nepoužije.

Příklad 33

Příprava Ac-(L-4-chlor-Phe)(D-4-fluor-Phe)RG-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-chlor-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu), Fmoc-D-4-fluor-Phe místo Fmoc-D-Phe, a Fmoc-L-Gly místo Fmoc-LTrp(Boc).

Příklad 34

Příprava Ac-(L-3,4-difluor-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-3,4-difluor-Phe místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 35

Příprava Ac-Y(D-2-Me-Phe)RW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-D-2-Me-Phe místo FmocD-Phe.

Příklad 36

Příprava Ac-(L-4-brom-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-brom-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu).

Příklad 37

Příprava Ac-(L-4-jod-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-jod-Phe místo Fmoc-LTyr(OtBu).

Příklad 38

Příprava Ac-(L-pentafluor-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-pentafluor-Phe místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 39

Příprava Ac-(L-4-nitro-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-nitro-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu).

► 99

9 • ··· • · « • · « • ·

Příklad 40

Příprava Ac-(L-aminomethyl-Phe)fRW-NH2

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-aminomethyl-Phe(Boc) místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 41

Příprava Ac-(L-tetraizochinolin-3-karboxylové kyseliny)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-tetraizochinolin-3-karboxylová kyselina místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 42

Příprava Ac-(L-homo-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-homo-Phe místo Fmoc-LTyr(OtBu).

Příklad 43

Příprava Ac-(L-bifenylalanin)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-bifenylalanin místo FmocL-Tyr(OtBu).

Příklad 44

Příprava Ac-(L-4-SO₃-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-SO3-Phe místo FmocL-Tyr(OtBu).

Příklad 45

Příprava Ac-(L-2,6-dimethyl-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-2,6-dimethyl-Phe místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 46

Příprava Ac-(L-4-methyl-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-methyl-Phe místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 47

Příprava Ac-(L-4-NH-Phe)fRW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-4-NH-Phe(Boc) místo Fmoc-L-Tyr(OtBu).

Příklad 48

Příprava Ac-YfKW-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Lys(Boc) místo Fmoc-LArg(Pmc).

Příklad 49

Příprava Ac-Yf(Orn)W-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Orn(Boc) místo Fmoc-LArg(Pmc).

Příklad 50

Příprava Bc-HFRW(N-Me-Gly)-NH₂ ·· ··· · » ·« • · • »·· • · «

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-His(Trt) místo Fmoc-LTyr(OtBu), Fmoc-L-Phe místo Fmoc-D-Phe, anhydrid kyseliny butanové místo anhydridu kyseliny octové a použije se další Fmoc-L-N-Me-Gly.

Příklad 51

Příprava Bc-HfRW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-His(Trt) místo Fmoc-LTyr(OtBu), anhydrid kyseliny butanové místo anhydridu kyseliny octové a použije se další Fmoc-L-N-Me-Gly.

Příklad 52

Příprava Bc-YfRW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije anhydrid kyseliny butanové místo anhydridu kyseliny octové a použije se další Fmoc-L-N-Me-Gly.

Příklad 53

Příprava Bc-YFRW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Phe místo Fmoc-D-Phe, anhydrid kyseliny butanové místo anhydridu kyseliny octové a použije se další Fmoc-LN-Me-Gly.

Příklad 54

Příprava Bc-FfRW(N-Me-Gly)-NH₂

Připraví se podle příkladu 1, s výjimkou, že se použije Fmoc-L-Phe místo Fmoc-LTyr(OtBu), anhydrid kyseliny butanové místo anhydridu kyseliny octové a použije se další Fmoc-L-N-Me-Gly.

B. Chemie v roztokové fázi

Příklad 55

4· ··· · • 444

Příprava naftalen-1 -ylmethyl)amidu 5-guanidino-2-(3-fenyl-2-(3-fenylpropylamino)propionylaminojpentanové kyseliny

Methylester 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku 2-(R)-(2-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionové kyseliny (2,0 g, 7,54 mmol) a methylesteru 2-(S)-amino-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (2,0 g, 1,1 ekv.) ve 100 ml bezvodého DMF se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylkarbodiimidu (1,5 g, 1,5 ekv.), 1-hydroxybenzotriazol (2,16 g, 1,4 ekv.) a triethylamin (3,0 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 20 hodin a poté se odstraní rozpouštědlo za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (100 ml) a methylenchlorid (100 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografii na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanová kyselina

K roztoku methylesteru 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5nitroguanidinopentanové kyseliny (3,6 g, 7,5 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (387 mg, 1,2 ekv.) a voda (10 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu, reakční směs se neutralizuje kyselinou trifluoroctovou (0,7 ml) a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek se rozdělí mezi vodu (200 ml) a ethylacetát (200 ml). Vodná vrstva se extrahuje s ethylacetátem (3 x 250 ml), • 0 ·»· · • 0 ··

organické podíly se spojí a suší se nad síranem horečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se použije bez dalšího čištění.

terc-Butylester (1-(S)-{4-nitroguanidino-1-[naftalen-1-yl-methyl)karbamoyl]butylkarbamoyl}-2-(R)-fenylethyl)karbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-guanidinopentanové kyseliny (1,0 g, 2,15 mmol) a C-naftalen-1 -yl-methylaminu (0,377 ml, 1,2 ekv.) v 50 ml bezvodého DMF se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylkarbodiimidu (532 mg, 1,5 ekv.), 1-hydroxybenzotriazol (376 mg, 1,4 ekv.) a triethylamin (0,9 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 20 hodin a poté se odstraní rozpouštědlo za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (75 ml) a methylenchlorid (75 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtruje se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografíi na silikagelu (90:9:1 chloroform: methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Trif luoroctová sůl (naftalen-l-ylmethyl)amidu 2-(S)-2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)5-nitroguanidinpentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru (1-(S)-{4-nitroguanidino-1-[naftalen-1-yl-methyl)karbamoyljbutylkarbamoyl}-2-(R)-fenylethyl)karbamové kyseliny (1,1 g, 1,82 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (50 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 3 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí preparativní HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(Naftalen-l-ylmethyl)amid 5-nitroguanidino-2-[3-fenyl-2-(3-fenylpropylamino)propionylaminojpentanové kyseliny ·· φφ φφ «φ • · φ φ · φ φ φ φ φφφ φφφ • ·Φ Φ ΦΦ φ'φ φ φ ·

ΦΦ ΦΦΦΦ ΦΦ φφ ·«

ΦΦ ·*»ι

Κ suspenzi (naftalen-l-ylmethyl)amidu 2-(S)-2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-guanidinopentanové kyseliny (750 mg, 1,21 mmol), 3-fenylpropionylaldehydu (0,159 ml, 1,0 ekv.) a aktivovaným molekulovým sítům (4 Á, drcené) se přidá triethylamin (0,247 ml,

1,5 ekv.). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin a poté se upraví pH na hodnotu 5 za pomoci kyseliny octové. Potom se přidá 1,0 M roztok kyanborohydridu sodného v tetrahydrofuranu (1,44 ml, 1,2 ekv.) rychlostí 0,2 ml/min. za použití injekční stříkačky. Vzniklá suspenze se míchá pň teplotě místnosti 24 hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(Naftalen-1 -ylmethyl)amid 5-guanidino-2-[3-fenyl-2-(3-fenylpropylamino)propionylaminojpentanové kyseliny

K roztoku (naftalen-1-ylmethyl)amidu 5-nitroguanidino-2-[3-fenyl-2-(3-fenyipropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny (140 mg, 0,165 mmol) v methanolu (30 ml) se přidá kyselina octová (3 ml) a 5% palladium na síranu bamatém (100 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu 24 hodin a poté se filtruje přes celit. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi.

Příklad 56

Příprava (2-naftalen-2-yl-ethyl)amidu 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-propylamino)propionylaminojpentanové kyseliny

2-Naftalen-2-yl-ethylester toluen-4 sulfonové kyseliny

9 99 99 · 9 • 999 9 9 9 9 9 9 • · 9 9 9 999 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 99 ·♦ 999 9

K roztoku 2-naftalen-2-yl-ethanolu (3,0 g, 17,4 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá anhydrid kyseliny p-toluensulfonové (6,8 g,1,2 ekv.) a triethylamin (7,1 ml, 3 ekv.).

Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti jednu hodinu a poté se odstraní rozpouštědla z sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (20% ethylacetát/hexan) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-(2-Azidoethyl)naftalen

K roztoku 2-naftalen-2-yl-ethylesteru toluen-4 sulfonové kyseliny (5,0 g, 15,3 mmol) v DMF 100 ml) se přidá azid sodný (1,3 g, 1,3 ekv.). Vzniklá suspenze se zahřívá na 80 °C po dobu dvacet čtyři hodin a poté se ochladí na teplotu místnosti. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (200 ml) a vodu (200 ml). Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu. Surový materiál se použije bez dalšího čištění.

2-Naftalen-2-yl-ethylamin

K roztoku 2-(2-azidoethyl)naftalenu (3,0 g, 15,2 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se přidá trifenylfosfin (6,0 g, 1,5 ekv.) a voda (5 ml). Vzniklý roztok se zahřívá při zpětném toku po dobu tří hodin a poté se ochladí na teplotu místnosti. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methylacetát:hydroxid amonný). Vyčištěný materiál se poté převede na sůl kyseliny trifluoroctové přidáním přebytku kyseliny trif luoroctové a následným odstraněním přebytku kyseliny odpařením za sníženého tlaku se získá sloučenina uvedená v názvu.

terc-Butylester {1-(S)-[4-nitroguanidino-1-(2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl)butylkarbamoyl]-2-(R)-fenylethyl}karbamové kyseliny

94 • '4 4 4 · ·

4 4

4 4

4··· «4 ·· ·4 ··* t » » « • 9 444 4 4 4 • t 4 4 4 4 4 4 » *» 4 · 4 · « ·· 44 tt 44

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (1,0 g, 2,14 mmol) a 2-(2-azidoethyl)naftalenu (733 mg, 1,2 ekv.) v DMF se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylamino)propyl)-3-ethylkarbodiimidu (614 mg, 1,5 ekv.), 1-hydroxybenzotriazol (434 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,877 ml, 3 ekv.). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (75 ml) a methylenchlorid (75 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-2-yl-ethyl)amid 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru {1-(S)-[4-nitroguanidino-1-(2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl)butylkarbamoyl]-2-(R)-fenylethyl}karbamové kyseliny (1,5 g, 2,04 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (50 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku.

Surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanoLhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-2-yl-ethyl)amid 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-propylamino)propionylaminojpentanové kyseliny

K roztoku (2-naftalen-2-yl-ethyl)amidu 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (600 mg, 1,15 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá

3-fenylpropionyladehyd (0,121 ml, 0,8 ekv.) a molekulární síta (4 A, drcené). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin a poté se upraví pH na hodnotu 5 za pomoci kyseliny octové. Potom se přidá 1,0 M roztok kyanborohydridu sodného v tetrahydrofuranu (1,38 ml, 1,2 ekv.) rychlostí 0,2 ml/min. za použití injekční stříkačky. Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti 24 hodin, filtruje se přes celit

4· 4* • · • · ····

a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-2-yl-ethyl)amid 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-propylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku (2-naftalen-2-yl-ethyl)amidu 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-propylamino)propionylamino]pentanové kyseliny (294 mg, 0,46 mmol) v 50 ml methanolu se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu bamatém. Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku 24 hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 57

Příprava (2-naftalen-1 -yl-ethyl)amidu 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku 2-naftalen-1-yl-ethanolu (3,0 g, 17,4 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá anhydrid kyseliny p-toluensulfonové (6,8 g, 1,2 ekv.) a triethylamin (7,1 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti po dobu 1 hodiny a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (20% ethylacetát/hexany) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

··· · · · · · tt 9 · · · ·· ·· 9 9

-(2-Azidoethyl)naftalen

K roztoku 2-naftalen-1-yl-ethylesteru toluen-4-sulfonové kyseliny (5,2 g, 15,9 mmol) v DMF (100 ml) se přidá azid sodný (1,3 g, 1,3 ekv.). Vzniklý roztok se zahřívá na 80 °C po dobu dvacet čtyři hodin a poté se ochladí na teplotu místnosti a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu, organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu. Surový produkt se čistí bez dalšího čištění.

2-Naftalen-1 -yl-ethylamin

K roztoku 1-(2-azidoethyl)naftalenu (3,0 g, 15,23 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se přidá trifenylfosfin (6,0g, 1,5 ekv.) a voda (5 ml) Vzniklý roztok se zahřívá při zpětném toku tři hodiny a poté se ochladí na teplotu místnosti. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový materiál se čistí mžikovou chromatografii na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu. Po přidání přebytku trifluoroctové kyseliny a následným odpařením se získá sůl kyseliny trifluoroctové.

terc-Butylester {1 -(S)-[4-nitroguanidino-1 -(2-naftalen-1 -yl-ethylkarbamoyljbutylkarbamoyl]-2-(R)-fenylethyl]karbamové kyseliny

K roztoku methylesteru 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5nitroguanidinopentanové kyseliny (1,0 g, 2,1 mmol) a 2-naftalen-1-yl-ethylaminu (733 mg, 1,2 ekv.) v DMF (50 ml) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (434 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (614 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,877 ml, 3 ekv.). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi methylenchlorid a 10% uhličitan sodný, organické podíly se suší nad síranem «· ·· ·· ·· ·· · ··· ···· · · · ·· · 9 9 9 9 9 999 9 9 · • · ··· » · ··· · · 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 99 horečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografíi na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-1~yl-ethyl)amid 2-(S)-2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru {1-(S)-[4-nitroguanidino-1-(2-naftalen-1-yl-ethylkarbamoyl)butylkarbamoyl]-2-(R)-fenylethyl]karbamové kyseliny (1,3 g, 1,77 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (50 ml). Směs se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (100 ml) a ethylacetát (100 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografíi na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-1-yl-ethyl)amid 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R-(3-fenylpropylamino)propionylaminojpentanové kyseliny

K roztoku (2-naftalen-1-yl-ethyl)amidu 2-(S)-2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (690 mg, 1,33 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá 3fenylpropionaldehyd (0,14 ml, 0,8 ekv.) a molekulární síta (4 A, drcené). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin a poté se upraví pH na hodnotu 5 za pomoci kyseliny octové. Potom se přidá 1,0 M roztok kyanborohydridu sodného v tetrahydrofuranu (1,6 ml, 1,2 ekv.) rychlostí 0,2 ml/min. za použití injekční stříkačky. Po 24 hodinách se rozpouštědla odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(2-Naftalen-1-yl-ethyl)amid 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropylamino)~ propionylaminojpentanové kyseliny • ·· · • · ··

K roztoku (2-naftalen-1-yl-ethyl)amidu 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R-(3-fenylpropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny (280 g, 0,44 mmol) v 50 ml methanolu se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu barnatém. Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu 24 hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 58

Příprava [2-(1 H-indol-3yl)ethyl]amidu 5-guanidino-2-(S)-(2-(S)-{ [3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny

Methylester 2-(S)-[2-(S)-(terc-butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionylamino]-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(terc-butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionové kyseliny (2,0 g, 7,17 mmol) a methylesterů 2-(S)-amino-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (1,83 g, 1ekv.) se přidá 1 -hydroxybenzotriazol (1,45 g, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimepropyl]3-ethylkarbodiimidu (2,05 g, 1,5 ekv.) triethylamin (3,0 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (150 ml) a methylenchlorid (150 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform: methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 5-nitroguanidino-2-(S)-2-(S)methylamino-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny

K roztoku methylesteru 2-(S)-[2-(S)-(terc-butoxykarbonylmethylamino)-3-fenylpropionylamino]-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (3,3 g, 6,68 mmol) v methylenchloridu (200 ml) se přidá kyselina trif luoroctová (100 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (150 ml) a methylenchlorid (150 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 5-nitroguanidino-2-(S)-2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3fenylpropionylamino)pentanové kyseliny

K roztoku methylesteru 5-nitroguanidino-2-(S)-2-(S)methylamino-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny (1,0 g, 2,54 mmol) a 3-(4-hydroxyfenyl)propanové kyseliny (506 mg, 1,2 ekv.) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (513 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (722 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (1,0 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi 10% uhličitan sodný (100 ml) a methylenchlorid (100 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

5-Nitroguanidino-2-(S)-(2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanová kyselina

K roztoku methylesteru 5-nitroguanidino-2-(S)-2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny (534 mg, 0,98 mmol) ·· · · ·· v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (49 mg, 1,1 ekv.) a voda (3 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti 24 hodin a poté se okyselí kyselinou trifluoroctovou (1 ekv.). Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový materiál se rozdělí mezi ethylacetát (75 ml) a vodu (75 ml). Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

[2-( 1 H-l ndo l-3-y l)ethy I] am id 5-nitroguanidino-2-(S)-(2-(S)-{ [3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny

K roztoku 5-nitroguanidino-2-(S)-(2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3fenylpropionylamino)pentanové kyseliny (460 mg, 0,87 mmol) a [2-(1 H-índol-3-yl)ethyljaminu (168 mg, 1,2 ekv.) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (176 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (250 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,36 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (75 ml) a vodu (75 ml), organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

[2-(1 H-lndol-3-y!)ethyl]amid 5-guanidino-2-(S)-(2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny

K roztoku [2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]amidu 5-nitroguanidino-2-(S)-(2-(S)-{[3-(4-hydroxyfenyl)propionyl]methylamino}-3-fenylpropionylamino)pentanové kyseliny (250 mg, 0,37 mol) v 50 ml methanolu se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu bamatém (250 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvacet čtyři hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 59 • · ···· · · · · • · · · · · · · · · · • 9 · «9 99 999 9 · ··· ···· · · · · «· ···· ·· · · ·· · ·

Příprava benzylamidu 5-guanidino-2-(S)-[3-Tenyl-2-(R)-(3-Tenylpropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

terc-Butylester [1 -(S)-(1 -benzylkarbamoyM-nitroguanidinbutyikarbamoyl)-2-(R)-fenylethyljkarbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (500 mg, 1,29 mmol), benzylaminu (0,155 ml, 1,1 ekv.) v DMF (50 ml) se přidá 1 -hydroxybenzotriazoí (261 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (371 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,53 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se 526 mg sloučeniny uvedené v názvu.

Benzylamid 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)~5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru [1-(S)-(1-benzylkarbamoyl-4-nitroguanidinbutylkarbamoyl)-2(R)-fenylethyl]karbamové kyseliny (512 mg, 1,12 mmol) v methylenchloridu (50 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (25 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu a získá se sloučenina uvedená v názvu.

• » ··· · · · · · · · • · · · · · · · * · · · · ·

Benzylamid 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K suspenzi benzylamidu 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (370 mg, 0,65 mmol), 3-fenylpropionaldehydu (0,077 ml, 0,9 ekv.) a molekulovým sítům (4 Á, práškové) se přidá triethylamin (0,177 ml, 2 ekv.). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin a poté se upraví pH na hodnotu 5 za pomoci kyseliny octové. Potom se přidá 1,0 M roztok kyanborohydridu sodného v tetrahydrofuranu (0,70 ml, 1 ekv.) rychlostí 0,2 ml/min. za použití injekční stříkačky. Po 24 hodinách se suspenze filtruje přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Benzylamid 5-guanidino-2-(S-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku benzylamidu 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropylamino)propionylaminojpentanové kyseliny (80 mg, 0,14 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu bamatém (80 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu dvacet čtyři hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 60

Příprava [1 -karbamoyí-2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]amidu 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

terc-Butylester (1 -(S)-(1 -[1 -karbamoy 1-2-(1 H-indol-3-yl)ethylkarbamoyl]-4-nitroguanidinobutylkarbamoyl}-2-(R)-fenylethyl)karbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5- nitroguanidinopentanové kyseliny (800 mg, 1,7 mmol) a 2-(S)-amino-3-(1H-indol-3-yl)propionamidu (500 mg, 1,2 ekv.) v DMF (50 ml) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (350 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (491 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (1,17 ml, 5 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (75 ml) a 10% uhličitan sodný (75 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol: hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

[1-Karbamoyl-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]amid 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru (1-(S)-{1-[1-karbamoyl-2-(1H-indol-3-yl)ethylkarbamoyl]-4-nitroguanidinobutylkarbamoyl}-2-(R)-fenylethyl)karbamové kyseliny (1,16 g, 1,78 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (50 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí chromatografií s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

• · • · • ·· · • ·

[1 -Karbamoyl-2-(1 H-indol-3-yl)ethylamid 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku [1-karbamoyl-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]amidu 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (250 mg, 0,378 mmol) a 2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionové kyseliny (100 mg, 1,2 ekv.) v DMF (50 ml) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (76 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimemethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (107 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,20 ml, 4 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

[1 -Karbamoyl-2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]amid 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3“fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku [1-karbamoyl-2-(1H-indol-3-yl)ethylamidu 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (100 mg, 0,13 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu barnatém (70 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu dvacet čtyři hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 61

Příprava [2-(S)-( 1 H-indol-3-yl)-1 -methylkarbamoylethyljamidu 2-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny

Methylester 2-amino-5-(3H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny

K suspenzi 2-terc-butoxykarbonylamino-5-(3H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (2,0g,

11,8 mmol) v methanolu (60 ml) se přidává bezvodý chlorovodík, dokud se roztok nenasytí. Roztok se poté zahřívá při teplotě zpětného toku dvacet čtyři hodin a poté se ochladí na teplotu místnosti. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-(3H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny

K roztoku 2-(R)-(2-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionové kyseliny (500 mg, 1,88 mmol) a methylesteru 2-amino-5-(3H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (500 mg, 1,1 ekv.) se přidá hydroxybenzotriazol (381 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (540 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (1,28 ml. 5 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (75 ml) a 10% uhličitan sodný (75 ml). Organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-(1 -trityl-1 Himidazol-4-yl)pentanové kyseliny

ΦΦ *ΦΦ ·

ΦΦ 99 9· 99

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 999 9 9 ·

Β Β 9 9 9 9 9 9 9 9 9 Β ··· · · · · Φ · Φ Φ

ΦΦ ΦΦΦΦ ΦΦ ΦΦ Φ· Φ·

Κ roztoku methylesterů 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5(3H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (300 mg, 0,72 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá trifenylmethylchlorid (220 mg, 1,1 ekv.) a triethylamin (0,2 ml, 2 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (5% methanol/chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-(S)-(2-(R)-terc-Butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-(1-trityl-1 H-imidazoi-4yl)pentanová kyselina

K roztoku methylesterů 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5(1-trityl-1H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (300 mg, 0,45 mmol) v tetrahydrofuranu (30 ml) se přidá monohydrátu hydroxidu lithného (32 mg, 1,2 ekv.) a voda (3 ml) a vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědlo za sníženého tlaku. Surový materiál se použije přímo v dalším stupni.

terc-Butylester {1 -(R)-[1 -[2-(S)-( 1 H-indol -3-y l)-1 -methylkarbamoylethylkarbamoyl]-4-(1 trityl-1H-imidazol-4-yl)butylkarbamoyl]-2-fenylethylkarbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-(1-trityl-1 Himidazol-4-yl)pentanové kyseliny (293 mg, 0,45 mmol) a 2-(S)-amino-3-(1H-indol-3-yl)propionamidu (117mg, 1,3 ekv.) se přidá PyBOP (301 mg, 1,3 ekv.) a triethylamin (0,18 ml, 3 ekv.). Výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědlo za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát (75 ml) a 19% uhličitan sodný (75 ml). Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (5% methanol/chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

[2-(S)-( 1 H-indol-3-yl)-1 -methylkarbamoylethyljamid 2-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny ·· ··· ·

K roztoku terc-butylesteru {1-(R)-[1-[2-(S)-(1H-indol-3-yl)-1-methylkarbamoylethylkarbamoyl]-4-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)butylkarbamoyl]-2-fenylethylkarbamové kyseliny (468 mg, 0,55 mmol) v metyhlenchloridu (32 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (16 ml). Poté se přidává po kapkách triethylsilan, dokud nezmizí světle žlutá barva. Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 62

Příprava methylesteru 2-(R)-[2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-guanidinopentanoylamino]-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny

Methylester 6-fenylhexanové kyseliny

Roztok 6-fenylhexanové kyseliny (1,9 g, 9,89 mmol) v methanolu (50 ml) se nasytí bezvodým chlorovodíkem a poté se zahřívá při zpětném toku dvacet čtyři hodin. Po ochlazení na teplotu místnosti se rozpouštědla odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi chloroform a 10% uhličitan sodný. Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-benzyl-6-fenylhexanové kyseliny

4

4444 « 4 444 44 444 4 4

444 444 4 4444

4444 44 44 44 44

K ochlazenému (-78 °C) roztoku methylesteru 6-fenylhexanové kyseliny (2,8 g, 13,5 mmol) v bezvodém tetrahydrofuranu (50 ml) se pomalu přidá 2,0 M roztok lithiumdiizopropylamidu v hexanu a tetrahydrofuranu (7,5 ml, 1,1 ekv.). Výsledý roztok se míchá při -78 °C čtyřicet minut a poté se pomalu přidá benzylbromid (1,92 ml, 1,2 ekv.). Vzniklý roztok se zahřívá přes noc na teplotu místnosti a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a vodu. Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-Benzyl-6-fenylhexanová kyselina

K roztoku methylesteru 2-benzyl-6-fenylhexanové kyseliny (2,17 g, 7,33 mmol) v tetrahydrofuranu (100 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (880 mg, 2 ekv.) a voda (15 ml). Vzniklý roztok se zahřívá při zpětném toku čtyřicet osm hodin a poté se ochladí na teplotu místnosti. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 1 M kyselinu citrónovou. Organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku methylesteru 2-benzyl-6-fenylhexanové kyseliny (513 mg, 1,82 mmol) a methylesteru 2-(S)-amino-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (480 mg, 1,1 ekv.) v DMF (50 ml) se přidá hydroxybenzotriazol (319 mg, 1,3 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (451 mg, 1,3 ekv.) a triethylamin (0,74 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

• · φφ ·♦·· « · · · φφφ · φ • · φ φφφφφ · · · φ φ φ φφ φφ φφφ φ • · · φφφφ φφφ φφ ΦΦΦΦ φφ ΦΦ φ· ··

2- (S)-(2-Benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanová kyselina

Κ roztoku methylester 2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (700 mg, 1,5 mmol) v tetrahydrofuranu (40 ml) se pňdá monohydrát hydroxidu lithného (180 mg, 2 ekv.) a voda (3 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-amino-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny

K suspenzi 2-amino-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny (300 mg, 1,39 mmol) v methanolu (40 ml) se přidává bezvodý chlorovodík dokud se roztok nenasytí. Vzniklý roztok se zahřívá při zpětném toku dvě hodiny a poté se ochladí na teplotu místnosti a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-(R)-[2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanoylamino]-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (100 mg, 0,22 mmol) a methylesteru 2-amino-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny (65 mg,

1,1 ekv.) v DMF (30 ml) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (44 mg, 1 ekv.), hydrochlorid 1[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (63 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,09 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-(R)-[2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-guanidinopentanoylamino]3- naftalen-2-ylpropionové kyseliny

K roztoku methylesteru 2-(R)-[2-(S)-(2-benzyl-6-fenylhexanoylamino)-5-nitroguanidinopentanoylamino]-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny (80 mg, 0,11 mmol) v methanolu • · · · · ·

(30 ml) se přidá kyselina octová (3 ml) a 5% palladium na síranu bamatém. Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvacet čtyři hodin, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu jako směs čtyř diastereomerů.

Příklad 63

Příprava (1 -(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 5-(1 H-imidazol-4-yl)-2-[3fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

Methylester 3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionové kyseliny

K roztoku 3-fenylpropionové kyseliny (1,0 g, 6,66 mmol) a methylesteru 2-(R)-amino-3fenylpropionové kyseliny (1,19 g, 1 ekv.) v DMF (60 ml) se přidá 1-hydroxybenzotriazol (1,35 g, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (1,90 g,

1,5 ekv.) a triethylamin (2,7 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi vodu a ethylacetát, suší se nad bezvodým síranem sodným, filtruje se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

3-Fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionová kyselina

K roztoku methylesteru 3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionové kyseliny (1,5 g, 4,82 mmol) v tetrahydrofuranu (70 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (434 mg,

1,5 ekv.) a voda (5 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a ·· ·* 99 · • · « · ·>· 9 9 « • · · 9 9 999 9 9 9

9 9 99 99 999 9 · • · · β · · · · · · ·

9999 99 99 99 99 ·· ·<!« poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 5-(3H-imidazol-4-yl)-2-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku 3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionové kyseliny (376 mg, 126 mmol) a methylesteru 2-amino-5-(3H-imidaziol-4-yl)pentanové kyseliny (355 mg, 1,1 ekv.) v DMF (50 ml) se pndá 1-hydroxybenzotriazol (256 mg, 1,5 ekv.), hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (362 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,863 ml, 5 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 2-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny

K roztoku methylesteru 5-(3H-imidazol-4-yl)-2-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]pentanové kyseliny (473 mg, 1,02 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá trifenylmethylchlorid (341 mg, 1,2 ekv.) a triethylamin (0,42 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (5% methanol/chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-[3-Fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanová kyselina

K roztoku methylesteru 2-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]-5-(1-trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (380 mg, 0,54 mmol) v tetrahydrofuranu (80 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (48 mg, 1,5 ekv.) a voda (10 ml). Vzniklý roztok

0« *49« »0 4« ·♦ ·« «400 * · · · · «

0 · · · 00« 9 · · • 9 0 0 0 ·· * · · · ·

9»· · · · 4 ·«··

0« 0090 04 04 «9 ·· se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se použije přímo v příštím stupni.

terc-Butylester (1 -(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)karbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-terc-butoxykarbonylamino-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny (1,5 g,

4,76 mmol) v DMF (50 ml) se přidá methylamin (3,0 ml 2,0 M roztoku v tetrahydrofuranu), PyBOP (3,7 g, 1,5 ekv.) a triethylamin (1,95 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 10% uhličitan sodný, organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí mžikovou chromatografíi na silikagelu (5% methanol/chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

2-(S)-Amino-N-methyl-3-naftalen-2-ylpropionamid

K roztoku terc-butylesteru (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)karbamové kyseliny (1,3 g, 3,96 mmol) v methylenchloridu (100 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (50 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylaminoj-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny

K roztoku 2-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (383 mg, 0,53 mmol) v DMF (50 ml) se přidá 2-(S)-aminoN-methyl-3-naftalen-2-ylpropionamid (147 mg, 0,8 ekv.), PyBOP (420 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,220 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti čtyřicet osm hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 10% uhličitan sodný, organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, ♦ r »·»· ·· ·· ·· ·· ·*·* « » · * » · • · r » · ··« · · · • · » ·« »·»··· · «*· ···· · · « · «« ··»· ·· i· >» ·« filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (5% methanol/chloroform) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 5-(1H-imidazol-4-yl)-2-[3-fenyl-2-(R)(3-fenylpropionylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku kyseliny trifluoroctové (20 ml) v metyhlenchloridu (40 ml) se přidá (1-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(3-fenylpropionylamino)propionylamino]-5-(1 -trityl-1 H-imidazol-4-yl)pentanové kyseliny (441 mg, 0,489 mmol). Poté se přidává po kapkách triethylsilan dokud světle žlutá barva nezmizí. Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odpaří rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanol:hydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu jako směs diastereomerú. Diastereomery se oddělí HPLC s reverzními fázemi a získá se prvně elující diastereomer a později elující diastereomer.

Příklad 64

Příprava (1 -(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino)-5-guanidinopentanové kyseliny

terc-Butylester {1 -(R)-[4-nitroguanidino-1 -(S)-(1 -(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethylkarbamoyl)butylkarbamoyl]-2-fenylethylkarbamové kyseliny

K roztoku 2-(S)-(2-(R)-terc-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (500 mg, 1,07 mmol) a 2-(S)-amino-N-methyl-3-naftalen-2-ylpropionamidu (440 mg, 1,2 ekv.) se přidá PyBOP (836 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,58 ml, 4 ekv.). Výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti přes noc a poté se odpaří rozpouštědlo za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 10% uhličitan sodný, suší se nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku terc-butylesteru {1-(R)-[4-nitroguanidino-1-(S)-(1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-yl-ethylkarbamoyl)butylkarbamoyl]-2-fenylethylkarbamové kyseliny (500 mg,

0,74 mmol) v methylenchloridu (60 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (30 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4hydroxyfenyl)propionylaminol-3-fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

K roztoku (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (400 mg, 0,58 mmol) v DMF (60 ml) se přidá 2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionová kyselina (155 mg, 1,2 ekv.), PyBOP (410 mg, 1,2 ekv.) a triethylamin (0,32 ml, 4 ekv.). Výsledný roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odpaří rozpouštědlo za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 10% uhličitan sodný, organické podíly se suší nad bezvodým síranem hořečnatým, filtruje se a rozpouštědla se odstraní

za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu (90:9:1 chloroform:methanokhydroxid amonný) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}-5-guanidinopentanové kyseliny

K roztoku (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 2-(S)-{2-(R)-[2-(S)-acetylamino-3-(4-hydroxyfenyl)propionylaminol-3-fenylpropionylamino}-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (330 mg, 0,42 mmol) v methanolu (50 ml) se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu barnatém (325 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvacet čtyři hodin a poté se filtruje přes celit. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 65

Příprava (1 ~(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 5-guanidino-2-(S)-{2-(R)-[3(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}pentanové kyseliny

K roztoku (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 2-(S)-(2-(R)-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (268 mg, 3,88 mmol) a 3-(4-hydroxyfenyl)propionové kyseliny (77 mg, 1,2 ekv) se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodiimidu (111 mg, 1,5 ekv.), 1-hydroxybenzotriazol (78 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,21 ml, 4 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi.

** ·· ·· ··· • · · · · • · ··· · · · • · ·· ··· · ···· ·· ·· (1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 5-guanidino-2-(S)-{2-(R)-[3-(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}pentanové kyseliny

K suspenzi (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 5-nitroguanidino-2-(S)-{2(R)-[3--(4-hydroxyfenyl)propionylamino]-3-fenylpropionylamino}pentanové kyseliny (141 mg, 0,19 mmol) a 5% palladiu na síranu bamatém (100 mg) v methanolu (45 ml) se přidá kyselina octová (5 ml). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku dvacet čtyři hodiny, filtruje se přes celit a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Zbytek se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 66

Příprava (1 -(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino) propionylaminojpentanové kyseliny

2-Fenylthansulfonylchlorid

K dvoufázovému roztoku 2-fenylethanthiolu (10,0 g, 72,5 mmol) ve 100 ml ledové vody se přidá kyselina octová (20 ml). Tento roztok se poté sytí pět minut plynným chlorem. Vodný roztok se poté extrahuje ethyletherem, suší se nad síranem hořečnatým, filtruje se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Methylester 3-fenyl-2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionové kyseliny <

<

« «

K roztoku methylesteru 2-amino-3-fenylpropionové kyseliny (700 mg, 3,9 mmol) v tetrahydrofuranu (30 ml) se přidá po kapkách 2-fenylethansulfonylchlorid (1,2 g, 5,88 mmol). K tomuto roztoku se přidá triethylamin (1,55 ml, 3 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

3-Fenyl-2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionová kyselina

K roztoku methylesteru 3-fenyl-2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionové kyseliny (890 mg, 2,56 mmol) v tetrahydrofuranu (50 ml) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (260 mg, 1,5 ekv.) a voda (5 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

terc-Butylester [4-nitroguanidino-1-(R)-(1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethylkarbamoyl)butyl]karbamové kyseliny

K roztoku 2-amino-N-methyl-3-naftalen-2-ylpropionové kyseliny (1,0 g, 2,92 mmol) a 2(R)-terc~butoxykarbonylamino-5-nitroguanidinopentanové kyseliny (1,12 g, 1,2 ekv.) se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]-3-ethylkarbodimidu (837 mg, 1,5 ekv.), 1hydroxybenzotriazol (529 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (1,2 ml, 3 ekv.). Vzniklá suspenze se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Zbytek se rozdělí mezi ethylacetát a 10% uhličitan sodný, organické podíly se suší nad síranem hořečnatým, filtrují se a rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku. Vzniklý surový materiál se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 2-(R)-amino-5-guanidinopentanové kyseliny • · • · • · to «

K roztoku terc-butylesteru [4-nitroguanidino-1-(R)-1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2yl-ethylkarbamoyl)butyl]karbamové kyseliny (800 mg, 1,52 mmol) v v methylenchloridu (40 ml) se přidá kyselina trifluoroctová (20 ml). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu jako sůl kyseliny trifluoroctové.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 5-nitroguanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)(2-fenylethansulfonylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku 3-fenyl-2(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionové kyseliny (150 mg, 0,45 mmol) a (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 2-(R)-amino-5-guanidinopentanové kyseliny (270 mg, 1,1 ekv.) se přidá hydrochlorid 1-[3-(dimethylaminopropyl]3-ethylkarbodiimidu (130 mg, 1,5 ekv.), 1- hydroxybenzotriazol (91 mg, 1,5 ekv.) a triethylamin (0,25 ml, 4 ekv.). Vzniklý roztok se míchá při teplotě místnosti dvacet čtyři hodin a poté se odstraní rozpouštědla za sníženého tlaku. Surový produkt se čiší HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

(1-(S)-Methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amid 5-guanidino-2-(S)-[3-fenyl-2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionylamino]pentanové kyseliny

K roztoku (1-(S)-methylkarbamoyl-2-naftalen-2-ylethyl)amidu 5-nitroguanidino-2-(S)-[3fenyl-2-(R)-(2-fenylethansulfonylamino)propionylamino]pentanové kyseliny (230 mg,

0,31 mmol) v methanolu (45 ml) se přidá kyselina octová (5 ml) a 5% palladium na síranu barnatém (200 mg). Vzniklá suspenze se hydrogenuje při atmosférickém tlaku po dobu dvacet čtyři hodin a poté se filtruje přes celit. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu ve formě soli s kyselinou trifluoroctovou.

Příklad 67 • ·

Příprava Ac-(carba-Ff)-RW-NH2 (11)

Tato sloučenina se připraví postupem uvedeným ve schématech ΙΑ & B:

Schéma IA terc-Butylester [1 -(4-chlorbenzyl)-3-(2,2-dimethyl-4,6-dioxo[1,3]dioxan-5-yl)-3-oxopropyljkarbamové kyseliny (1)

K dobře míchané směsi Boc-(S)-3-amino-4-(4-chlorfenyl)butanové kyseliny (5,0 g, 16 mmol), 2,2-dimethyl-1,4-dioxan-4,6-dionu (2,54 g, 17,6 mmol) a DMAP (24 mmol) v DCM (160 ml) se při teplotě 0 °C přidá v jedné dávce EDCI (24 mmol). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 18 hodin. Přidá se DCM (100 ml) a směs se promyje s vodou (2 x 50 ml), 5% vodným hydrogensíranem draselným (3 x 50 ml), 5% vodným hydrogenuhličitanem sodným (1 x 50 ml) a solankou (1 x 50 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem hořečnatým a po zahuštění se získá 1.

terc-Butylester [1 -(4-chlorbenzyl)-3-(2,2-dimethyl-4,6-dioxo[1,3]dioxan-5-yl]karbamové kyseliny (2)

Borohydrid sodný (63,8 mmol, 4,0 ekv.) se přidá po částech při teplotě 0 °C během jedné hodiny k míchanému roztoku 1 (15,96 mmol) ve směsi DCM (180 ml) a kyseliny • ·

• · octové (10 ml, 175 mmol, 11,0 ekv.). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 64 hodin. Reakční směs se zředí s DCM (150 ml) a promyje se vodou (1 x 50 ml) a solankou (2 x 50 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a koncentruje se rotačním odpařením a získá se sloučenina 2.

6-(4-Chlorbenzyl)piperidin-2-on (3a) a terc-butylester 2-(4-chlorbenzyl)-6-oxopiperidin-1karboxylové kyseliny (3b)

Míchaná směs 2 (15,32 mmol) a xylenu (140 ml) se zahřívá při zpětném toku po dobu 6 hodin. Rozpouštědlo se odstraní odpařením při teplotě 37 °C ve vakuu a získá se surová sloučenina 3a. Tento materiál se spojí s di-terc-butyldikarbonátem (5,0 ekv.) a DMAP (0,3 ekv.) v DCM (100 ml) a směs se míchá při teplotě místnosti 40 hodin. Rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a zbytek se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití EtOAc-hexan (1:19, 500 ml a 1:9, 1300 ml) jako eluentu a získá se 3b.

terc-Butylester 3-benzyl-6-(4-chlorbenzyl)-2-oxopiperidin-1 -karboxylové kyseliny (4)

Bis(trimethylsilyl)amid sodný (5,16 ml 1,0M roztoku v THF, 1,0 ekv.) se přidá po kapkách při teplotě -78 °C a pod argonem k dobře míchanému roztoku 3b (1,67 g, 5,16 mmol) ve směsi THF-DME (1:1, 100 ml) a vzniklá směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 0,5 hodiny. K této míchané, studené směsi se přidá roztok benzylbromidu (0,882 g, 5,16 mmol, 1,0 ekv.) v THF (5 ml) a míchání pokračuje při teplotě -78 °C pod argonem po dobu 2 hodiny. Reakční směs se uhasí nasyceným vodným roztokem chloridu amonného (20 ml) a míchání pokračuje po dobu více než 10 minut. Směs se poté rozdělí mezi DCM (80 ml) a vodu (40 ml) a vodná fáze se extrahuje s DCM (2 x 40 ml). Spojené organické fáze se promyjí s vodou (1 x 40 ml), suší se nad bezvodým síranem hořečnatým a koncentrují se a získá se surová sloučenina 4, která se čistí mžikovou chromatografií na silikagelu za použití EtOAc-hexan (1:39, 1000 ml a 1:19, 1300 ml) jako eluentu a získá se sloučenina 4 (jednotlivý diastereomer).

4 4

2-(R)-Benzyl-5-(R)-terc-butoxykarbonylamino-6-(4-chlorfenyl)hexanová kyselina ('Boc(carba-4-CI-Ff)-OH', 5)

K dobře míchanému roztoku sloučeniny 4 (1,152 g, 2,783 mmol) ve směsi THF-voda (4:1) se přidá monohydrát hydroxidu lithného (0,467 g, 11,132 mmol, 4 ekv.) v jedné dávce a po kapkách se přidá peroxid vodíku (1,95 ml, 8,0 ekv.). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 16 hodin. Reakční směs se při teplotě 0 °C okyselí vodnou kyselinou chlorovodíkovou (11,5 ml, 1N) a extrahuje se s DCM (4 x 40 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, koncentruje se a zbytek se trituruje a získá se sloučenina 5 (jednotlivý diastereomer).

Schéma IB

Boc-R(NO₂)-W-NH₂ (6)

HOBt (1,0 ekv.) se přidá při teplotě 0 °C k dobře míchanému roztoku Boc-R(N0₂)-OH (0,639 g, 2,0 mmol) a H-W-NH₂· HCI (0,479 g, 2,0 mmol) v DMF (10 ml) a poté se přidá EDCI (1,1 ekv.) a NMM (0,484 ml, 2,2 ekv.). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 4 až 18 hodin. Reakční směs se zředí s EtOAc (100 ml) a promyje se vodou (1 x 20 ml), 1 N vodnou kyselinou ·· ··· chlorovodíkovou (2x10 ml), nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 10 ml) a solankou (1x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým a po zahuštění se získá sloučenina 6, p-TSA · H-R(NO₂)-W-NH₂ (7)

Roztok sloučeniny 6 (0,697 g, 1,381 mmol) ve směsi TFA-DCM-voda (10:40:0,5, 15 ml) se míchá při teplotě místnosti 2 až 4 hodiny. K reakční směsi se přidá monohydrát p-toluensulfonové kyseliny 1 ekv.). Směs se míchá 10 minut, reakční směs se koncentruje odpařením ve vakuu a zbytek se trituruje směsí etheru a hexanu (1:1) a získá se sloučenina 2.

Boc-(carba-4-CI-Pf)-R(NO₂)-W-NH₂ (8)

Postupuje se podle postupu přípravy sloučeniny 6 a sloučenina 7 (0,5 mmol) se kopuluje s Boc-(carba-4-CI-Ff)-OH (5, 0,5 mmol, 1,0 ekv.) a získá se sloučenina 8.

p-TSA · H-(carba-4-CI-Ff)-R(NO₂)-W-NH₂ (9)

Postupuje se podle postupu přípravy sloučeniny 7 a ze sloučeniny 8 se získá sloučenina

9.

Ac-(carba-4-CI-Ff)-R(NO₂)-W-NH₂ (10)

Postupuje se podle postupu přípravy sloučeniny 6 a sloučenina 9 (0,472 mmol) se kondenzuje s kyselinou octovou a získá se surová sloučenina 10, která se čistí HPLC (Cw) a získá se sloučenina 10,

Ac-(carba-Ff)-R-W-NH₂ (11) · ·· • 44

4

Směs sloučeniny 10 (200 mg, 0,263 mmol) a 300 mg 5% Pd-BaSO₄ (neredukovaný) ve směsi MeOH-HOAc (10:1,22 ml) se hydrogenuje pod tlakem 0,293 MPa při teplotě místnosti po dobu 17 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací přes polštářek Celitu, který se promyje s MeOH. Filtrát se koncentruje a získá se surová sloučenina 11, která se čistí preparativní HPLC (C-is) a produkt se trituruje s etherem a získá se sloučenina 11 ve formě TFA soli.

Příklady 68 a 69

Příprava 3-(4-hydroxyfenyl) propanoyl-Atc-R-tryptamidu (17) a 3-fenylpropanoyl-Atc-Rtryptamidu (19)

Sloučeniny těchto příkladů se připraví jak je uvedeno ve schématu II:

Schéma II

Boc-R(NO₂)-tryptamid (12) • ·

• · · · · ·

HOBt (1,0 ekv.) a EDCI (0,949 g, 4,95 mmol, 1,1 ekv.) se přidají postupně při teplotě 0 °C k dobře míchané směsi Boc-R(NO₂)-OH (1,437 g, 4,5 mmol) a tryptaminu (0,721 g,

4,5 mmol) v DMF (20 ml). Vzniklá směs se míchá 30 minut při teplotě 0 °C a poté při teplotě místnosti cca 20 hodin. Směs se zředí s EtOAc (100 ml) a poté se promyje postupně vodou (2 x 20 ml), 5% vodnou kyselinou citrónovou (3x10 ml), 5% vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 10 ml) a solankou (2 x 20 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným a po koncentraci rotačním odpařením se získá sloučenina 12, která se použije v příštím stupni.

H-R(NO2)-triptamid (13)

Roztok sloučeniny 12 (1,985 g, 4,3 mmol) ve směsi kyseliny trifluoroctové, dichlormethanu a vody (10:40:0,5, 50 ml) se míchá při teplotě 0 °C po dobu 15 minut a poté při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a zbytek se znovu odpaří s methanolem (3 x 40 ml). Surový produkt se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 13.

Fmoc-Atc-R(NO₂)-tryptamid (14)

HOAt (0,409 g, 3,005 mmol), EDCI (0,632 g, 3,306 mmol, 1,1 ekv.) a TEA (1,1 ekv.) se přidají postupně při teplotě 0 °C k dobře míchanému roztoku sloučeniny 13 (1,086 g, 3,005 mmol) a Fmoc-Atc-OH (1,242 g, 3,005 mmol) v DMF (15 ml). Vzniklá směs se míchá 30 minut při teplotě 0 °C a poté při teplotě místnosti 21 hodin. Zpracováním, jak je popsáno pro sloučeninu 12 se získá surová sloučenina 14. Tento materiál se použije přímo v příštím stupni bez dalšího čištění.

H-Atc-R(NO₂)-tryptamid (15) • · ·· ··

Roztok sloučeniny 14 (2,27 g, 3,0 mmol) ve směsi DEA-DMF (1:9, 30 ml) se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny. Rozpouštědlo se odstraní odpařením za sníženého tlaku a zbytek se trituruje směsí etheru a hexanu (1:1, 100 ml) a získá se sloučenina 15.

3-(4-Hydroxyfenyl)propanoyl-Atc-R(NO₂)-tryptamid (16)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 12 a ze sloučeniny 15 (0,535 g, 1,0 mmol) a 3(4-hydroxyfenyl)propanové kyseliny (0,166 g, 1,0 mmol) se získá 0,603 g surové sloučeniny 16. Surový produkt se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 16.

3-(4-Hydroxyfenyl)propanoyl-Atc-R-tryptamid (17)

Směs sloučeniny 16 (0,270 g, 0,405 mmol) a 5% Pd-BaSCL (neredukován, 0,270 g) ve směsi MeOH-HOAc (10:1,22 ml) se hydrogenuje při teplotě místnosti a při atmosférickém tlaku po dobu 17 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací přes polštářek celitu a filtrát se koncentruje za sníženého tlaku rotačním odpařením. Zbytek se čistí preparativní HPLC a trituruje se s etherem a získá se sloučenina 17.

3-Fenylpropanoyl-Atc-R(NO₂)-tryptamid (18)

Postupuje se podle přípravy 16 a z 535 g (1,0 mmol) sloučeniny 15 a 3-fenylpropionové kyseliny (0,150 g, 1,0 mmol) se získá sloučenina 18.

3-Fenylpropanoyl-Atc-R-tryptamid (19)

Postupuje se podle přípravy příkladu 17 a získá se sloučenina 19 jako hydratovaná TFA sůl z 0,270 mg sloučeniny 18.

Příklad 70

Příprava 3-fenylpropanoyl-f-N(Me)R-tryptamidu (25) *♦ *·

Sloučenina tohoto příkladu se připraví postupem popsaným ve schématu III:

Schéma III

Boc-N(Me)-R(Tos)tryptamid (20)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 12 (schéma I) a z 1,991 g (4,5 mmol) BocN(Me)-R(Tos)-OH a 0,721 g (4,5 mmol) tryptaminu se získá sloučenina 20. Tento surový materiál se použije v příštím stupni bez dalšího čištění.

p-TSA · H-N(Me)-R(Tos)tryptamid (21)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 7 (schéma 0) a získá se sloučenina 21 jako pTSA sůl z 2,631 g (4,5 mmol) sloučeniny 20.

Boc-f-N(Me)-R(Tos)tryptamid (22)

DIEA (0,310 ml, 1,772 mmol, 2,0 ekv.) se přidá při teplotě 0 °C k dobře míchané směsi sloučeniny 21 (0,4293 g, 0,886 mmol), Boc-f-OH (0,2351 g, 0,886 mmol) a PyBrop • » > ΦΦΦ

Φ Φ 4

Φ · 4 » Φ« • φ* • 9 9 • 9 1 · • Φ > · »Φ · φ· (0,3795 g, 0,886 mmol) v DCM (10 ml). Vzniklá reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 16 hodin a poté se zředí EtOAc (50 ml). Organická vrstva se promyje postupně s vodou (1x10 ml), 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného (2 x 10 ml) a solankou (2 x 10 ml) a suší se nad bezvodým síranem sodným. Po odstranění sušidla a odpaření těkavých látek za sníženého tlaku se získá surová sloučenina 22.

H-f-N(Me)-R(Tos)tryptamid (23)

Roztok sloučeniny 22 (0,609 g, 0,833 mmol) rozpuštěný ve směsi TFA-DCM-voda (10:40:0,5, 10 ml) se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté se udržuje v chladničce při teplotě 4 °C po dobu 72 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se poté dvakrát odpaří s DCM (10 ml ea). Takto získaný surový materiál se čistí preparativní HPLC a trituruje se s etherem a získá se sloučenina 23.

3-Fenylpropanoyl-f-N(Me)-R(Tos)tryptamid (24)

TEA (0,209 mmol, 1,1 ekv.) se pňdá při teplotě 0 °C k dobře míchané směsi sloučeniny 23 (0,120 g, 0,19 mmol), 3-fenylpropanové kyseliny (0,19 mmol) a EDCI (0,209 mmol,

1,1 ekv.) v DMF (3 ml). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 0,5 hodiny a poté při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Reakční směs se zředí s EtOAc (30 ml) a promyje se postupně s vodou (2x5 ml), 5% vodnou kyselinou citrónovou (3x3 ml), 5% vodným hydrogenuhličitanem sodným (2x3 ml) a solankou (2x5 ml). Organická vrstva se suší nad bezvodým síranem sodným, koncentruje se a poté se trituruje s etherem a získá se surová sloučenina 24.

3-Fenylpropanoyl-f-N(Me)R-tryptamid (25)

Sloučenina 24 (100 mg, 0,13 mmol) se rozpustí při teplotě -78 °C v kapalném amoniaku (25 ml) a za intenzivního míchání magnetickým míchadlem se přidají kousky kovového sodíku, dokud trvá modrá barva po dobu dvou hodin. Přebytek reakční složky se rozloží octanem amonným a amoniak se odstraní odpařením při teplotě místnosti. Zbytek se ·· 99 • * ♦ 4 • · 4 • * 4 • · ·

9999 *·· 4* < « · • 4 444 • 4 4 « ♦ · 4*4 • · 4

4 · 9

4 44 rozpustí v methanolu a roztok se filtruje přes polštářek silikagelu, který se následně promyje s methanolem. Spojené methanolové filtráty se koncentrují na rotační odpařovačce a získá se surový materiál, který se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 25 jako hydratovaná, TFA sůl.

Příklady 71 až 75

Přípravy H-YfRW-NH₂ (32), Bc-YfRW-NH₂ (34), CH₃(CH₂)8CO-YfRW-NH2 (36), BcYfRW-tryptamidu (40), a CH₃(CH₂)8CO-YfRW-tryptamidu (42)

Tyto sloučeniny se připraví podle postupu uvedeném ve schématu IV:

• · · · r^Hx^N'^N°²

-r^OH ⁺

Λ ^Η^ΛΤ ! O

NH₂

EDO}, HOBt

OMe TEA, DMF

W _ Áh ^h

Boc _2S '-^Ν'γ>^Ν'ΜΟ₂

NH₂ „OMe

1) TFA, DCM y <

2) p-TSA p-TS^ .

'y^NQ,

NH2

Boc-fR(NO₂)-OMe (26)

Boc-f-OH (7,64 g, 28,8 mmol), H-W(NO₂)-OMe.HCI (6,72 g, 28,8 mmol), HOBt (3,94 g,

29,2 mmol), TEA (8 ml, 57,6 mmol) a DMF (110 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na • ·

teplotu 0 °C a za míchání se přidá EDCI (5,89 g, 30,8 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin, poté se koncentruje rotačním odpařením, zředí se vodou (350 ml) a extrahuje se s EtOAc (4 x 80 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodnou 1N HCI (3 x 60 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 50 ml), solankou (45 ml) a poté se suší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se filtrát koncentruje rotačním odpařením, odpaří se spolu s etherem (50 ml) a po sušení ve vakuu se získá sloučenina 3 p-TSA · H-fR(NO₂)-OMe (27)

TFA (6 ml) se přidá při teplotě 0 °C k roztoku Boc-fR(NO₂)-OMe (26) (1,49 g, 3,1 mmol) v DCM (20 ml). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut, potom se míchá při teplotě místnosti 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, zbytek se znovu odpaří s etherem (25 ml) a vzniklý zbytek se rozpustí v methanolu (25 ml). Ke směsi se přidá monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (0,6 g, 3,1 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 5 minut, těkavé podíly se odstraní ve vakuu a zbytek se odpaří s etherem (2 x 25 ml) a získá se sloučenina 27.

Boc-YfR(NO₂)-OMe (28) p-TSA · H-fR(NO₂)-OMe (27, 3,46 g, 6 mmol), Boc-Y-OH (1,72 g, 6,12 mmol), HOBt (0,83 g, 6,18 mmol), TEA (1,6 ml, 12 mmol) a DMF (25 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na teplotu 0 °C a za míchání se přidá EDCI (1,1 g, 6,3 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, poté se koncentruje rotačním odpařením, zředí se vodou (110 ml) a extrahuje se s EtOAc (4 x 23 ml). Spojené organické extrakty se promyjí vodnou 1N HCI (3 x 20 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 25 ml), solankou (25 ml) a poté se suší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se filtrát koncentruje rotačním odpařením a získá se sloučenina 5.

Boc-YfR(NO₂)-OH (29) ··· · · · · ···· ·· ···· ·· ·· ·· ··

Směs Boc-YfR(NO₂)-OCH3 (28, 2,64 g, 4,1 mmol), LiOH (0,113 g, 4,72 mmol), vody (0,4 ml) a MeOH (10 ml) se míchá pň teplotě místnosti 6 hodin. Po odstranění rozpouštědla se zbytek rozpustí v minimálním množství vody. Poté se přidá 1 N HCI (cca 4,7 ml), aby se směs neutralizovala na pH 5-6. Filtrací pevné látky a sušením ve vakuu se získá sloučenina 29.

Boc-YfR(NO₂)W-NH₂ (30)

Boc-YfR(NO₂)-OH (29, 0,99 g, 1,56 mmol), H-W-NH₂.HCI (0,43 g, 1,8 mmol), HOBt (0,25 g, 1,84 mmol), TEA (0,55 ml, 3,9 mmol) a DMF (20 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na 0 °C a za míchání se přidá EDCI (0,36 g, 1,87 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, koncentruje se rotačním odpařením, zředí se vodou (120 ml) a extrahuje se s EtOAc (4 x 25 ml). Spojené organické extrakty se promyjí 1 N HCI (3 x 20 ml), nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 25 ml), solankou (20 ml) a poté se suší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se filtrát koncentruje rotačním odpařením, odpaří se s etherem (20 ml) a po vysušení ve vakuu se získá sloučenina 30.

H-YfR(NO₂)-Trp-NH₂ (31)

TFA (2 ml) se přidá při teplotě 0 °C k roztoku peptidu 30 (0,95 g, 1,16 mmol) v DCM (6 ml). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut a poté se reakční směs míchá při teplotě místnosti 5 hodin. Rozpouštědlo se odpaří rotačním odpařením a vzniklý zbytek se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 31.

H-YfRW-NH₂ (32)

Peptid 31 (0,25 g, 0,35 mmol), 5% Pd/BaSO4 (0,25 g, neredukovaný) a MeOH (15 ml) se spojí a směs se hydrogenuje při tlaku vodíku 0,2812 MPa při teplotě místnosti po dobu 48 hodin. Po filtraci se filtrát koncentruje rotačním odpařením a zbytek se čistí preparativní HPLC a získá se H-YfRW-NH₂ (32).

• · • · · · ··· · · · « · · · · · · · β · · • · · · · · · ···· ·· ···· ·· ·· ·· ··

Bc-YfR(NO₂)W-NH₂ (33)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28, poté následuje čištění preparativní HPLC a získá se sloučenina 33 z H-YfR(NO₂)W-NH₂ (31, 0,26 g, 0,37 mmol), butanové kyseliny (0,037 g, 0,42 mmol), HOBt (0,059 g, 0,43 mmol), TEA (0,1 ml, 0,74 mmol), EDCI (0,084 g, 0,44 mmol), a DMF (12 ml).

Bc-YfRW-NH7 (34)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a sloučenina 34 se získá ze sloučeniny 33 (0,16 g, 0,2 mmol), 5%, Pd/BaSO₄ (0,15 g, neredukován), MeOH (12 ml), a TFA (0,1 ml).

CH₃(CH₂)₈CO-YfR(NO₂)W-NH₂ (35)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28, poté následuje čištění preparativní HPLC a získá se sloučenina 35 z H-YfR(NO₂)W-NH₂ (31, 0,26 g, 0,36 mmol), kyseliny děkanové (0,071 g, 0,41 mmol), HOBt (0,057 g, 0,42 mmol), TEA (0,1 ml, 0,73 mmol), EDCI (0,083 g, 0,43 mmol), a DMF (12 ml).

CH₃(CH₂)₈CO-YfRW-NH₂ (36)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 31 a sloučenina 36 se získá ze sloučeniny 35 (0,2 g, 0,23 mmol), 5% Pd/BaSO₄ (0,18 g, neredukovaný), MeOH (12 ml), a TFA (0,1 ml).

Boc-YfR(NO₂)-tryptamid (37)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30 a získá se sloučenina 37 z Boc-YfR(NO₂)-OH (29,0, 95 g, 1,5 mmol), tryptaminu (0,276 g, 1,73 mmol), HOBt (0,239 g, 1,77 mmol), • ·

100

TEA (0,5 ml, 3,6 mmol), EDCI (0,34 g, 1,8 mmol), a DMF (18 ml).

H-YfR(NO₂)-tryptamid (38)

Peptid 30 (0,98 g, 1,27 mmol) v DCM (6 ml) a roztok anisol-TFA-DCM (1:8:9,6 ml) se smísí pň teplotě 0 °C a míchá se za chlazení ledem po dobu 20 minut. Směs se poté nechá míchat pň teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odstraní a vzniklý zbytek odpaří s etherem (2 x 25 ml) a získá se surová sloučenina 38.

Bc-YfR(NO₂)-tryptamid (39)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a po čištění preparativní HPLC se získá sloučenina vzorce 39 ze sloučeniny 38 (0,28 g, 0,41 mmol), butanové kyseliny (0,042 g, 0,47 mmol), HOBt (0,066 g, 0,49 mmol), TEA (0,12 ml, 0,83 mmol), EDCI (0,094g, 0,49 mmol), a DMF (10 ml).

Bc-YfR(NO₂)-tryptamid (40)

Postupuje se podle přípravy 32 a získá se sloučenina 40 ze sloučeniny 39 (0,19 g, 0,25 mmol), 5% Pd/BaSO4 (0,18 g, neredukovaný), MeOH (12 ml), a TFA (0,1 ml).

CH₃(CH₂)₃CO-YfR(NO₂)-triptamid (41)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a po čištění preparativní HPLC se získá sloučenina 41 ze sloučeniny 38 (0,27 g, 0,4 mmol), děkanové kyseliny, (0,081 g, 0,47 mmol), HOBt (0,065 g, 0,48 mmol), TEA (0,11 ml, 0,81 mmol), EDCI (0,093g, 0,49 mmol), a DMF (12 rnl).

CH₃(CH₂)₈CO-YfRW-tryptamid (42)

101

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a po izolaci se získá sloučenina 42 ze sloučeniny 41 (0,21 g, 0,25 mmol), 5 % Pd/BaSC>4 (0,18 g, neredukovaný), MeOH (12 ml), a TFA (0,1 ml).

Příklady 76 až 81

Příprava Ac-YfRW-OMe (47), Ac-YfRW-NHCH₃ (49), AcYfRWSar-NH₂ (50), 3-(4-OHPh)propanoyl-fRW-NHCH₃ (53), 3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRW-NH(CH₂)₂OH (54), a 3-(4OH-Ph)propanoyl-fRW-NH(CH₂)₂OH (55)

Sloučeniny těchto příkladů se připraví postupem uvedeným ve schématu V:

• · · ·

102 • · · ····· · · · • · · · · · « · · · · φ φ · · · · · · ···· ·· ···· ·· ·· ·· ··

Βοσ

j-^-hydroxyfenyl)propanová kyselina

EDCI, HOBT . \ TEA, DMF °=< FV?

OMe

Boc' 44 '

Ri = H, R2=CH₃

Ri = CH3 R₂= CH23ONH2

Ri = H, R₂= CH2CH2OH

R-| = CH3 R₂= CH2CONH2

Schéma V ♦ ·

103 • ·· · · · · · • · · · ·· ··

Boc-fR(NO)-OH (43)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 as získá se sloučenina 43 z Boc-fR(NO₂)OMe (26, 2,8 g, 5,8 mmol), LiOH (0,27 g, 11 mmol) a MeOH (15 ml).

Boc-fR(NO₂)W-OMe (44)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 26 a získá se sloučenina 44 z Boc-fR(NO2)-OH (43, 4,22 g, 9,06 mmol), H-W-OMe.HCI (2,65 g, 10,4 mmol), HOBt (1,44 g, 10,7 mmol), TEA (3,15 ml, 22,6 mmol), EDCI (2,08 g, 10,9 mmol), a DMF (55 ml).

H-fR(NO₂)W-OMe (45)

TFA (12 ml) se přidá k roztoku sloučeniny 44 (5 g, 7,5 mmol) v DCM (30 ml) při teplotě 0 °C. Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a reakční směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se odpaří s etherem (2 x 35 ml) a produkt se suší ve vakuu a získá se surový produkt 45.

Ac-YfR(NO₂)W-OMe (46)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se surová sloučenina 46 z H-fR(N0₂)W-0Me (45, 3,3 g, 5,8 mmol), Ac-Y-OH (1,5 g, 6,7 mmol), HOBt (0,93 g, 6,9 mmol), TEA (1,7 ml, 12,2 mmol), EDCI (1,34 g, 7 mmol), a DMF (25 ml).

Ac-YfRW-OMe (47)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a získá se sloučenina vzorce 47 (0,2 g, 0,26 mmol), 5% Pd/BaSO₄ (0,19 g, neredukovaný), MeOH (15 ml) a TFA (0,1 ml).

Ac-YfR(NO₂)W-OH (48)

104 • to • to · toto to • toto toto·· toto·· ·· ···· «· ·· ·· ··

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a následným čištěním preparativní HPLC se získá sloučenina 48 z Ac-YfR(NO2)W-OMe (46, 0,96 g, 1,25 mmol), LiOH (0,063 g, 2,6 mmol), vody (0,4 ml), a MeOH (6 ml).

Ac-YfRW-NHCHa (49)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30, s výjimkou, stupně pro koodpařování, a kondezační produkt se získá z Ac-YfR(NO2)W-OH (48, 0,3 g, 0,39 mmol), methylaminu (0,014 g, 0,45 mmol), HOBt (0,058 g, 0,43 mmol), TEA (0,092 ml, 0,91 mmol), EDCI (0,089 g, 0,47 mmol), a DMF (12 ml). Tento produkt se čistí preparativní HPLC a poté se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,17 g, neredukováno) v MeOH (12 ml) a získá se sloučenina 49.

Ac-YfRWSar-NH₂ (50)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30, s výjimkou, stupně pro koodpařování, a kondezační produkt se získá z Ac-YfR(NO₂)W-OH (19, 0,3 g, 0,39 mmol), sarkosinamidu.HCI (0,05 g, 0,4 mmol), HOBt (0,058 g, 0,43 mmol), TEA (0,092 ml, 0,91 mmol), EDCI (0,089 g, 0,47 mmol), a DMF (12 ml). Tento produkt se čistí preparativní HPLC a poté se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,17 g, neredukováno) v MeOH (12 ml) a získá se sloučenina 50.

3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRW-OCH₃ (51)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 26 a po čištění preparativní HPLC se získá sloučenina 51 z H-fR(N0₂)W-OCH₃ 45 (2,1 g, 3,7 mmol), 3-(4-hydroxyfenyl)propanové kyseliny (0,71 g, 4,3 mmol), HOBt (0,59 g, 4,4 mmol), TEA (1,1 ml, 0,91 mmol), EDCI (0,85 g, 4,5 mmol), a DMF (25 ml).

3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRW-OH (52)

4 ·· · · · · • ••4 444 44 4

4 44 444 44 4

444 4444 4444

4444 44 44 44 44

105

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a získá se sloučenina 52 ze sloučeniny 51 (1,15 g, 1,61 mmol), LiOH (0,081 g, 3,38 mmol), vody (0,4 ml) a MeOH (8 ml).

3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRW-NHCH₃ (53)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30 a získá se kondenzační produkt ze sloučeniny 52 (0,3 g, 0,42 mmol), methylaminu (0,015 g, 0,49 mmol), HOBt (0,064 g, 0,47 mmol), TEA (0,14 ml, 0,98 mmol), EDCI (0,098 g, 0,51 mmol), a DMF (12 ml). Tento produkt se čistí preparativní HPLC a poté se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,16 g) a MeOH (12 ml) a získá se sloučenina 53.

3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRW-NHCH₂CH₂OH (54)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30 a získá se kondenzační produkt ze sloučeniny 52 (0,3 g, 0,42 mmol), ethanolaminu (0,031 g, 0,51 mmol), HOBt (0,066 g, 0,49 mmol), TEA (0, 14 ml, 1 mmol), EDCI (0,1 g, 0,52 mmol), a DMF (12 ml). Tento produkt se čistí preparativní HPLC a poté se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,18 g) a MeOH (12 ml) a získá se sloučenina 54.

3-(4-OH-Ph)propanoyl-fRWSar-NH₂ (55)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30 a získá se kondenzační produkt ze sloučeniny 52 (0,3 g, 0,42 mmol), sarkosinamidu.HCI (0,061 g, 0,49 mmol), HOBt (0,068 g, 0,5 mmol), TEA (0,15 ml, 1,1 mmol), EDCI (0,098 g, 0,51 mmol), a DMF (12 ml).

Tento produkt se čistí preparativní HPLC a poté se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,18 g) a MeOH (12 ml) a získá se sloučenina 55.

Příklady 82 až 84 • · ·· ····

106

Příprava Bc-YfRW-NHCH₃ (63), Bc-YfRW-NH(CH₂)₂OH (64), a BcYfRW-N(CH₃)(CH₂OH (65)

Sloučeniny těchto příkladů se připraví podle postupu popsaném ve schématu VI:

Schéma VI

Boc-YfRW-OCH₃ (56)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se 2,1 g (95 %) sloučeniny 56 z BocYfR(NO₂)-OH (29, 1,7 g, 2,6 mmol), H-W-OCH₃.HCI (0,68 g, 2,7 mmol), HOBt (0,42 g, 3,1 mmol), TEA (0,8 ml, 5,8 mmol), EDCI (0,63 g, 3,3 mmol), a DMF (25 ml).

·· · · ·* · 9 9 9 9 99 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 999 9 9 9

9 9 99 99 999 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 9

107

H-YfRW-OCH₃ (57)

Postupuje podle postupu přípravy sloučeniny 38 a získá se sloučenina 57 ze sloučeniny 56 (2,1 g, 2,5 mmol) a roztoku směsi anisol-TFA-DCM (1:8:9, 18 ml).

Bc-YfRW-OCH₃ (58)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se kondenzační produkt z H-YfR(NO₂)W-OCH₃ (57, 1,21 g, 1,65 mmol), butanové kyseliny (0,18 g, 2 mmol), HOBt (0,26 g, 1,95 mmol), TEA (0,57 ml, 4,1 mmol), EDCI (0,394 g, 2,06 mmol), a DMF (25 ml). Tento produkt se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 58.

Bc-YfRW-OH (59)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a získá se sloučenina 59 ze sloučeniny 58 (0,1 g, 0,13 mmol), LiOH (0,004 g, 0,15 mmol), vody (0,2 ml) a MeOH (2 ml).

Bc-YfRW-NHCH₃ (63)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se kopulační produkt 60 ze sloučeniny 59 (0,1 g, 0,125 mmol), methylaminu (0,006 ml, 0,15 mmol), HOBt (0,02 g, 0,15 mmol), TEA (0,04 ml, 0,3 mmol), EDCI (0, 03g, 0,16 mmol), a DMF (3 ml). Tento produkt se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 s Pd/BaSO₄ (0,1 g, neredukovaný) v MeOH (6 ml) a získá se sloučenina 63.

Bc-YfR(NO₂)W-NH(CH₂)₂OH (61)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a čištěním HPLC se získá sloučenina 61 ze sloučeniny 59 (1,3 g, 1,65 mmol), ethanolaminu (0,12 ml, 1,9 mmol), HOBt (0,263 g, 1,95 mmol), TEA (0,55 ml, 4 mmol), EDCI (0, 38g, 2 mmol), a DMF (20).

• ··· • · · • φ φ

108

Bc-YfRW-NH(CH₂)₂OH (64)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a získá se sloučenina 64 ve formě pevné látky ze sloučeniny 61 (0,22 g, 0,26 mmol), 5% Pd/BaSO₄ (0,2 g, neredukovaný), MeOH (12 ml), a TFA (0,1 ml).

Bc-YfR(NO₂)W-N(CH₃)(CH₂)₂OH (62)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a následným čištěním HPLC se získá sloučenina 62 ze sloučeniny 59 (0,26 g, 0,33 mmol), N-methylethanolaminu (0,032 ml, 0,4 mmol), HOBt (0,053 g, 0,39 mmol), TEA (0,11 ml, 0,83 mmol), EDCI (0,076g, 0,4 mmol), a DMF (10 ml).

Bc-YfRW-N(CH₃)(CH₂)₂OH (65)

Postupuje podle přípravy sloučeniny 32 a získá se sloučenina 65 ze sloučeniny 62 (0,16 g, 0,19 mmol), 5% Pd/BaSO₄ (0,19 g, neredukovaný), MeOH (10 ml), a TFA (0,1 ml).

Příklad 85

Příprava 3-(4-OHPh)propanoyl-YfRW-NH₂ (69)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví jak je uvedeno ve schématu VII:

• · ·4 4 · ·· ·· ·· 44 • · · 4 4 4« 4 · * • · 4 4 4 4·· 4 4 4

444444444 4 • 4 4 4444 4444 ······ 44 44 44 44

109

Schéma VII

3-(4-OHPh)propanoyl-fR(N0₂)-OCH₃ (66)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a následným čištěním preparativní HPLC se získá sloučenina 66 ze sloučeniny 27 (1,5 g, 2,6 mmol), 3-(4-hydroxyfenyl)propanové kyseliny (0,48 g, 2,9 mmol), HOBt (0,43 g, 3,2 mmol), TEA (0,91 ml, 6,6 mmol), EDCI (0,63 g, 3,3 mmol), a DMF (28 ml).

3-(4-OHPh)propanoyl-fR(N0₂)-OH (67)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a získá se sloučenina 67 ze sloučeniny 66 (0,33 g, 0,63 mmol), LiOH (0,029 g, 1,2 mmol), vody (0,4 ml) a MeOH (5 ml).

3-(4-OHPh)propanoyl-fR(NO₂)W-NH₂ (68)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a následným čištěním preparativní HPLC se získá sloučenina 68 ze sloučeniny 67 (0,32 g, 0,62 mmol), H-W-NH₂.HCI (0,16 g, 0,68 mmol), HOBt (0,1 g, 0,73 mmol), TEA (0,2 ml, 1,6 mmol), EDCI (0,14g, 0,75 mmol), a DMF (13 ml).

• to · to « ·

110 • to ·· ·· ·· • ·· · to ·· ·· · ····· toto · • · ··· toto ··· · · ··· ···· ···· ·· ···· ·· ·· ·· ··

3-(4-OHPh)propanoyl-fRW-NHo (69)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a sloučenina 69 se získá ze sloučeniny 68 (0,14 g, 0,2 mmol), 5% Pd/BaSC>4 (0,12 g, neredukovaný), MeOH (9 ml), a TFA (0,1 ml).

Příklad 86

Příprava Ac-YfR-tryptamidu (73)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví podle schématu Vlil:

Schéma Vlil

Ac-YfR(NO₂)-OCH₃ (70)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a následným čištěním preparativní HPLC se získá sloučenina 70 ze sloučeniny 27 (0,36 g, 0,63 mmol), Ac-Y-OH (0,14 g, 0,63 mmol), HOBt (0,1 g, 0,74 mmol), TEA (0,17 ml, 1,2 mmol), EDCI (0,14 g, 0,76 mmol), a DMF (12 ml).

Ac-YfR(NO₂)-OH (71)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a následným odpařením z THF (5 ml) se získá směs sloučeniny 71 a dva ekvivalenty LÍCI, ze sloučeniny 70 (0,08 g, 0,14 mmol), ·· «9 44 44

4444 449 44 4

4 4 · 4 944 »44

494444494 4

444 4444 4449

4« 4444 4» 44 »4 »4 »· e·»»

111

LiOH (0,007 g, 0,28 mmol), vody (0,2 ml), a MeOH (4 ml).

Ac-YfR-tryptamid (73)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se surový kondenzační produkt 72 ze směsi Ac-YfR(NO2)-OH/2LiCI (71, 0,091 g, 0,136 mmol), tryptaminu (0,025 ml, 0,15 mmol), HOBt (0,021 g, 0,15 mmol), TEA (0,1 ml, 0,7 mmol), EDCI (0,03g, 0,16 mmol), a DMF (6 ml). Tento produkt se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 použitím 5% Pd/BaSO4 (0,2 g, neredukovaný) a MeOH (8 ml) a získá se sloučenina 73 jako pevná látka.

Příklad 87

Příprava hydrocinnamoyl-fRW-NH₂ (77)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví podle schématu IX:

Schéma IX

Hydrocinnamoyl-fR(N0₂)-OCH₃ (74)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se sloučenina 74 ze sloučeniny 27 (0,25 g, 0,43 mmol), kyseliny hydroskořicové (0,068 g, 0,45 mmol), HOBt (0,068 g, 0,5 φφ φφφφ φφ φφ φ» ·* • φ · ♦ «·« φ φ · • φ φφφ φφφ φφφ φ φ φφφ φφ φφφ φ φ φφφ φφφφ φφφφ • Φ φφφφ φφ φφ φφ φφ

112 mmol), ΤΕΑ (0,16 ml, 1,1 mmol), EDCI (0,097 g, 0,51 mmol), a DMF (20 ml).

Hydrocinnamoyl-fW(N0₂)-OH (75)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a získá se sloučenina 75 ze sloučeniny 74 (0,22 g, 0,43 mmol), LiOH (0,014 g, 0,56 mmol), vody (0,3 ml) a MeOH (8 ml).

Hydrocinnamoyl-fRW-NH2 (77)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 28 a získá se surový kondenzační produkt ze sloučeniny 75 (0,2 g, 0,4 mmol), H-W-NH₂.HCI (0,1 g, 0,42 mmol), HOBt (0,068 g, 0,5 mmol), TEA (0,14 ml, 1 mmol), EDCI (0,1 g, 0,52 mmol), a DMF (12 ml). Tento produkt se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 použitím 5% Pd/BaSO4 (0,2 g, neredukovaný) a MeOH (10 ml) a získá se sloučenina 77.

Příklad 88

Příprava 3-(4-OHPh)propanoyl-(4-F-f)RW-NH₂ (82)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví

HO postupu uvedeném ve schématu X:

Boc-(4-F-f)R(NO₂)-OMe (78) ♦ » 9« 99 99

9999 999 99 9 • 9 9 9 9 999 9 9 9

9 99 99 *99 9 9 «99 9999 9*99

9999 99 9* 99 99

113 *9 999*

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 26 a získá se sloučenina 78 z Boc-(4-F-f)-OH (1,5 g, 5,3 mmol), H-R(NO₂)-OMe.HCI (1,46 g, 5,4 mmol), HOBt (0,87 g, 6,4 mmol), TEA (1,86 ml, 13,3 mmol), EDCI (1,33 g, 6,9 mmol), a DMF (35 ml).

H-(4-F-f)R(NO₂)-OMe (79)

TFA (4 ml) se přidá při teplotě 0 °C k roztoku sloučeniny 78 (2,48 g, 5 mmol) v DCM (20 ml). Směs se míchá za chlazení ledem 30 minut a poté se míchá při teplotě místnosti přes noc. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se znovu odpaří s etherem (2 x 30 ml) a vzniklý zbytek se suší ve vakuu a získá se sloučenina 79 ve formě pevné látky.

3-(4-OHPh)propanoyl-(4-F-f)R(NO₂)-OMe (80)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 26 a získá se sloučenina 80 ze sloučeniny 79 (2 g, 5 mmol), 3- (4-hydroxyfenyl)propanové kyseliny, (0,92 g, 5,5 mmol), HOBt (0,8 g, 5,9 mmol), TEA (1,7 ml, 12,6 mmol), EDCI (1,15 g, 6 mmol) a DMF (25 ml).

3-(4-OHPh)propanoyl-(4-F-f)R(NO₂)-OH (81)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 29 a získá se sloučenina 81 ze sloučeniny 80 (0,75 g, 1,4 mmol), LiOH (0,065 g, 2,7 mmol), vody (0,4 ml), a MeOH (8 ml).

3-(4-OHPh)propanoyl-(4-F-f)R(NO₂)W-NH₂ (82)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 30 a následujícím čištěním preparativní HPLC se získá kondenzační produkt 81 (0,4 g, 0,75 mmol), H-W-NH₂.HCI (0,2 g, 0,82 mmol), HOBt (0,12 g, 0,9 mmol), TEA (0,26 ml, 1,9 mmol), EDCI (0,17 g, 0,9 mmol), a DMF (20 ml).). Tento produkt se hydrogenuje za použití postupu přípravy sloučeniny 32 použitím 5% Pd/BaSO₄ (0,25 g, neredukovaný) a MeOH (8 ml) a získá se sloučenina 82.

114

Příklady 89-91

Příprava 3-(4-OHPh)propanoyl-fR-tryptamidu (88), 3-(2-OHPh) propanoyl-fR-tryptamidu (89), a hydrocinnamoyl-fR-tryptamidu (90)

Sloučeniny těchto příkladů se připraví podle schématu XI:

Schéma XI

Boc-fR(NO2)-triptamid (83)

Boc-fR(NO2)-OH (43, 507,9 mg, 1,09 mmol), tryptamin (172,9 mg, 1,08 mmol), HOBt (163,3 g, 1,08 mmol), TEA (0,16 ml, 0,12 mmol) a DMF (6 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na teplotu 0 °C a za míchání se přidá EDCI (226,9 mg, 1,18 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 45 minut, ledová lázeň se odstaví a směs se zahřeje a míchá se při teplotě místnosti 14,5 hodiny. Směs se zředí s EtOAc (20 ml) a promyje se vodnou 2 N HCI (3x5 ml), vodná kyselá vrstva se zpětně extrahuje s EtOAc (1x10 ml) a spojené EtOAc vrstvy se promyjí 1 M NaHCO₃ (3x5 ml) a solankou (10 ml). Organický extrakt se poté suší bezvodým síranem sodným, sušidlo se odfiltruje a filtrát se koncentruje rotačním odpařením. Získaná pevná látka se suší ve vakuu a získá se sloučenina 83.

115 • ·· • · · p-TSA · H-fR(NO)-tryptamid (84)

TFA (3 ml) se pňdá při teplotě 0 °C k roztoku Boc-fR(NC>2)tryptamidu (83) (0,58 g, 0,95 mmol) v DCM (6 ml). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut, potom při teplotě místnosti 1,25 hodiny. Přidá se monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (176,2 mg, 0,93 mmol) a těkavé látky se odstraní rotačním odpařením a získá se hnědý olej. Tento olej se trituruje s etherem (10 ml) a zbytek se suší ve vakuu a získá se sloučenina 84.

3-(4-OHPh)propanoyl-fR(NO2)-tryptamid (85) p-TSA · H-fR(NO2)-tryptamid (84,149,9 mg, 220 pmmol), 3-(4-hydroxyfenyl)propanová kyselina (39,6 mg, 238 pmol), HOBt (33,7 mg, 233 pmol), NMM (0,37 ml, 337 pmol) a DMF (1,5 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na teplotu °C a za míchání se přidá EDCI (44,6 mg, 233 pmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1,3 hodiny, ledová lázeň se odstaví a směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se 100 hodin. Směs se zředí EtOAc (20 ml) a promyje se vodnou 2 N HCI (3x5 ml), vodná kyselá vrstva se zpětně extrahuje s EtOAc (1 x 10 ml) a spojené EtOAc vrstvy se promyjí s 1 M NaHCO3 (3x5 ml) a solankou (10 ml). Organický extrakt se poté suší bezvodým síranem sodným, sušidlo se odstraní filtrací a filtrát se koncentruje rotačním odpařením a získá se sloučenina 85.

3-(2-OHPh)propanoyl-fR(NO₂)-tryptamid (86)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 85 a získá se surový kopulační produkt ze sloučeniny 84 (151,7 mg, 223 pmmol), 3-(2-hydroxyfenyl) propanové kyseliny (39,2 mg, 236 pmol), HOBt (35,3 mg, 231 pmol), NMM (0,40 ml, 364 pmol), EDCI (45,0 mg, 235 μίτιοΙ), a DMF (1,5 ml, bezvodý). Tento materiál se dále čistí preparativní HPLC (C4) a získá se sloučenina 86.

116

Hydrocinnamoyl-fR(NO2)-tryptamid (87)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 85 a získá se sloučenina 87 ze sloučeniny 84 (150,6 mg, 221 mmol), hydroskořicové kyseliny (35,6 mg, 237 μίτιοΙ), HOBt (34,4 mg, 225 μτηοΙ), NMM (0,37 ml, 337 pmol), EDCI (45,1 mg, 235 μηιοΙ) a DMF (1,5 ml, bezvodý).

3-(4-OHPh)propanoyl-fR-tryptamid (88)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a získá se sloučenina 88 z 95 mg (145 μηιοΙ) sloučeniny 85 a 5% Pd-BaSO4 (68 mg, neredukovaný).

3-(2-OHPh)propanoyl-fR-tryptamid (89)

Posupuje se podle přípravy sloučeniny 32, s výjimkou, že se produkt lyofilizuje ze směsi acetonitrilu a vody,dříve než se čistí HPLC a získá se sloučenina 89 z 33,7 mg (51, μίτιοΙ) sloučeniny 86 a 5% Pd-BaSO4 (31 mg, neredukovaný).

Hydrocinnamoyl-fR-tryptamid (90)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 32 a získá se sloučenina 90 ze 106 mg (165 μηιοΙ) sloučeniny 87 a 5% Pd-BaSO₄ (63 mg, neredukovaný).

Příklad 92

Příprava 3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR-tryptamidu (95)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví podle schématu XII:

117 ·· ·· · · 4· 4 4 ···· • · · · 4 · · · · · • · · 4 4 4 4 4 4 4 4

4 4 44 44 444 4 4 • 44 4444 4444

4444 44 44 44 44

Schéma XII

Boc-Me-fR(NO₂)-OMe (91)

Boc-Me-f-OH (1,0008 g, 3,6 mmol), H-R(NO₂)-OMe · HCI (0,9659 g, 3,6 mmol), HOBt (0,5515 g, 3,6 mmol), TEA (0,525 ml, 3,8 mmol) a DMF (20 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na 0 °C a za míchání se přidá EDCI (0,7211 g, 3,8 mmol). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny, ledová lázeň se odstaví a směs se zahřeje na teplotu místnosti a míchá se 23 hodin. Směs se zředí EtOAc (20 ml) a promyje se vodnou 2 N HCI (3x8 ml), vodná kyselá vrstva se zpětně extrahuje s EtOAc (1 x 10 ml) a spojené EtOAc vrstvy se promyjí s 1 M NaHCO3 (3x8 ml) a solankou (10 ml). Organický extrakt se poté suší bezvodým síranem sodným, sušidlo se odstraní filtrací a filtrát se koncentruje rotačním odpařením a získá se sloučenina 91.

p-TSA · H-Me-fR(NO₂)-OMe (92)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 84 a získá se sloučenina 92 jako hydratovaná pTSA sůl ze sloučeniny 91 (0,4989 g, 1,0 mmol).

3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR(N0₂)-OMe (93) • · • · ·« ·· ·· • · · · · · * • · · · · · · ·

118 p-TSA · H-Me-fR(N02)-0Me (92, 282,8 mg, 500 pmmol), 3-(4-hydroxyfenyl)propanová kyselina (85,7 mg, 516 μιτιοΙ), HOBt (77,4 mg, 505 pmol), NMM (0,60 ml, 546 μιτιοΙ) a DMF (3 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na 0 °C a za míchání se přidá EDCI (101,9 mg, 532 μιτιοΙ). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1,3 hodiny, ledová lázeň se odstaví a směs se ohřeje a míchá se při teplotě místnosti 24 hodin. Přidá se další EDCI (41,2 mg, 215 μιτιοΙ) a směs se míchá při teplotě místnosti 64 hodin, opět se přidá další EDCI (29,9 mg, 156 μιτιοΙ) spolu s dalším NMM (0,60 ml, 546 μιτιοΙ) a směs se zahřívá na 50 °C po dobu 8 hodin. Směs se poté nechá při teplotě místnosti 21 dnů a poté se zpracuje podle postupu přípravy sloučeniny 91 a získá se sloučenina 93.

3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR(NO₂)-OH (94)

Směs 3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR(NO₂)-OMe (93, 96,3 mg, 177 μιτιοΙ), monohydrátu LiOH (21,3 mg, 508 μιτιοΙ) ve směsi THF-MeOH-voda (6 ml, 4:1:1) se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Potom se pňdá 6% vodný hydrogensíran draselný (1,3 ml) a těkavé podíly se odstraní rotačním odpařením. K vlhkému zbytku se pňdá voda (1,4 ml), pH se upraví přibližně na hodnotu 2 a pňdá se několik dalších kapek 6% hydrogensíranu draselného a vodná směs se extrahuje s EtOAc (3x2 ml). Spojené organické vrstvy se promyjí s vodou a solankou a suší se nad bezvodým síranem sodným. Použité sušidlo se odstraní filtrací a filtrát se koncentruje rotačním odpařením a získá se sloučenina 94.

3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR-tryptamid (95)

3-(4-OHPh)propanoyl-Me-fR(NO₂)-OH (94, 77,0 mg, 146 μιτιοΙ), tryptamin (23,9 mg, 149 μιτιοΙ), HOBt (25,1 mg, 164 μιτιοΙ), NMM (0,17 ml, 155 μιτιοΙ) a DMF (5 ml, bezvodý) se smísí a ochladí se na 0 °C a za míchání se přidá EDCI (32,4 mg, 169 μιτιοΙ). Směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1,5 hodiny, ledová lázeň se odstaví a směs se zahřívá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin. Směs se zpracuje jako v případě přípravy sloučeniny 85 a získá se surový kondenzační produkt, který se čistí preparativní HPLC (C4). Čištěný produkt se poté rozpustí v 10% kyselině octové v methanolu (20 ml) a • · ·· · · ·· ·· ···· • · · ♦ · · · · · · • « * ··«·♦ ·· · • · ········· · • · · ···· ···· • · · ·· · ·· · · ·· · ·

119 hydrogenuje se pod tlakem vodíku 0,2812 MPa při teplotě místnosti po dobu 15 hodin, za použití 5% Pd-BaSC>4 (31,3 mg, neredukovaný) jako katalyzátoru. Katalyzátor se odstraní filtrací přes Celit, těkavé látky se odstraní ve vakuu, zbytek se novu rozpustí v 10% acetonitrilu ve vodě (15 ml) a směs se zmrazí a lyofilizuje za získání sloučeniny 95.

Příklad 93

Příprava [1 -karbamoyl-2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]amidu 5-[2-acetylamino-3-(4-chlorfenyl)propionylamino]-4-oxo-6-fenyl-2-(2-pyridin-2-ylethyl)hexanové kyseliny (103)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví podle schémat XIII a XIV:

1) NaOH, MeOH

2) toluen, reflux .O

Boc „NH

OH

100

Schéma XIII

3-(tert-Butoxykarbonylamino)-1 -diazo-4-fenylbutan-2-on (96)

K roztoku Boc-f-OH (5,30 g, 20 mmol) v suchém THF (100 ml) se přidá při teplotě -15 °C pod atmosférou argonu TEA (2,02 g, 20 mmol) a ethylchloroformiát (2,16 g, 20 mmol). Směs se míchá při teplotě -15 °C po dobu 30 minut a poté se ohřeje na 0 °C. Poté se přidá roztok diazomethanu v etheru [100 ml, připraven z Me(NO)NCONH₂ (4,0 g, 40 mmol) a 50% vodného KOH (20 ml)]. Směs se míchá při teplotě místnosti 3 hodiny.

• · • · · · · ·

·· ··· ·· ·· ·· ··

120

Směs se poté promyje nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (30 ml), nasyceným vodným chloridem amonným (30 ml) a solankou (2 x 30 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným a koncentruje se rotačním odpařením. Zbytek se krystalizuje ze směsi hexanu a EtOAc při teplotě 5 °C a získá se žádaný produkt. Matečný louh se koncentruje a čistí se chromatografií (hexany-EtOAc, 80:20) a získá se další žádaný produkt.

(R)-3-(tert-Butoxykarbonylamino)-1 -chlor-4-fenylbutan-2-on (97)

K roztoku diazoketonu (96,115 mg, 0,4 mmol) v etheru (3 ml) se přidá po kapkách při teplotě 0 °C 4N HCI/1,4-dioxan (0,11 ml, 0,44 mmol, připravena zředěním koncentrované HCI s 1,4-dioxanem). Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 30 minut. Přidá se několik kapek TEA, aby se roztok neutralizoval a směs se zředí s EtOAc (20 ml), promyje se nasyceným vodným hydrogenuhličitanem sodným (10 ml) a solankou (3x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným a rozpouštědla se odpaří. Zbytek se čistí chromatografií (hexany-EtOAc, 90:10) a získá se 108 mg (92 %) bezbarvé pevné látky: t.t. 101 až 102 °C; ¹H NMR (CDCb, 400 MHz) δ 1,43 (s, 9H),

3,03, 3,10 (ABX, J_AB = 13,8 Hz, Jax = 7,1 Hz, J_BX = 6,8 Hz, 2H), 4,00, 4,19 (AB, J_AB =

16,2 Hz, 2H), 4,70 (m, 1H), 5,04 (brd, J = 6, 8 Hz, 1H), 7,18-7,37 (m, 5H).

Methyl-2-methoxykarbonyl-4-(2'-pyridinyl)butanoát (98)

K čerstvě připravenému NaOMe [z 2,3 g (0,1 mol) sodíku] v MeOH (25 ml) se přidá dimethylmalonát (32 g, 0,24 mmol). Poté se přidá po kapkách během 40 minut k roztoku NaOMe při zpětném toku roztok 2-vinylpyridinu (10,5 g, 0,1 mol) v MeOH (15 ml). Vzniklá směs se zahřívá při zpětném toku 2,5 hodiny. MeOH se odstraní za sníženého tlaku, zbytek se zpracuje s 2N HCI (150 ml) a poté se extrahuje s etherem (2 x 60 ml), aby se odstranil přebytečný dimethylmalonát. Vodná fáze se alkalizuje 2 N NaOH a extrahuje se etherem (3 x 100 ml). Spojené organické fáze se promyjí solankou (3 x 60 ml) a suší se nad síranem sodným. Filtrát se koncentruje za sníženého tlaku a poté se většina přebytku 2-vinylpyridinu odstraní ve vakuu. Zbytek se čistí • · • · · · · ·

121 chromatografií (hexany-EtOAc, 60:40 až 50:50 až 30:70) a získá se žádaný produkt.

Methyl-(R)-5-(terc-butoxykarbonylamino)-2-methoxykarbonyl-6-fenyl-2-[2'-(2- pyridínyl)ethyl]--4-oxohexanoát (99)

K roztoku a-chlorketonu (97, 150 mg, 0,5 mmol) v suchém 1,2-dimethoxyethanu (3,0 ml) se přidá Nal (75 mg, 0,5 mmol) a směs se míchá pod atmosférou argonu po dobu 15 minut (směs A). K roztoku diesteru (98, 142 mg, 0,6 mmol) v suchém 1,2-dimethoxyethanu (3,0 ml) se přidá čerstvě připravený NaOMe (32 mg, 0,6 mmol) a směs se míchá pod atmosférou argonu po dobu 15 minut (směs B). Směs B se přidá ke směsi A a vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Směs se zředí s EtOAc (30 ml) a promyje se solankou (2x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem sodným, rozpouštědla se odstraní rotačním odpařením a zbytek se čistí chromatografií (hexanyizopropylalkohol, 90:20) a získá se sloučenina 99.

(2RS, 5R)-5-(terc-Butoxykarbonylamino)-6-fenyl-2-[2'-(2-pyridinyl)ethyl]-4-oxohexanová kyselina (100)

K roztoku diesteru (99,165 mg) v MeOH (10 ml) se přidá 5N NaOH (1,0 ml) a výsledná směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Směs se koncentruje rotačním odpařením a zbytek se rozpustí ve vodě (10 ml) a okyselí se s 3N HCI na pH = 3. Směs se extrahuje s DCM (3 x 10 ml) a spojené organické fáze se promyjí solankou (10 ml) a suší se nad síranem sodným. Rozpouštědla se odstraní rotačním odpařením s získá se dikyselina. Tato surová dikyselina se suspenduje v toluenu (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku pod atmosférou argonu 3 hodiny. Rozpouštědlo se odpaří a zbytek se čistí chromatografií (DCM-MeOH, 98:2 až 95:5) a získá se směs dvou diastereomerů, které jsou oddělitelné preparativní HPLC.

122 ·· · * 44 44 4444 • 4 4 4 · · · » φ • · · 4 · 4 4 44 4

Schéma XIV terc-Butylester {1 -benzyl-4-[1 -karbamoy 1-2-(1 H-indol-3-yl)ethylkarbamoyl]-2-oxo-6-pyridin-2-ylhexel}karbamové kyseliny (101)

Kyselina 100 (44 mg, 0,1 mmol), H-W-NH₂.HCI (26 mg, 0,11 mmol), HOBt (16 mg, 0,12 mmol),

TEA (24 mg, 0,24 mmol), EDCI (24 mg, 0,12 mmol) a DMF (1 ml, bezvodý) se spojí. Směs se míchá pň teplotě místnosti přes noc, poté se vlije do vody (10 ml) a extrahuje se s EtOAc (4x9 ml). Spojené extrakty se promyjí s 1 N HCI (2x8 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (1x8 ml), solankou (8 ml) a poté se suší bezvodým síranem sodným. Po filtraci se filtrát koncentruje rotačním odpařením a získá se sloučenina 101.

[1-Karbamoyl-2-(1H-indol-3-yl)ethyl]amid 5-amino-4-oxo-6-fenyl-2-(2-pyridin-2-yl-ethyl)hexanové kyseliny (102)

Peptid 101 (97 mg, 0,16 mmol) se smísí s roztokem (1 ml) směsi anisol-TFA-DCM (1:8:9). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc. Po odstranění rozpouštědla se výsledný zbytek odpaří s etherem (2x8 ml) a získá se 0,81 g (99 %) sloučeniny 102.

Ac-(4-CI-F)-OH

Směs Boc-(4-CI-F)-OH (54 mg, 0,18 mmol), DCM (0,5 ml), a TFA (0,5 ml) se míchá při ·

• 4 ·Μ· • · 4 4 4 4

4444 449 44 4 ·· · 449*4 »4 4

494 4444 4444 • 4 4444 44 44 44 44

123 teplotě místnosti 2 hodiny. Po odstranění rozpouštědla se vzniklý zbytek smísí s DCM (1 ml), anhydridem kyseliny octové (17 mg, 0,2 mmol) a TEA (40 mg, 0,4 mmol). Směs se míchá při teplotě místnosti přes noc, koncentruje se rotačním odpařením a získá se Ac(4-CI-F)-OH.

[1 -Karbamoyl-2-(1 H-indol-3-yl)ethyl]amid 5-[2-acetylamino-3-(4-chlorfenyl)propionylamino]-4-oxo-6-fenyl-2-(2-pyridin-2-yl-ethyl)hexanové kyseliny (103)

EDCI (36 mg, 0,19 mmol) se přidá při teplotě 0 °C ke směsi peptidu 102 (81 mg, 16 mmol), Ac-(4-CI-F)-OH (41 mg, 0,17 mmol), HOBt (24 mg, 0,18 mmol), TEA (35 mg,

0,35 mmol), a DMF (2 ml, bezvodý). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a poté se zpracuje postupem, jako v případě přípravy sloučeniny 101. Surový produkt se čistí preparativní HPLC a získá se sloučenina 103.

Příklad 94

Příprava N-{3-[9-benzyl-12-(4-chlorobenzyl)-3-(1H-indol-3ylmethyl-2,5,8,14-tetraoxo1,4,7,13-tetraazacyklotetracos-6-yl]propyl}guanidinu (110)

Sloučenina tohoto příkladu se připraví podle postupu uvedeném ve schématu XV:

124

Schéma XV

Boc-R(Pbf)W-OMe (104)

NMM (0,48 ml, 4,4 mmol) se přidá při teplotě 0 °C ke směsi Boc-R(Pbf)-OH (1,053 g,

2,0 mmol), H-W-OMe · HCI (0,509 g, 2,0 mmol), HOBt (0,270 g, 2,0 mmol), EDCI (0,422 g, 2,2 mmol) v DMF (10 ml) a výsledná směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 4 hodiny. Reakční směs se zředí s EtOAc (100 ml) a promyje se postupně s vodou (2x10 ml), 1 N HCI (2x10 ml), nasyceným hydrogenuhličitanem sodným (2 x 10 ml) a solankou (2x10 ml). Organická vrstva se suší nad síranem hořečnatým, sušidlo se odstraní filtrací a filtrát se koncentruje rotačním odpařením a získá se 1,454 g (100 %) surové sloučeniny 104.

p-TSA · H-R(Pbf)W-OMe (105) ·· ···· ·· ·· ·· ·· • · · 9 · · · * * • 9 99999 99 9 • 9 9 9 99 9 9 99 9 ·* ···· ·· <· «· ·«

125

Roztok sloučeniny 104 (1,454 g, 2,0 mmol) ve směsi TFA-DCM-voda (10:40:0,5, 20 ml) a DCM (20 ml) se míchá při teplotě místnosti 6 hodin. Poté se pňdá monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (0,380 g, 2,0 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 10 minut. Rozpouštědlo se odstraní rotačním odpařením a zbytek se trituruje směsí etherhexan (1:1, 100 ml) a získá se 1,598 g (99,9 %) surové sloučeniny 105.

Boc-(carba-4-CI-Ff)-R(Pbf)W-OMe (106)

EDCI (105,5 mg, 0,55 mmol) a NMM (0,12 ml, 1,1 mmol) se přidají při teplotě 0 °C k dobře míchané směsi sloučeniny 5 (216 mg, 0,5 mmol), 105 (399,5 mg, 0,5 mmol), a HOBt (67,6 mg, 0,5 mmol) v DMF (9 ml). Výsledná směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti po dobu 5 hodin. Směs se zpracuje postupem pro přípravu sloučeniny 104 a získá se 508 mg (98 %) sloučeniny 106.

p-TSA · H-(carba-4-CI-Ff)-R(Pbf)W-OMe (107)

Roztok sloučeniny 106 (508 mg, 488 μηιοΙ) ve směsi TFA-DCM-voda (10:90:0, 5,15 ml) se míchá při teplotě místnosti 17 hodin. Analýza HPLC indikuje, že reakce ještě neproběhla úplně a proto se přidá další směs TFA-DCM-voda (10:90:0,5, 10 ml) a voda (1 ml) a vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti 7 dnů. Přidá se monohydrát kyseliny p-toluensulfonové (92,8 mg, 488 μηηοΙ) a směs se míchá 10 minut při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří rotačním odpařením a zbytek se trituruje etherem (25 ml) a získá se surová sloučenina 107.

Fmoc-11 -Aun-(carba-4-CI-Ff)-R(Pbf)W-OMe (108)

Postupuje se podle přípravy sloučeniny 104 a získá se surová sloučenina 108 z Fmoc11-Aun-OH (207 mg, 488 mol), 107 (543 mg, 488 mol), HOBt (66,0 mg, 488 mol), EDCI (103,0 mg, 537 mol), a NMM (0,118 ml, 1,07 mmol).

• * ·· ··· 9 • 999

126 ► 9 9 9 • 9 99 [11-Aun-(carba-4-CI-Ff)-R(Pbf)W] (109)

N NaOH (2,2 ml, 2,2 mmol) se pndá k roztoku sloučeniny 108 (520 mg, 387 qmol) ve směsi THF-MeOH (1:1) při teplotě místnosti a vzniklá směs se míchá při teplotě místnosti 2 hodiny. Směs se okyselí 1 N HCI na pH cca 3 a rozdělí se mezi EtOAc (100 ml) a vodu (20 ml). Vodná fáze se dále extrahuje s EtOAc (2 x 20 ml) a spojené organické fáze se promyjí solankou (20 ml) a suší se nad síranem hořečnatým. Sušidlo se odstraní filtrací, filtrát se koncentruje rotačním odpařením a zbytek se trituruje s etherem (20 ml), aby došlo k cyklizaci surové aminokyseliny. NMM (47 μΙ, 460 μηηοΙ) se přidá při teplotě 0 °C ke směsi této surové aminokyseliny (430 mg, 387 μηηοΙ), HOBt (53 mg, 387 μηηοΙ), a EDCI (82,5 mg, 430 qmol) v DMF. Vzniklá směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny a poté při teplotě místnosti 14 hodin. Směs se zpracuje postupem pro přípravu sloučeniny 104 a čistí se preparativní HPLC a získá se sloučenina 109.

[11 -Aun-(carba-4-CI-Ff)-RW] (110)

Smě sloučeniny 109 (42 mg, 39 Fmol) ve směsi TFA-DCM-voda (10:10:0, 5,5 ml) se míchá při teplotě 20 hodin, těkavé podíly se odstraní rotačním odpařením a zbytek se čistí preparativní HPLC. Frakce obsahující produkt se koncentrují, zmrazí a po lyofilizaci se získá sloučenina 110 ve formě TFA soli.

Příklady 95-99

Kondenzační postup (CP) pro tvorbu peptidové vazby v roztoku

Aminová složka (1 ekvivalent), složka kyseliny (1 ekvivalent) a HOBt (2 ekvivalenty) se rozpustí v DMF (2 ml/mmol substrátu). Roztok se zpracuje s N-methylmorfolinem (3 až 4 ekvivalenty), EDCI (1,2 ekvivalentu) a směs se míchá při teplotě místnosti, dokud tvorba

127 • · ·· ·«·· ·♦ ·♦ ·· • · # · · · « · ♦ · · ····· · produktu není kompletní (obvykle 1 až 5 hodin). Produkt se vysráží po přidání vody (610 ml/ml DMF) k reakční směsi a oddělí se od kapalné složky filtrací a dekantací.

A. Příprava jádra dipeptidu Boc-DPhe-Arg(NO₂)OH (A-2)

A-l. Boc-DPhe-Arg(N0₂)OMe

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
Boc-D-Phe	265,31	0,05	13,26	g
DMF			50	ml
EDCI	191,17	0,06	11,5	g
H-Arg(OMe)HCI	269,69	0,05	13,48	g
HOBt	135,13	0,1	13,5	g
NMM	101,14	0,15	16,5	ml

Použije se kondenzační postup (CP) pro tvorbu peptidové vazby v roztoku.

A-2 Boc-Dphe-Arg(NO₂)OH

128 • · ·· ·· ·· ·· 9 99 9

9·· 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 999 9 9 9

9 9 99 99 999 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 99

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
Boc-D-PheArg(NO2)OMe	480,23	0,01	4,8	g
LiOH	23,95	0,023	0,55	g
THF			20	ml
voda			10	ml

Roztok Boc-DPhe-Arg(NO₂)OMe v THF se ochladí v ledové láni a zpracuje se při teplotě 0 °C vodným roztokem LiOH. Reakční směs se míchá v ledové lázni 4 hodiny. Rozpouštědla se odpaří na malý objem, který se zpracuje s 1N HCI (přibližně 25 ml) na pH 2 až 3. Produkt se extrahuje s ethylacetátem, promyje se směsí vody a solanky a suší se nad bezvodým síranem hořečnatým; rozpouštědlo se odpaří a získá se sloučenina uvedená v názvu.

B. Příprava koncových aminoskupin

B-1. 3-(4-Benzyloxyfenyl)propionová kyselina

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
p-hydroxypropionová kyselina	166,17	0,0468	7,78	g
benzylbromid	171,03	0,048	8,17	g
NaOH, 1N			100	ml
EtOH			150	ml

• * ·· ·· »« ·· ··· ·

129

Použije se postup popsaný v JACS 1955, 77, str. 4887-4892. Produkt se vysráží po okyselení reakční směsi na pH 2-3.

B-2. 3-(4-Benzyloxyfenyl)propionylchlorid

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
3-(4-benzyloxyfenyl)propionová kyselina	256,11	0,038	9,73	g
PCIs 95%	208,24	0,0418	9,15	g
toluen			400	ml

Pevný PCI₅ se přidá k roztoku 3-(4-benzyloxyfenyl)propionové kyseliny v toluenu během 1 hodiny. Reakční směs se míchá pň teplotě místnosti 3 hodiny a rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se míchá s hexany přes noc a získá se krystalický materiál, který se filtruje a suší ve vakuu.

B-3. 4-(S)-Benzyl-3-[3-(4-benzyloxyfenyl)propionyl]oxazolidin-2-on

Cl

9999

9 9 9 9 999 9 9 9

130

9 9 9 9 9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 99

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
benzyloxyfenylpropanoylchlorid	274,74	0,005	1,37	g
(S)-(-)-4-benzyloxazolidinon	177,2	0,005	0,89	g
terc-BuLi 1,7 v pentanu		0,0051	3	ml
THF, suchý			6	ml
THF, suchý			6	ml

Použije se postup popsaný v Tetrahedron 52 (43), 1996, str. 13733-13738. Li-(S)-(-)-4benzyloxazolidinová sůl se připraví při teplotě -65 °C až -72 °C. Poté se ochladí roztok dekanoylchloridu v THF na teplotu -72 °C a zpracuje se při této teplotě Li-(S)-(-)-4-benzyloxazolidinonovým roztokem. Reakční směs se míchá při teplotě -70 ° až -75 °C jednu hodinu a přes noc při teplotě místnosti, zpracuje se s roztokem NH4CI a extrahuje se s ethylacetátem. Organická vrstva se promyje směsí vody a solanky, suší se síranem hořečnatým a odpaří se. Zbytek se rozdělí na sílkagelové koloně za použití směsi hexanu a ethylacetátu (7/3) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

B-4. 4-(S)-Benzyl-3-[2-(4-benzyloxybenzyl)pent-4-enoyl]oxazolidin-2-on

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
4-(S)-Benzyl-3-[3-(4-	415,48	0,003	1,24	g

·· φφ Φ· φφ

ΦΦΦΦ φφφ φφ φ φφ φ φφφφφ φφ φ

131 φφ ΦΦΦΦ φφφ ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ φφ ΦΦΦΦ φφ φφ φφ φφ

benzyloxyfenyl)propionyl]oxazolidin-2-on
allylbromid, d=1,398	120,98	0,006	0,52	ml
THF			30	ml
NaHMDS, 0,6 M v THF		0,003	5	ml

NaHMDS se přidá při teplotě -70 ⁰ až -75 °C během 15 minut k THF roztoku 4-(S)-benzyl-3-[3-(4-benzyloxyfenyl) propionyl]oxazolidin-2-onu. Směs se jednu hodinu a působí se na ní při teplotě -70 °C allylbromidem. Míchání pokračuje při této teplotě po dobu 1 hodiny. Teplota reakční směs se nechá během 3 hodin zvýšit na 0 °C a poté se reakční směs zalije 10% NH₄CI. Produkt se extrahuje ethylacetátem, promyje se směsí vody a solanky a suší se nad bezvodým síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se odpaří a surový produkt se čistí na silikagelu za použití hexanu a ethylacetátu (4/1) a získá se sloučenina uvedená v názvu.

B-5. 2-(4-Benzyloxybenzyl)pent-4-enová kyselina

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
amid	455,54	0,004	1,85	g
H2O2, 30%		0,016	1,82	ml

Φ· φ« • * · φ φφφφ

132 φφ φ» • φ φ φ • φ · φφφ • φ φ •Φ ·««« φ φ φ · • Φ φφ ♦ φ φ φφφ φφ φφ»· • φ · · φ« ··

UOH	23,95	0,008	0,19	9
THF			10	ml

Použije se postup popsaný v JOC 1992, 57 (10), 2888-2902 (str. 2894).

B-6. 4-(4-(S)-Benzyl-2-oxooxazolidin-3-yl)-3-(4-benzyloxybenzyl)-4-oxobutyronitril

K přípravě sloučeniny B-6 se použije postup analogický přípravě sloučeniny B-4.

B-7. Hydrochlorid ethylesteru 4-amino-2-(4-hydroxybenzyl)butanové kyseliny

2-Kyanmethyl-3-fenylpropionová kyselina (8,16 g, 43 mmol) v roztoku ethanolu (75 ml) a koncentrované HCI (10 ml) se hydrogenuje při 0,2812 MPa přes noc v přítomnosti 10% Pd/C. Katalyzátor se odstraní filtrací; filtrát se koncentruje za sníženého tlaku do sucha získá se sloučenina uvedená v názvu.

B-8. Methylester 3-(4-benzyloxyfenyl)-2-dekanoylaminopropanové kyseliny

133 φφ ··

Φ· e β * • · • · • · • φφφ ·· ·φ φφ φφφφ • φ · φ φ · • φ φ·φ φ φ φ φ φ φφ φφφ φ φ φφφ» «φφφ φφ φ· φ« φφ

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
H-Tyr(Bzl)-OMe.HCI	321,8	0,003	0,965	g
dekanoylchlorid, 98% d=0,919	190,71	0,006	1,27	ml
TEA, d=0,726	101,19	0,016	2,2	ml
DCM			15	ml

TEA se přidá při teplotě -2 ° až +3 °C k roztoku zbývajících reaktantů v DCM. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 4 hodin a poté se zředí 0,1N HCI. Produkt se extrahuje s DCM, promyje se vodou, suší se síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se krystalizuje z hexanů a získá se sloučenina uvedená v názvu.

B-9. 3-(4-Benzyloxyfenyl)-2-dekanoylaminopropionová kyselina

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
Ester	439,59	0,0023	0,98	g

• ·

134

1N NaOH		0,0023	2,3	ml
THF			4,3	ml
voda			0,7	ml

Reakční složky se míchají při teplotě místnosti 5 hodin. Rozpouštědla se odpaří za sníženého tlaku; zbytek se zředí vodou a okyselí se na pH okolo 2. Vzniklá sraženina produktu se odfiltruje a promyje se vodou, dokud pH filtrátu není okolo 6 a poté se suší ve vakuu přes noc.

C. Příprava koncových karboxylových skupin

C-1

M THF roztok komplexu BH₃ a Me₂S (40 ml) se přidá k roztoku amidového substrátu (4,5 g, 8,4 mmol) v bezvodém THF (50 ml). Reakční směs se zahřívá na 75 °C přičemž se slabě destilující kapalina sebere přes chladič. Po dvou hodinách se přidá nová dávka 2M THF roztoku komplexu BH₃ a Me₂S (10 ml) a zahřívání, současně s destilací pokračuje další 3 hodiny. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a opatrně se zpracuje s MeOH, dokud se uvolňuje plyn a s 3N NaOH. Surový produkt se extrahuje s ethylacetátem a čistí se na silikagelu za použití roztoku 1,5% MeOH v AcOEt a poté roztokem EtOAc/DCM/MeOH/Et₃N 4/5/0,5/0,3 a získá se sloučenina uvedená v názvu.

C-2. N¹-Benzyl-N-hexyl-3-(1 H-indol-3-yl)propan-1,2-diamin

135

BH₃.SMe₂

THF

K přípravě sloučeniny C-2 se použije postup analogický k přípravě sloučeniny C-1.

C-3. N¹-Hexyl-3-(1 H-indol-3-yl)-N¹-methylpropan-1,2-diamin

K přípravě sloučeniny C-3 se použije postup analogický k přípravě sloučeniny C-1.

D. Soubor tetrapeptidových mimetik

D-1. terc-Butylester (1 -(4-nitroguanidino-1 -[2-(hexylmethylamino)-1 -(1 H-indol-3-ylmethyl)ethylkarbamoyl]butylkarbamoyl}-2-fenylethyl)karbamové kyseliny

• · • ·

136

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
dipeptid	466,49	0,0005	0,233	9
N^Hexyl-S-OH-indol3-yl)N1-methylpropan-1,2diamin	287,24	0,0005	0,143	g
HOBt	135,12	0,001	0,135	g
NMM, d = 0,92	101,14	0,0015	0,17	ml
EDCI	191,17	0,0006	0,114	g
DMF			1	ml

Použije se kopulační postup (CP) tvorby peptidové vazby v roztoku. Surový produkt se čistí na silikagelu za použití směsi hexan/ethylacetát 6/1 a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Pro přípravu sloučenin D-2, D-3, D-4 a D-5 se použije postup jako v případě sloučeniny D-1.

D-2. Methylester 2-(2-(2 -tert-butoxykarbonylamino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanoylamino]-3-(1 H-indol-3-yl)propionové kyseliny

D-3. terc-Butylester (1 -{1 -[2-(benzylhexylamino)-1 -(1 H-indol-3-ylmethyl)ethylkarb• · • · • · · ·

137 amoyl]-4- nitroguanidinobutylkarbamoyl}-2-fenylethyl)karbamové kyseliny

o₂n

ŇyNH₂

D-4. terc-Butylester (1-{4-nitroguanidino-1 -[2-(1H-indol-3-yl)-1-(methylpropylkarbamoyl)ethylkarbamoyl]butylkarbamoyl}-2-fenylethyl)karbamové kyseliny

D-5. terc-Butylester (1 -{1 -[1 -(karbamoylmethylmethylkarbamoyl)-2-(1 H-indol-3-yl)ethylkarbamoyl]-4- nitroguanidinobutylkarbamoyl}-2-fenylethyl)karbamové kyseliny

o

138 • ·

• ·» · · • · 9 9 • · · 9·· · · · · 9 f>

• 9 · * • 9 9 9 · · • · · • 9 ·

9 9

9 9 9

9 9 9

D-6. [2-(Hexylmethylamino)-1 -(1 H-indol-3-ylmethyl)ethyl]amid 2-(2-amino-3-fenylpropionylamino)-5-nitroguanidinopentanové kyseliny

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
tripeptid			0,15	9
TFA/DCM/H2O 1/2/0,1			2	ml

Reakční směs se míchá pň teplotě místnosti po dobu 4 hodin a zředí se 1,2dichlorethanem. Rozpouštědla se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se suší ve vakuu přes noc.

D-7, (1- {4-Nitroguanidino-1-[2-(hexylmethylamino)~1-(1H-indol-3-ylmethyl)ethylkarbamoyl]butylkarbamoyl}-2-fenylethylamid 2-(4-benzyloxybenzyl)pent-4-enové kyseliny

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
Tvorba amidové vazby	749,82	0,000226	0,17	g

139

kyselina	296,36	0,0003	0,09	g
HOBt	135,12	0,0006	0,08	g
NMM, d = 0,92	101,14	0,001	0,11	ml
EDCI	191,17	0,00036	0,069	g
DMF			0,7	ml

Použije se kopulační postup (CP) pro tvorbu peptidové vazby v roztoku. Surový produkt se čistí preparativní HPLC v reverzní fázi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 95

Příprava (1 -{4-guanidino-1 -[2-(hexylmethylamino)-1 -(1 H-indol-3-ylmethyl)ethylkarbamoyl]butylkarbamoyl}-2-fenylethyl)amidu 2-(4-hydroxybenzyl)pentanové kyseliny

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
Výchozí materiál D-7	913,15		0,1	g
EtOH	635,8		1,5	ml
Pd(OH)2

Reakční směs se hydrogenuje při teplotě místnosti a tlaku 0,3164 MPa přes noc. Katalyzátor se oddělí filtrací přes í za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí preparativní HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 96

140

Příprava [1-(1-{4-guanidino-1-[2-(hexylmethylamino)-1 -(1 H-indol-3-ylmethyl)ethylkarbamoyl]butylkarbamoyl}-2-fenylethylkarbamoyl)-2-(4-hydroxyfenyl)ethyl]amidu děkanové kyseliny

Reaktant/Reagent	Mol. hmotnost	Moly	Množství	Jednotky
kyselina	426,56	0,00023	0,1	g
amin	635,8	0,00019	0,12	g
HOBt	135,12	0,0005	0,007	g
NMM, d = 0,92	101,14	0,001	0,11	ml
EDCI	191,17	0,0003	0,06	g
DMF			1	ml
Pd(OH)2

Použije se kopulační postup (CP) pro tvorbu peptidové vazby v roztoku. Hydrogenace se provádí v ethanolu při 0,3154 MPa po dobu 48 hodin. Katalyzátor se odstraní filtrací; surový produkt se čistí HPLC s reverzními fázemi a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Analogický postup k tomu, který je popsán v příkladu 95 se použije k přípravě sloučenin příkladů 97-99.

Příklad 97

141 ’· ·

Příprava methylesterů 2-(5-guanidino-2-{2-[2-(4-hydroxybenzyl)pentanoylamino]-3-fenyl propionylamino}pentanoylamino)-3-(1H-indol-3-yl)propionové kyseliny

Příklad 98

Příprava (1-{1-[1-(benzylmethylkarbamoyl)-2-(1H-indol-3-yl)ethylkarbamoyl]-4-guanidinobutylkarbamoyl}-2-fenylethyl)amidu 2-(4-hydroxybenzyl)pentanové kyseliny

Příklad 99

Příprava terc-butylesteru [2-(1-{1-[1-(karbamoylmethylmethylkarbamoyl)-2-(1H-indol-3yl)ethylkarbamoyl]-4-guanidinobutylkarbamoyl}-2-fenylethylkarbamoyl)-3~(4-hydroxyfenyl)propyl]karbamové kyseliny

142 ·· 4···

C. Manuální syntéza v pevné fázi

Následující peptidy se získají manuální syntézou za použití Fmoc chemie a Rinkovy amidové pryskyřice jako pevného nosiče. Odstranění skupin Fmoc se provede reakcí 20% piperidinu v DMF po dobu 30 minut a následným promytím s DMF (3 x 35 ml), MeOH (3 x 35 ml) a DMF (3 x 35 ml). Pro sledování úplnosti průběhu reakce se použije ninhydrinový barevný test. Acetylace terminální aminoskupiny se provede s 5 % Ac₂O/0,25 % NMM/0,2 % HOBt v DMF po dobu 30 minut a následným důkladným promytím s DMF a DCM a krátkým sušením ve vakuu. Surový produkt se odštěpí z pryskyřice a chránící skupiny se odstraní za použití 93 % TFA a 2,3 % ethandithiolu ve vodě po dobu 3 hodin při teplotě místnosti. Po odstranění pryskyřice filtrací a promytí s 3% TFA (3x18 ml) se filtrát extrahuje s etherem (6 x 20 ml) a zmrazí se a lyofilzuje. Surový produkt se poté rozpustí v 30% vodné kyselině octové a roztok se čistí preparativní HPLC (10 μ Vydac Cw, 10 x 250 mm, 6 až 60% acetonitril ve vodě (0,1 % TFA), gradient během 1,5 hodiny). Frakce obsahující produkt se spojí a lyofilizují se získají čisté peptidy.

Příklad 100

Příprava Ac-Y-(4-Py)ala-RW-NH₂ · 2TFA

Fmoc-W(Boc)-OH a Fmoc-R(pbf)-OH (každý v dvounásobném přebytku) se postupně váží k Rinkově amidové pryskyřici (4,28g, 3 mmol) za použití PyBOP (dvojnásobný ·· ··*· ·· ··»·

143 přebytek) a NMM (čtyřnásobný přebytek). Po promytí s DMF (3 x 35 ml), etherem (4 x 35 ml), a sušení ve vakuu se dosáhne zvýšení hmotnosti. Pryskyřice (1,17 g, 0,35 mmol) se suspenduje v (10 ml), skupina Fmoc se odstraní a postupně se přidá PyBOP (0,6 g, 1,15 mmol), NMM (0,26 ml, 2,8 mmol), a Fmoc-(4-Py)ala-OH (0,447 g, 1,15 mmol) a směs se třepe 1 hodinu. Po deprotekci Fmoc se kondenzační postup opakuje s Fmoc Y(terc-Bu)-OH (0,528 g, 1,1 mmol). U peptidu se poté odstraní chránící skupina, provede se deacetylace a odštěpení z pryskyřice a získá se žádaný produkt.

Příklad 101

Příprava Ac-Y-(3-Py)ala-RW-NH₂ · 2TFA

Postupuje se jako v příkladu 100, s výjimkou, že se použije Fmoc-(3-Py)ala-OH místo Fmoc-(4-Py)ala-OH a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Příklad 102

Příprava Ac-Y-(2-Py)ala-RW-NH₂ · 2TFA

Přidání Fmoc-(2-Py)ala-OH k roztoku PyBop a NMM v DMF vede k velmi rychlému rozkladu aminokyseliny. Proto se v tomto příkladu použije modifikace postupu použitém v příkladu 100, kdy se přidá NMM (88 μΙ, 0,8 mmol) k roztoku Fmoc-(2-Py)ala-OH (0,311 g, 0,8 mmol) a PyBrop (0,373 mg, 0,8 mmol). Poté se přidá po 15 minutách druhý ekvivalent NMM. Po 100 minutách se jakákoliv nezreagovaná terminální aminoskupina acetyluje a následují zbývající stupně popsané v příkladu 100 a získá se sloučenina uvedená v názvu.

Vlil. Kompozice a metodické příklady

Příklad A ···· « · · · to · · to · · ····· ·· ··· · · · · ·· ·· ···· * · · · 9

144

Obézní žena o hmotnosti 130 kg se ošetří touto metodou, aby se dosáhlo ztráty hmotnosti. Konkrétně, jednou denně, po dobu 6 měsíců se subjektu podává intravenózní injekcí 15 ml vodného roztoku, který obsahuje:

Složka	Koncentrace (mq/ml)
Sloučenina příkladu 1 Hydrogensíran sodný Chlorid sodný Chlorbutanol	5 1 7 5
Kyselina citrónová Sterilní voda	10 qs do 1 ml
Hydroxid sodný	k úpravě na pH 5

Ke konci této léčebné periody pacient vykazuje měřitelnou ztrátu hmotnosti.

Příklad B

Obézní muž o hmotnosti 150 kg se podrobí programu, při kterém se dosáhne ztráty hmotnosti se sníženou otylostí kombinací omezení příjmu potravy a zvýšeným cvičením. Konkrétně, jednou denně, po dobu 6 měsíců se subjektu podává intravenózní injekcí 15 ml vodného roztoku, který obsahuje:

Složka	Koncentrace (mq/ml)
Sloučenina příkladu 9 Hydrogensíran sodný Chlorid sodný Chlorbutanol	5 1 7 5
Kyselina citrónová Sterilní voda	10 qs do 1 ml

• · ·· · ·· ·

145

Hydroxid sodný k úpravě na pH 5

Ke konci této léčebné periody pacient vykazuje měřitelnou ztrátu hmotnosti a sníženou otylost.

Příklad C

Obézní muž o hmotnosti 165 kg se podrobí redukčnímu programu, při kterém se dosáhne ztráty hmotnosti, kombinací omezení příjmu potravy, zvýšeným cvičením a denní subkutánní injekcí 15 ml vodného roztoku, který obsahuje:

Složka

Sloučenina příkladu 9 Hydrogensíran sodný Chlorid sodný Chlorbutanol Kyselina citrónová Sterilní voda Hydroxid sodný

Koncentrace (mg/ml) qs do 1 ml k úpravě na pH 5

Jakmile se dosáhne požadované ztráty hmotnosti, ztráta hmotnosti u pacienta se udržuje intravenózní injekcí, jednou denně, po dobu dalších 6 měsíců. Ke konci této léčebné periody pacient vykazuje měřitelnou ztrátu hmotnosti a sníženou otylost.

Příklad D

Obézní žena o hmotnosti 140 kg se ošetří podle předkládané metody, k dosažení ztráty hmotnosti. Konkrétně, žena se ošetří implantovatelným podkožním čerpadlem, které dodává 0,1 mg/kg sloučeniny příkladu 31 během 24 hodinové periody. Čerpadlo obsahuje roztok sloučeniny rozpuštěné v roztoku obsahujícím 50 % propylenglykolu a ··· ·

146 % sterilní vody. Čerpadlo se nahrazuje měsíčně a ošetřování pokračuje po dobu šesti měsíců, kdy pacient vykazuje ztrátu hmotnosti a sníženou otylost.

Příklad E

Obézní muž o hmotnosti 150 kg se ošetří touto metodou, k dosažení ztráty hmotnosti. Konkrétně, muž se ošetří orální tabletou dvakrát denně, obsahující 300 mg sloučeniny příkladu 29. Ošetření se provádí po dobu 12 měsíců, kdy pacient vykazuje ztrátu hmotnosti a sníženou otylost.

·· ·· «« ·· ·♦ 9 9 9 9 9 9 9

4 4 4 4 444

9 9 9 9 · ·· 9499 99 99 • · · 9 9 9

9 9

4 9 9

9 99 γν awj. 147

Claims (19)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Sloučenina mající strukturu obecného vzorce I:

   (A) X ze vybere ze souboru, který tvoří vodík, fluor, aryloxy, acyloxy, OR¹, SR¹, -NR¹R¹ a -CHR¹R¹, kde R¹ a R¹ jsou nezávisle vybrány ze souboru který tvoří vodík, alkyl a acyl;

   (B) (1) každé R² se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, halogen a heteroalkyl; nebo (2) (a) dvě po sobě jdoucí R² části nebo po sobě jdoucí R² a R³ části mohou spolu spojené tvořit 3 až 8 členný karbocyklický nebo heterocyklický kruh; nebo (b) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán k X a Z¹ a R⁵ část mohou být případně spojeny za vzniku karbocyklického nebo heterocyklického kruhu, který je kondenzován k fenylovému kruhu J; nebo (c) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán ke kruhu Ar může po spojení s R⁷ tvořit kruh kondenzovaný ke kruhu Ar; nebo (d) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který se váže k Z² a Z³ může případně po spojení s R⁸ tvoňt karbocyklický nebo heterocyklický kruh; nebo (e) skupina R² vázaná k atomu uhlíku, který je vázán k Z³ a D může případně po spojení s R¹⁰ tvořit karbocyklický nebo heterocyklický kruh;

   (C) každé Z¹, Z² a Z³ se nezávisle vybere z -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -S(O)aC(R³)(R^3a)-, kde a je 0, 1 nebo 2; -C(R³)(R^3a)S(O)b-, kde b je 0, 1 nebo 2; -N(R^3e)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -N(R^3d)C(O)-;

   99 9

   148

   -C(O)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)C(O)-; -C(R³)(R^3a)(R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -C^C-; -SO2N(R^3d)-; -N(R^3d)SO2-; -C(R³)(R^3a)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-; -N(R^3d)P(=O)(OR^3f)-; -P(=O)(OR^3f)N(R^3d)-; -P(=O)(OR^3f)O-; -O-P(=O)(OR^3f)-; cykloalkyl obsahující 3 až 8 atomů uhlíku a heterocykloalkyl obsahující 4 až 8 atomů v kruhu; kde (1) každé R³, R^3a, R^3b a R^3c, pokud je přítomné, se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy, acyloxy, thiol, alkylthio, acylthio, arylthio, amino, alkylamino, acylamino a alkyl;

   (2) R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu a arylu;

   (3) R^3e, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu, arylu a acylu; a (4) R^3f, pokud je přítomné se vybere z vodíku a alkylu;

   (D) p je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde (1) když p je větší než 0, každé R⁴ a R⁴ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, arylu, halogenu, hydroxy, alkoxy, amino a acylamino;

   (2) když p je větší než 1, dvě části R⁴, mohou spolu s atomy uhlíku, ke kterým jsou vázány, tvořit heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když p je větší než 1, části R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁴ a R⁴ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

   (E) R⁵ představuje pět substituentů (t.j. polohy 2-6) na fenylovém kruhu J, kde každé R⁵ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, halo, thiol, -OR¹², -SR¹², -SO₂N(R¹²)(R¹²), -N(R¹²)(R¹²'), alkyl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; kde každé R¹² a R¹²' se nezávisle vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík, alkyl, acyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; nebo dvě části R⁵ případně spolu tvoří karbocyklický nebo heterocyklický kruh, který je kondenzován kfenylovému kruhu J;

   (F) q je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde (1) když q je větší než 0, každé R⁶ a R⁶ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen, hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino;

   (2) když q je větší než 1, dvě části R⁶, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke

   4 4 4 444 4 4 · · 4 · 4 4 · 4 4 4 • 4 >44444444 4

   444 4444 4444

   444· 44 4 · 44 4 4

   149 kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když q je větší než 1, mohou být části R⁶ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁶ a R⁶ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

   (G) Ar je arylový nebo heteroarylový kruh vybraný ze skupiny, kterou tvoří fenyl, thiofen, furan, oxazol, thiazol, pyrrol a pyridin;

   (H) R⁷ představuje všechny substituenty na kruhu Ar, kde každé R⁷ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, halogen, -NR¹³R¹³, alkyl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; kde každé R¹³ a R¹³ se nezávisle vybere ze skupiny, kterou tvoří vodík, alkyl, acyl, heteroalkyl, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; nebo dvě části R⁷ mohou případně po spojení tvořit karbocyklický nebo heterocyklický kruh, kondenzovaný ke kruhu Ar;

   (I) r je 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6 nebo 7; kde (1) každé R⁸ a R⁸ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, halogenu, hydroxy, alkoxy a aminoskupiny;

   (2) když r je větší než 1, dvě části R⁸, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když r je větší než 1, mohou být části R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁸ a R⁸ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

   (J) B se vybere ze souboru, který tvoří -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵), =0 nebo =SNR¹⁶R¹⁷,

   -NR²⁰R²¹, kyano (-CN), heteroarylový kruh, například thiofen, alkyl nebo dialkylamin, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu, kde R¹⁴,

   R¹⁵, R¹⁶, R¹⁷, R²⁰ a R²¹ se nezávisle vyberou z vodíku, alkylu, alkenu a alkynu; kde dále případné spojení dvou nebo více R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ s atomy, ke kterým jsou vázány, vede ke vzniku monocyklického nebo bicyklického kruhu; výhodně je -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, kyano, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh,

   4 4 4 4 444 4 4 4

   4444444*4 * »44 4444 4444 • 4 4444 4· 44 44 44

   150 obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu. Výhodněji jsou -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, -N(R¹⁴)C(=O)NR¹⁶R¹⁷, kyano, triazol a imidazol;

   (K) s je 0, 1, 2, 3, 4 nebo 5; kde (1) když s je větší než 0, každé R⁹ a R⁹ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen, hydroxy, alkoxy, amino nebo acylamino;

   (2) když s je větší než 1, dvě části R⁹, mohou tvořit spolu s atomy uhlíku ke kterým jsou vázány heterocykloalkylový, cykloalkylový nebo arylový kruh; a (3) když s je větší než 1, mohou být části R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku dvojná vazba nebo obě části R⁹ a R⁹ na dvou sousedních atomech uhlíku mohou být nula, takže vznikne mezi dvěma sousedními atomy uhlíku trojná vazba;

   (L) R¹⁰ se vybere ze skupiny, kterou tvoří případně substituovaný bicyklický arylový kruh a případně substituovaný bicyklický heteroarylový kruh; a (M) D se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří, vodík, fluor, hydroxy, thiol, acylthio, alkoxy, aryloxy, alkylthio, acyloxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹; kde R¹¹ se vybere ze skupiny, kterou tvoří hydroxy; alkoxy; amino; alkylamino;

   -NHOR¹⁸, kde R¹⁸ se vybere ze souboru, který tvoří vodík a alkyl;

   -N(R¹⁹)CH2C(O)NH2, kde R¹⁹je alkyl; -NHCH2CH₂OH; -N(CH₃)CH₂CH₂OH; a -NHNHC(=Y)NH₂, kde Y se vybere z O, S a NH; a (N) kde jestliže alespoň jedno ze Z¹, Z² nebo Z³ je jiné než -C(O)N(R^3d)- nebo -N(R^3d)C(O)-, potom X a D mohou být případně spolu vázány přes vazebnou část L, která obsahuje všechny kovalentní vazby nebo kovalentní vazby a iontovou vazbu, takže vznikne cyklický peptidový analog;

   nebo její optický izomer, diastereomer nebo enantiomer; nebo jejich farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo biodegradovatelný ester, amid nebo imid.
2. 2. Sloučenina podle nároku 1, kde X se vybere z -NR¹R¹ a -CHR¹R¹ a R¹ je vodík nebo alkyl a R¹ je acyl.
3. 3. Sloučenina podle nároku 1 nebo 2, kde každé R² je vodík; nebo R² vázané k atomu uhlíku vázanému k Z³ a D spojené s R¹⁰ tvoří karbocyklický nebo heterocyklický • 4 ····

   151 • 4 ·4 • · 4 · • · · ·4>
4. 4 4 ·· 4444 • 4 44

   4 4 • 4 44« • · 4 ·

   44

   4 4 • 44 • · · « 4 4

   44 kruh a ostatní části R² jsou vodík.

   4. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde Z¹, Z² a Z³ se nezávisle vybere z -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -C(R³)(R^3a)C(R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -SO₂N(R^3d)- a -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-.
5. 5. Sloučenina podle nároku 4, kde každé R³, R^3a, R^3b a R^3c, pokud jsou přítomné, se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy a alkyl;

   R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku a alkylu; R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku nebo alkylu; R^3e, pokud je přítomné, se vybere z vodíku a alkylu; a R^3f, pokud je přítomné se vybere z alkylu kde uvedený alkyl ve významu R^3f je rozvětvený alkyl.
6. 6. Sloučenina podle nároku 1, kde p je 1 nebo 2.
7. 7. Sloučenina podle nároku 1, kde každé R⁴, pokud je přítomné, je vodík a každé R⁴, pokud je přítomné je vodík nebo alkyl.
8. 8. Sloučenina podle nároku 1, kde každé R⁵ se nezávisle vybere z vodíku; hydroxy; halogenu; thiolu; -SO₂N(R^{10 * 12})(R¹²'), -N(R¹²)(R¹²') kde R¹² a R¹²' jsou obě vodík; a -N(R¹²)(R¹²'), kde R¹² a R¹² jsou každé vodík nebo alkyl, přičemž výhodně čtyři z částí R⁵ na kruhu J jsou vodík, výhodně 4-poloha kruhu J je jiná než vodík.
9. 9. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde q je 0, 1 nebo 2, výhodně je q větší než 0, každé R⁶ je vodík, a každé R⁶ je vodík nebo alkyl.
10. 10. Sloučenina podle nároku 1, kde Ar je arylový nebo heteroarylový kruh vybraný ze skupiny, kterou tvoří fenyl, thiofen, furan, výhodně fenyl a kde 4 poloha fenylového kruhu se vybere z vodíku, fluoru, chloru, kyano, bromu, jodu, nitro a alkylové skupiny a zbývající 4 polohy jsou vodík.

    » • * • · · ·

    152
11. 11. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde r je 2, 3 nebo 5 a každé R⁸ a R⁸ je nezávisle vybráno z vodíku a alkylu.
12. 12. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde B se vybere z -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylového kruhu, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylového kruhu, obsahujícího alespoň jeden atom dusíku v kruhu, výhodně Bje -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, kde R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶a R¹⁷jsou nezávisle vybrány z vodíku a alkylu.
13. 13. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde s je 1 nebo 2 a R⁹ je vodík a každé R⁹ je vodík nebo alkyl.
14. 14. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde R¹⁰ se vybere ze skupiny, kterou tvoří 1-naftyl, 2-naftyl, indan, 1H-inden, benzocyklobutan, benzocyklobuten, indol, indolin, pyridin, dihydropyridin, oktahydropyridin, benzothiofen, benzofuran, benzimidazol, benzopyran, chinolin, chinolon a izochinolin.
15. 15. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde D se vybere ze souboru, který tvoří, fluor, hydroxy, thiol, alkoxy, aryloxy, alkylthio, acyloxy, kyano, amino, acylamino, -C(O)R¹¹ a -C(S)R¹¹.
16. 16. Sloučenina podle kteréhokoliv z předchozích nároků, kde X a D jsou spolu vázané přes vazebnou část L za poskytnutí cyklické sloučeniny mající následující strukturu obecného vzorce II:

    R² R² R² R² —X- c-Z¹ C-—C-Z³— c- D— «

    • 99 9 • · ·«

    153
17. 17.

    kde (A) (B) (C) (D) (E) (F) (G)

    Sloučenina mající následující strukturu obecného vzorce A:

    >2

    R' o

    II

    R

    I

    -c11 i'z

    NZ — CH—C—NH-CH-C—NH—CH-C—R *

    (oáQ (crV)_? ch₂

    Rio (A) kde R¹ a R¹ jsou nezávisle vybrány ze souboru který tvoří vodík, alkyl a acyl;

    R² se vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl a heteroalkyl;

    Z¹ se vybere z -OC(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)O-; -S(O)2C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)S(O)2-; -N(R^3e)C(R³)(R^3a)-; -C(R³)(R^3a)N(R^3e)-; -C(O)N(R^3d)-; -N(R^3d)C(O)-; -C(R³)(R^3a)(R^3b)(R^3c)-; -C(R³)=C(R^3a)-; -C^C-; -SO2N(R^3d)-; -N(R^3d)SO2-; -C(R³)(R^3a)P(=O)(OR^3f)-; a -P(=O)(OR^3f)C(R³)(R^3a)-, kde (1) každé R³, R^3a, R^3b a R^3c, pokud je přítomné, se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, alkoxy, aryloxy, acyloxy, thiol, alkylthio, acylthio, arylthio, amino, alkylamino, acylamino a alkyl;

    (2) R^3d, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu a ary lu;

    (3) R^3e, pokud je přítomné, se vybere z vodíku, alkylu, arylu a acylu; a (4) R^3f, pokud je přítomné se vybere z vodíku a alkylu;

    p je 1 nebo 2 a každé R⁴ a R⁴ se nezávisle vybere z vodíku, alkylu, arylu, halogenu, hydroxy, alkoxy, amino a acylamino;

    R⁵ se vybere ze souboru, který tvoří vodík, hydroxy, chlor, fluor, -N(R¹²)(R¹²), kde každé R¹² a R¹²' se nezávisle vybere z vodíku a alkylu;

    q je 0, 1 nebo 2; kde když q je větší než 0, každé R⁶ a R⁶ se nezávisle vybere ze souboru, který tvoří vodík, alkyl, aryl, halogen, hydroxy, alkoxy, amino a acylamino;

    R⁷ se vybere ze souboru, který tvoří vodík, halogen, -NR¹³R¹³, alkyl, acyl, alken, alkyn, kyano, nitro, aryl, heteroaryl, cykloalkyl a heterocykloalkyl; kde každé R¹³ a R¹³ se nezávisle vybere z vodíku a alkylu;

    φφ φφ φφ φφ φφ Φ·*Φ φ · φ · φφφ φ φ * • ♦ φ φ φ ··· φφ φ «φ φ φφ φ φ φ φ φ φ « • ΦΦ φφφφ φφφφ φφ φφφφ φφ φφ φφ φφ

    154 (Η) Β se vybere ze souboru, který tvoří -N(R¹⁴)C(=NR¹⁵)NR¹⁶R¹⁷, heteroarylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu a heterocykloalkylový kruh, obsahující alespoň jeden atom dusíku v kruhu; kde R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶a R¹⁷ se nezávisle vyberou z vodíku a alkylu; kde dále případné spojení dvou nebo více R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ s atomy ke kterým jsou vázány, vede monocyklickému nebo bicyklickému kruhu;

    (I) R¹⁰ je případně substituovaný bicyklický kruh, vybraný z 1-naftylu, 2-naftylu, indanu, 1H-indenu, benzylcyklobutanu, benzylcyklobutenu, indolu, indolinu, pyridinu, dihydropyridinu, oktahydropyridinu, benzothiofenu, benzofuranu, benzimidazolu, benzopyranu, chinolinu a izochinolinu; a kde R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ se nezávisle vyberou z vodíku a alkylu; kde dále případné spojení dvou nebo více R¹⁴, R¹⁵, R¹⁶ a R¹⁷ s atomy ke kterým jsou vázány, vede monocyklickému nebo bicyklickému kruhu;

    (I) R¹⁰je případně substituovaný bicyklický kruh, vybraný z 1-naftylu, 2-naftylu, indanu, 1 H-indenu, benzylcyklobutanu, benzylcyklobutenu, indolu, indolinu, pyridinu, dihydropyridinu, oktahydropyridinu, benzothiofenu, benzofuranu, benzimidazolu, benzopyranu, chinolinu a izochinolinu; a (J) R¹¹ se vybere ze skupiny, kterou tvoří amino; alkylamino; -NHOR¹⁸, kde R¹⁸ se vybere z vodíku a alkylu; -N(R¹⁹)CH2C(O)NH2, kde R¹⁹ je alkyl; NHCH2CH₂OH; a -N(CH₃)CH₂CH₂OH;

    nebo její optický izomer, diastereomer nebo enantiomer; farmaceuticky přijatelná sůl, hydrát nebo biohydrolyzovatelný ester, amid nebo imid.
18. 18. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje:

    (a) bezpečné a účinné množství cyklického peptidového analogu podle kteréhokoliv z předchozích nároků a (b) farmaceuticky přijatelný excipient.
19. 19. Farmaceutický prostředek podle nároku 18 pro použití k léčení chorob, vybraných ze soubru, který tvoří odolnost vůči insulinu, nesnášenlivost glukózy, diabet mellitus typu 2, nemoc koronární artérie, zvýšený krevní tlak, hypertenze, dyslipidemie, rakovina •9 9**9 ·· >9 9

    9 9

    9 9

    9 9

    9999 ·· • 9 • 9

    9

    9

    9« • 9 9 9 9

    9

    9 9

    9 9 · *

    9 9 9 • 9 99

    155 (například endometriální, cervikální rakovina, rakovina vaječníku, prsu, prostaty, žlučníku, střeva), nepravidelnosti v menstruaci, hirtusismus, neplodnost, nemoci žlučníku, restriktivní plicní nemoc, krátkodobé zastavení dýchání ve spánku, dna, osteoartritida a tromboembolické nemoci u živočišného subjektu, výhodně nemoc je choroba související s tělesnou hmotností, vybraná ze skupiny, kterou tvoří obesita, anorexie a kachexie.