JP2012513773A - 微小粒子を用いた生きた生物負荷の検出法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、いずれも本明細書に援用する2008年12月31日出願の米国仮特許出願第61/141,685号、及び2009年12月30日出願の米国仮特許出願第61/291,301号の恩典を主張するものである。
本明細書で使用するところの「生物学的検体」とは、生物内に生ずる、又は生物によって生成される分子又はその誘導体のことを指して言う。例えば、生物学的検体としては、これらに限定されるものではないが、アミノ酸、核酸、ポリペプチド、タンパク質、ヌクレオチド、ポリヌクレオチド、脂質、リン脂質、糖類、多糖類、及びこれらの組み合わせのうちの少なくとも1つが含まれうる。生物学的検体の具体例としては、これらに限定されるものではないが、代謝産物(例えば、ATPなどの小分子、又はタンパク質Aなどのポリペプチド)、アレルゲン(例えば、落花生アレルゲン)、ホルモン、毒素(例えば、Bacillus属下痢毒素、アフラトキシンなど)、RNA(例えば、mRNA、全RNA、tRNAなど)、DNA(例えば、プラスミドDNA、植物DNAなど)、タグ付きタンパク質、抗体、抗原、及びこれらの組み合わせが挙げられる。
本開示の物品及び方法は、試料中の生物学的検体の検出法を提供する。特定の実施形態では、本物品及び方法は、試料中の生きた細胞からの生物学的検体の検出法を提供する。特定の実施形態では、本物品及び方法は、試料中の生きた微生物細胞の検出法を提供する。特定の好ましい実施形態では、本物品及び方法は、試料中の生きた細菌細胞の検出法を提供する。
本開示の方法では、液体試料中に存在する細胞と結合する細胞濃縮剤を使用する。細胞濃縮剤は、細胞を含むことが疑われる液体試料と所定の時間接触させる。細胞は、共有結合又は非共有結合(例えば、疎水性又はイオン性相互作用)によって、あるいは共有結合と非共有結合との組み合わせによって細胞濃縮剤と結合しうる。細胞が細胞濃縮剤と結合した後、例えば沈降、凝集、遠心、濾過、又はこれらの任意の組み合わせによって細胞濃縮剤を液体試料から除去することができる。
本開示は、試料中の微生物を検出するために使用することができる装置を提供する。装置は、少なくとも2個の貯留部を含み、その間に通路を有するハウジングと、ハウジングの上側貯留部内に配置された必要に応じて用いられる細胞濃縮剤と、ハウジング内の少なくとも2個の貯留部を隔離するための手段と、ハウジングの上側貯留部から下側貯留部へと細胞濃縮剤を移動するための手段とを含みうる。特定の実施形態では、ハウジングは2個の貯留部を隔離するための手段(例えば、破断可能なシール)を含みうる。特定の実施形態では、ハウジングは、細胞濃縮剤をハウジングの上側貯留部から下側貯留部へと移動するための手段(例えば、弁)を含みうる。特定の実施形態では、装置は微生物を検出するための試薬を更に含みうる。特定の実施形態では、装置は細胞抽出剤を含むヒドロゲルを更に含みうる。細胞抽出剤は、微生物からの生物学的検体の検出を促進することができる。
本開示の方法には、有効量の細胞抽出剤への曝露後に、例えば生きた微生物などの、生きた細胞から放出される生物学的検体を検出するための方法が含まれる。
本開示は粒子状の細胞濃縮剤を濃縮するための装置を提供する。本方法は、液体試料の一部を液体試料中への粒子状物質の懸濁液から分離する装置を提供する工程を含む。好適な装置としては、例えば、図2A、図3A、図4A、図5A、図7A、及び図10Aに図示及び説明される装置が挙げられる。各装置は、粒子状の細胞濃縮剤を含む液体試料を収容するためのハウジングと、粒子状細胞濃縮剤を液体試料の少なくとも一部から分離するための手段とを含んでいる。
本開示の構成要素及び/又は装置は、使用説明書及び必要に応じて付属物品又は試薬とともにパッケージングすることによって、試料の調製及び検出キットとすることができる。したがって、一態様において本開示は、i)少なくとも2個の貯留部を含み、その間に通路を有するハウジングと、ii)ハウジングの上側貯留部を下側貯留部から隔離するための手段と、iii)細胞濃縮剤と、iv)細胞濃縮剤を上側貯留部から下側貯留部に移動するための手段とを備えるキットを提供する。上側貯留部は試料を受容するように構成された開口部を含む。下側貯留部はその内部に配置された検出試薬を含む。特定の実施形態では、ハウジングは、本明細書で述べたように上側貯留部を下側貯留部から隔離するための手段を更に含みうる。特定の実施形態では、ハウジングは、細胞濃縮剤を上側貯留部から下側貯留部に移動するための手段を更に含みうる。特定の実施形態では、細胞濃縮剤はハウジングの上側貯留部内に配置される。
細菌培養は、特に断らないかぎり、すべてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC、バージニア州マナッサス)より入手した。
ヒドロゲルの重合後のヒドロゲルビーズへの細胞抽出剤の取り込み。
微小粒子の使用による細胞濃縮、並びに細胞抽出剤を充填したヒドロゲル及びATP生物発光を利用した検出
3M(商標)CLEAN−TRACE表面ATPシステムをスリー・エム社(3M Company)(ミネソタ州セントポール)より入手した。大腸菌ATCC 51183の純粋培養物をトリプシン処理した大豆ブロス中に接種して、37℃で一晩増殖させた。細菌培養物をButterfield緩衝液(pH 7.2±0.2、一塩基性リン酸カリウム緩衝溶液、ブイ・ダブリュー・アール社(VWR)(ペンシルベニア州ウェストチェスター))中で約106又は105CFU/mLに希釈し、100マイクロリットルの希釈懸濁液を10mLの脱イオン水(Milli−Q Biocel System、ミリポア社(Millipore)(マサチューセッツ州))試料の入った個々の試験管に直接加えることによってそれぞれ10mL中、約105CFU又は104CFUを得た。10mgのオートクレーブしたCM−111 3M(商標)Cosmetic Microspheres(か焼した非晶質の長球化ケイ酸マグネシウム粉末、スリー・エム社(3M Company)(ミネソタ州セントポール))を細胞の入った試験管に加え、室温で約15分間混合した。粒子を沈降させ、上清を除去した。粒子を100μLのButterfield緩衝液に懸濁し、1.5mLの微量遠心管に移した。400マイクロリットルのCLEAN−TRACE表面ATPシステムからのルシフェラーゼ/ルシフェリン液体試薬溶液を遠心管に加えた。コントロール(非濃縮)反応として、100μLの約106又は105CFU/mLの細胞懸濁液を1.5mLの微小遠心管に加え、400μLのClean−Trace表面ATPシステムからのルシフェラーゼ/ルシフェリン液体試薬溶液を遠心管に加えた。試薬を加えた直後に、細胞抽出剤を含むヒドロゲルビーズ(約11mg)を個々の遠心管に加え、相対発光量(RLU)の測定値をベンチトップ型ルミノメーター(ターナー・バイオシステムズ社(Turner Biosystems)(カリフォルニア州サニーベール)より販売される20/20nシングルチューブ型ルミノメーター)で10秒間隔で記録した。発光量の測定値は、ルミノメーターとともに提供される20/20n SISソフトウェアを使用してルミノメーターから得た。光信号を1秒間にわたって積分し、RLUで表される結果を表1に示した。
ATP生物発光検出システムを利用した一体型試料調製及び検出装置による微生物細胞の検出
この実施例では、図2に示されるような一体型の試料調製及び検出装置200を使用する。装置の上側貯留部220には約10mgのオートクレーブしたCM−111 3M Cosmetic Microspheresが入っている。下側貯留部224には、約0.6ミリリットルのCLEAN−TRACE表面ATPシステムからのルシフェラーゼ/ルシフェリン液体試薬溶液からなる液体検出試薬265が入っている。第3の貯留部226には、2008年9月30日出願の米国特許出願第61/101,546号の調製例5に従って調製された2個のBARDAC 205Mビーズが入っている。10ミリリットルの滅菌脱イオン水を、使用直前に一体型装置200の上側貯留部220に加える。
ATP生物発光検出システムを利用した一体型試料調製及び検出装置による微生物細胞の検出
この実施例では、図3に示されるような一体型試料調製及び検出装置300を使用する。弁アクチュエータ372は、使用に先だって、弁キャビティ374が上側貯留部320と流体連通するように配置されている。装置の上側貯留部320には、約10mgのオートクレーブしたCM−111 3M Cosmetic Microspheresが入っている。下側貯留部324には、約0.6ミリリットルのClean−Trace表面ATPシステムからのルシフェラーゼ/ルシフェリン液体試薬溶液からなる液体検出試薬365が入っている。BARDAC 205Mビーズは、2008年9月30日出願の米国特許出願第61/101,546号の調製例5に従って調製されたものである。10ミリリットルの滅菌脱イオン水を、使用直前に一体型装置300の上側貯留部320に加える。
検出装置の調製:
I型の装置:これらの検出装置では、以下に述べる相違点を有する以外は図10Aのハウジングと同様のハウジングを構成した。以下の参照符合は図10Aの対応する部材を示す。ハウジング1100の上側部分1012及び下側部分1014は、3M Clean−Trace(商標)表面ATP試験(スリー・エム社(3M Company)(英国、ブリジェンド))から同様の構成要素を使用して得た。破断可能なシール1068が結合された回収要素1067を、下側部分1014の上側部分に、破断可能なシール1068がハウジング1100の下側部分1014に面するようにして圧入した。上側部分1012は、ヒートガン(マスター・アプライアンス社(Master Appliances Corp)、ウィスコンシン州ラシーン)を使用してbuyheatshrink.comより入手した、3:1ポリオレフィン2重壁の接着剤でライニングされた熱収縮フィルム(部品番号_HSC3A−050−cc、直径1.5cm)の2cmの切片を用いて下側部分1014と連結した。
I型装置を使用した、スパイク水からの粒子状濃縮剤による大腸菌の捕捉
トリプシン処理大豆寒天(Tryptic Soy Agar)プレート(ベクトン・ディッキンソン社(Becton Dickinson)メリーランド州スパークス)から単離した大腸菌(ATCC 51813)のコロニーを使用して5mLのトリプシン処理大豆ブロス(Tryptic Soy Broth)(ベクトン・ディッキンソン社(Becton Dickinson)メリーランド州スパークス)に接種し、37℃のインキュベーター内で一晩インキュベートした。約109個のコロニー形成単位/mL(CFU/mL)を含む一晩培養物をフィルター滅菌した18メガオームの水で1:10,000に希釈した(約105CFU/mLにまで、以後、「初期希釈懸濁液」と呼ぶ)。500マイクロリットルの希釈培養液を50mLのフィルター滅菌した18メガオームの水に移し、約1000個/mLの最終濃度とした。
III型装置を使用したCM−111による大腸菌の濃縮
単離した大腸菌(ATCC5 1813)のコロニーをストリークプレートから5mLのトリプシン処理大豆ブロス(Tryptic Soy Broth)(TSB、ベクトン・ディッキンソン社(Becton Dickinson)メリーランド州スパークス)に接種し、37℃で18〜20時間インキュベートした。約109個のコロニー形成単位/mLのこの一晩培養物をフィルター滅菌した脱イオン水(MilliQ、ミリポア社(Millipore)マサチューセッツ州)中で希釈し、10mLのフィルター滅菌した脱イオン水中でスパイクして1×103個/mL及び1×104個/mL(全体で約1×104/mL cfu〜1×105/mL cfu)の最終濃度を得た。スパイクした水を、10mgの予め滅菌した(121℃、15分)CM−111(Cosmetic Microspheres−111、スリー・エム社(3M Company)、セントポール)の粉末及び100マイクロリットルの100倍吸着緩衝液(pH 7.2)の入ったIII型装置のハウジングに加えた。ハウジングを表面滅菌したパラフィルムで密封し、ロッキングプラットフォーム上に置いた。次いで、キャップした装置を、Thermolyne Vari Mix(商標)ロッキングプラットフォーム(バーンステッド・インターナショナル社(Barnstead International)アイオワ州、14サイクル/分)上で5分間の接触時間にわたって室温(25℃)でインキュベートした。次いで装置を振盪させずに(重力によって粒子を沈降させるため)5分間静置し(ロッキング及び沈降の全経過時間=10分間)、パラフィルムを取り外して、II型装置のプランジャをハウジングに挿入し、ハウジングの底の方向に押し込むことによってバルク試料からCM−111粒子を分離した。プランジャが破断可能なシールを破ると、約0.1mLの液体試料に懸濁されたCM−111粒子はハウジングの下側貯留部に移された。CM−111粒子を下側貯留部から回収して、1.5mLの滅菌した微小遠心管に移した。体積100マイクロリットルのBacTiter−Glo(商標)試薬(プロメガ社(Promega)、ウィスコンシン州マディソン)をペレットに加え、VWR Fixed Speed Vortexミキサー上で5秒間(3200rpmで5秒)ボルテックスして混合し、卓上型ルミノメーター(FB12シングルチューブ型ルミノメーター、バートホールド・ディテクション・システムズ・ユー・エス・エー社(Berthold Detection Systems USA)、テネシー州オークリッジ)上で読み取った。大腸菌細胞の1×105個/mL及び1×106個/mLの懸濁液から100マイクロリットルの体積を試験することにより、ポジティブコントロール(「100%シグナル」)を調製した。結果は下式によって計算し、下記表2にまとめた。
RLU=相対ルシフェラーゼ単位。
II型装置を使用したCM−111による大腸菌の濃縮
単離した大腸菌(ATCC 33090)のコロニーをストリークプレートから5mLのトリプシン処理大豆ブロス(Tryptic Soy Broth)(TSB、ベクトン・ディッキンソン社(Becton Dickinson)メリーランド州スパークス)に接種し、37℃で18〜20時間インキュベートした。約108個のコロニー形成単位/mLのこの一晩培養物をフィルター滅菌した脱イオン水(MilliQ、ミリポア社(Millipore)マサチューセッツ州)中で希釈し、10mLのフィルター滅菌した脱イオン水中でスパイクして1×103個/mL(全体で約104cfu)の最終濃度を得た。スパイクした水を、10mgの予め滅菌した(121℃、15分)CM−111(Cosmetic Microspheres−111、スリー・エム社(3M Company)、セントポール)の粉末及び100マイクロリットルの100倍吸着緩衝液が既に入っている装置に加えた。装置を表面滅菌したパラフィルムで密封し、ロッキングプラットフォーム上に置いた。次いで、キャップした装置を、Thermolyne Vari Mix(商標)ロッキングプラットフォーム(バーンステッド・インターナショナル社(Barnstead International)アイオワ州、14サイクル/分)上で1及び9分間(全経過=時間2分間及び10分間)、室温(25℃)でインキュベートした。
RLU=相対ルシフェラーゼ単位。
II型装置を使用したAB−CM−111による大腸菌の濃縮
実施例8において述べた手順を用い、AB−CM(吸着緩衝液で処理したCM−111)の10mgの一定分量についても、10mLの水からの大腸菌の濃縮について試験を行った。接触時間を9分、1分として、POREXプランジャを使用してAB−CMを沈降させた。データを表4にまとめた。
比較例−非濃縮試料における大腸菌の検出
現時点の技術水準における水試験法として、標準的なATP生物発光アッセイ(例えば、スリー・エム社(3M Company)(ミネソタ州セントポール)より入手可能な3M CLEANTRACE Water−Free ATP、カタログ番号AQF100)を用いて100マイクロリットルの水をATPについて試験する方法がある。
本明細書に引用するすべての特許、特許出願及び公開公報、並びに電子的に入手可能な資料の開示内容の全体を援用する。本出願の開示内容と本明細書に援用されるいずれかの文書の開示内容との間になんらかの矛盾が存在する場合には、本出願の開示内容が優先するものとする。上記の詳細な説明及び実施例はあくまで理解を助けるために示したものである。これらによって不要な限定をするものと理解されるべきではない。本発明は、図示及び説明された厳密な詳細に限定されるものではなく、当業者には明らかな変形例は特許請求の範囲によって定義される本発明に含まれるものとする。
Claims (51)
- 試料中の細胞を検出するための方法であって、
細胞濃縮剤、細胞抽出剤を含むヒドロゲル、及び細胞を含むことが疑われる液体試料を提供する工程と、
前記液体試料と前記細胞濃縮剤とを所定の時間にわたって接触させる工程と、
前記液体試料の少なくとも一部から前記細胞濃縮剤を分離する工程と、
前記分離された細胞濃縮剤及び前記ヒドロゲルを含む液体混合物を形成する工程であって、前記細胞抽出剤が前記混合物中に放出される、工程と、
生物学的検体を検出する工程と、を含む、方法。 - 試料中の細胞を検出するための方法であって、
細胞を含むことが疑われる試料;細胞濃縮剤;細胞抽出剤を含むヒドロゲル;2以上の貯留部を備えるハウジングと、前記試料を受容するように構成された開口部とを含む検出物品;及び、前記細胞濃縮剤を分離して、前記ハウジングの上側貯留部から下側貯留部に移動するための手段を提供する工程と、
液体媒質中で前記試料を、前記ハウジングの前記上側貯留部内の前記細胞濃縮剤と接触させる工程と、
前記細胞濃縮剤を分離して、前記ハウジングの前記下側貯留部に移動する工程と、
前記分離された細胞濃縮剤及び前記ヒドロゲルを含む液体混合物を形成する工程であって、前記細胞抽出剤が前記混合物中に放出される、工程と、
生物学的検体を検出する工程と、を含む、方法。 - 試料中の細胞を検出するための方法であって、
細胞を含むことが疑われる試料;前記試料を受容するように構成された開口部と、細胞濃縮剤が収容された上側貯留部と、細胞抽出剤を含むヒドロゲルが収容された下側貯留部とを備えるハウジングを含む検出物品;前記細胞濃縮剤を前記液体試料の少なくとも一部から分離するための手段;及び、前記細胞濃縮剤を前記ハウジングの前記上側貯留部から前記下側貯留部に移動するための手段を提供する工程と、
液体媒質中で前記試料と、前記ハウジングの前記上側貯留部内の前記細胞濃縮剤とを接触させる工程と、
前記細胞濃縮剤を分離して、前記ハウジングの前記下側貯留部に移動する工程と、
前記分離された細胞濃縮剤及び前記ヒドロゲルを含む液体混合物を形成する工程であって、前記細胞抽出剤が前記混合物中に放出される、工程と、
生物学的検体を検出する工程と、を含む、方法。 - 前記生物学的検体を検出する工程が、生きた細胞の存在を検出することを含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、検出システムを使用することを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、微生物細胞に関連する生物学的検体を検出することを含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 体細胞抽出剤を提供する工程と、該体細胞抽出剤を前記試料からの細胞と接触させる工程と、を更に含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、前記生物学的検体の量を定量することを含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体の量が2回以上定量される、請求項8に記載の方法。
- 第1の時点において検出される前記生物学的検体の量が、第2の時点において検出される前記生物学的検体の量と比較される、請求項9に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、細胞からのATPを検出することを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞からのATPを検出する工程が、微生物細胞からのATPを検出することを含む、請求項11に記載の方法。
- 前記ATPを検出する工程が、細菌細胞からのATPを検出することを含む、請求項12に記載の方法。
- 前記細胞からのATPを検出する工程が、ルシフェリン及びルシフェラーゼが関与する反応においてATPを検出することを含む、請求項11〜13のいずれか一項に記載の方法。
- ATPを加水分解することが可能な酵素を提供する工程と、該酵素を前記試料の少なくとも一部と接触させる工程と、を更に含む、請求項14に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、前記生物学的検体を免疫学的に検出することを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、前記生物学的検体を遺伝学的に検出することを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、前記試料中の生きた細胞から放出される酵素を検出することを含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記酵素がアデニル酸キナーゼの酵素活性を含む、請求項18に記載の方法。
- 前記生物学的検体を検出する工程が、比色測定法により、蛍光測定法により、電気化学的方法により、又は光量測定法により検出することを含む、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 一体型試料調製及び検出装置であって、
少なくとも2個の貯留部を含み、その間に通路を有するハウジングであって、
上側貯留部が、試料を受容するように構成された開口部、及び上側貯留部内に配置された細胞濃縮剤を含み、
下側貯留部が、その内部に配置された検出試薬を含む、ハウジングと、
前記上側貯留部を前記下側貯留部から隔離するための手段と、
前記細胞濃縮剤を前記上側貯留部から前記下側貯留部に移動するための手段と、を備える、装置。 - 前記細胞濃縮剤が、粒子状又は分散された細胞濃縮剤を含む、請求項21に記載の装置。
- 前記ハウジングの前記上側貯留部と前記下側貯留部とを隔離するための前記手段が、プランジャ、弁、又は破断可能なシールを含む、請求項21又は22に記載の装置。
- 前記細胞濃縮剤を前記ハウジングの前記上側貯留部から前記下側貯留部に移動するための前記手段が、プランジャ、スワブ、又は弁を含む、請求項21〜23のいずれか一項に記載の装置。
- テーパ状の内壁を備える、請求項21〜24のいずれか一項に記載の装置。
- 細胞抽出剤を含むヒドロゲルを更に含む、請求項21〜25のいずれか一項に記載の装置。
- 前記ヒドロゲルが、ビーズ、繊維、リボン、又はシートである、請求項26に記載の装置。
- 前記ヒドロゲルが固体基材上にコーティングされる、請求項26に記載の装置。
- 前記ハウジングが第3の貯留部を更に含む、請求項21〜28のいずれか一項に記載の装置。
- 前記ヒドロゲルが前記第3の貯留部内に配置される、請求項29に記載の装置。
- 体細胞抽出剤を更に含む、請求項21〜30のいずれか一項に記載の装置。
- プランジャを更に備える、請求項21に記載の装置。
- 前記プランジャが流体経路を含む、請求項32に記載の装置。
- 前記流体経路がフィルターを含む、請求項33に記載の装置。
- 前記フィルターが微多孔性フィルターを含む、請求項34に記載の装置。
- 前記プランジャがスクレーパーを更に含む、請求項32に記載の装置。
- 前記スクレーパーが、前記スクレーパーの縁部と前記ハウジングとの間に液体を通過させるように構成されている、請求項36に記載の装置。
- 少なくとも2個の貯留部を含み、その間に通路を有するハウジングであって、
上側貯留部が、試料を受容するように構成された開口部を含み、
下側貯留部が、その内部に配置された検出試薬を含む、ハウジングと、
前記上側貯留部を前記下側貯留部から隔離するための手段と、
細胞濃縮剤と、
前記細胞濃縮剤を前記上側貯留部から前記下側貯留部に移動するための手段と、を備える、キット。 - 前記ハウジングが、前記上側貯留部を前記下側貯留部から隔離するための前記手段を含む、請求項38に記載のキット。
- 前記ハウジングが、前記細胞濃縮剤を前記上側貯留部から前記下側貯留部に移動するための前記手段を含む、請求項38又は請求項39に記載のキット。
- 前記細胞濃縮剤が、前記ハウジングの前記上側貯留部内に配置される、請求項38〜40のいずれか一項に記載のキット。
- 前記細胞濃縮剤が、粒子状又は分散された細胞濃縮剤を含む、請求項38〜41のいずれか一項に記載のキット。
- 微生物細胞抽出剤を含むヒドロゲルを更に含む、請求項38〜42のいずれか一項に記載のキット。
- 体細胞抽出剤を更に含む、請求項43に記載のキット。
- 試料取得装置を更に備える、請求項38〜44のいずれか一項に記載のキット。
- プランジャを更に備える、請求項38〜45のいずれか一項に記載のキット。
- 前記プランジャが流体経路を含む、請求項46に記載のキット。
- 前記流体経路がフィルターを含む、請求項47に記載のキット。
- 前記フィルターが微多孔性フィルターを含む、請求項48に記載のキット。
- 前記プランジャがスクレーパーを更に含む、請求項46に記載のキット。
- 前記スクレーパーが、前記スクレーパーの縁部と前記ハウジングとの間に液体を通過させるように構成されている、請求項50に記載のキット。
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