JP2012503006A

JP2012503006A - 非対称メソ置換ポルフィリンおよびクロリンのｐｄｔへの適用と新規方法

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Publication number: JP2012503006A
Application number: JP2011527954A
Authority: JP
Inventors: ウィーエ，アルノ; アイヒャー，ダニエル; ベーヴェーシュタルク，クリスチャン; グラーフェ，スザンナ
Original assignee: セラムオプテックインダストリーズインコーポレーテッド
Priority date: 2008-09-18
Filing date: 2009-09-17
Publication date: 2012-02-02
Anticipated expiration: 2029-09-17
Also published as: US9315510B2; CN102159569B; EP3459955B1; EP3459955A1; PT3459955T; EP2350058B1; US20110206613A1; WO2010033678A3; RU2574062C9; ES2707228T3; RU2574062C2; EP2350058A2; RU2011108837A; EP2350058A4; CN102159569A; ES2932287T3; WO2010033678A2; JP5955559B2; WO2010033678A8

Abstract

【課題】本発明は診断および治療に適用される光増感剤として用いられる生物活性化合物を提供する。適用とは特に癌、感染症、その他の過剰増殖性疾患のＰＤＴや、関節炎、炎症性疾患、ウイルス性・細菌性感染症、皮膚疾患、眼疾患、泌尿器疾患のような非癌適応のための蛍光診断およびＰＤＴ療法に向けてなされる。本発明はまた、調剤可能な水準に達したそれらの化合物を合成する方法を提供する。
【解決手段】ある実施形態は、所定位置のメソ置換基を有するポルフィリンを合成する方法と、このポルフィリン系をジヒドロキシル化あるいは還元によってクロリン系に変換する方法とを含み、複数の異性体が形成された場合には順相あるいは逆相シリカのクロマトグラフィーによってそれらを分離する方法を含む。他の実施形態では、クロリンの還元あるいはジヒドロキシル化の際に、特定の異性体が選択的に合成されるようにポルフィリンの置換基が選択される。その他の実施形態では、膜への親和性が高くＰＤＴ効果の高い両親媒性化合物を提供する。その他の実施形態では、気体Ｈ_２Ｓの使用を回避するオスミウム酸（ＶＩ）エステルの還元的解離の方法を提供する。その他の実施形態において、置換基を特定し、その置換基の立体的および／あるいは電子的効果によってジヒドロキシル化反応あるいはジイミンによる還元反応が選択性を有し、一つの異性体が優位となることを示す。その他の実施形態は、対象となる異性体を注射用リポソーム製剤として製剤し、注射の際の可溶性の問題やテトラピロール系の薬物動態遅延の問題のような望ましくない影響を回避する方法を含む。
【選択図】図２

Description

本発明は、生物学的活性を有する化合物に関する。より具体的には、癌、感染症およびその他の疾患の光線力学療法のような、様々な光照射療法のための光増感剤として利用できる、特異的に置換されたポルフィリンおよびクロリン誘導体に関する。

光線力学療法（ＰＤＴ）は、医療での多様な応用に利用するために現在開発が進められている、最も成長が見込まれる新たな技術の一つであり、特に腫瘍の破壊に対してはよく知られた治療法である（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃｔｈｅｒａｐｙ，ｂａｓｉｃｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｅｄｓ．Ｂ．Ｗ．Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ，Ｔｈ．Ｊ．Ｄｏｕｇｈｅｒｔｙ，ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，１９９２，ＮｅｗＹｏｒｋ）（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃｔｕｍｏｒｔｈｅｒａｐｙ．２ｎｄａｎｄ３ｒｄｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ．Ｅｄ．Ｊ．Ｇ．Ｍｏｓｅｒ，ＨａｒｗｏｏｄＡｃａｄｅｍｉｃＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９８，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）。光線力学療法では、治療上の所望の効果を達成するため光と光増感剤（色素）が用いられる。数多くの天然由来色素や合成色素が、光線力学療法のための光増感剤の候補であると評価されてきた。最も広く研究されている光増感剤はおそらくテトラピロール大環状化合物類であろう。それらの中でも特にポルフィリンとクロリンのＰＤＴ効果の研究が行われてきた。ポルフィリンは、１つの炭素原子がピロール環を架橋して特徴的なテトラピロール環状構造を形成する大環状化合物である。ジヒドロピロール単位を有するものも含めて、ポルフィリン誘導体には多くの異なる化合物群がある。本発明で開示するクロリンは、ジヒドロピロール単位を１つ有するポルフィリン誘導体である。一方バクテリオクロリンはジヒドロピロール単位を２つ持つことが特徴的である（一般的に、クロリンではポルフィリンと比較して芳香環系のβ位の二重結合が一つ欠けていて、バクテリオクロリンではポルフィリンと比較して２つの対面に位置する二重結合が欠けている）。Ｂｏｍｍｅｒらによる米国特許４６５６１８６号には、光増感剤として用いられるテトラピロール大環状化合物の例として、蛍光を発するアミノカルボン酸のモノアミド、ジアミド、ポリアミドと、少なくとも３つのカルボキシル基を有するテトラピロールとが開示されている。また、ＭａｃＡｌｐｉｎｅらによる米国特許７０２２８４３Ｂ１には、光増感剤としてのβ，β’−ジヒドロキシメソ置換クロリンが開示されている。また、Ｐａｎｄｅｙらによる米国特許７１６６７１９Ｂ２には、フッ素化された置換基を有するテトラピロール化合物が開示され、このテトラピロール化合物はＰＤＴの診断と治療への適用のためのクロリンあるいはバクテリオクロリンである。

光増感剤として有効であるためには、いくつかの特性を備える必要がある。その中でも、深部の標的組織を有効に破壊するため、長波長に強い吸収を有することが求められる。現在の光増感剤の多くはスペクトル中で赤色領域の吸収が弱いため、有効性が不十分である。クロリンには、電磁波スペクトルの赤色領域および近赤外領域において強力な吸収があるという利点がある。このため、ＰＤＴを腫瘍の治療に採用する場合、長波長の光が組織内の深部に到達すれば例えばより広範囲の腫瘍を治療できる。ＰＤＴの候補化合物であるクロリンは、自然由来のものでも、全合成されたものでもよい。

クロリンが天然化合物から得られる場合、通常クロロフィルあるいはバクテリオクロロフィルの誘導体として得られる。その例は、米国特許第５３３０７４１号に開示された、光合成植物および藻類のクロロフィルａから誘導された光増感剤である。天然化合物は変化を受けやすいため、クロリンの天然化合物からの取得はしばしば困難であり、また多くの原料を必要とする。このため、全合成によるクロリンの合成は有望な代替手段である。当技術分野で、クロリンおよびバクテリオクロリンを全合成によって調製する方法が知られている。一般的にそれらの化合物は、まずポルフィリンを合成し、次にそのポルフィリン環系をクロリンあるいはバクテリオクロリン環系に変換することによって調製される。この工程は例えば、ｉｎｓｉｔｕで発生させたジイミンによる還元、あるいは四酸化オスミウムによるシス−ジヒドロキシル化によって行うことができる。シス−ジヒドロキシル化につながる多段階反応もまた知られている（欧州特許第００３３７６０１号；国際公開第０９６１３５０４号、国際公開第０００６１５８４号；Ｃ．Ｂｒｕｅｃｋｎｅｒ，Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ，２，３−ｖｉｃ−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ−ｍｅｓｏ−ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｉｎｓｆｒｏｍｔｈｅＯｓｍｉｕｍＴｅｔｒｏｘｉｄｅＯｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｏ−Ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｐｏｒｐｈｙｒｉｎ，ＴｅｔｒａｈｅｔｒｏｎＬｅｔｔ．１９９５，３６，３２９５−３２９８；Ｃ．Ｂｒｕｅｃｋｎｅｒ，Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ，β，β’−Ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｏ−Ｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌｃｈｌｏｒｉｎｓ，ＴｅｔｒａｈｅｔｒｏｎＬｅｔｔ．１９９５，３６，９４２５−９４２８；Ｈ．Ｗ．Ｄａｎｉｅｌｌ，Ｓ．Ｃ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ，Ｈ．Ａ．Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｃ．Ｂｒｕｅｃｋｎｅｒ，Ｏｘｉｄａｔｉｏｎｏｆｍｅｓｏ−ｔｅｔｒａ−ｐｈｅｎｙｌ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎ：ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ β，β’−ｄｉｏｘｏｃｈｌｏｒｉｎｓ，ＴｅｔｒａｈｅｔｒｏｎＬｅｔｔ．２００３，４４，４０４５−４０４９；Ｆ．Ｒａｎｃａｎ，Ａ．Ｗｉｅｈｅ，Ｍ．Ｎｏｅｂｅｌ，Ｍ．Ｏ．Ｓｅｎｇｅ，Ｓ．ＡｌＯｍａｒｉ，Ｆ．Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．Ｊｏｈｎ，Ｂ．Ｒｏｅｄｅｒ，Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓｏｎａｓｙｍｍｅｔｒｉｃｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓｗｉｔｈｒｅｇａｒｄｔｏｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｕｐｔａｋｅ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｉｎＪｕｒｋａｔｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ２００５，７８１７−２８；Ｉ．Ｌａｖｉｌｌｅ，Ｔ．Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏ，Ｂ．Ｌｏｏｃｋ，Ｓ．Ｐｉｇａｇｌｉｏ，Ｐｈ．Ｍａｉｌｌａｒｄ，Ｄ．Ｓ．Ｇｒｉｅｒｓｏｎ，Ｄ．Ｃａｒｒｅｚ，Ａ．Ｃｒｏｉｓｙ，Ｊ．Ｂｌａｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣｅｌｌｕｌａｒＩｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＰｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧｌｕｃｏ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＴｒｉａｎｄＴｅｔｒａ（ｍｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｃｈｌｏｒｉｎｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，１１，１６４３−１６５２）。ＰＤＴ効果に関する研究、試験はほとんどの場合メソ位に４つの同一置換基を持つ化合物について行われている。優れた例の一つは、医薬品フォスカン（登録商標）の活性化合物であるテモポルフィンである。フォスカン（登録商標）は頭頸部癌のＰＤＴ療法のための医薬品としてヨーロッパで用いられて成功をおさめた。上記の国際公開第０９６１３５０４号に開示の実施例の化合物も全て、メソ位に４つの同一置換基を持つ。全合成によって得られたメソ位非対称４置換クロリンに関する存在する数少ない文献は、Ａ_３Ｂタイプについてのものである。すなわち、３つの同一メソ置換基と１つの異なるメソ置換基を含む（Ｉ．Ｌａｖｉｌｌｅ，Ｔ．Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏ，Ｂ．Ｌｏｏｃｋ，Ｓ．Ｐｉｇａｇｌｉｏ，Ｐｈ．Ｍａｉｌｌａｒｄ，Ｄ．Ｓ．Ｇｒｉｅｒｓｏｎ，Ｄ．Ｃａｒｒｅｚ，Ａ．Ｃｒｏｉｓｙ，Ｊ．Ｂｌａｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣｅｌｌｕｌａｒＩｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＰｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧｌｕｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＴｒｉａｎｄＴｅｔｒａ（ｍｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｃｈｌｏｒｉｎｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，１１，１６４３−１６５２，Ｆ．Ｒａｎｃａｎ，Ａ．Ｗｉｅｈｅ，Ｍ．Ｎｏｅｂｅｌ，Ｍ．Ｏ．Ｓｅｎｇｅ，Ｓ．ＡｌＯｍａｒｉ，Ｆ．Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．Ｊｏｈｎ，Ｂ．Ｒｏｅｄｅｒ，Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓｏｎａｓｙｍｍｅｔｒｉｃｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓｗｉｔｈｒｅｇａｒｄｔｏｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｕｐｔａｋｅ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｉｎＪｕｒｋａｔｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ２００５，７８１７−２８；Ｊ．Ｋ．Ｍａｃａｌｐｉｎｅ，Ｒ．Ｂｏｃｈ，Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ，Ｊ．ＰｏｒｐｈｙｒｉｎｓＰｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ２００２，６，１４６−１５５）。クロリンに変換する際に対称置換されたポルフィリンを用いる理由の一つは、この場合には異性体が形成されないためである。異性体が形成されなければ生成物を容易に同定、調製でき、この点は商業生産の観点で重要な因子である。クロリンに変換するために非対称ポルフィリンを用いた場合、異なる位置異性体が生じるために後の分離工程が必要となる（置換基がトランス配座となる場合を除く、図２参照）。このため、当技術分野に見られるメソ−Ａ_３Ｂ−置換クロリンは同定が不十分であるか未分離の異性体混合物のまま用いられていることが多い（例えばＪ．Ｋ．Ｍａｃａｌｐｉｎｅ，Ｒ．Ｂｏｃｈ，Ｄ．Ｄｏｌｐｈｉｎ，Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｅｔｒａｐｈｅｎｙｌ−２，３−ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓａｓｐｏｔｅｎｔｉａｌｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ，Ｊ．ＰｏｒｐｈｙｒｉｎｓＰｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ２００２，６，１４６−１５５；Ｉ．Ｌａｖｉｌｌｅ，Ｔ．Ｆｉｇｕｅｉｒｅｄｏ，Ｂ．Ｌｏｏｃｋ，Ｓ．Ｐｉｇａｇｌｉｏ，Ｐｈ．Ｍａｉｌｌａｒｄ，Ｄ．Ｓ．Ｇｒｉｅｒｓｏｎ，Ｄ．Ｃａｒｒｅｚ，Ａ．Ｃｒｏｉｓｙ，Ｊ．Ｂｌａｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＣｅｌｌｕｌａｒＩｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄＰｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃＡｃｔｉｖｉｔｙｏｆＧｌｕｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｄＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆＴｒｉａｎｄＴｅｔｒａ（ｍｅｔａ−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｃｈｌｏｒｉｎｅｓ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，１１，１６４３−１６５２）。ＰＤＴ効果に寄与しない異性体を分離するために混合物を精製することや、合成時に活性化合物を増加させることは困難であるため、容易に同定され簡易な合成方法で合成される非対称テトラキスメソ置換クロリンを代替として見いだすことは有益であろう。特に、非対称置換クロリンの特徴的な性質を把握することは有益である。それらは化合物の両親媒性を高め、それによって膜への親和性やＰＤＴ効果を高めるためである。

このように、癌、感染症、その他の疾患の光線力学療法のような光線照射療法を広範囲に渡って有効に実施するために、光増感剤として用いられる従来技術の生物活性化合物の有効性を高めることが求められている。さらに、従来利用可能なものよりも高度な光増感剤を提供するために、非対称テトラキスメソ置換クロリンの新規合成方法と適用方法を提供する必要がある。このように、ＰＤＴ効果は非対称テトラキスメソ置換クロリンの性質の利点を活用することで高まるであろう。利点とは例えば、電磁波スペクトルの赤および近赤外領域の様な長波長領域に強い吸収を有するために深部の組織に浸透する点、目的に特化した両親媒性が膜親和性を高めるため、健康な周囲の組織と比べて癌や他の標的組織に対して選択性が高い点、ＰＤＴの特別の適用方法を用いることで薬物動態をカスタマイズできる点である。

本発明は、癌、感染症、その他の疾患の光線力学療法のような光線照射療法を含む広範囲な用途に光増感剤として用いることができる生物活性化合物を提供することを目的とする。

本発明はさらに、化学的に安定なポルフィリンおよびクロリン誘導体を光線力学療法のような多様な医療用途に使用することを目的とする。

本発明はさらに、癌や他の過剰増殖性疾患、皮膚疾患、ウイルス性・細菌性感染症、眼疾患、泌尿器疾患の光線力学療法に使用できる非対称テトラキスメソ置換クロリン構造を提供することを目的とする。

本発明はさらに、関節炎や類似の炎症性疾患のような疾患への非癌適応のための蛍光診断およびＰＤＴ療法に使用できる非対称テトラキスメソ置換クロリン構造を提供することを目的とする。

本発明はさらに、そのような非対称テトラキスメソ置換クロリンを合成し精製する方法を提供し、形成された異性体を分離する方法を提供することを目的とする。

本発明はさらに、癌、皮膚疾患、ウイルス性・細菌性感染症、眼疾患、泌尿器疾患のＰＤＴ療法に使用できる両親媒性の高い化合物を提供することを目的とする。

本発明はさらに、出発物質のジヒドロキシル化反応あるいは還元反応の選択性を一つの異性体の形成のみに特化させられる合成方法を提供することを目的とする。

本発明はまた、注射部位への沈着やテトラピロール系の薬物動態の遅延のような望ましくない影響を回避するため、本発明の生物活性化合物のための注射用リポソーム製剤のような調剤的に許容できる処方を提供することを目的とする。

簡潔に述べれば、本発明は診断および治療に適用される光増感剤として用いられる生物活性化合物を提供する。適用とは特に癌、感染症、その他の過剰増殖性疾患のＰＤＴや、関節炎、炎症性疾患、ウイルス性・細菌性感染症、皮膚疾患、眼疾患、泌尿器疾患のような非癌適応のための蛍光診断およびＰＤＴ療法に向けてなされる。本発明はまた、調剤可能な水準に達したそれらの化合物を合成する方法を提供する。ある実施形態は、所定位置のメソ置換基を有するポルフィリンを合成する方法と、このポルフィリン系をジヒドロキシル化あるいは還元によってクロリン系に変換する方法とを含み、複数の異性体が形成された場合には順相あるいは逆相シリカのクロマトグラフィーによってそれらを分離する方法を含む。他の実施形態では、クロリンの還元あるいはジヒドロキシル化の際に、特定の異性体が選択的に合成されるようにポルフィリンの置換基が選択される。その他の実施形態では、膜への親和性が高くＰＤＴ効果の高い両親媒性化合物を提供する。その他の実施形態では、気体Ｈ_２Ｓの使用を回避するオスミウム酸（ＶＩ）エステルの還元的解離の方法を提供する。その他の実施形態において、置換基を特定し、その置換基の立体的および／あるいは電子的効果によってジヒドロキシル化反応あるいはジイミンによる還元反応が選択性を有し、一つの異性体が優位となることを示す。その他の実施形態は、対象となる異性体を注射用リポソーム製剤として製剤し、注射の際の可溶性の問題やテトラピロール系の薬物動態遅延の問題のような望ましくない影響を回避する方法を含む。

本発明の前述のあるいは他の目的、特徴、利点は、後述の明細書を図と合わせて購読することによって明確となるであろう。

図１は、医療用途に特段の適合性を有する、２つの非極性（アルキル）基および２つの極性基によってメソ置換された非対称テトラキスメソ置換クロリンの例を示す図である。図２は、特異的に置換されたポルフィリン化合物、とくにクロリンのタイプ１、２、３あるいは４の誘導体に関する本発明の実施形態を表す図である。図３は、Ａを非極性（アルキル）置換基、Ｂを極性置換基とした場合の、Ａ_２Ｂ_２−タイプのシスあるいはトランスメソ置換ポルフィリン系における、クロリン系に変換される位置を示した、本発明の実施形態を表す図である。

本発明は、癌、過剰増殖性疾患、皮膚疾患、ウイルス性・細菌性感染症、眼疾患および／あるいは泌尿器疾患の光線力学療法のような広範囲の光照射療法に光増感剤として使用できる生物活性化合物を提供する。本発明で提供する新たな光増感剤は、簡易に合成および同定ができるという利点を有する。さらに、本発明は両親媒性化合物を対象となるＰＤＴの用途に特化する方法を提供する。このため標的組織への選択性が高まり、またＰＤＴの効果も高まる。本発明では、生物活性化合物が電磁波スペクトルの赤および近赤外領域のような長波長領域において強い吸収を有するために深部の組織に浸透する。また、用途に特化した両親媒性と、個々のＰＤＴの適用によってカスタマイズされた薬物動態のため、周囲の健康な組織に比べて標的組織の選択性が高い。この点が従来技術の生物活性化合物の有効性を上回る。

様々な医療の適応、特にＰＤＴに使用できる本発明の生物活性化合物は、非対称テトラキスメソ置換クロリン構造を有する。実際には、２つの非極性（アルキル）基および２つの極性基によるメソ置換構造を有する、図１に例示するようなクロリンがそのような医療用途に特段の適合性を有することは、思いがけなく見いだされた。さらにこの新規発明は発展的に応用されて、関節炎や類似の炎症性疾患のような非癌適応のための蛍光診断およびＰＤＴ療法に利用可能となる。

新規光増感剤を得るため、本発明では図２の式１、２、３、及び４に示された化学的に安定なポルフィリンおよびクロリンの誘導体が用いられる。本発明はまた、メソアルキル置換クロリンを得るための合成方法および形成された異性体の分離方法を提供する。メソアルキル置換クロリンはより具体的には光線力学療法で使用可能な非対称テトラキスメソ置換クロリンである。部分的にメソアルキル置換されたクロリンに関しては、実際、ただ一つの文献のみが存在する（Ｆ．Ｒａｎｃａｎ，Ａ．Ｗｉｅｈｅ，Ｍ．Ｎｏｅｂｅｌ，Ｍ．Ｏ．Ｓｅｎｇｅ，Ｓ．ＡｌＯｍａｒｉ，Ｆ．Ｂｏｅｈｍ，Ｍ．Ｊｏｈｎ，Ｂ．Ｒｏｅｄｅｒ，Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓｏｎａｓｙｍｍｅｔｒｉｃｄｉｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｉｎｓｗｉｔｈｒｅｇａｒｄｔｏｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｕｐｔａｋｅ，ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎｉｎＪｕｒｋａｔｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．Ｂ：Ｂｉｏｌｏｇｙ２００５，７８，１７−２８；この化合物もまたメソ−Ａ_３Ｂ−置換パターンである）。一方、特にこのような位置異性体として純粋な（ほとんどの場合エナンチオ異性体の混合物であるにせよ）非対称置換クロリンがＰＤＴの光増感剤として非常に興味深いこともあるだろう。このような非対称置換によって化合物の両親媒性が高まり、膜への親和性が高まってＰＤＴ効果が高まると考えられるためである。さらに、驚くべきことに、異なるクロリン異性体間でＰＤＴ効果に大きな相違が時に見られることが、本発明に関する研究の中で発見された。

本発明のある実施形態は、所定の位置がメソ置換されたポルフィリンを合成して（図３に示すＡ_２Ｂ_２−タイプのポルフィリンでシスあるいはトランス配置のメソ置換体。ここで例えばＡは非極性（アルキル）置換基、Ｂは極性置換基）、このポルフィリン系をジヒドロキシル化あるいは還元によってクロリン系に変換する（例えば次の文献に記載されている：Ｍ．Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ，ＯｓｍｉｕｍＴｅｔｒａｏｘｉｄｅＣｉｓＤｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｉｏｎｏｆＵｎｓａｔｕｒａｔｅｄＳｕｂｓｔｒａｔｅｓ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９８０，８０，１８７−２１３；Ｒ．Ｂｏｎｎｅｔｔ，Ｒ．Ｄ．Ｗｈｉｔｅ，Ｕ．−Ｊ．Ｗｉｎｆｉｅｌｄ，Ｍ．Ｃ．Ｂｅｒｅｎｂａｕｍ，Ｈｙｄｒｏｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓｏｆｔｈｅｍｅｓｏ−ｔｅｔｒａ（ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓｅｒｉｅｓａｓｔｕｍｏｒｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．１９８９，２６１，２７７−２８０）方法を含む。最後の工程で、異性体（複数の異性体が形成された場合）が順相あるいは逆相シリカのクロマトグラフィーによって分離される。

本発明の他の実施形態は、所定位置がメソ置換されたポルフィリンを合成する工程、これをクロリンに変換する工程、上で述べた異性体を分離する工程、所望の異性体をリポソーム製剤に処方する工程を含む。

本発明の他の実施形態では、トランス−Ａ_２Ｂ_２−タイプのポルフィリンが合成され、ジヒドロキシクロリンに変換されてクロマトグラフィーによって精製される。

本発明の他の実施形態では、シス−Ａ_２Ｂ_２−タイプのポルフィリンが合成され、ジヒドロキシクロリンに変換され、異性体が分離されてクロマトグラフィーによって精製される。

ポルフィリンの置換基の電子的・立体的効果のために、ジヒドロキシル化反応は選択性を有するものとなる。このため、１つの異性体の生成が優位となることもまた発見された。このため、本発明の他の実施形態では、クロリンの還元反応やジヒドロキシル化反応（実施例３．２および３．４）に選択性を与えて異性体が選択的に生成するように、ポルフィリンの置換基が選択される。

本発明の特に好適な実施形態において、置換基Ａとしてヘキシル鎖を有し、置換基Ｂとしてメトキシカルボニルフェニル残基を有するトランス−Ａ_２Ｂ_２−タイプのポルフィリンが合成される。このポルフィリンはその後ジヒドロキシクロリンに変換され、残されたメチルエステルは加水分解されて対応するカルボン酸となる。

本発明の主題である、クロリン合成のための出発物質として可能である物質はピロールとアルデヒドである。より具体的には、ピロールと２分子のアルデヒド、１つはアルキルアルデヒド（ａｌｋａｎａｌ）、一つは芳香族アルデヒド、が非対称置換ポルフィリンを合成するために用いられ、非対称置換ポルフィリンが対応するクロリンの合成の基となる。ピロールとアルデヒドの縮合反応が行われる。この縮合反応に適した方法は、当技術分野では昔から知られている（Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ，Ｉ．Ｃ．Ｓｃｈｒｅｉｍａｎ，Ｈ．Ｃ．Ｈｓｕ，Ｐ．Ｃ．ＫｅａｒｎｅｙａｎｄＡ．Ｍ．Ｍａｒｇｕｅｒｅｔｔａｚ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８７，５２，８２７−８３６）。この替わりに、ジピロメタンあるいはトリピロメタンとアルデヒドとを用いて非対称置換ポルフィリンを合成することもでき、これも当技術分野で知られているものである（Ｃ．−Ｈ．Ｌｅｅ，Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ，Ｏｎｅ−ＦｌａｓｋＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＭｅｓｏ−ＳｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄＤｉｐｙｒｒｏｍｅｔｈａｎｅｓａｎｄＴｈｅｉｒＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｉｎｔｈｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＴｒａｎｓ−ＳｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄＰｏｒｐｈｙｒｉｎＢｕｉｌｄｉｎｇＢｌｏｃｋｓ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１９９４，５０，１１４２７−１１４４０）。縮合反応を行い、所望の非対称置換ポルフィリンを精製した後、ポルフィリンはクロリンに変換される。アルキル置換基が一つしかないテトラメソ置換クロリンの例は当技術分野で一つしか知られておらず、本発明の他の実施形態で複数のメソアルキル置換基を有するクロリンをジヒドロキシル化によって合成する方法を提供する。アルキル鎖を有するメソ置換クロリンの合成は実施例３．１〜３．４で例示される。さらに、ジヒドロキシル化の基質として脂溶性のアルキル置換ポルフィリンを用いる点が本発明の特徴的な点である。これによって膜親和性の高い両親媒性化合物を合成することが可能となり、ＰＤＴ効果が高まるためである。実施例１．１および１．２では、親水性基と疎水性基との双方を有するポルフィリンを得ることを目的として一連の非対称置換ポルフィリンが合成される。

当技術分野で知られているポルフィリンの四酸化オスミウムによるジヒドロキシル化（上記のＢｒｕｅｃｋｎｅｒらの文献参照）では、オスミウム酸（ＶＩ）エステルの還元的解離に気体のＨ_２Ｓが用いられる。最終的に大規模な薬剤調合に使用される化合物の合成に気体の有毒なＨ_２Ｓを用いることは好ましくない。さらに、硫化水素を使用すれば不純物が混入し、このためにクロマトグラフィー操作とクロリン異性体の分離が困難となる。よって本発明の他の実施形態では、気体のＨ_２Ｓの使用を回避できる簡易なオスミウム酸（ＶＩ）エステルの還元的解離の方法を提供する。替わりに用いるのは水／メタノール溶液に飽和させた亜硫酸水素ナトリウムであり、反応混合物に少量が添加される。混合物を一晩攪拌した後、オスミウム酸エステルのジオールへの解離反応が定量的に進行する（実施例３．１〜３．４）。生成物のクロリン混合物はクロマトグラフィーによって容易に分離・精製できる。

四酸化オスミウムあるいはジイミンによる攻撃はピロールサブユニットのうちどれに対しても起こりうるため、シス−Ａ_２Ｂ_２−タイプの非対称置換ポルフィリンでは３つの位置異性体が形成され、トランス−Ａ_２Ｂ_２−タイプでは位置異性体は１つのみが形成される。よって、本発明の他の実施形態では、ジヒドロキシル化反応あるいはジイミンによる還元反応が選択性を有するように置換基が特定され、この置換基の立体的および／あるいは電子的効果によって１つの異性体の生成が優位となる。本発明に関する研究において、シス−Ａ_２Ｂ_２−タイプのポルフィリン（Ａ＝ヘキシル基）ではヘキシル基に挟まれたピロールサブユニット（実施例３．２および３．４）がジヒドロキシル化において優位となることが発見された。この選択性は、単純な立体的および／あるいは電子的効果が原因であると考えられる。ことなる異性体の構造は２Ｄ−ＮＭＲスペクトル（ＣＯＳＹ、ＨＭＱＣおよびＨＭＢＣ）によって明白に特定された。ジヒドロキシル化されたピロールサブユニットが近傍のメソ位の置換基に影響を与えていることが^１ＨＮＭＲスペクトルから分かる。興味深い点は、クロリンの双極子モーメントがジオールの位置に影響されているために、化合物のクロマトグラフィー挙動がほとんどの場合対応する位置異性体の構造を反映していることである。

本発明の方法によって合成された、特定の位置に置換基を有する両親媒性ポルフィリンおよびクロリン誘導体は、癌やその他の過剰増殖性疾患および感染症に対する光線力学療法のための使用に好適である。このような両親媒性の化合物を得ることを目的として、他の実施形態では、いくつかのポルフィリンおよびジヒドロキシクロリンのメチルエステル基が塩基性条件下で加水分解され、対応するカルボン酸に変換される（実施例２および４）。それらの酸は極性溶媒への溶解度が高く、光増感剤としての可能性が高い。

ＰＤＴは次の様に行われる。まず、特定の治療部位に誘導体を輸送するため、誘導体を調剤可能な輸送媒体（例えばエタノール溶液やリポソーム製剤）に混ぜ込む。次に、媒体中の誘導体を治療部位に投与し、十分な時間をかけてポルフィリンおよびクロリンを病変組織に優先的に蓄積させる。最後に、治療部位に適切な波長および十分な強度の光を照射し、ポルフィリン誘導体を活性化させて前記組織細胞の壊死やアポトーシスを起こさせる。よって、本発明の生物活性化合物の便利な調剤処方が行われることは、主要な利点の一つである。調剤処方は例えば注射用リポソーム製剤であり、注射部位への沈着やテトラピロール系の薬物動態の遅延のような望ましくない影響を回避できる。本発明の化学的に安定なポルフィリンおよびクロリン誘導体は、その両親媒性のために、例えば注射のような様々な投与方法のための、様々な調剤可能な製剤として製造できる。特に好適な実施形態では、そのような両親媒性化合物がリポソームとして製剤される（実施例８．１および８．２）。このリポソーム製剤は注射の際に注射部位への沈着やテトラピロール系の薬物動態の遅延のような望ましくない影響を回避できる。

本発明のあるクロリン誘導体、すなわち実施例４．１で調製される５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンについて、ＨＴ２９細胞株を用いた細胞培養実験によって暗毒性（ｄａｒｋｔｏｘｉｃｉｔｙ）および光毒性（実施例６．１）が検査され、この化合物がＰＤＴへの使用に対して優秀な特性を有することが示された。本発明の化合物の良好な光毒性のさらなる例は、実施例６．２および６．３に例示されている。ＨＴ２９細胞株を用いた実験のさらなる実施例６．４〜６．６は、本発明で用いられている置換基とその配置を有しないその他のジヒドロキシクロリンではＰＤＴ効果を期待できないことを例示するために含まれる。

本発明の他の目的は、本明細書に開示のポルフィリンおよびクロリン誘導体を関節炎や類似の炎症性疾患の診断と治療に用いることである。このため、関節炎との関連性が特に高い２つの細胞株（ＨＩＧ８２およびＪ７７４Ａ．１、ウサギ滑膜細胞およびマウスマクロファージ細胞株）に対する本発明の一連の化合物を用いた光線力学療法の結果が、実施例７．１〜７．４に記載のデータに集約されている。ここでも、本発明で用いた置換基を持たず、光線力学活性を有しない化合物の陰性例が含まれている。

後述する実施例は、通常の技術を有する当業者に、本発明のクロリン誘導体の合成方法に関する十分かつ例示的な開示および記述を提供し、それらの光線力学活性を示すために記載されるものであり、発明者が発明として位置づけるものの範疇を限定することを意図するものではない。用いた数値（例えば量、温度等）に関しては精度を確保する配慮がなされたが、いくばくかの実験誤差と偏差がある点が考慮されるべきである。また、系統的なＩＵＰＡＣ名を化合物に命名するため最善の方法がとられたが、基本的には実験による分光学的データに基づいて記載された構造式を参照されたい。

〔実施例〕
全ての試薬は市販品を購入して用いた。テトラアセチル−β−Ｄ−グルコピラノシロキシル−ベンズアルデヒド（Ｉ．Ｌａｖｉｌｌｅ，Ｓ．Ｐｉｇａｇｌｉｏ，Ｊ．−Ｃ．Ｂｌａｉｓ，Ｂ．Ｌｏｏｃｋ，Ｐｈ．Ｍａｉｌｌａｒｄ，Ｄ．Ｓ．Ｇｒｉｅｓｏｎ，Ｊ．Ｂｌａｉｓ，Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，１２，３６７３−３６８２）および５−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ジピロメタン（Ｂ．Ｊ．Ｌｉｔｔｌｅｒ，Ｍ．Ａ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｃ．−Ｈ．Ｈｕｎｇ，Ｒ．Ｗ．Ｗａｇｎｅｒ，Ｄ．Ｆ．Ｏ’Ｓｈｅａ，Ｐ．Ｄ．Ｂｏｙｌｅ，Ｊ．Ｓ．Ｌｉｎｄｓｅｙ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９９９，６４，１３９１−１３９６）が、文献にならって合成された。ジクロロメタンは使用前にＫ_２ＣＯ_３を用いた蒸留によって精製した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にはアルミニウム板にあらかじめコーティングされたメルク製のシリカゲル６０（蛍光指示薬を含まない）を用いた。フラッシュクロマトグラフィーは、メルク社製のシリカゲル６０の０．０４０〜０．０６３ｍｍ（２３０〜４００メッシュ）のものを用いて行った。^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲスペクトルの測定はブルカー社製のＡＣ２５０、ＡＣ５００、ＡＭＸ５００装置を用いてＣＤＣｌ_３、（ＣＤ_３）_２ＣＯあるいは（ＣＤ_３）_２ＳＯ中で行った。化学シフトδは内部基準物質ＴＭＳからのずれ、あるいは残留溶媒ピークからのずれとしてｐｐｍ単位で与えられ、Ｊ値はＨｚ単位で与えられる。質量スペクトルはＶａｒｉａｎＭＡＴ７７１、ＶａｒｉａｎＩｏｎＳｐｅｃＱＦＴ−７あるいはＡｇｉｌｅｎｔ６２１０ＥＳＩ−ＴＯＦ測定装置を用いて測定された。電子吸収スペクトルはジクロロメタンあるいはアセトンを溶媒としてＳｐｅｃｏｒｄＳ３００（ＡｎａｌｙｔｉｃＪｅｎａ）分光光度計を用いて測定された。

非対称置換ポルフィリンの合成

（１．１５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリンの調製（方法Ａ）および５，１０−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリンの調製）
代表的な実験において、マグネチックスターラーとアルゴンガスの注入口を備えた三口フラスコに乾燥ジクロロメタン（１５００ｍｌ）を加えた。ピロール（１．０５ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）、ヘプタナール（１．０５ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ）、４−ホルミル安息香酸メチル（１．２３ｇ、７．５ｍｍｏｌ）を加えた後、フラスコに周囲の光からの遮断を施し、ＴＦＡ（１．１６ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間反応混合物を攪拌した。その後、乾燥ジクロロメタン（１００ｍｌ）にけん濁させたＤＤＱ（２．５５ｇ、１１．２５ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１時間攪拌した後、トリエチルアミン（３ｍｌ）を加えた。重合副生成物を除去するため、反応混合物をシリカゲルでろ過した。溶媒を留去し、ジクロロメタンを用いたフラッシュクロマトグラフィーによって分離し、溶離剤としてジクロロメタン／ヘキサン３：１（第一画分）およびジクロロメタン（第二画分）を用いてさらなる精製を行った。ジクロロメタン／ヘキサンを溶媒とした再結晶によってさらなる精製を行った。カラムの第一画分は５，１０，１５−トリヘキシル−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（２０３ｍｇ、１２％）を含み、第二画分は表題化合物である５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（１０９ｍｇ、４％）を含み、第三画分は表題化合物である５，１０−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（１９９ｍｇ、７％）を含んでいた。

（１．２５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリンの合成、方法Ｂ）
代表的な実験において、マグネチックスターラーとアルゴンガスの注入口を備えた三口フラスコにアセトニトリル（５００ｍｌ）を加えた。５−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ジピロメタン（７１４ｍｇ、２．６ｍｍｏｌ）およびヘプタナール（０．３６ｍｌ、２．６ｍｍｏｌ）を加えた後、フラスコに周囲の光からの遮断を施し、ＴＦＡ（０．２ｍｌ、２．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間反応混合物を攪拌した。その後、アセトニトリル（３０ｍｌ）にけん濁させたＤＤＱ（８６０ｍｇ、３．８ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１時間攪拌した後、トリエチルアミン（１ｍｌ）を加えた。溶媒を留去し、溶離剤としてジクロロメタン／メタノール９５：５を用いた粗精製をフラッシュクロマトグラフィーによって行った。さらなる精製をジクロロメタン／酢酸エチル９９：１を溶離剤として、フラッシュクロマトグラフィーを用いて行った。表題化合物である５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリンは、ジクロロメタン／メタノールを溶媒とした再結晶によって得られた（８１ｍｇ、９％）。

（１．３５，１５−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリンおよび５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリンの合成）
代表的な実験において、マグネチックスターラーとアルゴンガスの注入口を備えた三口フラスコに乾燥ジクロロメタン（１５００ｍｌ）を加えた。ピロール（１．０５ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）、テトラデカナール（１５９３ｍｌ、７．５ｍｍｏｌ）、３−ヒドロキシベンズアルデヒド（９１６ｍｇ、７．５ｍｍｏｌ）を加えた後、フラスコに周囲の光からの遮断を施し、ＴＦＡ（１．１６ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）を加え、室温で４時間反応混合物を攪拌した。その後、乾燥ジクロロメタン（１００ｍｌ）にけん濁させたＤＤＱ（２．５５ｇ、１１．２５ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１時間攪拌した後、トリエチルアミン（６ｍｌ）を加えた。重合副生成物を除去するため、反応混合物をシリカゲルでろ過した。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９０：１０および９５：５を溶離剤として複数回のフラッシュクロマトグラフィーによって分離を行った。さらなる精製は、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶によって行った。カラムの第一画分は５−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，１５，２０−トリス−（トリデシル）−ポルフィリン（６８ｍｇ、４％）を含み、第二画分は表題化合物である５，１５−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリン（５２ｍｇ、２％）を含み、第三画分は表題化合物である５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリン（１１４ｍｇ、４％）を含んでいた。

（１．３５，１０，１５−トリヘキシル−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリンの合成）
代表的な実験において、マグネチックスターラーとアルゴンガスの注入口を備えた三口フラスコに乾燥ジクロロメタン（１５００ｍｌ）を加えた。ピロール（１０．５ｍｌ、１５０ｍｍｏｌ）、ヘプタナール（１５．８ｍｌ、１１３ｍｍｏｌ）、４−ホルミル安息香酸メチル（６．２ｇ、３８ｍｍｏｌ）を加えた後、フラスコに周囲の光からの遮断を施し、ＴＦＡ（２．１５ｍｌ、２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間反応混合物を攪拌した。その後、乾燥ジクロロメタン（１００ｍｌ）にけん濁させたＤＤＱ（２５ｇ、１１０ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１時間攪拌した後、トリエチルアミン（６ｍｌ）を加えた。重合副生成物を除去するため、反応混合物をシリカゲルでろ過した。溶媒を留去し、ジクロロメタンを溶媒としてフラッシュクロマトグラフィーによる分離を行い、ジクロロメタン／ヘキサン３：１を溶媒としてさらに精製を行った。ジクロロメタン／メタノールを溶媒とした再結晶によってさらに精製を行った。カラムの第一画分には５，１０，１５，２０−テトラヘキシル−ポルフィリン（９３０ｍｇ、５％）が含まれ、第二画分には表題化合物の５，１０，１５−トリヘキシル−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（１４００ｍｇ、５％）が含まれていた。

非対称カルボキシ置換ポルフィリンの合成

（２．１５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−ポルフィリンの合成）
代表的な実験において、ＫＯＨ（２００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍｌ）溶液を、５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（３１ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−ポルフィリン（２６ｍｇ、８７％）を得た。

（２．２５，１０−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１５，２０−ジヘキシル−ポルフィリンの合成）
代表的な実験において、ＫＯＨ（２００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）のメタノール（１ｍｌ）溶液を、５，１０−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（３４ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５，１０−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１５，２０−ジヘキシル−ポルフィリン（２６ｍｇ、７９％）を得た。

非対称置換シスジヒドロキシクロリンの合成

（３．１５，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、ジクロロメタン／ピリジン３０％（４ｍｌ）を溶媒とする四酸化オスミウム（４０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）溶液を、ジクロロメタン／ピリジン３０％（９ｍｌ）を溶媒とする５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（９０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。３時間攪拌した後、水／メタノール１：１（１５ｍｌ）を溶媒とする亜硫酸水素ナトリウム飽和溶液を加え、反応混合物を１８時間攪拌した。セライト（登録商標）を用いて反応混合物をろ過し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９５：５を溶離剤とするフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。さらにジクロロメタン／メタノールを溶媒として再結晶した。カラムの第一画分は出発物質（２０ｍｇ、２２％）を含み、第二画分は表題化合物である５，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（５２ｍｇ、５５％）を含んでいた。

（３．２５，１０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン、５，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，１５−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン、５，１０−ジヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１７，１８−クロリンの合成）
代表的な実験において、ジクロロメタン／ピリジン３０％（１０ｍｌ）を溶媒とする四酸化オスミウム（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）溶液を、ジクロロメタン／ピリジン３０％（３５ｍｌ）を溶媒とする５，１５−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（２２６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。２０時間攪拌した後、水／メタノール１：１（４０ｍｌ）を溶媒とする亜硫酸水素ナトリウム飽和溶液を加え、反応混合物を１８時間攪拌した。セライト（登録商標）を用いて反応混合物をろ過し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９０：１０を溶離剤とするフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。さらにジクロロメタン／メタノールを溶媒として再結晶した。カラムの第一画分は出発物質（３８ｍｇ、１８％）含み、第二画分は表題化合物である５，１０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（６０ｍｇ、２５％）を含み、第三画分は表題化合物である５，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，１５−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（７４ｍｇ、３１％）を含み、第四画分は表題化合物である５，１０−ジヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−１５，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１７，１８−クロリン（２２ｍｇ、９％）を含んでいた。

（３．３７，８−ジヒドロキシ−５，１５−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，２０−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、ジクロロメタン／ピリジン３０％（４ｍｌ）を溶媒とする四酸化オスミウム（３６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）溶液を、ジクロロメタン／ピリジン３０％（６ｍｌ）を溶媒とする５，１５−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリン（８０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。５時間攪拌した後、水／メタノール１：１（１５ｍｌ）を溶媒とする亜硫酸水素ナトリウム飽和溶液を加え、反応混合物を１８時間攪拌した。セライト（登録商標）を用いて反応混合物をろ過し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９０：１０を溶離剤とするフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。さらにジクロロメタン／水メタノールを溶媒として再結晶した。カラムの第一画分は出発物質（３０ｍｇ、３９％）を含み、第二画分は表題化合物である７，８−ジヒドロキシ−５，１５−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，２０−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリン（３５ｍｇ、４４％）を含んでいた。

（３．４１７，１８−ジヒドロキシ−５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−１７，１８−クロリン、７，８−ジヒドロキシ−５，２０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，１５−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリン、７，８−ジヒドロキシ−５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、ジクロロメタン／ピリジン３０％（８ｍｌ）を溶媒とする四酸化オスミウム（７６ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）溶液を、ジクロロメタン／ピリジン３０％（１０ｍｌ）を溶媒とする５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−ポルフィリン（１８５ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。５時間攪拌した後、水／メタノール１：１（２０ｍｌ）を溶媒とする亜硫酸水素ナトリウム飽和溶液を加え、反応混合物を１８時間攪拌した。セライト（登録商標）を用いて反応混合物をろ過し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９０：１０、４０：１０、ジクロロメタン／メタノール９５：５を溶離剤とする複数回のフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。さらにジクロロメタン／水メタノールを溶媒として再結晶した。カラムの第一画分は出発物質（１９ｍｇ、１０％）を含み、第二画分は表題化合物である１７，１８−ジヒドロキシ−５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−１７，１８−クロリン（４９ｍｇ、２５％）を含み、第三画分は表題化合物である７，８−ジヒドロキシ−５，２０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１０，１５−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリン（４７ｍｇ、２４％）を含み、第四画分は表題化合物である７，８−ジヒドロキシ−５，１０−ビス−（３−ヒドロキシフェニル）−１５，２０−ビス−（トリデシル）−７，８−クロリン（２５ｍｇ、１３％）を含んでいた。

（３．５５，１０，１５−トリヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン、５，１０，１５−トリヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１７，１８−クロリンの合成）
代表的な実験において、ジクロロメタン／ピリジン３０％（１０ｍｌ）を溶媒とする四酸化オスミウム（１００ｍｇ、０．３９ｍｍｏｌ）溶液を、ジクロロメタン／ピリジン３０％（４５ｍｌ）を溶媒とする５，１０，１５−トリヘキシル−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−ポルフィリン（２１２ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。１３日間攪拌した後、水／メタノール１：１（４０ｍｌ）を溶媒とする亜硫酸水素ナトリウム飽和溶液を加え、反応混合物を１８時間攪拌した。セライト（登録商標）を用いて反応混合物をろ過し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／酢酸エチル９５：５を溶離剤とする複数回のフラッシュクロマトグラフィーによって残渣を精製した。さらにジクロロメタン／水メタノールを溶媒として再結晶した。カラムの第一画分は出発物質（１０３ｍｇ、４９％）を含み、第二画分は表題化合物である５，１０，１５−トリヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（４８ｍｇ、２２％）を含み、第三画分は表題化合物である５，１０，１５−トリヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１７，１８−クロリン（３４ｍｇ、１５％）を含んでいた。

非対称カルボキシ置換クロリンの合成

（４．１５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、メタノール（１ｍｌ）を溶媒とするＫＯＨ（１００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）溶液を、ＴＨＦ（３ｍｌ）を溶媒とする５，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，２０−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（２０ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（１８ｍｇ、９２％）を得た。

（４．２５，２０−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、メタノール（１ｍｌ）を溶媒とするＫＯＨ（２００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）溶液を、ＴＨＦ（３ｍｌ）を溶媒とする５，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−１０，１５−ビス−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（３５ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５，２０−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（３１ｍｇ、９１％）を得た。

（４．３５−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５，２０−トリヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−１７，１８−クロリンの合成）
代表的な実験において、メタノール（０．５ｍｌ）を溶媒とするＫＯＨ（１００ｍｇ、１．８ｍｍｏｌ）溶液を、ＴＨＦ（３ｍｌ）を溶媒とする５，１０，１５−トリヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−７，８−クロリン（１２ｍｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５，２０−トリヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−１７，１８−クロリン（１０ｍｇ、８７％）を得た。

（４．４５−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５，２０−トリヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンの合成）
代表的な実験において、メタノール（１ｍｌ）を溶媒とするＫＯＨ（２００ｍｇ、３．６ｍｍｏｌ）溶液を、ＴＨＦ（３ｍｌ）を溶媒とする５，１０，１５−トリヘキシル−１７，１８−ジヒドロキシ−２０−（４−メトキシカルボニルフェニル）−１７，１８−クロリン（２５ｍｇ、０．０３４ｍｍｏｌ）溶液に攪拌しながら加えた。反応混合物を２日間攪拌した。水（５０ｍｌ）と塩酸を加えてｐＨが４〜６になるように調製した。水相をジクロロメタン（２×１００ｍｌ）で抽出し、有機相を分離し、中性となるまで水洗し、硫酸ナトリウムを加えて乾燥させた。溶媒を留去し、ジクロロメタン／水メタノールを溶媒とした再結晶を行って表題化合物である５−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５，２０−トリヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリン（２２ｍｇ、９０％）を得た。

含ポルフィリン炭化水素化合物の合成

（５５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（３−β−Ｄ−アセトグルコシルフェニル）−ポルフィリン、５，１０−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（３−β−Ｄ−アセトグルコシルフェニル）−ポルフィリンの合成）
代表的な実験において、マグネチックスターラーとアルゴンガスの注入口を備えた三口フラスコに乾燥ジクロロメタン（５２８ｍｌ）を加えた。ピロール（５２８μｌ、７．６２ｍｍｏｌ）、ヘプタナール（５６０μｌ、３．９６ｍｍｏｌ）、テトラアセチル−β−Ｄ−グルコピラノシロキシ−ベンズアルデヒド（６００ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）を加えた後、フラスコに周囲の光からの遮断を施し、ＴＦＡ（４０８μｌ、５．２８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１８時間反応混合物を攪拌した。その後、乾燥ジクロロメタン（３０ｍｌ）にけん濁させたＤＤＱ（８９８ｍｇ、３．９６ｍｍｏｌ）を加えた。さらに１時間攪拌した後、トリエチルアミン（１ｍｌ）を加えた。重合副生成物を除去するため、反応混合物をシリカゲルでろ過した。溶媒を留去し、ヘキサン／酢酸エチル６０：４０およびジクロロメタン／酢酸エチル９０：１０を溶離剤として複数回のフラッシュクロマトグラフィーによって精製を行った。さらにジクロロメタン／メタノールを溶媒とする再結晶を行った。カラムの第一画分は５，１０，１５，２０−テトラヘキシルポルフィリン（５１ｍｇ、８％）を含み、第二画分は５，１０，１５−トリヘキシル−２０−ビス−（３−β−Ｄ−アセトグルコシルフェニル）−ポルフィリン（１４５ｍｇ、１１％）を含み、第三画分は表題化合物である５，１５−ジヘキシル−１０，２０−ビス−（３−β−Ｄ−アセトグルコシルフェニル）−ポルフィリン（３３ｍｇ、４％）を含み、第四画分は表題化合物である５，１０−ジヘキシル−１５，２０−ビス−（３−β−Ｄ−アセトグルコシルフェニル）−ポルフィリン（５７ｍｇ、７％）を含んでいた。

選択した化合物について行ったＨＴ２９細胞株を用いた細胞試験

光線力学活性を、ヒト結腸腺癌細胞株ＨＴ２９を用いて決定した。ＨＴ２９細胞株の培養は、加熱不活性化処理済ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）１０％、ペニシリン（１００００ＩＵ）１％、ストレプトマイシン（１００００μｇ／ｍｌ、ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）を含有するＤＭＥＭ（ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）培地中で行った。細胞を加湿された培養器（空気中５％ＣＯ_２、３７℃）中で単層状態となるよう維持した。

光増感剤のストック溶液（２ｍＭ）をＤＭＳＯ中で調製し、暗所で４℃に保持した。さらなる希釈を、フェノールレッドを含まずＦＣＳ１０％を含むＲＰＭＩ１６４０培地で行い、光増感剤の濃度がそれぞれ２μＭと１０μＭになるよう調製した。

マイクロプレートに２・１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍｌを播いた（２・１０^５ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌ）。ＦＣＳ１０％と２μＭあるいは１０μＭの光増感剤を含む新たな培地（フェノールレッド不含ＲＰＭＩ培地）で細胞を光照射前に２４時間培養した。光増感化前に細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳを含むフェノールレッド不含ＲＰＭＩ培地で培養し、その後室温で６５２ｎｍのダイオードレーザー光（ＣｅｒａｌａｓＰＤＴ６５２、ｂｉｏｌｉｔｅｃＡＧ）を１００ｍＷ／ｃｍ^２（５０Ｊ／ｃｍ^２）の固定フルエンス率で照射した。照射後、細胞を加湿された培養器（空気中５％ＣＯ_２、３７℃）中で細胞生死判別試験まで２４時間培養した。

細胞生死判別試験はＸＴＴアッセイによって行った。５００ｍｇのＸＴＴ（３’−［（フェニルアミノカルボニル）−３，４−テトラゾリウム］−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ＡｐｐｌｉｃｈｅｍＧＭＢＨ）を５００ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液（Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋を含まない）に溶解し、無菌ろ過した。溶液は使用まで暗所に−２０℃で保存した。ＸＴＴの活性化剤としてＰＭＳ（Ｎメチルジベンゾピラジンメチル硫酸、ＡｐｐｌｉｃｈｅｍＧＭＢＨ）を含む無菌溶液が必要であった。１ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液に０．３８３ｍｇのＰＭＳを溶解した。溶液は凍結保存する必要があり、光に曝露させてはならない。ＸＴＴ試薬溶液を３７℃の水槽で溶解し、活性化溶液ＰＭＳを使用直前に加えた。１つのマイクロプレート（９６ウェル）に十分な反応溶液を調達するため、５ｍのＸＴＴ試薬に対して０．１ｍｌの活性化溶液（ＰＭＳ）を加えた。マイクロプレート中の培地は、１０％ＦＣＳ（１００μｌ）を含む新たなフェノールレッド不含ＲＰＭＩ培地に交換し、ウェルあたり５０μｌのＸＴＴ反応溶液を添加した。マイクロプレートを３７℃、５％ＣＯ_２でオレンジ色の色素が生成するまで２〜３時間培養した。色素をウェル内で均一にするためにマイクロプレートを穏和に攪拌した。

分光光度計（Ｂｉｏ−ＫｉｎｅｔｉｃｓＲｅａｄｅｒＥＬ３１２ｅ；Ｂｉｏ−ＴｅｋＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＩｎｃ．）を用いてサンプルの吸光度を４９０ｎｍの波長で測定した。対照吸光度を測定するため（特徴のない指示値を測定するため）、６３０〜６９０ｎｍの波長を用いた。

例６．１〜６．３は、本明細書中で述べた置換基のパターンを有する光増感剤の光線力学活性を例示している（ＤＴは暗毒性を、レーザーは光毒性を意味する）。これら３つの光増感剤は、Ａ_２Ｂ_２−置換パターンのメソ置換基を有し、それらは２つの極性置換基と２つの非極性置換基との組み合わせである。特に５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンは、ＨＴ２９細胞株に対して非常に強い光線力学活性を有し、細胞毒物に対する耐性が非常に高いことが知られており、ＰＤＴ活性も高い。

例６．４〜６．６は、本明細書中で述べた置換基のパターンを有していないクロリン光増感剤が細胞実験において光線力学活性の潜在能力を有していないことを示すために含められた。ここで例示されている３つの光増感剤はＡ_３Ｂ−置換パターンのメソ置換基を有する。３つのヘキシル鎖と１つの安息香酸エステル基がメソ位にある例６．６では、照射によって（光増感剤の濃度は１０μＭ、下記参照）実際細胞の生存能力が増している（！）。

選択した化合物について行った、ウサギ滑膜細胞およびマウスマクロファージ細胞株、ＨＩＧ８２、Ｊ７７４Ａ．１を用いた細胞試験

マウス単球−マクロファージ細胞株Ｊ７７４Ａ．１およびウサギ滑膜細胞株ＨＩＧ８２を加熱不活性化処理済ウシ胎仔血清（ＦＣＳ、ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）１０％、ペニシリン（１００００ＩＵ）１％、ストレプトマイシン（１００００μｇ／ｍｌ、ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）を含有するＤＭＥＭ（ｃｃ−ｐｒｏＧＭＢＨ）培地中で培養した。細胞を加湿された培養器（空気中５％ＣＯ_２、３７℃）中で単層状態となるよう維持した。

細胞生死判別試験はＸＴＴアッセイによって行った。５００ｍｇのＸＴＴ（３’−［（フェニルアミノカルボニル）−３，４−テトラゾリウム］−ビス（４−メトキシ−６−ニトロ）ベンゼンスルホン酸ナトリウム、ＡｐｐｌｉｃｈｅｍＧＭＢＨ）を５００ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液（Ｃａ^２＋、Ｍｇ^２＋を含まない）に溶解し、無菌ろ過した。溶液は使用まで暗所に−２０℃で保存した。ＸＴＴの活性化剤としてＰＭＳ（Ｎメチルジベンゾピラジンメチル硫酸、ＡｐｐｌｉｃｈｅｍＧＭＢＨ）を含む無菌溶液が必要であった。１ｍｌのＰＢＳ緩衝溶液に０．３８３ｍｇのＰＭＳを溶解した。溶液は凍結保存する必要があり、光に曝露させてはならない。ＸＴＴ試薬溶液を３７℃の水槽で溶解し、活性化溶液ＰＭＳを使用直前に加えた。１つのマイクロプレート（９６ウェル）に十分な反応溶液を調達するため、５ｍのＸＴＴ試薬に対して０．１ｍｌの活性化溶液（ＰＭＳ）を加えた。マイクロプレート中の培地は、１０％ＦＣＳ（１００μｌ）を含む新たなフェノールレッド不含ＲＰＭＩ培地に交換し、ウェルあたり５０μｌのＸＴＴ反応溶液を添加した。マイクロプレートを３７℃、５％ＣＯ_２でオレンジ色の色素が生成するまで２〜３時間培養した。式ををウェル内で均一にするためにマイクロプレートを穏和に攪拌した。

例７．１〜７．４は、本明細書中で述べた置換基のパターンを有する光増感剤の、滑膜細胞とマクロファージに対する光線力学活性を例示している。これらの細胞は関節炎やその他の炎症性疾患の治療と特に関連が深い。これら４つの光増感剤は、Ａ_２Ｂ_２−置換パターンのメソ置換基を有し、それらは２つの極性置換基と２つの非極性置換基との組み合わせである。特に５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンと５，２０−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，１５−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンは、これら２つの細胞株に対して非常に強い光線力学活性を有することが示された。

例７．５もまた、本明細書中で述べた置換基のパターンを有していないクロリン光増感剤が光線力学活性の潜在能力を有していないことを示すために含められた。

５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンのリポソーム製剤の細胞試験

光増感剤５，１５−ビス−（４−カルボキシフェニル）−１０，２０−ジヘキシル−７，８−ジヒドロキシ−７，８−クロリンのリポソーム製剤を、Ｖ．Ａｌｂｒｅｃｈｔ、Ａ．Ｆａｈｒらによる米国特許７３５４５９９Ｂ２に記載の方法に類似の方法によって調製した。

リポソーム製剤の試験は、本発明の光増感剤は例えばＰＤＴや関節炎の治療のためにリポソーム製剤として製剤した際に光線力学活性を失わないことを例示する。

リポソーム製剤は、例えば光増感剤の吸収、拡散の薬物動態に影響を与えるために使用でき、生体利用効率を上昇させる。

実施例を参照しながら本発明の好適な実施形態について記述したが、本発明が特定の実施形態によって限定されるものではないことが理解されるべきである。後述の特許請求の範囲において定義される発明の範疇から外れることなく、当業者による多様な変更や変形が行われて良い。

Claims

下記化１に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化２に示す構造１〜４から選択される構造を有し、
下記化２の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群からそれぞれ選択され、
下記化２の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ_３、−ＮＨ_２、−ＣＯＯＸ、−ＮＨＸ、−ＯＸ、−ＮＨ−Ｙ−ＣＯＯＨ及び−ＣＯ−Ｙ−ＮＨ_２からなる群からそれぞれ選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基であり、
前記Ｘは分子式（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_３、ｎ＝１〜３０で表されるポリエチレングリコールまたは前記ポリエチレングリコールの炭化水素部分であり、
前記Ｙはペプチドまたは１〜３０量体オリゴペプチドである、
ことを特徴とするテトラピロール化合物。
下記化３に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化４に示す構造１〜４から選択される構造を有し、
下記化４の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群から選択され、
下記化４の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ及び−ＮＨ_２からなる群から選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基である、
ことを特徴とするテトラピロール化合物。
下記化５に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化６に示す構造１〜４から選択される構造を有し、
下記化６の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群からそれぞれ選択され、
下記化６の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ_３、−ＮＨ_２、−ＣＯＯＸ、−ＮＨＸ、−ＯＸ、−ＮＨ−Ｙ−ＣＯＯＨ及び−ＣＯ−Ｙ−ＮＨ_２からなる群からそれぞれ選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基であり、
前記Ｘは分子式（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_３、ｎ＝１〜３０で表されるポリエチレングリコールまたは前記ポリエチレングリコールの炭化水素部分であり、
前記Ｙはペプチドまたは１〜３０量体オリゴペプチドである、
ことを特徴とするクロリン。
下記化７に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化８に示す構造１〜４から選択される構造を有し、
下記化８の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群から選択され、
下記化８の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ及び−ＮＨ_２からなる群から選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基である、
ことを特徴とするクロリン。
下記化９に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化１０に示す構造を有し、
下記化１０の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群からそれぞれ選択され、
下記化１０の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＣＨ_３、−ＮＨ_２、−ＣＯＯＸ、−ＮＨＸ、−ＯＸ、−ＮＨ−Ｙ−ＣＯＯＨ及び−ＣＯ−Ｙ−ＮＨ_２からなる群からそれぞれ選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基であり、
前記Ｘは分子式（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎＣＨ_３、ｎ＝１〜３０で表されるポリエチレングリコールまたは前記ポリエチレングリコールの炭化水素部分であり、
前記Ｙはペプチドまたは１〜３０量体オリゴペプチドである、
ことを特徴とするクロリン。
下記化１１に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化１２に示す構造を有し、
下記化１２の置換基Ｒ^１は炭素数が４〜１５で置換アルキル基、非置換アルキル基及びフルオロアルキル基からなる群から選択され、
下記化１２の置換基Ｒ^２は−ＯＨ、−ＣＯＯＨ及び−ＮＨ_２からなる群から選択され、
前記置換基Ｒ^２はそれぞれメタ位あるいはパラ位の置換基である、
ことを特徴とするクロリン。
下記化１３に示す構造群から選択される部分構造Ｂを有し、
下記化１４に示す構造を有する、
ことを特徴とするクロリン。
下記化１５に示す構造を有する、
ことを特徴とする請求項７に記載のクロリンまたは製剤に適合した前記クロリンの誘導体。
下記化１６に示す構造を有する、
ことを特徴とする請求項７に記載のクロリンまたは製剤に適合した前記クロリンの誘導体。
下記化１７に示す構造を有する、ことを特徴とする請求項７に記載のクロリンまたは製剤に適合した前記クロリンの誘導体。
光線力学療法に使用される、ことを特徴とする請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体。
光線力学療法のための医薬組成物の調製のための、請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体の使用方法。
癌、皮膚疾患、ウイルス性または細菌性感染症、眼疾患または泌尿器疾患の光線力学療法に使用される、
ことを特徴とする請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体。
関節炎または類似の炎症性疾患の光線力学療法に用いられる、
ことを特徴とする請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体。
関節炎または類似の炎症性疾患の診断に用いられる、
ことを特徴とする請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体。
請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体を活性物質として含有する、
ことを特徴とする医薬組成物。
請求項１乃至１０に記載の化合物または製剤に適合した前記化合物の誘導体が標的物質と結合している、
ことを特徴とする医薬組成物。
前記標的物質が抗体または抗体の断片である、
ことを特徴とする請求項１７に記載の医薬組成物。
前記標的物質がペプチドである、
ことを特徴とする請求項１７に記載の医薬組成物。
前記医薬組成物がリポソーム製剤である、
ことを特徴とする請求項１６に記載の医薬組成物
前記医薬組成物がリポソーム製剤である、
ことを特徴とする請求項１７に記載の医薬組成物
請求項１１乃至１５に記載の化合物を含む医薬組成物
リポソーム製剤であること、
を特徴とする請求項１３に記載の化合物を含む医薬組成物。
リポソーム製剤であること、
を特徴とする請求項１４または請求項１５に記載の化合物を含む医薬組成物。