ES2932287T3 - Método y aplicación novedosos de porfirinas y clorinas meso-sustituidas asimétricamente para TFD - Google Patents

Abstract

Compuestos biológicamente activos que pueden usarse como fotosensibilizadores para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas, en particular para TFD de cáncer, infecciones y otras enfermedades hiperproliferativas, diagnóstico por fluorescencia y tratamiento TFD de una indicación no tumoral como artritis, enfermedades inflamatorias, infecciones virales o bacterianas, se proporcionan trastornos dermatológicos, oftalmológicos o urológicos así como métodos para obtenerlos en calidad farmacéutica. Una realización consiste en un método para sintetizar una porfirina con una disposición definida de meso-sustituyentes y luego convertir este sistema de porfirina en un sistema de clorina por dihidroxilación o reducción, y si se forma más de un isómero, separarlos por cromatografía en normal o inverso. fase sílice. En otra realización, los sustituyentes de la porfirina se seleccionan para dirigir la reducción o dihidroxilación a la clorina de manera que se forme selectivamente un cierto isómero. Otra realización es proporcionar compuestos anfifílicos con una mayor afinidad por la membrana y una mayor eficacia de la TFD. En otra realización, se proporciona un método para escindir reductivamente el éster de osmato (VI) evitando el uso de H2S gaseoso. En otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorece un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposomal para ser inyectada evitando efectos indeseables como problemas de solubilidad o farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. Otra realización es proporcionar compuestos anfifílicos con una mayor afinidad por la membrana y una mayor eficacia de la TFD. En otra realización, se proporciona un método para escindir reductivamente el éster de osmato (VI) evitando el uso de H2S gaseoso. En otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorece un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposomal para ser inyectada evitando efectos indeseables como problemas de solubilidad o farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. Otra realización es proporcionar compuestos anfifílicos con una mayor afinidad por la membrana y una mayor eficacia de la TFD. En otra realización, se proporciona un método para escindir reductivamente el éster de osmato (VI) evitando el uso de H2S gaseoso. En otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorece un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposomal para ser inyectada evitando efectos indeseables como problemas de solubilidad o farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. En otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorece un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposomal para ser inyectada evitando efectos indeseables como problemas de solubilidad o farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. En otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorece un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposomal para ser inyectada evitando efectos indeseables como problemas de solubilidad o farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Método y aplicación novedosos de porfirinas y clorinas meso-sustituidas asimétricamente para TFD Antecedentes de la invención

La presente patente reivindica el beneficio de la Solicitud Provisional de EE.UU. N.° de Serie 61/098.026 presentada el 18 de septiembre de 2008.

1. Campo de la invención

La invención se refiere a la química de compuestos biológicamente activos. Más particularmente, a derivados de clorina sustituidos específicamente que pueden utilizarse como fotosensibilizadores para una amplia gama de tratamientos de irradiación de luz tales como terapia fotodinámica del cáncer, infecciones y otras enfermedades.

2. Declaración de divulgación de la invención

La terapia fotodinámica (TFD) es una de las nuevas técnicas más prometedoras que se están explorando actualmente para su uso en una diversidad de aplicaciones médicas (Photodynamic therapy, basic principles and clinical applications. Eds. B. W. Henderson, Th. J. Dougherty, Marcel Dekker, 1992, Nueva York), y en particular es un tratamiento muy reconocido para la destrucción de tumores (Photodynamic tumor therapy. 2nd and 3rd generation photosensitizers. Ed. J. G. Moser, Harwood Academic Publishers, 1998, Amsterdam). La terapia fotodinámica usa luz y un fotosensibilizador (un colorante) para conseguir su efecto médico deseado. Se ha evaluado un gran número de colorantes de origen natural y sintéticos como posibles fotosensibilizadores para la terapia fotodinámica. Quizás, la clase de fotosensibilizadores más ampliamente estudiada son los compuestos macrocíclicos tetrapirrólicos. Entre ellos, se han sometido a ensayo especialmente las porfirinas y las clorinas para determinar su eficacia en la TFD. Las porfirinas son compuestos macrocíclicos con puentes de un átomo de carbono que unen pirroles para formar una estructura de anillo de tetrapirrol característica. Existen muchas clases diferentes de derivados de porfirina, incluyendo los que contienen unidades de dihidropirrol. Las clorinas, a las que se hace referencia en la presente invención, son derivados de porfirina que contienen una unidad de dihidropirrol, mientras que las bacterioclorinas se caracterizan por dos unidades de dihidropirrol (en general, en las clorinas, está ausente un doble enlace del sistema aromático en posición ¡5- y en las bacterioclorinas están ausentes dos dobles enlaces opuestos en comparación con la porfirina). Como ejemplos de compuestos macrocíclicos tetrapirrólicos utilizados como fotosensibilizadores, la patente n.° US-4.656.186 de Bommer y col. describe la mono, di o poliamida fluorescente de un ácido aminocarboxílico y tetrapirrol que contiene al menos tres grupos carboxi, la patente n.° US-7.022.843B1 de MacAlpine y col. proporciona ¡5, 5-dihidroxi clorina meso-sustituida como fotosensibilizador, y la patente n.° US-7.166.719B2 de Pandey y col. describe compuestos de tetrapirrol que contienen un sustituyente fluorado donde el compuesto es una clorina o una bacterioclorina para aplicaciones terapéuticas y de diagnóstico por TFD.

Hay varias propiedades que debe cumplir un fotosensibilizador eficaz. Entre ellas, una característica deseable para destruir eficientemente los tejidos diana profundos es una absorción fuerte a longitud de onda larga. Muchos fotosensibilizadores actuales no son lo suficientemente eficientes ya que tienen una absorción baja en la región roja del espectro. Las clorinas tienen la ventaja de que poseen una absorción intensa en la región roja e infrarroja cercana del espectro electromagnético. Como la luz de longitud de onda más larga penetra más profundamente en el tejido, es posible tratar, por ejemplo, tumores más expandidos, si la TFD se emplea para la terapia tumoral. Las clorinas que poseen potencial para TFD pueden derivar de fuentes naturales o de síntesis total.

Si las clorinas derivan de compuestos naturales, usualmente se obtienen derivatizando clorofilas o bacterioclorofilas, como, por ejemplo, los fotosensibilizadores derivados de clorofila a de plantas fotosintéticas y algas descritos en la patente n.° US-5.330.741. Debido a la sensibilidad de los compuestos naturales, frecuentemente esto es difícil y requiere grandes recursos. Así, la síntesis de clorinas mediante síntesis total es una alternativa atractiva. Se conocen en la técnica métodos para preparar clorinas y bacterioclorinas mediante síntesis total. Generalmente, estos compuestos se preparan sintetizando en primer lugar la porfirina y a continuación convirtiendo el sistema de porfirina en un sistema de clorina o bacterioclorina. Esta etapa puede realizarse, por ejemplo, mediante la reducción con di-imina generada in situ o mediante c/s-dihidroxilación con tetraóxido de osmio; también se conocen reacciones de múltiples etapas que conducen a trans-dihidroxilación (patente EP 00337601B1; solicitud de patente WO 09613504A1, solicitud de patente WO 00061584A1; C. Bruckner, D. Dolphin, 2,3-vic-Dihydroxy-mesotetraphenylchlorins from the Osmium Tetroxide Oxidation of meso-Tetraphenylporphyrin, Tetrahedron Lett. 1995, 36, 3295-3298; C. Bruckner, D. Dolphin, 5, 5-Dihydroxylation of meso-Tetraphenylchlorins, Tetrahedron Lett. 1995, 36, 9425-9428; H. W. Daniell, S. C. Williams, H. A. Jenkins, C. Brückner, Oxidation of meso-tetra-pheny 1-2,3-di hydroxy chlorin: simplified synthesis of 5, 5-dioxochlorins, Tetrahedron Lett. 2003, 44, 4045-4049; F. Rancan, A. Wiehe, M. Nobel, M. O. Senge, S. Al Omari, F. Bohm, M. John, B. Rbder, Influence of substitutions on asymmetric dihydroxychlorins with regard to intracellular uptake, sub cellular localization and photosensitization in Jurkat cells, J. Photochem. Photobiol. B: Biology 2005, 78, 17-28; I. Laville, T. Figueiredo, B. Loock, S. Pigaglio, Ph. Maillard, D. S. Grierson, D. Carrez, A. Croisy, J. Blais, Synthesis, Cellular Internalization and Photodynamic Activity of Glucoconjugated Derivatives of Tri and Tetra(meta- hydroxyphenyl)chlorines, Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 1643-1652).

En su mayoría, se han investigado y sometido a ensayo compuestos con cuatro sustituyentes idénticos en las posiciones meso para determinar su eficacia en la TFD. Un ejemplo destacado es la Temoporfina, que es el compuesto activo del medicamento Foscan®, que se utiliza satisfactoriamente en Europa como medicamento para el tratamiento por TFD del cáncer de cabeza y cuello. Además, todos los ejemplos de la solicitud de patente WO 09613504A1 mencionada anteriormente son compuestos con cuatro sustituyentes meso idénticos. Las pocas publicaciones sobre clorinas tetraquis-meso-sustituidas asimétricamente derivadas de síntesis total que existen son del tipo denominado A³B, es decir, que incorporan 3 sustituyentes meso iguales y uno diferente (I. Laville, T. Figueiredo, B. Loock, S. Pitaglio, Ph. Maillard, D. S. Grierson, D. Carrez, A. Croisy, J. Blais, Synthesis, Cellular Internalization and Photodynamic Activity of Glucoconjugated Derivatives of Tri and Tetra(metohydroxyphenyl)chlorines, Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 1643-1652, F. Rancan, A. Wiehe, M. Nobel, M. O. Senge, S. Al Omari, F. Bohm, M. John, B. Rbder, Influence of substitutions on asymmetric dihydroxychlorins with regard to intracellular uptake, sub cellular localization and photosensitization in Jurkat cells, J. Photochem. Photobiol. B: Biology 2005, 78, 17-28; J. K. Macalpine, R. Boch, D. Dolphin, Evaluation of tetraphenyl-2,3 - dihydroxychlorins as potential photosensitizers, J. Porphyrins Phthalocyanines 2002, 6, 146-155). Una razón para utilizar porfirinas sustituidas simétricamente para convertirlas en clorinas es que en este caso no se forman isómeros. Si no se forman isómeros, los compuestos resultantes se caracterizan y preparan fácilmente, un factor clave para la producción comercial. Si se utilizan porfirinas sustituidas asimétricamente para convertirlas en clorinas, se forman regioisómeros diferentes que requieren una separación posterior (no en el caso de una disposición trans de los sustituyentes, véase la Figura 2). Por lo tanto, las clorinas con una sustitución meso-MB que se encuentran en la técnica frecuentemente están mal caracterizadas o se utilizan como una mezcla isomérica sin separación (por ejemplo, J. K. Macalpine, R. Boch, D. Dolphin, Evaluation of tetraphenyl- 2,3-dihydroxy chi orins as potential photosensitizers, J. Porphyrins Phthalocyanines 2002, 6, 146-155; I. Laville, T. Figueiredo, B. Loock, S. Pigaglio, Ph. Maillard, D. S. Grierson, D. Carrez, A. Croisy, J. Blais, Synthesis, Cellular Internalization and Photodynamic Activity of Glucoconjugated Derivatives of Tri and Tetra(meto-hydroxyphenyl)chlorines, Bioorg. Med. Chem. 2003, 11, 1643­ 1652). Como es difícil purificar la mezcla para eliminar los isómeros que no contribuyen al efecto de TFD o enriquecer la preparación con compuestos activos, sería una ventaja encontrar clorinas tetraquis-meso-sustituidas asimétricamente alternativas caracterizadas y producidas fácilmente con métodos de preparación simples. Especialmente para aprovechar las propiedades particulares de las clorinas sustituidas asimétricamente, ya que podrían aumentar la anfifilia de los compuestos y, por lo tanto, su afinidad por la membrana y la eficacia en la TFD. El documento FR 2 709 491 describe diversas porfirinas para el tratamiento de tumores por TFD, en particular también porfirinas meso-sustituidas en la denominada configuración cis, a saber:

5.10- di-(para-p-D-glucosil-fenil)-15,20-di(undecanil)-porfirina,

5.10- di-(para-p-D-maltosil-fenil)-15,20-di(undecanil)-porfirina y

5.10- di-(para-p-D-glucosil-fenil)-15,20-di(butanil)-porfirina.

No se han publicado ensayos que demuestren la eficiencia de estas porfirinas en la TFD.

Por lo tanto, existe la necesidad de potenciar la eficacia de los compuestos biológicamente activos de la técnica anterior utilizados como fotosensibilizadores para realizar satisfactoriamente una amplia gama de tratamientos de irradiación de luz, tales como la terapia fotodinámica del cáncer, infecciones y otras enfermedades. Además, es necesario proporcionar métodos novedosos de preparación y aplicación de clorinas tetraquis-meso-sustituidas asimétricamente para proporcionar fotosensibilizadores potenciados con respecto a los disponibles hasta la fecha. Por lo tanto, la eficacia de la TFD aumentaría aprovechando las propiedades de las clorinas tetraquis-mesosustituidas asimétricamente, tal como una absorción fuerte a longitud de onda larga de la región roja e infrarroja cercana del espectro electromagnético para una penetración tisular más profunda, una selectividad potenciada para tumores u otros tejidos diana sobre los tejidos circundantes sanos debido a su anfifilia personalizada que aumenta la afinidad por la membrana, y a su comportamiento farmacocinético adaptado dependiendo de la aplicación de TFD particular.

Objetivos y breve resumen de la invención

Un objetivo de la presente invención es proporcionar compuestos biológicamente activos que puedan utilizarse como fotosensibilizadores para una amplia gama de aplicaciones que incluye tratamientos de irradiación de luz tales como terapia fotodinámica del cáncer, infecciones y otras enfermedades.

Un objetivo adicional de la presente invención es utilizar los derivados de clorina químicamente estables para diversas aplicaciones médicas tales como la terapia fotodinámica.

Otro objetivo de la presente invención es proporcionar estructuras de clorina tetraquis-meso-sustituida asimétricamente que puedan utilizarse en la terapia fotodinámica de tumores y otras enfermedades hiperproliferativas, trastornos dermatológicos, infecciones víricas o bacterianas, trastornos oftalmológicos o trastornos urológicos.

Otro objeto más de la presente invención es proporcionar estructuras de clorina tetraquis-meso-sustituida asimétricamente que puedan utilizarse para el diagnóstico de fluorescencia y el tratamiento por TFD de una indicación no tumoral tal como artritis y enfermedades inflamatorias similares.

Se describe un método para preparar y purificar dichas clorinas tetraquis-meso-sustituidas asimétricamente y proporcionar un método para la separación de los isómeros formados.

Un objeto adicional más de la presente invención es proporcionar compuestos altamente anfifílicos que han de utilizarse en el tratamiento por TFD de tumores, trastornos dermatológicos, infecciones víricas o bacterianas, trastornos oftalmológicos o trastornos urológicos.

Se describe un método de preparación que puede dirigir la dihidroxilación o reducción del material de partida de manera que se favorezca la formación de un isómero.

Otro objetivo más es proporcionar formulaciones farmacéuticamente aceptables para los compuestos biológicamente activos de la presente invención tales como formulaciones liposómicas que han de inyectarse evitando efectos no deseables como la precipitación en el sitio de inyección o la farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol.

Dicho brevemente, la presente invención proporciona compuestos biológicamente activos que pueden utilizarse como fotosensibilizadores para aplicaciones de diagnóstico y terapéuticas, en particular para la TFD del cáncer, infecciones y otras enfermedades hiperproliferativas, el diagnóstico por fluorescencia y tratamiento por TFD de una indicación no tumoral tal como artritis, enfermedades inflamatorias, infecciones víricas o bacterianas, trastornos dermatológicos, oftalmológicos o urológicos así como proporcionar métodos para obtenerlos en calidad farmacéutica. Una realización consiste en un método para sintetizar una porfirina con una disposición definida de sustituyentes meso y a continuación convertir este sistema de porfirina en un sistema de clorina mediante dihidroxilación o reducción, y si se forma más de un isómero, separarlos mediante cromatografía en sílice de fase normal o inversa. En otra realización, los sustituyentes de la porfirina se seleccionan para dirigir la reducción o dihidroxilación a la clorina de manera que se forme selectivamente un determinado isómero. Otra realización es proporcionar compuestos anfifílicos con una mayor afinidad por la membrana y una mayor eficacia de la TFD. En otra realización, se proporciona un método para escindir de forma reductora el éster de osmiato (VI) evitando el uso de H²S gaseoso. En otra realización, se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorezca un isómero. Otra realización consiste en formular el isómero deseado en una formulación liposómica que ha de inyectarse evitando efectos no deseables como problemas de solubilidad en la inyección o la farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol

Los anteriores y otros objetivos, características y ventajas de la presente invención resultarán evidentes a partir de la siguiente descripción leída junto con los dibujos adjuntos.

Breve descripción de las figuras

La Figura 1 muestra ejemplos de estructuras de clorina tetraquis-meso-sustituida asimétricamente que combinan dos sustituyentes meso no polares (alquilo) y dos polares especialmente adecuados para aplicaciones médicas. La Figura 2 representa una realización que muestra los derivados de porfirina específicamente sustituidos, particularmente los derivados de clorina de los tipos 1, 2, 3 o 4.

La Figura 3 muestra una realización que representa la disposición de un sistema de porfirina para convertirlo en un sistema de clorina, donde el sistema de porfirina es del tipo A²B² ya sea con una disposición “ cis” o “ trans” de los sustituyentes meso y A es el sustituyente no polar (alquilo) y B, el polar.

Descripción detallada de las realizaciones preferidas

La presente invención proporciona compuestos biológicamente activos que pueden utilizarse como fotosensibilizadores para una amplia gama de tratamientos de irradiación de luz tales como terapia fotodinámica del cáncer, enfermedades hiperproliferativas, trastornos dermatológicos, enfermedades infecciosas víricas o bacterianas, trastornos oftalmológicos y/o trastornos urológicos. Los fotosensibilizadores alternativos proporcionados por la presente invención tienen la ventaja de que se producen y caracterizan fácilmente. Además, ya que la presente invención proporciona métodos para adaptar compuestos anfifílicos a las aplicaciones de TFD deseadas, aumenta la selectividad del tejido diana y, por lo tanto, la eficacia de la TFD. La presente invención potencia la eficacia de los compuestos biológicamente activos de la técnica anterior que ofrecen una penetración tisular más profunda debido a su absorción fuerte a longitud de onda larga de la región roja e infrarroja cercana del espectro electromagnético, una selectividad potenciada para los tejidos diana sobre los tejidos circundantes sanos debido a su anfifilia adaptada y un comportamiento farmacocinético adaptado dependiendo de la aplicación particular de TFD.

Los compuestos biológicamente activos de la presente invención que pueden utilizarse para diferentes indicaciones médicas, en particular la TFD, son estructuras de clorina tetraquis-meso-sustituida asimétricamente. De hecho, se ha descubierto inesperadamente que las clorinas que combinan dos sustituyentes meso no polares (alquil) y dos polares en su estructura, como se ilustra en la Figura 1, son especialmente adecuadas para una aplicación médica de este tipo. De forma adicional, la invención novedosa amplía sus aplicaciones, ya que puede utilizarse para el diagnóstico por fluorescencia y el tratamiento por TFD de una indicación no tumoral, tal como la artritis y enfermedades inflamatorias similares.

Para obtener los fotosensibilizadores novedosos, la presente descripción utiliza los derivados de porfirina y clorina químicamente estables según las fórmulas 1, 2, 3, y 4 que se muestran en la Figura 2 y proporciona métodos de preparación y separación de los isómeros formados para obtener clorinas sustituidas con meso-alquilo, más particularmente las estructuras de clorina tetraquis-meso-sustituida asimétricamente que pueden utilizarse en la terapia fotodinámica. Con respecto a clorinas sustituidas con meso-alquilo parcialmente, de hecho, solo hay un ejemplo en la literatura (F. Rancan, A. Wiehe, M. Nobel, M. O. Senge, S. Al Omari, F. Bohm, M. John, B. Rbder, Influence of substitutions on asymmetric dihydroxychlorins with regard to intracellular uptake, sub cellular localization and photosensitization in Jurkat cells, J Photochem. Photobiol. B: Biology 2005, 78, 17-28; el compuesto es también del patrón de sustitución meso-A^B). Por otro lado, especialmente dichas clorinas sustituidas asimétricamente, que son regioisoméricamente puras (aunque en la mayoría de los casos todavía hay mezclas enantioméricas), podrían ser de gran interés como fotosensibilizadores para la TFD, ya que dicha sustitución asimétrica podría aumentar la anfifilia de los compuestos y, por lo tanto, su afinidad por la membrana y la eficacia en la TFD. Además, se ha descubierto sorprendentemente durante las investigaciones relacionadas con la presente invención, que a veces hay diferencias pronunciadas en la eficacia de la TFD entre diferentes isómeros de clorina.

Se describe un método para sintetizar una porfirina con una disposición definida de sustituyentes meso [una porfirina del tipo A²B² , ya sea con una disposición 'cis' o una 'trans' de los sustituyentes meso, como se ilustra en la Figura 3, donde, por ejemplo, A es el sustituyente no polar (alquilo) y B, el polar] y a continuación convertir este sistema de porfirina en un sistema de clorina mediante dihidroxilación o reducción (como, por ejemplo, se describe en: M. Schroeder, Osmium Tetraoxide Cis Dihydroxylation of Unsaturated Substrates, Chem. Rev. 1980, 80, 187-213; R. Bonnett, R. D. White, U.-J. Winfield, M. C. Berenbaum, Hydroporphyrins of the meso- tetra(hydroxyphenyl)porphyrin series as tumor photosensitizers, Biochem. J. 1989, 261, 277-280). En una última etapa, los isómeros (si se forma más de un isómero) se separan mediante cromatografía en sílice de fase normal o inversa.

Otra realización consiste en las etapas de sintetizar una porfirina con una disposición definida de sustituyentes, convertirla en la clorina, separar los isómeros como se ha descrito anteriormente y a continuación formular el isómero deseado en una formulación liposómica.

En otra realización más, se sintetiza una porfirina del tipo 'trans'-A²B2, se convierte en la dihidroxiclorina y se purifica mediante cromatografía.

En otra realización más, se sintetiza una porfirina del tipo 'cis'-A²B², se convierte en la dihidroxiclorina y a continuación los isómeros se separan y se purifican mediante cromatografía.

También se ha descubierto que los sustituyentes de la porfirina debido a su influencia electrónica y estérica pueden dirigir la dihidroxilación, favoreciendo de este modo la formación de un isómero. Así, en otra realización más, los sustituyentes de la porfirina se seleccionan para dirigir la reducción o dihidroxilación a la clorina (ejemplos 3.2 y 3.4) de manera que se forme selectivamente un determinado isómero.

En una realización específicamente preferida, se sintetiza una porfirina del tipo 'trans'-A²B² , que tiene cadenas de hexilo como sustituyente A y restos de metoxicarbonil fenilo como sustituyente B. A continuación, esta porfirina se convierte en la dihidroxiclorina y el éster metílico restante se hidroliza para recibir el ácido carboxílico correspondiente.

Son materiales de partida aceptables para la síntesis de las clorinas que son el objeto de la presente invención el pirrol y los aldehídos. Más específicamente, se emplean pirrol y dos aldehídos, un alcanal y un aldehído aromático para la síntesis de las porfirinas sustituidas asimétricamente que son la base de la síntesis de las clorinas correspondientes. El pirrol y los aldehídos se someten a una reacción de condensación. Hace tiempo que se conocen en la técnica métodos adecuados para esta condensación (J. S. Lindsey, I. C. Schreiman, H. C. Hsu, P. C. Kearney y A. M. Marguerettaz, J. Org. Chem. 1987, 52, 827-836). Alternativamente, las porfirinas sustituidas asimétricamente también pueden sintetizarse utilizando di o tripirrometanos y aldehídos, como también se conoce en la técnica (C.-H. Lee, J. S. Lindsey, One-Flask Synthesis of Meso-Substituted Dipyrromethanes and Their Application in the Synthesis of Trans-Substituted Porphyrin Building Blocks, Tetrahedron 1994, 50, 11427-11440). Después de la condensación y purificación de las porfirinas sustituidas asimétricamente deseadas, éstas se convierten en las clorinas. Como solo hay un ejemplo de una clorina tetra-mesosustituida que lleva solo un sustituyente alquilo conocido en la técnica, otra realización proporciona un método para la preparación de clorinas sustituidas con meso-alquilo múltiples veces a través de dihidroxilación. La síntesis de clorinas meso-sustituidas que llevan cadenas de alquilo se ejemplifican con los ejemplos 3.1-3.4. Además, el uso de porfirinas sustituidas con alquilo lipofílicas como sustratos para la dihidroxilación es una característica clave, ya que da acceso a compuestos anfifílicos con una mayor afinidad por la membrana y una mayor eficacia de la TFD. En los ejemplos 1.1 y 1.2 se sintetiza una serie de porfirinas sustituidas asimétricamente con el objetivo de obtener porfirinas que lleven grupos hidrófilos e hidrófobos. La dihidroxilación de porfirinas con tetraóxido de osmio que se conoce en la técnica (véase anteriormente Bruckner, y col.) utiliza H²S gaseoso para escindir reductivamente el éster de osmiato (VI). El uso de H²S gaseoso y tóxico no es favorable para la síntesis de compuestos que en última instancia se utilizarán en preparaciones farmacéuticas a gran escala. Además, el uso de sulfuro de hidrógeno conduce a impurezas, lo que dificulta el tratamiento cromatográfico y la separación de los isómeros de cloro. Por lo tanto, otra realización proporciona un método simple para la escisión reductora del éster de osmiato (VI) que evita el uso de H²S gaseoso. En su lugar, se utiliza una pequeña cantidad de una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol que se añade a la mezcla de reacción. Después de agitar la mezcla durante la noche, la escisión del éster de osmiato en el diol transcurre cuantitativamente (ejemplos 3.1-3.4). Las mezclas de cloro resultantes pueden separarse y purificarse fácilmente mediante cromatografía.

Como el ataque del tetraóxido de osmio o de la diimina puede tener lugar sobre cualquiera de las subunidades pirrólicas, la reacción de las porfirinas sustituidas asimétricamente en el caso de las porfirinas de tipo C/S-A²B² conduce a la formación de 3 regioisómeros, mientras que para el tipo 'trans'-A²B² solo se forma un regioisómero. Por lo tanto, en otra realización se identifican sustituyentes que a través de su influencia estérica y/o electrónica dirigen la dihidroxilación o reducción con diimina de manera que se favorezca un isómero. En el curso de las investigaciones resultó que para las porfirinas de tipo C/s'-A²B² (con A = hexilo), se prefiere la subunidad pirrólica entre los grupos hexilo (ejemplo 3.2 y 3.4) para la dihidroxilación. Este grado de selectividad puede ser provocado por simples efectos estéricos y/o electrónicos. La estructura de los diferentes regioisómeros se determinó inequívocamente mediante espectroscopia 2D-RMN (COSY, HMQC y HMBC). Ya los espectros de RMN de 1H muestran la influencia de la subunidad pirrólica dihidroxilada en los grupos cercanos en las posiciones meso. Curiosamente, como el momento dipolar de las clorinas se ve afectado por la posición del diol, el comportamiento cromatográfico de los compuestos refleja en la mayoría de los casos la estructura de los regioisómeros correspondientes.

El uso de derivados de porfirina y clorina anfifílicos específicamente sustituidos es adecuado para la terapia fotodinámica del cáncer y otras enfermedades e infecciones hiperproliferativas. En otra realización, con el objetivo de obtener dichos compuestos anfifílicos, los grupos éster metílico de algunas porfirinas y dihidroxiclorinas se hidrolizaron en condiciones básicas para proporcionar los ácidos carboxílicos correspondientes (ejemplo 2 y 4). Estos ácidos tienen una mayor solubilidad en disolventes polares, aumentando su potencial como fotosensibilizadores.

La TFD se logra incorporando en primer lugar los derivados en un vehículo de aplicación farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, solución etanólica o formulación liposómica) para el suministro de los derivados a un sitio de tratamiento específico. Después de administrar los derivados en el vehículo a un área de tratamiento, se deja pasar el tiempo suficiente para que los derivados de porfirina y clorina se acumulen preferiblemente en el tejido enfermo. Por último, se irradia el área de tratamiento con luz de longitud de onda adecuada y potencia suficiente para activar los derivados de porfirina para inducir necrosis o apoptosis en las células de dicho tejido enfermo. Por lo tanto, una de las principales ventajas es que pueden crearse formulaciones farmacéuticas convenientes para los compuestos biológicamente activos de la presente invención tales como formulaciones liposómicas que han de inyectarse evitando efectos no deseables como la precipitación en el sitio de inyección o la farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol. Debido a su naturaleza anfifílica, los derivados de porfirina y clorina químicamente estables de la presente invención pueden prepararse en diversas preparaciones activas y farmacéuticamente aceptables para diferentes métodos de administración, por ejemplo, inyecciones. En una realización específicamente preferida, dichos compuestos anfifílicos se formulan en liposomas (ejemplo 8.1 y 8.2). Esta formulación liposómica puede a continuación inyectarse evitando efectos no deseables tales como la precipitación en el sitio de inyección o la farmacocinética retardada de los sistemas de tetrapirrol.

Determinación de la toxicidad en la oscuridad (TO) y la fototoxicidad (ejemplo 6.1) de un derivado de clorina específico de la presente invención, 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina preparada según el ejemplo 4.1, en experimentos de cultivo celular con una línea celular HT 29 mostró las excelentes propiedades de los compuestos para su uso en TFD. Se ilustran ejemplos adicionales de las buenas propiedades fototóxicas de los compuestos de la presente descripción con los ejemplos 6.2 y 6.3. Los ejemplos adicionales 6.4 - ^{6 .6} de experimentos en la línea celular ^hT 29 se incluyen para ilustrar que otras dihidroxiclorinas que no poseen una combinación y disposición de sustituyentes como la favorecida en la presente invención, muestran una actividad de TFD menos prometedora.

Como otro objeto de la presente descripción es utilizar los derivados de porfirina y clorina descritos en el diagnóstico y el tratamiento de la artritis y enfermedades inflamatorias similares, los datos presentados en los ejemplos 7.1 - 7.4 resumen los resultados del tratamiento fotodinámico de dos líneas celulares especialmente pertinentes para la artritis (HIG82 y J774A.1, una línea celular de sinoviocitos de conejo y una de macrófagos de ratón) con una serie de compuestos de la presente descripción. De nuevo, también se incluye un ejemplo negativo (7.5) de un compuesto que no tiene la combinación favorecida de sustituyentes y que carece de actividad fotodinámica.

Los siguientes ejemplos se presentan para proporcionar a los expertos en la técnica una descripción completa e ilustrativa de cómo fabricar los derivados de clorina de la invención y mostrar su actividad fotodinámica y no pretenden limitar el alcance de lo que el inventor considera la invención. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números utilizados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etc.), pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. Además, se han tomado las mejores medidas para nombrar los compuestos con su nombre sistemático IUPAC, sin embargo, la referencia básica son las fórmulas estructurales dadas basadas en los datos espectroscópicos experimentales.

Ejemplos

Todos los reactivos se utilizaron tal como se adquirieron en proveedores comerciales. Se prepararon tetraacetil-^-D-glucopiranosiloxi-benzaldehído (I. Laville, S. Pigaglio, J.-C. Blais B. Loock, Ph. Maillard, D. S. Grieson, J. Blais, Biorg. Med. Chern. 2004, 12, 3673-3682) y 5-(4-metoxicarbonilfenil)-dipirrometano (B. J. Littler, M. A. Miller, C.-H. Hung, R. W. Wagner, D. F. O'Shea, P. D. Boyle, J. S. Lindsey, J. Org. Chem. 1999, 64, 13 91-13 96) según la literatura. El diclorometano se purificó mediante destilación sobre K²CO³ antes de su uso. La cromatografía en capa fina (CCF) se realizó utilizando gel de sílice 60 de Merck (sin indicador de fluorescencia) aplicado como recubrimiento previamente sobre láminas de aluminio. La cromatografía ultrarrápida se realizó usando gel de sílice 60 de Merck, 0,040-0,063 mm (malla 230-400). Los espectros de RMN de 1H y de 13C se registraron en CDQ³ , (CD³)²CO o (CD³)²SO en los instrumentos Bruker AC 250, AC 500 o AMX 500. Se proporcionan desplazamientos químicos 5 en ppm con respecto a TMS como patrón interno o con respecto a la resonancia del pico de disolvente residual, los valores de J se proporcionan en Hz. Los espectros de masas se registraron en instrumentos de IEN-TDV Varian MAT 771, Varian lonSpec QFT-7 o Agilent 6210. Los espectros de absorción electrónica se registraron en un espectrofotómetro Specord S300 (Analytik Jena) utilizando diclorometano o acetona como disolvente.

Ejemplo 1

Ejemplo de referencia

Preparación de porfirinas sustituidas asimétricas

1.1 Preparación de 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (método A) y 5,10-dihexil-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina

En un experimento típico, se colocó diclorometano seco (1500 ml) en un matraz de tres bocas equipado con un agitador magnético y entrada de gas argón. Después de que se añadiesen pirrol (1,05 ml, 15 mmol), heptanal (1,05 ml, 7,5 mmol) y 4-formilbenzoato de metilo (1,23 g, 7,5 mmol), el matraz se protegió de la luz ambiental y se añadió TFA (1,16 ml, 15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, se añadió DDQ (2,55 g, 11,25 mmol) suspendido en diclorometano seco (100 ml). Después de agitar adicionalmente durante 1 h, se añadió trietilamina (3 ml). Para retirar los subproductos poliméricos, la mezcla de reacción se filtró a través de gel de sílice. El disolvente se evaporó y la separación se consiguió a través de cromatografía ultrarrápida con diclorometano y purificación adicional con diclorometano/hexano 3:1 (primera banda) y diclorometano (segunda y tercera banda) como eluyente. Se consiguió una purificación adicional mediante la recristalización en diclorometano/metanol. La primera banda de la columna contenía 5,10,15-trihexil-20-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (203 mg, 12 %), la segunda banda, el compuesto del título 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (109 mg, 4 %) y la tercera banda, el compuesto del título 5,10-dihexil-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (199 mg, 7 %).

5,15-Dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina

sólido microcristalino violeta, pf 238 °C; /máx(CH²Cl²)/nm 421 (£/dm³ mol^-1 cm^-1 253500), 517 (13400), 553 (7600), 594 (3900) y 650 (5000); 5^h(250 MHz; CDCh) -2,71 (2 H, s, NH), 0,92 ^{( 6} H, t, J 7,3, 2 x CH³), 1,29-1,53 ^{( 8} H, m, 4 x CH²), 1,76 (4 H, mc, 2 x CH²), 2,48 (4 H, mc, 2 x CH²), 4,14 ^{( 6} H, s, 2 x OCH³), 4,89 (4 H, t, J 7,7, 2 x CH²), 8,27 (4 H, d, J 8,2, Ar), 8,45 (4 H, d, J 8,2, Ar), 8,79 (4 H, d, J 5,0, j3-H), 9,40 (4 H, d, J 5,0, j3-H); 5c(63 MHz; CDCla) 14,26 (CH³), 22,84 (CH²), 30,37 (CH²), 32,04 (CH²), 35,49 (CH²), 38,89 (CH²), 52,55 (OCH³), 117,88 (meso-C), 120,48 (meso-C), 127,93 (Ar), 128,20 (Ar), 129,70 (Ar), 131,46 (Ar), 134,61 (Ar), 147,67 (Ar), 167,53 (CO²CH³); m/z (IEN) 747,3904 ([M H]+, C⁴⁸H⁵¹N⁴O⁴+ requiere 747,3905).

5,10-Dihexil-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina

sólido microcristalino violeta, pf 131 °C; /máx(CH²Cl²)/nm 420 (£/dm³ mol^-1 cm^-1 263300), 519 (12000), 553 (7000), 596 (3900) y 652 (4000); 5^h(250 MHz; CDCla) -2,72 (2 H, s, NH), 0,95 ^{( 6} H, t, J 7,3, 2 x CH³), 1,45 ^{( 8} H, mc, 4 x CH²), 1,79 (4 H, mc, 2 x CH²), 2,52 (4 H, mc, 2 x CH²), 4,12 ^{( 6} H, s, 2 x OCH³), 4,91 (4 H, t, J 8,2, 2 x CH¿), 8,24 (4 H, d, J 8,2, Ar), 8,43 (4 H, d, J 8,2, Ar), 8,69 (2 H, s, j3-H), 8,78 (2 H, d, J 5,0, j3-H), 9,41 (2 H, d, J 5,0, j3-H), 9,50 (2 H, s, ;⁶ -H); 5c(63 MHz; CDCl³) 14,30 (CH³), 22,89 (CH²), 30,43 (CH²), 32,06 (CH²), 35,86 (CH²), 39,06 (CH²), 52,53 (OCH³), 117,49 (meso-C), 120,98 (meso-C), 128,05 (Ar), 128,63 (Ar), 129,68 (Ar), 130,88 (Ar), 134,63 (Ar), 147,30 (Ar), 167,51 (CO²CH³); m/z (IEN) 747,3932 ([M H]+, C⁴⁸H⁵¹N⁴O⁴+ requiere 747,3905).

1.2 Preparación de 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (método B)

En un experimento típico, se colocó acetonitrilo (500 ml) en un matraz de tres bocas equipado con un agitador magnético y una entrada de gas argón. Después de que se añadiesen 5-(4-metoxicarbonilfenil)-dipirrometano (714 mg, 2,6 mmol) y heptanal (0,36 ml, 2,6 mmol), el matraz se protegió de la luz ambiental y se añadió TFA (0,2 ml, 2,6 mmol), y la reacción la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, se añadió DDQ (860 mg, 3,8 mmol) suspendido en acetonitrilo (30 ml). Después de agitar adicionalmente durante 1 h, se añadió trietilamina (1 ml). El disolvente se evaporó y se consiguió una purificación preliminar a través de cromatografía ultrarrápida con diclorometano/metanol 95:5 como eluyente y purificación adicional a través de cromatografía ultrarrápida con diclorometano/acetato de etilo 99:1 como eluyente. El compuesto del título 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina se obtuvo después de la recristalización en diclorometano/metanol (81 mg, 9 %).

1.3 Preparación de 5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-porfirina y 5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-porfirina

En un experimento típico, se colocó diclorometano seco (1500 ml) en un matraz de tres bocas equipado con un agitador magnético y entrada de gas argón. Después de que se añadiesen pirrol (1,05 ml, 15 mmol), tetradecanal (1593 mg, 7,5 mmol) y 3-hidroxibenzaldehído (916 mg, 7,5 mmol), el matraz se protegió de la luz ambiental y se añadió TFA (1,16 ml, 15 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h. A continuación, se añadió DDQ (2,55 g, 11,25 mmol) suspendido en diclorometano seco (100 ml). Después de agitar adicionalmente durante 1 h, se añadió trietilamina ^{( 6} ml). Para retirar los subproductos poliméricos, la mezcla de reacción se filtró a través de gel de sílice. El disolvente se evaporó y la separación se consiguió a través de cromatografía ultrarrápida repetida con diclorometano/acetato de etilo 90:10 y 95:5 como eluyente. Se consiguió una purificación adicional mediante recristalización en diclorometano/metanol acuoso. La primera banda de la columna contenía 5-(3-hidroxifenil)-10,15,20-tris-(tridecil)-porfirina ^{( 6 8} mg, 4 %), la segunda banda, el compuesto del título 5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-porfirina (52 mg, 2 %) y la tercera banda, el compuesto del título 5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-porfirina (114 mg, 4 %).

,15-Bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-porfirina

sólido microcristalino violeta, pf 133 °C; 5^h(500 MH^z ; CDCI³) -2,70 (2 H, s, NH), 0,87 (6 H, t, J 7,0, 2 x CH³), 1,25­ 1,33 (32 H, m, 16 x CH¡), 1,46 (4 H, mc, 2 x CH2) 1,72 (4 H, mc, 2 x CH2), 2,46 (4 H, mc, 2 x CH2), 4,84 (4 H, t, J 8,0, 2 x CH²), 7,15-7,17 (2 H, m, Ar), 7,46-7,47 (2 H, m, Ar), 7,54 (2 H, d, J 7,5, Ar), 7,73 (2 H, d, J 7,5, Ar), 8,83 (4 H, d, J 4,7, j3-H), 9,33 (4 H, d, J 4,7, j3-H); <5c(125 MHz; CDCla) 14,1 (CH³), 22,7 (CH²), 29,3 (CH²), 29,6 (CH²), 29,7 (CH²), 30,5 (CH²), 31,9 (CH²), 35,2 (CH²), 38,7 (CH²), 114,6 (Ar), 118,2 (meso-C), 119,9 (meso-C), 121,7 (Ar), 127,5 (Ar), 127,6 (j3-C), 131,6 (j3-C), 144,1 (Ar), 153,7 (Ar); m/z (IE) 858 ([M]+, 100 %), 689 ([M - C¹²H¹⁵E 87), 429 ([M]2+, 9).

5,10-Bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-porfirina

sólido microcristalino violeta, pf 113 °C; 5^h(500 MHz; CDCI³) -2,68 (2 H, s, NH), 0,88 (6 H, t,J6,9, 2 x CH³), 1,27-1,37 (32 H, m, 16 x CH²), 1,46-1,52 (4 H, m, 2 x CH²), 1,72-1,78 (4 H, m, 2 x CH2), 2,46-2,52 (4 H, m, 2 x CH2), 4,86 (4 H, t, J 7,0, 2 x CH²), 6,93-7,09 (2 H, m, Ar), 7,25-7,30 (2 H, m, Ar), 7,38-7,46 (2 H, m, Ar), 7,56-7,65 (2 H, m, Ar), 8,54­ 8,62 (2 H, m, j3-H), 8,75-8,79 (2 H, m, j3-H), 9,30 (2 H, d, J 4,8, j3-H) 9,49 (2 H, s, j3-H); 5c(125 MHz; CDCla) 14,1 (CH³), 22,7 (CH²), 29,7 (CH²), 30,6 (CH²), 31,9 (CH²), 35,6 (CH²), 38,9 (CH²), 114,5 (Ar), 118,0 (meso-C), 120,3 (meso-C), 121,6 (Ar), 127,5 (Ar), 127,6 (Ar), 143,5 (Ar), 153,6 (Ar); m/z (IE) 858 ([M]+, 100 %), 689 ([M - C¹²H¹⁵E 36), 520 ([M - 2 C¹²H15]+, 6), 429 ([M]2+, 4).

1.3 Preparación de 5,10,15-trihexil-20-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina

En un experimento típico, se colocó diclorometano seco (1500 ml) en un matraz de tres bocas equipado con un agitador magnético y entrada de gas argón. Después de que se añadiesen pirrol (10,5 ml, 150 mmol), heptanal (15,8 ml, 113 mmol) y 4-formilbenzoato de metilo (6,2 g, 38 mmol), el matraz se protegió de la luz ambiental y se añadió TFA (2,15 ml, 28 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, se añadió DDQ (25 g, 110 mmol) suspendido en diclorometano seco (100 ml). Después de agitar adicionalmente durante 1 h, se añadió trietilamina (6 ml). Para retirar los subproductos poliméricos, la mezcla de reacción se filtró a través de gel de sílice. El disolvente se evaporó y la separación se consiguió a través de cromatografía ultrarrápida con diclorometano y purificación adicional con diclorometano/hexano 3:1. Se consiguió una purificación adicional mediante recristalización en diclorometano/metanol. La primera banda de la columna contenía 5,10,15,20-tetrahexil-porfirina (930 mg, 5 %), la segunda banda, el compuesto del título 5,10,15-trihexil-20-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (1400 mg, 5 %).

5,10,15-Trihexil-20-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina

sólido microcristalino violeta; / máx(CH²Cl²)/nm 418 (£/dm³ mol^-1 cm^-1290300), 519 (14600), 553 (9100), 597 (4200) y

654 (6400); 5^h(250 MHz; CDCh) -2,68 (2 H, s, NH), 0,92-1,06 (9 H, m, 3 x CH³), 1,33-1,60 (12 H, m, ⁶ x CH²) 1,73­

1,88 ^{( 6} H, m, 3 x CH²) 2,43-2,60 ^{( 6} H, m, 3 x CH²) 4,14 (3 H, s, OCH³), 4,85-4,96 ^{( 6} H, m, M), 8,25 (2 H, d, J 8,2, Ar),

8,43 (2 H, d, J 8,2, Ar), 8,73 (2 H, d, J 5,5, j3-H), 9,36 (2 H, d, J 5,5, j3-H), 9,45 (2 H, d, J 5,5, j3-H), 9,48 (2 H, d, J 5,5, j3-H); 5c(63 MHz; CDCla) 14,30 (CH³), 22,89 (CH²), 22,93 (CH²), 30,39 (CH²), 30,46 (CH²), 32,07 (CH² 35,96 (CH²), 38,83 (CH²), 39,04 (CH²), 52,51 (OCH³), 116,54 (meso-C), 119,51 (meso-C), 120,01 (meso-C), 127,95

(Ar), 128,26 (Ar), 129,52 (Ar), 130,84 (Ar), 134,63 (Ar), 147,77 (Ar), 167,58 (CO²CH³); m/z (IEN) 697,4467 ([M H]+ C⁴⁶H⁵⁷N⁴O2+ requiere 697,4476).

Ejemplo 2

Ejemplo de referencia

Preparación de porfirinas sustituidas con carboxi asimétricas

2.1 Preparación de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-porfirina

En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (200 mg, 3,6 mmol) en metanol (1 ml) a una solución agitada de 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (31 mg, 0,04 mmol) en THF ^{( 8} ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se

ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con

agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título

5.15- bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-porfirina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso

(26 mg, 87 %).

5.15- Bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-porfirina

sólido microcristalino violeta, 5^h(250 MHz; (CDa^SO) -2,96 (2 H, s, NH), 0,81 ^{( 6} H, t, J 7,1, 2 x CH³), 1,15-1,41 ^{( 8} H, m, 4 x CH²), 1,60-1,71 (4 H, m, 2 x CH²), 2,25-2,37 (4 H, m, 2 x CH²), 4,81-4,86 (4 H, m, 2 x CH²), 8,21 (4 H, d, J8,1,

Ar), 8,33 (4 H, d, J 8,1, Ar), 8,71 (4 H, d, J 4,8, j3-H), 9,57 (4 H, d, J 4,8, j3-H); m/z (IEN) 719,3621 ([M H]+, C⁴⁶H⁴⁷N⁴O⁴+ requiere 719,3592).

2.2 Preparación de 5,10-bis-(4-carboxifenil)-15,20-dihexil-porfirina

En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (200 mg, 3,6 mmol) en metanol (1 ml) a una solución agitada de 5,10-dihexil-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (34 mg, 0,05 mmol) en THF ^{( 8} ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se

ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título 5.10- bis-(4-carboxifenil)-15,20-dihexil-porfirina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso (26 mg, 79 %).

5.10- bis-(4-carboxifenil)-15,20-dihexil-porfirina

sólido microcristalino violeta, &(250 MHz; (CDa^SO) -2,99 (2 H, s, NH), 0,81 ^{( 6} H, t, J 7,0, 2 x CH³), 1,19-1,41 ^{( 8} H, m, 4 x CH²), 1,60-1,71 (4 H, m, 2 x CH²), 2,25-2,36 (4 H, m, 2 x CH²), 4,78-4,83 (4 H, m, 2 x CH²), 8,18 (4 H, d, J 8,0, Ar), 8,30 (4 H, d, J 8,0, Ar), 8,63 (2 H, s, ;0-H), 8,69 (2 H, d, J 4,7, ^-H ), 9,54 (2 H, d, J 4,7, ;0-H), 9,62 (2 H, s, ;0-H); m/z (IEN) 719,3611 ([M H]+, C⁴⁶H⁴⁷N⁴O⁴+ requiere 719,3592).

Ejemplo 3

Preparación de clorinas sustituidas con c/s-dihidroxi asimétricamente

3.1 Ejemplo de referencia: Preparación de 5,15-dihexil-7,8-dihidroxi-10,20-bis-(4-metoxi-carbonilfenil)-7,8-clorina En un experimento típico, se añadió una solución de tetraóxido de osmio (40 mg, 0,16 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (4 ml) a una solución agitada de 5,15-dihexil-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenilo)-porfirina (90 mg, 0,12 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (9 ml). Después de agitar durante 3 h, se añadió una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol 1:1 (15 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida con diclorometano/acetato de etilo 95:5 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol. La primera banda de la columna contenía material de partida (20 mg, 22 %) y la segunda banda, el compuesto del título 5,15-dihexil-7,8-dihidroxi-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina (52 mg, 55 %)•

5,15-Dihexil-7,8-dihidroxi-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina

1,50 ^{( 8} H, m, 4 x CH2) 1,67-1,76 (4 H, m, 2 x 2,15-2,29 (2 H, m, CH2) 2,33-2,41 (2 H, m, CH2) 4,08 (3 H, s, OCH³), 4,11 (3 H, s, OCH³), 4,32-4,39 (1 H, m, HCH), 4,48-4,54 (1 H, m, HCH), 4,59-4,65 (2 H, m, CH²) 6,22 (1 H, d, J 7,1, ¹⁰-H), 6,45 (1 H, d, J 7,1, ^-H ), 7,95 (1 H, d, J 7,3, Ar), 8,04 (1 H, d, J 7,4, Ar), 8,15 (2 H, d, J 8,3, Ar), 8,19 (1 H, d, J 5,0, |0-H ), 8,32-8,39 (4 H, m a, Ar), 8,42 (1 H, d, J 4,6, ^-H ), 8,61 (1 H, d, J 4,9, ^-H ), 9,00 (1 H, d, J 4,9, ^-H ), 9,06 (1 H, d, J 4,6, |0-H ), 9,13 (1 H, d, J 5,0, ^-H ); 5c(125 MHz; CDCla) 14,26 (CH³), 14,30 (CH³), 22,81 (CH²), 22,91 (CH²), 30,33 (CH²), 30,42 (CH²), 31,98 (CH²), 32,07 (CH²), 33,38 (CH²), 35,22 (CH²), 36,76 (CH²), 38,20 (CH²), 52,55 (OCH³), 73,60 (0-C), 74,05 (0-C), 111,35 (meso-C), 113,39 (meso-C), 120,54 (meso-C), 122,28 (0-C), 123,81 (meso-C), 124,14 (0-C), 124,86 (0-C), 127,97 (Ar), 128,62 (0-C), 128,73 (Ar), 129,32 (Ar), 129,65 (Ar), 129,75 (0-C), 129,81 (a-C), 132,35 (Ar), 133,09 (j3-C), 134,03 (Ar), 134,27 (Ar), 135,72 (a-C), 139,04 (a-C), 141,43 (a-C), 146,84

(Ar), 147,29 (Ar), 151,59 (a-C), 153,67 (a-C), 159,05 (a-C), 162,79 (a-C), 167,26 (CO²CH³), 167,50 (CO²CH³); m/z

(IEN) 781.3988 ([M H]+, C⁴⁸H⁵³N⁴O⁶+ requiere 781,3960).

3.2 Preparación de 5,10-dihexil-7,8-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxi-carbonilfenil)-7,8-dorina, 5,20-dihexil-7,8-dihidroxi-10,15-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-dorina y 5,10-dihexil-17,18-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de tetraóxido de osmio (100 mg, 0,39 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (10 ml) a una solución agitada de 5,10-dihexil-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenilo)-porfirina (226 mg, 0,30 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (35 ml). Después de agitar durante 20 h, se añadió

una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol 1:1 (40 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h. La mezcla

de reacción se filtró a través de Celite y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se

purificó mediante cromatografía ultrarrápida con diclorometano/acetato de etilo 90:10 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol. La primera banda de la columna contenía material de partida (38 mg,

18 %), la segunda banda, el compuesto del título 5,10-dihexil-7,8-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina (60 mg, 25 %), la tercera banda, el compuesto del título 5,20-dihexil-7,8-dihidroxi-10,15-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina (74 mg, 31 %) y la cuarta banda contenía el compuesto del título 5,10-dihexil-17,18-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-clorina (22 mg, 9 %).

5,10-Dihexil-7,8-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 171-178 °C; Amáx(CH²Cl²)/nrn 410 (s/dm³ mo^-1 cm^-1 346000), 426 (339000), 526 (31100), 553 (38900), 596 (18100) y 648 (39400); 5^h(500 MHz; CDCla) -2,19 (2 H, m, NH), 0,95 (6 H, t, J 7,3 Hz, 2 x

CH³), 1,36-1,49 (8 H, m, 4 x CH²), 1,66-1,75 (4 H, m, 2 x CH²), 2,09-2,23 (4 H, m, 2 x CH²), 4,06 (6 H, s, 2 x OCH³)

4,25-4,31 (2 H, m, CH²), 4,38-4,44 (2 H, m, CH²), 6,38 (2 H, s, ^-H), 7,90-7,98 (2 H, m a, Ar), 8,02-8,09 (2 H, m a,

Ar), 8,14 (2 H, s a, ^-H), 8,28-8,30 (4 H, m, Ar), 8,55 (2 H, d, J 5,0, ^-H), 8,95 (2 H, d, J 5,0, ;S-H); 5c(125 MHz;

CDCl³) 14,31 (CH³), 22,93 (CH²), 30,43 (CH²), 32,04 (CH²), 33,74 (CH²), 36,86 (CH²), 52,52 (OCH³) 113,47 (meso- C), 120,15 (meso-C), 122,51 (0-C), 127,97 (0-C), 129,49 (0-C), 132,45 (Ar), 133,88 (Ar), 134,19 (Ar),

134,69 (a-C), 140,16 (a-C), 146,83 (Ar), 152,33 (a-C), 161,12 (a-C), 167,45 (CO²CH³); m/z (IEN) 781,3993 ([M H]+, C⁴⁸H⁵³N⁴O⁶+ requiere 781,3960).

5,20-Dihexil-7,8-dihidroxi-10,15-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 128 °C; Amáx(CH²Cl²)/nm 409 (£/dm³ mol^{' 1} cm^{' 1}175100), 428 (143800), 524 (14900),

551 (17800), 594 (8400) y 647 (19800); 5^h(500 MHz; CDCh) -2,01 (1 H, s, NH), -1,81 (1 H, s, NH), 0,92-0,98 (6 H, m,

2 x CH³), 1,34-1,52 (8 H, m, 4 x CH²), 1,68-1,77 (4 H, m, 2 x CH²), 2,12-2,20 (1 H, m, HCH), 2,21-2,29 (1 H, m, HCH), 2,34-2,40 (2 H, m, CH²), 4,05 (3 H, s, OCH³), 4,09 (3 H, s, OCH³), 4,29-4,35 (1 H, m, HCH), 4,42-4,49 (1 H, m, HCH), 4,53 (2 H, t, J 8,3 Hz, CH²), 6,15 (1 H, d, J 7,2, ^-H), 6,37 (1 H, d, J 7,2, ^-H), 7,85 (1 H, d, J 7,0, Ar), 7,95

(1 H, d, J 7,0, Ar), 8,05-8,10 (1 H, m, Ar), 8,11 (1 H, d, J 4,9, ^-H), 8,16-8,23 (1 H, m, Ar), 8,25-8,38 (4 H, m, Ar), 8,42

(1 H, d, J 4,6, ;S-H), 8,47 (1 H, d, J 4,9, j3-H), 8,98 (1 H, d, J 5,0, j3-H), 9,04 (1 H, d, J 4,6, j3-H), 9,16 (1 H, d, J 5,0, /3-H); 5c(125 MHz; CDCI³) 14,28 (CH³), 14,33 (CH³), 22,86 (CH²), 22,95 (CH²), 30,38 (CH²), 30,46 (CH²), 31,98 (CH²),

32,09 (CH²), 33,68 (CH²), 35,48 (CH²), 36,80 (CH²), 38,38 (CH²), 52,52 (OCH³), 73,61 (j3-C), 73,82 (j3-C), 111,18

(meso-C), 113,40 (meso-C), 120,61 (meso-C), 122,36 (S-C), 123,73 (meso-C), 123,95 (S-C), 125,72 (j3-C), 128,08 (Ar), 128,76 (Ar), 129,30 (Ar), 129,65 (Ar), 129,74 (Ar), 130,02 (j3-C), 132,24 (Ar), 132,71 (j3-C), 133,95

(Ar), 134,16 (Ar), 134,82 (a-C), 134,97 (a-C), 139,66 (a-C), 140,69 (a-C), 146,40 (Ar), 146,90 (Ar), 151,92 (a-C), 153,22 (a-C), 159,91 (a-C), 161,68 (a-C), 167,22 (CO²CH³), 167,46 (CO²CH³); m/z (IE) 780 ([M]+, 21 %), 762 ([M -H²O]+, 61), 746 ([M - 2 OH]+, 71), 690 ([M - H²O - C⁵H¹¹E 51), 675 ([M - 2 OH - C⁵H¹¹E 100), 604 ([M - 2 OH - 2

C⁵H^h ]+, 30), 390 ([M]2+, 8), 381 ([M - H²O]2+, 7), 373 ([M - 2 OH]2+, 7); m/z EMAR (IE) 780,3889 ([M]+', C⁴⁸H⁵²N⁴O⁶+' requiere 780,3881).

5,10-Dihexil-17,18-dihidroxi-15,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-dorina

sólido microcristalino violeta, pf 121 °C; /máx(CH²Cl²)/nm 409 (£/dm³ mol^-1 cm^-1 163200), 428 (128300), 526sh (16300), 547 (19300), 593 (7700) y 645 (21000); 5^h(500 MHz; CDCla) -1,53 (2 H, s, NH), 0,93 (6 H, t, J 7,3 Hz, 2 x CH³), 1,36-1,49 (8 H, m, 4 x CH²), 1,73 (4 H, mc, 2 x CH²), 2,40 (4 H, mc, CH²), 4,05 (6 H, s, 2 x OC/h), 4,58-4,67 (4

H, m, 2 x CH²), 6,10 (2 H, s, j3-H), 7,89 (2 H, d, J 6,3, Ar), 8,08 (2 H, d, J 6,3, Ar), 8,19 (2 H, d, J 5,0, j3-H), 8,29 (2 H, d, J 6,3, Ar), 8,35 (2 H, d, J 6,3, Ar), 9,12 (2 H, d, J 5,0 Hz, j3-H), 9,13 (2 H, s, j3-H ); 5c(125 MHz; CDCl³) 14,28

(CH³), 22,86 (CH²), 30,37 (CH²), 32,00 (CH²), 35,56 (CH²), 38,27 (CH²), 52,47 (OCH³), 73,94 (S-C), 111,25 (meso-C), 123,83 (meso-C), 124,22 (S-C), 125,41 (S-C), 128,67 (Ar), 129,14 (Ar), 129,63 (Ar), 130,34 (j3-C), 132,36 (Ar), 134,16 (Ar), 135,14 (a-C), 140,19 (a-C), 146,53 (Ar), 152,94 (a-C), 160,57 (a-C), 167,31 (CO²CH³); m/z (IEN) 781,3989 ([M H]+, C⁴⁸H⁵³N⁴O⁶+ requiere 781,3960).

3.3 Ejemplo de referencia: Preparación de 7,8-dihidroxi-5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-7,8-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de tetraóxido de osmio (36 mg, 0,14 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (4 ml) a una solución agitada de 5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-porfirina

(80 mg, 0,09 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (6 ml). Después de agitar durante 5 h, se añadió una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol 1:1 (15 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida con diclorometano/acetato de etilo 90:10 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol acuoso. La primera banda de la columna contenía material de partida (30 mg, 39 %) y la segunda banda, el compuesto del título 7,8-dihidroxi-5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecilo)-7,8-clorina (35 mg,

44 %).

7,8-Dihidroxi-5,15-bis-(3-hidroxifenil)-10,20-bis-(tridecil)-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 111-120 °C; 5^h(500 MHz; CDCla) -1,88 (1 H, s, NH), - 1,65 (1 H, s, NH), 0,82-0,85 (6

H, m, 2 x CH³), 1,22-1,34 (32 H, m, 16 x CH²), 1,40-1,49 (4 H, m, 2 x 1,67-1,74 (4 H, m, 2 x CH²), 2,22-2,40 (4 H, m,

2 x CH²), 4,35-4,41 (1 H, m, HCH), 4,61-4,71 (3 H, m, CH2, HCH), 6,26-6,33 (1 H, m, j3-H), 6,50-6,53 (1 H, m, j3-H),

7,16-7,18 (1 H, m, Ar), 7,25-7,28 (1 H, m, Ar), 7,40-7,63 (6 H, m, Ar), 8,35 (1 H, d, J 4,8, j3-H), 8,52 (1 H, d, J 4,9, j3-H), 8,75 (1 H, d, J4,9, j3-H), 9,14 (2 H, d, J 4,9, j3-H), 9,32 (1 H, d, J4,8, j3-H); <5c(125 MHz; CDCla) 13,5 (CH³), 22,5

(CH²), 28,9 (CH²), 29,1 (CH²), 29,2 (CH²), 29,4 (CH²), 29,5 (CH²), 29,6 (CH²), 29,7 (CH²), 30,2 (CH²), 30,5 (CH²), 31,8 (CH²), 34,5 (CH²), 36,3 (CH²), 3 8,1 (CH²), 72,9 (0-C), 74,5 (0-C), 113,0 (meso-C), 114,4 (Ar), 114,7 (Ar), 121.4 (Ar), 121,7 (0-C), 122,4 (Ar), 124,1 (Ar), 124,4 (0-C), 125,8 (Ar), 127,6 (Ar), 128,3 (0-C), 129,2 (0-C), 132,9 (0-C), 134,1 (a-C), 135,2 (a-C), 139,4 (a-C), 140,9 (a-C), 143,8 (Ar), 151,8 (a-C), 153,4 (a-C), 155,8 (Ar); m/z (IE) 875 ([M - H²OE 37 %), 856 ([M - 2 H2O]+, 13), 706 ([M - H²O - C¹²H²⁵E 6).

3.4 Preparación de 17,18-dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-17,18-dorina, 7,8-dihidroxi-5,20-bis-(3-hidroxifenil)-10,15-bis-(tridecil)-7,8-dorina y 7,8-dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-7,8-dorina En un experimento típico, se añadió una solución de tetraóxido de osmio (76 mg, 0,30 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (8 ml) a una solución agitada de 5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-porfirina (185 mg, 0,22 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (10 ml). Después de agitar durante 5 h, se añadió una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol 1:1 (20 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida repetida con diclorometano/acetato de etilo 90:10, 40:10 y diclorometano/metanol 95:5 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol acuoso. La primera banda de la columna contenía material de partida (19 mg, 10 %), la segunda banda, el compuesto del título 17.18- dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-17,18-clorina (49 mg, 25 %), la tercera banda, el compuesto del título 7,8-dihidroxi-5,20-bis-(3-hidroxifenil)-10,15-bis-(tridecil)-7,8-clorina (47 mg, 24 %) y la cuarta banda contenía el compuesto del título 7,8-dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-7,8-clorina (25 mg, 13 %).

17.18- Dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-17,18-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 103 °C; 5^h(500 MH^z ; (CD³^SO) -2,22 (2 H, s, NH), 0,78 (6 H, t, J 6,92 x CH³), 1,10­ 1,30 (32 H, m, 16 x CH²), 1,35-1,43 (4 H, m, 2 x CH²), 1,60-1,70 (4 H, m, 2 x CH²), 2,08-2,25 (4 H, m, 2 x CH²), 4,32­ 4,40 (2 H, m, 2 x HCH), 4,53-4,63 (2 H, m, 2 x HCH), 6,01 (2 H, s, 0-OH), 6,44 (2 H, s, 0-H), 7,15-7,20 (2 H, m, Ar), 7,45-7,54 (6 H, m, Ar), 8,39 (2 H, s, 0-H), 8,72 (2 H, d, J4,7, 0-H), 9,19 (2 H, d, J 4,7, 0-H), 9,79 (2 H, s, Ar-OH); 5c(125 MHz; (CDa^SO) 14,4 (CH³), 22,6 (CH²), 29,2 (CH²), 29,5 (CH²), 29,6 (CH²), 30,5 (CH²), 31,8 (CH²), 33,4 (CH²), 36,6 (CH²), 73,3 (0-C), 113,4 (meso-C), 115,4 (Ar), 120,8 (meso-C), 122,9 (0-C), 125,6 (Ar), 128,3 (Ar), 128,3 (0-C), 132,5 (0-C), 134,5 (a-C), 140,0 (a-C), 143,1 (Ar), 152,1 (a-C), 156,4 (Ar), 164,0 (a-C); m/z (IE) 892 ([M]+, 5 %), 874 ([M - H²O]+, 100), 858 ([M - 2 OH)]+, 31) 705 ([M - H²O - C¹²H²⁵E 14).

7,8-Dihidroxi-5,20-bis-(3-hidroxifenil)-10,15-bis-(tridecil)-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 203-205 °C; 5^h(500 MHz; (CDs^SO) -2,02 (1 H, s, NH), -1,92(1 H, s,NH), 0,78-0,82 (6 H, m, 2 x CHa), 1,12-1,46 (36 H, m, 18 x CH2), 1,59-1,71 (4 H, m, 2 x CH2), 2,10-2,25 (2 H, m, CH²), 2,26-2,32 (2 H, m, CH²), 4,35-4,41 (1 H, m, HCH), 4,60-4,66 (1 H, m, HCH), 4,67-4,73 (2 H, m, CH²), 5,31 (1 H, s, 0-OH), 5,81(1 H, s, S-OH), 6,05-6,11 (1 H, m, 0-H), 6,38-6,44 (1 H, m, 0-H), 7,05-7,07 (1 H, m, Ar), 7,14-7,19 (1 H, m, Ar), 7,25­ 7,56 (6 H, m, Ar), 8,23 (1 H, d, J4,8, 0-H), 8,43 (1 H, d, J4,6, 0-H), 8,56 (1 H, d, J4,9, 0-H), 9,17 (1 H, d, J4,6, 0-H), 9,25 (1 H, d, J4,8, 0-H), 9,54 (1 H, d, J4,9, 0-H); 5c(125 MHz; (CD³)²SO) 14,4 (CH³), 14,5(CH³), 22,6 (CH²), 29,2 (CH²), 29,5 (CH²), 29,6 (CH²), 29,7 (CH²), 31,8 (CH²), 38,5 (CH²), 73,3 (S-C), 74,6 (S-C), 122,8 (S-C), 124,8 (0-C), 126,5 (S-C), 128,3 (S-C), 130,6 (S-C), 132,8 (S-C), 134,6 (a-C), 143,1 (Ar), 151,7 (a-C), 152,6 (a-C), 164,1 (a-C); m/z (IE) 874 ([M - H²OE 20 %), 705 ([M - H²O - C¹²H²⁵E 9).

7,8-Dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-7,8-dorina

sólido microcristalino violeta, pf 137-141 °C; 5^h(500 MHz; (CDs^CO) -1,56 (2 H, s, NH), 0,83-0,86 (6 H, m, 2 x CH³), 1,24-1,35 (32 H, m, 16 x CH²), 1,45-1,51 (4 H, m, 2 x CH²), 1,72-1,78 (4 H, m, 2 x CH²), 2,42 (4 H, m⁶ 2 x CH²), 4,70-4,80 (4 H, m, 2 x CH²), 6,18-6,28 (2 H, m, 0-H), 7,12-7,15 (2 H, m, Ar), 7,30-7,63 (6 H, m, Ar), 8,37 (2 H, d, J 4,8, S- H), 8,59 (2 H, s, Ar-OH), 9,26 (2 H, s, 0-H), 9,36 (2 H, d, J 4,8, 0-H); &(125 MHz; (CD³)²CO) 13,5 (CH³), 22,5 (CH²), 28,9 (CH²), 29,1 (CH²), 29,2 (CH²), 29,3 (CH²), 29,4 (CH²), 29,5 (CH²), 29,6 (CH²), 30,2 (CH²), 31,8 (CH²), 34,9 (CH²), 38,2 (CH²), 73,9 (S-C), 112,7 (meso-C), 122,7 (meso-C), 124,1 (S-C), 125,1 (S-C), 130,1 (S-C), 134,8 (a-C), 140,5 (a-C), 143,1 (Ar), 152,6 (a-C), 162,6 (a-C); m/z (IE) 874 ([M - H²O]+, 1 %), 705 ([M - H²O - C¹²H²⁵]+, 1).

3.5 Ejemplo de referencia: Preparación de 5,10,15-trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina y 5.10.15- tri hexil-17,18-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de tetraóxido de osmio (100 mg, 0,39 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (10 ml) a una solución agitada de 5,10,15-trihexil-20-(4-metoxicarbonilfenil)-porfirina (212 mg, 0,30 mmol) en diclorometano/piridina al 30 % (45 ml). Después de agitar durante 13 días, se añadió una solución saturada de bisulfito de sodio en agua/metanol 1:1 (40 ml) y la mezcla se agitó durante 18 h. La mezcla de reacción se filtró a través de Celite y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y el residuo se purificó mediante cromatografía ultrarrápida repetida con diclorometano/acetato de etilo 95:5 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol acuoso. La primera banda de la columna contenía material de partida (103 mg, 49 %), la segunda banda, el compuesto del título 5,10,15-trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina (48 mg, 22 %) y la tercera banda, el compuesto del título 5,10,15-trihexil-17,18-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-clorina (34 mg, 15 %).

5.10.15- Trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 109-111 °C; /máx(CH²Ch)/nm 410 (£/dm3 mol-1 cm'1146100), 430 (121700), 527 (12400), 556 (16300), 596 (7400), y 649 (14900); 5^h(500 MHz; CDCh) -2,15 (2 H, s a, NH), 0,90-0,94 (6 H, m, 2 x CH³), 0,95 (3 H, t, J 7,0, CH³), 1,31-1,47 (12 H, m, 6 x CH²), 1,59-1,71 (6 H, m, 3 x CH²), 1,97-2,12 (4 H, m, 2 x CH²), 2,17-2,29 (2H, m, CH²), 4,02-4,37 (9H, m, 3 x CH², OCH³), 6,14-6,17 (2H, m, j3-H), 8,11-8,22 (2 H, m a, Ar), 8,38 (2 H, d, J 8,3 Hz, Ar), 8,42 (1 H, d, J 4,4, j3-H), 8,59 (1 H, d, J 4,8, j3-H), 8,61 (1 H, d, J4,7, j3-H), 8,73 (1 H, d, J4,7, j3-H), 8,94 (1 H, d, J4,8, ^-H), 8,99 (1 H, d, J 4,4, ^-H); 5c(125 MHz; CDCh) 14,29 (CH³), 14,33 (CH³), 22,86 (CH²), 22,89 (CH²), 22,94 (CH²), 30,33 (CH²), 30,34 (CH²), 30,38 (CH²), 31,95 (CH²), 32,01 (CH²), 32,03 (CH²), 33,24 (CH²), 33,59 (CH²), 36,57 (CH²), 36,68 (CH²), 38,09 (CH²), 52,56 (OCH³), 73,33 (0-C), 73,83 (0-C), 112,20 (meso-C), 112,24 (meso-C), 119,32 (meso-C), 121,83 (0-C), 122,24 (meso-C), 122,43 (0-C), 124,87 (0-C), 127,97 (Ar), 128,01 (0-C), 129,52 (Ar), 129,67 (0-C), 132,61 (0-C), 134,19 (Ar), 134,61 (a-C), 139,42 (a-C), 140,38 (a-C), 147,34 (Ar), 151,53 (a-C), 152,94 (a-C), 159,70 (a-C), 161,12 (a-C), 167,56 (CO²CH³); m/z (IEN) 731,4485 ([M H]+ C⁴⁶H⁵⁹N⁴O⁴+ requiere 731,4531).

5,10,15-Trihexil-17,18-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-dorina

sólido microcristalino violeta /máx(CH²Ch)/nm 409 (£/dm3 mol-1 cm-1 209900), 43 0 (167300), 527 (17900), 554 (22200), 595 (10300) y 647 (19800); 5^h(500 MHz; CDCh) - 1,86 (2 H, s a, NH), 0,92-0,97 (9 H, m, 3 x CH³), 1,34­ 1,51 (12 H, m, 6 x CH²), 1,67-1,76 (6 H, m, 3 x CH²), 2,07-2,29 (2 H, m, CH²), 2,34-2,42 (4 H, m, 2 x CH²), 4,06 (3 H, s, 5 OCH³), 4,21-4,28 (1 H, m, HCH), 4,34-4,40 (1 H, m, HCH),4,52-4,59 (4 H, m, 2 x CH²), 6,01 (1 H, d, J 7,2, ^-H), 6,26 (1 H, d, J 7,2, ^-H), 7,79-7,90 (2 H, m a, Ar), 8,08 (1 H, d, J 5,0, ^-H), 8,23-8,33 (2 H, m a, Ar), 8,91 (1 H, d, J 5,0, |0-H), 9,05 (1 H, d, J 5,0, ^-H), 9,09 (2 H, s, ^-H), 9,13 (1 H, d, J 7,2, ^-H), 5c (125 MHz; CDCh) 14,30 (CH³), 14,33 (CH³), 22,87 (CH²), 22,91 (CH²), 22,95 (CH²), 30,37 (CH²), 30,42 (CH²), 32,00 (CH²), 32,01 (CH²), 32,09 (CH²), 33,34 (CH²), 35,30 (CH²), 35,58 (CH²), 36,61 (CH²), 38,15 (CH²), 38,33 (CH²), 52,51 (OCH³), 73,52 (0-C), 73,85 (0-C), 110,27 (meso-C), 112,26 (meso-C), 121,92 (0-C), 122,91 (meso-C), 122,93 (meso-C), 123,60 (0-C), 124,83 (0-C), 125,67 (0-C), 128,65 (Ar), 129,18 (Ar), 129,54 (Ar), 129,92 (0-C), 130,21 (0-C), 132,34 (Ar), 133,90 (Ar), 134,41 (a-C), 135,08 (a-C), 139,21 (a-C), 140,87 (a-C), 146,75 (Ar), 152,35 (a-C), 152,76 (a-C), 158,99 (a-C), 161,59 (a-C), 167,30 (CO²CH³); m/z (IE) 730 ([M]+, 29 %), 712 ([M - H²OE 100), 697 ([M - 2 OH]+, 42), 641 ([M - H²O - C⁵H¹¹E 57), 623 ([M - 2 OH - C⁵H¹¹]-, 71); m/z EMAR (IE) 730,4454 ([M]+, C⁴⁶H⁵⁸N⁴O⁴+ requiere 730,4453).

Ejemplo 4

Preparación de clorinas sustituidas con carboxi asimétricas

4.1 Ejemplo de referencia: Preparación de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (100 mg, 1,8 mmol) en metanol (1 ml) a una solución agitada de 5,15-dihexil-7,8-dihidroxi-10,20-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-clorina (20 mg, 0,016 mmol) en THF (3 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso (18 mg, 92 %).

,15-Bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-dorina

sólido microcristalino violeta, pf >300 °C; /máx((CHa)²CO)/nm 407 (£/dm3 mol-1 cm"1154700), 427 (130300), 521 (13600), 548 (15300), 594 (6500) y 646 (17600); 5h(500 MHz; (CD³)²SO) -2,05 (1 H, s, NH), -1,85 (1 H, s, NH), 0,84 (3 H, t, J 7,3 Hz, CH³), 0,91 (3 H, t, J 7,3, CH³), 1,24-1,48 (8 H, m, 4 x CH²), 1,64-1,67 (2 H, m, CH²), 1,69-1,75 (2 H, m, CH²), 2,12-2,23 (2 H, m, CH²), 2,25-2,31 (2 H, m, CH²), 4,35-4,41 (1 H, m, HCH), 4,57-4,64 (1 H, m, HCH), 4,66­ 4,72 (2 H, m, CH²), 5,40 (1 H, s a, OH), 5,86 (1 H, s a, OH), 6,09 (1 H, d, J 6,9, 0-H), 6,40 (1 H, d, J 6,9, 0-H), 8,02­ 8,35 (10 H, m, 8 x Ar, 2 x 0-H), 64 (1 H, d, J 5,0, 0-H), 9,19 (1 H, d, J 4,7, 0-H), 9,24 (1 H, d, J 5,0, 0-H), 9,45 (1 H, d, J 5,2, 0-H); 5c(125 MHz; (CDâ SO) 13,93 (CH³), 14,02 (CH³), 22,10 (CH²), 22,23 (CH²), 29,30 (CH²), 29,67 (CH²), 31,27 (CH²), 31,36 (CH²), 33,88 (CH²), 111,99 (meso-C), 113,10 (meso-C), 119,32 (meso-C), 122,64 (0-C), 123,87 (0-C), 127,79 (Ar), 128,23 (0-C), 132,40 (S-C), 133,59 (Ar), 146,10 (Ar), 146,46 (Ar) 167,50 (CO²H), 167,67 (CO²H); m/z (IEN) 753,3664 ([M H]+, C⁴⁶H⁴⁹N⁴O⁶+ requiere 753,3647).

4.2 Preparación de 5,20-bis-(4-carboxifenil)-10,15-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (200 mg, 3,6 mmol) en metanol (1 ml) a una solución agitada de 5,20-dihexil-7,8-dihidroxi-10,15-bis-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-dorina (35 mg, 0,045 mmol) en THF (3 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título 5,20-bis-(4-carboxifenil)-10,15-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso (31 mg, 91 %).

5,20-Bis-(4-carboxifenil)-10,15-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf >300 °C; /máx((CHa)²CO)/nm 407 (£/dm3 mol-1 cm-1 122800), 427 (96000), 523 (10100), 548 (11500), 595 (4600) y 646 (13900); 5^h(500 MHz; (CDa^CO) -1,88 (1 H, s, NH), -1,74 (1 H, s, NH), 0,91 (3 H, t, J 7,3 Hz, CH³), 0,96 (3 H, t, J 7,3, CH³), 1,34-1,56 (8 H, m, 4 x CH²), 1,75-1,85 (4 H, m, 2 x CH²), 2,28-2,46 (4 H, m, 2 x CH²), 4,44-4,50 (1 H, m, HCH), 4,65-4,72 (1 H, m, HCH), 4,77 (2 H, m6 CH²), 6,33 (1 H, d, J 7,0, 0-H), 6,53 (1 H, d, J 7,0, 0-H), 8,24 (1 H, d, J 4,9, 0-H), 8,00-8,40 (8 H, m a, Ar), 8,42 (1 H, d, J 4,5, 0-H), 8,56 (1 H, d, J 4,9, 0-H), 9,21 (1 H, d, J 4,5, 0-H), 9,30 (1 H, d, J 5,0, 0-H), 9,56 (1 H, d, J 5,0, 0-H); <5c(125 MHz; (CDa^SO) 14,00 (CH³), 14,10 (CH³), 22,19 (CH²), 22,33 (CH²), 29,38 (CH²), 29,76 (CH²), 31,33 (CH²), 31,44 (CH²), 32,86 (CH²), 34,39 (CH²), 36,16 (CH²), 38,12 (CH²), 72,91 (S-C), 73,13 (S-C), 111,93 (meso-C), 113,17 (meso-C), 119,45 (meso-C), 122,66 (S-C), 124,10 (0-C), 126,43 (0-C), 127,44 (0-C), 127,92 (Ar), 129,52 (Ar), 130,20 (S-C), 132,11 (S-C), 133,76 (a-C), 133,87 (Ar), 134,29 (a-C), 139,06 (a-C), 140,04 (a-C), 145,84 (Ar), 146,22 (Ar), 150,78 (a-C), 152,25 (a-C), 163,07 (a-C), 163,91 (a-C), 167,53 (CO²H), 167,71 (CO²H); m/z (IEN) 753,3637 ([M H]+, C⁴⁶H⁴⁹N⁴O⁶+ requiere 753,3647).

4.3 Ejemplo de referencia: Preparación de 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-17,18-dihidroxi-17,18-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (100 mg, 1,8 mmol) en metanol (0,5 ml) a una solución agitada de 5,10,15-trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-7,8-dorina (12 mg, 0,016 mmol) en THF (2 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-17,18-dihidroxi-17,18-clorina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso (10 mg, 87 %).

5-(4-Carboxifenil)-10,15,20-trihexil-17,18-dihidroxi-17,18-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 134 °C; /máx((CH3)²CO)/nm 408 (£/dm3 mol-1 cm-188600), 428 (73300), 526 (8500),

553 (9200), 595 (4300) y 649 (7400); 5^h(500 MHz; (CD3)²CO) -1,98 (1 H, s, NH), -1,96 (1 H, s, NH), 0,88-0,98 (9 H, m, 3 x 1,33-1,55 (12 H, m, 6 x CH²), 1,73-1,85 (6 H, m, 3 x CH²), 2,20-2,45 (6 H, m, 3 x CH²), 4,38-4,47 (2 H, m, CH²), 4,60-4,67 (2 H, m, CH²), 4,75 (2 H, mc, CH²), 5,30 (1 H, s a, COOH), 6,57 (2 H, s, j3-H), 8,19 (2H, d, J 8,1 Hz,

Ar), 8,38 (1 H, d, J 4,5, j3-H), 8,41 (2 H, d, J8,1, Ar), 8,64 (1 H, d, J 4,9, j3-H), 9,16-9,18 (2 H, m, j3-H), 9,24 (1 H, d,

J5,0, j3-H), 9,49 (1 H, d, J5,0, j3-H); 5c(125 MHz; (CD3)²CO) 14,37 (CH3), 14,44 (CH3), 14,47 (CH3), 23,40 (CH²), 23,50 (CH²), 23,54 (CH²), 30,77 (CH²), 31,04 (CH²), 31,09 (CH²), 32,64, (CH²), 32,71 (CH²), 32,74 (CH²), 34,12

(CH²), 34,49 (CH²), 35,54 (CH²), 37,24 (CH²), 37,37 (CH²), 39,06 (CH²), 74,14 (j3-C), 74,28 (j3-C), 11 113,70 (meso-C), 119,70 (meso-C), 122,71 (meso-C), 123,05 (j3-C), 123,13 (j3-C), 126,16 (j3-C), 128,42 (j3-C), 128,88 (Ar), 130,50 (j3-C), 130,79 (a-C), 133,08 (j3-C), 134,83 (Ar), 135,70 (a-C), 140,53 (a-C), 141,03 (a-C), 148,04

(Ar), 152,14 (a-C), 153,83 (a-C), 163,12 (a-C), 164,13 (a-C), 167,87 (CO²H); m/z (IEN) 717,43 99 ([M H]+ C⁴⁵H⁵⁷N⁴O⁴+ requiere 717,4374).

4.4 Ejemplo de referencia: Preparación de 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

En un experimento típico, se añadió una solución de KOH (200 mg, 3,6 mmol) en metanol (1 ml) a una solución agitada de 5,10,15-trihexil-17,18-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonilfenil)-17,18-clorina (25 mg, 0,034 mmol) en THF

(3 ml) y la mezcla de reacción se agitó durante 2 d. A continuación, se añadieron agua (50 ml) y ácido clorhídrico hasta que el pH se ajustó a 4-6. La capa acuosa se extrajo con diclorometano (2 x 100 ml) y la capa orgánica se separó, se lavó con agua hasta neutralidad y se secó sobre sulfato de sodio. El disolvente se evaporó y se obtuvo el compuesto del título 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina después de la recristalización en diclorometano/metanol acuoso (22 mg, 90 %).

5-(4-Carboxifenil)-10,15,20-trihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

sólido microcristalino violeta, pf 128-133 °C; /máx((CH3)²CO)/nm 404 (£/dm3 mol'1 cm'1152200), 428 (114600), 525 (13300), 550 (15900), 595 (6600) y 647 (18200); 5^h(500 MHz; (CD3)²CO) -1,78 (1 H, s, NH), -1,59 (1 H, s, NH), 0,87­

0,96 (9 H, m, 3 x CH³), 1,30-1,53 (12 H, m, 6 x CH²) 1,68-1,80 (6 H, m, 3 x CH²), 2,18-2,27 (1 H, m, HCH), 2,29-2,42

(5 H, m, 2 x CH², HCH), 4,32-4,82 (1 H, m, HCH), 4,54-4,60 (1 H, m, HCH), 4,61-4,72 (4 H, m, 2 x 6,17 (1 H, d, J 7,1

S-H), 6,40 (1 H, d, J 7,1 S-H), 7,89-7,95 (1 H, m a, Ar), 8,11-8,16 (1 H, m, Ar), 8,17 (1 H, d, J 4,9, S-H), 8,22-8,36 (2

H, m a, Ar), 9,14 (1 H, d, J 5,0, S-H), 9,16 (1 H, d, J4,7, S-H), 9,18 (1 H, d, J4,7, S-H), 9,26 (1 H, d, J 4,9, S-H), 9,41

(1 H, d, J 5,0, S-H); 5c(125 MHz; (CD³^CO) 14,37 (CH³), 14,40 (CH³), 14,46 (CH³), 23,38 (CH²), 23,42 (CH²), 23,51

(CH²), 30,73 (CH²), 30,79 (CH²), 31,05 (CH²), 32,62, (CH²), 32,63 (CH²), 32,72 (CH²), 33,93 (CH²), 35,4 35,82 (CH²), 37,16 (CH²), 38,92 (CH²), 39,12 (CH²), 73,88 (S-C), 74,55 (S-C), 112,13 (meso-C), 113,2 122,71 G0-C), 122,93 (meso-C), 122,96 (meso-C), 124,48 (S-C), 125,68 (S-C), 126,56 (S-C), 130,22 (a-C), 130,67

(S-C), 130,98 (S-C), 135,07 (a-C), 135,70 (a-C), 140,12 (a-C), 141,49 (a-C), 148,03 (Ar), 153,09 (a-C), 153,50 (a-C),

162,07 (a-C), 164,25 (a-C), 168,01 (CO²H); m/z (IEN) 717,4356 ([M H]+ C⁴⁵H⁵⁷N⁴O⁴+ requiere 717,4374).

Ejemplo 5

Ejemplos de referencia

Preparación de porfirmas que contienen restos de hidrato de carbono

5 Preparación de 5,15-dihexil-10,20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina y 5,10-dihexil-15,20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina

En un experimento típico, se colocó diclorometano seco (528 ml) en un matraz de tres bocas equipado con un agitador magnético y entrada de gas argón. Después de que se añadiesen pirrol (528 ml, 7,62 mmol), heptanal

(560 ml, 3,96 mmol) y tetraacetil-S-D-glucopiranosiloxi-benzaldehído (600 mg, 1,32 mmol), el matraz se protegió de

la luz ambiental y se añadió TFA (408 ml, 5,28 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 18 h. A continuación, se añadió DDQ (898 mg, 3,96 mmol) suspendido en diclorometano seco (30 ml).

Después de agitar adicionalmente durante 1 h, se añadió trietilamina (1 ml). Para retirar los subproductos poliméricos, la mezcla de reacción se filtró a través de gel de sílice. El disolvente se evaporó y la purificación se consiguió a través de cromatografía ultrarrápida repetida con hexano/acetato de etilo 60:40 y diclorometano/acetato

de etilo 90:10 como eluyente, seguida de recristalización en diclorometano/metanol. La primera banda de la columna contenía 5,10,15,20-tetrahexil-porfirina (51 mg, 8 %), la segunda banda 5,10,15-trihexil-20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina (145 mg, 11 %), la tercera banda, el compuesto del título 5,15-dihexil-10,20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina (33 mg, 4 %) y la cuarta banda contenía el compuesto del título 5,10-dihexil-15,20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina (57 mg, 7 %).

5,15-Dihexil-10,20-bis-(3-S-D-acetoglucosilfenil)-porfirina

sólido microcristalino violeta, 5^h(500 MHz; CDCla) -2,72 (2 H, s, NH), 0,91-0,96 (6 H, m, 2 x CH³), 1,31-1,33 (6 H, m,

Ac), 1,36-1,43 (4 H, m, 2 x CH²), 1,48-1,56 (4 H, m, 2 x CH²), 1,77-1,84 (4H, m, 2 x CH²), 1,98 (6H, s, Ac), 2,04 (6H, s, Ac), 2,11 (6H, s, Ac), 2,49-2,55 (4 H, m, 2 x CH²), 3,76-3,81 (2 H, m, H-5 'osa'), 4,03-4,07 (2 H, m, H-6 'osa') 4,14­

4,18 (2 H, m, H-6 'osa'), 4,94-5,00 (4 H, m, 2 x CH²), 5,15-5,20 (2 H, m, H-4 'osa'), 5,31-5,34 (2 H, m, H-2/3 'osa'), 5,3

5-5,37 (2 H, m, H-l 'osa'), 5,39-5,42 (2 H, m, H-2/3 'osa'), 7,43-7,46 (2 H, m, Ar), 7,66-7,69 (2 H, m, Ar), 7,84-7,87 (2

H, m, Ar), 7,92-7,95 (2 H, m, Ar), 8,89 (4 H, d, J 4,7, S-H), 9,43-9,46 (4 H, m, S-H); 5c(125 MHz; CDCla) 14,23 (CH³),

19,96 (COCH³), 20,60 (COCH³), 20,69 (COCH³), 20,81 (COCH³), 22,82 (CH²), 3 0,31 (CH²), 31,99 (CH² (CH²), 38,88 (CH²), 61,99 (C-6 'osa'), 68,38 (C-4 'osa'), 71,40 (C-2/3 'osa'), 72,26 (C-5 'osa'), 72,89 (C-2/3 'osa'), 99,3

8 (C-l 'osa'), 116,71 (Ar), 118,10 (meso- C), 120,21 (meso-C), 122,77 (Ar), 127,67 (Ar), 128,07 (S-C), 129,94 (Ar),

131,70 (S-C), 144,31 (Ar), 155,34 (Ar), 169,44 (2 x COCH³), 170,30 (COCH³), 170,45 (COCH3); m/z (IEN) 1323,5

([M H]+ C⁷²H⁸³N⁴O²⁰+ requiere 1323,6).

,10-D¡hex¡l-15,20-b¡s-(3-í6-D-acetoglucos¡lfen¡l)-porf¡rina

sólido m¡crocr¡stal¡no v¡oleta, 5^h(500 MHz; CDCls) -2,71 (2 H, s, NH), 0,95-0,98 (6 H, m, 2 x CHa), 1,32-1,38 (6 H, m, Ac), 1,40-1,47 (4 H, m, 2 x CH2), 1,52-1,59 (4 H, m, 2 x CH2), 1,82-1,89 (4 H, m, 2 x CH2), 1,98-2,01 (6 H, m, Ac), 2.04- 2,05 (6 H, m, Ac), 2,10-2,12 (6 H, m, Ac), 2,52-2,61 (4 H, m, 2 x CH2), 3,75-3,84 (2 H, m, H-5 'osa'), 4,02-4,07 (2 H, m, H-6 'osa') 4,14-4,21 (2 H, m, H-6 'osa'), 5,00-5,04 (4 H, m, 2 x CH2), 5,15-5,21 (2 H, m, H-4 'osa'), 5,30-5,43 (6 H, m, H-l, H-2, H-3 'osa'), 7,41-7,45 (2 H, m, Ar), 7,63-7,70 (2 H, m, Ar), 7,82-7,95 (4 H, m, Ar), 8,76-8,79 (2 H, m, 10-H), 8,87-8,91 (2 H, m, ^-H), 9,45-9,49 (2 H, m, ^-H), 9,59 (2 H, s, ^-H); 5c(125 MHz; CDCh) 14,25 (CH³), 19,96 (COCH³), 20,61 (COCH³), 20,69 (COCH³), 20,80 (COCH³), 22,85 (CH²), 30,41 (CH²), 32,02 (CH²), 35,84 (CH²), 39,05 (CH²), 62,01 (C-6 'osa'), 68,39 (C-4 'osa'), 71,39 (C-2/3 'osa'), 72,27 (C-5 'osa'), 72,89 (C-2/3 'osa'), 99,24 (C-l 'osa'), 116,52 (Ar), 117,75 (meso-C), 120,68 (meso- C), 122,79 (Ar), 129,95 (Ar), 129,94 (Ar), 143,97 (Ar), 155,45 (Ar), 169,45 (2 x COCH³), 170,31 (COCH³), 170,47 (COCH³); m/z (IEN) 1323,5 ([M H]+ C⁷²H⁸³N⁴O²⁰+ requ¡ere 1323,6).

Ejemplo 6

Ensayos en células de compuestos selecc¡onados en la línea celular HT 29

La act¡v¡dad fotosens¡b¡l¡zadora se determ¡nó en la línea celular de adenocarc¡noma de colon humano HT29. Las líneas celulares HT29 se cult¡varon en DMEM (cc-pro GmbH) complementado con suero de ternera fetal ¡nact¡vado por calor al 10 % (FCS, cc-pro GmbH), pen¡c¡l¡na al 1 % (10000 UI) y estreptom¡c¡na (10000 pg/ml, cc-pro GmbH). Las células se mantuv¡eron como un cult¡vo monocapa en una ¡ncubadora hum¡d¡f¡cada (C02 al 5 % en el a¡re a 37 °C.

Se real¡zó una soluc¡ón madre de fotosens¡b¡l¡zador (2 mM) en DMSO y se mantuvo en la oscur¡dad a 4 °C. Se real¡zó una d¡luc¡ón ad¡c¡onal en med¡o RPMI 1640 s¡n rojo fenol complementado con FCS al 10 % para alcanzar una concentrac¡ón f¡nal de fotosens¡b¡l¡zador de 2 o 10 pM, respect¡vamente.

Se sembraron 2^104 células/ml en m¡croplacas (2^105 células/poc¡llo). Las células se ¡ncubaron con med¡o fresco (RPMI s¡n rojo fenol) que contenía FCS al 10 % con 2 o 10 pM del fotosens¡b¡l¡zador durante 24 h antes de la expos¡c¡ón a la luz. Antes de la fotosens¡b¡l¡zac¡ón, las células se lavaron, se ¡ncubaron con RPMI s¡n rojo fenol y FCS al 10 %, a cont¡nuac¡ón se ¡rrad¡aron a temperatura amb¡ente con un láser de d¡odo de 652 nm (Ceralas TFD 652, b¡ol¡tec AG) a una veloc¡dad de fluenc¡a f¡ja de 100 mW/cm2 (50 J/cm2). Después de la ¡rrad¡ac¡ón, las células se ¡ncubaron en una ¡ncubadora hum¡d¡f¡cada (CO² al 5 % en a¡re a 37 °C) durante 24 h hasta el ensayo de v¡ab¡l¡dad celular.

La v¡ab¡l¡dad celular se evaluó med¡ante el ensayo XTT. Se d¡solv¡eron 500 mg de XTT (ác¡do 3'-[fen¡lam¡nocarbon¡l)-3.4- tetrazol¡o]-b¡s(4-metox¡-6-n¡tro)bencenosulfón¡co sód¡co, Appl¡chem GmbH) en 500 ml de tampón de PBS (s¡n Ca2+ y Mg2) y se ester¡l¡zaron med¡ante f¡ltrac¡ón. La soluc¡ón se almacenó en la oscur¡dad a -20 °C hasta su uso. Se neces¡taba una soluc¡ón estér¡l que contuv¡era PMS (sulfato de N-met¡l d¡benzop¡raz¡na met¡lo, Appl¡chem GmbH) como react¡vo de act¡vac¡ón para el XTT. Se d¡solv¡eron 0,383 mg de PMS en 1 ml de tampón de PBS. La soluc¡ón debe almacenarse congelada y no debe exponerse a la luz. La soluc¡ón de react¡vo XTT se descongeló en un baño de agua a 37 °C y la soluc¡ón de act¡vac¡ón (PMS) se añad¡ó ¡nmed¡atamente antes de su uso. Para preparar una soluc¡ón de reacc¡ón suf¡c¡ente para una m¡croplaca (96 poc¡llos), se proporc¡onaron 0,1 ml de soluc¡ón de act¡vac¡ón (PMS) a 5 ml de react¡vo XTT. El med¡o en la m¡croplaca se ¡ntercamb¡ó con RPMI fresco s¡n rojo fenol y FCS al 10 % (100 pl) antes de añad¡r 50 pl de soluc¡ón de reacc¡ón XTT por poc¡llo. La m¡croplaca se ¡ncubó durante 2-3 horas a 37 °C y CO2 al 5 % hasta que se formó un colorante naranja. La m¡croplaca se ag¡tó suavemente para d¡str¡bu¡r un¡formemente el colorante en los poc¡llos.

La absorbanc¡a de las muestras se m¡d¡ó con un espectrofotómetro (B¡o-K¡net¡cs Reader EL312 e; B¡o-Tek Instruments Inc.) a una long¡tud de onda de 490 nm. Para med¡r la absorbanc¡a de referenc¡a (para med¡r lecturas no específ¡cas) se ut¡l¡zó una long¡tud de onda de 630-690 nm.

Los ejemplos 6.1 a 6.3 ¡lustran la act¡v¡dad fotod¡nám¡ca (TO s¡gn¡f¡ca tox¡c¡dad a oscuras y Láser s¡gn¡f¡ca fototox¡c¡dad) de fotosens¡b¡l¡zadores que t¡enen un patrón de sust¡tuc¡ón como aquel al que se hace referenc¡a en la presente invención. Los tres fotosensibilizadores tienen un patrón de sustitución A²B² de los sustituyentes meso, combinando dos sustituyentes meso polares y dos no polares. Especialmente la 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-dorina presenta una actividad fotodinámica muy fuerte en la línea celular HT29, que se sabe que es muy resistente contra agentes tóxicos para las células y la TFD también.

Los ejemplos 6.4 a ^{6 .6} se incluyen para ilustrar que los fotosensibilizadores de clorina que no tienen un patrón de sustitución como aquel al que se hace referencia en la presente invención no presentan una actividad fotodinámica prometedora en los experimentos con células. Los tres fotosensibilizadores en este caso se basan en un patrón de sustitución A³B de los sustituyentes meso. De hecho, en el ejemplo ⁶.⁶ , donde hay tres cadenas hexilo y un grupo éster benzoico en las posiciones meso, la viabilidad celular parece aumentar (!) con irradiación (para una concentración de fotosensibilizador de 10 |^j M, véase a continuación).

6.1 Ensayo en células de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

6.2 Ensayo en células de 5,20-bis-(4-carboxifenil)-10,15-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

. nsayo en c uas e , - s- -car ox en - , - ex-por rna

¡ayo en células de 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-7,8-dihidroxi-7,8-dorina

^m HT29

140

120

100

80

B

40

20

0

.5 Ensayo en células de 5-(4-carboxifenil)-10,15,20-trihexil-17,18-dihidroxi-17,18-dorina

6.6 Ensayo en células de 5,10,15-trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonil-fenil)-7,8-dorina

Ejemplo 7

Ensayos en células de compuestos seleccionados en un sinoviocitos de conejo y una línea celular de macrófagos de ratón, HIG82 y J774A.1

La línea celular de monocitos-macrófagos de ratón J774A.1 y la línea celular de sinoviocitos de conejo HIG-82 se cultivaron en DMEM (cc-pro GmbH) complementado con suero de ternera fetal inactivado por calor al 10 % (FCS, cc-pro GmbH), penicilina al 1 % (10000 UI) y estreptomicina (10000 ug/ml, cc-pro GmbH). Las células se mantuvieron como un cultivo monocapa en una incubadora humidificada (CO2 al 5 % en el aire a 37 °C).

Se realizó una solución madre de fotosensibilizador (2 mM) en DMSO y se mantuvo en la oscuridad a 4 °C. Se realizó una dilución adicional en medio RPMI 1640 sin rojo fenol complementado con FCS al 10 % para alcanzar una concentración final de fotosensibilizador de 2 o 10 ^M, respectivamente.

Se sembraron 2*104 células/ml en microplacas (2*105 células/pocillo). Las células se incubaron con medio fresco (RPMI sin rojo fenol) que contenía FCS al 10 % con 2 o 10 ^M del fotosensibilizador durante 24 h antes de la exposición a la luz. Antes de la fotosensibilización, las células se lavaron, se incubaron con RPMI sin rojo fenol y FCS al 10 %, a continuación se irradiaron a temperatura ambiente con un láser de diodo de 652 nm (Ceralas TFD 652, biolitec AG) a una velocidad de fluencia fija de 100 mW/cm2 (50 J/cm2). Después de la irradiación, las células se incubaron en una incubadora humidificada (CO² al 5 % en aire a 37 °C) durante 24 h hasta el ensayo de viabilidad celular.

La viabilidad celular se evaluó mediante el ensayo XTT. Se disolvieron 500 mg de XTT (ácido 3'-[fenilaminocarbonil)-3,4-tetrazolio]-bis(4-metoxi-6-nitro)bencenosulfónico sódico, Applichem GmbH) en 500 ml de tampón de PBS (sin Ca2+ y Mg2) y se esterilizaron mediante filtración. La solución se almacenó en la oscuridad a -20 °C hasta su uso. Se necesitaba una solución estéril que contuviera PMS (sulfato de N-metil dibenzopirazina metilo, Applichem GmbH) como reactivo de activación para el XTT. Se disolvieron 0,383 mg de PMS en 1 ml de tampón de PBS. La solución debe almacenarse congelada y no debe exponerse a la luz. La solución de reactivo XTT se descongeló en un baño de agua a 37 °C y la solución de activación (PMS) se añadió inmediatamente antes de su uso. Para preparar una solución de reacción suficiente para una microplaca (96 pocillos), se proporcionaron 0,1 ml de solución de activación (PMS) a 5 ml de reactivo XTT. El medio en la microplaca se intercambió con RPMI fresco sin rojo fenol y FCS al 10 % (100 pl) antes de añadir 50 pl de solución de reacción XTT por pocillo. La microplaca se incubó durante 2-3 horas a 37 °C y CO² al 5 % hasta que se formó un colorante naranja. La microplaca se agitó suavemente para distribuir uniformemente el colorante en los pocillos.

La absorbancia de las muestras se midió con un espectrofotómetro (Bio-Kinetics Reader EL312 e; Bio-Tek Instruments Inc.) a una longitud de onda de 490 nm. Para medir la absorbancia de referencia (para medir lecturas no específicas) se utilizó una longitud de onda de 630-690 nm.

Los ejemplos 7.1 a 7.4 ilustran la actividad fotodinámica de los fotosensibilizadores que tienen un patrón de sustitución al que se hace referencia en la presente invención contra sinoviocitos y macrófagos, tipos de células que son especialmente pertinentes para el tratamiento de la artritis y enfermedades inflamatorias similares. Los cuatro fotosensibilizadores tienen el patrón de sustitución A²B² de los sustituyentes meso, combinando dos sustituyentes meso polares y dos no polares. Especialmente, la 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina y la 5,20-bis-(4-carboxifenil)-10,15-dihexil- La 7,8-dihidroxi-7,8-clorina presentan una actividad fotodinámica muy fuerte en las dos líneas celulares.

El ejemplo 7.5 se incluye nuevamente para ilustrar que los fotosensibilizadores de clorina que no tienen un patrón de sustitución como aquel al que se hace referencia en la presente invención no presentan una actividad fotodinámica prometedora.

7.1 Ensayo en células de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina

. nsayo en c uas e , - s- -car ox en - , - ex- , - rox- , - orna

.3 Ensayo en células de 7,8-dihidroxi-5,10-bis-(3-hidroxifenil)-15,20-bis-(tridecil)-7,8-dorina

.4 Ensayo en células de 5,10-bis-(4-carboxifenil)-15,20-dihexil-porfirina

7.5 Ensayo en células de 5,10,15-trihexil-7,8-dihidroxi-20-(4-metoxicarbonil-fenil)-7,8-dorina

Ejemplo 8

Ensayo en células de una formulación liposómica de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-dorina La formulación liposómica del fotosensibilizador 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-dorina se preparó de manera análoga al procedimiento descrito en la patente de EE.UU. US-7.354.599 B2 de V. Albrecht, A. Fahr y col.

Los ensayos con la formulación liposómica ilustran que los fotosensibilizadores de la presente invención pueden formularse en liposomas con el fin de, por ejemplo, un tratamiento por TFD o de la artritis sin perder su actividad fotodinámica.

La formulación liposómica del fotosensibilizador se puede utilizar, por ejemplo, para influir en la farmacocinética de la absorción y distribución de fotosensibilizadores y aumentar la biodisponibilidad.

8.1 Ensayo en células de una formulación liposómica de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina en la línea celular HT 29

8.2 Ensayo en células de una formulación liposómica de 5,15-bis-(4-carboxifenil)-10,20-dihexil-7,8-dihidroxi-7,8-clorina en las líneas celulares HIG82 y J774A.1

Habiendo descrito realizaciones preferidas de la invención con referencia a los ejemplos adjuntos, debe entenderse que la invención no se limita a las realizaciones precisas, y que los expertos en la técnica pueden efectuar diversos cambios y modificaciones sin apartarse del alcance de la invención como se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (12)

REIVINDICACIONES

1. Una clorina basada en las fórmulas 1, 2 o 3:

R1 es: independientemente un grupo alquilo sin sustituir o un grupo fluoroalquilo que consiste en 4­ 15 átomos de carbono

R2 es independientemente un sustituyente en la posición meta o para del anillo de fenilo con R2 = -OH, -COOH, -COOCH3, -NH2, -COOX, -NHX, OX, -NH-Y-COOH o -CO-Y-NH².

en donde:

X es un resto polietilenglicol con (CH²CH²O)nCH³ con n = 1-30 o un resto hidrato de carbono

Y es péptidos u oligopéptidos en donde n = 1-30.

2. La clorina según la reivindicación 1,

en donde:

R¹ es: un grupo alquilo sin sustituir que consiste en 4-15 átomos de carbono

R² es un sustituyente en la posición meta o para del anillo de fenilo con R² = -OH, -COOH, -NH2.

3. La clorina según la reivindicación 1 o 2,

basada en la fórmula ² y que tiene la fórmula:

4. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia fotodinámica.

5. Uso del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo para la preparación de una composición farmacéutica para terapia fotodinámica.

6. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en terapia fotodinámica de tumores, trastornos dermatológicos, infecciones víricas o bacterianas, trastornos oftalmológicos o trastornos urológicos.

7. El compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el diagnóstico o la terapia fotodinámica de la artritis y enfermedades inflamatorias similares.

⁸. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo como principio activo.

9. Una composición farmacéutica en la que un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o un derivado farmacéuticamente aceptable del mismo está conjugado con un agente de direccionamiento.

10. La composición farmacéutica según la reivindicación 9, en la que un anticuerpo o un fragmento de un anticuerpo es el agente de direccionamiento.

11. La composición farmacéutica según la reivindicación 9 o 10, en la que dicha composición farmacéutica es una formulación liposómica.

12. Una composición farmacéutica que contiene un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que dicha composición farmacéutica es una formulación liposómica.