JP2012500964A - 癌の検出と治療における自己抗体 - Google Patents
癌の検出と治療における自己抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012500964A JP2012500964A JP2011508722A JP2011508722A JP2012500964A JP 2012500964 A JP2012500964 A JP 2012500964A JP 2011508722 A JP2011508722 A JP 2011508722A JP 2011508722 A JP2011508722 A JP 2011508722A JP 2012500964 A JP2012500964 A JP 2012500964A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cancer
- antibody
- autoantibody
- antigen
- autoantibodies
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
【選択図】 なし
Description
本研究は、部分的に米国国立保健研究所、国立癌研究所からNCI助成金5RO1−CA109384−03の援助を受けた。従って米国政府は本発明に一定の権利を有する。
この発明は、癌の検出及び治療における自己抗体の使用法に関する。
肺癌を例に取ると、非侵襲的画像化における進歩により肺癌の検出能は改善されたが、75%以上の肺癌患者は、病期の進展を示す状態にあり、治療上の選択肢が限られている(非特許文献1)。臨床的に第1期肺癌を示す患者は、高々60%の5年生存率を有し、全ての第1期患者の大部分が、診察時に検出できない転移性疾患を有している(非特許文献1)。これらの統計から、初期の検出方法における改善の必要性がはっきり分かる。
さらに、肺癌は、いかなる他の悪性腫瘍よりも多くの癌死の原因となる。診断能力及び治療における進歩にも拘わらず、肺癌死亡率は、過去数十年の間顕著に変化しなかった。化学療法及び放射線療法を含む治療上の選択肢が殆ど治癒的でない場合、多くの患者は、手術不能な疾患を示す。
癌の可能性のある患者の治療を管理する方法をもまた開示する。幾つかの実施態様において、この方法は、(1)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程、及び(2)この癌関連自己抗体の有無又は量に基づいて、癌の可能性のある患者の治療を管理する工程から成る。
腫瘍又は腫瘍と疑われる病変の分子病期を区分する方法をもまた開示する。幾つかの実施態様において、この方法は、(1)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程、及び(2)この癌関連自己抗体の有無又は量に基づいて、腫瘍又は腫瘍と疑われる病変の分子病期区分を決定する工程から成る。
本願発明の方法において、検体は血清検体又は血液検体であってもよい。また本願発明において、患者はヒト患者であってもよい。
従って、本発明の目的は、癌を検出し治療するための新規方法及び組成物を提供することである。この目的及び他の目的は、本発明により全体として、又は部分的に達成される。
以上の本発明の目的、他の目的及び利点は、以下の記載、図面及び実施例の吟味により明らかとなるであろう。
他に定義をしなければ、本明細書で用いた全ての技術及び科学用語は、本発明が属する技術分野の1人により通常理解されると同じ意味を持つ。本明細書で述べた全ての発刊物、特許出願、特許及び他の引例については、その全体を本明細書の引例に取り込む。
以下の用語は、当業者に良く理解されていると信ずるが、本発明の説明を助けるために以下の定義を示す。
長年の特許法慣習に従い用語"a(1つ、ある)"及び"an(1つ、ある)"は、請求の範囲を含めて本申請で用いる際"1又はそれ以上"を表す。
もし他に指示されなければ、この明細書及び請求の範囲で用いられる、含有物、反応条件、等々の量を表す数字は、全ての場合に用語"約"により修正されたと理解すべきである。従って、これと逆に指示されなければ、この明細書及び添付された請求の範囲において示されたパラメーターの数値範囲は、本発明により求めて得られる好ましい特性に依存して変化することができる近似である。
本明細書に用いるように、用語"検体"は、その最も広い意味で用いられる。ある意味では、生物源からの試料を含むことを意味する。生物的検体は、動物(ヒトを含む)から得ることができて、及び流動体、固体、組織及び気体に及ぶことができる。生物的検体は、血漿、血清等々の様な血液産物を含む。
本明細書で用いるように、用語"患者"は、ヒト、ヒト以外の霊長類、囓歯類等々を含む、がこれらに限らない、如何なる動物(即ち、哺乳動物)をも表し、これは特別な治療の受容者である。用語"患者"及び"病人"は、本明細書において互換的に用いられ、ヒト患者に限らない。
本明細書で用いるように、用語"癌の危険性のある患者"は、癌進行のための1又はそれ以上の危険因子を持つ患者を表す。
II.A.検出方法
幾つかの実施態様において、本発明は、血液検体を含むが、これに限らない、検体から患者の癌を検出する方法を提供する。幾つかの実施態様において、本発明は、患者の血清中に特異的抗体の有無を探索することにより行うことができる。これらの抗体の幾つかが存在したとき、癌の可能性がある。癌のない患者は、彼等の血清中にこれらの抗体を持たなくとも良い。
本開示を一読した当業者には自明であるように、癌関連自己抗体の有無及び/又はレベルの測定のために適した如何なる方法も用いることができる。例えば、自己抗体を検出する方法は、精製したタンパク質を用いたイムノブロット、ELISA及び/又はタンパク質検定を含むことができる。
本発明に従い、患者の癌を治療するための組成物及び方法を提供する。本発明は、幾つかの実施態様において、癌を有する患者に有効量の、癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体(幾つかの症例では、これは二重特異性抗体);癌関連自己抗体に対する抗原;又は癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体及び癌関連自己抗体に対する抗原の両者;の投与を含むことができる。
液体組成物はまた、水に加えて、及び水を除いて、液相を含むことができる。このような付加的な液相の例としては、グリセリン、綿の種子油のような植物油、及び水−油乳濁液がある。
幾つかの実施態様において、本発明は、癌関連自己抗体に対する抗原性ポリペプチドを含む治療組成物を提供する。代表的抗原性ポリペプチドとしては、補体因子H(CFH)、α−グルコシダーゼ(GANAB)、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)、α−エノラーゼ、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)、HSP60(60kDa熱ショックタンパク質)、又はこの断片又は類似体が含まれる。更なる、代表的抗原性ポリペプチドとしては、以下に示す表2〜4に掲載した物質を含むが、これらに限らない。
ポリペプチドが必要な阻害活性を示すならば、成句"保存的置換"はまた、ペプチドの非誘導残基の代わりに化学的に誘導された残基の使用を含む。
本発明はまた、幾つかの実施態様において、癌関連自己抗体及び自己抗体を単離する方法及び/又は自己抗体と同じ免疫反応特性(例えば、抗原認識特性)を有する抗体を作成する方法を提供する。このような特性を有する抗体は、"自己抗体類似体"と表すことができる。
従って、成句"癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体"は、本明細書に開示した癌関連自己抗体それ自体又は自己抗体類似体を含むことができるが、これらに限らない。さらに、癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体は、本明細書において前述のように二重特異的抗体であることができる。
種々の文法形態で用いる、成句"モノクローナル抗体"は、特定のエピトープとの免疫反応できる1種類の抗体結合部位を含む抗体分子の集合を表す。従って、モノクローナル抗体は、一般的に如何なる免疫反応を行うエピトープに対しても単一の結合親和性を示す。従って、モノクローナル抗体は、各々は異なるエピトープに対して免疫特異的である複数の抗体結合部位を持つ抗体分子、例えば、二重特異的モノクローナル抗体、を含むことができる。
簡単に述べると、モノクローナル抗体組成物を調製するためのハイブリドーマを作成するために、Cheresh 他., J. Biol Chem, 262:17703-17711 (1987)に記載されているように、ミエローマ又は他の自立増殖能のある細胞株は、抗原により高度免疫化された哺乳動物の脾臓から得たリンパ球と融合する。
脾細胞は一般的に、ポリエチレングリコール(PEG)1500を用いて、ミエローマ細胞と融合される。融合したハイブリッドは、HATに対する感受性により選択される。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、実施例に記載する酵素結合免疫吸着検定(ELISA)を用いて同定される。
モノクローナル抗体、ハイブリドーマ細胞、又はハイブリドーマ細胞培養を産生する他の方法も既知である。例えば、Sastry, 他, Proc Natl Acad Sci USA 86:5728-5732 (1989); 及び Huse他, Science 246:1275-1281 (1989)に記載された様な、免疫学的レパートリーからモノクローナル抗体を単離する方法を参照のこと。
もしあるモノクローナル抗体が、前もって選択した標的分子と本発明のモノクローナル抗体が結合することを妨げるかどうか確認することにより、前者が後者と同じ(即ち、等価な)特異性(免疫反応特性)を持つかどうかについて、必要以上の実験無しに、また決定することが可能である。固相に存在する標的分子との結合に対する標準的競合検定において、本発明のモノクローナル抗体による結合の減少により示されるように、もし検定するモノクローナル抗体が、本発明のモノクローナル抗体と競合するならば、2種のモノクローナル抗体は、同一の、又は密接に関係した、エピトープと結合する可能性がある。
あるモノクローナル抗体が、本発明のモノクローナル抗体の特異性を有するかどうか決定する他の方法は、問題となる抗体のCDR(complementarity determining region, 相補性決定領域)領域のアミノ酸残基配列を決定することである。そのCDR領域に同一の、又は機能的に等価なアミノ酸残基配列を有する抗体分子は、同じ結合特異性を有する。ポリペプチドの配列決定の方法は、当技術分野において既知である。
本発明は、本明細書において実施例を参照してより詳細に開示される。以下代表的実施態様を示す。しかし本発明はこれらと異なる形で具体化可能であり、本明細書に示した実施態様に制限されるように解釈すべきではない。むしろこれらの実施態様は、開示が十分かつ完全であるように提供され、当業者には実施態様の範囲を完全に伝達するであろう。
以下の実施例は、病期初期の肺癌患者における機能的自己抗体の発見に関する。
実施例5は、癌患者におけるα-グルコシダーゼ(GANAB)自己抗体の発見に関し、癌に対する分子マーカーの他の例を提供する。
実施例6及び7は、更なる自己抗体の発見に関し、癌に対するさらなる分子マーカーの例を提供する。
モノクローナル抗体は、多くの悪性腫瘍において、治療試薬として用いられているが、腫瘍に対する宿主免疫応答は、主に細胞免疫によると考えられる(O. J. Finn, J Immunol 178, 2615 (Mar 1, 2007))。非小細胞肺癌(NSCLC)及び大部分の腫瘍における体液性免疫は、良く特徴付けられて居らず、自己抗体は、一般的に、特徴的な臨床的表現形質と関連づけられてない。初期の肺癌患者は、進行した状態の患者が持たない腫瘍細胞タンパク質に対する自己抗体を有するかも知れないこと、及びこれらの自己抗体が、転移を制限する上で機能的働きをするかも知れないことが、仮定された。
この問題に取り組む第1段階として、進行した状態の非小細胞肺癌(NSCLC)の5人の患者のプールした血清を含むイムノブロットを作製した。このブロットを、少なくとも2年間再発のない10人の初期の非小細胞肺癌(NSCLC)患者からの個人個人の血清検体をプローブとして探索した。抗体抗原複合体を検出するために、2次抗ヒトIgG西洋わさびペルオキシダーゼ(HRP)結合物をプローブとしてイムノブロットを探索した。幾つかの異なる免疫反応性バンドが検出されたが、初期疾患の10人の患者中4人に150kDaバンドが見られた(図1A)。
補体因子H(CFH)自己抗体が後期の患者から初期の患者を識別するために用いることができるかどうか決めるために、精製した補体因子H(CFH)をゲルに流し、膜にブロットし、膜を28人の病期Iの患者、28人の病期III/IVの患者からの血清、及び12人の癌のない対照群からの血清をプローブとして探索した。図1Bに代表的検体の結果を示す。全体として、17人のアデノカルシノーマ(ADC)患者の中10人、及び11人の扁平上皮癌(SCC)患者の中4人を含め、28人の非再発病期I非小細胞肺癌(NSCLC)患者の14人(50%)は、CFH自己抗体に対して陽性であり、他方16人のADC患者中2人、及び12人のSCC患者中1人を含め、28人の後期NSCLC患者の3人(10.7%)がこの自己抗体陽性であった。初期と後期のNSCLCにおけるCFH自己抗体の発生率の差異は、統計的に有意であった(p=0.003)。癌のない12人中、誰もCFH自己抗体を持たなかった。
補体因子H(CFH)は、肝臓、単球及びマクロファージにより産生され、分泌する補体阻害タンパク質である。またこれは、肺、結腸、卵巣、膀胱、及び神経膠細胞起源の癌を含め癌細胞と関係することが見出された。 D. Ajona et al., Cancer Res 64, 6310 (Sep 1, 2004); D. Ajona, Y. F. Hsu, L. Corrales, L. M. Montuenga, R. Pio, J Immunol 178, 5991 (May 1, 2007); E. Wilczek et al., Int J Cancer 122, 2030 (May 1, 2008); S. Junnikkala et al., Br J Cancer 87, 1119 (Nov 4, 2002); Z. Z. Cheng et al., Clin Chem 51, 856 (May, 2005); P. Gasque, A. Thomas, M. Fontaine, B. P. Morgan, J Neuroimmunol 66, 29 (May, 1996); S. Junnikkala et al., J Immunol 164, 6075 (Jun 1, 2000)。CD35 (CR1), CD46 (MCP), CD55 (DAF), 及びCD59 (プロテクチン)を含め、CFH及び他の補体調節タンパク質は、補体系による攻撃から腫瘍細胞を防御する。K. Jurianz 他, Mol Immunol 36, 929 (Sep-Oct, 1999)。CFHは、液相において及び膜上で、重要な補体成分C3bに結合することにより補助的な補体経路を阻害する。S. Rodriguez de Cordoba, J. Esparza-Gordillo, E. Goicoechea de Jorge, M. Lopez-Trascasa, P. Sanchez-Corral, Mol Immunol 41, 355 (Jun, 2004)。これは、因子Iを介するタンパク質分解及びC3b不活性化のコファクターとして働き、及び膜上にC3bを産生するC3bBbコンベルターゼの崩壊を加速する。S. Rodriguez de Cordoba, J. Esparza-Gordillo, E. Goicoechea de Jorge, M. Lopez-Trascasa, P. Sanchez-Corral, Mol Immunol 41, 355 (Jun, 2004). C3bの沈殿は細胞溶解性膜攻撃複合体の形成を開始する。K. M. Murphy, P. Travers, M. Walport, Janeway's Immunobiology (Garland Science, London, England, ed. 7th, 2007)
補体因子H(CFH)の主要な機能は、C3bの除去及びC3コンベルターゼC3bBbの不活性化を加速することによる、補体を介した溶解を阻害することである。S. Rodriguez de Cordoba, J. Esparza-Gordillo, E. Goicoechea de Jorge, M. Lopez-Trascasa, P. Sanchez-Corral, Mol Immunol 41, 355 (Jun, 2004)。補体阻害タンパク質に対する抗体の中和は、C3b沈殿を増加させ、他の補体防御タンパク質に対する抗体と共同して、このタンパク質を発現し結合する細胞株における細胞毒性を増加させることが示されてきた。K. Jurianz et al., Mol Immunol 36, 929 (Sep-Oct, 1999)。幾人かの患者が抗CFH抗体を生み出し、及び幾人かは生み出さない理由は、未解決のままである。以前の研究は、溶血性尿毒症症候群(HUS)の患者におけるCFH自己抗体を記載した。M. A. Dragon-Durey et al., J Am Soc Nephrol 16, 555 (Feb, 2005)。この研究におけるどの患者もどんな腎臓疾患を持たないことは、肺癌患者におけるCFH自己抗体は、溶血性尿毒症症候群(HUS)で認識されるエピトープとは異なるエピトープを認識することを示唆する。半数はCFH自己抗体を持つ患者、及び半数は持たない患者由来の、8個の腫瘍の免疫組織化学により、全ての検体において、腫瘍細胞染色が拡散することが分かった。CFHに対して免疫染色した肺腺癌の代表的切片を図4に示す。全ての腫瘍は、CFHを発現するが、全ての患者が抗体を生み出さないという事実は、単なるCFH発現は、患者に抗体応答を生み出すために十分ではないこと、及び抗原がどのように免疫系に提示されているかが重要であることを示唆する。
肺癌の様な、癌の早期検出は、困難な問題として残る。疾患を検出し表現型分けするだけではなく、適切な標的を持つ治療を決めることができる可能性のある新規分子マーカーは莫大な臨床上の恩恵をもたらすであろう。我々は、2つの理由でNSCLC患者における自己抗体を観察することを選択した。第1に、モノクローナル抗体が腫瘍治療に用いられる、及び我々は何人かの患者は、腫瘍の挙動を変えるために自己抗体を利用しているかも知れないと仮定した。第2に、自己抗体は、理論的には、特異的、異常な標的を同定することができて、従って、診断上用いることができるかも知れない。本研究は、腫瘍阻害の可能性のあるメカニズムに注意を向ける自己抗体を発見するための最初の研究である。
患者:
最初の自己抗体スクリーンにおいて、病期III又はIVの非小細胞肺癌(NSCLC)患者5人の血清検体をプールした、及びこのプールを以下の記載のようにイムノブロットした。他の、4人の男性及び6人の女性で、平均年齢66.6歳(年齢範囲57〜72歳)を含む、初期NSCLC患者10人からの血清を別々にブロットに対するプローブとして用いた。肺癌患者の補体因子H(CFH)免疫ブロット測定に対して、28人の患者:病期IのNSCLCを持つ14人の男性及び14人の女性で、平均年齢65.5歳(年齢範囲51〜78歳);及び28人の患者:病期III又はIVのNSCLCを持つ16人の男性及び12人の女性で、平均年齢64歳(年齢範囲41〜83歳);の個人個人の血清検体を用いた。他の、癌を持たない12人の対照患者もまた登録した。本研究にエントリーするために選んだ全ての癌患者は、以下の基準を満たした:1)組織標本からNSCLCと確認した;2)肺癌のために前もって化学療法又は放射線を受けてない;及び3)初期患者に対して、診断後少なくとも2年間再発の証拠がない。全ての血清は、Duke University Medical Center, Durham, North Carolina, USA、での治療前に得た。施設の審査委員会は、医学研究に対する生物試料の採取前に、患者からインフォームドコンセントを得た。血清は、液体窒素で凍結し、−80℃で保存した。
後期NSCLC患者からのヒト血清の解析のために、血清プールの15μl部分を、製造者の指示に従い、最初、アルブミン及びIgG除去キット(GE Healthcare, Piscataway, New Jersey, USA)で処理した。除去した血清中のタンパク質(400μg)を、単一調整用ウェルを備えた10%ポリアクリルアミドゲル中でSDS-PAGEの還元状態で分離し、その後ポリビニリデンジフルオリド(PVDF)膜に移した。このPVDF膜を、多数の検体のためにブロット上のチャンネルを作り出す、Surf-Blot装置(Idea Scientific Company, Minneapolis, Minnesota, USA)中に置いた。精製したタンパク質の解析のために、精製したヒトCFH(Complement Technology Inc., Tyler, Texas, USA)の0.5μg部分をゲルの多数のウェル中で泳動させ、PVDF膜に移した。ブロットをプローブで検出するために、患者血清を50 mM Tris-HCl, 137 mM NaCl, pH 7.6 and 5% (w/v) 無脂肪ドライミルク (MTBS)で1:1000に稀釈した。ヤギ抗ヒトIgGγ鎖−HRP(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California, USA)を第2抗体として用い、及びMTBS中に1:40,000に稀釈した。結合した抗体をSuperSignal West Femto 化学発光検出システム (Pierce, Rockford, Illinois, USA)を用いて検出した。
アルブミン及びIgGを除去した、プールした後期血清の小部分2つを非還元状態で、SDS-PAGEゲルの隣のレーンに泳動させた。多量の血清タンパク質α-2マクログロブリンが、還元状態で、興味の対象のバンドとほぼ同じ分子量で泳動するが、非還元状態では〜320kDaで泳動するので、非還元状態は必要であった。R. Sayegh, J. T. Awwad, C. Maxwell, B. Lessey, K. Isaacson, J Clin Endocrinol Metab 80, 1021 (Mar, 1995)。1方のレーンのタンパク質は、イノブロット解析のためにPVDFに移され、他方のレーンのタンパク質は、Coomassie blueで染色した。イムノブロット解析は、1:1000稀釈した図1Aの血清#5、及び1:40、000稀釈したヤギ抗ヒトγ鎖IgG-HRPを用いて行った。免疫複合体の検出は、Luminol Western Blot HRP Substrate (Boston Bioproducts, Worcester, Massachusetts, USA)で行った。イムノブロットを用いて、同一分子量で泳動したCoomassie染色ゲルのバンドを同定した。その後、このバンド中のタンパク質にゲル内トリプシン消化を行い、MALDI-TOFペプチドフィンガープリント解析及びMS/MS配列決定により同定した。セルロプラスミン及び補体因子3,4A及びHが、切り出したバンドから同定された。血清#5をプローブとして用いて、精製したセルロプラスミン及び補体因子3及びHを含むイムノブロットを探索し、補体因子H(CFH)が免疫反応性タンパク質と同定された。
A549(肺腺癌)及びH661(肺大細胞癌)細胞株をAmerican Type Culture Collectionより得た。A549細胞株は10%FBSを補強したF-12K培地中で維持し、及びH661細胞株は、10%FBS(Invitrogen, Carlsbad, California、USA)を補強したGlutamaxを伴うRPMI1640培地中で維持した。両細胞株は、37℃、5%CO2/95%空気中で維持される。
全RNAはA549及びH661細胞より、High Pure RNA Isolation Kit (Roche Applied Science, Indianapolis, Indiana, USA)を用いて単離され、及びcDNAは、1μg RNAより、Transcriptor reverse transcriptase (Roche Applied Science)を用いて、合成した。PCRは、全容積50μl中に、0.5μlのcDNA(20μlのcDNA反応容積の中)又は0.5μl水、CFH特異的プライマー及びApex Taq MasterMix (Genesee Scientific, San Diego, California, USA)を用いて行った。順方向プライマーの塩基配列は、5(-GGAACCACCTCAATGCAAAG-3( (配列番号1)であり、逆方向プライマーの塩基配列は、5(-AAGCTTCTGTTTGGCTGTCC-3( (配列番号2)であった。サイクル条件は以下の様であった:最初の変性94℃で2分間;その後94℃で15秒間;52℃で30秒間; 及び72℃で45秒間;の反応を30 サイクル。反応液の一部を1.7%(w/v)TAE−アガロースゲルで泳動し、GelStar (Lonza, Rockland, Maine, USA)で可視化した。予想されるアンプリコン(増幅産物)のサイズは、277bpであり、この産物は、配列解析により、CFH DNAとして確認された。
A549及びH661細胞を80%コンフルエンスまで増殖させ、培地を吸引し、細胞を3回PBSで洗浄し、2回血清の無い培地で洗浄した。血清の無い培地(10ml)を各75cm2フラスコに加え、細胞を37℃/5%CO2で、26.5時間インキュベートした。培地を集め、残った細胞を遠心で除き、培地を10,000MWCO遠心濃縮器(Sartorius, Goettingen, 独)を用いて10倍に濃縮し、さらに30,000MWCO遠心濃縮器(Sartorius, Goettingen, 独)を用いて5倍濃縮した。全タンパク質濃度を測定して、各細胞株から12μgタンパク質を、100ng精製ヒト補体因子H(CFH)と並べて、SDS-PAGEにより分離した。このタンパク質をPVDFにブロットして、MTBS中0.2μg/mlで、ヤギ抗ヒトCFH(Santa Cruz)をプローブとして検出した。2次抗体は、1:20,000稀釈で、ロバ抗ヤギIgG-HRP(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, California、USA)であった。検出は、SuperSignal West Femto substrate (Pierce)で行った。
A549及びH661細胞を75cm2フラスコ中で80%コンフルエンスまで増殖させ、0.25%Trypsin-EDTA (Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA)を用いて剥がした。細胞を集め、50μl結合緩衝液(PBS中1% BSA, 0.1% アジ化ナトリウム)に2x106/mlの濃度で再懸濁した。精製した補体因子H(CFH)(Complement Technology, Inc.)をヨードビーズ(Pierce, Rockford, Illinois、USA)を用いて、製造者の指針に従い125Iで標識した。非結合のヨウ素を、Micro Bio-Spin 6 クロマトグラフィーカラム(Bio-Rad, Hercules, California, USA)を用いて除いた。細胞(50μl)に、125I標識したCFH(50μl中1μgタンパク質)を加え、混合物を22℃で、30分間インキュベートした。競合的結合のために、細胞を最初10μg非標識CFHと30分間インキュベートし、その後125I標識CFHを加えた。細胞を3回PBSで洗浄し、結合CPM(カウント数/分)をガンマカウンター(Packard)中で検出した。各試験を3回繰り返した。
3人の患者の血清のプールした各検体(500μl)に等量の0.9%NaClを加えた。4℃で、飽和硫酸アンモニウム(1000μl)を、常に攪拌しながら、この溶液に滴下しつつ加えた。4℃で、混合を続け、2時間にわたり沈殿を形成させた。この沈殿を、4℃、15分間、12,000xgで遠心して集めた。沈殿物を冷PBS緩衝液に溶かした。このIgG溶液を、4リットルのPBSに対して、4℃で一晩中透析した。沈殿したIgG濃度は、Bradfordタンパク質検定(Bio-Rad)により計算した。最終的IgG濃度を6mg/mlに合わせた。
以前記載した(E. Wagner, H. Jiang, M. M. Frank, in Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods J. B. Henry, Ed. (W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA, 2001) pp. 892-913)様に、我々は、Veronal塩緩衝液(VBS)、pH7.4を、0.1% (w/v) ゼラチン及び1 mM MgCl2 (GVBS)を加えて、しかしながら古典的経路の活性化を避けるために、CaCl2を除いて調製した。A549及びH661細胞を、75cm2フラスコ中に80%コンフルエンスまで増殖させ、トリプシン−EDTAにより剥がした。細胞を集め、GVBS中に、2x106/mlの濃度に再懸濁した。患者IgG(最終濃度1.5mg/ml)及び正常ヒト血清(最終稀釈1:8)を全容積100μlになるようにGVBSに加えた。平行反応は、データ規格化のために、GVBS中に正常ヒト血清のみを含めた。これらの混合物を4℃、30分間インキュベートし、細胞(100μl)に加え、37℃、30分間インキュベートした。反応を終結させるために、1mlの氷冷GVBSを加え、この混合物を遠心し、上清を吸引した。バックグランド対照として、正常ヒト血清を最初56℃、30分間インキュベートし、補体成分を不活性化した。ヤギ抗ヒトC3抗体((Complement Technology, Inc.)を上記のように125I標識ヨードビーズを用いて標識した。細胞をPBSで洗浄し、125I-標識抗C3抗体と22℃で、30分間インキュベートした。細胞を3回PBSで洗浄し、結合cpmをガンマカウンター中で検出した。各検査を3回繰り返した。データを集め、バックグランド(加熱した正常血清によるカウント数(cpm))を差し引き、結果得られた値は、非加熱正常血清からのカウント数(cpm)で規格化した。
標準的脱パラフィンの後、ヤギ抗ヒトCFH抗血清(Quidel, San Diego, California, USA)を用いて、免疫組織化学を各切片(厚さ5〜7μm)について行った。稀釈なしのロバ血清を用いて、室温で、10分間、内因性ペルオキシダーゼ活性及び非特異的タンパク質結合部位をブロックした後、1次抗体を1:1000稀釈で適用し、室温で、1時間スライドとインキュベートした。免疫複合体の検出は、ヤギHRPポリマーキット(BioCare Medical, Concord, California、USA)により、製造者の指針の下に行った。結合抗体は、クロモゲン3,3’−ジアミノベンジジンを用いて検出し、対比染色はHarrisヘマトキシリンを用いた。スライドは乾燥させ、カバースリップを載せるまえに汚れを除いた。
統計解析:
統計的有意性を計算するために、Fisherの正確確立検定を行った。
α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する自己抗体もまた、何人かの患者に発見された。これらの自己抗体を、実施例1〜4のために本明細書に記載した方法に従い同定した。また、これらの自己抗体は、本明細書に記載した方法により、治療及び/又は診断試薬としても用いることができる。
材料及び方法:
非小細胞肺癌(NSCLC)と診断された患者から血清検体を採取した。3種の肺腺癌細胞株からの溶解液プールを用いてWesternブロットを行った(図5)。その後、これらの患者らの血清をプローブとして用いて、このブロットを探索した。多くの離散的バンド(タンパク質及び自己抗体に対応する)を含む検体を、さらに2D-PAGE及びWesternブロッティングを用いて解析した(図6及び図7)。溶解液タンパク質を患者の血清をプローブとして用いて探索した時に作られたシグナルを、染色ゲルと並べた。ゲル上の対応するスポットを切り出して、Duke Proteomics Core Facility (Duke University, Durham, North Carolina, USA)に送り、タンパク質を消化し、得られたペプチドをナノスケール液体クロマトグラフィー−直列質量分析器で解析した。同定後、精製タンパク質を購入した。これらのタンパク質、及び補体因子H(CFH)及びα−グルコシダーゼに対する自己抗体の有無を、非小細胞肺癌(NSCLC)を持つ20人の患者及び20人の整合対照群の血清を用いて、Westernブロッティングを用いて決定した(図8及び図9)。
2D-PAGE及びWesternブロッティングから切り出されたスポットから同定したタンパク質は、ストレス誘発性リンタンパク質1(STI1)、α−エノラーゼ、HSP-60及び14-3-3εが含まれる。これらのタンパク質に向けられた自己抗体を有するNSCLC患者の数は、対照群から有意に違わない様である。この発見に対して、多くの可能な説明がある。第1に、NSCLC患者の全集合について、この結論を一般化するには、検体のサイズが非常に小さい。また、検定に用いるタンパク質濃度の測定は困難である。濃度の増加は、低濃度で血清中に存在する自己抗体の検出を可能にすることができるが、これはまた、他の自己抗体と非特異的に結合する可能性を導くことができる。さらに、何人かの患者は、突然変異した又は二者択一的にスプライスしたタンパク質の領域に向けられた自己抗体を持つ可能性がある。このような検体は、精製したタンパク質を認識せず、またこの検定ではフォールス陰性(誤陰性)として読まれるであろう。しかしながら、この方法は、NSCLC患者の自己抗体の標的の同定に対して成功した手順を決定し、既にその様なタンパク質を同定した。もっと多くのNSCLC患者の自己抗体状態をテストするために、これらのタンパク質を、マイクロアレイ上で使うことができる。
表2〜4に掲載した物質に対する自己抗体を、また何人かの患者に発見した。これらの自己抗体を、実施例1〜6のために、本明細書に記載した方法に従い同定した。これらの自己抗体はまた、本明細書に記載した方法に従い、治療及び/又は診断試薬として使用することができる。
本明細書に掲載した、特許、特許出願、データベースの引用(Swiss Prot Accession Numberを含むがこれに限らない)及び科学文献を含む全ての引例は、これらが、補充し、説明し、背景を提供し、又は、方法、技術及び/又は本明細書で使った組成物を教えるという点で、本明細書の参考文献にその全体が組み込まれている。
1. O. J. Finn, J Immunol 178, 2615 (Mar 1, 2007).
2. S. Rodriguez de Cordoba, J. Esparza-Gordillo, E. Goicoechea de Jorge, M. Lopez-Trascasa, P. Sanchez-Corral, Mol Immunol 41, 355 (Jun, 2004).
3. D. Ajona et al., Cancer Res 64, 6310 (Sep 1, 2004).
4. D. Ajona, Y. F. Hsu, L. Corrales, L. M. Montuenga, R. Pio, J Immunol 178, 5991 (May 1, 2007).
5. E. Wilczek et al., Int J Cancer 122, 2030 (May 1, 2008).
6. S. Junnikkala et al., Br J Cancer 87, 1119 (Nov 4, 2002).
7. Z. Z. Cheng et al., Clin Chem 51, 856 (May, 2005).
8. P. Gasque, A. Thomas, M. Fontaine, B. P. Morgan, J Neuroimmunol 66, 29 (May, 1996).
9. S. Junnikkala et al., J Immunol 164, 6075 (Jun 1, 2000).
10. K. Jurianz et al., Mol Immunol 36, 929 (Sep-Oct, 1999).
11. K. M. Murphy, P. Travers, M. Walport, Janeway's Immunobiology (Garland Science, London, England, ed. 7th, 2007), pp.
12. M. A. Dragon-Durey et al., J Am Soc Nephrol 16, 555 (Feb, 2005).
13. E. Gumus et al., Int J Urol 11, 1070 (Dec, 2004).
14. P. J. Mintz et al., Nat Biotechnol 21, 57 (Jan, 2003).
15. S. Varsano, L. Rashkovsky, H. Shapiro, D. Ophir, T. Mark-Bentankur, Clin Exp Immunol 113, 173 (Aug, 1998).
16. R. Sayegh, J. T. Awwad, C. Maxwell, B. Lessey, K. Isaacson, J Clin Endocrinol Metab 80, 1021 (Mar, 1995).
17.E. Wagner, H. Jiang, M. M. Frank, in Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods J. B. Henry, Ed. (W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA, 2001) pp. 892-913.
Claims (38)
- 患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程から成る患者の癌を検知する方法。
- (1)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程、及び(2)この癌関連自己抗体の有無又は量に基づいて、癌の可能性のある患者の治療を管理する工程から成る癌の可能性のある患者の治療を管理する方法。
- (1)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程、及び(2)この癌関連自己抗体の有無又は量に基づいて、腫瘍又は腫瘍と疑われる病変の分子病期区分を決定する工程から成る腫瘍又は腫瘍と疑われる病変の分子病期を区分する方法。
- (1)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出する工程、及び(2)この癌関連自己抗体の有無又は量に基づいて、患者を癌に対する高リスク群に区分けする工程から成る患者を癌に対する高リスク群に区分けする方法。
- 前記検体が血清検体又は血漿検体である請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記患者がヒトである請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記癌が肺癌である請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 補体因子H(CFH)に対する自己抗体、α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する自己抗体、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)に対する自己抗体、α-エノラーゼに対する自己抗体、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)に対する自己抗体、若しくはHSP60(60kDa熱ショックタンパク質)に対する自己抗体、又はこれらの自己抗体の組合せを検出する工程から成る請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 表4に掲載された1又はそれ以上の物質に対する自己抗体、又はこれらの組合せを検出することから成る請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無及び/又は量を検出するためのキットであって、(1)癌関連自己抗体に特異的な結合パートナー、及び(2)患者から採取した検体中の癌関連自己抗体の有無を検出及び/又はその量を測定するための説明書から成るキット。
- 補体因子H(CFH)に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、α-エノラーゼに対する自己抗体に特異的な結合パートナー、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、若しくはHSP 60(60kDa熱ショックタンパク質)に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、又はこれらの結合パートナーの組合せを検出する工程から成る請求項10に記載のキット。
- 表4に掲載された1又はそれ以上の物質に対する自己抗体に特異的な結合パートナー、又はこれらの組合せから成る請求項10に記載のキット。
- 前記結合パートナーが、固体支持台に結合され、前記自己抗体に対する第2の特異的結合パートナーを含む請求項10に記載のキット。
- 前記第2の特異的結合パートナーが抗体である請求項13に記載のキット。
- 前記第2の特異的結合パートナーが検出可能基と結合する請求項12又は13に記載のキット。
- 前記検出可能基が、放射活性標識、蛍光標識、酵素標識及び蛍光標識から成る群から選択される請求項15に記載のキット。
- 更に、1又はそれ以上の緩衝試薬、タンパク質安定化剤、酵素基質、バックグランド低下剤、対照試薬、検出を行う装置、並びに解析及び結果発表のために必要なソフトウェアを含む請求項10に記載のキット。
- 癌に罹った患者に、有効量の(a)任意に二重特異的抗体であってもよい癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体、(b)癌関連自己抗体に対する抗原、又は(c)癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体及び癌関連自己抗体に対する抗原の両者、を投与することから成る患者の癌を治療する方法。
- 前記癌が肺癌である請求項18に記載の方法。
- 補体因子H(CFH)に対する抗体、α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する抗体、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)に対する抗体、α-エノラーゼに対する抗体、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)に対する抗体、若しくはHSP 60(60kDa熱ショックタンパク質)に対する抗体、又はこれらの抗体の組合せを投与することから成る請求項18又は19に記載の方法。
- 表4に掲載した1又はそれ以上の物質に対する抗体の投与、又はこれら組合せを投与することから成る請求項18又は19に記載の方法。
- 補体因子H(CFH)抗原、α-グルコシダーゼ(GANAB)抗原、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)抗原、α-エノラーゼ抗原、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)抗原、若しくはHSP 60(60kDa熱ショックタンパク質)抗原、又はこれらの抗原の組合せを投与することから成る請求項18又は19に記載の方法。
- 表4に掲載した1又はそれ以上の物質から調製した抗原、又はこれらの組合せを投与することから成る請求項18又は19に記載の方法。
- 患者へアジュバントの投与することを含む請求項18〜23のいずれか一項に記載の方法。
- (A)有効量の(a)任意に二重特異的抗体であってもよい癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体、(b)癌関連自己抗体に対する抗原、又は(c)癌関連自己抗体の免疫反応特性を有する抗体及び癌関連自己抗体に対する抗原の両者、並びに(B)医薬的に許容される担体から成る患者の癌を治療するための組成物。
- 前記癌が肺癌である請求項25に記載の組成物。
- 補体因子H(CFH)に対する抗体、α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する抗体、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)に対する抗体、α-エノラーゼに対する抗体、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)に対する抗体、若しくはHSP60(60kDa熱ショックタンパク質)に対する抗体、又はこれらの抗体の組合せから成る請求項25又は26に記載の組成物。
- 表4に掲載した1又はそれ以上の物質に対する抗体、又はこれらの組合せから成る請求項25又は26に記載の組成物。
- 補体因子H(CFH)抗原、α-グルコシダーゼ(GANAB)抗原、STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)抗原、α-エノラーゼ抗原、14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)抗原、若しくはHSP60(60kDa熱ショックタンパク質)抗原、又はこれらの抗原の組合せから成る請求項25又は26に記載の組成物。
- 表4に掲載した1又はそれ以上の物質から調製した抗原、又はこれらの組合せから成る請求項25又は26に記載の組成物。
- 更にアジュバントを含む請求項25〜30のいずれか一項に記載の組成物。
- 補体因子H(CFH)に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- α-グルコシダーゼ(GANAB)に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- STIP1(ストレス誘発性リンタンパク質1)に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- α-エノラーゼに対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- 14−3−3(14−3−3タンパク質エプシロン)に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- HSP60(60kDa熱ショックタンパク質)に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
- 表4に掲載した1又はそれ以上の物質に対する自己抗体の免疫反応特性を有する単離されかつ精製された抗体。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US12713808P | 2008-05-09 | 2008-05-09 | |
US61/127,138 | 2008-05-09 | ||
US12871708P | 2008-05-23 | 2008-05-23 | |
US61/128,717 | 2008-05-23 | ||
US18820908P | 2008-08-07 | 2008-08-07 | |
US61/188,209 | 2008-08-07 | ||
PCT/US2009/043460 WO2009137832A2 (en) | 2008-05-09 | 2009-05-11 | Autoantibodies in the detection and treatment of cancer |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012500964A true JP2012500964A (ja) | 2012-01-12 |
JP2012500964A5 JP2012500964A5 (ja) | 2012-06-28 |
Family
ID=41265468
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011508722A Pending JP2012500964A (ja) | 2008-05-09 | 2009-05-11 | 癌の検出と治療における自己抗体 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20120003225A1 (ja) |
EP (1) | EP2277049A4 (ja) |
JP (1) | JP2012500964A (ja) |
CN (1) | CN102171569A (ja) |
CA (1) | CA2725548A1 (ja) |
WO (1) | WO2009137832A2 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016523235A (ja) * | 2013-06-07 | 2016-08-08 | デューク ユニバーシティ | 補体因子h阻害薬 |
Families Citing this family (43)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20100099221A (ko) | 2007-11-27 | 2010-09-10 | 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 | 관절염의 예방과 치료를 위한 14-3-3 길항제 |
FR2936060B1 (fr) * | 2008-09-17 | 2010-11-19 | Assist Publ Hopitaux De Paris | Procede de diagnostic d'une sclerodermie systemique ou d'une hypertension arterielle pulmonaire. |
US8628927B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-01-14 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
US9365901B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-06-14 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Monitoring immunoglobulin heavy chain evolution in B-cell acute lymphoblastic leukemia |
US9506119B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-11-29 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method of sequence determination using sequence tags |
US8748103B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-06-10 | Sequenta, Inc. | Monitoring health and disease status using clonotype profiles |
US8691510B2 (en) | 2008-11-07 | 2014-04-08 | Sequenta, Inc. | Sequence analysis of complex amplicons |
EP4335932A2 (en) | 2008-11-07 | 2024-03-13 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods of monitoring conditions by sequence analysis |
US9528160B2 (en) | 2008-11-07 | 2016-12-27 | Adaptive Biotechnolgies Corp. | Rare clonotypes and uses thereof |
PT2387627E (pt) | 2009-01-15 | 2016-06-03 | Adaptive Biotechnologies Corp | Determinação do perfil de imunidade adaptativa e métodos de geração de anticorpos monoclonais |
TR201902845T4 (tr) * | 2009-03-11 | 2019-03-21 | Augurex Life Sciences Corp | Artritik durumların karakterize edilmesine yönelik bileşimler ve yöntemler. |
EP3409792B1 (en) | 2009-06-25 | 2023-09-20 | Fred Hutchinson Cancer Center | Method of measuring adaptive immunity |
US9043160B1 (en) | 2009-11-09 | 2015-05-26 | Sequenta, Inc. | Method of determining clonotypes and clonotype profiles |
US10385475B2 (en) | 2011-09-12 | 2019-08-20 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Random array sequencing of low-complexity libraries |
BR112014009536A2 (pt) | 2011-10-21 | 2017-04-18 | Augurex Life Sciences Corp | antígenos derivados de 14-3-3 xitrulinada e usos dos mesmos no diagnóstico de artrite reumatoide |
US9279159B2 (en) | 2011-10-21 | 2016-03-08 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Quantification of adaptive immune cell genomes in a complex mixture of cells |
AU2012347460B2 (en) | 2011-12-09 | 2017-05-25 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Diagnosis of lymphoid malignancies and minimal residual disease detection |
US9499865B2 (en) | 2011-12-13 | 2016-11-22 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Detection and measurement of tissue-infiltrating lymphocytes |
US20130183242A1 (en) * | 2012-01-18 | 2013-07-18 | University Of Connecticut | Methods for identifying tumor-specific polypeptides |
JP6302847B2 (ja) | 2012-03-05 | 2018-03-28 | アダプティヴ バイオテクノロジーズ コーポレーション | 頻度が一致したサブユニットからの、対をなす免疫受容体鎖の決定 |
CN107586832B (zh) | 2012-05-08 | 2021-03-30 | 适应生物技术公司 | 用于测量和校准多重pcr反应中的扩增偏倚的组合物和方法 |
CN102707068B (zh) * | 2012-05-31 | 2015-03-18 | 北京大学 | 补体h因子用作甲基苯丙胺成瘾患者的基因表达产物中的应用 |
CA2886647A1 (en) | 2012-10-01 | 2014-04-10 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Immunocompetence assessment by adaptive immune receptor diversity and clonality characterization |
US9708657B2 (en) | 2013-07-01 | 2017-07-18 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method for generating clonotype profiles using sequence tags |
EP3047277B1 (en) * | 2013-09-18 | 2018-11-21 | Adelaide Research & Innovation Pty Ltd. | Autoantibody biomarkers of ovarian cancer |
EP3114240B1 (en) | 2014-03-05 | 2019-07-24 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods using randomer-containing synthetic molecules |
US10066265B2 (en) | 2014-04-01 | 2018-09-04 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Determining antigen-specific t-cells |
ES2777529T3 (es) | 2014-04-17 | 2020-08-05 | Adaptive Biotechnologies Corp | Cuantificación de genomas de células inmunitarias adaptativas en una mezcla compleja de células |
CN104777305B (zh) * | 2014-08-27 | 2017-04-05 | 北京蛋白质组研究中心 | 应激诱导的磷酸化蛋白1在制备筛查肝细胞癌产品中的应用 |
EP3212790B1 (en) | 2014-10-29 | 2020-03-25 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from many samples |
US10246701B2 (en) | 2014-11-14 | 2019-04-02 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Multiplexed digital quantitation of rearranged lymphoid receptors in a complex mixture |
EP3498866A1 (en) | 2014-11-25 | 2019-06-19 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Characterization of adaptive immune response to vaccination or infection using immune repertoire sequencing |
US11047008B2 (en) | 2015-02-24 | 2021-06-29 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods for diagnosing infectious disease and determining HLA status using immune repertoire sequencing |
WO2016161273A1 (en) | 2015-04-01 | 2016-10-06 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method of identifying human compatible t cell receptors specific for an antigenic target |
EP3294334B1 (en) | 2015-05-11 | 2020-07-08 | The Johns Hopkins University | Autoimmune antibodies for use in inhibiting cancer cell growth |
CN106557536B (zh) * | 2015-09-30 | 2021-12-21 | 松下知识产权经营株式会社 | 控制方法 |
US10428325B1 (en) | 2016-09-21 | 2019-10-01 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Identification of antigen-specific B cell receptors |
EP3519826A1 (en) * | 2016-09-27 | 2019-08-07 | The University of The Highlands and Islands | Antigen biomarkers |
US10865238B1 (en) | 2017-05-05 | 2020-12-15 | Duke University | Complement factor H antibodies |
CN111108388A (zh) * | 2017-06-23 | 2020-05-05 | 昂西免疫德国有限公司 | 用于治疗癌症的免疫肿瘤学 |
CN107991493B (zh) * | 2017-11-22 | 2020-03-31 | 中国医科大学附属第一医院 | 抗eno1自身抗体在对ait孕妇筛查和预测流产风险中的应用 |
US11254980B1 (en) | 2017-11-29 | 2022-02-22 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Methods of profiling targeted polynucleotides while mitigating sequencing depth requirements |
CN114910649A (zh) * | 2022-05-07 | 2022-08-16 | 浙江大学 | 检测抗α-烯醇化酶-IgG抗体的试剂在制备检测血管内皮损伤的试剂盒中的应用 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004531713A (ja) * | 2001-04-03 | 2004-10-14 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 腎細胞癌の腫瘍マーカー |
WO2005100992A1 (ja) * | 2004-04-01 | 2005-10-27 | National University Corporation Chiba University | 脳機能障害性疾患の検査方法、それに用いるタンパク質マーカ、診断薬および診断キット |
JP2006523300A (ja) * | 2003-03-31 | 2006-10-12 | ウイミンズ、アンド、チルドランズ、ホスピトル | リソソーム蓄積症(lds)の多重スクリーニング |
WO2007007129A2 (en) * | 2005-07-14 | 2007-01-18 | Universite De Geneve | Diagnostic method for brain damage-related disorders |
WO2007042256A1 (en) * | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Laboratorios Salvat, S.A. | Non-invasive in vitro method to detect transitional cell carcinoma of the bladder |
JP2007183176A (ja) * | 2006-01-06 | 2007-07-19 | Ind Technol Res Inst | 重症筋無力症の診断方法およびそのキット |
WO2008037792A1 (en) * | 2006-09-29 | 2008-04-03 | Ribovax Biotechnologies Sa | Novel antigens and antibodies associated to pancreatic ductal adenocarcinoma |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0636248A4 (en) * | 1992-04-14 | 1996-11-13 | Univ Duke | METHOD FOR DETECTING P53 AND HSP70 COMPLEX CONTAINING TUMORS. |
AU742626B2 (en) * | 1998-05-20 | 2002-01-10 | Immunomedics Inc. | Therapeutics using a bispecific anti-HLA class II invariant chain X anti-pathogen antibody |
GB9827228D0 (en) * | 1998-12-10 | 1999-02-03 | Univ Nottingham | Cancer detection method and reagents |
US6645465B2 (en) * | 1999-08-06 | 2003-11-11 | Michigan, University Of The Regents | Annexin proteins and autoantibodies as serum markers for cancer |
CN1584028A (zh) * | 2004-06-10 | 2005-02-23 | 上海富纯中南生物技术有限公司 | 用于筛选肿瘤坏死靶向抗体的克隆及其制备方法和用途 |
KR20060102592A (ko) * | 2005-03-24 | 2006-09-28 | 바이오제멕스 주식회사 | 자가항체 검출방법을 이용한 암진단용 면역복합체 및키트와 이를 이용하는 방법 |
EP2074422A4 (en) * | 2006-11-13 | 2010-02-17 | Life Technologies Corp | METHOD AND KITS FOR DETECTING PROSTATE CANCER BIOMARKERS |
-
2009
- 2009-05-11 CN CN2009801263641A patent/CN102171569A/zh active Pending
- 2009-05-11 EP EP09743818A patent/EP2277049A4/en not_active Withdrawn
- 2009-05-11 US US12/991,666 patent/US20120003225A1/en not_active Abandoned
- 2009-05-11 CA CA2725548A patent/CA2725548A1/en not_active Abandoned
- 2009-05-11 JP JP2011508722A patent/JP2012500964A/ja active Pending
- 2009-05-11 WO PCT/US2009/043460 patent/WO2009137832A2/en active Application Filing
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004531713A (ja) * | 2001-04-03 | 2004-10-14 | メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフトング | 腎細胞癌の腫瘍マーカー |
JP2006523300A (ja) * | 2003-03-31 | 2006-10-12 | ウイミンズ、アンド、チルドランズ、ホスピトル | リソソーム蓄積症(lds)の多重スクリーニング |
WO2005100992A1 (ja) * | 2004-04-01 | 2005-10-27 | National University Corporation Chiba University | 脳機能障害性疾患の検査方法、それに用いるタンパク質マーカ、診断薬および診断キット |
WO2007007129A2 (en) * | 2005-07-14 | 2007-01-18 | Universite De Geneve | Diagnostic method for brain damage-related disorders |
WO2007042256A1 (en) * | 2005-10-11 | 2007-04-19 | Laboratorios Salvat, S.A. | Non-invasive in vitro method to detect transitional cell carcinoma of the bladder |
JP2007183176A (ja) * | 2006-01-06 | 2007-07-19 | Ind Technol Res Inst | 重症筋無力症の診断方法およびそのキット |
WO2008037792A1 (en) * | 2006-09-29 | 2008-04-03 | Ribovax Biotechnologies Sa | Novel antigens and antibodies associated to pancreatic ductal adenocarcinoma |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
JPN6013002257; GRAZYNA ADAMUS et al.: 'The Occurrence of Serum Autoantibodies against Enolase in Cancer-Associated Retinopathy' CLINICAL IMMUNOLOGY AND IMMUNOPATHOLOGY Vol.78, No.2, 1996, 120-129 * |
JPN6013002258; Robert Sijbrandi: 'Characterization of an iron-regulated alpha-enolase of Bacteroides fragilis' Microbes and Infection Vol.7/Iss.1, 200501, 9-18, Elsevier * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016523235A (ja) * | 2013-06-07 | 2016-08-08 | デューク ユニバーシティ | 補体因子h阻害薬 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2725548A1 (en) | 2009-11-12 |
EP2277049A4 (en) | 2012-05-30 |
US20120003225A1 (en) | 2012-01-05 |
CN102171569A (zh) | 2011-08-31 |
WO2009137832A3 (en) | 2010-04-01 |
EP2277049A2 (en) | 2011-01-26 |
WO2009137832A2 (en) | 2009-11-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2012500964A (ja) | 癌の検出と治療における自己抗体 | |
RU2651513C2 (ru) | Новое антитело для диагностики и (или) прогнозирования рака | |
BR112016007037B1 (pt) | Método para detectar câncer pancreático | |
AU2017204683B2 (en) | Compositions and methods for assessing the risk of cancer occurrence | |
JP5670422B2 (ja) | 胃癌検出用マーカー及び胃癌検出方法 | |
US20140363825A1 (en) | Marker for detecting colorectal cancer or esophageal cancer and method for examining such cancer | |
JP6276992B2 (ja) | 胸膜中皮腫患者の早期発見のための分子マーカー及びその発現解析方法 | |
JP5773979B2 (ja) | 胃癌検出用マーカー及び胃癌検出方法 | |
JPWO2009044561A1 (ja) | 抗proNT/NMNモノクローナル抗体 | |
US8685399B2 (en) | PAX 5 monoclonal antibody | |
US20170313770A1 (en) | Reagents for detecting or diagnosing cancer cells having high invasive capacity | |
JP6797107B2 (ja) | 膵臓機能異常の検出方法及び検出用キット | |
EP1848742A1 (en) | Anti-prl-3 antibodies and methods of use thereof | |
WO2023190820A1 (ja) | 抗CK2α抗体又はその断片 | |
WO2022202826A1 (ja) | 悪性膵嚢胞性腫瘍の判定補助方法及び判定補助用キット | |
CN105474016B (zh) | Augurin免疫试验 | |
JP6729917B2 (ja) | EphA2 N末端フラグメント抗体 | |
JP6793514B2 (ja) | 新規甲状腺癌関連抗原に結合する抗体および甲状腺癌診断剤 | |
US11061034B2 (en) | Blood biomarker for use in evaluation of effect of drug therapy on kidney cancer | |
WO2013031757A1 (ja) | 膵癌、乳癌、肺癌又は前立腺癌の検出用マーカー及び検査方法 | |
EP2650307A1 (en) | IMMUNOLOGICAL cofilin-1 PROTEIN MEASUREMENT METHOD | |
JP2014167419A (ja) | 胸膜中皮腫患者の早期発見のための分子マーカーの組合せとその発現解析方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120511 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120511 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20121114 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130128 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130701 |