JP2012500779A - 多層血液製剤 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明を次の図面を参照して以下に詳しく説明する。
2.プラスチック容器に採血する。
3.血液および凝固活性化因子を2分間転倒混合する。
4.容器を16200gで20分間スピンする。
5.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
6.鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
2.遠心管に採血する。
3.管の血液を1分間混合する。
4.管を3000gで20分間スピンする。
5.蓋を開け、壁からフィブリン(頂部の血清に形成)を解離させる(細いプラスチック棒または針を使用)。
6.サンプルをさらに5分間3000gでスピンする。
7.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
8.鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
2.蓋をして、容器の内部に真空を作る。
3.患者に針を挿入する。
4.真空のまま、針を容器に接続する。
5.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
6.管を15000gで12分間スピンする。
7.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
8.蓋を取り、血液製剤を鉗子で取り出す。
2.容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は1未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
3.例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
4.蓋をして、容器の内部に真空を作る。
5.患者に針を挿入する。
6.真空のまま、針を容器に接続する。
7.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
8.管を3000gで8分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、g力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
9.底のディスクを解放する。
10.管を3000gで2分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は1つのシートに圧縮される。
11.蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
2.容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は1未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
3.例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
4.容器の内部に真空を作り、蓋をする。
5.患者に針を挿入する。
6.真空のまま、針を容器に接続する。
7.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
8.管を3700gで3分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、g力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
9.8分間待つ。
10.底のディスクを解放する。
11.管を3000gで2分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は1つのシートに圧縮される。
12.蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
2.ポリアミドまたはポリウレタンから調製した20ml容器(内径26mm)に18ml充填し、様々なRCF(相対遠心分離力)で様々な時間スピンした。
3.上記スピン時間後、底部(底から約5mm上)および頂部(表面から約5mm下)のサンプル(約300ul)をシリンジ採取し、その後、次のサンプルを得るために、スピンを継続した。底部サンプルをD−PBSで1:1に希釈した。
4.自動細胞計測(XE2100、Sysmex Corporation)によってサンプルを分析し、元のサンプルの細胞数を算出した。結果はml当たり細胞(100万)で示す。
2.血液製剤を半分に切断し、100ulPBS1%BSAまたは100ul慢性損傷液(静脈性下腿潰瘍から24時間採取)に加え、37℃でインキュベートした。
3.所与の時点(1、2、3.5、7、14、22、および29時間)後、サンプルを16000gで10分間スピンし、上清を新しい管に移し、1/10(81ulサンプル+9ulPI)プロテアーゼ阻害剤(Complete(登録商標)、Roche)を添加し、−80℃で凍結させた。
4.製造業者によって記載されているとおり、ELISAキット(DuoSet(登録商標)ELISAカタログ番号DY222、R&Dsystems)を用いて、血小板由来成長因子−ABレベルを求めた。元のサンプルのPDGF−AB濃度を算出した。
2.2つの血液製剤を1mlDMEM(PAA、Germany)中、37℃および5%CO2で48時間インキュベートした。
3.並行して、2つの血液製剤を、リポ多糖((10ng/ml)大腸菌由来LPS;L2654;Sigma−Aldrich)を含む1mlDMEM(PAA、Germany)中、37℃および5%CO2で48時間インキュベートした。
4.48時間後、媒質をマイクロ遠心管に移し、16200xgで20分間スピンした。分析まで、上清を−80℃で凍結させた。
5.両方のキットでバッファ4(ARY007)を用いたことを除いて、R&Dsystemsによって記載されているとおり、プロテオーム・プロファイラ・アレイARY007およびARY005(共にR&Dsystems)を実行した。R&Dsystemsによって記載されているとおり、420ul上清を500ulバッファ4および580ulバッファ5で希釈した。
6.化学発光HRP基質(Immobilon Western(商標)、Millipore、US)を用いて、アレイによる反応性を検出した。
7.Fluorchem3000システム(Alpha Innotech、US)を用いて、発光を捕捉した。Flourchemソフトウェア(Alpha Innotech、US)で平均ピクセル密度を得た。
本発明を次の図面を参照して以下に詳しく説明する。
2.プラスチック容器に採血する。
3.血液および凝固活性化因子を2分間転倒混合する。
4.容器を16200gで20分間スピンする。
5.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
6.鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
2.遠心管に採血する。
3.管の血液を1分間混合する。
4.管を3000gで20分間スピンする。
5.蓋を開け、壁からフィブリン(頂部の血清に形成)を解離させる(細いプラスチック棒または針を使用)。
6.サンプルをさらに5分間3000gでスピンする。
7.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
8.鉗子を用いて、血液製剤を取り出す。
2.蓋をして、容器の内部に真空を作る。
3.患者に針を挿入する。
4.真空のまま、針を容器に接続する。
5.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
6.管を15000gで12分間スピンする。
7.この後、赤血球と血清の間の層に血液製剤が形成される。
8.蓋を取り、血液製剤を鉗子で取り出す。
2.容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は1未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
3.例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
4.蓋をして、容器の内部に真空を作る。
5.患者に針を挿入する。
6.真空のまま、針を容器に接続する。
7.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
8.管を3000gで8分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、g力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
9.底のディスクを解放する。
10.管を3000gで2分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は1つのシートに圧縮される。
11.蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
2.容器の底にディスクを入れる。ディスクの密度は1未満であるべきであり、できるかぎり小さいことが好ましい。
3.例えば容器の壁を圧縮して、容器の底にディスクを固定する。
4.容器の内部に真空を作り、蓋をする。
5.患者に針を挿入する。
6.真空のまま、針を容器に接続する。
7.真空の助力で、プラスチック容器に採血する。
8.管を3700gで3分間スピンする。この段階では、白血球は赤血球の上にあり、g力が低く、フィブリンを血小板の上に圧縮することができないため、フィブリンは上部血清層全体に重合される。
9.8分間待つ。
10.底のディスクを解放する。
11.管を3000gで2分間スピンする。これによりディスクは頂部に移動し、これによって白血球および血小板は集められ、フィブリン層は1つのシートに圧縮される。
12.蓋を取り、容器の頂部に配置される血液製剤を取り出す。
2.ポリアミドまたはポリウレタンから調製した20ml容器(内径26mm)に18ml充填し、様々なRCF(相対遠心分離力)で様々な時間スピンした。
3.上記スピン時間後、底部(底から約5mm上)および頂部(表面から約5mm下)のサンプル(約300ul)をシリンジ採取し、その後、次のサンプルを得るために、スピンを継続した。底部サンプルをD−PBSで1:1に希釈した。
4.自動細胞計測(XE2100、Sysmex Corporation)によってサンプルを分析し、元のサンプルの細胞数を算出した。結果はml当たり細胞(100万)で示す。
2.血液製剤を半分に切断し、100ulPBS1%BSAまたは100ul慢性損傷液(静脈性下腿潰瘍から24時間採取)に加え、37℃でインキュベートした。
3.所与の時点(1、2、3.5、7、14、22、および29時間)後、サンプルを16000gで10分間スピンし、上清を新しい管に移し、1/10(81ulサンプル+9ulPI)プロテアーゼ阻害剤(Complete(登録商標)、Roche)を添加し、−80℃で凍結させた。
4.製造業者によって記載されているとおり、ELISAキット(DuoSet(登録商標)ELISAカタログ番号DY222、R&Dsystems)を用いて、血小板由来成長因子−ABレベルを求めた。元のサンプルのPDGF−AB濃度を算出した。
2.2つの血液製剤を1mlDMEM(PAA、Germany)中、37℃および5%CO2で48時間インキュベートした。
3.並行して、2つの血液製剤を、リポ多糖((10ng/ml)大腸菌由来LPS;L2654;Sigma−Aldrich)を含む1mlDMEM(PAA、Germany)中、37℃および5%CO2で48時間インキュベートした。
4.48時間後、媒質をマイクロ遠心管に移し、16200xgで20分間スピンした。分析まで、上清を−80℃で凍結させた。
5.両方のキットでバッファ4(ARY007)を用いたことを除いて、R&Dsystemsによって記載されているとおり、プロテオーム・プロファイラ・アレイARY007およびARY005(共にR&Dsystems)を実行した。R&Dsystemsによって記載されているとおり、420ul上清を500ulバッファ4および580ulバッファ5で希釈した。
6.化学発光HRP基質(Immobilon Western(商標)、Millipore、US)を用いて、アレイによる反応性を検出した。
7.Fluorchem3000システム(Alpha Innotech、US)を用いて、発光を捕捉した。Flourchemソフトウェア(Alpha Innotech、US)で平均ピクセル密度を得た。
Claims (61)
- 全血由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含む血液製剤(10)であって、第1層(21)、第2層(22)、および第3層(23)を含み、第2層(22)は、第1層(21)および第3層(23)に隣接しており、第1層(21)は、血液製剤(10)の第1外面(24)を画定し、第3層(23)は、血液製剤(10)の第2外面(25)を画定し、第1層(21)は、大部分のフィブリンを含み、第2層(22)は、大部分の血小板を含み、第3層(23)は、大部分の白血球を含む血液製剤(10)。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分のフィブリンが、第1層(21)に含まれる、請求項1に記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分の血小板が、第2層(22)に含まれる、請求項1または2に記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分の白血球が、第3層(23)に含まれる、請求項1、2、または3に記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)が、全血由来の成分のみからなる、請求項1から4のいずれかに記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)が、自己由来である、請求項1から5のいずれかに記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)が、可撓性である、請求項1から6のいずれかに記載の血液製剤。
- 血液製剤(10)が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第1物質をさらに含む、請求項1から7のいずれかに記載の血液製剤。
- 治療に使用するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤。
- 治療に使用する薬剤を製造するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤の使用。
- 創傷を治療するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤。
- 創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤の使用。
- 自己使用するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤。
- 自己薬剤を製造するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤の使用。
- 手術に使用するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤。
- 手術に使用する薬剤を製造するための、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤の使用。
- ある体積の全血(5)から血液製剤(10)を調製する方法であって、以下の工程:
a)体積の全血(5)を容器手段(1)に入れる工程であって、容器手段(1)が、全血(5)が接触する内面(3)を画定する第1材料を含む工程、
b)全血(5)の凝固を活性化する工程、
c)容器手段(1)に配置された全血(5)に作用する遠心力(6)によって、全血(5)を赤血球(11)、血清(9)、および血液製剤(10)に分離し、これによって全血(10)が、赤血球(11)、血液製剤(10)、および血清(9)間の密度の違いにより、赤血球(11)、血液製剤(10)、および血清(9)を含む層に分離する工程であって、血液製剤(10)は、フィブリン、白血球、および血小板を含み、適用される遠心力(6)は、全血に作用する重力、例えばgより少なくとも1000倍大きい工程、ならびに
d)血液製剤(10)を容器手段(1)から取り出す工程を含む方法。 - 全血からフィブリンを抽出する方法の収率が、少なくとも60%超である、請求項17に記載の方法。
- 全血から白血球を抽出する方法の収率が、少なくとも50%超である、請求項17または18に記載の方法。
- 全血から血小板を抽出する方法の収率が、少なくとも60%超である、請求項17、18、または19に記載の方法。
- 遠心力が、少なくとも30秒間適用される、請求項17から20のいずれかに記載の方法。
- 血液製剤(10)が、全血由来の成分のみからなる、請求項17から21のいずれかに記載の方法。
- 工程b)の凝固が、内面(3)を画定する第1材料によって活性化される、請求項17から22のいずれかに記載の方法。
- 工程b)の凝固が、全血(5)をガラスビーズなどの物体(7)に暴露することによって活性化される、請求項17から23のいずれかに記載の方法。
- 容器手段(1)の内面(3)の第1材料が、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリカルボナート、ポリアミド、アクリロニトリルブタジエンスチレン、スチレン、変性スチレン、ポリウレタン、および他のポリマー材料からなる群から選択される、請求項17から24のいずれかに記載の方法。
- 容器手段(1)の内面(3)が、血液製剤(10)と第1材料の内面(3)との間の摩擦を下げるために、表面処理、例えば被覆されている、請求項17から25のいずれかに記載の方法。
- 遠心力(6)が、内面(3)と血液製剤(10)との間に作用する接着力より大きい、請求項17から26のいずれかに記載の方法。
- 内面(3)に接着している血液製剤(10)が、工程c)中、少なくとも1度、内面(3)から剥離される、請求項17から27のいずれかに記載の方法。
- 容器手段(1)に配置されたフィルタなどの圧縮手段(8)によって血液製剤(10)が圧縮される圧縮工程をさらに含む、請求項17から28のいずれかに記載の方法。
- 工程c)中に赤血球(11)が血液製剤(10)から単離される単離工程をさらに含む、請求項17から29のいずれかに記載の方法。
- 血液製剤(10)が洗浄され、血液製剤(10)に付着した実質的にすべての赤血球(11)および/または血清(9)が剥離される洗浄工程をさらに含む、請求項17から30のいずれかに記載の方法。
- 容器手段(1)が、取り外し可能な蓋(2)で閉鎖可能な開口端、および閉鎖端(12)を含む管(4)である、請求項17から31のいずれかに記載の方法。
- 工程b)が工程a)に先行する、請求項17から32のいずれかに記載の方法。
- 工程b)が、工程a)の少なくとも1分前に行われる、請求項17から33のいずれかに記載の方法。
- 工程b)が、工程c)と同時に行われる、請求項17から34のいずれかに記載の方法。
- 線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第1物質が全血に添加される、請求項17から35のいずれかに記載の方法。
- フィルタなどの圧縮手段(8)が、第1固定位置および第2位置を有する、請求項17から36のいずれかに記載の方法。
- フィルタなどの圧縮手段(8)が、容器手段(1)の壁を変形することによって第1固定位置に固定される、請求項17から37のいずれかに記載の方法。
- 全血(5)の代わりに、フィブリンを含む血漿、ならびに白血球および血小板を含むバフィーコートが用いられる、請求項17から38のいずれかに記載の方法。
- 15分以内に行われる、請求項17から39のいずれかに記載の方法。
- 請求項17から40のいずれかに記載の方法であって、該方法によって得られた血液製剤(10)が、請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤(10)である、方法。
- 全血(5)由来の成分、特にフィブリン、血小板、および白血球を含み、血液製剤(10)は、第1層(21)、第2層(22)、および第3層(23)を含み、第2層(22)は、第1層(21)および第3層(23)に隣接しており、第1層(21)は、血液製剤(10)の第1外面(24)を画定し、第3層(23)は、血液製剤(10)の第2外面(25)を画定し、第1層(21)は、大部分のフィブリンを含み、第2層(22)は、大部分の血小板を含み、第3層(23)は、大部分の白血球を含む、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤(10)。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分のフィブリンが、第1層(21)に含まれる、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分の血小板が、第2層(22)に含まれる、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)に含まれる大部分の白血球が、第3層(23)に含まれる、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)が、全血(5)由来の成分のみからなる、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)が、自己由来である、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)が、可撓性である、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 血液製剤(10)が、線維芽細胞、ケラチノサイト細胞、およびヒアルロン酸を含む群から選択された第1物質をさらに含む、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 治療に使用するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 治療に使用する薬剤を製造するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
- 創傷を治療するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 創傷を治療する薬剤を製造するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
- 自己使用のための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 自己薬剤を製造するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
- 手術に使用するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤。
- 手術に使用する薬剤を製造するための、請求項17から41のいずれかに記載の方法によって得られる血液製剤の使用。
- 請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤を調製するための血液製剤調製容器手段(1)であって、ポリアミドおよび/またはポリウレタンを含む血液製剤調製容器手段(1)。
- 請求項1から8のいずれかに記載の血液製剤(10)を製造するための、請求項58に記載の血液製剤調製容器手段(1)の使用。
- ポリアミドおよび/またはポリウレタンを含む、血液製剤調製容器手段(1)。
- 血液製剤(10)を製造するための、請求項60に記載の血液製剤調製容器手段(1)の使用。
Applications Claiming Priority (3)
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