JP2012217342A - 多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 - Google Patents
多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2012217342A JP2012217342A JP2011082838A JP2011082838A JP2012217342A JP 2012217342 A JP2012217342 A JP 2012217342A JP 2011082838 A JP2011082838 A JP 2011082838A JP 2011082838 A JP2011082838 A JP 2011082838A JP 2012217342 A JP2012217342 A JP 2012217342A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- cryopreservation
- group
- solution
- saccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 68
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 title claims abstract description 48
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title abstract description 19
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 title abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 title description 123
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 57
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims abstract description 29
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 25
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 23
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 23
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims abstract description 19
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims abstract description 19
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 15
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 claims description 21
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 19
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 claims description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 8
- -1 saccharide compound Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 claims description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 4
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 4
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 4
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 4
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 claims description 4
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 claims description 3
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 3
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 3
- ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N triethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCO ZIBGPFATKBEMQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 claims description 3
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims 2
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 claims 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229920001351 ε-poly-L-lysine Polymers 0.000 abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 abstract description 6
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 6
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 abstract description 5
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 abstract 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 35
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 35
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000004017 vitrification Methods 0.000 description 32
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 21
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 20
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 18
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 18
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 16
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 14
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 14
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 11
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 8
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 6
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 4
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 4
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 4
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 3
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 3
- 150000007942 carboxylates Chemical group 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 230000000959 cryoprotective effect Effects 0.000 description 3
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 3
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001244 carboxylic acid anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 231100000005 chromosome aberration Toxicity 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 150000002840 non-reducing disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920000083 poly(allylamine) Polymers 0.000 description 2
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 150000003267 reducing disaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N (-)-Epigallocatechin-3-o-gallate Chemical compound O([C@@H]1CC2=C(O)C=C(C=C2O[C@@H]1C=1C=C(O)C(O)=C(O)C=1)O)C(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-WIYYLYMNSA-N 0.000 description 1
- WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 2-(3-hydroxy-2,5-dioxooxolan-3-yl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1(O)CC(=O)OC1=O WQNHWIYLCRZRLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPYCVQASEGGKEG-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyoxolane-2,5-dione Chemical compound OC1CC(=O)OC1=O KPYCVQASEGGKEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 206010061764 Chromosomal deletion Diseases 0.000 description 1
- 208000036086 Chromosome Duplication Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N GCG Natural products C=1C(O)=C(O)C(O)=CC=1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2CC1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 WMBWREPUVVBILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 229920000805 Polyaspartic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010020346 Polyglutamic Acid Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002862 amidating effect Effects 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical group 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000005168 endometrial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940030275 epigallocatechin gallate Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005861 gene abnormality Effects 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N glutaric anhydride Chemical compound O=C1CCCC(=O)O1 VANNPISTIUFMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010064470 polyaspartate Proteins 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920002643 polyglutamic acid Polymers 0.000 description 1
- 229920000223 polyglycerol Polymers 0.000 description 1
- 229930188544 polylisin Natural products 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 239000012474 protein marker Substances 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000010583 slow cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001338 α-poly-D-lysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001347 α-poly-L-lysine Polymers 0.000 description 1
- 229920001345 ε-poly-D-lysine Polymers 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【解決手段】ε-ポリ-L-リジンに無水コハク酸を反応させて、ε-ポリ-L-リジンのアミノ基の60%以上をカルボキシル基に変換する。このようにして得た高分子化合物を、生理的食塩水などに5〜7.5w/w%溶解させ、エチレングリコール6〜7.5M、スクロース0.75Mを含有した溶液としたガラス化液とする。この組成により低温での水の結晶化が抑制され、-70〜-300℃/minの冷却速度域で安定なガラス状態が得られるため、効率の高い凍結保存が可能となった。
【選択図】図1
Description
ε-ポリ-L-リジン(チッソ社製、分子量4000)は25%水溶液のものを用い、分子中のアミノ基に対し、モル%で0〜100%の無水コハク酸(和光純薬工業製)を添加することでカルボキシル基導入率の異なるポリリジンを作成した。ポリリジン分子中のアミノ基のカルボキシル基への置換率はTNBS法(トリニトロベンゼンスルホン酸法によるアミノ基の定量法)により求めた。(なお、以降、たとえばポリリジンのアミノ基のうち65モル%をカルボキシル基に置換した場合、「PLL(0.65)」と表示することとする。)PLL(0.65)溶液をダルベッコ改変培地(DMEM、シグマアルドリッチ製)に0〜20w/w%となるように添加した。このPLL(0.65)溶液に、添加物としてエチレングリコール(和光純薬)を5〜7.5M、スクロースを0.75Mとなるように添加した。この際、pHが6.4〜8.0の範囲内になるように1Nもしくは5N水酸化ナトリウム水溶液で中和した。一方、比較例の凍結保存溶液としてDAP213を作成した。この際、DMSO、アセトアミド、プロピレングリコールはすべて和光純薬工業製を用い、それぞれ、2M、1M、3Mを生理食塩水に溶解し作成した。
エチレングリコール6.5M、スクロース0.75M、PLL(0.65)7.5%のガラス化液を1mLクライオバイアル(Simport Plastics)に熱電対を入れ、そのバイアルを液体窒素中に浸漬、もしくは、あらかじめ-150℃にチャンバー内を冷却しておいたプログラムフリーザー(大陽日酸)内に投入、もしくは室温のチャンバーに投入後、液体窒素蒸気を吹き付けて-150℃に急冷した時の温度降下速度を定量した。その結果を表1に示した。
エチレングリコール5〜7.5M、スクロース0.75M、PLL(0.65)0〜7.5%の各ガラス化液と、比較例としてDAP213ガラス化液を1.5mLマイクロチューブに200μL添加した状態で実施例2にて得られた3種の冷却条件で冷却し、ガラス化が起きるかどうかを検討した。また、解凍時に室温で放置し、再結晶化が起きるかも評価した。評価法は、目視で判定し、透明なままであればガラス化および再結晶化が起こらなかったとして○評価、白濁すれば結晶化が起きたとみなし×評価、ひび割れや一部白濁などを△評価とした。その結果を表2に示した。
凍結保存実験に供したヒトiPS細胞は京都大学iPS研究所より供与された253G1株、継代数20〜70までを用いた。
本発明の手法で凍結保存したヒトiPS細胞がiPS細胞としての機能を解凍後も示すことを確認する必要がある。そこで、まず、EG6.5M、スクロース0.75M、PLL(0.65)7.5%で凍結し、解凍した後のヒトiPS細胞がin vitroにて未分化マーカーを発現しているかを免疫染色法およびアルカリホスファターゼ染色により調べた結果を図2に示す。確認した未分化マーカーはアルカリホスファターゼ、Oct-4、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60、TRA-1-81である。アルカリホスファターゼはシグマのアルカリホスファターゼ活性キットを用い、赤色発色を光学顕微鏡で観察した。その他の5つの未分化マーカーに関してはそれぞれの一次抗体で処理した後、各抗体に適した二次抗体の蛍光を蛍光顕微鏡で観察した。二次抗体に結合した蛍光色素の関係でOct-4、SSEA-3、TRA-1-60陽性細胞は緑色蛍光、SSEA-4、TRA-1-81陽性細胞は赤色蛍光を発する。図2には、蛍光顕微鏡により得られたカラー画像をRGB分解後、緑色蛍光のものは緑色成分のみ、赤色蛍光のものは赤色成分のみを示す。図2より、すべてのマーカーが陽性であり、本発明法で凍結保存したヒトiPS細胞は未分化能を保っていることが確認された。
<実施例6 ヒトiPS細胞の染色体異常評価>
ヒトiPS細胞は移植される可能性があるため、操作技術などにより遺伝子異常が起こることは望ましくない。簡易に遺伝子異常を調べる手段として、染色体異常を評価する手法がある。これにより染色体の欠失や重複などの異常が判別できる。本発明保存液および手法で凍結保存したヒトiPS細胞の形状をG-Band法により調べた結果を図5に示した。この結果より、すべての染色体に異常は見られなかったことから、本発明手法によりヒトiPS細胞は遺伝子異常を引き起こさずに凍結保存可能であった。
Claims (7)
- アミノ基及びカルボン酸基を繰り返し単位中に有する両性高分子化合物1〜20重量%と、分子量1000未満の糖類化合物0.25M〜1.5Mと、分子量1000未満の非糖類多価アルコール5M〜7Mとを溶解させた生理溶液を凍結保存液として用い、該保存液中に細胞のコロニーまたはシングルセルを分散させて、-70℃/min〜-150℃/minにて冷却を行うことを特徴とする細胞の凍結保存法。
- アミノ基及びカルボン酸基を繰り返し単位中に有する両性高分子化合物1〜20重量%と、分子量1000未満の糖類化合物を水酸基モル数ベースの濃度で0.03M〜0.2Mと、分子量1000未満の非糖類多価アルコールを水酸基モル数ベースの濃度で2.9〜3.7Mとを溶解させた生理溶液を凍結保存液として用い、該保存液中に細胞のコロニーまたはシングルセルを分散させて、-70℃/min〜-300℃/minにて冷却を行うことを特徴とする細胞の凍結保存法。
- 前記両性高分子化合物は、ポリアミノ酸の側鎖アミノ基のうちの一部に、無水ジカルボン酸を反応させた形のアミド結合によりカルボン酸基が導入されたものであることを特徴とする請求項1または2に記載の凍結保存法。
- 前記糖類化合物がスクロース、トレハロース、グルコース、ラフィノース、ラクトース、マルトース、マンノース、ガラクトース及びフルクトースからなる群より選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の凍結保存法。
- 前記非糖類多価アルコールが、エチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、マンニトール、ジエチレングリコール及びトリエチレングリコールからなる群より選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の凍結保存法。
- 細胞のコロニーまたはシングルセルを分散させて凍結保存するための凍結保存液であって、アミノ基及びカルボン酸基を繰り返し単位中に有する両性高分子化合物1〜20重量%と、分子量1000未満の糖類化合物0.25M〜1.5Mと、分子量1000未満の非糖類多価アルコール5M〜7Mとを生理溶液に溶解させてなることを特徴とする凍結保存液。
- 前記両性高分子化合物は、繰り返し単位中にアミノ基側鎖を有するポリアミノ酸について、アミノ基の50〜99モル%に無水ジカルボン酸を反応させた形のカルボキシル基を導入した部分カルボキシル化ポリアミノ酸であり、
前記糖類化合物が、スクロース、トレハロース、グルコース、ラフィノース、ラクトース、マルトース、マンノース、ガラクトース及びフルクトースからなる群より選ばれる少なくとも一種であり、
前記前記非糖類多価アルコールが、エチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、キシリトール、ソルビトール、エリスリトール、マンニトール、ジエチレングリコール及びトリエチレングリコールからなる群より選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項6に記載の凍結保存液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011082838A JP6220108B2 (ja) | 2011-04-04 | 2011-04-04 | 多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2011082838A JP6220108B2 (ja) | 2011-04-04 | 2011-04-04 | 多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2012217342A true JP2012217342A (ja) | 2012-11-12 |
JP6220108B2 JP6220108B2 (ja) | 2017-10-25 |
Family
ID=47269572
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2011082838A Active JP6220108B2 (ja) | 2011-04-04 | 2011-04-04 | 多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6220108B2 (ja) |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015100287A (ja) * | 2013-11-21 | 2015-06-04 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 凍結による細胞内分子導入法 |
JP2015149905A (ja) * | 2014-02-10 | 2015-08-24 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 細胞シート及び三次元細胞培養体の凍結保存のための緩慢ガラス化方法 |
WO2016158479A1 (ja) * | 2015-03-27 | 2016-10-06 | 国立大学法人東北大学 | 凍結装置、凍結方法 |
WO2017141991A1 (ja) * | 2016-02-17 | 2017-08-24 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 動物細胞凍結保存液用ガラス化状態安定化剤 |
JP2018533377A (ja) * | 2015-11-16 | 2018-11-15 | アクロン・バイオテクノロジー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーAkron Biotechnology, LLC | 凍結保存組成物およびその使用方法 |
JP2019154329A (ja) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | 旭化成株式会社 | 幹細胞の凍結保存液 |
WO2019189758A1 (ja) * | 2018-03-30 | 2019-10-03 | 味の素株式会社 | ポリリジン類縁体を含む、細胞増殖促進用組成物 |
WO2020013247A1 (ja) * | 2018-07-10 | 2020-01-16 | 大日本住友製薬株式会社 | 多能性幹細胞の分散体、多能性幹細胞製品及びその製造方法 |
WO2021100830A1 (ja) * | 2019-11-20 | 2021-05-27 | 大日本住友製薬株式会社 | 細胞凝集体の凍結方法 |
US11197473B2 (en) | 2015-05-29 | 2021-12-14 | Japan Advanced Institute Of Science And Technology | Vitrified state stabilizing agent for animal cell cryopreservation solution |
US11998002B2 (en) | 2018-03-16 | 2024-06-04 | University Of Warwick | Cryopreserving processes |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109221082B (zh) * | 2018-09-14 | 2021-07-09 | 上海慧存医疗科技有限公司 | 细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001070021A1 (fr) * | 2000-03-24 | 2001-09-27 | Menicon Co., Ltd. | Procede de conservation d'equivalent au tissu et equivalent au tissu conserver a l'etat congele |
WO2009157209A1 (ja) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | 株式会社バイオベルデ | 細胞および組織の凍結保存用組成物 |
JP2011030557A (ja) * | 2009-08-04 | 2011-02-17 | Bio Verde:Kk | 医療用細胞凍害防御液 |
-
2011
- 2011-04-04 JP JP2011082838A patent/JP6220108B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001070021A1 (fr) * | 2000-03-24 | 2001-09-27 | Menicon Co., Ltd. | Procede de conservation d'equivalent au tissu et equivalent au tissu conserver a l'etat congele |
WO2009157209A1 (ja) * | 2008-06-27 | 2009-12-30 | 株式会社バイオベルデ | 細胞および組織の凍結保存用組成物 |
JP2011030557A (ja) * | 2009-08-04 | 2011-02-17 | Bio Verde:Kk | 医療用細胞凍害防御液 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6014054285; 低温医学 36巻,3号, 20100930, 65-68頁 * |
JPN6014054290; Biomaterials Vol.30, 2009, p.4842-4849 * |
JPN6014054292; '新規ガラス化法によるヒトiPS細胞の凍結保存' 再生医療 Vol.9,増刊号, 20100205, p.209 * |
Cited By (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015100287A (ja) * | 2013-11-21 | 2015-06-04 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 凍結による細胞内分子導入法 |
JP2015149905A (ja) * | 2014-02-10 | 2015-08-24 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 細胞シート及び三次元細胞培養体の凍結保存のための緩慢ガラス化方法 |
WO2016158479A1 (ja) * | 2015-03-27 | 2016-10-06 | 国立大学法人東北大学 | 凍結装置、凍結方法 |
JP2016182103A (ja) * | 2015-03-27 | 2016-10-20 | 国立大学法人東北大学 | 凍結装置、凍結方法 |
US11197473B2 (en) | 2015-05-29 | 2021-12-14 | Japan Advanced Institute Of Science And Technology | Vitrified state stabilizing agent for animal cell cryopreservation solution |
JP2022017508A (ja) * | 2015-11-16 | 2022-01-25 | アクロン・バイオテクノロジー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 凍結保存組成物およびその使用方法 |
JP7323290B2 (ja) | 2015-11-16 | 2023-08-08 | アクロン・バイオテクノロジー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニー | 凍結保存組成物およびその使用方法 |
JP2018533377A (ja) * | 2015-11-16 | 2018-11-15 | アクロン・バイオテクノロジー・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーAkron Biotechnology, LLC | 凍結保存組成物およびその使用方法 |
JPWO2017141991A1 (ja) * | 2016-02-17 | 2018-12-06 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 動物細胞凍結保存液用ガラス化状態安定化剤 |
US11812739B2 (en) | 2016-02-17 | 2023-11-14 | Japan Advanced Institute Of Science And Technology | Vitreous state stabilizing agent for animal cell cryopreservation solution |
WO2017141991A1 (ja) * | 2016-02-17 | 2017-08-24 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 動物細胞凍結保存液用ガラス化状態安定化剤 |
JP7033316B2 (ja) | 2016-02-17 | 2022-03-10 | 国立大学法人北陸先端科学技術大学院大学 | 動物細胞凍結保存液用ガラス化状態安定化剤 |
JP2019154329A (ja) * | 2018-03-14 | 2019-09-19 | 旭化成株式会社 | 幹細胞の凍結保存液 |
JP7000212B2 (ja) | 2018-03-14 | 2022-01-19 | 旭化成株式会社 | 幹細胞の凍結保存液 |
US11998002B2 (en) | 2018-03-16 | 2024-06-04 | University Of Warwick | Cryopreserving processes |
WO2019189758A1 (ja) * | 2018-03-30 | 2019-10-03 | 味の素株式会社 | ポリリジン類縁体を含む、細胞増殖促進用組成物 |
JPWO2019189758A1 (ja) * | 2018-03-30 | 2021-04-01 | 味の素株式会社 | ポリリジン類縁体を含む、細胞増殖促進用組成物 |
WO2020013247A1 (ja) * | 2018-07-10 | 2020-01-16 | 大日本住友製薬株式会社 | 多能性幹細胞の分散体、多能性幹細胞製品及びその製造方法 |
JPWO2020013247A1 (ja) * | 2018-07-10 | 2021-08-02 | 大日本住友製薬株式会社 | 多能性幹細胞の分散体、多能性幹細胞製品及びその製造方法 |
JP7428645B2 (ja) | 2018-07-10 | 2024-02-06 | 住友ファーマ株式会社 | 多能性幹細胞の分散体、多能性幹細胞製品及びその製造方法 |
WO2021100830A1 (ja) * | 2019-11-20 | 2021-05-27 | 大日本住友製薬株式会社 | 細胞凝集体の凍結方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6220108B2 (ja) | 2017-10-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6220108B2 (ja) | 多能性幹細胞その他の分散浮遊可能な細胞用の凍結保存液および凍結保存法 | |
Jang et al. | Cryopreservation and its clinical applications | |
US9826732B2 (en) | Composition for cryopreservation of cells and tissues | |
Matsumura et al. | Cryopreservation of a two-dimensional monolayer using a slow vitrification method with polyampholyte to inhibit ice crystal formation | |
Zhou et al. | Bovine oocyte vitrification using the Cryotop method: effect of cumulus cells and vitrification protocol on survival and subsequent development | |
JP5630979B2 (ja) | 動物幹細胞凍結保存液 | |
Seo et al. | Cryopreservation of amniotic fluid-derived stem cells using natural cryoprotectants and low concentrations of dimethylsulfoxide | |
KR20080087148A (ko) | 저온보호 조성물 및 그 이용방법 | |
AU2017377309B2 (en) | Mammalian cell cryopreservation liquid | |
JP2002520290A (ja) | 低温での細胞保存用の溶液におけるアポトーシスレギュレーターの含有 | |
EP2641966A1 (en) | Vitrificated storage solution for cells | |
JP7038369B2 (ja) | ウシ生殖細胞の凍結保存用組成物及び凍結保存方法 | |
US20130267008A1 (en) | Freezing medium composition for cryopreserving amniotic fluid-derived stem cells and a method for cryopreserving the same | |
Zullo et al. | Crocetin improves the quality of in vitro–produced bovine embryos: Implications for blastocyst development, cryotolerance, and apoptosis | |
Marquez-Curtis et al. | Expansion and cryopreservation of porcine and human corneal endothelial cells | |
JP7323290B2 (ja) | 凍結保存組成物およびその使用方法 | |
KR20140041249A (ko) | 식물 유래의 재조합 인간 혈청 알부민, 지질 및 식물 단백질 가수분해물을 유효성분으로 포함하는 줄기세포 또는 일차배양세포의 동결보존용 조성물 | |
Abdalla et al. | Vitrification of ICSI-and IVF-derived bovine blastocysts by minimum volume cooling procedure: effect of developmental stage and age | |
JP2019033707A (ja) | ガラス化凍結保存液およびガラス化凍結保存方法 | |
Matsumura et al. | 7 Cell and Materials Interface in Cryobiology and Cryoprotection | |
Siddiqui et al. | Effect of slow and rapid freezing method on the viability of cryopreserved vero cells | |
JP2014198673A (ja) | 動物胚の低温保存用の保存剤及び低温での動物胚の保存方法 | |
Soares et al. | Safety assessment of poly (N-vinylcaprolactam) as a potential drug carrier in extenders for boar sperm cryopreservation | |
Hicks et al. | Zinc Chloride Supplemented during Ovarian Tissue Vitrification Improves In Vitro Follicle Development and Fertilization in Pigs | |
Jelínková et al. | 5. Influence of selected cryoprotectants on regeneration of cryopreserved cells properties |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131016 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150106 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150227 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20150707 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20151006 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20151130 |
|
A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20160122 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20160408 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160408 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20160509 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20160509 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170512 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20170929 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6220108 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313115 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |