JP7323290B2 - 凍結保存組成物およびその使用方法 - Google Patents
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Description
-80℃の温度への低速凍結保存法に適する凍結保存組成物は、ダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM)中で混合した7.5%v/vのカルボキシル化ポリリシンおよび5%w/vのデキストラン-40を含む。コハク酸無水物との反応によりポリリシンのアミノ基のおよそ60%をカルボキシル化した。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシンを、DMEM中1:3の比でデキストラン-40と混合する。
-80℃の温度への低速凍結保存法に適する凍結保存組成物は、DMEM中で混合した7.5%v/vのカルボキシル化ポリリシンおよび5%w/vのエクトインを含む。コハク酸無水物との反応によりポリリシンのアミノ基のおよそ60%をカルボキシル化した。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシを、DMEM中1:3の比でエクトインと混合する。
-80℃の温度への低速凍結保存法に適する凍結保存組成物は、DMEM中で混合した7.5%v/vのカルボキシル化ポリリシン、5%w/vのエクトインおよび5%w/vのデキストラン-40を含む。コハク酸無水物との反応によりポリリシンのアミノ基のおよそ60%をカルボキシル化した。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシを、DMEM中1:3の比でデキストラン-40およびエクトインと混合する。
凍結保存法に適する凍結保存組成物は、DMEM中で混合した7.5%v/vのカルボキシル化ポリリシン、20%w/vのエクトインおよび20%w/vのデキストラン-40を含む。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシを、DMEM中1:3の比でデキストラン-40およびエクトインと混合する。
-100℃未満の温度へのガラス化および/または超急速凍結を含む高速凍結保存に適する凍結保存組成物は、DMEM中で混合した52.5%v/vのカルボキシル化ポリリシン、35%w/vのエクトインおよび35%w/vのデキストラン-40を含む。コハク酸無水物との反応によりポリリシンのアミノ基のおよそ60%をカルボキシル化する。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシを、DMEMを加えることによりそれらの最終濃度にデキストラン-40およびエクトインと混合する。
-100℃未満の温度へのガラス化および/または超急速凍結を含む高速凍結保存に適する凍結保存組成物は、DMEM中で混合した37.5%v/vのカルボキシル化ポリリシン、25%w/vのエクトインおよび25%w/vのデキストラン-40を含む。コハク酸無水物との反応によりポリリシンのアミノ基のおよそ60%をカルボキシル化する。その溶媒としての水中のカルボキシル化ポリリシを、DMEMを加えることによりそれらの最終濃度にデキストラン-40およびエクトインと混合する。
Claims (35)
- カルボキシル化ポリアミノ酸、有機両性剤、および多糖を含む、凍結保存組成物であって、
カルボキシル化ポリアミノ酸が凍結保存組成物の0.1%w/v~20%w/vの範囲の量で存在し、カルボキシル化ポリアミノ酸がカルボキシル化ポリリシンであり;
有機両性剤が凍結保存組成物の0.1%w/v~20%w/vの範囲の量で存在し;有機両性剤がエクトイン、ヒドロキシエクトイン、またはそれらの組合せより選択され;
多糖が凍結保存組成物の0.1%w/v~20%w/vの範囲の量で存在し、多糖がデキストランである;
細胞を凍結するための凍結保存組成物。 - カルボキシル化ポリリシン上の50%超のアミノ基がブロックされる、請求項1に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリリシン上の50%~65%のアミノ基がブロックされる、請求項1~2のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリアミノ酸が凍結保存組成物の1.0%w/v~10%w/vの範囲の量で存在する、請求項1~3のいずれか一項に記載の組成物。
- 有機両性剤が凍結保存組成物の1.0%w/v~10%w/vの範囲の量で存在する、請求項1~4のいずれか一項に記載の組成物。
- 多糖が凍結保存組成物の1.0%w/v~10%w/vの範囲の量で存在する、請求項1~5のいずれか一項に記載の組成物。
- 多糖および有機両性剤が凍結保存組成物の3.0%w/v~8%w/vの範囲の同じ量で存在する、請求項1~6のいずれか一項に記載の組成物。
- 凍結保存組成物が7.5%w/v以下のカルボキシル化ポリアミノ酸、5%w/v以下の有機両性剤、および5%w/v以下の多糖を含む、請求項1~7のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリアミノ酸が7.5%w/v以下のカルボキシル化ポリリシンを含み、有機両性剤が5%w/v以下のエクトインおよび/またはヒドロキシエクトインを含み、多糖が5%w/v以下のデキストランを含む、請求項1~8のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリアミノ酸が1.1:1~3:1の範囲の有機両性剤に対する比で存在する、請求項1~9のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリアミノ酸が1.3:1~1.7:1の有機両性剤に対する比で存在する、請求項1~10のいずれか一項に記載の組成物。
- 有機両性剤がエクトインであり、多糖がデキストランである、請求項1に記載の組成物。
- DMEM、EMEM、X-VIVO、生理食塩水、水、およびそれらの組合せからなる群より選択される溶媒をさらに含む、請求項1~12のいずれか一項に記載の組成物。
- 生体試料を凍結保存組成物と接触させることを含む、生体試料を凍結保存する方法であって、該凍結保存組成物が1%w/v~10%w/vのカルボキシル化ポリリシン、1%w/v~10%w/vの有機両性剤、および0%w/v~10%w/vの多糖を含み;有機両性剤がエクトイン、ヒドロキシエクトイン、またはそれらの組合せより選択され、多糖がデキストランである、方法。
- 凍結保存組成物が、1%w/v~10%w/vのカルボキシル化ポリリシン、ここで該カルボキシル化ポリリシンは50%超のアミノ基がブロックされており、1%w/v~10%w/vのエクトインを含む、請求項14に記載の方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.1:1:1~3:1:1の範囲のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項14~15のいずれか一項に記載の方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.5:1:1のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項14~16のいずれか一項に記載の方法。
- 凍結保存組成物を生体試料に加えることを含む、生きた状態で生体試料を貯蔵する方法であって、該凍結保存組成物が、1%w/v~10%w/vのカルボキシル化ポリリシン、ここで該カルボキシル化ポリリシンは50%超のアミノ基がカルボキシル基でブロックブロックされており、1%w/v~10%w/vのエクトイン、および0%w/v~10%w/vのデキストランを含む、方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.5:1:1のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項18に記載の方法。
- 生体試料を解凍することをさらに含み、該生体試料が50%超の解凍後生存率を示す、請求項18~19のいずれか一項に記載の方法。
- 20%w/v~55%w/vのカルボキシル化ポリリシン、20%~55%のエクトインまたはヒドロキシエクトイン、および20%~55%の多糖を含み、多糖がデキストランである、細胞を凍結するための凍結保存組成物。
- カルボキシル化ポリリシン上の50%超のアミノ基がブロックされる、請求項21に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリリシン上の60%のアミノ基がブロックされる、請求項21~22のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリリシンが凍結保存組成物の22.5%w/v~52.5%w/vの範囲の量で存在する、請求項21~23のいずれか一項に記載の組成物。
- エクトインまたはヒドロキシエクトインが凍結保存組成物の25%w/v~35%w/vの範囲の量で存在する、請求項21~24のいずれか一項に記載の組成物。
- デキストランが凍結保存組成物の25%w/v~35%w/vの範囲の量で存在する、請求項21~25のいずれか一項に記載の組成物。
- 多糖およびエクトインまたはヒドロキシエクトインが凍結保存組成物の25.0%w/v~35%w/vの範囲の同じ量で存在する、請求項21~26のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリリシンが1.1:1~3:1の範囲のエクトインおよび/またはヒドロキシエクトインに対する比で存在する、請求項21~27のいずれか一項に記載の組成物。
- カルボキシル化ポリリシンが1.3:1~1.7:1のエクトインおよび/またはヒドロキシエクトインに対する比で存在する、請求項21~28のいずれか一項に記載の組成物。
- 生体試料を凍結保存組成物と接触させることを含む、生体試料を凍結保存する方法であって、該凍結保存組成物が20%w/v~55%w/vのカルボキシル化ポリリシン、20%w/v~55%w/vの有機両性剤、および20%w/v~55%w/vの多糖を含み;有機両性剤がエクトイン、ヒドロキシエクトイン、またはそれらの組合せより選択され、多糖がデキストランである、方法。
- 凍結保存組成物が、20%w/v~55%w/vのカルボキシル化ポリリシン、ここで該カルボキシル化ポリリシンは50%超のアミノ基がブロックされており、25%w/v~35%w/vのエクトインおよび25%w/v~35%w/vのデキストランを含む、請求項30に記載の方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.1:1:1~3:1:1の範囲のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項30~31のいずれか一項に記載の方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.5:1:1のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項30~32のいずれか一項に記載の方法。
- 凍結保存組成物を生体試料に加えることを含む、生きた状態で生体試料を貯蔵する方法であって、該凍結保存組成物が、20%w/v~55%w/vのカルボキシル化ポリリシン、ここで該カルボキシル化ポリリシンは50%超のアミノ基がブロックされており、20%w/v~55%w/vのエクトインおよび20%w/v~55%w/vのデキストランを含む、方法。
- カルボキシル化ポリリシンが1.5:1:1のエクトインとデキストランに対する比で存在する、請求項34に記載の方法。
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