JP2012130343A5 - - Google Patents
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- 生来のレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性と比較して増加したレベルのオルニチンデカルボキシラーゼ活性（増加したＯＤＣ活性）を有する微生物における１，４−ブタンジアミンの生化学合成のための方法であって、
増加したオルニチンデカルボキシラーゼ活性は、増加した翻訳および／または転写効率によるオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子の過剰発現によって得られ、そして微生物において産生される１，４−ブタンジアミンは、オルニチンが添加されていない発酵ブロスに分泌され、発酵ブロスから回収され、
前記増加した翻訳および／または転写効率は、イソプロピル−β−Ｄ−チオガラクトシド（ＩＰＴＧ）誘導性の強力なプロモーターからなる強力な調節プロモーターの使用によって得られることを特徴とする、方法。 - 増加した翻訳および／または転写効率は、Ｔ７、Ｔ５、ｐｔａｃ、およびｐｌａｃプロモーターからなる群から選択されるプロモーターの使用によって得られる、請求項１に記載の方法。
- オルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子は、リボソームによるＲＮＡ−テンプレートの良好な認識を達成するためにＲＢＳが適用される前記遺伝子のコーディング領域の上流に局在するリボソーム結合部位（ＲＢＳ）を有する、請求項１または２に記載の方法。
- 過剰発現されるオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子はオルニチンデカルボキシラーゼｓｐｅＦまたはｓｐｅＣ遺伝子（それぞれＥ．Ｃ．４．１．１．１７に属する）である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
- 過剰発現されるオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子はオルニチンデカルボキシラーゼｓｐｅＦ遺伝子である、請求項４に記載の方法。
- 過剰発現されるオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子は、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、およびシェワネラ（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ）からなる群から選択される属のうちの１つから由来するオルニチンデカルボキシラーゼ遺伝子ｓｐｅＦまたはｓｐｅＣである、請求項４または５のいずれか一項に記載の方法。
- 過剰発現されるオルニチンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子は、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）、Ｂ群赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ）、サルモネラ・チフィムチウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｔｉｕｍ）、ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ）、およびシェワネラ・オネイデンシス（Ｓｈｅｗａｎｅｌｌａ ｏｎｅｉｄｅｎｓｉｓ）からなる群から選択される種のうちの１つから由来するオルニチンデカルボキシラーゼ遺伝子である、請求項６に記載の方法。
- さらに、増加したＯＤＣ活性のために、
アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子ｓｐｅＡ（Ｅ．Ｃ．４．１．１．１９に属する）およびアグマチナーゼをコードする遺伝子ｓｐｅＢ（Ｅ．Ｃ．３．５．３．１１に属する、アグマチンウレアヒドロラーゼをコードする遺伝子とも称される）、または
アルギニンデカルボキシラーゼをコードする遺伝子ｓｐｅＡ（Ｅ．Ｃ．４．１．１．１９に属する）、アグマチンイミノヒドロラーゼをコードする遺伝子ａｇｕＡ（Ｅ．Ｃ．３．５．３．１２に属する、アグマチンデイミナーゼをコードする遺伝子とも称される）、Ｎ−カルバモイルプトレシンアミドヒドロラーゼをコードする遺伝子ａｇｕＢ（Ｅ．Ｃ．３．５．１．５３に属する）、および、アグマチナーゼをコードする遺伝子ｓｐｅＢ（Ｅ．Ｃ．３．５．３．１１に属する）
のいずれかの過剰発現によって、少なくとも２つの他の酵素についても増加した酵素活性が得られる、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。 - 方法は、サッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）ｓｐ．、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）ｓｐ．、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）ｓｐ．およびピキア（Ｐｉｃｈｉａ）ｓｐ．からなる群から選択される宿主生物体において行われる、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
- 方法は、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）ｓｐ．およびエシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）ｓｐ．からなる群から選択される宿主生物体において行われ、オルニチンデカルボキシラーゼの増加したレベルの活性とは別に、少なくともアグマチナーゼならびに／またはアグマチンイミノヒドロラーゼおよびＮ−カルバモイルプトレシンアミドヒドロラーゼと組み合わされたアルギニンデカルボキシラーゼの活性のレベルも増加する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
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