JP2011524750A - Il−6に対する抗体及びそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、米国仮出願第61/073430号(2008年6月18日出願)の利益を主張する;これは参照によりその全体が本明細書に加入される。
本明細書の開示及び特許請求の範囲は、特許請求された発明がなされた日付又はそれ以前に効力を有するPfizer Inc.とMedarex,Incとの間の共同研究合意の範囲内で行われた活動の成果としてなされたものである。
本発明は、ヒトIL−6に結合する抗体及びその抗原結合部分に関する。本発明はまた、このような抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸;このような抗体及びその抗原結合部分を作製する方法;このような抗体又はその抗原結合部分を含む組成物;並びにこのような抗体又はその抗原結合部分の使用に関する。
IL−6に特異的に結合し、そしてIL−6受容体アンタゴニストとして作用し得る単離された抗体又はその抗原結合部分、その抗体又は部分を含む組成物が提供される。
定義及び一般的な技術
用語「抗体」は免疫グロブリンと同義であり、そして当該分野で一般的に知られているように理解されるべきである。特に、用語抗体は、抗体を製造するいずれかの特定の方法に限定されない。例えば、用語抗体には、とりわけ、組み換え抗体、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体が含まれる。
それを必要とする患者にIL−6抗体を投与することによりIL−6活性を阻害するための方法も提供される。本明細書に記載される抗体又はその抗原結合部分はいずれも治療に使用され得る。好ましい実施態様において、IL−6抗体はヒト抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体である。別の好ましい実施態様において、IL−6はヒトであり、そして患者はヒト患者である。あるいは、患者は、IL−6抗体が交差反応するIL−6を発現する哺乳動物であり得る。抗体は、IL−6を発現させる目的で、又はヒト疾患の動物モデルとしての非ヒト哺乳動物に投与され得る。このような動物モデルは、抗体の治療有効性を実証するために使用され得る。
(I)線維症に関連する肺疾患、例えば、突発性肺線維症、放射線誘導線維症、慢性閉塞性肺疾患(COPD)、強皮症、ブレオマイシン誘導肺線維症、慢性ぜん息、珪肺症、アスベスト誘導肺線維症、急性肺損傷及び急性呼吸促迫症(細菌性肺炎誘導、外傷誘導、ウイルス性肺炎誘導、人工呼吸器誘導、肺外敗血症誘導、及び吸引誘導を含む);
(II)損傷/線維症に関連する慢性ネフロパシー(腎線維症)、例えば、狼瘡、糖尿病、強皮症、糸球体腎炎、巣状分節状糸球体硬化症、IgAネフロパシー、高血圧、同種移植、狼瘡、及びアルポート;
(III)腸線維症、例えば、強皮症、及び放射線誘導腸線維症;
(IV)肝線維症、例えば、肝硬変、アルコール誘導肝線維症、非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)、胆管損傷、原発性胆汁性肝硬変、感染又はウイルス誘導肝線維症(例えば慢性HCV感染)、及び自己免疫性肝炎;
(V)頭部及び頸部の線維症、例えば放射線誘導;
(VI)角膜瘢痕、例えば、LASIXTM、角膜移植、及び線維柱帯切除術;
(VII)肥厚性瘢痕及びケロイド、例えば、火傷誘導及び手術;及び他の線維性疾患、例えば、サルコイドーシス、強皮症、脊髄損傷/線維症、骨髄線維症(myelofibrosis)、血管再狭窄、アテローム性動脈硬化症、ウェグナー肉芽腫症、混合性結合組織疾患、及びペイロニー病、
が挙げられる。
・筋痛、線維筋痛症、脊椎炎、血清陰性(非リウマチ性)関節症、非関節性リウマチ、ジストロフィン異常症、グリコーゲン分解、多発性筋炎及び化膿性筋炎を含む、筋骨格障害に起因する疼痛;
・狭心症、心筋梗塞、僧帽弁狭窄、心膜炎、レイノー現象、浮腫性硬化症(scleredoma)及び骨格筋虚血により引き起こされる疼痛を含む、心臓及び血管の疼痛;
・頭部疼痛、例えば片頭痛(前兆がある片頭痛及び前兆のない片頭痛)、群発性頭痛、緊張型頭痛混合頭痛及び血管障害に関連する頭痛;並びに
・歯痛、耳痛、口腔灼熱症候群及び側頭下顎筋筋膜痛を含む口腔顔面痛、
が挙げられる。
IL−6抗体及びその抗原結合部分はまた、併用療法(co−therapies)においても使用され得る。適切な抗炎症併用療法化合物としては:
シクロスポリン、ゾレドロン酸、エファリズマブ、アレファセプト、エトドラク、ロルノキシカム、OM−89、バルデコキシブ、トシリズマブ、アバタセプト、メロキシカム、エタネルセプト、ナムブメトン(nambumetone)、リメキソロン、153Sm−EDTMP、プロソルバ(prosorba)、サリチル酸イミダゾール、オプレルベキン、ヒアルロン酸(hylauronic acid)、ナプロキセン、ピロキシカム、ジアセレイン、ルメリコキシブ(lumericoxib)、タクロリムス、アセクロフェナク、アクタリット、テノキシカム、ロシグリタゾン、デフラザコート、アダリムマブ、レフルノミド、リセドロン酸ナトリウム、ミソプロストール及びジクロフェナク、SK−1306X、インフリキシマブ、アナキンラ、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトリコキシブ及びフェルビナク、リューマコン(reumacon)、ゴリムマブ、デノスマブ、オファツムマブ、10rT1抗体、ペルビプロフェン、リコフェロン、テムシロリムス、エクリズマブ、イグラチモド、並びにプレドニゾンが挙げられる。他の適切な抗炎症薬としては、CP−481715、ABN−912、MLN−3897、HuMax−IL−15、RA−1、パクリタキセル、Org−37663、Org 39141、AED−9056、AMG−108、フォントリズマブ(fontolizumab)、ペグスネルセプト(pegsunercept)、プラルナカサン、アピリモド(apilimod)、GW−274150、AT−001、681323(GSK) K−832、R−1503、オクレリズマブ、DE−096、Cpn10、THC+CBD(GW Pharma)、856553(GSK)、ReN−1869、免疫グロブリン、mm−093、アメルバント(amelubant)、SCIO−469、ABT−874、LenkoVAX、LY−2127399、TRU−015、KC−706、アモキサピネト(amoxapinet)及びジピリダモール、TAK−715、PG 760564、VX−702、プレドニゾロン及びジピリダモール、PMX−53、ベリムマブ、プリナベレル(prinaberel)、CF−101、tgAAV−TNFR:Fc、R−788、プレドニゾロン及びSSRI、CP−690550並びにPMI−001が挙げられる。
IL−6抗体及びその抗原結合部分はさらに、変形性関節症の1つ又はそれ以上の徴候を処置するために有用な1つ又はそれ以上の薬剤とともに、変形性関節症の処置のために同時投与(co−administered)され得る。抗IL−6抗体又はその抗原結合部分と組み合わせて使用するための、変形性関節症の1つ又はそれ以上の徴候を処置するために有用な薬剤の例としては、マトリックスメタロプロテイナーゼ(MMP)阻害剤、アグリカナーゼ阻害剤、誘導型一酸化窒素(iNOS)阻害剤、インスリン様成長因子(IGF)発現又は活性の阻害剤、線維芽細胞増殖因子(FGF)発現又は活性の阻害剤、CD44発現又は活性の阻害剤、インターロイキン(IL)発現又は活性の阻害剤、腫瘍壊死因子アルファ(TNF−アルファ)発現又は活性の阻害剤、腫瘍壊死因子誘導タンパク質6(TSG−6)発現又は活性の阻害剤、ビクニン発現又は活性の阻害剤、ベータ−セクレターゼ(BACE)の阻害剤、PACE−4の阻害剤、核内受容体rev−ErbAアルファ(NR1D1)発現又は活性の阻害剤、内皮分化スフィンゴ脂質Gタンパク質共役受容体1(EDG−1)発現又は活性の阻害剤、プロテイナーゼ活性化受容体(PAR)発現又は活性の阻害剤、軟骨由来レチノイン酸感受性タンパク質(CD−RAP)発現又は活性の阻害剤、プロテインキナーゼCゼータ(PKCz)の阻害剤、レジスチン発現又は活性の阻害剤、ディスインテグリン及びメタロプロテイナーゼ8(ADAM8)の阻害剤、補体成分1s小成分(C1s)発現又は活性の阻害剤、ホルミルペプチド受容体様1(FPRL1)発現又は活性の阻害剤が挙げられる。
IL−6抗体又はその抗原結合部分は、疼痛の処置のための1つ又はそれ以上のさらなる薬理活性化合物と組み合わせて投与することができる。これら化合物は、単一の投薬形態で同時に投与してもよいし、又は同じでも異なっていてもよい投薬形態で別々に投与されてもよい。あるいは、これら化合物は順次投与することができる。薬理活性化合物の薬学的に許容しうる塩もまた、組み合わせで使用され得る。
シクロオキシゲナーゼ−2(COX−2)選択的阻害剤、例えばセレコキシブ、ロフェコキシブ、パレコキシブ、バルデコキシブ、デラコキシブ(deracoxib)、エトリコキシブ、及びルミラコキシブ;オピオイド鎮痛薬、例えばモルヒネ、ヒドロモルホン、オキシモルホン、フェンタニル、コデイン、ジヒドロコデイン、オキシコドン、ヒドロコドン、ブプレノルフィン、トラマドール、及びナルブフィン;非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)、例えばアスピリン、ジクロフェナク、ジフルニサル、イブプロフェン、フェノプロフェン、ナプロキセン、ネパフェナク、及びアセトアミノフェン;ホスホジエステラーゼV阻害剤(PDEV)、例えばシルデナフィル;アルファ−2−デルタリガンド、例えばガバペンチン及びプレガバリン;並びに局所麻酔薬、例えばベンゾカイン、リドカイン、ロピバカイン、メントール、カンファー及びサリチル酸メチル、
が挙げられる。
バルビツレート鎮静薬;ベンゾジアゼピン類;鎮静作用を有するヒスタミンH1アンタゴニスト;鎮静薬;骨格筋弛緩薬;N−メチル−D−アスパラギン酸(NMDA)受容体アンタゴニスト;アルファ−アドレナリン作用薬;三環系抗うつ薬;抗痙攣薬、例えばカルバマゼピン;タキキニン(NK)アンタゴニスト、特にNK−3、NK−2又はNK−1アンタゴニスト;ムスカリンアンタゴニスト;神経遮断薬;バニロイド受容体アゴニスト又はアンタゴニスト;ベータ−アドレナリン作用薬;副腎皮質ステロイド;セロトニン(5−HT)受容体アゴニスト又はアンタゴニスト、例えば5−HT1B/1D、5−HT2A、及び5−HT3受容体アンタゴニスト;コリン作用性(ニコチン性)鎮痛薬;カンナビノイド;代謝型グルタミン酸サブタイプ1受容体(mGluR1)アンタゴニスト;セロトニン再取り込み阻害剤、例えばセルトラリン;ノルアドレナリン(ノルエピネフリン)再取り込み阻害剤、例えばレボキセチン、特に(S,S)−レボキセチン;二重セロトニン−ノルアドレナリン再取り込み阻害剤、例えばデュロキセチン;誘導型一酸化窒素合成酵素(iNOS)阻害剤、例えば、S−[2−[(1−イミノエチル)アミノ]エチル]−L−ホモシステイン、S−[2−[(1−イミノエチル)−アミノ]エチル]−4,4−ジオキソ−L−システイン、S−[2−[(1−イミノエチル)アミノ]エチル]−2−メチル−L−システイン、(2S,5Z)−2−アミノ−2−メチル−7−[(1−イミノエチル)アミノ]−5−ヘプテイン酸、2−[[(1R,3S)−3−アミノ−4−ヒドロキシ−1−(5−チアゾリル)−ブチル]チオ]−5−クロロ−3−ピリジンカルボニトリル;2−[[(1R,3S)−3−アミノ−4−ヒドロキシ−1−(5−チアゾリル)ブチル]チオ]−4−クロロベンゾニトリル、(2S,4R)−2−アミノ−4−[[2−クロロ−5−(トリフルオロメチル)フェニル]チオ]−5−チアゾールブタノール、2−[[(1R,3S)−3−アミノ−4−ヒドロキシ−1−(5−チアゾリル)ブチル]チオ]−6−(トリフルオロメチル)−3ピリジンカルボニトリル、2−[[(1R,3S)−3−アミノ−4−ヒドロキシ−1−(5−チアゾリル)ブチル]チオ]−5−クロロベンゾニトリル、N−[4−[2−(3−クロロベンジルアミノ)エチル]フェニル]チオフェン−2−カルボキサミジン、及びグアニジノエチルジスルフィド;アセチルコリンエステラーゼ阻害剤;プロスタグランジンE2サブタイプ4(EP4)アンタゴニスト、例えばN−[({2−[4−(2−エチル−4,6−ジメチル−1H−イミダゾ[4,5−c]ピリジン−1−イル)フェニル]エチル}アミノ)−カルボニル]−4−メチルベンゼンスルホンアミド又は4−[(1S)−1−({[5−クロロ−2−(3−フルオロフェノキシ)ピリジン−3−イル]カルボニル}アミノ)エチル]安息香酸;ロイコトリエンB4アンタゴニスト、例えば1−(3−ビフェニル−4−イルメチル−4−ヒドロキシ−クロマン−7−イル)−シクロペンタンカルボン酸;5−リポキシゲナーゼ阻害剤;並びにナトリウムチャネル遮断薬。
製品:鎮痛薬、例えばアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、トラマドール、トラゾドン;シクロベンザプリン;アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、インドメタシン、及び他のNSAID;抗うつ薬、例えば三環系抗うつ薬及び選択的セロトニン再取り込み阻害剤、例えばアミトリプチリン、イミプラミン、ノルトリプチリン、ドキセピン、フルオキセチン、セルトラリン、及びパロキセチンのような抗うつ薬;筋弛緩薬、例えばシクロベンザプリン;睡眠補助剤(sleeping aids)、例えばゾルピデム。
製品:鎮痛薬、例えばアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、トラマドール、アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、インドメタシン、及び他のNSAID;疾患修飾抗リウマチ薬(DMARD)、例えばスルファサラジン又はメトトレキサート;副腎皮質ステロイド;並びに腫瘍壊死因子(TNF)遮断薬、例えばエタネルセプト及びインフリキシマブ。
製品:ソラレン長波長紫外線(ソラレンUVA又はPUVA)療法、狭帯域中波長紫外線(UVB)療法、及び組み合わせ光(combination light)療法を含む光線療法;外用副腎皮質ステロイド;ビタミンD類似体、例えばカルシポトリエン;アントラリン;外用レチノイド(すなわち、ビタミンA誘導体)、例えばアシトレチン及びタザロテン;プロピオン酸クロベタゾール;メトトレキサート;アザチオプリン;シクロスポリン;ヒドロキシ尿素;並びに免疫調節薬、例えばアレファセプト、エファリズマブ、及びエタネルセプト。
製品:NSAID、例えばアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、トラマドール、アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、及びインドメタシン;並びに副腎皮質ステロイド、例えばプレドニゾン。
製品:鎮痛薬、例えばアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、トラマドール、アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、インドメタシン、及び他のNSAID;抗炎症薬;スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、及びオルサラジン;並びに副腎皮質ステロイド、例えばプレドニゾン及びブデソニド;免疫抑制薬、例えばアザチオプリン、メルカプトプリン、TNF遮断薬、例えばインフリキシマブ及びアダリムマブ、メトトレキサート、及びシクロスポリン;抗生物質、例えばメトロニダゾール及びシプロフロキサシン;止瀉薬、例えばロペラミド;並びに緩下薬。
クラス:鎮痛薬、例えばアセトアミノフェン、ナプロキセンナトリウム、イブプロフェン、トラマドール、アスピリン、セレコキシブ、バルデコキシブ、インドメタシン、及び他のNSAID;抗炎症薬;スルファサラジン、メサラミン、バルサラジド、及びオルサラジン;副腎皮質ステロイド;免疫抑制薬、例えばアザチオプリン、メルカプトプリン、TNF遮断薬、例えばインフリキシマブ及びアダリムマブ、メトトレキサート、並びにシクロスポリン;止瀉薬、例えばロペラミド;並びに緩下薬。
製品:止瀉薬、例えばロペラミド;緩下薬;抗コリン薬;抗うつ薬、例えば三環系抗うつ薬及び選択的セロトニン再取り込み阻害剤、例えばアミトリプチリン、イミプラミン、ノルトリプチリン、ドキセピン、フルオキセチン、セルトラリン、及びパロキセチンのような抗うつ薬;アロセトロン;並びにテガセロッド。
ヒトを含む哺乳動物における異常な細胞浸潤の処置のための医薬組成物も提供され、この医薬組成物は、本明細書に記載されるような、異常な細胞浸潤の処置において有効である量のIL−6抗体又はその抗原結合部分、及び薬学的に許容しうる担体を含む。本組成物は、種々の炎症性疾患及び自己免疫疾患(例えば関節リウマチ、アテローム性動脈硬化症、肉芽腫性疾患、多発性硬化症、ぜん息及びがん)のうち1つ又はそれ以上を有する患者に対して治療的利益をもたらす。
本明細書に提供される別の局面は診断方法である。抗IL−6抗体又はその抗原結合部分は、インビトロマテャアインビボで生物学的サンプル中のIL−6を検出するために使用され得る。一局面は、それを必要としている対象において、IL−6を発現している細胞の存在又は位置を診断するための方法を提供し、この方法は、抗体を対象に注射する工程、抗体が結合している場所を特定することにより対象におけるIL−6の発現を決定する工程、対象における発現を正常な参照対象若しくは標準と比較する工程、及び細胞の存在又は位置を診断する工程を含む。抗IL−6抗体はまた、炎症及び/又は免疫細胞(例えば単球及びT細胞)の組織への浸潤についてのマーカーとして使用され得る。
IL−6抗体のクラス(例えば、IgG、IgM、IgE、IgA、又はIgD)及びサブクラス(例えばIgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4)は、あらゆる適切な方法により決定され得る。一般に、抗体のクラス及びサブクラスは、特定のクラス及びサブクラスの抗体に対して特異的な抗体を使用して決定され得る。このような抗体は市販されている。クラス及びサブクラスは、ELISA、又はウェスタンブロット法に加えて他の技術によっても決定することができる。
IL−6に対する抗IL−6抗体の結合親和性及び解離速度を、任意の適切な方法により決定することができる。結合親和性は、ELISA、RIA、フローサイトメトリー、及び表面プラズモン共鳴(例えばBIACORETM)により測定することができる。解離速度は、表面プラズモン共鳴により測定することができる。任意の適切な方法を使用することにより、抗体が抗IL−6抗体と実質的に同じKDを有するか否かを決定することができる。実施例7は、抗IL−6モノクローナル抗体の親和性定数を決定するための方法を例示する。
任意の適切な方法を使用することにより、IL−6抗体との結合について抗体が同じエピトープに結合するか又は交差競合するか否かを決定することができる。一例において、飽和条件下でIL−6抗体をIL−6に結合させて、次いで試験抗体がIL−6に結合する能力を測定する。試験抗体がIL−6抗体と同時にIL−6に結合することができる場合、その試験抗体はIL−6抗体と異なるエピトープに結合する。しかし、試験抗体が同時にIL−6に結合できない場合、その試験抗体は同じエピトープ、重複エピトープ、又はヒトIL−6抗体が結合したエピトープに極めて近接したエピトープに結合する。この実験は、ELISA、RIA、BIACORETM、又はフローサイトメトリー(FACS)を使用して行うことができる。
IL−6抗体又はその抗原結合部分は、従来のモノクローナル抗体方法論、例えばKohler and Milstein(1975)Nature 256:495の標準的な体細胞ハイブリダイゼーション技術を含む種々の技術により製造することができる。Bリンパ球のウイルス形質転換又はがん化のような、モノクローナル抗体を製造するための他の技術も使用され得る。
抗体及び抗体産生細胞株の製造
IL−6抗原を用いた動物の免疫後に、抗体及び/又は抗体産生細胞を、その動物から得ることができる。いくつかの場合において、IL−6抗体を含有する血清を、動物を採血又は屠殺することにより動物から得る。この血清を、動物から得たままで使用し得、免疫グロブリンフラクションは血清から得られ得るか、又はIL−6抗体を血清から精製し得る。
IL−6抗体又はその抗原結合部分は、宿主細胞における免疫グロブリン軽鎖及び重鎖遺伝子の組み換え発現により製造することができる。例えば、抗体を組み換えにより発現させるために、抗体の免疫グロブリン軽鎖及び重鎖をコードするDNAフラグメントを有する1つ又はそれ以上の組み換え発現ベクターを用いて、宿主細胞をトランスフェクトして、その結果軽鎖及び重鎖が宿主細胞において発現され、そして好ましくは宿主細胞が培養される培地中に分泌されてその培地から抗体から回収することができる。Sambrook、Fritsch and Maniatis(eds)、Molecular Cloning;A Laboratory Manual、Second Edition、Cold Spring Harbor、N.Y.、(1989)、Ausubel、F.M.et al.(編) Current Protocols in Molecular Biology、Greene Publishing Associates、(1989)及び米国特許第4,816,397号(これらの開示は本明細書中に参照により加入される)に記載されるもののような、種々の組み換えDNA方法論が、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子を得るため、これらの遺伝子を組み換え発現ベクターに組み込むため、及びベクターを宿主細胞にベクターを導入するために使用される。
IL−6抗体を発現させるために、VH及びVL領域をコードするDNAフラグメントを、本明細書において考察される方法のいずれかを使用して最初に得ることができる。種々の変異、欠失、及び/又は付加もまた種々の適切な方法を使用してDNA配列に導入することができる。例えば、変異誘発は、標準的な方法、例えばPCR媒介(mediated)変異誘発(ここでは変異したヌクレオチドを、PCR産物が所望の変異又は部位特異的変異誘発を含むようにPCRプライマーに組み込む)を使用して行われ得る。例えば、作製され得る置換の1つの型は、抗体中の1つ又はそれ以上のシステイン(化学的に反応性であり得る)を別の残基(例えば限定することなるアラニン又はセリン)に変更することである。例えば、非標準又は標準システインの置換が存在し得る。置換は、抗体の可変ドメインのCDR若しくはフレームワーク領域又は定常ドメインにおいて作製され得る。抗体はまた、重鎖及び/又は軽鎖の可変ドメインにおいて、例えば抗体の結合特性を変更するように変異し得る。例えば、変異はIL−6に対する抗体のKDを増加若しくは減少させるため、koffを増加若しくは減少させるため、又は抗体の結合特異性を変更するために、CDR領域の1つ又はそれ以上において作製され得る。部位特異的変異誘発における技術には、例えばSambrookら及びAusubelらが含まれる(これらは参照により本明細書に加入される)。
に相互作用し得るようにリンカーによりVLドメインと隔てられている。次いで、VH−リンカー−VL抗体は目的のポリペプチドに連結される。さらに、2つ(又はそれ以上)の一本鎖抗体が互いに連結されている融合抗体を作製することができる。これは、単一のポリペプチド鎖に二価若しくは多価抗体を作製したい場合、又は二重特異性抗体を作製したい場合に有用である。
IL−6抗体及びその抗原結合部分を発現させるために、本明細書に記載されるようにして得られた、部分的又は全長の軽鎖及び重鎖をコードするDNAを、遺伝子が転写及び翻訳制御配列に作動可能に連結されるように発現ベクターに挿入する。この文脈において、用語「作動可能に連結される」は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列がその抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節するというそれらの意図された機能を果たすように、抗体遺伝子がベクターに結合されることを意味するように意図される。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。発現ベクターとしては、例えば、プラスミド、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)、植物ウイルス、例えばカリフラワーモザイクウイルス、タバコモザイクウイルス、コスミド、YAC、及びEBV誘導エピソームが挙げられる。抗体遺伝子は、ベクター内の転写及び翻訳制御配列がその抗体遺伝子の転写及び翻訳を調節するというそれらの意図された機能を果たすように、ベクターに結合される。発現ベクター及び発現制御配列は、使用される発現宿主細胞と適合性であるように選択される。抗体軽鎖遺伝子及び抗体重鎖遺伝子を別々のベクターに挿入してもよく、又は両方の遺伝子を同じ発現ベクターに挿入する。抗体遺伝子は、種々の方法(例えば、抗体遺伝子フラグメント上の相補性制限部位とベクターとのライゲーション、又は制限部位が存在しない場合には平滑末端ライゲーション)により発現ベクターに挿入される。
IL−6抗体又はその抗原結合部分を製造する方法も提供され、この方法は、ヒト抗体のライブラリーをファージにおいて合成する工程、このライブラリーをIL−6又はその部分を用いてスクリーニングする工程、IL−6に結合するファージを単離する工程、及びファージから抗体を得る工程を含む。例として、ファージディスプレイ技術において使用するための抗体のライブラリーを製造するための1つの方法は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒト動物をIL−6又はその抗原性部分を用いて免疫して免疫応答を生じさせて、抗体産生細胞を免疫された動物から抽出する工程;抗体の重鎖及び軽鎖をコードするRNAを抽出した細胞から単離し、RNAを逆転写してcDNAを産生し、プライマーを使用してcDNAを増幅し、そしてcDNAを、抗体がファージで発現されるようにファージディスプレイベクターに挿入する工程を含む。組み換えIL−6抗体は、このやり方で得られ得る。
別の局面において、IL−6抗体又はその抗原結合部分は、PCT公開第WO98/52976号及び同第WO00/34317号(参照により本明細書に加入される)に記載される技術を使用して、それらの免疫原性を減少させるために脱免疫化され得る。
IL−6 抗体又は抗原結合部分は、誘導体化されるか又は別の分子(例えば別のペプチド又はタンパク質)に連結され得る。一般に、抗体又はその抗原結合部分は、L−6結合が誘導体化又は標識により不利な影響を受けないように誘導体化される。従って、抗体及び抗原結合部分は、本明細書に記載されるヒトIL−6抗体のインタクトな形態及び改変された形態の両方を含むことを意図される。例えば、抗体又は抗原結合部分は、1つ又はそれ以上の他の分子実体(例えば、別の抗体(例えば、二重特異性抗体又は二特異性抗体(diabody))、検出剤、標識、細胞傷害性剤、医薬品、及び/又は抗体若しくは抗原結合部分と別の分子(例えばストレプトアビジンコア領域又はポリヒスチジンタグ)との結合を媒介し得るタンパク質若しくはペプチド)に対して、(化学的カップリング、遺伝子融合、非共有結合性結合又はその他の方法により)機能的に連結され得る。
抗IL−6抗体を産生するハイブリドーマの作製
本開示に従う典型的な抗体を以下のように調製し、選択し、そしてアッセイした:
マウス系統
ヒトIL−6に対する完全ヒトモノクローナル抗体を、ヒトIgトランスジェニックマウス系統HCo7及びHCo12、さらにはヒト導入染色体/トランスジェニック系統、KM(Medarex、Inc.)を使用して調製した。これらの系統は全て、ヒトから単離された抗体と区別できない完全ヒト抗体を発現する。
3つの系統全てにおいて、内因性マウスカッパ軽鎖遺伝子及び内因性マウス重鎖遺伝子の両方を、Chen et al.(1993) EMBO J.12:811−820及びPCT公開第WO01/09187号の実施例1にそれぞれ記載されるようにホモ接合的に破壊した。さらに、3つ全てが、Fishwild et al.(1996) Nature Biotechnology 14:845−851に記載されるように、ヒトカッパ軽鎖導入遺伝子、KCo5を保有する。対照的に、これら3つの系統はそれらのヒト重鎖遺伝子に関しては異なっている。HCo7系統は、米国特許第5,545,806号、同第5,625,825号、及び同第5,545,807号に記載されるようなHCo7ヒト重鎖導入遺伝子を保有し;HCo12系統は、PCT公開第WO01/09187号の実施例2に記載されるようなHCo12ヒト重鎖導入遺伝子を保有し;そしてKM系統は、Ishida et al.、(2002)、Cloning and Stem Cells、4:91−102に記載されるようなヒトミニ染色体を保有する。
HuMabマウスについての一般的な免疫スキームは、Lonberg et al(1994) Nature 368(6474):856−859;Fishwild et al.(1996) Nature Biotechnology 14:845−851及びPCT公開第WO98/24884号に記載されている。本ケースでは、HCo7、HCo12及びKM系統の合計で81のHuMabマウスを、Ribiアジュバント中の精製したヒトIL−6 5〜25μgを用いて6〜16週齢で開始して免疫した。ヒトIL−6を、ヒト骨髄由来間質細胞、HS−5(ATCC CRL−11882、Roecklein B.A.& Torok−Storb B.、Blood 85:997−1005、1995)(これは内因的にIL−6を培地中に分泌する)から精製した。ヒトIL−6を、IL−6を発現しているHS−5培地から単離し、これを限外ろ過により濃縮し、続いてQセファロースアニオン交換クロマトグラフィー工程及びマウス抗hIL−6MAb(R&D Systems、Catalog number MAB2061、clone 1936)を使用するアフィニティクロマトグラフィー工程を行った。精製されたヒトIL−6は、SDS−PAGEにより約90%の純度を有していた。主要なバンドをSDS−PAGEゲルから切り取り、トリプシンで消化し、そして抽出ゲル精製トリプシンペプチドを、MALDI/MSにより4700 TOF/TOF Proteomics Analyzerで分析し、そしてヒトIL−6であることを確認した。代りに、商業供給元からの組み換えヒトIL−6(例えば、Recombinant Human IL−6、カタログ番号206−IL−6/CF.R&D System Inc.614 Mckinley Place NE、Minneapolis、MN 55413)を使用することができる。投与は、腹腔内、皮下又は足蹠への注射により3〜14日間隔で、合計8回までの免疫であった。免疫応答を、以下に記載するように、ELISAスクリーニングを介してモニターした。
上述のトランスジェニックマウスから血液を後眼窩からの出血を介して得て、精製ヒトIL−6組み換えタンパク質に対する特異的な結合についてELISAによりFishwild et al.(1996)、Nature Biotechnology 14:845−85により記載されるように分析した。
手短に言うと、マイクロタイタープレートを、PBS中に1μg/mlを含有する精製組み換えIL−6溶液を50μl/ウェル使用してコーティングして、終夜4℃でインキュベートした。次いでウェルを、PBS/Tween(0.05%)中5%ニワトリ血清200μl/ウェルを使用してブロックした。IL−6免疫マウスからの血漿の希釈を各ウェルに加え、そして1時間周囲温度でインキュベートした。プレートをPBS/Tweenで洗浄し、次いで西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)と結合したヤギ−抗ヒトIgG Fcポリクローナル抗体とともに1時間室温でインキュベートした。洗浄した後、プレートをABTS基質(Moss Inc、製品番号:ABTS−1000mg/ml)で発色させ、分光光度計でOD 415−495にて分析した。抗IL−6抗体の最も高い力価を発現したマウス(合計22匹の動物)を融合に使用した。
上で選択されたマウスを、3日目及びその後犠牲にする2日前に再びIL−6を用いて静脈内で追加免疫し、そして脾臓及び/又はリンパ節を取り出した。合計で17の融合を行った。
免疫されたHuMabマウス又はKMマウスから単離したマウス脾細胞及び/又はリンパ節リンパ球を、SP2/0非分泌マウス骨髄腫細胞(ATCC、CRL−1581、ATCC American Type Culture Collection、1080 University Boulevard、Manassas、VA 20110−2209 USA)に、標準的な又は製造業者が推奨するプロトコルに従って電気融合(E−fusion、Cyto PulseTM technology、Cyto PulseTM Sciences、Inc.、Glen Burnie、MD)を使用して融合させた。
手短に言うと、免疫したマウスからの脾細胞及び/又はリンパ節リンパ球の単一細胞懸濁液を調製し、次いで等しい数のSp2/0非分泌マウス骨髄腫細胞と混合し;次いでE−融合を行った。
IL−6抗体の配列決定
全長抗IL−6抗体をクローニングし、そして配列をハイブリドーマから以下のように確認した:ポリA+mRNAを、RNeasy Mini Kit(Qiagen)を使用して単離し、そしてcDNAをAdvantage RT−for−PCRキット(BD Biosciences)でオリゴdTプライミングを用いてmRNAから合成した。クローン9C8についてオリゴ(dT)プライミングしたcDNAを、それぞれ表1に掲載した縮重プライマーを使用して増幅した。
可変ドメインを、表3に掲載したプライマーを使用してpCR2.1クローンcDNAから増幅した。増幅は、Pfx Platinumポリメラーゼ(Invitrogen)及びPTC−200 DNA Engine(MJ Research)を使用して、以下のサイクルを用いて達成した:2’@94℃;20x(30’’@94℃、45’’@55℃、1’@68℃);5’@68℃。次いで可変ドメインを、適切なアイソタイプの定常ドメインを含む発現ベクターにクローニングした。これらのクローンの配列を、Grills 16th BDTv3.1/dGTP chemistry(Applied Biosystems Inc)及び3730xl DNA分析器(Applied Biosystems Inc)を使用して確認した。
抗IL−6抗体の突然変異誘発:
重鎖可変ドメインにおける抗IL−6抗体9C8のアミノ酸置換変異体を、IgG1又はIgG2の両方の形式において単独又は組み合わせのいずれかで、位置24(I24V)、30(R30S)、31(E31G)、52(F52N)、68(N68T)、83(T83S)で作製した。軽鎖可変ドメインにおける抗IL−6抗体9C8のアミノ酸置換変異体を、IgG1又はIgG2形式として両方92(K92N)で作製した。重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメイン変異体の両方を有する抗体を作製した。種々の変異の組み合わせのいくつかを表6a及び6bに示す。クローン9C8のVH(I24V)、VH(E31G)、VH(N68T)、及びVH(T83S)領域における突然変異誘発を、表4(センス鎖が示される;標的の残基は太字で示す)に掲載したプライマー及びQuickChangeキット(Stratagene)を用いて製造業者の使用説明書に従って行った。突然変異した変異体の配列を確認し、そして標準的な手順で発現ベクターにクローニングした。
TF−1増殖
アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(ATCC)(Manassas、Va.)からヒト細胞、TF−1細胞を入手し、そして10% 熱不活化ウシ胎仔血清(FBS)(Invitrogen、Carlsbad、Ca.)を含有するRPMI−1640培地中で2ng/ml組み換えヒトGM−CSFと共に維持した。TF−1細胞を翌日の使用のために1〜2x105に分けた。プレーティングの前に、細胞を3回RPMI−1640で洗浄し、計数し、そして体積をアッセイ培地で調整して2x105細胞/mlとした。各ウェルに、洗浄した細胞50μlを加え、そして終夜37℃にて5%CO2でインキュベートした。全ての条件を96ウェル組織培養処理プレート(Corning、Corning、NY)において三連(triplicate)で行った。各ウェルに、体積25μlの25ng/ml又は2.5ng/mlのいずれかのIL−6及びリン酸ナトリウム緩衝液(10mMリン酸ナトリウム及び150mM塩化ナトリウム、pH7.4)中体積25μlで種々の濃度での試験抗体又はコントロール抗体を最終体積100μlにして加えた。抗体を単独で、及びヒトIL−6とともに試験した。プレートを48時間(hrs)37℃にて5%CO2でインキュベートした。48時間後、10μl/ウェルの0.5μCi3H−チミジン(Amersham Biosciences、Piscataway、N.J.)を加え、そして細胞に3時間パルス標識した。組み込まれたチミジンの量を検出するために、細胞を予め湿らせたユニフィルターGF/Cフィルタープレート(Packard、Meriden、Ct.)上に採取し10回水で洗浄した。これらのプレートを終夜乾燥するにまかせた。底のシールをフィルタープレートに取り付けた。次に、1ウェルあたり45μl Microscint 20(Packard、Meriden、Ct.)を加えた。上部のシールを取り付けた後、プレートをTrilux microbetaカウンター(Wallac、Norton、Oh.)により計数し、データをCPM(1分あたりのカウント)として報告した。表6a及び表6bは、9C8抗体及びアミノ酸置換を有する種々の抗体のTF−1増殖アッセイにおけるIC50を示す。表6a及び表6bにおいて示される結果は2つの別々の時に行われたアッセイからのものである。
LPS−サル研究からのC−反応性タンパク質
この研究のインビボの部分は、Charles River Laboratories Preclinical Servicesにより彼らのWorcester、MAの試験施設にて行われた。手短に言うと、この研究は、15頭の雄性カニクイザル(5つの群;3頭のサル/群)で構成された。日1に群1の動物にビヒクルを与え;群2及び3の動物に抗体9C8 N68T T83S IgG1をそれぞれ0.5及び5mg/kgの用量で投与し;そして群4及び5に9C8 N68T T83S IgG2をそれぞれ0.5及び5mg/kgの用量で投与した。全ての処置は、静脈内ボーラス注射により各1mL/kgの用量体積で行われた。処置の約2時間後、全ての動物を、10μg/kg細菌リポ多糖(LPS)、体積1mL/kgでゆっくりとした静脈内ボーラス注射によりチャレンジした。日1にベースライン(処置の前);処置直後;処置の2時間後(LPS投与の直前);並びにLPSチャレンジの30分後及び1、2、3、4、6、8、及び22時間後に、末梢血管から採血した。血液サンプルは日3、4、5、6及び7にも採取した。全血サンプルを処理して血清とし、そして血清サンプルを凍結保存した。C反応性タンパク質(CRP)を、Meso Scale Discovery(MSD(登録商標))、Gaithersburg、MDからのヒト血管損傷パネルII Multi−Spot(登録商標)アッセイキットを使用して測定した。アッセイは、MSDから公開されているキット使用説明書に概説されているように行った。図2は、9C8 N68T T83S IgG2抗体についての総血清CRPを示す。
フローサイトメトリーによるpSTAT3アッセイ
インビトロアッセイを、組み換えヒトIL−6(rhIL−6)で刺激したヒト全血及びヒト末梢血単核細胞(PBMC)で行って、抗IL−6抗体の存在下のリン酸化STAT3(pSTAT3)レベルを測定した。
採取したばかりのヘパリン化ヒト全血を、抗IL−6抗体又はビヒクルコントロール(15mLポリプロピレンチューブ中最終体積300μL)とともに15分間37℃でインキュベートした。サンプルを組み換えヒト(rh)IL−6で最終濃度25ng/mLについて刺激し、そして10分間37℃でインキュベートした。次いで赤血球(RBC)をRBC溶解緩衝液(Sigma)4mLで溶解し、そしてサンプルを穏やかに10分間37℃で混合した。サンプルを400×gで5分間回転して細胞をペレットにした。上清を除去した。洗浄緩衝液(PBS中の4%BSA、Gibco)2ミリリットルを各チューブに加え、次いでサンプルを400×gで5分間回転させて細胞をペレットにした。上清を除去し、そして細胞ペレットを予熱した(37℃)透過処理(permeabilization)緩衝液(PBS中2%ホルムアルデヒド、Polysciences、Inc.)200μLに再懸濁して37℃で10分間インキュベートした。氷冷MeOH3ミリリットルを各サンプルに加えて細胞を固定した。サンプルを混合して氷上に少なくとも30分間置いた。サンプルを回転させて(400×g、5分間)、上清を除去した。ペレットを洗浄緩衝液で1回洗浄した。次いで細胞ペレットを、洗浄緩衝液で希釈した(最終体積100μL)Alexa Fluor 488(BD Pharmingen)に結合した抗リン酸化STAT3(Y705)抗体で染色した。サンプルを氷上で30分間インキュベートし、次いで2回洗浄緩衝液で洗浄した。最終細胞ペレットを400μL IF緩衝液(ハンクス平衡塩類溶液、2%ウシ胎児血清、10mM Hepes、0.2%アジ化ナトリウム、Gibco)に再懸濁した。CellQuestソフトウエア(BD Biosciences)を使用するFACSCalibur機器を使用して、データを収集及び解析した。表7は、ヒト全血で測定して、抗IL−6抗体の存在下でのpSTAT3レベルを示す。
末梢血単核細胞(PBMC)を、採取したばかりのヘパリン化ヒト全血から、Accuspin System−Histopaque 1077カラムを使用して製造業者のプロトコル(Sigma−Aldrich A7054)にしたがって単離し、そして(マクロファージSFM培地、Gibco中0.1%ペニシリン ストレプトマイシン)に入れた。約2×106のPBMCを抗IL−6抗体又はビヒクルコントロール(最終体積300μL)と15分間37℃でインキュベートした。PBMCをrhIL−6で最終濃度25ng/mLで刺激し、そして10分間37℃でインキュベートした。サンプルを400×gで5分間回転させて細胞をペレットにした。上清を除去した。洗浄緩衝液(PBS中4% BSA)2mLを各サンプルに加えた。サンプルを400×gで5分間回転させて細胞をペレットにした。上清を除去し、そして細胞ペレットを、予熱した(37℃)透過処理緩衝液(PBS中2%ホルムアルデヒド、Polysciences、Inc.)200uLに再懸濁させて37℃で10分間インキュベートした。氷冷MeOH3ミリリットルを各サンプルに加えて細胞を固定した。サンプルを混合して氷上に少なくとも30分間維持した。サンプルを400xgで5分間回転させて上清を除去した。細胞ペレットを洗浄緩衝液で1回洗浄し、次いで全血アッセイにおいて記載したように染色して分析した。表8は、ヒト末梢血単核細胞において測定して、抗IL−6抗体の存在下におけるpSTAT3レベルを示す。
結合親和性
BIAcoreチップの準備
抗IL−6抗体 9C8 N68T T83S IgG2を、Loefas及びJohnsson(J.Chem.Soc.Chem.Commun.(1990);21:pp1526−1528)により記載しているように、チップのデキストランマトリックスに結合したカルボキシメチルセルロース(CM)へのアミンカップリングによりBIAcore CM5チップ(GE Biosciences−以前はBIAcore Inc、Piscataway、NJ)上に固定化した。このチップをカップリングの前に1M NaCl及び50mM NaOHで前処理した。アミンカップリングを、EDC(1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド)とNHS(N−ヒドロキシコハク酸イミド)とを混合し、そしてチップを通過させてCM基を活性化することにより達成した。10mM酢酸緩衝液pH5中のリガンドを、チップ表面を通過させて、活性化したCM基に共有結合させた。チップ表面上の残った活性CM基を、チップに1MエタノールアミンpH8.5を通過させることによりクエンチした。EDC、NHS、及びエタノールアミンをGE Biosciencesから得られるAmine Couplingキットの一部として入手した。カップリングを、BiaControlソフトウエアV3.2に同梱されている自動化表面準備ウィザード(Surface Preparation Wizard)を使用して行った。
全てのSPR測定は、BIAcore 3000装置(GE Biosciences、Piscataway、NJ)で行った。BIAcoreソフトウエア−BIAcore 3000制御ソフトウェアV3.2を、BIAcore 3000装置の操作及び制御に使用した。BiaEvaluationソフトウェアV4.1を、BIAcore 3000装置からのSPRデータの解析に使用し、そしてデータをGraph Pad Prismソフトウェアバージョン5を使用してプロットした。モノクローナル抗体(mAb)に対するIL−6の結合親和性を、HBS−EP緩衝液(10mM HEPES、150mM NaCl、3.4mM EDTA、0.005% P20)中25℃で測定した。親和性研究のための流量は、物質輸送の作用(mass transport effects)を最小にするために40uL/分であった(Myszka、D.G.、et al.、Biophysical chemistry.64、127−137、1997)。ヒトIgGκをチップの参照チャネルの構築のためのリガンドとして使用した。固定化されたリガンド(9C8 N68T T83S IgG2)に対する被検体(rhIL−6;R&D Systems、Minneapolis、MN、206−IL)結合を、二連(duplicate)で測定し、そしてIL−6の濃度範囲は0〜25nMであった。IL−6についての注入時間は6分であり、解離時間は25分であった。表面を10mMグリシンpH1.7、30秒間、流量30uL/分によりサイクルの間に再生させた。再生条件は、再生研究(データは示されていない)後に最適であることが確立されている。データを、1:1ラングミュアモデル(Karlson R&Faelt A.、J.Immunol.Methods.200:pp121−133、1997)を使用するBiaEvaluationソフトウェアV4.1に両方とも含まれている、反応速度論ウィザード(Kinetics Wizard)及び手動フィッティングプログラムを使用することにより解析した。抗IL−6抗体9C8 N68T T83S IgG2は、ka=9.95E+05(Ms)-1、kd=1.34E−04s-1、及びKD=1.35E−10M又は135pMを有することが示された。
Claims (26)
- a) 配列番号5で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、及び配列番号7で示されるVHCDR3;
b) 配列番号35で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、及び配列番号7で示されるVHCDR3;
c) 配列番号5で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、及び配列番号41で示されるVHCDR3;
d) 配列番号5で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、及び配列番号44で示されるVHCDR3;並びに
e) 配列番号5で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、及び配列番号45で示されるVHCDR3;
からなる群より選択されるCDR1、CDR2、及びCDR3領域を含む重鎖可変(VH)ドメインアミノ酸配列を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - 配列番号16で示されるVLCDR1、配列番号17で示されるVLCDR2、及び配列番号18で示されるVLCDR3を含む軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列をさらに含む、請求項1に記載の単離されたヒト抗体又は抗原結合部分。
- 配列番号16で示されるVLCDR1、配列番号17で示されるVLCDR2、及び配列番号18で示されるVLCDR3を含む軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分。 - 配列番号5で示されるVHCDR1、配列番号6で示されるVHCDR2、配列番号7で示されるVHCDR3、配列番号16で示されるVLCDR1、配列番号17で示されるVLCDR2、及び配列番号18で示されるVLCDR3を含む、請求項2に記載の単離された抗体又はその抗原結合部分。
- 配列番号4、配列番号29、配列番号34、配列番号37及び配列番号40からなる群より選択されるか、又は配列番号4、配列番号29、配列番号34、配列番号37及び配列番号40のいずれか1つと少なくとも1つの保存的アミノ酸置換を有することが異なるか、又は配列番号4、配列番号29、配列番号34、配列番号37及び配列番号40のいずれか1つと、配列番号46と比較して生殖系列アミノ酸置換を少なくとも1つ有することが異なる、重鎖可変(VH)ドメインアミノ酸配列を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - VHドメインが、配列番号4、配列番号29、配列番号34、配列番号37及び配列番号40のいずれか1つと、アミノ酸配列において少なくとも90%同一である、請求項5に記載の抗体又はその抗原結合部分。
- 配列番号15からなる群より選択されるか、又は保存的アミノ酸置換を有することが配列番号15と異なるか、又は配列番号47と比較して生殖系列アミノ酸置換を有することが配列番号15と異なる、軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列を含み;
ヒトIL−6に対して特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - 配列番号15と、アミノ酸配列において少なくとも90%同一であるVLドメインを含む、請求項7に記載の抗体又はその抗原結合部分。
- 配列番号15からなる群より選択されるか、又は保存的アミノ酸置換を有することが配列番号15と異なるか、又は配列番号47からなる群より選択されるそれらのそれぞれの生殖系列配列と比較して生殖系列アミノ酸置換を有することが配列番号15と異なる、軽鎖可変(VL)ドメインアミノ酸配列をさらに含む、請求項5に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
- 抗体9C8、9C8 N68T T83S、9C8 E31G N68T T83S、9C8 I24V N68T T83S、及び22B5のVL及びVHドメインと、それぞれアミノ酸配列において少なくとも90%同一なVL及びVHドメインを含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - a) モノクローナル抗体9C8 IgG1、9C8 IgG2、9C8 N68T T83S IgG1、9C8 N68T T83S IgG2、9C8 E31G N68T T83S IgG1、9C8 E31G N68T T83S IgG2、9C8 I24V N68T T83S IgG1、9C8 I24V N68T T83S IgG2及び22B5 IgG1からなる群より選択される抗体の重鎖から独立して選択される、少なくとも1つの重鎖CDR1、CDR2及び/若しくはCDR3;又は
b) モノクローナル抗体9C8 IgG1、9C8 IgG2、9C8 N68T T83S IgG1、9C8 N68T T83S IgG2、9C8 E31G N68T T83S IgG1、9C8 E31G N68T T83S IgG2、9C8 I24V N68T T83S IgG1、9C8 I24V N68T T83S IgG2及び22B5 IgG1からなる群より選択される抗体の軽鎖から独立して選択される、少なくとも1つの軽鎖CDR1、CDR2及び/若しくはCDR3;又は
c) モノクローナル抗体9C8 IgG1、9C8 IgG2、9C8 N68T T83S IgG1、9C8 N68T T83S IgG2、9C8 E31G N68T T83S IgG1、9C8 E31G N68T T83S IgG2、9C8 I24V N68T T83S IgG1、9C8 I24V N68T T83S IgG2及び22B5 IgG1からなる群より選択される抗体の重鎖から独立して選択される少なくとも重鎖CDR1、CDR2及び/若しくはCDR3、並びにモノクローナル抗体9C8 IgG1、9C8 IgG2、9C8 N68T T83S IgG1、9C8 N68T T83S IgG2、9C8 E31G N68T T83S IgG1、9C8 E31G N68T T83S IgG2、9C8 I24V N68T T83S IgG1、9C8 I24V N68T T83S IgG2及び22B5 IgG1からなる群より選択される抗体の軽鎖から独立して選択される少なくとも1つの軽鎖CDR1、CDR2及び/若しくはCDR3を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - 配列番号3、配列番号24、配列番号28、及び配列番号32からなる群より選択されるか、又は配列番号3、配列番号24、配列番号28、及び配列番号32のいずれか1つと保存的アミノ酸置換を有することが異なるか、又は配列番号3、配列番号24、配列番号28、及び配列番号32と、配列番号46からなる群より選択されるそれらのそれぞれの生殖系列配列と比較して生殖系列アミノ酸置換を有することが異なる、アミノ酸配列を有する重鎖を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - 配列番号14、配列番号26及び配列番号43からなる群より選択されるか、又は配列番号14、配列番号26及び配列番号43のいずれか1つと保存的アミノ酸置換を有することが異なるか、又は配列番号14、配列番号26及び配列番号43と、配列番号47からなる群より選択される対応する生殖系列配列と比較して生殖系列アミノ酸置換を有することが異なる、アミノ酸配列を有する軽鎖を含み;
ヒトIL−6に特異的に結合する、
単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - a) 配列番号3のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号14のアミノ酸配列を有する軽鎖;
b) 配列番号24のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖;
c) 配列番号28のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号26のアミノ酸配列を有する軽鎖;並びに
d) 配列番号31のアミノ酸配列を有する重鎖及び配列番号14のアミノ酸配列を有する軽鎖、
からなる群より選択される重鎖及び軽鎖を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。 - 重鎖アミノ酸配列が配列番号28であり、そして軽鎖アミノ酸配列が配列番号26である、請求項14に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
- 9C8、9C8 N68T T83S、9C8 E31G N68T T83S、9C8 I24V N68T T83S、及び22B5からなる群より選択される抗体の、1つ若しくはそれ以上のVH FR1、FR2、FR3若しくはFR4及び/又はVL FR1、FR2、FR3若しくはFR4アミノ酸配列をさらに含む、請求項1、2、3、4、及び11のいずれか1項に記載の単離されたモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の抗体又は抗原結合部分、及び薬学的に許容しうる担体を含む、医薬組成物。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の抗体若しくは抗原結合部分、又は該抗体若しくは該抗原結合部分の重鎖若しくは軽鎖を産生する、単離された細胞株。
- 請求項1〜16のいずれか1項に記載の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
- 請求項19に記載の核酸分子を含み、該核酸分子に作動可能に連結された発現制御配列を場合により含む、ベクター。
- 請求項20に記載のベクター又は請求項19に記載の核酸分子を含む、宿主細胞。
- 必要とする対象においてIL−6仲介障害の症状を処置、予防又は軽減するための方法であって、該対象に請求項1〜16のいずれか1項に記載の抗体若しくは抗原結合部分、又は請求項17に記載の医薬組成物を投与することを含む、上記方法。
- 対象が、炎症性疾患、アレルギー性疾患、自己免疫障害、移植片拒絶障害、アテローム性動脈硬化症、骨粗しょう症、神経障害性疼痛、2型糖尿病、慢性閉塞性肺疾患、多発性硬化症、敗血症、がん、及び線維症状態からなる群より選択される1つ又はそれ以上の状態又は疾患を罹患している、請求項22に記載の方法。
- 炎症性疾患が、関節リウマチ、若年性突発性関節炎、変形性関節症、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、乾癬、キャッスルマン病、クローン病、及び成人発症スチル病からなる群より選択される、請求項23に記載の方法。
- 線維症状態が、肝線維症、腎線維症、及び肺線維症からなる群より選択される、請求項23に記載の方法。
- がんが、多発性骨髄腫、腎細胞がん、及びキャッスルマン病からなる群より選択される、請求項23に記載の方法。
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