JP2011522070A - ミセル集合体 - Google Patents

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Abstract

本願によって、コポリマーを含むミセル集合体が提供される。一定の場合、本願に提供されるミセル集合体はｐＨ感受性粒子である。
【選択図】図１

Description

相互参照
［０００１］本願は、米国仮出願第６１／０５２，９０８号（２００８年５月１３日出願）、米国仮出願第６１／０５２，９１４号（２００８年５月１３日）、米国仮出願第６１／０９１，２９４号（２００８年８月２２日出願）、米国仮出願第６１／１１２，０４８号（２００８年１１月６日出願）、米国仮出願第６１／１４０，７７４号（２００８年１２月２４日出願）および米国仮出願第６１／１７１，３６９号（２００９年４月２１日出願）の利益を主張し、これらの文献は、その全体が本願に援用される。
連邦政府に後援を受ける研究に関する表明
［０００２］本発明は、契約番号ＮＩＨ１ＲＯ１ＥＢ００２９９１の下、国立衛生研究所から与えられる政府の支援に基づきなされたものである。政府は本発明に一定の権利を有する。
［０００３］本願は、ポリマーから形成されるミセル集合体およびそのようなミセル集合体の使用を開示する。
［０００４］一定の場合において、生きた細胞に対して治療薬（例えばオリゴヌクレオチド）を提供することは有益である。ある場合、生きた細胞に対するそのようなポリヌクレオチドの送達は治療の利点を提供する。
［０００５］一定の実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックはｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、ここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるミセル集合体が提供される。ある実施態様において、「膜」という用語は、細胞質の膜、ベジクル膜、被覆小窩膜、エンドソーム膜および／または細胞膜を意味する。
［０００６］一定の実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、前記コアブロックはコポリマーブロックであり、且つここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるミセル集合体が提供される。ｐＨが帯電可能種のｐＫａ付近である場合、双方の形態の帯電可能種の平衡な分布が存在するだろう。陰イオン種の場合、ｐＨが陰イオン種のｐＫａであるときには、集団の約５０％が陰イオンとなり、約５０％が帯電していない状態であるだろう。ｐＨが帯電可能種のｐＫａからずれるとこの平衡状態は対応して変化し、より高いｐＨ値では陰イオンの形態が支配的となり、より低いｐＨ値では荷電していない形態が支配的となるだろう。ここに記載される実施態様は、任意のｐＨ値におけるコポリマーの形態を含む。
［０００７］ある実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、前記第１の帯電可能種は疎水性的に保護されており、且つここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるミセル集合体が提供される。
［０００８］一定の実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種およびほぼ中性のｐＨにおいて陽イオン性である第２の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、且つここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるミセル集合体が提供される。
［０００９］ある実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、且つここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて温度非依存性親水性物質であるミセル集合体が提供される。一実施態様において、「温度非依存性親水性物質」は、２０から４０℃の温度範囲にわたって実質的に変化しない親水性特性を有する親水性物質を指す。その結果、親水性特性は、ヒト患者へのミセル集合体の投与の前後において実質的に変化しない。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約６．５もしくはそれより低いｐＨで、約５．０から約６．５のｐＨで、または約６．２もしくはそれより低いｐＨで膜を不安定にする膜不安定化ブロックコポリマーを含む。
［００１０］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体に利用される膜不安定化ブロックコポリマーは、少なくとも２つのブロックを含み、またはジブロックコポリマーである。
［００１１］一定の実施態様において、ミセル集合体のシェルはポリエチレングリコール基を含む。特定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックはポリエチレングリコールであるか、またはそれを含む。ある実施態様において、シェルブロックは複数のシェルモノマー単位を含み、ここにおいて１以上の前記シェルモノマー単位はＰＥＧ基によって置換されまたは官能化されている。
［００１２］ある実施態様において、約６．２から７．５のｐＨ範囲にわたる前記ミセル集合体の形態は、ミセル、擬似ミセルまたはミセル様構造である。さらなるまたは代替となる実施態様において、約６．２から７．５のｐＨ範囲にわたる前記ミセル集合体の形態はミセルである。
［００１３］一定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの少なくとも１つのブロックはグラジエントブロックであるミセル集合体が提供される。
［００１４］ある実施態様において、少なくとも１つの研究試薬を含むミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は少なくとも１つの診断薬を含む。ある実施態様において、ミセル集合体は少なくとも１つの治療薬を含む。特定の実施態様において、治療薬は、共有結合、非共有結合相互作用またはそれらの組み合わせにより、ミセル集合体において少なくとも１つの膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックに付着される。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、少なくとも１つの膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックに付着された第１の治療薬およびミセル集合体のコア部分内における少なくとも１つの第２の治療薬を含む。ある実施態様において、それぞれのミセル集合体は、平均で１−５、５−２５０、５−１０００、２５０−１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０または少なくとも５０の治療薬を含む。ある実施態様において、ここに記述されるミセル集合体にて提供される治療薬は、少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸を含む。一定の実施態様において、治療薬は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、遺伝子発現修飾因子、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアプタマーである。ある実施態様において、治療薬は、タンパク質性治療薬（例えば、タンパク質、ペプチド、酵素、ドミナントネガティブタンパク質、ホルモン、抗体、抗体様分子または抗体断片）である。一定の実施態様において、治療薬は、炭水化物または約５００ダルトンより大きな分子量を有する小分子である。ある実施態様において、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーは、治療薬に付着される。
［００１５］ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸を含む。ある実施態様において、シェルブロックは非ペプチド性である。一定の実施態様において、少なくとも１つのヌクレオチドはリボヌクレオチドである。ある実施態様において、少なくとも１つのヌクレオチドは、遺伝子発現修飾因子、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアプタマーである。特定の実施態様において、ノックダウン剤は、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである。
［００１６］ある実施態様において、少なくとも１つのターゲッティング成分を含むミセル集合体が提供される。
［００１７］一定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは帯電しているか、または帯電可能である。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、ほぼ中性のｐＨでポリカチオン性である。一定の実施態様において、シェルブロックは陽イオン性および非陽イオン性のモノマー単位を含む。ある実施態様において、シェルブロックは、少なくとも１つの陽イオン性帯電可能モノマー単位および少なくとも１つの非帯電可能なモノマー単位を含む。
［００１８］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ホモポリマーブロックであるシェルブロックを有する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含む。さらなるまたは代替となる実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ヘテロポリマーブロックであるシェルブロックを有する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含む。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体の膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレートモノマー単位、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレートモノマー単位、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレートモノマー単位またはそれらの組み合わせを含む。
［００１９］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、少なくとも１つの第１の帯電可能種および少なくとも１つの第２の帯電可能種を有するコアを含み、ここにおいて前記第１の帯電可能種は陰イオン種に帯電可能か、または帯電しており、ここにおいて前記第２の帯電可能種は陽イオンに帯電可能か、または帯電しており、且つここにおいてコアにおける第１の帯電可能種と第２の帯電可能種との比は約１：４から約４：１である。ある実施態様において、前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比は、ほぼ中性のｐＨで約１：４から約４：１である。一定の実施態様において、前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比は、ほぼ中性のｐＨで約１：２から約２：１である。ある実施態様において、前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比は、ほぼ中性のｐＨで約１：１．１から約１．１：１である。
［００２０］ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える陰イオン種に帯電した、または帯電可能な帯電可能種を含む。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第１の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、それぞれの第１の帯電可能種は、陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第２の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、各々の第２の帯電可能種は、陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している。一定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える疎水性種を含む。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える陰イオン種に帯電した、または帯電可能な帯電可能種を含む。一定の実施態様において、ここに提供される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第１の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、それぞれの第１の帯電可能種は、陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第２の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、各々の第２の帯電可能種は、陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している。一定の実施態様において、ここに提供される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える疎水性種を含む。
［００２１］ある実施態様において、少なくとも１つの膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、第１のモノマー単位に存在する第１の帯電可能種（例えば陰イオン性帯電可能）および第２のモノマー単位における第２の帯電可能種（例えば陽イオン性帯電可能）を含む。代替となる実施態様において、第１のおよび第２の帯電可能種は、同一のモノマー単位（例えば、双性イオン性帯電可能モノマー単位）に存在する。ある実施態様において、コアに存在する第１のモノマー単位の数と第２のモノマー単位の数との比は、約１：４から約４：１である。
［００２２］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、少なくとも１つの第１の帯電可能なモノマー単位および少なくとも１つの第２の帯電可能なモノマー単位を含むコアブロックを有する少なくとも１つの膜不安定化ブロックコポリマーを含む。ある実施態様において、第１の帯電可能なモノマー単位はブレンステッド酸である。一定の実施態様において、少なくとも８０％の第１の帯電可能なモノマー単位は、Ｈ＋の損失により、約７．４のｐＨで陰イオン種に帯電している。さらなるまたは代替となる実施態様において、５０％未満の第１の帯電可能なモノマー単位は、約６のｐＨで陰イオン種に帯電している。ある実施態様において、第１の帯電可能なモノマー単位は（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸である。一定の実施態様において、第２の帯電可能なモノマー単位はブレンステッド塩基である。ある実施態様において、少なくとも４０％の第２の帯電可能なモノマー単位は、Ｈ＋の取得により、約７．４のｐＨで陽イオン種に帯電している。一定の実施態様において、第２の帯電可能なモノマー単位は、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレート、またはＮ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリラートである。ある実施態様において、コアブロックはさらに少なくとも１つの非帯電可能なモノマー単位を含む。一定の実施態様において、非帯電可能なモノマー単位は、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−エタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−メタクリレート、または（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−アクリラートである。
［００２３］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約１０ｎｍから約２００ｎｍの平均流体力学的径を有する粒子である。特定の実施態様において、ミセル集合体は、約２０ｎｍから約１００ｎｍの平均流体力学的径を有する。より特定の実施態様において、ミセル集合体は約３０ｎｍから約８０ｎｍの平均流体力学的径を有する。
［００２４］ある実施態様において、自己組織化したミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、ミセル集合体は、約６．５から約７．５の間のｐＨの水性媒質にて自己組織化する。ある実施態様において、自己組織化は、２時間未満、１時間未満、３０分未満、１５分未満に生じる。ある実施態様において、ミセル集合体は、約５．０から約７．４の間のｐＨの水性媒質にて膜を不安定にする。
［００２５］一定の実施態様において、約７のｐＨよりも約５のｐＨにおいてより大きな正味の陽イオン性の電荷を含むミセル集合体が提供される。ある実施態様において、ミセル集合体の電荷の絶対値は、約７のｐＨよりも約５のｐＨの場合の方が大きい。
［００２６］ある実施態様において、コアブロックおよびシェルブロックを有する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体が提供され、ここにおいてコアブロックの数平均分子量とシェルブロックの数平均分子量との比は約５：１から約１：１、または１：１から約５：１である。より特定の実施態様において、コアブロックの数平均分子量とシェルブロックの数平均分子量との比は約２：１である。
［００２７］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、任意の適した数平均分子量（Ｍｎ）（例えば、２，０００ダルトンを越える数平均分子量、約２，０００ダルトンから約２００，０００ダルトン、約２，０００ダルトンから約１００，０００ダルトン、約２，０００ダルトンから約１００，０００ダルトン、約１０，０００ダルトンから約２００，０００ダルトン、または約１０，０００ダルトンから約１００，０００ダルトン）を有するコアブロックを有する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含む。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、任意の適した数平均分子量（Ｍｎ）（５，０００ダルトンを越える数平均分子量、または約５，０００ダルトンから約５０，０００ダルトン）を有するシェルブロックを有する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含む。
［００２８］ある実施態様において、ここに提供される膜不安定化ブロックコポリマーは、２未満、１．８未満、１．６未満、１．５未満、１．４未満または１．３未満の多分散指数を有する。
［００２９］ある実施態様において、約７．４のｐＨで安定しているミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、ミセル集合体は、約７．４のｐＨよりも約５．８のｐＨの場合の方が、実質的に安定性が低い。
［００３０］一定の実施態様において、（例えば、ほぼ中性のｐＨにおいて）１０μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定であるミセル集合体が提供される。ある実施態様において、（例えば、ほぼ中性のｐＨにおいて）１００μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定であるミセル集合体が提供される。
［００３１］特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体を構成する任意のポリマーがここに記載される。すなわち、ポリマーのサブユニット（例えば、ブロックコポリマー）または個々のポリマー（ミセル集合体の形態であるか否かにかかわらず）もまたここに記載される実施態様である。明確には、ここに存在するそれぞれおよび全てのブロックコポリマーは、個々のポリマーとしてまたはここに記載されるミセル集合体の重合体のユニット／鎖／成分として、本願発明の範囲内である。
［００３２］特許請求の範囲には、本発明の新規の特徴が特に説明される。本発明の特徴および利点についてのよりよい理解は、本発明の根本方針が利用され例示的な実施態様を説明する以下の詳細な説明および続く図面を参照することで得られるだろう。
図１Ａは、ＲＡＦＴ合成したポリマーの組成および特徴の例示である。図１Ｂは、ＰＥＧＭＡ−ＤＭＡＥＭＡコポリマーの組成物および特性の例示である。 図２は、ブロックコポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６のＮＭＲ分光法の例示である。 図３は、ｓｉＲＮＡと複合体を形成したポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の粒子サイズの動的光散乱（ＤＬＳ）測定の例示である。 図４は、異なる電荷比におけるポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６／ｓｉＲＮＡ複合体のゲルシフト分析の例示である。 図５は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の臨界安定性濃度（ＣＳＣ）の例示である。 図６は、有機溶媒中のポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６粒子安定性の例示である。 図７は、培養した哺乳細胞におけるｓｉＲＮＡ―ミセル複合体のノックダウン活性の例示である。 図８は、ポリマーミセルおよびそれらのｓｉＲＮＡ複合体の膜不安定化活性の例示的な実証である。 図９は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の例示的な透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）分析である。 図１０は、ポリマー−ｓｉＲＮＡ複合体の細胞取り込みおよび細胞内分布の例示的な蛍光顕微鏡である。 図１１は、ポリマー構造に対するｐＨの効果の例示である。 図１２は、培養した哺乳細胞におけるｓｉＲＮＡ−ミセル複合体についてのノックダウンデータの例示的な要約である。 図１３は、ガラクトース末端官能化ポリ［ＤＭＡＥＭＡ］−マクロＣＴＡの例示である。 図１４は、［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］の合成の例示である。 図１５は、ＰＥＧＭＡおよびＭＡＡ−ＮＨＳのＲＡＦＴコポリマー化の例示である。 図１６は、ガラクトース官能化ＤＭＡＥＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）またはＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）ジブロックコポリマーの例示である。 図１７は、結合可能ｓｉＲＮＡ、ペプチドおよびピリジルジスルフィドアミンの構造の例示である。
発明の詳細な説明
［００５１］一定の実施態様において、ミセル集合体およびその製造方法が提供される。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は複数のブロックコポリマーを含み、ブロックコポリマーはシェルブロックおよびコアブロックを含む。ある実施態様において、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいてコアはマルチブロックポリマーのコアブロックを含み、ここにおいてシェルはマルチブロックポリマーのシェルブロックを含む。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は自己組織化される。特定の実施態様において、ミセル集合体は自発的に自己組織化される。ある実施態様において、ミセル集合体はミセルである。
［００５２］一定の実施態様において、ミセル集合体のコアは複数の疎水性基を含む。ある実施態様において、疎水性基は、ほぼ中性のｐＨで疎水性である。より特定の実施態様において、疎水性基は弱酸性のｐＨ（例えば、約６のｐＨおよび／または約５のｐＨ）において疎水性である。一定の実施態様において、２以上の異なる疎水性基が存在する。ある実施態様において、疎水性基は、約１以上のπ値を有する。化合物のπ値は、その関連する親水性−親脂肪性の値の尺度である（例えばＣａｔｅｓ，Ｌ．Ａ．による「薬学部学生による薬剤可溶性の計算」 Ａｍ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｅｄｕｃ．４５：１１−１３ （１９８１）参照）。
［００５３］ある実施態様において、ミセル集合体のコアは、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４）で少なくとも１つの電荷を含む。特定の実施態様において、少なくとも１つの電荷は負電荷である。より特定の実施態様において、少なくとも１つの電荷は、少なくとも１つの負電荷および少なくとも２つの正電荷である。
［００５４］特定の実施態様において、シェルブロックは親水性である（例えばほぼ中性のｐＨにおいて）。ある実施態様において、ミセル集合体は、約４．７から約６．８の間のｐＨで崩壊または分離する。
［００５５］ある例において、生きた細胞への治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはペプチド含む）の送達に適したミセル集合体が提供される。ある実施態様において、ミセル集合体は、複数のブロックコポリマーおよび任意に少なくとも１つの治療薬を含む。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、生物学的適合性を有し、安定であり（物理的に安定および／または化学的に安定を含む）、および／または再生して合成される。さらに、ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、無毒（例えば、低い毒性を示す）であり、治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはペプチド）ペイロードを分解から保護する、自然発生するプロセス（例えばエンドシトーシスによる）によって生きた細胞に入り、および／または細胞に接触した後に生きた細胞の細胞質に治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはペプチド）ペイロードを送達する。一定の例において、ポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）は、ｓｉＲＮＡおよび／または細胞の少なくとも１つの遺伝子の発現を変更する別の「ヌクレオチドベース」の薬剤である。したがって、一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、細胞へｓｉＲＮＡまたはペプチドを送達するのに役立つ。一定の例において、細胞はインビトロであり、その他の例において、細胞はインビボである。ある実施態様において、ｓｉＲＮＡまたはペプチドを含む治療的有効量のミセル集合体は、それを必要とする個人（例えば遺伝子ノックダウンを必要とする個人、ここにおいて当該遺伝子は、投与されたｓｉＲＮＡによってノックダウンできる）に投与される。特異的な例において、ミセル集合体は、特に個人の標的細胞へのｓｉＲＮＡまたはペプチドの送達に有用であるか、またはそのために特別に設計されている。
［定義］
［００５６］本願に関して、異なると明記した場合を除き、単数形の使用は複数形を含み、その逆も成り立つと理解される。すなわち、「１つの（ａ）」および「その（ｔｈｅ）」とは、１つ以上の全ての語句の修飾に関する。例えば、「ポリマー」または「ヌクレオチド」は、１つのポリマーもしくはヌクレオチドまたは複数のポリマーもしくはヌクレオチドを意味してよい。同様に、「ポリマー（ｐｏｌｙｍｅｒｓ）」および「ヌクレオチド（ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ）」は、明記されない限り、または文脈からそのような意味が明白でない限り、１つのポリマーまたは１つのヌクレオチド並びに複数のポリマーまたはヌクレオチドを意味してよい。
［００５７］ここに使用されるように、２つの成分または化合物は、非限定的な例示として、１以上の共有結合、１以上の非共有結合相互作用（例えば、イオン結合、静的な力、ファンデルワールス相互作用もしくはそれらの組み合わせ等）、またはそれらの組み合わせを含む相互作用によって互いに繋がっている場合に、「付着」する。
［００５８］脂肪族または脂肪族基：ここに使用されるような「脂肪族」または「脂肪族基」という用語は、直鎖（すなわち、枝がない）、分枝または環状（融合、架橋およびスピロ融合多環式を含む）であってよく、且つ完全に飽和してよく、または１以上の不飽和単位を含むが芳香族でなくてよい、炭化水素成分を意味する。別段の定めない限り、脂肪族基は１−２０の炭素原子を含む。
［００５９］陰イオンモノマー：ここに使用されるような「陰イオンモノマー」または「陰イオンモノマー単位」とは、陰イオン性に帯電した状態または帯電していない状態で存在する基を有するモノマーまたはモノマー単位であるが、帯電していない状態である場合、例えば親電子物質（例えばｐＨ依存的な様式において、例えばプロトン（Ｈ＋））が除去されると、陰イオン性に帯電可能である。一定の例において、基は、ほぼ生理的なｐＨにおいて実質的に負に帯電しているが、プロトン化により、弱酸性ｐＨにて実質的に中性となる。そのような基の非限定的な例は、カルボキシル基、バルビツール酸およびその誘導体、キサンチンおよびその誘導体、ボロン酸、ホスフィン酸、ホスホン酸、スルフィン酸、リン酸塩、およびスルホンアミドを含む。
［００６０］陰イオン種：ここに使用されるような「陰イオン種」は、陰イオン性に帯電している、または帯電していない状態の基、残基または分子であるが、帯電していない状態の場合、例えば、親電子物質（例えばｐＨ依存的様式で、例えばプロトン（Ｈ＋））の除去により、陰イオン性に帯電できる。特定の例において、基、残基または分子は、生理的なｐＨにおいて実質的に負に帯電するが、プロトン化により、弱酸性ｐＨで実質的に中性となる。
［００６１］アリールまたはアリール基：ここに使用されるような「アリール」または「アリール基」という用語は、計５から１４の環員を有する単環式、二環式および三環式の環系を意味し、ここにおいて系において少なくとも１つの環は芳香性であり、ここにおいて系におけるそれぞれの環は３から７の環員を含む。
［００６２］ここに使用されるような「中性に帯電」とは、±１０から±３０ｍＶの間のゼータ電位を有する粒子、および／または負の電荷に帯電可能な帯電可能種（例えば、脱プロトン化によって陰イオン性となる酸性種）の第１の数（ｚ）および正の電荷に帯電可能な帯電可能種（例えば、プロトン化によって陽イオン性となる塩基性種）の第２の数（０．５ｚ）の存在を意味する。
［００６３］ここに使用されるような通常の生理的ｐＨとは、血液、血清、正常細胞の細胞質等のような哺乳類の身体の主な液体のｐＨを指す。特定の例において、通常の生理的ｐＨはほぼ中性のｐＨであり、例えば約７．２から約７．４のｐＨを含む。ある例において、ほぼ中性のｐＨとは６．６から７．６のｐＨである。中性のｐＨおよび生理的（ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ、ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ）ｐＨとは同義であり且つ互換的である。
［００６４］ここに使用されるように、ミセル集合体は、安定したミセル集合体に対して、同一に、実質的に同様にまたは類似した様式で機能しない場合、および／または同一の、実質的に同様のまたは同様の物理的および／または化学的特徴を有さない場合、「崩壊」している。ミセル集合体の「崩壊」は任意の適切な方法にて決定することができる。１つの例において、ミセル集合体は、同一のブロックコポリマーを含み、ｐＨ７．４の水溶液で形成されたまたはヒト血清中で形成されたミセル集合体の流体力学的粒子サイズに対して５倍、４倍、３倍、２倍、１．８倍、１．６倍、１．５倍、１．４倍、１．３倍、１．２倍または１．１倍未満の流体力学的粒子サイズを有さない場合、「崩壊」している。１つの例において、ミセル集合体は、同一のブロックコポリマーを含み、ｐＨ７．４の水溶液で形成されたまたはヒト血清中で形成されたミセル集合体の集合体の濃度に対して５倍、４倍、３倍、２倍、１．８倍、１．６倍、１．５倍、１．４倍、１．３倍、１．２倍または１．１倍未満の集合体の濃度を有さない場合、「崩壊」している。
［００６５］ヘテロアルキル：「ヘテロアルキル」という用語は、少なくとも１つの骨格炭素原子はヘテロ原子に置き換えられているアルキル基を意味する。
［００６６］ヘテロアリール：「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１つの環員がヘテロ原子であるアリール基を意味する。
［００６７］ここに使用されるように、「帯電可能種」、「帯電可能基」または「帯電可能モノマー単位」は、帯電しているか、または帯電していない状態の種、基またはモノマー単位である。特定の例において、「帯電可能モノマー単位」は、親電子物質（例えばプロトン（Ｈ＋）、例えばｐＨ依存的様式において）の付加または除去により、帯電した状態（陰イオン性または陽イオン性に帯電した状態）に変換することができるものである。「帯電可能種」、「帯電可能基」または「帯電可能モノマー単位」という用語のいずれかの使用は、その他の説明がない限り、その他の「帯電可能種」、「帯電可能基」または「帯電可能モノマー単位」のいずれかの開示を含む。「陰イオンに帯電可能であるか、帯電している」または「陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している」「帯電可能種」は、陰イオン性に帯電した状態または帯電していない状態のいずれかの種または基であるが、帯電していない状態では、例えばプロトン（Ｈ＋）といった親電子物質の除去により、陰イオン性に帯電した状態に変換できる。特定の実施態様において、帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオンに帯電した種である。ポリマーにおける全ての帯電可能種が、帯電可能種のｐＫａ（酸解離定数）付近のｐＨにおいて陰イオンになるとは限らないが、陰イオン種および非陰イオン種の平衡状態が共存するであろうということが強調される。「陽イオンに帯電可能であるか、帯電している」または「陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している」「帯電可能種」は、陽イオン性に帯電した状態または帯電していない状態のいずれかの種または基であるが、帯電していない状態では、例えばプロトン（Ｈ＋）といった親電子物質の付加により、陽イオン性に帯電した状態に変換できる。特定の実施態様において、帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨで陽イオンに帯電した種である。ポリマーにおける全ての帯電した陽イオン種が、帯電した陽イオン種のｐＫａ（酸解離定数）付近のｐＨでカチオンになるとは限らないが、陽イオン種および非陽イオン種の平衡状態が共存するであろうことが強調される。ここに記載される「帯電可能モノマー単位」は、「帯電可能モノマー残基」と互換的に使用される。
［００６８］ヘテロ原子：「ヘテロ原子」という用語は、水素または炭素以外の原子、例えば酸素、硫黄、窒素、リン、ホウ素、ヒ素、セレンまたはケイ素原子を意味する。
［００６９］疎水性種：ここに使用されるような「疎水性種」（「疎水性−促進成分」と互換的に使用される）は、モノマーまたはポリマーといった分子に共有結合で付着された場合、分子の疎水性を増加させるか、または疎水性促進成分として役立つ置換基、残基または基といった成分である。「疎水性」という用語は、非極性溶剤と水との間における化合物の転送の自由エネルギーによって測定される化合物の物理的特性を記述する学術的な用語である（Hydrophobicity regained. Karplus P.A., Protein Sci., 1997, 6: 1302-1307）。化合物の疎水性は、そのｌｏｇＰ値、すなわち分配係数（Ｐ）の対数（２つの不混合性溶媒（例えばオクタノールおよび水）の混合物の２つの相における化合物の濃度の比として定義される）によって測定できる。疎水性の測定の実験的方法並びにｌｏｇＰ値のコンピュータによる計算方法が当業者に既知である。本発明の疎水性種は、脂肪族、へテロ脂肪族、アリールおよびヘテロアリール基を含むがこれらに限られない。
［００７０］ここに使用されるように、「疎水性コア」は疎水性成分を含む。特定の例において、「疎水性コア」は実質的に帯電していない（例えば、電荷は実質的に正味中性である）。
［００７１］阻害：ここに使用されるような「阻害」、「サイレンシング」および「減衰」という用語は、ノックダウン剤の非存在下における標的ｍＲＮＡまたは対応するタンパク質の発現と比較した場合の、標的ｍＲＮＡまたは対応するタンパク質の発現の測定可能な減少を指す。「ノックダウン」または標的ｍＲＮＡもしくは対応するタンパク質の発現の減少は、当該分野の周知技術、例えば定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）増幅、ＲＮＡ溶液ハイブリダイゼーション、ヌクレアーゼプロテクション、ノーザンブロッティングおよびハイブリダイゼーション、およびマイクロアレイによる遺伝子発現モニタリングを用いてｍＲＮＡレベルを測定することによって評価でき；タンパク質の場合には、当該分野の周知技術、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、抗体結合、ウェスタンブロッティング分析、免疫沈殿、ラジオイムノアッセイまたは酵素結合抗体免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、蛍光活性化細胞分析および免疫細胞化学によって評価できる。
［００７２］特許請求の範囲において特に詳述されていない理論に結ぶつけられることなく、膜不安定化ポリマーは、細胞膜構造（例えばエンドソーム膜）の変化（例えば透過性変化）を直接的または間接的に誘発することができ、ミセル集合体またはミセル（またはそれらの構成ポリマー）と共同してまたはそれらとは独立に、薬剤（例えばポリヌクレオチド）の、そのような膜構造の通過、例えば細胞への侵入または細胞の小胞（例えばエンドソーム）の脱出を可能にする。膜不安定化ポリマーは膜破壊ポリマーでありえる（が必ずしもそうである必要はない）。膜破壊ポリマーは、細胞小胞の溶解または細胞膜の崩壊を直接的または間接的に誘発することができる（例えば細胞膜の集団の実質的なフラクションにて観察されるように）。
［００７３］一般に、ポリマーまたはミセルの膜不安定化または膜破壊の特性は様々な手段によって評価できる。１つの非限定的なアプローチにおいて、細胞膜構造の変化は、細胞膜（例えばエンドソーム膜）からの薬剤（例えばポリヌクレオチド）の（直接的または間接的な）放出を測定するアッセイ、例えばそのような膜の外部の環境におけるそのような薬剤の存在または非存在またはそのような薬剤の活性の決定により観察することができる。その他の非限定的なアプローチは、例えば関心ある細胞膜のための代理アッセイとしての、赤血球溶解（溶血）の測定を含む。アッセイは、任意に、単一のｐＨ値または複数のｐＨ値において行われる。
［００７４］ここに使用されるような「ミセル」は、コアおよび親水性シェルを含む粒子を含み、ここにおいて、コアは、少なくとも部分的に、主にまたは実質的に疎水性相互作用によって互いに固定されている。特定の例において、ここに使用されるような「ミセル」とは、少なくとも２つのドメイン、内部ドメインまたはコアおよび外側のドメインまたはシェルを含むマルチ構成部分の、ナノ粒子である。コアは、少なくとも部分的に、主にまたは実質的に疎水性相互作用によって互いに固定され、ミセルの中心に存在する。ここに使用されるように、「ミセルのシェル」はミセルの非コア部分として定義される。
［００７５］ここに使用されるような粒子または集合体は、実質的にはミセルのように振る舞う場合に、「ミセル様」である：（１）それが、水混和性溶媒（例えばエタノール、但しこれに限定されない）から水性溶媒（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．４）への希釈によるブロックコポリマーの自発的な自己会合により組織化された集合体（例えばミセル）を形成することで、形成される；（２）それが、（例えば、臨界安定性濃度または臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を構成する１００ｕｇ／ｍｌ、５０ｕｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５ｕｇ／ｍｌまたは１ｕｇ／ｍｌのポリマー濃度への）希釈に対して安定である；（３）それが、周囲の媒質の高いイオン強度（例えば０．５Ｍ ＮａＣｌ）に対して安定である；および／または（４）それが、有機溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳ）およびジオキサンを含むがこれらに限定されない有機溶媒）の濃度が増大すると、安定性を増す。
［００７６］「ｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質」は、少なくとも部分的に、主にまたは実質的に疎水性であり、ｐＨ依存的様式で膜を不安定化する基である。特定の例において、ｐＨ依存性膜不安定化帯電可能疎水性物質は、ブロックコポリマーの疎水性のポリマーのセグメントであり、および／または複数の疎水性種を含み；および複数の陰イオン性帯電可能種を含む。ある実施態様において、陰イオン性帯電可能種はほぼ中性のｐＨで陰イオンである。さらなるまたは代替となる実施態様において、陰イオン性帯電可能種は、より低いｐＨ、例えばエンドソームのｐＨにおいて帯電していない。ある実施態様において、膜不安定化帯電可能疎水性物質は複数の陽イオン種を含む。ｐＨ依存性膜不安定化帯電可能疎水性物質は、非ペプチド性および非脂質性ポリマー骨格を含む。
［００７７］ここに使用されるように、集合体が分離しない、または不安定化しない場合、ここに記載されるミセル集合体は「安定」である。特定の例において、安定したミセル集合体は、ｐＨ７．４の水溶液（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．４）にて当初に形成された同一のブロックコポリマーを含むミセル集合体の流体力学的粒子サイズの約６０％、５０％、４０％、３０％、２０％または１０％以内の流体力学的粒子サイズを有するものである。ある例において、安定したミセル集合体は、ｐＨ７．４の水溶液（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．４）にて当初の同一のブロックコポリマーを含むミセル集合体の構成物／集合体の濃度の約６０％、５０％、４０％、３０％、２０％または１０％以内である構成物／集合体の濃度のものである。
［００７８］ナノ粒子：ここに使用されるように、「ナノ粒子」という用語は、１０００ナノメーター（ｎｍ）未満の直径を有する任意の粒子を指す。一般に、ナノ粒子は、真核細胞による取り込みが可能な程度に小さな寸法を有するべきである。典型的に、ナノ粒子は、２００ｎｍ以下の最長の直線の寸法（例えば直径）を有する。ある実施態様において、ナノ粒子の直径は１００ｎｍ以下である。例えば約１０ｎｍから約２００ｎｍ、約２０ｎｍから約１００ｎｍまたは５０ｎｍ以下、例えば５ｎｍ−３０ｎｍまたは１０ｎｍ−３０ｎｍの直径を有するより小さなナノ粒子がある実施態様において使用される。
［００７９］ヌクレオチド：ここに使用されるような「ヌクレオチド」という用語は、その最も広い意味において、ポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）鎖である、またはそれに組む込むことができる任意の化合物および／または物質を意味する。ある実施態様において、ヌクレオチドは、ポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）鎖であるか、ホスホジエステル結合によってそれに組み込むことができる化合物および／または物質である。ある実施態様において、「ヌクレオチド」は、各々の核酸残基（例えばヌクレオチドおよび／またはヌクレオシド）を指す。一定の実施態様において、「少なくとも１つのヌクレオチド」は１以上のヌクレオチドの存在を指す；様々な実施態様において、１以上のヌクレオチドは、分離したヌクレオチドであり、非共有結合で互いに付着しており、または共有結合で互いに付着している。それゆえ、特定の例において、「少なくとも１つのヌクレオチド」は１以上のポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）を指す。ある実施態様において、ポリヌクレオチドは２以上ヌクレオチドモノマー単位を含むポリマーである。
［００８０］オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレーター：ここに使用されるように、「オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレーター」は、アンチセンスの機構を含むがこれらに限定されない機構により、または、（ｉ）転写の不活性化；（ｉｉ）ｍＲＮＡの分解または隔離；（ｉｉｉ）転写の阻害もしくは減衰または（ｉｖ）翻訳の阻害もしくは減衰を含んでもよいＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）介在経路により、生きた細胞における遺伝子発現の選択的な調節を誘導できるオリゴヌクレオチド剤である。オリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレーターは、調節性ＲＮＡ（事実上あらゆる調節性ＲＮＡを含む）を含み、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ、ｓｈＲＮＡ、アプタマーおよびそれらの任意のアナログまたは前駆体を含むが、これらに限定されない。
［００８１］オリゴヌクレオチドノックダウン剤：ここに使用されるように、「オリゴヌクレオチドノックダウン剤」は、配列特異的な方式にて細胞内の核酸をターゲットとして結合することで、遺伝子発現を阻害することができるオリゴヌクレオチド種である。オリゴヌクレオチドノックダウン剤の非限定的な例は、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、ダイサー基質、アンチセンスオリゴヌクレオチド、デコイＤＮＡまたはＲＮＡ、抗遺伝子オリゴヌクレオチド、およびそれらの任意のアナログおよび先駆物質を含む。
［００８２］ここに使用されるように、「オリゴヌクレオチド」という用語は、７−２００のヌクレオチドモノマー単位を含むポリマーを指す。ある実施態様において、「オリゴヌクレオチド」は、一本鎖および／または二本鎖のＲＮＡ並びに一本鎖および／または二本鎖のＤＮＡを包含する。更に、「ヌクレオチド」、「核酸」、「ＤＮＡ」、「ＲＮＡ」という用語および／または同様の用語は、核酸アナログ、すなわち、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ロックされた核酸（ＬＮＡ）、ホスホノ−ＰＮＡ、モルフォリノ核酸または修飾されたリン酸基（例えば、ホスホロチオネート、ホスホネート、５’Ｎ−ホスホラミダイト結合）を有する核酸を含むがこれらに限定されない、修飾された骨格を有するアナログを含む。ヌクレオチドは、天然物から精製し、組み換え発現系を用いて製造して任意に精製し、化学的に合成することなどができる。ここに使用されるように、「ヌクレオシド」は、単糖および塩基を含む化合物を記述する用語である。単糖はペントースおよびヘキソース単糖を含むが、これらに限定されない。単糖はまた、単糖模倣物および水酸基をハロゲン、メトキシ、水素またはアミノ基で置換することで、または付加的な水酸基のエステル化によって修飾した単糖を含む。ある実施態様において、ヌクレオチドは、天然のヌクレオシドリン酸（例えばアデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシンおよびデオキシシチジンリン酸）であるか、それらを含む。ある実施態様において、塩基は、様々な核酸から自然発生する任意の塩基並びにそのような自然発生する塩基を模倣した、またはそのような塩基に類似したその他の修飾物を含む。修飾または誘導体化された塩基の非限定的な例は、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシルメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、ベータ−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ６−アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、ベータ Ｄ−マンノシルキューオシン、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル、キューオシン、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、ウラシル−５−オキシ酢酸、５−メチル−２−チオウラシル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル、２−アミノアデニン、ピロロピリミジンおよび２，６−ジアミノプリンを含む。ヌクレオシド塩基は更に、普遍的な核酸塩基、例えばジフルオロトリル、ニトロインドリル、ニトロピロリル、またはニトロイミダゾリルを含む。ヌクレオチドはさらに、ラベルを有するまたは脱塩基（すなわち塩基を欠く）モノマーを含むヌクレオチドを含む。特に示さない限り、核酸配列は、５’から３’方向に示される。ヌクレオチドは、ワトソンクリック塩基対を介する水素結合を通じて、配列特異的な方式で別のヌクレオチドに結合できる。そのような塩基対は、互いに相補的であると言われる。オリゴヌクレオチドは、一本鎖、二本鎖または三本鎖であり得る。
［００８３］ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）：ここに使用されるように、「ＲＮＡ干渉」または「ＲＮＡｉ」という用語は、標的ＲＮＡに実質的に相補的である部分も含む少なくとも部分的に二本鎖のＲＮＡが介在する、遺伝子発現の配列特異的な阻害および／または標的ｍＲＮＡおよびタンパク質レベルの減少を意味する。
［００８４］ＲＮＡｉ剤：ここに使用されるように、「ＲＮＡｉ剤」という用語は、ＲＮＡｉ機構によって遺伝子発現の阻害を仲介することができるオリゴヌクレオチドを意味し、ｓｉＲＮＡ、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、非対称性干渉ＲＮＡ（ａｉＲＮＡ）、ダイサー基質およびそれらの前駆体を含むがこれらに限定されない。
［００８５］ショート干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）：ここに使用されるように、「ショート干渉ＲＮＡ」または「ｓｉＲＮＡ」という用語は、約１５−５０塩基対の長さを有し、任意に０から２の一本鎖オーバーハングをさらに含むヌクレオチド二重鎖を含むＲＮＡｉ剤を意味する。ｓｉＲＮＡの１つの鎖は、相補的な方式で標的ＲＮＡとハイブリダイズする部分を含む。ある実施態様において、ｓｉＲＮＡと標的ＲＮＡのターゲットとされた部分との間で１以上のミスマッチが存在してもよい。ある実施態様において、ｓｉＲＮＡは、ターゲットとなる転写の分解を引き起こすことで、遺伝子発現の阻害を仲介する。
［００８６］ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）：ショートヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）は、互いにハイブリダイズするか、または互いにハイブリダイズ可能であり、二本鎖（二重鎖）構造および少なくとも１つの一本鎖部分を形成する少なくとも２つの相補部分を有するオリゴヌクレオチドを意味する。
［００８７］ダイサー基質：「ダイサー基質」は、細胞において、ＲＮａｓｅＩＩＩファミリーメンバーであるダイサーの基質である約２５塩基対より大きい二重鎖ＲＮＡである。ダイサー基質は分断され、ＲＮＡ干渉の効果を促す約２１の塩基対の二重鎖小分子干渉ＲＮＡｓ（ｓｉＲＮＡｓ）が作られ、ｍＲＮＡノックダウンにより遺伝子サイレンシングがもたらされる。
［００８８］遺伝子発現の阻害：ここに使用されるように、「遺伝子発現の阻害」という表現は、遺伝子の発現産物の量のあらゆる測定可能な減少を引き起こすことを意味する。発現産物とは、遺伝子から転写されたＲＮＡ（例えばｍＲＮＡ）および／または遺伝子から転写されたｍＲＮＡから翻訳したポリペプチドであり得る。発現のレベルは、ｍＲＮＡまたはタンパク質の測定のための標準的な技術を使用して決定してよい。
［００８９］ここに使用されるように、「実質的に帯電していない」とは、±１０から±３０ｍＶのゼータ電位、および／または負の電荷に帯電可能な帯電可能種（例えば、脱プロトン化によって陰イオン性となる酸性種）の第１の数（ｚ）および正の電荷に帯電可能な帯電可能種（例えば、プロトン化によって陽イオン性となる塩基性種）の第２の数（０．５ｚ）の存在を含む。
［００９０］治療薬：ここに使用されるように、「治療薬」という表現は、対象、臓器、組織または細胞に投与された場合に、治療効果を有し、および／または所望の生物学的および／または薬理学的効果を誘発する任意の薬剤を意味する。
［００９１］治療的有効量：ここに使用されるように、治療薬という用語の「治療的有効量」は、疾病、障害および／または症状を患うまたはそれらの傾向がある対象に投与された場合、疾病、障害および／または症状を治療する、診断する、予防するおよび／またはそれらの病徴の発症を遅らせるために十分な量を意味する。
［ミセル集合体構造］
［００９２］ある実施態様において、複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、ミセル集合体はコアおよびシェルを含む。
［００９３］ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは膜を不安定化する。特定の実施態様において、ここに記述される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックはｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質である。一定の実施態様において、シェルブロックは親水性である。特定の実施態様において、シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性である。
［００９４］ここに使用されるように、膜不安定化ブロックコポリマーは、膜破壊ブロックコポリマー（例えばエンドソーム膜を溶解するポリマー）および（例えばエンドソーム膜の一時的な裂け目を介して）膜を局所的に不安定化するブロックコポリマーを含む。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、（ｉ）複数の疎水性のモノマー残基、（ｉｉ）帯電可能種を有する複数の陰イオンモノマー残基、この帯電可能種は、血清の生理的ｐＨで陰イオンであり、エンドソームのｐＨで実質的に中性であるかまたは帯電していない、および（ｉｉｉ）任意に複数の陽イオン性モノマー残基を含む。ある実施態様において、ブロックコポリマーにおける陰イオン種と陽イオン種との比の変更は、ここに記載されるミセル集合体の膜不安定化活性の変更を可能にする。そのような実施態様の幾つかにおいて、ブロックコポリマーにおける陰イオン種：陽イオン種の比は、血清の生理的ｐＨにおいて約４：１から約１：４の範囲である。そのような実施態様の幾つかにおいて、ブロックコポリマーの疎水性ブロックにおける陰イオン種と陽イオン種との比の変更は、ここに記載されるミセル集合体の膜不安定化活性の変更を可能にする。そのような実施態様の幾つかにおいて、ここに記述されるブロックコポリマーの疎水性ブロックにおける陰イオン種：陽イオン種の比は、血清の生理的ｐＨにおいて約１：２から約３：１、または約１：１から約２：１の範囲である。
［００９５］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体に存在する膜不安定化ブロックコポリマーは、複数の疎水性基を含むコアセクション（例えばコアブロック）を含む。より特定の実施態様において、コアセクション（例えばコアブロック）は、複数の疎水性基および複数の第１の帯電可能種または基を含む。さらに特定の実施態様において、そのような第１の帯電可能種または基は、（例えばほぼ中性のｐＨ、または約７．４のｐＨで）負に帯電しておりおよび／または負に帯電した種または基に帯電可能である。ある特定の実施態様において、コアセクション（例えばコアブロック）は、複数の疎水性基、複数の第１の帯電可能種または基、および複数の第２の帯電可能種または基を含む。より特定の実施態様において、第１の帯電可能種または基は、負に帯電しており、および／または負に帯電した種または基に帯電可能であり、第２の帯電可能種または基は、（例えばほぼ中性のｐＨ、または約７．４のｐＨで）正に帯電しており、および／または正に帯電した種または基に帯電可能である。
［００９６］一定の実施態様において、ミセル集合体のシェルおよび／またはここに記述される膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、帯電可能種または基をさらに含む。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体に存在する１以上の膜不安定化ブロックコポリマーは複数の陽イオン性帯電可能種または基を含むシェルセクションを有する。ミセル集合体の周囲の媒質における電解質（例えばｐＨ）の濃度に依存して、これらの陽イオン性帯電可能種は、陽イオンに帯電した状態であるか、または帯電していない状態である。
［００９７］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約５のｐＨにて正味陽イオンの電荷を有する。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨにおいて、正味中性の電荷を有している。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）にて正味陽イオンの電荷を有する。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、約７のｐＨよりも約５のｐＨにおいてより大きな正味の陽イオン性の電荷を有する。さらなるまたは代替となる実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、公称の（または絶対値の）電荷、すなわち約７のｐＨよりも約５のｐＨの場合の方が大きい電荷を有する。
［００９８］一定の実施態様において、ミセル集合体の形態が、約６以上、約６．５以上、約７以上、約６から約１４以上；約６から約１０以上；約６から約９．５以上；約６から約９以上；約６から約８．５以上；約６から約８以上；約６．５から約１４以上；約６．５から約１０以上；約６．５から約９．５以上；約６．５から約９以上；約６．５から約８．５以上；約７から約１４以上；約７から約１０以上；約７から約９．５以上；約７から約９以上；約７から約８．５以上；約６．２から約７．５以上；６．２から７．５；または約７．２から約７．４のｐＨ範囲にわたってミセル、擬似ミセルまたはミセル様構造であるミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、約７以下；約６．８以下；約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．８以下；または約５．７以下のｐＨにおいて、ここに提供されるミセル集合体、ミセル、擬似ミセルまたはミセル様構造は、実質的に、または少なくとも部分的に分裂または解離する。特定の実施態様において、約６．２から７．５のｐＨ範囲にわたる前記ミセル集合体の形態はミセルである。ここに使用されるように、ミセル集合体は、少なくとも記述されるｐＨにわたって形態を有し、記述されるｐＨの範囲外のｐＨにおいても形態を有してよいと理解すべきである。
［００９９］一定の実施態様において、ここに記述される「ブロックコポリマー」は、コアセクションおよびシェルセクションを含む。ここに議論されるように、コアセクションは、任意にコアブロックであり、またはコアブロックを含み、シェルセクションは、任意にシェルブロックであるか、またシェルブロックを含む。ある実施態様において、少なくとも１つのそのようなブロックは、グラジエントポリマーブロックである。さらなる実施態様において、ここで使用されるブロックコポリマーは、任意にグラジエントポリマーで置換される（すなわち、ミセル集合体において使用されるポリマーは、コアセクションおよびシェルセクションを有するグラジエントポリマーである）。
［００１００］一定の実施態様において、ミセル集合体はナノ粒子である。特定の実施態様において、ミセル集合体はミセルである。またさらなる実施態様において、ミセル集合体は、約１０ｎｍから約２００ｎｍ、約１０ｎｍから約１００ｎｍまたは約３０−８０ｎｍのサイズを有するナノ粒子またはミセルである。粒子サイズは、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）、動的光散乱法（ＤＬＳ）、電子顕微鏡技術（例えばＴＥＭ）およびその他の方法を含むがこれらに限定されない任意の様式にて決定できる。
［００１０１］一定の実施態様において、シェルおよび／またはシェルブロックは、親水性および／または帯電性（例えば非帯電性、陽イオン性、ポリカチオン性、陰イオン性、ポリアニオン性または双生イオン性）である。一定の実施態様において、シェルおよび／またはシェルブロックは親水性および中性（非帯電性）である。特定の実施態様において、シェルおよび／またはシェルブロックは正味の正電荷を含む。特定の実施態様において、シェルおよび／またはシェルブロックは正味の負電荷を含む。特定の実施態様において、シェルおよび／またはシェルブロックは正味の中性電荷を含む。ある実施態様において、コアおよび／またはコアブロックは疎水性であり、および／または疎水性の基、成分、モノマー単位、種等を含む。特定の実施態様において、疎水性コアおよび／またはコアブロックは、複数の疎水性の基、成分、モノマー単位、種等および複数の帯電可能種またはモノマー単位を含む。より特定の実施態様において、複数の帯電可能なモノマー単位または種は、複数の陰イオン性帯電可能モノマー単位または種を含む。より特定の実施態様において、複数の帯電可能なモノマー単位または種は、複数の陽イオン性帯電可能モノマー単位または種を含む。さらに特定の実施態様において、複数の帯電可能なモノマー単位または種は、複数の陽イオン性および複数の陰イオン性帯電可能モノマー単位または種を含む。ある実施態様において、ブロックコポリマーは、それぞれ、（１）ミセル集合体（例えばミセル）のシェルを形成する親水性、帯電性（例えば陰イオン性もしくはポリアニオン性；または陽イオン性もしくはポリカチオン性；または双生イオン性；または非帯電性）のブロック、（２）疎水性ブロック、および（３）複数の陰イオン性帯電可能種を有し、膜を不安定にする（例えば、ｐＨ依存的様式で膜を不安定にする）。ある実施態様において、複数の陰イオン性帯電可能種は疎水性ブロックに存在する。一定の実施態様において、疎水性コアおよび／またはコアブロックは、任意に、疎水性基、帯電可能基またはそれらの組み合わせを含んでよく、または含まないでよいスペーサーモノマー単位を含む。ある実施態様において、ミセル集合体（例えばミセル）のコア（例えばコポリマーの１以上のコアブロック）を形成する、またはそれに存在するポリマーブロックは、帯電可能である（例えば、生理的なｐＨにおいて陽イオン種および／または陰イオン種を含む）。ある例において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、自己会合する複数のブロックコポリマーから形成される。特定の例において、自己会合は、ブロックコポリマーの疎水性ブロックの相互作用によって生じ、生じるミセル集合体（例えばミセル）は、ミセル集合体のコアに存在する疎水性ブロックの疎水性相互作用によって安定する。
［００１０２］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間または少なくとも２４時間、５０％のヒト血清にて活性（例えば、ポリヌクレオチドといった治療薬を送達するミセル集合体の活性）を維持する。さらなるまたは代替となる実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間または少なくとも２４時間、少なくとも５０％のヒト血漿にて活性（例えばポリヌクレオチドを送達するミセル集合体の活性）を維持する。さらなるまたは代替となる実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間または少なくとも２４時間、５０％のマウス血清にて活性（例えばポリヌクレオチドを送達するミセル集合体の活性）を維持する。また更なるまたは代替となる実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも２時間、少なくとも４時間、少なくとも６時間、少なくとも８時間、少なくとも１２時間または少なくとも２４時間、少なくとも５０％のマウス血漿にて活性（例えば、ポリヌクレオチドといった治療薬を送達するミセル集合体の活性）を維持する。特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも２時間５０％のヒト血清にて、少なくとも２時間少なくとも５０％のヒト血漿にて、少なくとも２時間５０％のマウス血清にて、少なくとも２時間少なくとも５０％のマウス血漿にて、またはそれらの組み合わせで、活性（例えば、ポリヌクレオチドといった治療薬を送達するミセル集合体の活性）を維持する。
［００１０３］様々な実施態様において、ここに記述されるミセル集合体（例えばミセル）に使用されるブロックコポリマーは、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）の一定の側面または機能性に影響を及ぼし、またはそれらに影響を及ぼすように選択され、そのような側面または機能性には以下のものが含まれるが、これらに限定されない：（１）ミセル集合体（例えばミセル）の生物物理学的特性、非限定的な例示としては、可溶性、水可溶性、安定性、水性媒質における安定性、親水性、親油性、疎水性等；（２）管理可能な形態またはその他の目的へのミセル集合体の処方の促進；（３）（例えばターゲットする成分を運ぶことによる）特定のまたは選択したタイプの細胞をターゲットするミセル集合体の能力；および／または（４）ミセル集合体（例えばミセル）の生物学的適合性を増大する能力。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、１以上の以下の事項によって特徴づけられる：（１）ミセル集合体（例えばミセル）は、水混和性溶媒（例えばエタノール、但しこれに限定されない）から水性溶媒（例えば、リン酸緩衝液、ｐＨ７．４）への希釈によるブロックコポリマーの自発的な自己会合により組織化された集合体（例えばミセル）を形成することで、形成される；（２）ミセル集合体（例えばミセル）は、（例えば、臨界安定性濃度または臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を構成する１００ｕｇ／ｍｌ、５０ｕｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、５ｕｇ／ｍｌまたは１ｕｇ／ｍｌのポリマー濃度への）希釈に対して安定である；（３）ミセル集合体（例えばミセル）は周囲の媒質の高いイオン強度に対して安定（例えば０．５Ｍ ＮａＣｌ）である；および／または（４）ミセル集合体（例えばミセル）は、有機溶媒（例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳ）およびジオキサンを含むがこれらに限定されない有機溶媒）の濃度が増大すると、安定性を増す。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも前述の特性の２つを有することにより特徴づけられる。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、少なくとも前述の特性の３つを有することにより特徴づけられる。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、前述の特性の全てを有することにより特徴づけられる。
［００１０４］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、その他の基準によって、更にまたは代替的に特徴付けられる：（１）個々のブロックの分子量およびそれらの相対長さ比は、形成されたミセル集合体のサイズおよびその相対的安定性を管理するために減少または増大され、および（２）シェルを形成するポリマー陽イオン性ブロックのサイズは、陰イオン性治療薬（例えばオリゴヌクレオチド剤）と有効な複合体の形成を提供するために、および／または陰イオン性治療薬（例えばオリゴヌクレオチド剤）の電荷の中和を提供するために、変更される。
［００１０５］さらに、一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、小さな疎水性の分子、例えば疎水性小分子化合物（例えば疎水性小分子薬剤）をミセル集合体の疎水性コアに選択的に取り込む。特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、小さな疎水性の分子、例えば疎水性小分子化合物ピレンをミセル集合体の疎水性コアに選択的に取り込む。
［コア］
［００１０６］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のコアは、複数のｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質を含む。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のコアは、少なくとも部分的に、実質的にまたは主に疎水性相互作用によって、一つに維持される。
［００１０７］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のコアは、複数の第１の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、第１の帯電可能種は、陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している。コア内の全ての第１の帯電可能種が帯電していないか、コア内の一部または全ての第１の帯電可能種が帯電していると理解される。
［００１０８］一定の実施態様において、ここに記述される膜不安定化ポリマーのコアブロックは、複数の第１の帯電可能種、および複数の第２の帯電可能種を含む。ある例において、第１の帯電可能種は、陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している；および、第２の帯電可能種は、陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のコアは、複数の第１の帯電可能種；複数の第２の帯電可能種；および複数の疎水性種を含む。
［００１０９］コアは複数の陰イオン性帯電可能種および複数の陽イオン性帯電可能種を含む一定の実施態様において、複数の陰イオン性帯電可能種の数と複数の陽イオン性帯電可能種の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約３：２から約２：３、または約１：１である。ある実施態様において、コアは陰イオン性に帯電した複数の陰イオン性帯電可能種および陽イオン性に帯電した複数の陽イオン性帯電可能種を含み、ここにおいて、コアの中に存在する陰イオン性に帯電した種の数と陽イオン性に帯電した種の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約３：２から約２：３、または約１：１である。
［００１１０］ある実施態様において、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）における、複数の陰イオン性帯電可能種の数と複数の陽イオン性帯電可能種の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約２：３から約３：２、約１：１．１から約１．１：１、または約１：１である。ある実施態様において、コアは、陰イオン性に帯電した複数の陰イオン性帯電可能種および陽イオン性に帯電した複数の陽イオン性帯電可能種を含み、ここにおいて、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）における、コアに存在する陰イオン性に帯電した種の数と陽イオン性に帯電した種の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約２：３から約３：２、約１：１．１から約１．１：１、または約１：１である。特定の実施態様において、コアに存在する正に帯電した種とコアにおける負に帯電した種との比は、ほぼ中性のｐＨの約１：４から約４：１である。より特定の実施態様において、コアに存在する正に帯電した種とコアにおける負に帯電した種との比は、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：２から約２：１である。特定の実施態様において、コアに存在する正に帯電した種とコアにおける負に帯電した種との比は、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：１．１から約１．１：１である。
［００１１１］特定の実施態様において、第１の帯電可能種はブレンステッド酸である。特定の例において、ここに使用されるように、帯電可能種は、（例えばｐＨ依存的様式における）プロトンの付加または除去が陽イオン性または陰イオン性の種、基またはモノマー単位をそれぞれ提供する種を含む。
［００１１２］ある実施態様において、コアに存在する第１の帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）で、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％負に帯電する種である。特定の実施態様において、これらの第１の帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨでＨ＋を損失して陰イオン種に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、コアに存在する第１の帯電可能種は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）で、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が中性または帯電していない種である。
［００１１３］ある実施態様において、第１の帯電可能種非限定的な例示として、カルボン酸、無水物、スルホンアミド、スルホン酸、スルフィン酸、硫酸、リン酸、ホスフィン酸、硼酸、亜燐酸等である。
［００１１４］ある実施態様において、コアに存在する第２の帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）にて、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電する種である。特定の実施態様において、これらの第２の帯電可能種は、Ｈ＋の付加により、陽イオン種に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、コアに存在する第２の帯電可能種は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）で、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電した種である。
［００１１５］ある実施態様において、ミセル集合体のコアにおいて複数の膜を不安定にする成分を含むミセル集合体が提供される。
［シェル］
［００１１６］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは親水性である。特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは複数の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、帯電可能種は陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している。その他の特定の実施態様において、帯電可能種は陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している。その他の実施態様において、ミセル集合体のシェルは親水性であり、および帯電していない（例えば実質的に帯電していない）。そのようなシェルブロックは、帯電可能種の全てが帯電していない、または帯電可能種の一部もしくは全てが帯電している種を含むと理解される。
［００１１７］特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは、ほぼ中性のｐＨ（例えば、約７．４のｐＨ）でポリカチオンである。ある実施態様において、ミセル集合体のシェルにおける帯電可能種は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）で、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電する種、基またはモノマー単位である。特定の実施態様において、ミセル集合体のシェルにおけるこれらの帯電可能種は、Ｈ＋の付加により、陽イオン種（例えばブレンステッド塩基）に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルにおける帯電可能種は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）で、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電する種である。
［００１１８］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは、生理的なｐＨ（例えば循環するヒト血漿のｐＨ）において、またはそのｐＨ付近において、陽イオン性である。ある実施態様において、シェルブロックはポリカチオン性である。ある実施態様において、シェルは、１以上の治療薬（例えばｓｉＲＮＡといったポリヌクレオチド）を含み、ここにおいて治療薬はポリアニオン性である。ある実施態様において、複数の治療薬は、総計ｘの陰イオンを含み、ここに記載されるミセル集合体のポリカチオン性シェルは、約０．６ｘ、約０．７ｘ、約０．８ｘ、約０．９ｘ、約１．０ｘ、約１．１ｘまたはそれ以上の陽イオンを含む。
［００１１９］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは親水性および非帯電性である。ここに有用な親水性、非帯電性種は、非限定的な例示として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）等である。
［００１２０］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のシェルは、複数の種々の親水性種（例えば少なくとも１つの帯電していない親水性種および少なくとも１つの帯電した親水性種）を含む。
［粒子サイズ］
［００１２１］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、任意の適切なサイズを有するナノ粒子である。ナノ粒子のサイズは、コアセクション、シェルセクション、付加的なセクションまたはそれらの組み合わせの重合度の調節により、特定のニーズを満たすために調節される。特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約１０ｎｍから約２００ｎｍの平均流体力学的径を有する。より特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、水性媒質において、約１ｎｍから約５００ｎｍ、約５ｎｍから約２５０ｎｍ、約１０ｎｍから約２００ｎｍ、約１０ｎｍから約１００ｎｍ、約２０ｎｍから約１００ｎｍ、約３０ｎｍから約８０ｎｍ等の平均流体力学的径を有する。さらに特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、水性媒質において、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）で、約１ｎｍから約５００ｎｍ、約５ｎｍから約２５０ｎｍ、約１０ｎｍから約２００ｎｍ、約１０ｎｍから約１００ｎｍ、約２０ｎｍから約１００ｎｍ、約３０ｎｍから約８０ｎｍ等平均流体力学的径を有する。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ヒト血清において、約１ｎｍから約５００ｎｍ、約５ｎｍから約２５０ｎｍ、約１０ｎｍから約２００ｎｍ、約１０ｎｍから約１００ｎｍ、約２０ｎｍから約１００ｎｍ、約３０ｎｍから約８０ｎｍ等の平均流体力学的径を有する。特定の実施態様において、約７．４のｐＨの水性媒質およびヒト血清の両方において、約１０ｎｍから約２００ｎｍの粒子サイズを有するミセル集合体が提供される。
［集合体］
［００１２２］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は自己会合する。一定の実施態様において、ミセル集合体は、水性媒質において自己会合し、または自己会合できる。ある実施態様において、ミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）を有する水性媒質において自己会合し、または自己会合できる。ある実施態様において、ミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）を有する水性媒質によるブロックコポリマーの有機溶液の希釈により、自己会合し、または自己会合できる。ある実施態様において、ミセル集合体は、ヒト血清において、自己会合し、または自己会合できる。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は自己会合する。
［００１２３］特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約６から約９、約６から約８、約６．５から約９、約６．５から約８、約６．５から約７．５、約７から約９または約７から約８の範囲の少なくとも１つのｐＨの値の水性媒質において自己会合する。ある実施態様において、ミセル集合体は、約５．０から約７．４の内のｐＨの値の水性媒質において膜を不安定にする。ここに使用されるように、ミセル集合体は、少なくともここに記述されるｐＨにおいて自己会合するが、記載されるｐＨ範囲外の１以上のｐＨ値にて自己会合してもよいと解される。
［００１２４］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、任意の適切な濃度にて自己会合する。一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約２μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約２０μｇ／ｍＬ、約２５μｇ／ｍＬ、約３０μｇ／ｍＬ、約４０μｇ／ｍＬ、約５０μｇ／ｍＬ、約６０μｇ／ｍＬ、約７０μｇ／ｍＬ、約８０μｇ／ｍＬ、約９０μｇ／ｍＬ、約１００μｇ／ｍＬまたはこれら以上の濃度（例えば臨界集合体濃度（ＣＡＣ）またはミセル集合体が形態される最小の濃度）で自己会合する。一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、約１μｇ／ｍＬから約１００μｇ／ｍＬの間の少なくとも１つの濃度にて自己会合する。
［００１２５］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、ここに記載されるポリマーの自発的な自己組織化によって作製される。一定の実施態様において、ここに記載されるポリマーは、（ａ）水混和性有機溶媒にポリマーを含む溶液を水性溶媒で希釈することによって、または（ｂ）水溶液に直接溶解することで、ここに記載されるミセル集合体へと集合する。ある実施態様において、ここに記載されたポリマーは、ポリヌクレオチドがない状態においてここに記載されるミセル集合体へと集合する。
［００１２６］ある実施態様において、ミセル集合体（例えばミセル）は水溶液による稀釈に対して安定的である。特定の実施態様において、ミセル集合体（例えばミセル）は、生理的ｐＨ（ヒトにおいて循環する血液のｐＨを含む）において、約５０から約１００μｇ／ｍＬまたは約１０から約５０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ未満、５μｇ／ｍＬ未満または２μｇ／ｍＬ未満の臨界安定性濃度（例えば臨界ミセル濃度（ＣＭＣ））を有して、希釈に安定的である。ここに使用されるように、「ミセル集合体の不安定化」とは、ミセル集合体を形成する重合体の鎖が、少なくとも部分的に、分散し、構造上変化すること（例えば、サイズの拡大および／または形状の変化）、および／または無定形の超分子構造（例えば非ミセル超分子の構造）を形成してもよいことを意味する。臨界安定性濃度（ＣＳＣ）、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）および臨界集合体濃度（ＣＡＣ）という用語は、ここにおいて互換的に使用される。
［安定性］
［００１２７］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は水性媒質において安定している。一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、選択したｐＨ、例えば、ほぼ生理的なｐＨ（例えば循環するヒト血漿のｐＨ）の水性媒質において安定している。特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）の水性媒質において安定している。特定の実施態様において、水性媒質は、動物（例えばヒト）の血清または動物（例えばヒト）の血漿である。一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ヒト血清および／またはヒト血漿において安定している。特定の実施態様において、ミセル集合体は循環するヒト血漿において安定している。ミセル集合体の安定性は明示されるｐＨに制限されないと理解されるが、少なくとも明示されるｐＨを含むｐＨの値で安定していると理解される。特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、ほぼ中性のｐＨよりも酸性のｐＨにおいて実質的に安定性が低い。より特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、約７．４のｐＨよりも約５．８のｐＨの場合の方が、実質的に安定性が低い。
［００１２８］特定の実施態様において、ミセル集合体は、（例えばほぼ中性のｐＨで）１０μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定である。ある実施態様において、ミセル集合体は、（例えばほぼ中性のｐＨで）１００μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定である。
［ブロックコポリマー］
［００１２９］ある実施態様において、ここに提供される膜不安定化ブロックコポリマーは、任意の適切なｐＨにおいて膜を不安定化する。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、（例えば水性媒質において）エンドソームのｐＨ、約６．５以下、約５．０から約６．５、または約６．２以下のｐＨにおいて、膜を不安定化する。
［００１３０］特定の実施態様において、ここに提供される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、複数の第１の帯電可能の基、種またはモノマー単位および複数の第２の帯電可能種、基またはモノマー単位を含む。特定の例において、第１の帯電可能の基、種またはモノマー単位は、負に帯電しており、または負の種、基またはモノマー単位に帯電可能である。ある例において、第２の帯電可能の基、種またはモノマー単位は、正に帯電しており、または陽イオン種、基またはモノマー単位に帯電可能である。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体を含む水性媒質のｐＨが増大すると、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックおよびミセル集合体のコアは、より正に帯電し、ミセル集合体の形状および／またはサイズの破壊をもたらし、および、膜（例えばミセル集合体の周囲のエンドソーム膜）の部分的または実質的な破壊を引き起こす。
［００１３１］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、ｐＨ依存的様式にてエンドソーム膜を不安定化する複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含む。様々な実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーは、ミセル集合体に集合した場合および／またはミセル集合体の形態と独立に存在する場合（例えばミセル集合体が解離および／または不安定化した場合）に、膜を不安定化する。ある実施態様において、生理的なｐＨ（例えば循環する血液のｐＨ）またはその付近のｐＨにおいて、ミセル集合体を構成するポリマーは、最小限に膜を不安定化するが、低下したｐＨ（例えばエンドソームのｐＨ）にさらされると、ポリマーは膜不安定化する。特定の例において、膜を不安定化する状態へのこの移行は、ポリマーに組み込まれる弱酸性残基のプロトン化によって生じ、そのようなプロトン化は、ポリマーの疎水性の増大をもたらす。特定の例において、ポリマーの疎水性の増大は、ミセル集合体の構造変化をもたらし、ミセル集合体に膜を不安定化させる（例えば膜の不安定化を引き起こす）。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体の膜不安定化の機構は、ポリカチオン例えばＰＥＩまたはその他のポリカチオンの純粋なプロトン−スポンジ膜不安定化機構に依存しない。ある実施態様において、膜破壊の２つの機構、（ａ）ポリカチオン（例えばＤＭＡＥＭＡ）および（ｂ）疎水性化されたポリアニオン（例えばプロピルアクリル酸）（これらはともに作用する）の組み合わせは、ポリマーによって付与される膜不安定化の力価に対して付加的または相乗的な効果を有する。
［００１３２］ある実施態様において、ポリマーブロックは、非限定的な例示として、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ポリエチレングリコール、親水性ブロック、疎水性ブロック、帯電したブロック等から任意に選択される。
［００１３３］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は膜不安定化ブロックコポリマーを含み、ここにおいて、ブロックコポリマーは非ペプチド性および／または非脂質性である。膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記コアブロックは非ペプチド性および／または非脂質性であるミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は膜不安定化ブロックコポリマーを含み、前記シェルブロックは非ペプチド性および／または非脂質性である。ある実施態様において、ミセル集合体を形成するブロックコポリマーの骨格は、非ペプチド性および／または非脂質性である。一定の実施態様において、コアブロックの骨格は非ペプチド性および／または非脂質性である。ある実施態様において、シェルブロックは非ペプチド性および／または非脂質性である。ここに使用されるように、脂質は、疎水性または環状分子として広く定義される化合物の多様な基であり、２つの異なるタイプの生化学的サブユニット：ケトアシル基およびイソプレン基から全体的にまたは部分的に起因し、例えば、脂肪酸、グリセロ脂質、グリセロリン脂質、スフィンゴ脂質、サッカロ脂質（ｓａｃｃｈａｒｏｌｉｐｉｄｓ）、ポリケチド、ステロール脂質およびプレノール脂質（ｐｒｅｎｏｌ ｌｉｐｉｄｓ）である。
［００１３４］ある実施態様において、コアセクション（例えばコアブロック）およびシェルセクション（例えばシェルブロック）を含む複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、コアセクション（例えば、コアブロック）の数平均分子量とシェルセクション（例えば、シェルブロック）の数平均分子量との比が任意の適切な比で存在するミセル集合体が提供される。特定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーでは、コアセクション（例えば、コアブロック）の数平均分子量とシェルセクション（例えば、シェルブロック）の数平均分子量との比は、約１：１０から約５：１、約１：１から約５：１、約５：４から約５：１、約１：２から約２：１、約２：１、約１．５：１、約１．１：１、約１．２：１、約１．３：１、約１．４：１、約１．６：１、約１．７：１、約１．８：１、約１．９：１または約２．１：１の比である。ある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーでは、コアセクション（例えば、コアブロック）の数平均分子量とシェルセクション（例えば、シェルブロック）の数平均分子量との比が、約２（以上）から１；約１．５（以上）から１；約１．１（以上）から１；約１．２（以上）から１；約１．３（以上）から１；約１．４（以上）から１；約１．６（以上）から１；約１．７（以上）から１；約１．８（以上）から１；約１．９（以上）から１；または約２．１（以上）から１である。特定の実施態様において、コアブロックの数平均分子量とシェルブロックの数平均分子量との比は約２：１である。
［００１３５］特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、親水性セグメントおよび疎水性セグメントを有する少なくとも１種のポリマー（例えばモノブロックコポリマーを含む、ブロックコポリマーおよび／またはモノブロックポリマー）を含む。一定の実施態様において、親水性セグメントは親水性ブロックであり、疎水性セグメントは疎水性ブロックである。ある実施態様において、これらのポリマーは非ペプチド性である。その他の実施態様において、親水性セグメントおよび疎水性セグメントは、モノブロックグラジエントコポリマーの異なる領域である。様々な例において、「ポリマーセグメント」は、所定の物理的性質（例えば、ここに記載されるブロックの物理的性質、例えば疎水性、親水性、帯電可能性等）を有するポリマーセクション、または同様の物理的性質（例えば疎水性、親水性、帯電可能性等）を有する１以上のブロックを含むものである。
［００１３６］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体の１以上のまたは全てのポリマー（少なくとも複数の膜不安定化ブロックコポリマーおよび任意に非膜不安定化ブロックコポリマーを含む）は、それぞれ、（１）ミセル集合体（例えばミセル）のシェルの少なくとも一部を形成する任意に帯電した親水性セグメント（例えばシェルブロック）；および（２）コア形成ポリマーセグメントの疎水性相互作用によって安定するミセル集合体（例えばミセル）の疎水性コアの少なくとも一部を形成する実質的に疎水性のセグメント（例えばコアブロック）を有する。ある実施態様において、親水性セグメントは中性であるか、または帯電していない。ある実施態様において、親水性セグメントは帯電しており陽イオン性であるか、またはポリカチオン性である。ある実施態様において、親水性セグメントは帯電しており陰イオン性であるか、またはポリアニオン性である。ある実施態様において、親水性セグメントは帯電しており両性イオン性である。ある場合、親水性セグメントは、少なくとも次の３つの機能に役立つかもしれない：（１）ミセル構造のシェルを形成する、（２）ミセル集合体の水性分散性を増大する、および（３）１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチド−ベースの治療分子、例えばｓｉＲＮＡ）に付着（例えば結合）する。ある実施態様において、ミセル集合体の膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックおよび／またはコアは、帯電可能または帯電した種（例えば生理的なｐＨにおいて、陰イオン性および／または陽イオン性の種／モノマー単位）を含み、膜を不安定化する（例えばｐＨ依存的様式にて膜を不安定化する）。ある実施態様において、ミセル集合体の実質的に疎水性のブロック（例えばコアブロック）および／またはコアは、１以上の帯電可能種（例えばモノマー単位、成分、基等）を含む。より特定の実施態様において、ミセル集合体の実質的に疎水性のブロックおよび／またはコアは、複数の陽イオン種および複数の陰イオン種を含む。さらに特定の実施態様において、ミセル集合体の膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックおよび／またはコアは、実質的に同等の数の陽イオン種および陰イオン種を含む（すなわち、疎水性ブロックおよび／またはコアは実質的に正味中性である）。
［００１３７］一定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は、第１のおよび第２の帯電可能種を含む疎水性のコアブロックを含む。ある実施態様において、第１の帯電可能種はここに記述される通りであり、第２の帯電可能種は陽子の付加により陽イオン種に帯電する。特定の実施態様において、第１の帯電可能種は、酸性ｐＨ（例えばエンドソームのｐＨ、約６．５より下のｐＨ、約６．０より下のｐＨ、約５．８より下のｐＨ、約５．７より下のｐＨ等）において帯電していない。特定の実施態様において、第２の帯電可能種のｐＫａは、約６から約１０、約６．５から約９、約６．５から約８、約６．５から約７．５またはその他の適切なｐＫａである。一定の実施態様において、少なくとも１つの第１の帯電可能種および少なくとも１つの第２の帯電可能種は、単一のモノマー単位に存在する。ある実施態様において、第１の帯電可能種は第１の帯電可能なモノマー単位に見つかり、第２の帯電可能種は第２の帯電可能なモノマー単位に存在する。一定の実施態様において、第１の帯電可能種は、脱プロトン化により陰イオン種に帯電し、第２の帯電可能種は、プロトン化により陽イオン種に帯電し、陰イオン種と陽イオン種との比は、ほぼ中性のｐＨにおいて、約１：１０と約１０：１との間、約１：６と約６：１との間、約１：４と約４：１との間、約１：２と約２：１との間、約１：２と３：２との間または約１：１である。ある実施態様において、第１の帯電可能なモノマー単位と第２の帯電可能なモノマー単位との比は、約１：１０と約１０：１との間、約１：６と約６：１との間、約１：４と約４：１との間、約１：２と約２：１との間、約１：２と３：２との間または約１：１である。
［００１３８］「コポリマー」という用語は、ここに使用されるように、ポリマーが２つ以上の異なるモノマーの重合の結果であることを示す。ここに記載されるミセル集合体の「モノブロックポリマー」または「サブユニットポリマー」は、単一の重合ステップの合成による生成物である。モノブロックポリマーという用語は、コポリマー（すなわち１つを超えるタイプのモノマーの重合の生成物）およびホモポリマー（すなわち単一のタイプのモノマーの重合の生成物）を含む。「ブロック」コポリマーとは、構成上のまたはモノマーの単位の１以上の下位の組み合わせ（ｓｕｂ−ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ）を含む構造を意味し、ここにおいて互換的に使用される。そのような構成上のまたはモノマーの単位は、重合されたモノマーの残基を含む。ある実施態様において、ここに記述されたブロックコポリマーは、非脂質性の構成上のまたはモノマーの単位を含む。ある実施態様において、ブロックコポリマーはジブロックコポリマーである。ジブロックコポリマーは２つのブロックを含む；そのようなポリマーの概要は下記のように表わされる：［（ＡａＢｂＣｃ）…］ｍ−［ＸｘＹｙＺｚ…］ｎ、ここにおいて、それぞれの文字は構成上のまたはモノマーの単位を表わし、構成単位のそれぞれの添字は、特定のブロックにおけるその単位のモル分数を表し、３つのドットは、それぞれのブロックにさらに構成単位が存在してもよい（または、より少なくてもよい）ことを表し、ｍおよびｎは、ジブロックコポリマーにおけるそれぞれのブロックの分子量を示す。概要によって示唆されるとおり、ある例において、それぞれの構成単位の数および性質は、それぞれのブロックにて別々に制御される。概要は、各々のブロックにおける構成単位の数または異なるタイプの構成単位の数の間において如何なる任意の関係の推論も意味すべきでなく、解釈されるべきではない。また、概要は、任意の特定の数または特定のブロック内の構成単位の配列を記述するのが目的ではない。それぞれのブロックにおいて、特別に述べない限り、構成単位は、純粋にランダムな、交互にランダムな、規則的に交互な、規則的なブロックまたはランダムなブロックの構成に配置してよい。純粋にランダムな構成は、例えば、非限定的な形態：ｘ−ｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｙ−ｚ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ…を有してよい。非限定的な、典型的な交互にランダムな構成は、非限定的な形態：ｘ−ｙ−ｘ−ｚ−ｙ−ｘ−ｙ−ｚ−ｙ−ｘ−ｚ…を有してよく、典型的で規則的に交互の構成は非限定的な形態：ｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｚ−ｘ−ｙ−ｚ…を有してよい。典型的で規則性なブロックの構成は、次の非限定的な構成：…ｘ−ｘ−ｘ−ｙ−ｙ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｘ…を有してよく、一方、典型的でランダムなブロック構成は非限定的な構成：…ｘ−ｘ−ｘ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｙ−ｙ−ｙ−ｙ−ｚ−ｚ−ｚ−ｘ−ｘ−ｚ−ｚ−ｚ−…を有してよい。グラジエントポリマーにおいて、１以上のモノマー単位の含有量は、ポリマーのα末端からω末端までグラジエントの様式で増大または減少する。前述の総括的ないずれの例においても、それぞれの構成単位もしくはブロックの特定の並置またはブロックにおける構成単位の数もしくはブロックの数を意味せず、本発明のミセル集合体を形成するブロックコポリマーの実際の構造に関するまたはそれに限定する任意の様式として解釈すべきでない。一定の実施態様において、任意のサブユニットポリマーまたはここに記載されるサブユニットポリマーの組成物が、そのようなポリマーがミセル集合体に集合するか否かにかかわらず提供される。
［００１３９］ここに使用されるように、構成単位を囲む括弧は、構成単位自身がブロックを形成することを意味せず且つそのような意味に解釈してはならない。すなわち、角括弧内の構成単位は、ブロック内のその他の構成単位と任意の様式で組み合わされてよく、すなわち、純粋にランダムな、交互にランダムな、規則的に交互な、規則的なブロックまたはランダムなブロックの構成であってよい。ここに記載されたブロックコポリマーは、任意に交互、グラジエントまたはランダムなブロックコポリマーである。ある実施態様において、ブロックコポリマーはデンドリマー、スター（ｓｔａｒ）またはグラフト（ｇｒａｆｔ）コポリマーである。
［００１４０］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）は、エチレン性不飽和モノマー（ｅｔｈｙｌｅｎｉｃａｌｌｙ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｍｏｎｏｍｅｒ）を含む。「エチレン性不飽和モノマー」という用語は、少なくとも１つの炭素二重結合または三重結合を有する化合物としてここに定義される。エチレン性不飽和モノマーの非限定的な例は次のとおりである：アルキル（アルキル）アクリラート、メタクリレート、アクリラート、アルキルアクリルアミド、メタクリルアミド、アクリルアミド、スチレン、アリルアミン、アリルアンモニウム、ジアリルアミン、ジアリルアンモニウム、Ｎ−ビニルホルムアミド、ビニルエーテル、ビニルスルホネート、アクリル酸、スルホベタイン、カルボキシベタイン、ホスホベタインまたは無水マレイン酸。
［００１４１］様々な実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマーを含む）を提供するのに適している任意のモノマーが使用される。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体のポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマーを含む）の作製における使用に適したモノマーは、非限定的な例示として、１以上の次のモノマーを含む：メチルメタクリレート、エチルアクリラート、プロピルメタクリレート（全て異性体）、ブチルメタクリレート（全て異性体）、２−エチルヘキシルメタクリレート、イソボルニルメタクリレート、メタクリル酸、ベンジルメタクリレート、フェニルメタクリレート、メタクリロニトリル、アルファ−メチルスチレン、メチルアクリラート、エチルアクリラート、プロピルアクリラート（全て異性体）、ブチルアクリラート（全て異性体）、２−エチルヘキシルアクリラート、イソボルニルアクリラート、アクリル酸、ベンジルアクリラート、フェニルアクリラート、アクリロニトリル、スチレン、次から選択されるアクリラートおよびスチレン、グリシジルメタクリレート、２−ヒドロキシエチルメタクリレート、ヒドロキシプロピルメタクリレート（全て異性体）、ヒドロキシブチルメタクリレート（全て異性体）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルメタクリレート、トリエチレングリコールメタクリレート、オリゴエチレングリコールメタクリレート、イタコン酸無水物、イタコン酸、グリシジルアクリラート、２−ヒドロキシエチルアクリラート、ヒドロキシプロピルアクリラート（全て異性体）、ヒドロキシブチルアクリラート（全て異性体）、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルアクリラート、Ｎ，Ｎ−ジエチルアミノエチルアクリラート、トリエチレングリコールアクリラート、メタクリルアミド、Ｎ−メチルアクリルアミド、Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリルアミド、Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルメタクリルアミド、Ｎ−ｎ−ブチルメタクリルアミド、Ｎ−メチロールアクリルアミド、Ｎ−エチロールアクリルアミド、ビニル安息香酸（全て異性体）、ジエチルアミノスチレン（全て異性体）、アルファ−メチルビニル安息香酸（全て異性体）、ジエチルアミノアルファ−メチルスチレン（全て異性体）、ｐ−ビニルベンゼンスルホン酸、ｐ−ビニルベンゼンスルホン酸ナトリウム塩、トリメトキシシリルプロピルメタクリレート、トリエトキシシリルプロピルメタクリレート、トリブトキシシリルプロピルメタクリレート、ジメトキシメチルシリルプロピルメタクリレート、ジエトキシメチルシリルプロピルメタクリレート、ジブトキシメチルシリルプロピルメタクリレート、ジイソプロポキシメチルシリルプロピルメタクリレート、ジメトキシシリルプロピルメタクリレート、ジエトキシシリルプロピルメタクリレート、ジブトキシシリルプロピルメタクリレート、ジイソプロポキシメチルシリルプロピルメタクリレート、トリメトキシシリルプロピルアクリラート、トリエトキシシリルプロピルアクリラート、トリブトキシシリルプロピルアクリラート、ジメトキシメチルシリルプロピルアクリラート、ジエトキシメチルシリルプロピルアクリラート、ジブトキシメチルシリルプロピルアクリラート、ジイソプロポキシメチルシリルプロピルアクリラート、ジメトキシシリルプロピルアクリラート、ジエトキシシリルプロピルアクリラート、ジブトキシシリルプロピルアクリラート、ジイソプロポキシシリルプロピルアクリラート、酢酸ビニル、酪酸ブチル、安息香酸ビニル、塩化ビニル、フッ化ビニル、臭化ビニル、無水マレイン酸、Ｎ−アリールマレイミド、Ｎ−フェニルマレイミド、Ｎ−アルキルマレイミド、Ｎ−ブチルマレイミド、Ｎ−ビニルピロリドン、Ｎ−ビニルカルバゾール、ブタジエン、イソプレン、クロロプレン、エチレン、プロピレン、１，５−ヘキサジエン、１，４−ヘキサジエン、１，３−ブタジエン、１，４−ペンタジエン、ビニルアルコール、ビニルアミン、Ｎ−アルキルビニルアミン、アリルアミン、Ｎ−アルキルアリルアミン、ジアリルアミン、Ｎ−アルキルジアリルアミン、アルキレンイミン、アクリル酸、アルキルアクリラート、アクリルアミド、メタクリル酸、アルキルメタクリレート、メタクリルアミド、Ｎ−アルキルアクリルアミド、Ｎ−アルキルメタクリルアミド、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、ビニルナフタレン、ビニルピリジン、エチルビニルベンゼン、アミノスチレン、ビニルピリジン、ビニルイミダゾール、ビニルビフェニル、ビニルアニソール、ビニルイミダゾリル、ビニルピリジニル、ビニルポリエチレングリコール、ジメチルアミノメチルスチレン、トリメチルアンモニウムエチルメタクリレート、トリメチルアンモニウムエチルアクリラート、ジメチルアミノプロピルアクリルアミド、トリメチルアンモニウムエチルアクリラート、トリメチルアンモニウムエチルメタクリレート、トリメチルアンモニウムプロピルアクリルアミド、ドデシルアクリラート、オクタデシルアクリラート、またはオクタデシルメタクリレートモノマー、またはそれらの組み合わせ。
［００１４２］ある実施態様において、これらのモノマーの官能化されたバージョンが任意に使用される。官能化モノマーは、ここに使用されるように、マスクされたまたはマスクされていない官能基、例えば重合に続いてその他の成分を付着させることができる基を含むモノマーである。そのような基の非限定的な例は、一級アミノ基、カルボキシル、チオール、ヒドロキシル、アジド、およびシアノ基である。いくつかの適切なマスキング基が利用可能である（T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis (2nd edition) J. Wiley & Sons, 1991. P. J. Kocienski, Protecting Groups, Georg Thieme Verlag, 1994参照）。
［００１４３］ここで記載されるポリマーは、任意の適切な様式にて調製される。ここに提供されるポリマーを製造するために使用される適切な合成法は、非限定的な例示として、陽イオン性の、陰イオン性のおよびフリーラジカルの重合を含む。ある例において、陽イオン性プロセスが使用される場合、重合の開始のためにモノマーは触媒で処理される。任意に、１以上のモノマーがコポリマーを形成するために使用される。ある実施態様において、そのような触媒は、例えばプロトン酸（ブレンステッド酸）またはルイス酸を含むイニシエーターであり、ルイス酸を使用する場合、あるプロモーター例えば水またはアルコールが任意に使用される。ある実施態様において、触媒は、非限定的な例示として、ヨウ化水素、過塩素酸、硫酸、リン酸、フッ化水素、クロロスルホン酸、メタンスルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、アルミニウム三塩化物、アルキル塩化アルミニウム、三フッ化ホウ素複合体、四塩化スズ、五塩化アンチモン、塩化亜鉛、四塩化チタン、五塩化リン、オキシ塩化リンまたは二塩化二酸化クロムである。一定の実施態様において、ポリマー合成は、純粋に行なわれ、または任意の適した溶媒にて行われる。適した溶媒は、ペンタン、ヘキサン、ジクロロメタン、クロロホルムまたはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を含むがこれらに限られない。一定の実施態様において、ポリマー合成は、例えば約−５０℃から約１００℃または約０℃から約７０℃含む任意の適切な反応温度でも行なわれる。
［００１４４］一定の実施態様において、ポリマーはフリーラジカル重合によって調製される。フリーラジカル重合プロセスが使用される場合、（ｉ）モノマー、（ｉｉ）任意にコモノマー、および（ｉｉｉ）フリーラジカルの任意の供給源が、フリーラジカル重合プロセスを引き起こすために提供される。ある実施態様において、あるモノマーは高温で加熱することで自発的に開始するため、フリーラジカルの供給源は任意である。特定の例において、重合混合物を形成した後、その混合物は重合状態にさらされる。ここに議論されるように、重合条件は、少なくとも１つのモノマーに少なくとも１つのポリマーを形成させる条件である。そのような条件は、任意の適切なレベルに自由に変更され、非限定的な例示として、温度、圧力、雰囲気、重合混合物に使用される開始成分の比率および反応時間を含む。重合は、例えば溶液、分散液、懸濁剤、エマルションまたはバルクにおける実行を含む任意の適切な様式において実行される。
［００１４５］ある実施態様において、イニシエーターは反応混合物中に存在する。任意の適切なイニシエーターが、ここに記載される重合プロセスに役立つ場合に自由に利用される。そのようなイニシエーターは、非限定的な例示として、１以上のアルキルペルオキシド、置換アルキルペルオキシド、アリールペルオキシド、置換アリールペルオキシド、アシルペルオキシド、アルキルヒドロペルオキシド、置換アルキルヒドロペルオキシド、アリールヒドロペルオキシド、置換アリールヒドロペルオキシド、ヘテロアルキルペルオキシド、置換ヘテロアルキルペルオキシド、ヘテロアルキルヒドロペルオキシド、置換ヘテロアルキルヒドロペルオキシド、ヘテロアリールペルオキシド、置換ヘテロアリールペルオキシド、ヘテロアリールヒドロペルオキシド、置換ヘテロアリールヒドロペルオキシド、アルキル過酸エステル、置換アルキル過酸エステル、アリール過酸エステル、置換アリール過酸エステルまたはアゾ化合物を含む。特定の実施態様において、過酸化ベンゾイル（ＢＰＯ）および／またはＡＩＢＮはイニシエーターとして使用される。
［００１４６］ある実施態様において、重合プロセスは、任意の適切な様式においてリビングの様式で行なわれ、例えば原子移動ラジカル重合（Ａｔｏｍ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｒａｄｉｃａｌ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）（ＡＴＲＰ）、ニトロキシドを介したリビングフリーラジカル重合（ｎｉｔｒｏｘｉｄｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｌｉｖｉｎｇ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ）（ＮＭＰ）、開環重合（ＲＯＰ）、縮退移動（ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅ ｔｒａｎｓｆｅｒ）（ＤＴ）、可逆的付加開裂移動（Ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ａｄｄｉｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｔｒａｎｓｆｅｒ）（ＲＡＦＴ）で行われるが、これらに限定されない。従来のおよび／またはリビング／制御性の重合方法を使用して、様々なポリマー構造（例えばブロック、グラフト、スターおよびグラジエントコポリマー、但しこれらに限定されない）を製造することができ、これにより、モノマー単位は、鎖を介して統計的にもしくはグラジエントな様式で分散され、またはブロック配列でもしくはペンダントグラフトにてホモポリマー化する。その他の実施態様において、ポリマーは、キサントゲン酸塩の可逆的付加開裂連鎖移動を解した分子設計（Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｄｅｓｉｇｎ ｖｉａ ｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ−ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｃｈａｉｎ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｏｆ Ｘａｎｔｈａｔｅｓ）（ＭＡＤＩＸ）によって合成される（Direct Synthesis of Double Hydrophilic Statistical Di- and Triblock Copolymers Comprised of Acrylamide and Acrylic Acid Units via the MADIX Process", Daniel Taton, et al., Macromolecular Rapid Communications, 22, No. 18, 1497-1503 (2001)）。
［００１４７］一定の実施態様において、可逆的付加開裂移動またはＲＡＦＴが、本発明のエチレン性骨格ポリマーの合成に使用される。ＲＡＦＴはリビング重合プロセスである。ＲＡＦＴはフリーラジカル退縮連鎖移動プロセスを含む。ある実施態様において、ここに記載されるポリマーを調製するためのＲＡＦＴ処置は、可逆的連鎖移動機構により重合を介在するために、チオカルボニルチオ化合物（例えば、限定を意味することなく、ジチオエステル、ジチオカーバメート、トリチオカーバメートおよびキサントゲン酸塩）を使用する。特定の例において、重合体のラジカルと先の化合物のうちのいずれかのＣ＝Ｓ基との反応は、安定したラジカル中間体の形成をもたらす。典型的に、これらの安定したラジカル中間体は、標準的なラジカル重合に典型的な停止反応を生じることがなく、むしろ、モノマーによる再開または伝播が可能なラジカルの再導入をもたらし、プロセスにおいてＣ＝Ｓ結合を再編成する。ほとんどの例において、この、Ｃ＝Ｓ結合への付加、続いて起こるラジカルの破片化のサイクルは、モノマーがすべて消費されるか、反応が停止するまで続く。一般に、任意の特定の時間における低濃度の活性ラジカルは、正常な停止反応を制限する。
［００１４８］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）にて利用されるポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）は、低い多分散指数（ＰＤＩ）または鎖長の違いを有する。多分散指数（ＰＤＩ）は、任意の適切な様式、例えばポリマー鎖の重量平均分子量をそれらの数平均分子量で割ることで、決定することができる。数平均分子量は、個々の鎖分子量の合計を鎖の数で割ったものである。重量平均分子量は、その分子量の分子の数で割られた分子量の２乗に比例する。重量平均分子量が数平均分子量より常に大きいため、多分散性は常に１以上である。数が同一となるほど、すなわち多分散性が１つの値に接近するほど、ポリマーは単分散により近くなり、すべての鎖が正確に同一の数の構成単位を有するようになる。１に近づく多分散性の値は、ラジカルリビング重合を使用して達成できる。多分散性を決定する方法（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー、動的光散乱法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化クロマトグラフィーおよびエレクトロスプレー質量クロマトグラフィー、但しこれらに限定されない）は、当該分野で周知である。ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）のブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）は、２．０未満、または１．８未満、または１．６未満、または１．５未満、または１．４未満、または１．３未満、または１．２未満の多分散指数（ＰＤＩ）を有する。
［００１４９］ここに記載された重合プロセスは、任意の適した溶媒またはそれらの混合物にて、任意に生じる。適した溶媒は、水、アルコール（例えばメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロピルアルコール、ブタノール）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、アセトン、アセトニトリル、ヘキサメチルホスホラミド、酢酸、ギ酸、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、ジオキサン、塩化メチレン、エーテル（例えばジエチルエーテル）、クロロホルムおよび酢酸エチルを含む。１つの側面において、溶媒は、水、および水と水混和性の有機溶媒（例えばＤＭＦ）との混合物を含む。
［００１５０］一定の実施態様において、ここに使用されるポリ（ＤＭＡＥＭＡ）およびその他の重合体の要素（例えばＢＭＡ、ＤＭＡＥＭＡおよびＰＡＡのコポリマーまたはコポリマーブロック）は、任意の適した様式にて製造される。１つの実施態様において、ポリ（ＤＭＡＥＭＡ）は、ＲＡＦＴ、ＣＴＡ、ＥＣＴおよびラジカルイニシエーターの存在下、ＤＭＡＥＭＡを重合することで製造される。ある実施態様において、ブロック、ポリ（ＤＭＡＥＭＡ）マクロＣＴＡは、第２のブロックがＢＭＡ、ＤＭＡＥＭＡおよびＰＡＡを含む一連のジブロックコポリマーを製造するために使用される。その他の特定の実施態様において、ジブロックポリマー上のブロックの配向は逆にされ、自己組織化により、ポリマーのω末端はミセルまたはミセル集合体の親水性セグメントにさらされる。様々な実施態様において、これは、多数の方法を総合的に含む任意の適切な様式にて達成される。例えば、ある実施態様において、ここに記載されるブロックコポリマーの合成は、ＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡコア−形成疎水性ブロックの製造により開始し、得られたＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡを第２のＲＡＦＴ重合ステップにさらすことにより、シェル−形成親水性帯電ブロックが第２の合成ステップに添加される。代替のアプローチは、ＰＡＡ／ＢＭＡ／ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡを分解してチオール末端を形成し、その後あらかじめ形成されたた親水性の帯電したポリマーを、形成したチオールに共有結合させることを含む。この合成アプローチは、ミセルの表面に露出した重合体鎖のω−末端に対する反応性基の導入方法を提供し、これにより、ミセルへの化学的結合の代替となるアプローチを提供する。
［００１５１］ある実施態様において、ブロックコポリマーは、別々の重合プロセスによって製造された幾つかのポリマーブロックの化学的結合によって合成される。
［００１５２］ある例において、ブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）は、当該分野で既知の化学、例えば「ｃｌｉｃｋ」化学によって、重合後の付加的な官能性の誘導に使用できる反応性基を有するモノマーを含む。（例えば「ｃｌｉｃｋ」反応についてはWu, P.; Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne Cycloaddition: Reactivity and Applications. Aldrichim. Acta, 2007, 40, 7-17を参照）。
［００１５３］特定の例において、以下の構造のポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマーを含むブロックコポリマー）が提供される：
α−［Ｄｓ−Ｘｔ］ｂ−［Ｂｘ−Ｐｙ−Ｄｚ］ａ−ω ［構造１］
α−［Ｂｘ−Ｐｙ−Ｄｚ］ａ−［Ｄｓ−Ｘｔ］ｂ−ω ［構造２］
ここにおいて、ｘ、ｙ、ｚ、ｓおよびｔは、ポリマーブロックにおいて、個々のモノマー単位Ｄ（ＤＭＡＥＭＡ）、Ｂ（ＢＭＡ）、Ｐ（ＰＡＡ）および親水性の中性のモノマー（Ｘ）のモル％の組成（一般に０−５０％）であり、ａおよびｂはブロックの分子量であり、［Ｄｓ−Ｘｔ］は親水性のコアブロックであり、およびαおよびωはポリマーの反対端を示す。一定の実施態様において、ｘは５０％、ｙは２５％且つｚは２５％である。一定の実施態様において、ｘは６０％、ｙは２０％且つｚは２０％である。一定の実施態様において、ｘは７０％、ｙは１５％且つｚは１５％である。一定の実施態様において、ｘは５０％、ｙは２５％且つｚは２５％である。一定の実施態様において、ｘは３３％、ｙは３３％且つｚは３３％である。一定の実施態様において、ｘは５０％、ｙは２０％且つｚは３０％である。一定の実施態様において、ｘは２０％、ｙは４０％且つｚは４０％である。一定の実施態様において、ｘは３０％、ｙは４０％且つｚは３０％である。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、約２，０００Ｄａから約３０，０００Ｄａ、約５，０００Ｄａから約２０，０００Ｄａまたは約７，０００Ｄａから約１５，０００Ｄａの親水性ブロックを含む。特定の実施態様において、親水性ブロックは、約７，０００Ｄａ、８，０００Ｄａ、９，０００Ｄａ、１０，０００Ｄａ、１１，０００Ｄａ、１２，０００Ｄａ、１３，０００Ｄａ、１４，０００Ｄａまたは１５，０００Ｄａである。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、約２，０００Ｄａから約５０，０００Ｄａ、約１０，０００Ｄａから約５０，０００Ｄａ、約１５，０００Ｄａから約３５，０００Ｄａ、または約２０，０００Ｄａから約３０，０００Ｄａの疎水性コアブロックを含む。ある特定の実施態様において、親水性ブロックを有するポリマーは１２，５００Ｄａであり、２５，０００Ｄａ（１：２の長さの比）の疎水性コアブロックはミセル集合体（例えばミセル）を形成する。ある特定の実施態様において、親水性ブロックを有するポリマーは１０，０００Ｄａであり、３０，０００Ｄａ（１：３の長さの比）の疎水性コアブロックはミセル集合体（例えばミセル）を形成する。ある特定の実施態様において、親水性ブロックを有するポリマーは１０，０００Ｄａであり、２５，０００Ｄａ（１：２．５の長さの比）の疎水性コアブロックは、約４５ｎｍ（動的光散乱法測定または電子顕微鏡観察によって決定される）のミセル集合体（例えばミセル）を形成する。ある特定の実施態様において、ミセルは、８０または１３０ｎｍ（動的光散乱法測定または電子顕微鏡観察によって決定される）である。典型的に、ミセルシェルを形成する［Ｄｓ−Ｘｔ］の分子量（または長さ）が、コアを形成する［Ｂｘ−Ｐｙ−Ｄｚ］疎水性コアブロックと比較して増大すると、ミセルのサイズは増大する。ある例において、シェル（［Ｄｓ−Ｘｔ］）を形成するポリマー陽イオン性ブロックのサイズは、オリゴヌクレオチド剤による有効な複合体形成／電荷中和を提供する点で重要である。例えば、特定の例において、約２０の塩基対（すなわち４０の陰イオンの電荷）のｓｉＲＮＡでは、陽イオン性ブロックは、例えば４０の陽イオン電荷との有効な結合を提供するのに適した長さを有する。７．４のｐＫａ値を有する８０ＤＭＡＥＭＡモノマー（ＭＷ＝１１，６８０）を含むシェルブロックでは、ブロックはｐＨ７．４で４０の陽イオン電荷を含む。ある例において、安定的ポリマー―ｓｉＲＮＡ結合物（例えば複合体）は、同様の数の反対の電荷と間の静電相互作用によって形成する。特定の例において、多数の過剰な正電荷の回避は、著しいインビトロおよびインビボの毒性を防ぐのを助ける。
［００１５４］特定の実施態様において、ブロックコポリマーの疎水性コアブロックは、複数の陽イオン性帯電可能種、例えばジメチルアミノエチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）を含む。したがって、ある実施態様において、そのようなポリマーセグメントの構造は、以下の構造３によって表される：
Ｑ１−［ＢＭＡｘ−ＰＡＡｙ−ＤＭＡＥＭＡｚ］−Ｑ２ ［構造３］
ここにおいて、上記の明示におけるＱ１およびＱ２はその他のポリマーブロックまたは末端基官能性を示し、ｘ、ｙおよびｚは、それぞれモノマー単位のモル％組成物（一般に０−５０％）である。特定の例において、それぞれのモノマー単位は、それぞれのおよび相乗的な機能を示す。例えば、陰イオン種および疎水性種の両方を含み、〜６．７のｐＫａ値を有するポリプロピルアクリル酸は、約６．７より大きいｐＨにて親水性であり、約６．７より下のｐＨにてますます疎水性であり、このときカルボン酸塩はプロトン化される。特定の例において、例えば、ブロックにおける主に疎水性のモノマー単位ＢＭＡのモル％の増大による局所的な環境の疎水性の増大は、ＰＡＡのｐＫａを上昇させ、より高いｐＨにてＰＡＡのプロトン化をもたらし、すなわち、ブロックを含むＰＡＡは、より高いｐＨにてより膜を不安定化するようになり、このため生理的なｐＨ〜７．４より下のｐＨにおいて、より小さな酸度の変化に対して反応性がより高くなる。ある例において、ＰＡＡのプロトン化は、疎水性の大きな上昇およびその後の膜不安定化特性を有する形態への構造変化をもたらす。上記のポリマーブロックにおける第３のモノマー単位は、ある例において以下のものを含むがこれらに限定されない複数の機能を示す陽イオン種（例えばＤＭＡＥＭＡ）である。等しいモル量においてＰＡＡの陰イオン種に匹敵する場合、それは、静電相互作用を形成するための電荷の中和および電位を作り、静電相互作用はミセル構造の疎水性コアの安定性に寄与でき、ここにおいて上記構造におけるＱ１またはＱ２のいずれかは、親水性のホモポリマーブロック（例えばポリ−ＤＭＡＥＭＡ）である。
［００１５５］一定の実施態様において、ブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）は式Ｉを有する：
Figure 2011522070
［００１５６］ある実施態様において：
Ａ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−から成る群から選択され；ここにおいて、
ａは１−４であり；
ｂは２−４であり；
Ｙ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（１Ｃ−１０Ｃ）、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリールおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリール、これらのいずれかが１以上のフッ素基で任意に置換されたものから成る群から選択され；
Ｙ０、Ｙ１およびＹ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリール−および−（６Ｃ−１０Ｃ）アリール−から成る群から独立に選択され；
Ｙ３は、共有結合、−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリール−および−（６Ｃ−１０Ｃ）アリール−から成る群から選択され；ここにおいて
Ｒ１−Ｒ５およびＹ０−Ｙ４で完全には置換されていないＡ１−Ａ４の４価の炭素原子は、適切な数の水素原子で補完され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール、これらのいずれかが１以上のフッ素原子で任意に置換されたものから成る群から独立に選択され；
Ｑ０は、生理学的なｐＨで親水性であって、生理学的なｐＨにて少なくとも部分的に正に帯電する残基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、ピリジル等）；生理学的なｐＨにて少なくとも部分的に負に帯電しているがより低いｐＨにてプロトン化を受ける残基（例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、リン酸等）；生理学的なｐＨにて実質的に中性である（または帯電していない）残基（例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化（ｐｏｌｙｏｘｙｌａｔｅｄ）アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオール等）；生理学的なｐＨにて少なくとも部分的に両性イオンである残基（例えば、生理学的なｐＨにてリン酸基およびアンモニウム基を含むモノマー残基）；結合可能または官能化可能残基（例えば、反応性の基を含む残基、例えば、アジド、アルキン、スクシンイミドエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド等）；または水素から成る群から選択される残基であり；
Ｑ１は、生理学的なｐＨにて親水性の残基であって、生理学的なｐＨにて少なくとも部分的に正に帯電した残基（例えば、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリル、ピリジル等）；生理学的なｐＨで少なくとも部分的に負に帯電するが、より低いｐＨにてプロトン化を受ける残基（例えば、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、リン酸等）；生理学的なｐＨにて実質的に中性である残基（例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオール等）；または生理学的なｐＨにて少なくとも部分的に両性イオンである残基（例えば、生理学的なｐＨにてリン酸基およびアンモニウム基を含むもの）であり；
Ｑ２は、生理学的なｐＨにて正に帯電しており、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリルおよびピリジルを含むがこれらに限定されない残基であり；
Ｑ３は、生理学的なｐＨにて負に帯電しているが、より低いｐＨにてプロトン化する、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびリン酸を含むがこれらに限定されない残基であり；
ｍは約０から１．０未満（例えば０から約０．４９）であり；
ｎは０より大きい値から約１．０（例えば約０．５１から約１．０）であり；ここにおいて
ｍ＋ｎ＝１
ｐは約０．１から約０．９（例えば約０．２から約０．５）であり；
ｑは約０．１から約０．９（例えば約０．２から約０．５）であり；ここにおいて：
ｒは０から約０．８（例えば０から約０．６）であり；ここにおいて
ｐ＋ｑ＋ｒ＝１
ｖは、約１から約２５ｋＤａまたは約５から約２５ｋＤａであり；および、
ｗは、約１から約５０ｋＤａまたは約５から約５０ｋＤａである。
［００１５７］ある実施態様において、ｐおよびｑとして表わされるモノマー残基の数または比は、互いの約３０％、互いの約２０％、互いの約１０％等の範囲である。特定の実施態様において、ｐは、ｑと実質的に同一である。一定の実施態様において、少なくとも部分的に帯電した、一般に微量を越える量の帯電した種を含み、例えば、残基の少なくとも２０％が帯電しており、残基の少なくとも３０％が帯電しており、残基の少なくとも４０％が帯電しており、残基の少なくとも５０％が帯電しており、残基の少なくとも６０％が帯電しており、残基の少なくとも７０％が帯電している。
［００１５８］一定の実施態様において、ｍは０であり、Ｑ１は、生理学的なｐＨにて親水性且つ実質的に中性の（または帯電していない）残基である。ある実施態様において、実質的に帯電していないとは、例えば、５％未満が帯電していること、３％未満が帯電していることまたは１％未満は帯電していることを含む。一定の実施態様において、ｍは０であり、Ｑ１は、生理学的なｐＨにて親水性且つ少なくとも部分的に陽イオン性の残基である。一定の実施態様において、ｍは０であり、Ｑ１は、生理学的なｐＨにて親水性且つ少なくとも部分的に陰イオン性である。一定の実施態様において、ｍは＞０であり、ｎは＞０であり、Ｑ０およびＱ１の１つは、生理学的なｐＨにおいて親水性且つ少なくとも部分的に陽イオン性の残基であり、Ｑ０およびＱ１の他方は、生理学的なｐＨにて親水性且つ実質的に中性の残基である。一定の実施態様において、ｍは＞０であり、ｎは＞０であり、Ｑ０およびＱ１の１つは、生理学的なｐＨにおいて親水性且つ少なくとも部分的に陰イオン性の残基であり、Ｑ０およびＱ１の他方は、生理学的なｐＨにて親水性且つ実質的に中性の残基である。一定の実施態様において、ｍは＞０であり、ｎは＞０であり、Ｑ１は生理学的なｐＨにて親水性且つ少なくとも部分的に陽イオン性である残基であり、Ｑ０は結合可能または官能化可能残基である残基である。一定の実施態様において、ｍは＞０であり、ｎは＞０であり、Ｑ１は生理学的なｐＨにて親水性且つ実質的に中性の残基であり、Ｑ０は結合可能または官能化可能残基である残基である。
［００１５９］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、式ＩＩのブロックコポリマーを含む：
Figure 2011522070
ある実施態様において：
Ａ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−から成る群から選択され；ここにおいて、
ａは１−４であり；
ｂは２−４であり；
Ｙ０およびＹ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（１Ｃ−１０Ｃ）、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリールおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリール、これらのいずれかが１以上のフッ素基で任意に置換されたものから成る群から独立に選択され；
Ｙ１およびＹ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリール−および−（６Ｃ−１０Ｃ）アリール−から成る群から独立に選択され；
Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリールおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリールから成る群から選択され；ここにおいて
Ｒ１−Ｒ５およびＹ０−Ｙ４で完全には置換されていないＡ１−Ａ４の４価の炭素原子は、適切な数の水素原子で補完され；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール、これらの何れかが１以上のフッ素原子で任意に置換されてもよいものから成る群から独立に選択され；
Ｑ１およびＱ２は、生理学的なｐＨにて正に帯電した残基であり、アミノ、アルキルアミノ、アンモニウム、アルキルアンモニウム、グアニジン、イミダゾリルおよびピリジルを含むが、これらに限定されない。
Ｑ３は、生理学的なｐＨにて負に帯電しているが、より低いｐＨでプロトン化を受ける残基であり、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネートおよびリン酸を含むが、これらに限定されない。
ｍは０から約０．４９まであり；
ｎは約０．５１から約１．０までであり；ここにおいて
ｍ＋ｎ＝１
ｐは約０．２から約０．５であり；
ｑは約０．２から約０．５であり；ここにおいて：
ｐは実質的にｑと同一であり；
ｒは０から約０．６であり；ここにおいて
ｐ＋ｑ＋ｒ＝１
ｖは、約１から約２５ｋＤａまたは約５から約２５ｋＤａであり；および、
ｗは、約１から約５０ｋＤａまたは約５から約５０ｋＤａである。
［００１６１］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、（例えば通常の生理的なｐＨにおいて）式ＩＩＩのブロックコポリマーを含む。
Figure 2011522070
［００１６２］一定の実施態様において、示されるように置換されたＡ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、式ＩＩＩのポリマーの構成単位を含む（ここでは「モノマー単位」および「モノマー残基」と互換的に使用される）。特定の実施態様において、式ＩＩＩのＡ群を構成するモノマー単位は、適切な条件の下で重合可能に適合する。特定の例において、エチレン性骨格または構成単位、−（Ｃ−Ｃ−）ｍ−ポリマー（ここにおいて、それぞれのＣはＨおよび／またはその他の適切な基によって二置換されている）は、炭素−炭素二重結合、＞Ｃ＝Ｃ＜を含むモノマーを使用して重合される。一定の実施態様において、それぞれＡ基（例えばＡ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４の各々）は、−Ｃ−Ｃ−（すなわちエチレンモノマー単位またはポリマー骨格）、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−（すなわちポリ無水物モノマー単位またはポリマー骨格）、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−（すなわちポリエステルモノマー単位またはポリマー骨格）、−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−（すなわちポリアルキルエングリコールモノマー単位またはポリマー骨格）等（ここにおいて、それぞれのＣは、Ｈおよび／または上記のＲ１２および／またはＲ１３を含む例えばここに記載されるその他の適切な基によって二置換される）であってよい（すなわち、これらから独立に選択されてよい）。特定の実施態様において、「ａ」という用語は１から４までの整数であり、「ｂ」は２から４までの整数である。特定の例において、式ＩＩＩの骨格に付着したそれぞれの「Ｙ」および「Ｒ」基（すなわちＹ０、Ｙ１、Ｙ２、Ｙ３、Ｙ４、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のうちの任意の１つ）は、特定のモノマー単位の任意の「Ｃ」（（Ｃ）ａまたは（Ｃ）ｂのいずれかを含む）に結合される。特定の実施態様において、特定のモノマー単位のＹおよびＲの両方は同一の「Ｃ」に付着される。ある特定の実施態様において、特定のモノマー単位のＹおよびＲの両方は同一の「Ｃ」に付着され、「Ｃ」は、存在するならば、モノマー単位のカルボニル基にアルファである。
［００１６３］特定の実施態様において、Ｒ１−Ｒ１１は、水素、アルキル（例えば１Ｃ−５Ｃアルキル）、シクロアルキル（例えば、３Ｃ−６Ｃシクロアルキル）、またはフェニルから独立して選択され、ここにおいてＲ１−Ｒ１１の何れかは、１以上のフッ素、シクロアルキルまたはフェニル（任意に１以上のアルキル基でさらに置換してもよい）で任意に置換される。
［００１６４］一定の特定の実施態様において、Ｙ０およびＹ４は、水素、アルキル（例えば１Ｃ−１０Ｃアルキル）、シクロアルキル（例えば３Ｃ−６Ｃシクロアルキル）、Ｏ−アルキル（例えば、Ｏ−（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル（例えば、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル）またはフェニル、これらのいずれかが１以上のフッ素で任意に置換されたものから独立に選択される。
［００１６５］ある実施態様において、Ｙ１およびＹ２は、共有結合、アルキル、好ましくは目下（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏアルキル、好ましくは目下−Ｃ（Ｏ）Ｏ−（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル基、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、好ましくは目下−ＯＣ（Ｏ）−（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル基、Ｏ−アルキル、好ましくは目下−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキルおよび−Ｓ−アルキル、好ましくは目下−Ｓ−（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル基から成る群から独立に選択される。一定の実施態様において、Ｙ３は、共有結合、アルキル、好ましくは目下（１Ｃ−５Ｃ）アルキルおよびフェニルから選択される。
［００１６６］ある実施態様において、Ｚ−は存在するか、存在しない。一定の実施態様において、ここにおいて、Ｒ１および／またはＲ４は水素であり、Ｚ−はＯＨ−である。一定の実施態様において、Ｚ−は、任意の対イオン（例えば１以上の対イオン）、好ましくは生物学的適合性の対イオン、例えば、非限定的な例示として、塩素イオン、無機または有機リン酸、硫酸、スルホン酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸塩、カプロン酸塩、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルメート（ｐａｌｍａｔｅ）、ステアリン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、リノレート（ｌｉｎｏｌａｔｅ）、アラキン酸、ガドレイン酸、ワクチネート（ｖａｃｃｉｎａｔｅ）、乳酸、グリコール酸、サリチル酸、デスアミノフェニルアラニン（ｄｅｓａｍｉｏｎｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、デスアミノセリン（ｄｅｓａｍｉｎｏｓｅｒｉｎｅ）、デスアミノスレオニン（ｄｅｓａｍｉｎｏｔｈｒｅｏｎｉｎｅ）、ε−ヒドロキシカプロン酸、３−ヒドロキシカプロン酸、４−ヒドロキシ酪酸または３−ヒドロキシ吉草酸である。ある実施態様において、Ｙ、Ｒおよび任意のフッ素のそれぞれが、選択された骨格の炭素に共有結合する場合、完全に置換されていない任意の炭素は適切な数の水素原子で補われる。ｍ、ｎ、ｐ、ｑおよびｒという数は、そのブロックにおけるそれぞれの構成単位のモル分数を表わし、ｖおよびｗはそれぞれのブロックの分子量を提供する。
［００１６７］一定の実施態様において、
Ａ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（ＣＲ１２Ｒ１３）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（ＣＲ１２Ｒ１３）ａＣ（Ｏ）−およびＯ（ＣＲ１２Ｒ１３）ｂＯから成る群から選択され；ここにおいて、
ａは１―４であり；
ｂは２―４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２およびＲ１３は、水素、（１Ｃ−５Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、（５Ｃ−１０Ｃ）アリール、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリール、これらのいずれかが１以上のフッ素原子で任意に置換されてもよいものから成る群から独立に選択され；
Ｙ０およびＹ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキルおよびフェニル、これらのいずれかが１以上のフッ素基で任意に置換されたものから成る群から独立に選択され；
Ｙ１およびＹ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−から成る群から独立に選択され；
Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−５Ｃ）アルキルおよびフェニルから成る群から選択され；ここにおいてＲ１−Ｒ５およびＹ０−Ｙ４で完全には置換されていないＡ１−Ａ４の４価の炭素原子は、適切な数の水素原子で補完され；
Ｚは１以上の生理学的に許容可能な対イオンであり、
ｍは０から約０．４９であり；
ｎは約０．５１から約１．０であり；ここにおいて
ｍ＋ｎ＝１
ｐは約０．２から約０．５であり；
ｑは約０．２から約０．５であり；ここにおいて：
ｐは実質的にｑと同一であり；
ｒは０から約０．６であり；ここにおいて
ｐ＋ｑ＋ｒ＝１
ｖは約１から約２５ｋＤａまたは約５から約２５ｋＤａであり；および、
ｗは約１から約５０ｋＤａまたは約５から約５０ｋＤａである。
［００１６８］特定の実施態様において、
Ａ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−から成る群から独立に選択され；ここにおいて、
ａは１−４であり；
ｂは２−４であり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０およびＲ１１は、水素、（１Ｃ−５Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキルおよびフェニル、これらのいずれかが１以上のフッ素原子で任意に置換されてもよいものから成る群から独立に選択され；
Ｙ０およびＹ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキルおよびフェニル、これらのいずれかが１以上のフッ素基で任意に置換されたものから成る群から独立に選択され；
Ｙ１およびＹ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−から成る群から独立に選択され；
Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−５Ｃ）アルキルおよびフェニルから成る群から選択され；
ここにおいてＲ１−Ｒ５およびＹ０−Ｙ４で完全には置換されていないＡ１−Ａ４の４価の炭素原子は、適切な数の水素原子で補完され；
Ｚは生理学的に許容可能な対イオンであり、
ｍは０から約０．４９であり；
ｎは約０．５１から約１．０であり；
ここにおいてｍ＋ｎ＝１
ｐは約０．２から約０．５であり；
ｑは約０．２から約０．５であり；ここにおいて：
ｐは実質的にｑと同一であり；
ｒは０から約０．６であり；ここにおいて
ｐ＋ｑ＋ｒ＝１
ｖは約５から約２５ｋＤａであり；および
ｗは約５から約２５ｋＤａである。
［００１６９］ある実施態様において、
Ａ１は−Ｃ−Ｃであり
Ｙ１は−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ２−であり；
Ｒ６は水素であり；
Ｒ７およびＲ８は各々−ＣＨ３であり；および、
Ｒ２は−ＣＨ３である。
［００１７０］ある実施態様において、
Ａ２は−Ｃ−Ｃ−であり；
Ｙ２は−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ２ＣＨ２−であり；
Ｒ９は水素であり；
Ｒ１０およびＲ１１は各々−ＣＨ３であり；および、
Ｒ３は−ＣＨ３である。
［００１７１］ある実施態様において、
Ａ３は−Ｃ−Ｃ−であり；
Ｒ４はＣＨ３ＣＨ２ＣＨ２−であり；
Ｙ３は共有結合であり；および
Ｚ−生理学的に許容可能な陰イオンである。
［００１７２］ある実施態様において、
Ａ4は−Ｃ−Ｃ−であり；
Ｒ５は水素および−ＣＨ３から成る群から選択され；および、
Ｙ４は−Ｃ（Ｏ）Ｏ（ＣＨ２）３ＣＨ３である。
［００１７３］ある実施態様において、
Ａ０は−Ｃ−Ｃであり
Ｒ１は水素および（１Ｃ−３Ｃ）アルキルから成る群から選択され；および、
Ｙ０は、―Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−３Ｃ）アルキルから成る群から選択される。
［００１７４］ある実施態様において、ｍは０である。
［００１７５］ある実施態様において、ｒは０である。
［００１７６］ある実施態様において、ｍおよびｒはともに０である。
［００１７７］ここに記載される様々な実施態様において、ここに記載される生理学的ｐＨにおいて陽イオン性であるかまたは正に帯電した構成単位（例えば、特定の親水性構成単位を含む）は、１以上のアミノ基、アルキルアミノ基、グアニジン基、イミダゾリル基、ピリジル基等、またはそれらがプロトン化された、アルキル化されたまたはその他の形態を含む。ある実施態様において、ここで使用される正常な生理学的ｐＨにおいて陽イオン性である構成単位は、非限定的な例示として、ジアルキルアミノアルキルメタクリレート（例えばＤＭＡＥＭＡ）のモノマー残基を含む。ここに記載された様々な実施態様において、ここに記載される生理学的ｐＨにおいて陰イオン性であるかまたは負に帯電した構成単位（例えば、特定の親水性構成単位を含む）は、１以上の酸性の基またはその共役塩基を含み、非限定的な例示として、カルボキシル、スルホンアミド、ボロネート、ホスホネート、リン酸等を含む。ある実施態様において、ここで使用される正常な生理学的ｐＨにおいて陰イオン性であるかまたは負に帯電した構成単位は、非限定的な例示として、アクリル酸、アルキルアクリル酸（例えばメチルアクリル酸、エチルアクリル酸、プロピルアクリル酸等）のモノマー残基等を含む。ここに記載された様々な実施態様において、生理学的なｐＨにおいて中性の親水性構成単位は、１以上の親水基、例えば、ヒドロキシ、ポリオキシル化アルキル、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、チオール等を含む。ある実施態様において、ここで使用される正常な生理学的ｐＨにおいて中性の親水性構成単位は、非限定的な例示として、ＰＥＧ化アクリル酸、ＰＥＧ化メタクリル酸、ヒドロキシアルキルアクリル酸、ヒドロキシアルキルアルカクリル酸（ｈｙｄｒｏｘｙａｌｋｙｌａｌｋａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ）（例えばＨＰＭＡ）のモノマー残基等を含む。ここに記載された様々な実施態様において、生理学的なｐＨにおいて両性イオンの親水性構成単位は、生理学的なｐＨにおいて陰イオン性であるかまたは負に帯電した基および生理学的なｐＨにおいて陽イオン性であるかまたは正に帯電した基を含む。ある実施態様において、ここで使用される正常な生理学的ｐＨにおいて両性イオンの親水性構成単位は、非限定的な例示として、生理学的なｐＨにおいてリン酸基およびアンモニウム基、例えばＵＳ７，３００，９９０（当該文献は本願に援用される）に開示されたもの等を含むモノマー残基を含む。
［００１７８］一定の実施態様において、ここに提供されるポリマーは、さらに、結合可能または官能化可能な側鎖（例えばモノマー残基のペンダント基）を含む１以上の構成単位を含む。ある例において、結合可能または官能化可能な側鎖は、当該分野で既知の化学、例えば「クリック」化学による付加的な官能性の重合後導入のために使用できる１以上の反応性基を有する基である（「クリック」反応の例は、Wu, P.; Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne Cycloaddition: Reactivity and Applications. Aldrichim. Acta, 2007, 40, 7-17参照）。一定の実施態様において、ここに提供される結合可能または官能化可能な側鎖は、１以上の任意の適切な活性化された基、例えばＮ−ヒドロスクシンイミド（ＮＨＳ）エステル、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）エステル、ｐ−ニトロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、ピリジルジスルフィド基等を含むが、これらに限定されない。
提供される一定の実施態様において、ブロックコポリマーは、（正常な生理的ｐＨまたはほぼ中性のｐＨにおいて）式ＩＶ１の化学式を有するジブロックコポリマーである：
Figure 2011522070
［００１７９］特定の例において、化合物ＩＶ１の構成単位は、左側の角括弧および右側の丸括弧内に示された通りであり、それらはモノマーに由来する：
Figure 2011522070
［００１８０］文字ｐ、ｑおよびｒは、そのブロック内のそれぞれの構成単位のモル分数を表す。文字ｖおよびｗは、ジブロックコポリマーにおけるそれぞれのブロックの分子量（数平均）を表す。
［００１８１］提供されるある実施態様において、ここに提供される化合物は以下の構造を有する化合物である。
Figure 2011522070
［００１８２］上に議論されるとおり、文字ｐ、ｑおよびｒは、そのブロック内のそれぞれの構成単位のモル分数を表す。文字ｖおよびｗは、ジブロックコポリマーにおけるそれぞれのブロックの分子量（数平均）を表す。
［００１８３］ある実施態様において、以下のポリマーが提供される：
［ＤＭＡＥＭＡ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ３
［ＰＥＧＭＡ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ４
［ＰＥＧＭＡｍ−／−ＤＭＡＥＭＡｎ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ５
［ＰＥＧＭＡｍ−／−ＭＡＡ（ＮＨＳ）ｎ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ６
［ＤＭＡＥＭＡｍ−／−ＭＡＡ（ＮＨＳ）ｎ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ７
［ＨＰＭＡｍ−／−ＰＤＳＭｎ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ８
［ＰＥＧＭＡｍ−／−ＰＤＳＭｎ］ｖ−［Ｂｐ−／−Ｐｑ−／−Ｄｒ］ｗ ＩＶ９
［００１８４］ある実施態様において、Ｂはブチルメタクリレート残基であり；Ｐはプロピルアクリル酸残基であり；ＤおよびＤＭＡＥＭＡはジメチルアミノエチルメタクリレート残基であり；ＰＥＧＭＡはポリエチレングリコールメタクリレート残基（例えば、１−２０のエチレンオキシド単位を有するもの、例えば化合物ＩＶ２に示されるもの、または４−５のエチレンオキシド単位を有するものまたは７−８のエチレンオキシド単位を有するもの）であり；ＭＡＡ（ＮＨＳ）はメチルアクリル酸−Ｎ−ヒドロキシコハク酸アミド残基であり；ＨＰＭＡはＮ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド残基であり；ＰＤＳＭはピリジルジスルフィドメタクリレート残基である。一定の実施態様において、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｗおよびｖという用語はここに記載された通りである。特定の実施態様において、ｗは約１ｘから約５ｘｖである。
［００１８５］式ＩＶ１−ＩＶ９の化合物は、ポリマーの第１のブロックを構成する様々な構成単位を含む、ここに提供されるポリマーの例である。ある実施態様において、第１のブロックの構成単位は改変されまたは化学的に処理されて、第１のブロックが、中性（例えばＰＥＧＭＡ）、陽イオン性（例えばＤＭＡＥＭＡ）、陰イオン性（例えば、ＰＥＧＭＡ−ＮＨＳ、ここで、ＮＨＳは酸またはアクリル酸に加水分解される）、両性電解性（例えば、ＤＭＡＥＭＡ−ＮＨＳ、ここで、ＮＨＳが酸に加水分解される）、または双性イオン性（例えばポリ［２―メタクリロイルオキシ―２’トリメチルアンモニウムエチルリン酸］）である構成単位であるか、またはそのような構成単位を含むポリマーが作られる。ある実施態様において、第１のブロック（例えば［ＰＥＧＭＡ−ＰＤＳＭ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］）においてピリジルジスルフィド官能基を含むポリマーは、チオール化されたｓｉＲＮＡと任意に反応可能であり且つ反応し、ポリマー―ｓｉＲＮＡ結合物を形成する。
［００１８６］特定の実施態様において、式ＩＶ３の化合物は、ここに記載されるように、Ｐ７クラスのポリマーであり、表１に示されるような分子量、多分散性およびモノマー組成を有する。
Figure 2011522070
［００１８７］ある特定の実施態様において、式ＩＶ３のポリマーは表２によるＰ７クラスのポリマーである。ある特定の実施態様において、式ＩＶ３のポリマーはＰ７ｖ６と呼ばれるＰ７クラスのポリマーである。ＰＲｘ０７２９ｖ６は、この出願および様々な先行する出願において、Ｐ７ｖ６と互換的に使用される。
Figure 2011522070
［コアブロック］
［００１８８］提供される一定の実施態様において、ここに記載される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、ｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であるか、それを含む。一定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、少なくとも部分的に、実質的にまたは主に疎水性である。
［００１８９］ある実施態様において、ここに記載される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含む。一定の実施態様において、ここに記載される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含み、コアブロックはコポリマーブロックである。ある実施態様において、ここに記述される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含み、前記第１の帯電可能種は、（例えばペンダント疎水性成分を含むポリマーブロックのポリマー骨格に近接することにより）疎水性的に保護されている。一定の実施態様において、ここに記述される膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種およびほぼ中性のｐＨにおいて陽イオン性である第２の帯電可能種を含む。
［００１９０］ある実施態様において、ここに記述される膜不安定化ポリマーのコアブロックは、少なくとも１つの第１の帯電可能種、基またはモノマー単位を含む。特定の実施態様において、第１の帯電可能種、基またはモノマー単位は、陰イオン性の種、基またはモノマー単位に帯電可能であるか、またはそれに帯電している。そのようなコアブロックは種、基および／またはモノマー単位を含み、ここにおいて帯電可能種、基またはモノマー単位は帯電しておらず、または一部もしくは全部が帯電している。
［００１９１］一定の実施態様において、ここに記述される膜不安定化ポリマーのコアブロックは、少なくとも１つの第１の帯電可能種、基またはモノマー単位、および少なくとも１つの第２の帯電可能種、基またはモノマー単位を含む。ある例において、第１の帯電可能種、基またはモノマー単位は上に記述されたとおりであり、第２の帯電可能種、基またはモノマー単位は陽イオン性の種、基またはモノマー単位に帯電可能であるか、それに帯電している。ある実施態様において、ここに記述される膜不安定化ポリマーのコアブロックは、少なくとも１つの第１の帯電可能種、基またはモノマー単位；少なくとも１つの第２の帯電可能種、基またはモノマー単位；および少なくとも１つの付加的な種、基またはモノマー単位を含む。特定の実施態様において、付加的な種、基またはモノマー単位は、非帯電可能な種、基またはモノマー単位である。一定の実施態様において、付加的な種、基またはモノマー単位は、疎水性の種、基またはモノマー単位である。
［００１９２］一定の実施態様において、コアブロックが、少なくとも１つの陰イオン性帯電可能種、基またはモノマー単位および少なくとも１つの陽イオン性帯電可能な種、基またはモノマー単位を含む場合、少なくとも１つの陰イオン性帯電可能種、基またはモノマー単位の数と少なくとも１つの陽イオン性帯電可能な種、基またはモノマー単位の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約３：２から約２：３または約１：１である。ある実施態様において、コアブロックは、陰イオン性に帯電した少なくとも１つの陰イオン性帯電可能種、基またはモノマー単位および陽イオン性に帯電した少なくとも１つの陽イオン性帯電可能な種、基またはモノマー単位を含み、ここにおいてコアブロックに存在する陰イオン性に帯電した種、基またはモノマー単位の数と陽イオン性に帯電した種、基またはモノマー単位の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約３：２から約２：３、または約１：１である。
［００１９３］ある実施態様において、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）における少なくとも１つの陰イオン性帯電可能種、基またはモノマー単位の数と少なくとも１つの陽イオン性帯電可能な種、基またはモノマー単位の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約２：３から約３：２、約１：１．１から約１．１：１、または約１：１である。ある実施態様において、コアブロックは、陰イオン性に帯電した少なくとも１つの陰イオン性帯電可能種、基またはモノマー単位および陽イオン性に帯電した少なくとも１つの陽イオン性帯電可能な種、基またはモノマー単位を含み、ここにおいてほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）における、コアブロックに存在する陰イオン性に帯電した種、基またはモノマー単位の数と陽イオン性に帯電した種、基またはモノマー単位の数との比は、約１：１０から約１０：１、約１：８から約８：１、約１：６から約６：１、約１：４から約４：１、約１：２から約２：１、約２：３から約３：２、約１：１．１から約１．１：１、または約１：１である。特定の実施態様において、前記コアブロックに存在する正に帯電した種、基またはモノマー単位対前記コアにおける負に帯電した種、基またはモノマー単位の比は、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：４から約４：１である。より特定の実施態様において、前記コアブロックに存在する正に帯電した種、基またはモノマー単位と前記コアにおける負に帯電した種、基またはモノマー単位との比は、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：２から約２：１である。特定の実施態様において、前記コアブロックに存在する正に帯電した種、基またはモノマー単位と前記コアにおける負に帯電した種、基またはモノマー単位との比は、ほぼ中性のｐＨにおいて、約１：１．１から約１．１：１である。
［００１９４］特定の実施態様において、第１の帯電可能なモノマー単位はブレンステッド酸である。特定の例において、ここに使用されるように、帯電可能な種、基またはモノマー単位は、種、基および／またはモノマー単位を含み、ここにおいて（例えばｐＨ依存的様式において）プロトンの付加または除去は、それぞれ陽イオン性または陰イオン性の種、基またはモノマー単位を提供する。
［００１９５］ある実施態様において、コアブロックに存在する第１の帯電可能種、基またはモノマー単位は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が負に帯電した種、基またはモノマー単位である。特定の実施態様において、これらの第１の帯電可能種、基またはモノマー単位は、ほぼ中性のｐＨにおいて、Ｈ＋の喪失により陰イオン種に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、コアブロックに存在する第１の帯電可能種、基またはモノマー単位は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）において、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が中性であるかまたは帯電していない種、基またはモノマー単位である。
［００１９６］ある実施態様において、第１の帯電可能種または基は、非限定的な例示として、カルボン酸、無水物、スルホンアミド、スルホン酸、スルフィン酸、硫酸、リン酸、ホスフィン酸、硼酸、亜燐酸等である。同様に、一定の実施態様において、ここにおいて有用な第１の帯電可能なモノマー単位は、カルボン酸、無水物、スルホンアミド、スルホン酸、スルフィン酸、硫酸、リン酸、ホスフィン酸、硼酸、亜燐酸等を含むモノマー単位である。特定の実施態様において、ここに有用な第１の帯電可能なモノマー単位は、（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸である。
［００１９７］ある実施態様において、コアブロックに存在する第２の帯電可能種、基またはモノマー単位は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電した種、基またはモノマー単位である。特定の実施態様において、これらの第２の帯電可能種、基またはモノマー単位は、Ｈ＋の付加により、陽イオン種に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、コアブロックに存在する第２の帯電可能種、基またはモノマー単位は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）において、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電する種、基またはモノマー単位である。
［００１９８］特定の実施態様において、第２の帯電可能なモノマー単位はブレンステッド塩基である。一定の実施態様において、第２の帯電可能種または基はアミン（例えば非環状および環状アミンを含む）である。ある実施態様において、第２の帯電可能なモノマー単位は、アミンを含むモノマー単位であり、例えば、非限定的な例示として、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレートまたはＮ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリラートである。ある実施態様において、第２の帯電可能なモノマー単位は、窒素複素環、例えばイミダゾール、ピリジン、ピペリジン、ピリミジン等を含む。
［００１９９］一定の実施態様において、ここに記述される膜不安定化ブロックコポリマーのコアセグメント（例えばコアブロック）は、疎水性であり、１以上の種の帯電可能種を含む。特定の実施態様において、帯電可能種は陽イオン種に帯電する。ここに記載されるミセル集合体は、帯電可能種を含み、各々の帯電可能種が帯電した状態または帯電していない状態でミセル集合体にそれぞれ個々に存在するミセル集合体を含む。更に、ここにおいて、ここに記載されるミセル集合体は、第１の帯電可能種の集団、第２の帯電可能種の集団および／または任意の付加的な帯電可能種の集団を含み、ここに記載されるミセル集合体は、第１、第２および任意の付加的な帯電可能種のそれぞれの集団は、完全に帯電した状態、部分的に帯電した状態または完全には帯電していない状態で、各々個々にミセル集合体に存在するミセル集合体を含む。
［００２００］ある実施態様において、陰イオン性帯電可能種は、保護された種（例えばエステル）としてまたは遊離酸として、選択された重合プロセスに任意に存在する任意の有機または無機酸残基である。ある実施態様において、陰イオン性帯電可能種は弱酸であり、例えば、ボロン酸、スルホンアミド、ホスホン酸、アルソン酸、ホスフィン酸、リン酸、カルボン酸、キサンテン、テトラゾールまたはそれらの誘導体（例えばエステル）であるが、これらに限定されない。特定の実施態様において、モノマー、例えば無水マレイン酸(Scott M. Henry, Mohamed E. H. El-Sayed, Christopher M. Pirie, Allan S. Hoffman, and Patrick S. Stayton pH-Responsive Poly(styrene-alt-maleic anhydride) Alkylamide Copolymers for Intracellular Drug Delivery. Biomacromolecules 2006, 7, 2407-2414)は、無水マレイン酸モノマー単位の重合後加水分解により、第１の帯電可能種の導入に使用される。特定の実施態様において、正常な生理的ｐＨにおいて陰イオン性である帯電可能種は、カルボン酸、例えば、２−プロピルアクリル酸または、より正確には、それに由来する構成単位、２−プロピルプロピオン酸、−ＣＨ２Ｃ（（ＣＨ２）２ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）（ＰＡＡ）である。
［００２０１］ある実施態様において、帯電可能種は陽イオン性である。一定の実施態様において、帯電可能種が生理的ｐＨにおいて陽イオン性である。特定の実施態様において、生理的ｐＨにおいて陽イオン性である種は、窒素種、例えば、アンモニウム、−ＮＲＲ’Ｒ’’、グアニジニウム（ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ）（カノニカル形を含む−ＮＲＣ（＝ＮＲ’Ｈ）＋ＮＲ’’Ｒ’’’）であり、ここにおいて、Ｒ基は独立して水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであるか、または同一のまたは隣接した窒素原子に結合した２つのＲ基は、さらに、互いにつながって複素環種（例えばピロール、イミダゾール、ピリミジンまたはインドール、但しこれらに限定されない）を形成してもよい。
［００２０２］ある実施態様において、帯電可能種は両性イオンのモノマー単位に存在する（すなわち、ここにおいて、陰イオン性および陽イオン性の帯電可能種は同一のモノマー単位に存在する）。
［００２０３］一定の実施態様において、コアブロックは少なくとも１つの非帯電可能なモノマー単位、基または種を含む。ある実施態様において、非帯電可能なモノマー単位は疎水性であるか、または疎水性の基または種を含む。一定の実施態様において、疎水性基は、約１以上；約２以上；約３以上；約４以上；約５以上等のπ値を有する。特定の実施態様において、非帯電可能なモノマー単は、非限定的な例示として、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−エタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−メタクリレートまたは（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−アクリラートである。
［００２０４］ある実施態様において、ブロックコポリマーは複数の疎水性種を含む。ある実施態様において、ブロックコポリマーは疎水性のモノマー単位を含む。一定の実施態様において、疎水性モノマー単位は、ビニル置換された芳香族化合物または複素環式芳香族化合物である。さらに特定の実施態様において、疎水性モノマーはアルキル（アルキル）アクリラートである。特定の実施態様において、疎水性モノマーはスチレン誘導体である。
［００２０５］ここに提供されるある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックは、約２，０００ダルトンから約２５０，０００ダルトン；２，０００のダルトンから約１００，０００ダルトン；約５，０００ダルトンから約１００，０００ダルトン；約５，０００ダルトンから約５０，０００ダルトン；または約１０，０００ダルトンから約５０，０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有する。
［シェルブロック］
［００２０６］ある実施態様において、ここに記載される膜不安定化ポリマーのシェルブロックは親水性である。ある実施態様において、ここに記載される膜不安定化ポリマーのシェルブロックは、ほぼ生理的なｐＨ（例えばｐＨ７．４）において親水性であり、帯電していない。ある実施態様において、ここに記載される膜不安定化ポリマーのシェルブロックは、ほぼ生理的なｐＨ（例えばｐＨ７．４）において親水性であり、帯電している。ある実施態様において、膜不安定化ポリマーのシェルブロックは、少なくとも１つの親水性の（例えば、帯電していない、陽イオン性の、陰イオン性のまたは両性イオン性の）種、基またはモノマー単位を含む。特定の実施態様において、膜不安定化ポリマーのシェルブロックは、少なくとも１つの帯電可能な種、基またはモノマー単位を含む。特定の実施態様において、帯電可能な種、基またはモノマー単位は、陽イオン種、基またはモノマーに帯電可能であるか、帯電している。その他の特定の実施態様において、帯電可能な種、基またはモノマー単位は、陰イオン性の種、基またはモノマー単位に帯電可能であるか、帯電しているである。特定の実施態様において、帯電可能な種、基またはモノマー単位は、両性イオン性の種、基またはモノマーに帯電しているか、帯電可能である。そのようなシェルブロックは、全ての帯電可能種、基またはモノマー単位が帯電していないか、その一部または全部が帯電している種、基および／またはモノマー単位を含むと解釈される。
［００２０７］ある実施態様において、膜不安定化ポリマーのシェルブロックは温度非依存的である。
［００２０８］特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において帯電していない。特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックもまた、ほぼエンドソームのｐＨにおいて帯電していない。
［００２０９］特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨ（例えば、約７．４のｐＨ）でポリカチオン性である。特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはまた、ほぼエンドソームのｐＨにおいてポリカチオン性である。
［００２１０］特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）においてポリアニオン性である。さらに、特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、ほぼエンドソームのｐＨにおいてポリアニオン性である。
［００２１１］特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において両性イオン性である。特定の実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはまた、ほぼエンドソームのｐＨにおいて両性イオン性である。
［００２１２］ある実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはホモポリマーブロックである。一定の実施態様において、ホモポリマーシェルブロックは陽イオン性帯電可能モノマー単位を含み、陽イオン性帯電可能モノマー単位の一部は陽イオン性であり、陽イオン性帯電可能モノマー単位のその他は帯電していない。さらなるまたは代替となる実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはヘテロポリマーである。特定の実施態様において、ヘテロポリマーシェルブロックは陽イオン性帯電可能モノマー単位および非帯電可能なモノマー単位を含む。一定の実施態様において、ホモポリマーシェルブロックは陰イオン性帯電可能モノマー単位を含み、陰イオン性帯電可能モノマー単位の一部は陰イオン性であり、陰イオン性帯電可能モノマー単位のその他は帯電していない。さらなるまたは代替となる実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはヘテロポリマーである。特定の実施態様において、ヘテロポリマーシェルブロックは陰イオン性帯電可能モノマー単位および帯電していないモノマー単位を含む。帯電していないモノマー単位は、例えば、ポリオキシル化オレフィン（例えばＰＥＧＭＡ）の残基、ヒドロキシ−アルキルオレフィン（例えばＨＰＭＡ）の残基、チオール−アルキルオレフィンの残基等を含む。
［００２１３］ある実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックに存在する帯電可能種、基またはモノマー単位は、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電した種、基またはモノマー単位である。１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックにおけるこれらの帯電可能種、基またはモノマー単位は、Ｈ＋の付加により、陽イオン種に帯電する。さらなるまたは代替となる実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックにおける帯電可能種、基またはモノマー単位は、わずかに酸性のｐＨ（例えば、約６．５以下；約６．２以下；約６以下；約５．９以下；約５．８以下のｐＨ；またはほぼエンドソームのｐＨ）において、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％または少なくとも９５％が正に帯電した種、基またはモノマー単位である。
［００２１４］ある実施態様において、陰イオン性帯電可能種は、選択された重合プロセスにおいて、保護された種（例えばエステル）としてまたは遊離酸として任意に存在する任意の有機または無機酸残基である。ある実施態様において、陰イオン性帯電可能種は、弱酸であり例えば次の群であるが、これらに限定されない：ボロン酸、スルホンアミド、ホスホン酸、アルソン酸、ホスフィン酸、リン酸、カルボン酸、キサンテン、テトラゾールまたはそれらの誘導体（例えばエステル）。特定の実施態様において、モノマー、例えば無水マレイン酸(Scott M. Henry, Mohamed E. H. El-Sayed, Christopher M. Pirie, Allan S. Hoffman, and Patrick S. Stayton pH-Responsive Poly(styrene-alt-maleic anhydride) Alkylamide Copolymers for Intracellular Drug Delivery. Biomacromolecules 2006, 7, 2407-2414)は、無水マレイン酸モノマー単位の重合後加水分解による第１の帯電可能種の導入に使用される。ある実施態様において、正常な生理的ｐＨにおいて陰イオン性である帯電可能種は、カルボン酸であり、例えば、２−プロピルアクリル酸、またはより正確にはそれに由来する構成単位、２−プロピルプロピオン酸、−ＣＨ２Ｃ（（ＣＨ２）２ＣＨ３）（ＣＯＯＨ）（ＰＡＡ）であるがこれらに限定されない。
［００２１５］ある実施態様において、シェルブロックは生理的ｐＨ（例えば循環するヒト血漿のｐＨ）またはその付近のｐＨにおいて、陽イオン性である。ある実施態様において、シェルブロックはポリカチオンを含む。ある実施態様において、シェルブロックは、ｘの陰イオンを含むポリアニオンである治療薬（例えば、ｓｉＲＮＡといったポリヌクレオチド）に結合され、ポリカチオン性シェルブロックは、約０．６ｘ、約０．７ｘ、約０．８ｘ、約０．９ｘ、約１．０ｘ、約１．１ｘまたはそれ以上の陽イオンを含む。特定の実施態様において、治療薬（例えば、ｓｉＲＮＡといったポリヌクレオチド）は、ｘの陰イオンを含むポリアニオン性であり、ポリカチオン性シェルブロックは約０．７ｘまたはそれ以上の陽イオンを含む。
［００２１６］ある実施態様において、帯電可能種は陽イオン性である。一定の実施態様において、帯電可能種が生理的ｐＨにおいて陽イオン性である。特定の実施態様において、生理的ｐＨにおいて陽イオン性である種は窒素種であり、例えばアンモニウム、−ＮＲＲ’Ｒ’’、グアニジニウム（カノニカル形を含む−ＮＲＣ（＝ＮＲ’Ｈ）＋ＮＲ’’Ｒ’’’）であり、ここにおいてＲ基は独立に、水素、アルキル、シクロアルキルまたはアリールであり、または同一の隣接した窒素原子に結合する２つのＲ基は、互いにつながって、複素環の種（例えばピロール、イミダゾールまたはインドール、但しこれらに限定されない）を形成してもよい。ある実施態様において、シェルブロックは、核酸結合ポリアミド、インターカレーター、または二重鎖もしくは三重鎖形成オリゴヌクレオチドである。特定の例において、シェルブロックは、任意に、ブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）のα−末端ブロックまたはω−末端ブロックである。同様に、コアブロックは、任意にブロックコポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）のα−末端ブロックまたはω−末端ブロックである。
［００２１７］ある実施態様において、帯電可能種は両性イオンのモノマー単位に存在する（すなわち、ここにおいて、陰イオン性および陽イオン性の帯電可能種は同一のモノマー単位に存在する）。
［００２１８］特定の実施態様において、１以上の膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックの帯電可能モノマー単位はブレンステッド塩基である。一定の実施態様において、シェルブロックの帯電可能種または基はアミン（例えば非環状または環状アミンを含む）である。ある実施態様において、シェルブロックの帯電可能モノマー単位は、アミンを含む単量体単位、例えば、非限定的な例示として、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレートまたはＮ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリラートである。ある実施態様において、シェルブロックの帯電可能モノマー単位は、窒素複素環式化合物（例えばイミダゾールまたはピリジン）を含むモノマー単位である。
［００２１９］ここに提供されるある実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、約１，０００ダルトンから約２００，０００ダルトン；１，０００のダルトンから約１００，０００ダルトン；約３，０００ダルトンから約１００，０００ダルトン；約５，０００ダルトンから約５０，０００ダルトン；約５，０００ダルトンから約２５，０００ダルトン；または約５，０００ダルトンから約２０，０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有する。
［００２２０］特定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、ほぼ中性のｐＨ（例えば約７．４のｐＨ）において、帯電しておらず、親水性である。一定の実施態様において、親水性のシェルブロックは、帯電可能基を含まず、または実質的に含まない。ある実施態様において、帯電していない親水性シェルブロックは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）等であるか、それらを含む。
［００２２１］一定の実施態様において、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは官能化する基（例えば可溶性にする基）を含む。特定の実施態様において、官能化する基はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）基である。一定の実施態様において、シェルブロックは、約１，０００のから約３０，０００の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の基、鎖またはブロックを含む。ある実施態様において、ＰＥＧはシェルブロック鎖の一部である（例えば取り込まれている）。一定の実施態様において、ＰＥＧは、重合の際、シェルブロック鎖に取り込まれる。ある実施態様において、１以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはＰＥＧである。一定の実施態様において、ポリカチオン性シェルブロックを有する第１の膜不安定化ブロックコポリマー、およびＰＥＧシェルブロックを有する第２の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体が提供される。一定の実施態様において、シェルブロックの１以上のモノマー単位は、ＰＥＧ基で置換または官能化される。ある実施態様において、ＰＥＧは、ここに提供されるミセル集合体に存在する、ブロックコポリマー末端基に、または１以上のペンダント修飾可能基に結合する。ある実施態様において、ＰＥＧ残基は、ここに提供されるミセル集合体のポリマー（例えばブロックコポリマー）の親水性セグメントまたはブロック（例えばシェルブロック）内の修飾可能な基に結合する。一定の実施態様において、ＰＥＧ残基を含むモノマーはコポリマー化され、ここに記載されるミセル集合体を形成するポリマーの親水性の部分を形成する。
［遮蔽親水性セグメント／ブロック］
［００２２２］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は１以上の遮蔽剤（ｓｈｉｅｌｄｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を含む。ある実施態様において、ポリヌクレオチドキャリアーブロック／セグメントは、ＰＥＧ置換モノマー単位を含む（例えば、ＰＥＧは側鎖であり、ポリヌクレオチドキャリアーブロックの骨格を含まない）。ある例において、ここに記載されるミセル集合体にて利用される１以上のポリマー（例えば、ブロックコポリマー）は、約１，０００から約３０，０００の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖またはブロックを含む。ある実施態様において、ＰＥＧは、ここに提供されるミセル集合体のポリマーに存在するポリマー末端基または１以上のペンダントの修飾可能基に結合される。ある実施態様において、ＰＥＧ残基は、ここに提供されるミセル集合体のポリマー（例えばブロックコポリマー）の親水性セグメントまたはブロック（例えばシェルブロック）内における修飾可能な基に結合される。一定の実施態様において、２−２０のエチレンオキシドユニットのＰＥＧ残基を含むモノマーはコポリマー化され、ここに提供されるミセル集合体を形成するポリマーの親水性の部分が形成される。
［００２２３］ある例において、遮蔽剤は、血漿における酵素の消化に対する治療薬（例えば、ポリヌクレオチドまたはペプチド等）の安定性を増強する。ある例において、遮蔽剤は、ここに記載されるミセル集合体（例えば、ポリヌクレオチドが結合したブロックコポリマー）の毒性を低下させる。ある実施態様において、遮蔽剤は中性の親水性モノマー残基を含む。ある例において、遮蔽ポリマーは、ポリマーの末端基を介して膜不安定化ブロックコポリマーに共有結合でつながれる。ある実施態様において、遮蔽剤は、ポリマーの１以上のモノマー残基に付着された共有結合でつながれたペンダント成分である。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体における複数のモノマー残基は、官能基を介してポリエチレングリコールオリゴマーまたはポリマーに共有結合した、ペンダント遮蔽種（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）オリゴマー（例えば２０以下の繰り返しユニットを有するもの）またはポリマー（例えば２０を超える繰り返しユニットを有するもの））を含む。ある例において、ブロックコポリマーは、コポリマーの膜不安定化ブロックのアルファ末端またはオメガ末端に共有結合したポリエチレングリコール（ＰＥＧ）オリゴマーまたはポリマーを含む。
［００２２４］一定の実施態様において、ポリヌクレオチドキャリアーブロック／セグメントは、ポリヌクレオチドキャリアーブロック／セグメントに対して電荷（例えば陽イオン性電荷）を少なくとも部分的に遮蔽するのに役立つモノマー単位を含む。特定の実施態様において、遮蔽は、少なくとも部分的にポリヌクレオチドキャリアーブロック／セグメントを含むモノマー単位にペンダント成分から少なくとも部分的に発生する。そのような遮蔽は、任意に、このセグメントにおける過度の電荷に由来する細胞毒性を低下させる。
［治療薬］
［００２２５］一定の実施態様において、少なくとも１つの研究試薬、少なくとも１つの診断薬、少なくとも１つの治療薬またはそれらの組み合わせを含むミセル集合体が提供される。ある実施態様において、そのような治療薬は、ミセル集合体のシェルに、ミセル集合体のコアに、ミセル集合体の表面にまたはそれらの組み合わせに存在する。
［００２２６］様々な実施態様において、研究試薬、診断薬および／または治療薬は、任意の適切な様式で、ミセル集合体またはその膜不安定化ブロックコポリマーに付着される。特定の実施態様において、付着は、共有結合、非共有結合相互作用、静的相互作用、疎水性相互作用等またはそれらの組み合わせによって達成される。ある実施態様において、研究試薬、診断薬および／または治療薬は、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックにつなげられる。一定の実施態様において、研究試薬、診断薬または治療薬は、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックを形成する。ある実施態様において、研究試薬、診断薬または治療薬は、ミセル集合体のシェルに存在する。
［００２２７］ある実施態様において、ミセル集合体のシェルに第１の治療薬をおよびミセル集合体のコアに第２の治療薬を含むミセル集合体が提供される。特定の実施態様において、第１の治療薬はポリヌクレオチドである。および、第２の治療薬は疎水性薬剤である。一定の実施態様において、ミセル集合体のコアに疎水性薬剤（例えば小分子疎水性薬剤）を含むミセル集合体が提供される。
［００２２８］一定の実施態様において、少なくとも１−５、５−２５０、５−１０００、２５０−１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０または少なくとも５０の治療薬を含むミセル集合体が提供される。ある実施態様において、ここに記載される複数のミセル集合体を含む組成物であって、ここにおいて、そのミセル集合体が平均で少なくとも１−５、５−２５０、５−１０００、２５０−１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０または少なくとも５０の治療薬を含む組成物が提供される。
［００２２９］ある実施態様において、治療薬、診断薬等は、非限定的な例示として、少なくとも１つのヌクレオチド（例えばポリヌクレオチド）、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸（例えばペプチド）から選択される。特定の実施態様において、治療薬は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、遺伝子発現修飾因子、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアプタマーである。その他の特定の実施態様において、治療薬はａｉＲＮＡである(Asymmetric RNA duplexes mediate RNA interference in mammalian cells. Xiangao Sun, Harry A Rogoff , Chiang J Li Nature Biotechnology 26, 1379 - 1382 (2008))。一定の実施態様において、治療薬は、タンパク質、ペプチド、ドミナントネガティブタンパク質、酵素、抗体または抗体断片である。ある実施態様において、治療薬は、炭水化物、または約５００ダルトンを超える分子量を有する小分子である。
［００２３０］一定の実施態様において、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーは治療薬に付着されている。ある実施態様において、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーは第１の治療薬に付着されており、ここにおいて、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーは第２の治療薬に付着されている。一定の実施態様において、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーは第１の治療薬に付着されており、ここにおいて、１以上の付加的なポリマーは第２の治療薬に付着されている。
［００２３１］ある実施態様において、ミセル集合体のシェルおよび／またはシェルブロックの１以上の膜不安定化ブロックコポリマーは、少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸を含む。一定の実施態様において、ミセル集合体のシェルおよび／または１以上の膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックは、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、遺伝子発現モジュレーター、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、アプタマー、タンパク質性治療薬、タンパク質、ペプチド、酵素、ホルモン、抗体、抗体断片、炭水化物、約５００ダルトンを超える分子量を有する小分子またはそれらの組み合わせを含む。
［００２３２］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体はポリヌクレオチドを含み、ここにおいて、ポリヌクレオチドは哺乳類発現ベクターである。別の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、ヒトにおける内因性遺伝子配列と組み換えを生じ且つそれを修正するように設計されたポリヌクレオチドを含む。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体にて提供されるポリヌクレオチドは遺伝子発現モジュレーターである。
［００２３３］哺乳類発現ベクターは相補的なＤＮＡ塩基配列（「ｃＤＮＡ」またはミニ遺伝子）を含み、当該配列はプロモーター領域に機能的に連結されており、プロモーターによってｃＤＮＡの発現が促進される。特定の例において、哺乳類発現ベクターは、さらにｃＤＮＡの３’末端にポリアデニル化シグナルを含む。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼ分子により認識されるヌクレオチドセグメントであり、ＲＮＡ合成（すなわち転写）を開始させるが、その他の転写調節のための要素、例えばエンハンサーをさらに含んでもよい。さらに、哺乳類発現ベクターにおいて連結した遺伝子の発現の仲介のために、任意の数の転写調節配列を使用してもよい。プロモーターは、レトロウイルスのプロモーター、その他のウイルスのプロモーター、例えばＨＳＶまたはＣＭＶに由来するものおよび内因性細胞遺伝子からのプロモーターを含むが、これらに限定されない。さらに、哺乳類発現ベクターは、典型的に、細菌におけるプラスミドとしての増殖を可能にするＥ．コリ由来の複製起点を有する。
［００２３４］特定の例において、培養においてまたはインビボで哺乳類細胞に哺乳類発現ベクターを導入できることが望ましい。ある実施態様において、発現ベクターは、ここに記載されるミセル集合体を使用して、哺乳類細胞へトランスフェクトされる。
［００２３５］ここに記載されるように、ここに記載されるミセル集合は、細胞へのまたはそれを必要とする個体へのポリヌクレオチドの送達のために使用される。一定の実施態様において、ミセル集合体のポリカチオン性ブロック（例えば、ここに記載された膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロック）は、哺乳類発現ベクターＤＮＡに結合し、ＤＮＡとミセル集合体との複合体を形成する。特定の例において、ポリカチオンは哺乳類発現ベクターＤＮＡに結合し、それと複合体を形成する。ある実施態様において、ポリヌクレオチド複合体を含むミセル集合体は中性に帯電する（例えば、ミセル集合体のシェルまたはミセル集合体のポリマーのシェルブロックおよびポリヌクレオチドは、実質的に中性に帯電する）。ポリヌクレオチドの長さに依存して、ポリカチオン性ブロックの長さは、ポリヌクレオチドの電荷の中和を提供するために任意に調節される。ある例において、電荷の中和は、調合物への陽イオンおよび／またはポリカチオンの付加によって達成される。ある実施態様において、ポリマーおよびポリヌクレオチド（例えば２００＋マー）を含むミセル集合体は、次に適切な緩衝液にて必要に応じて希釈し、培養物における細胞に直接添加される。生じる細胞におけるトランスフェクトされた遺伝子またはｃＤＮＡの発現は、哺乳類発現ベクターに、指標となる遺伝子、例えばルシフェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼまたはＧＦＰを作動させる発現カセットを含めることで容易に測定できる。これらの遺伝子は容易に利用可能であり、リポーターアッセイが記述されている。
［００２３６］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は遺伝子治療に使用される。遺伝子治療による疾病および疾患の治療は、一般に細胞への新規の遺伝子情報の移転を含む。「遺伝子治療ベクター」は、任意に哺乳類発現ベクターに存在する、送達すべき新規の遺伝物質を含む。ミセル集合体の使用は、遺伝子組み換え、遺伝子発現の阻害、遺伝子の修正または遺伝子の増強のためのＤＮＡ塩基配列の送達、またはその他のある所望の効果（例えば免疫反応の調節）を有する遺伝子の導入を含む。遺伝子発現の阻害は、任意の適切な様式、非限定的な例示として、ｓｈＲＮＡまたはその他のＲＮＡｉ剤を発現する細胞における遺伝子カセットの発現によって実行される。
［００２３７］ある実施態様において、ポリカチオン性シェルブロックを有するミセル集合体は、遺伝子治療ベクターと混合して、それらをミセル集合体と結合させる。適切な賦形剤（下記参照）におけるミセル集合体−遺伝子治療ベクター複合体は、次に、静脈内、関節内（ｉｎｔｒａ−ａｒｃｔｉｃｕｌａｒ）、鞘内、頭蓋内、吸入、皮下または眼内を含むがこれらに限定されない経路によって生きた対象に投与される 。
［００２３８］特定の実施態様において、ここに提供されるミセル集合体は少なくとも１つのポリヌクレオチド（例えば、オリゴヌクレオチド）を含む。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、それを必要とする個体へのポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）の送達に役立つ。特定の実施態様において、少なくとも２、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも３０、少なくとも４０、少なくとも５０、少なくとも１００のポリヌクレオチドを含むミセル集合体が提供される。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、２−５０ポリヌクレオチド、５−４０ポリヌクレオチド、５−３０ポリヌクレオチド、５−２５ポリヌクレオチド、２０−４０ポリヌクレオチド等を含む。一定の実施態様において、ポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチド遺伝子発現モジュレーターである。さらなる実施態様において、ポリヌクレオチドはオリゴヌクレオチドノックダウン剤である。特定の実施態様において、ポリヌクレオチドはＲＮＡｉ剤、ダイサー基質またはｓｉＲＮＡである。一定の実施態様において、ミセル集合体は、コア、シェルおよび１以上のポリヌクレオチドを含むナノ粒子（例えばミセル）であり、ここにおいて、ポリヌクレオチドはミセル集合体のコアに存在しない。特定の実施態様において、ポリヌクレオチドは、ミセル集合体のシェルに組み込まれる（例えば、ミセル集合体のシェルの一部に存在し、および／またはその一部分を形成する）。ある実施態様において、１以上のポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、ミセル集合体のポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー、または非膜不安定化希釈剤／キャリアーポリマー）のシェルブロックに付着される。様々な実施態様において、付着は、１以上の共有結合、１以上の非共有結合性相互作用またはそれらの組合せによって達成される。ある実施態様において、ｓｉＲＮＡは、膜不安定化ブロックコポリマー（例えばコアブロック）の疎水性ブロックに共有結合で付着される。特定の実施態様において、ｓｉＲＮＡは、ブロックコポリマーの疎水性ブロック（例えばコアブロック）に共有結合で添付され、ミセル集合体のシェルの少なくとも一部を形成する。より特定の実施態様において、ｓｉＲＮＡはブロックコポリマーの親水性ブロック（例えばシェルブロック）である。その他の実施態様において、ｓｉＲＮＡは、ブロックコポリマーの親水性ブロックにまたは任意のポリマーブロック（例えばスペーサーブロック）に付着される。
［００２３９］ある実施態様において、１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、任意の適切な様式、例えば非共有結合性会合によって、ここに提供されるブロックコポリマーに付着される。（ｉ）ポリマーおよび／またはここに提供されるポリマーの集合体（例えば複数のポリマーによって形成されたミセル）と（ｉｉ）１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチド）との間の非共有結合性会合は、静電相互作用（陽イオン性基を有するポリマーと陰イオン性基を有する治療薬との間の静電相互作用を含む）、疎水性相互作用、親和性相互作用またはそれらの組合せを含むが、これらに限定されない任意の適切な様式にて達成される。一定の実施態様において、１以上の治療薬および／またはミセル集合体（例えばミセル）のポリマーは、互いに親和性を有する１以上の治療薬および／またはポリマーの余裕がある化学的成分、例えばアリールボロン酸−サリチルヒドロキサム酸、ロイシンジッパーまたはその他のペプチドモチーフ、ミセルおよび治療薬における正電荷と負電荷との間のイオン性相互作用、またはその他のタイプの非共有結合性化学親和力リンケージによって改変される。さらに、ある実施態様において、二本鎖ポリヌクレオチドは、ここに記載されるポリマーまたはミセル集合体（例えばミセル）と会合する（例えばこれらと複合体を形成する）。ある実施態様において、ポリマーまたはミセル集合体（例えばミセル）は、ミセル集合体（例えばミセル）の成分（例えばポリマー）に付着される（例えば共有結合される）核酸マイナーグルーブ（ｍｉｎｏｒ ｇｒｏｏｖｅ）結合剤または挿入剤と会合する（例えば複合体を形成する）。
［００２４０］ある実施態様において、治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド）は少なくとも１つの負電荷（例えば、負にを帯電した骨格を含む）を含み、ミセル集合体（例えばミセル）の陽イオン性シェルおよび／またはミセル集合体のブロックコポリマーの陽イオン性シェルブロックと会合する。特定の実施態様において、陽イオン性のシェルまたはシェルブロックは、少なくとも部分的に、ミセル集合体に付着したまたはそこに存在する１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチド）に存在する負電荷を中和する。一定の実施態様において、１以上の治療薬（例えば１以上のオリゴヌクレオチド、１以上のｓｉＲＮＡまたはそれらの組合せ）は、ミセル集合体（例えばミセル）のポリカチオン性シェルブロックとの会合（例えば複合体）を形成する。ある実施態様において、ミセル集合体（例えばミセル）および治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）の間の会合（例えば複合体）は、ミセル集合体（例えばミセル）を形成するブロックコポリマーと治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）との間の任意の所望の電荷比、例えば１：１から１６：１の間の比を形成する。特定の実施態様において、ミセルとｓｉＲＮＡとの間の複合体は２：１、４：１または８：１の電荷比にて形成する。言いかえれば、ある実施態様において、ミセル集合体のシェルに存在する陽イオン性電荷の数と治療薬に存在する陰イオン性電荷の数との比は、任意の所望の値、例えば、約１：１から約１６：１、約２：１から約８：１、約４：１から約１２：１、約２：１、約４：１または約８：１である。ある実施態様において、ｓｉＲＮＡは、ミセル集合体を形成するブロックコポリマーのポリカチオン性ブロックによって電荷中和される。例えば、ある特定の実施態様において、生理学的なｐＨにおいて４０の負電荷を含む２０塩基対のポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、約７．４のｐＫａを有するポリＤＭＡＥＭＡシェルブロック（８０モノマー単位の長さ、ＭＷ＝１１，６８０）を含むミセル集合体（例えばミセル）と会合する（例えば複合体を形成する）。このｐＨにおいて、ポリＤＭＡＥＭＡは４０の負電荷を含み、これにより、実質的に正味中性の電荷であるポリヌクレオチド−シェルブロック会合（例えば複合体）をもたらす。特定の例において、多数の過度の正電荷の回避は、インビトロおよびインビボの毒性の低下を助ける。ある実施態様において、治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）は、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）の正に帯電したシェルと自発的に会合する。
［００２４１］ある実施態様において、治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはペプチド）は、任意の適切な化学的連結技術によって、ミセル集合体（例えばミセル）におよび／またはミセル集合体（例えばミセル）の１以上のポリマーに化学的に連結する。治療薬は、ポリマーの末端にまたはポリマーのペンダント側鎖に任意に連結する。ある実施態様において、ＲＮＡｉ剤を含むミセル集合体（例えばミセル）は、ＲＮＡｉ剤と複数のポリマー（例えばブロックコポリマー）を含む予め形成されたミセル集合体（例えばミセル）との連結により形成される。その他の実施態様において、ＲＮＡｉ剤を含むミセル集合体（例えばミセル）は、ＲＮＡｉ剤とポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー）との連結、その後の、任意の適切な様式、例えば、得られた連結物をＲＮＡｉ剤を含むミセル集合体（例えばミセル）に自己組織化させることによる、ミセル集合体（例えばミセル）の形成により形成される。様々な実施態様において、そのようなミセル集合体は、任意に、ＲＮＡｉ剤に結合したものと類似の、同一のまたは異なる非連結ポリマー（例えば、ブロックコポリマー）をさらに含む。ここに記載されるミセル集合体のポリマーと治療薬との間の共有結合は、任意に、分裂可能でないか、または分裂可能である。一定の実施態様において、１以上のＲＮＡｉ剤（例えばダイサー基質）の前駆体は、ミセル集合体（例えばミセル）またはミセル集合体（例えば非分裂可能結合によるミセル）の重合体のユニットに付着される。ある実施態様において、１以上のＲＮＡｉ剤は分裂可能結合によって付着される。一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体において使用される分裂可能結合は、非限定的な例示として、ジスルフィド結合（例えば、細胞質の還元環境下で分離するジスルフィド結合）を含む。ある実施態様において、（その成分を含む）ミセル集合体と治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡまたはペプチド）との間の共有結合性の会合は、アミン−カルボキシルリンカー、アミン−スルフヒドリルリンカー、アミン−炭水化物リンカー、アミン−ヒドロキシルリンカー、アミン−アミンリンカー、カルボキシル−スルフヒドリルリンカー、カルボキシル−炭水化物リンカー、カルボキシル−ヒドロキシルリンカー、カルボキシル−カルボキシルリンカー、スルフヒドリル−炭水化物リンカー、スルフヒドリル−ヒドロキシルリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルリンカー、炭水化物−ヒドロキシルリンカー、炭水化物−炭水化物リンカー、ヒドロキシル−ヒドロキシルリンカーを含むがこれらに限定されない任意の適切な化学的連結方法を介して達成される。ある実施態様において、連結はまた、ヒドラゾンおよびアセタールのリンケージを含むがこれらに限定されない、ｐＨ感受性結合およびリンカーにより実行される。その他の適切な連結方法が任意に同様に利用され、例えば広く様々な結合化学が利用可能である(例えば、Bioconjugation, Aslam and Dent, Eds, Macmillan, 1998およびその中の章を参照)。
［００２４２］特定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体の手段によって送達される薬剤は診断薬である。ある実施態様において、診断薬は、画像診断薬剤、例えば哺乳類の血管系のイメージングに役立つ薬剤であり、それには、ポジトロン放出断層撮影（ＰＥＴ）薬剤、コンピュータ断層撮影装置（ＣＴ）薬剤、核磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）薬剤、核磁気画像化（ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｉｍａｇｉｎｇ）薬剤（ＮＭＩ）、螢光透視薬剤および超音波造影剤を含むがこれらに限定されない。そのような診断薬は、そのような元素のアイソトープ、例えば１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ等を含むヨウ素（Ｉ）、バリウム（Ｂａ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、９９Ｔｃを含むテクネチウム（Ｔｃ）、３１Ｐを含むリン（Ｐ）、鉄（Ｆｅ）、マンガン（Ｍｎ）、タリウム（Ｔｌ）、５１Ｃｒを含むクロミウム（Ｃｒ）、１４Ｃを含む炭素（Ｃ）等、蛍光性ラベルされた化合物、またはそれらの複合体、キレート、付加物および連結物を含む。その他の実施態様において、診断薬は、細胞にて発現した場合に容易に検知できるタンパク質をコードするマーカー遺伝子（β−ガラクトシダーゼ、緑色蛍光タンパク質、ルシフェラーゼ等を含むが、これらに限定されない）およびラベルされた核酸プローブ（例えば放射性同位体標識されたプローブまたは蛍光性標識されたプローブ）である。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体に対する診断法薬剤の共有結合性連結は、様々な連結プロセスによって達成される。その他の実施態様において、診断薬は、ミセル集合体を形成するブロックコポリマーに組み込まれたキレート化残基（例えばカルボン酸残基）と複合体形成することで、ここに記載されるミセル集合体と非共有結合的に会合する。ある実施態様において、放射性同位体で識別されたモノマー（例えば１４Ｃラベルされたモノマー）は、ミセル集合体のポリマー骨格（例えばミセルのシェルブロックまたはコアブロック）に取り込まれる。ある実施態様において、診断薬と会合したミセル集合体はターゲットとする成分を含む。
［００２４３］ある実施態様において、治療薬はタンパク質性薬剤である。ここに記載されるミセル集合体へのタンパク質性治療薬（例えばポリペプチド）の連結は、様々な連結プロセスにしたがって、（例えば、ミセル集合体のシェルにおける、またはシェルブロックのモノマー単位における）ミセル集合体に存在する１以上の官能基とタンパク質性治療薬（例えばポリペプチド）の１以上の官能基とに関する化学反応により達成される。通常含まれているポリペプチド官能基は、アミノ、ヒドロキシ、チオールまたはカルボキシル基を含むがこれらに限られない。そのような基は、末端基として存在できるか、またはアミノ酸側鎖上で存在できる。ある実施態様において、タンパク質性治療薬は、部位特異的な連結の形成のための特別な官能基、例えば「クリック」化学を介する連結のためのアジド基を含む非天然アミノ酸を含むように設計される。
［００２４４］一定の実施態様において、１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチド）とポリマー（例えばブロックコポリマー）との連結（ここにおいて、ポリマーはユニマー（ｕｎｉｍｅｒ）であるか、または集合したここに提供されるミセル集合体に存在する）は、以下の２つのステップを含むプロセスによって調製される：（１）例えば１−エチル−３，３−ジメチルアミノプロピルカルボジイミド（ＥＤＡＣ）、イミダゾール、Ｎ−ヒドロスクシンイミド（ＮＨＳ）およびジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ｐ−ニトロフェニルクロロホルメート、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）およびＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジル炭酸塩（ＤＳＣ）を含むがこれらに限定されない任意の適切な活性化試薬を用いて、オリゴヌクレオチドの修飾可能な末端基（例えば、５’−水酸基または３’−水酸基）を活性化すること；および（２）オリゴヌクレオチドの末端へブロックコポリマーを共有結合させること。ある実施態様において、オリゴヌクレオチドの５’−または３’−末端の修飾可能な基は、ブロックコポリマーとの連結に先立って、その他の官能基によって置換される。例えば、水酸基（−−ＯＨ）は、スルフヒドリル基（−−ＳＨ）、カルボキシル基（−−ＣＯＯＨ）またはアミン基（−−ＮＨ２）を含むリンカーで任意に置換される。
［００２４５］また別の実施態様において、１以上の塩基（例えば５−アミノアルキルピリミジン）が導入された官能基を含むオリゴヌクレオチドが、任意の適切な処置により活性化剤または反応性二官能価リンカーを使用してポリマー（例えばブロックコポリマー）に連結される（ここにおいてポリマーはユニマーであるか、またはここに提供されるミセル集合体に存在する）。そのような様々な活性化剤および二官能価リンカーは、Ｓｉｇｍａ、Ｐｉｅｒｃｅ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎといったサプライヤーから市販されている。
［００２４６］ある実施態様において、オリゴヌクレオチドまたは複数のオリゴヌクレオチドを含むミセル集合体（例えばミセル）は、自発的な自己組織化によって形成される。ミセル集合体の自発的な自己組織化は、ある実施態様において、単一のポットにて達成される。例えば、ある実施態様において、有機溶媒（例えばエタノール）にここに記載されたポリマー（例えばブロックコポリマー）を含む溶液を水性溶媒（例えば水またはＰＢＳ）で希釈することで自発的に構築されるミセル集合体（例えばミセル）は、１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）と組み合わせられ、当該ミセル集合体は、それにより自発的に形成されるポリマーおよび１以上の治療薬を含む。その他の実施態様において、自発的な自己組織化は、（１）関心ある１以上の治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）とここに記載されるポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマー、非膜不安定化ブロックコポリマーまたはモノブロックポリマー）とを接触させて、ポリマー−治療薬結合物を形成すること；および（２）ポリマー−治療薬結合物をここに記載されるミセル集合体に自己組織化させるのに適した条件にポリマー−治療薬結合物をさらすこと。ある実施態様において、ポリマー−治療薬結合物の自己組織化を与えるステップは、ポリマー−治療薬結合物と付加的ポリマー（例えば、非連結ブロックコポリマーもしくはモノブロックポリマー、希釈ポリマー等またはそれらの組合せ）との接触をさらに含む。
［００２４７］ある実施態様において、ここに記載される任意のミセル集合体は、治療薬に付着していない付加的なポリマーをさらに含む。ある実施態様において、付加的なポリマーは、希釈ポリマーまたはターゲッティング成分キャリアーポリマーである。一定の実施態様において、任意のここに提供されるミセル集合体は、少なくとも１つの第２の治療薬（例えば第２の治療薬）に付着されている付加的なポリマーをさらに含む。一定の実施態様において、少なくとも１つの第２の治療薬（例えば第２の治療薬）は、少なくとも１つの治療薬（例えば第１の治療薬）とは異なる。ある実施態様において、ミセル集合体に存在する全ポリマーのコア部分（例えばコアブロック）は類似するかまたは同一である。一定の実施態様において、ミセル集合体における１以上の異なるポリマーは、類似のまたは同一のコア部分（例えばコアブロック）を含むが、異なる非コア部分（例えばシェルブロック）を含む。
［治療］
［００２４８］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、高い血漿レベルまたはコレステロール、アポリポ蛋白質ｂ、および／またはＬＤＬコレステロールに関連および／または起因する障害、例えば高コレステロール血症のリスクがあるかまたは患う対象の治療に役立つ。一定の実施態様において、処理は治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド剤）を含むミセル集合体を提供することを含み、ここにおいて治療薬は、（例えば分裂により）遺伝子またはそのような条件を促進する遺伝子産物をサイレンスする。ある実施態様において、治療薬（例えばオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡｉ剤）は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬＲ）レベルおよび機能の制御の原因となるプロタンパク質転換酵素サブチリシン／ケキシンタイプ９（ＰＣＳＫ９）遺伝子をサイレンスし、これにより、そのような治療薬を含むミセル集合体は、望まれないＰＣＳＫ９発現によって特徴づけられる障害、例えば、高い血漿レベルまたはコレステロール、アポリポ蛋白質ｂおよび／またはＬＤＬコレステロールに関連するおよび／または起因する障害、例えば高コレステロール血症を患うまたはそのリスクのある対象を治療するために使用される。ある実施態様において、ミセル集合体は、ＰＣＳＫ９を発現する細胞にＰＣＳＫ９サイレンシングポリヌクレオチド剤（例えばｓｉＲＮＡ）を送達する。ある実施態様において、細胞は肝細胞である。
［００２４９］ある実施態様において、ここに提供されるミセル集合体（例えばミセル）は、望まれない細胞増殖（例えば有害または無害の細胞増殖）のリスクがある、またはそれを患う対象の治療に有用である。治療は、治療薬（例えば、オリゴヌクレオチド剤）を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて治療薬は（例えば分裂により）、望まれない細胞増殖を促進する遺伝子または遺伝子産物をサイレンスさせることができる；および、対象（例えばヒト対象）に治療的有効量のミセル集合体を投与することを含む。ある実施態様において、治療薬は、遺伝子と相同的であり、遺伝子を（例えば分裂により）サイレンスさせることができるポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチド）である。
［００２５０］一定の実施態様において、遺伝子は、成長因子または成長因子の受容体遺伝子、ホスファターゼ、キナーゼ、例えば、タンパク質チロシン、セリンまたはトレオニンキナーゼ遺伝子、Ｇタンパク質スーパーファミリー分子をコードする遺伝子または転写調節因子をコードする遺伝子であるが、これらに限定されない。ある例において、ミセル集合体は、肺、膵臓、肝臓、腎臓、卵巣、筋肉、皮膚、乳房、結腸、胃等を含むがこれらに限定されない特定の組織または臓器にて発現する遺伝子をサイレンスするポリヌクレオチドを含む。
［００２５１］ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、１以上の以下の遺伝子をサイレンスする：ＰＤＧＦベータ遺伝子、このため、望ましくないＰＤＧＦベータ発現によって特徴付けられる障害（例えば睾丸および肺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｅｒｂ−Ｂ遺伝子（例えばＥｒｂ−Ｂ−２またはＥｒｂ−Ｂ−３）、このため、望ましくないＥｒｂ−Ｂ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳房または肺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｓｒｃ遺伝子、このため、望ましくないＳｒｃ発現によって特徴付けられる障害（例えば結腸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＣＲＫ遺伝子、このため、望ましくないＣＲＫ発現によって特徴付けられる障害（例えば結腸癌および肺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＧＲＢ２遺伝子、このため、望ましくないＧＲＢ２発現によって特徴付けられる障害（例えば扁平上皮細胞カルシノーマ）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＲＡＳ遺伝子、このため、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴付けられる障害（例えば、膵臓癌、結腸癌および肺癌および慢性白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＭＥＫＫ遺伝子、このため、望ましくないＭＥＫＫ発現によって特徴付けられる障害（例えば扁平上皮癌、黒色腫または白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＪＮＫ遺伝子、このため、望ましくないＪＮＫ発現によって特徴付けられる障害（例えば膵臓癌または乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＲＡＦの遺伝子、このため、望ましくないＲＡＦ発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌または白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｅｒｋ１／２遺伝子、このため、望ましくないＥｒｋ１／２発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＰＣＮＡ（ｐ２１）遺伝子、このため、望ましくないＰＣＮＡ発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＭＹＢ遺伝子、このため、望ましくないＭＹＢ発現によって特徴付けられる障害（例えば結腸癌または慢性骨髄性白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ｃ−ＭＹＣ遺伝子、このため、望ましくないｃ−ＭＹＣ発現によって特徴付けられる障害（例えばバーキットリンパ腫または神経芽細胞腫）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＪＵＮ遺伝子、このため、望ましくないＪＵＮ発現によって特徴付けられる障害（例えば、卵巣癌、前立腺癌または乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＦＯＳ遺伝子、このため、望ましくないＦＯＳ発現によって特徴付けられる障害（例えば皮膚癌または前立腺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＢＣＬ−２遺伝子、このため、望ましくないＢＣＬ−２発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌または前立腺癌または、非ホジキンリンパ腫）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；サイクリンＤ遺伝子、このため、望ましくないサイクリンＤ発現によって特徴付けられる障害（例えば食道癌および結腸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＶＥＧＦ遺伝子、このため、望ましくないＶＥＧＦ発現によって特徴付けられる障害（例えば食道癌および結腸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＥＧＦＲ遺伝子、このため、望ましくないＥＧＦＲ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；サイクリンＡ遺伝子、このため、望ましくないサイクリンＡ発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌および子宮頸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；サイクリンＥ遺伝子、このため、望ましくないサイクリンＥ発現によって特徴付けられる障害（例えば肺癌および乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＷＮＴ−１遺伝子、このため、望ましくないＷＮＴ−１発現によって特徴付けられる障害（例えば基底細胞癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ベータ−カテニン遺伝子、このため、望ましくないベータ−カテニン発現によって特徴付けられる障害（例えば腺癌または肝細胞癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ｃ−ＭＥＴ遺伝子、このため、望ましくないｃ−ＭＥＴ発現によって特徴付けられる障害（例えば肝細胞癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＰＫＣ遺伝子、このため、望ましくないＰＫＣ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＮＦＫＢ遺伝子、このため、望ましくないＮＦＫＢ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＳＴＡＴ３遺伝子、このため、望ましくないＳＴＡＴ３発現によって特徴付けられる障害（例えば前立腺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；サルビビン（ｓｕｒｖｉｖｉｎ）遺伝子、このため、望ましくないサルビビン発現によって特徴付けられる障害（例えば頚部癌または膵臓癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｈｅｒ２／Ｎｅｕ遺伝子、このため、望ましくないＨｅｒ２／Ｎｅｕ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；トポイソメラーゼＩ遺伝子、このため、望ましくないトポイソメラーゼＩ発現によって特徴付けられる障害（例えば卵巣癌および結腸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；トポイソメラーゼＩＩアルファ遺伝子、このため、望ましくないトポイソメラーゼＩＩ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳房癌および結腸癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる。
［００２５２］その他の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、以下の遺伝子の１つにおける変異をサイレンスする：ｐ７３遺伝子、このため、望ましくないｐ７３発現によって特徴付けられる障害（例えば結腸直腸の腺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）遺伝子、このため、望ましくないｐ２１（ＷＡＦ１／ＣＩＰ１）発現によって特徴付けられる障害（例えば肝臓癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ｐ２７（ＫＩＰ１）遺伝子、このため、望ましくないｐ２７（ＫＩＰ１）発現によって特徴付けられる障害（例えば肝臓癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＰＰＭ１Ｄ遺伝子、このため、望ましくないＰＰＭ１Ｄ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＲＡＳ遺伝子、このため、望ましくないＲＡＳ発現によって特徴付けられる障害（例えば乳癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；カベオリンＩ遺伝子、このため、望ましくないカベオリンＩ発現によって特徴付けられる障害（例えば食道扁平上皮癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＭＩＢ Ｉ遺伝子、このため、望ましくないＭＩＢ Ｉ発現によって特徴付けられる障害（例えばオスの乳癌（ＭＢＣ））を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＭＴＡＩ遺伝子、このため、望ましくないＭＴＡＩ発現によって特徴付けられる障害（例えば卵巣の癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｍ６８遺伝子、このため、望ましくないＭ６８発現によって特徴付けられる障害（例えば食道、胃、結腸および直腸のヒト腺癌）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる。
［００２５３］ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、癌抑制遺伝子における変異をサイレンスし、および、したがって、化学療法と組み合わせてアポトーシス活性を促進する方法として使用することができる。ある実施態様において、癌抑制遺伝子は、１以上の以下の癌抑制遺伝子から選択される：ｐ５３癌抑制遺伝子、ｐ５３ファミリーメンバーＤＮ−ｐ６３、ｐＲｂ癌抑制遺伝子、ＡＰＣ１癌抑制遺伝子、ＢＲＣＡ１癌抑制遺伝子、ＰＴＥＮ癌抑制遺伝子。
［００２５４］ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、以下の融合遺伝子の１つをサイレンスする：ｍＬＬ融合遺伝子（例えばｍＬＬ−ＡＦ９）、このため、望ましくないＭＬＬ融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば急性白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子、このため、望ましくないＢＣＲ／ＡＢＬ融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば急性および慢性の白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子、このため、望ましくないＴＥＬ／ＡＭＬ１融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば幼年期急性白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子、このため、望ましくないＥＷＳ／ＦＬＩ１融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えばユーイング肉腫）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子、このため、望ましくないＴＬＳ／ＦＵＳ１融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば粘液様脂肪肉腫）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子、このため、望ましくないＰＡＸ３／ＦＫＨＲ融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば障害粘液様脂肪肉腫）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；ＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子、このため、望ましくないＡＭＬ１／ＥＴＯ融合遺伝子発現によって特徴付けられる障害（例えば急性白血病）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる。
［００２５５］ある側面において、ここにおいて、ミセル集合体は、血管形成阻害により利益を得る可能性がある疾病または障害（例えば癌または網膜の変性）のリスクがあるかまたはそれを患う対象（例えばヒト）を治療するための治療薬を提供する。治療は、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて、前記オリゴヌクレオチド剤は、血管形成を介在する遺伝子（例えば、ＶＥＧＦ−Ｒ１、ＶＥＧＦ−Ｒ２またはこれらの受容体の経路のシグナルタンパク質をコードする遺伝子）と相同的であり、および／またはこのような遺伝子を例えば分裂によりサイレンスすることができる；およびオリゴヌクレオチド剤を含む治療的有効量の前記ミセル集合体を対象（例えばヒト対象）に投与することを含む。
［００２５６］ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、以下の遺伝子の１つをサイレンスする：アルファｖ−インテグリン遺伝子、このため、望ましくないアルファＶ−インテグリンによって特徴付けられる障害（例えば、脳腫瘍または上皮に由来する腫瘍）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；Ｆｌｔ−１受容体遺伝子、このため、望ましくないＦｌｔ−１受容体によって特徴付けられる障害（例えば癌および慢性関節リウマチ）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる；チューブリン遺伝子、このため、望ましくないチューブリンによって特徴付けられる障害（例えば癌および網膜新生血管）を患うまたはそのリスクがある対象の治療に使用できる。
［００２５７］ある側面において、ここに提供されるオリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体は、ウイルスに感染した対象またはウイルス感染に関連する障害または疾病のリスクがあるもしくはそれを患う対象を治療する方法に関する。方法は、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて前記オリゴヌクレオチド剤は、ウイルス遺伝子またはウイルスの機能（例えば侵入または増殖）を介在する細胞内遺伝子と相同的であり、および／またはそのような遺伝子を、例えば分裂によりサイレンスする；および治療的有効量の前記オリゴヌクレオチド剤を対象（例えばヒト対象）に投与することを含む。
［００２５８］ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体は、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）に感染した対象またはＨＰＶが介在する障害（例えば子宮頸癌）のリスクがあるかまたはそれに患う対象の治療に有用である。
［００２５９］ある実施態様において、ミセル集合体は、ＨＰＶ遺伝子の発現をサイレンスするオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、ＨＰＶ遺伝子はＥ２、Ｅ６またはＥ７の基から選択される。
［００２６０］別の実施態様において、ＨＰＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６１］ある実施態様において、ミセル集合体は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に感染した患者またはＨＩＶが介在する障害（例えば後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ））のリスクがあるもしくはそれを患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、ＨＩＶ遺伝子の発現が低下させられる。その他の実施態様において、ＨＩＶ遺伝子はＣＣＲ５、ＧａｇまたはＲｅｖである。ある実施態様において、ＨＩＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。ある実施態様において、遺伝子はＣＤ４またはＴｓｇ１０１である。
［００２６２］ある実施態様において、ミセル集合体は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）に感染した患者またはＨＢＶが介在する障害（例えば肝硬変および肝細胞癌（ｈｅｐｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ））のリスクがあるかもしくはそれを患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。１つの実施態様において、ＨＢＶ遺伝子の発現が低下させられる。その他の実施態様において、ターゲットとされたＨＢＶ遺伝子は、ＨＢＶコア・タンパク質のテール領域の基の１つ、プレ−クレジアス（ｐｒｅ−ｃｒｅｇｉｏｕｓ）（ｐｒｅ−ｃ）領域、またはクレジアス（ｃｒｅｇｉｏｕｓ）（ｃ領域をコードする。その他の実施態様において、ターゲットとされたＨＢＶ−ＲＮＡ配列は、ポリ（Ａ）尾部で構成される。ある実施態様において、ＨＢＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６３］ある実施態様において、ミセル集合体は、以下から選択されたウイルスに感染した患者または当該ウイルスが介在する障害のリスクがあるかもしくはそれを患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）；Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）；肝炎Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＧまたはＨを含む肝炎ウイルス株の群のいずれか；呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）；疱疹サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）；疱疹エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）；カポージ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）；ＪＣウイルス（ＪＣＶ）；ミクソウイルス（例えばインフルエンザを引き起こすウイルス）、ライノウイルス（例えば風邪を引き起こすウイルス）、またはコロナウイルス（例えば風邪を引き起こすウイルス）；セントルイス型脳炎フラビウイルス；ダニ媒介脳炎フラビウイルス；マーレーバレー脳炎フラビウイルス；デング熱フラビウイルス；シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）；脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）；はしかウイルス（ＭＶ）；水痘ゾスターウイルス（ＶＺＶ）；アデノウイルス（例えば呼吸器感染症を引き起こすウイルス）；ポリオウイルス；またはポックスウイルス（天然痘を引き起こすポックスウイルス）。ある実施態様において、これらのウイルスの複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６４］ある実施態様において、ミセル集合体は、単純性疱疹ウィルス（ＨＳＶ）に感染した患者またはＨＳＶが介在する障害、例えば性器ヘルペス症および口辺ヘルペス並びに例えば主として免疫無防備の患者における生命を脅かすまたは視力を損なう疾病のリスクがあるかもしくはそれを患う患者を治療するのに有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、ＨＳＶ遺伝子の発現が低下させられる。その他の実施態様において、ターゲットされたＨＳＶ遺伝子は、ＤＮＡポリメラーゼまたはヘリカーゼ−プライマーゼをコードする。ある実施態様において、ＨＳＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６５］ある実施態様において、ミセル集合体は、西ナイルウイルスに感染した患者または西ナイルウイルスが介在する障害のリスクがあるかもしくはそれを患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、西ナイルウイルス遺伝子の発現が低下させられる。その他の好ましい実施態様において、西ナイルウイルス遺伝子は、Ｅ、ＮＳ３またはＮＳ５を含む群から選択される。ある実施態様において、西ナイルウイルス複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６６］ある実施態様において、ミセル集合体は、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）に感染した患者またはこのウイルスが関連する疾病もしくは障害（例えば白血病または脊髄障害）を患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、ＨＴＬＶ遺伝子の発現が低下させられる。ある実施態様において、ＨＴＬＶ１遺伝子は税転写活性化因子である。ある実施態様において、ＨＴＬＶ複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６７］ある側面において、ミセル集合体は、病原体（例えば細菌の、アメーバの、寄生性のまたは菌の病原体）に感染した対象の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。治療の方法は、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて前記オリゴヌクレオチドは、病原体遺伝子または病原体の増殖に関連する遺伝子と相同性であり、および／またはそのような遺伝子を例えば分裂によりサイレンスすることができる；および対象（例えばヒト対象）に治療的有効量の前記オリゴヌクレオチド剤を投与することを含む。標的遺伝子は、病原体の増殖、細胞壁合成、タンパク質合成、転写、エネルギー代謝、例えばクレブズ回路、または毒素生産に関する遺伝子から選択することができる。
［００２６８］したがって、ある実施態様において、ミセル集合体は、マラリアを引き起こすマラリア原虫に感染した患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、マラリア原虫遺伝子の発現が低下させられる。その他の実施態様において、遺伝子は頂端側細胞膜抗原１（ＡＭＡ１）である。ある実施態様において、マラリア原虫複製に必要なヒト遺伝子の発現が低下させられる。
［００２６９］ある実施態様において、ミセル集合体は、ミコバクテリウム・ウルセランス、ミコバクテリウム・ツーベキュロス、ミコバクテリウム・レプラ、スタフィロコッカス・オーレウス、ストレプトコッカス・ニューモニアエ、ストレプトコッカス・ピオゲネス、クラミジア・ニューモニエもしくはマイコプラスマ・ニューモニエに感染した患者またはこれらの病原体のいずれかが関連する疾病もしくは障害を患う患者の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。ある実施態様において、これらの細菌の複製に必要な細菌の遺伝子および／またはヒト遺伝子の発現は低下する。
［００２７０］ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体によって治療される疾病は、全身性であってよく、または特定の組織（例えば肺、皮膚、肝臓、乳房、腎臓、膵臓、ＣＮＳ等）に存在してもよい。一定の側面において、オリゴヌクレオチドは、代謝病または障害（例えば糖尿病、肥満等）を介在するまたはそれに関連する遺伝子をサイレンスする。一定の実施態様において、肺の疾病または障害（例えば、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性繊維症または肺癌）を介在するまたはそれに関連する遺伝子をサイレンスする。ここにおいてある側面において、ミセル集合体は、望まれない免疫反応に特徴づけられる疾病または障害（例えば炎症性の疾病もしくは障害または自己免疫疾患もしくは障害）のリスクがあるかもしくはそれを患う対象（例えばヒト）を治療する方法に有用であり、および／またはそのような方法に関連するオリゴヌクレオチド剤を含む。方法は、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて、前記オリゴヌクレオチド剤は、望まれない免疫反応を介在する遺伝子と相同的であり、および／またはそのような遺伝子を例えば分裂によりサイレンスできる；および対象（例えばヒト対象）に前記オリゴヌクレオチド剤を投与することを含む。ある実施態様において、疾病または障害は、虚血または再潅流傷害であり、例えば急性心筋梗塞不安定狭心症、心肺バイパス、外科的介入、例えば血管形成、例えば経皮経管冠形成、移植された臓器または組織に対する反応、例えば心臓または血管組織の移植に関連する虚血または再潅流傷害；または血栓溶解である。その他の実施態様において、疾病または障害は再狭窄であり、例えば外科的介入、例えば血管形成、例えば経皮経管冠形成に関連した再狭窄である。その他の実施態様において、疾病または障害は、炎症性腸疾患、例えばクローン病、潰瘍性大腸炎である。ある実施態様において、疾病または障害は、感染症または損傷に関連した炎症である。その他の実施態様において、疾病または障害は、喘息、アレルギー、狼瘡、多発性硬化症、糖尿病、例えば、２型糖尿病、関節炎、例えばリューマチ性関節炎または乾癬性関節炎である。一定の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤はインテグリンまたはそのコ−リガンド（例えばＶＬＡ４、ＶＣＡＭ、ＩＣＡＭ）をサイレンスする。その他の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤はセレクチンまたはそのコ−リガンド（例えばＰ−セレクチン、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）、Ｉ−セレクチン、Ｐ−セレクチン糖タンパク質−１）（ＰＳＧＬ−１））をサイレンスする。一定の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、補体系の成分（例えばＣ３、Ｃ５、Ｃ３ａＲ、Ｃ５ａＲ、Ｃ３転換酵素およびＣ５転換酵素）をサイレンスする。ある実施態様において、オリゴヌクレオチドは、ケモカインまたはその受容体（例えばＴＮＦＩ、ＴＮＦＪ、ＩＬ−１Ｉ、ＩＬ−１Ｊ、ＩＬ−２、ＩＬ−２Ｒ、ＩＬ−４、ＩＬ−４Ｒ、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦＲＩ、ＴＮＦＲＩＩ、ＩｇＥ、ＳＣＹＡ１１およびＣＣＲ３）をサイレンスする。その他の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、ＧＣＳＦ、Ｇｒｏ１、Ｇｒｏ２、Ｇｒｏ３、ＰＦ４、ＭＩＧ、プロ−血小板基本タンパク質（Ｐｒｏ−Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｂａｓｉｃ Ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＰＰＢＰ）、ＭＩＰ−１Ｉ、ＭＩＰ−１Ｊ、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＣＭＢＫＲ１、ＣＭＢＫＲ２、ＣＭＢＫＲ３、ＣＭＢＫＲ５、ＡＩＦ−１またはＩ−３０９をサイレンスする。
［００２７１］ある側面において、ミセル集合体は、神経学的な疾病または障害のリスクがあるかまたはそれを患う対象（例えばヒト）の治療に有用なオリゴヌクレオチド剤を含む。方法は、オリゴヌクレオチド剤を含むミセル集合体を提供すること、ここにおいて、前記オリゴヌクレオチドは、神経学的な疾病または障害を介在する遺伝子と相同的でありおよび／またはそのような遺伝子を例えば分裂によりサイレンスすることができる；および対象（例えばヒト）に治療的有効量の前記オリゴヌクレオチド剤を投与することを含む。ある実施態様において、疾病または障害はアルツハイマー病またはパーキンソン疾病である。一定の実施態様において、オリゴヌクレオチド剤はアミロイド−ファミリー遺伝子、例えばＡＰＰ；プレセニリン遺伝子、例えばＰＳＥＮ１、ＰＳＥＮ２、Ｉ−ｓｙｎｕｃｌｅｉｎをサイレンスする。その他の実施態様において疾病または障害は、神経変性トリヌクレオチド繰り返し障害、例えば、ハンティングトン病、歯状核赤核淡蒼球ルイ体萎縮症または脊髄小脳失調、例えばＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＳＣＡ３（Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ病）、ＳＣＡ７またはＳＣＡ８である。ある実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、ＨＤ、ＤＲＰＬＡ、ＳＣＡ１、ＳＣＡ２、ＭＪＤ１、ＣＡＣＮＬ１Ａ４、ＳＣＡ７またはＳＣＡ８をサイレンスする。
［００２７２］一定の側面において、ここに記載されるミセル集合体は、１を超える遺伝子を分裂させるまたはサイレンスすることができるオリゴヌクレオチド剤を含む。これらの実施態様において、オリゴヌクレオチド剤は、それが、１を超える遺伝子において見つかる配列、例えばこれらの遺伝子間で保存された配列に対して十分な相同性を有するように選択される。したがって、ある実施態様において、そのような配列に有効にターゲットとするオリゴヌクレオチド剤は、遺伝子の全体コレクションをサイレンスする。
［００２７３］ある側面において、ここに記載されるミセル集合体は、２以上の種のオリゴヌクレオチド剤は含み、ここにおいて、オリゴヌクレオチド剤は、同一の疾病または異なる疾病の異なる遺伝子をサイレンスする。
［００２７４］ここに記載される任意の薬剤もまた、任意の適切な様式、例えばここに記載された任意の様式にて、ミセル集合体またはポリマー（例えば膜不安定化ブロックコポリマーまたは付加的なポリマー）に付着する。
［ターゲッティング成分］
［００２７５］一定の実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、少なくとも１つのターゲッティング成分（例えば、特定の細胞または細胞の種をターゲットとする成分）を含む。ある実施態様において、ターゲッティング成分は、ミセル集合体のコア内に存在し、ミセル集合体のシェル内に存在し、ミセル集合体の表面に存在し、膜不安定化ブロックコポリマーのコアブロックに付着し、膜不安定化ブロックコポリマーのシェルブロックに付着し、膜不安定化剤のシェルブロックであり、ミセル集合体内の非膜不安定化ポリマー上に存在し、ミセル集合体内の治療薬への付着しており、またはその他の状態である。
［００２７６］特定の実例において、ここに記載されるミセル集合体は、個々の特異的な標的細胞への治療薬の送達に有用である。特定の例において、ミセル集合体の細胞取り込みの効率は、ミセル集合体内へのまたはその表面におけるターゲッティング成分の取り込みによって増強される。「ターゲッティング成分」（「ターゲッティング剤」と互換的に使用される）は、細胞（例えば選択した細胞）の表面を認識する任意の親和性薬剤である。ある実施態様において、ターゲッティング成分は、細胞表面抗原を認識するか、または標的細胞の表面上の受容体に結合する。適切なターゲッティング成分は、非限定的な例示として、抗体、抗体様分子、またはペプチド、例えばインテグリン−結合ペプチド、例えばＲＧＤ含有ペプチド、または小分子、例えばビタミン、例えば、葉酸、糖、例えばラクトースおよびガラクトース、またはその他の小分子を含む。細胞表面抗原細胞表面分子例えば、細胞表面上のタンパク質、糖、脂質またはその他の抗原を含む。特定の実施態様において、細胞表面抗原はインターナリゼーションを行う。ここに記載されるミセル集合体（例えばミセル）のターゲッティング成分によってターゲットとされる細胞表面抗原の例は、トランスフェリン受容体タイプ１および２、ＥＧＦ受容体、ＨＥＲ２／Ｎｅｕ、ＶＥＧＦ受容体、インテグリン、ＮＧＦ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ４３、ＣＤ３８、ＣＤ５６、ＣＤ６９およびアシアロ糖蛋白受容体を含むがこれらに限られない。
［００２７７］種々の実施態様において、ターゲッティング成分は、ミセル集合体のポリマー（例えば、ブロックコポリマー）のいずれかの末端またはモノマー単位の側鎖に結合するか、またはポリマーブロックに組み込まれる。ポリマーへのターゲッティング成分の結合は、いずれかの適切な様式で達成され、例えば、限定するものではないが、アミン−カルボキシルリンカー、アミン−スルフヒドリルリンカー、アミン−炭水化物リンカー、アミン−ヒドロキシルリンカー、アミン−アミンリンカー、カルボキシル−スルフヒドリルリンカー、カルボキシル−炭水化物リンカー、カルボキシル−ヒドロキシルリンカー、カルボキシル−カルボキシルリンカー、スルフヒドリル−炭水化物リンカー、スルフヒドリル−ヒドロキシルリンカー、スルフヒドリル−スルフヒドリルリンカー、炭水化物−ヒドロキシルリンカー、炭水化物−炭水化物リンカー、およびヒドロキシル−ヒドロキシルリンカーが含まれる多数の結合化学アプローチのいずれか１つにより達成される。特定の実施態様において、「クリック」化学は、ここで提供されるミセル集合体を形成するブロックコポリマーにターゲッティングリガンドを結合させるために使用される（「クリック」反応の例については、Wu, P.; Fokin, V. V. Catalytic Azide-Alkyne Cycloaddition: Reactivity and Applications. Aldrichim. Acta 2007, 40, 7-17を参照されたい）。多くの種類の結合化学が、任意に利用される（例えば、Bioconjugation, Aslam and Dent, Eds, Macmillan, 1998およびその中のチャプターを参照されたい）。いくつかの実施態様において、ターゲッティングリガンドはモノマーに結合し、結果として得られる化合物は、ここに記載されるミセル集合体において利用されるポリマー（例えば、ブロックコポリマー）の重合合成において使用される。いくつかの実施態様において、ターゲッティング成分は、混合したミセル集合体において、第１のブロックコポリマーのブロックまたは第２のブロックコポリマーのブロックに結合する。いくつかの実施態様において、ターゲッティングリガンドは、ミセル集合体に結合したｓｉＲＮＡのセンスまたはアンチセンス鎖に結合する。ある実施態様において、ターゲッティング剤は、センスまたはアンチセンス鎖の５’または３’末端に結合する。
［００２７８］特定の実施態様において、ここで提供されるミセル集合体を形成するブロックコポリマーは、生体適合性である。ここで使用される場合、「生体適合性である」とは、それ自体またはそのインビボ分解産物により特徴付けられるポリマーの特性が、生組織に対して有害でないか、または少なくとも最小および／または修繕可能な程度に有害であり；および／または生組織における免疫反応を引き起こさないか、または免疫反応が少なくとも最小限および制御可能であることを意味する。塩に関しては、現在、カチオン性の種とアニオン性の種の両方が生体適合性であることが好ましい。ここで使用される場合、「生理学的に許容可能である」とは、「生体適合性である」と互換性である。いくつかの場合において、ここで使用されるミセル集合体およびポリマー（例えば、ブロックコポリマー）は、カチオン性の脂質と比較して低い毒性を示す。
［００２７９］ある例において、ここに記載されるミセル集合体にて利用される１以上のポリマー（例えば、ブロックコポリマー）は、約１，０００から約３０，０００の分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）鎖またはブロックを含む。ある実施態様において、ＰＥＧは、ポリマー末端基、またはここに提供されるミセル集合体のポリマーに存在する１以上のペンダント修飾可能基に結合される。ある実施態様において、ＰＥＧ残基は、ここに提供されるミセル集合体のポリマー（例えばブロックコポリマー）の親水性セグメントまたはブロック（例えばシェルブロック）内の修飾可能基に結合される。一定の実施態様において、２−２０のエチレンオキシドユニットのＰＥＧ残基を含むモノマーはコポリマー化し、ここに記載されるミセル集合体を形成するポリマーの親水性部分を形成する。
［細胞取り込み］
［００２８０］いくつかの実施態様において、治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）を含むミセル集合体は、エンドサイトーシスにより細胞に送達される。細胞内小胞とエンドソームは、本明細書全体にわたって互換性に使用される。細胞質への治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）の首尾のよい送達は、一般的に、エンドソームの逸脱のためのメカニズムを有する。ある場合において、ここで提供される治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）を含むミセル集合体は、エンドサイトーシスを受けるエンドソームコンパートメントにおけるより低いｐＨに対して感受性である。ある場合において、エンドサイトーシスは、ミセル集合体の陰イオン性帯電可能種（例えば、プロピルアクリル酸単位）の電化中和またはプロトン化をトリガーし、結果としてミセル集合体において構造的移行を生じる。ある場合において、この構造的移行は、エンドソームから細胞質への治療薬（例えば、オリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）の放出を媒介するより疎水性の膜不安定化形態を生じる。ｓｉＲＮＡを含むこのようなミセル集合体において、ｓｉＲＮＡの細胞質への送達は、そのｍＲＮＡノックダウン効果を生じさせる。他のタイプのオリゴヌクレオチドを含むこのようなミセル集合体において、細胞質への送達は、それらの望ましい作用を生じさせる。
［医薬組成物］
［００２８１］ここに提供されるミセル集合体（例えば、１以上の治療薬、例えば１以上のオリゴヌクレオチドに付着したもの）は、任意に組成物（例えば医薬的に許容可能な組成物）にて提供される。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、医薬組成物の形成のために、任意の適切な様式において（例えば安定剤、緩衝剤等とともに、またはそれらを含まずに）患者への投与することができる。ある実施態様において、ここに記載されるミセル集合体は、経口投与のための錠剤、カプセルまたはエリキシル剤、直腸投与のための坐薬、注射可能な投与のための無菌溶液、懸濁液、および任意のその他の適切な組成物として処方され、使用される。
［００２８２］ここに記載される少なくとも１つの治療薬を含むミセル集合体の薬学的に許容可能な製剤が提供される。これらの製剤は、上記の化合物の塩、例えば酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、酢酸およびベンゼンスルホン酸の塩を含む。薬理学的な組成物または製剤は、例えば細胞またはヒトを含む患者への投与（例えば全身的な投与）に適している形態の組成物または製剤を指す。適切な形態は、部分的に、用途または侵入の経路に（例えば、経口、経皮または注射）に依存する。したがって、ミセル集合体がポリヌクレオチドの送達を含みおよび当該送達である特定の実施態様において、製剤は、ミセル集合体、より具体的にはポリヌクレオチド（例えばオリゴヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ）の完全な状態および／または機能的な状態での標的細胞への到達を妨げない形態である。例えば、一定の実施態様において、血流に注入される薬理学的組成物は可溶性および／または分散性である。さらに、ここに記載される医薬組成物は好ましくは無毒である。ある実施態様において、ここにおいて、ここに記載されるミセル集合体は治療的利益のために投与され、治療薬（例えばｓｉＲＮＡといったポリヌクレオチド）を含むミセル集合体の治療的有効量が投与される。典型的な実施態様において、治療的有効量は、個体１ｋｇ当たり約１０ｍｇ以下のｓｉＲＮＡを供給するのに十分な量のミセル集合体を含む。
［００２８３］ある実施態様において、治療薬（例えばｓｉＲＮＡといったポリヌクレオチド）を含むミセル集合体を含む医薬組成物は、全身に投与される。ここに使用されるように、「全身的な投与」とは、インビボにおける、血流における薬剤の全身的な吸収または蓄積、それに続く全身にわたる分布を意味する。全身的な吸収をもたらす投与経路は、静脈内、皮下、腹腔内、吸入、経口、肺内および筋肉内を含むがこれらに限定されない。ある実施態様において、ミセル集合体組成物は局所的に投与される。
［００２８４］いくつかの実施態様において、組成物は、保存または投与のために調製され、薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤中における薬学的に有効な量のミセル集合体を含む治療薬を含む。いずれかの許容可能なキャリアまたは希釈剤は、任意にここで利用される。特定のキャリアおよび希釈剤は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., A.R. Gennaro Ed., 1985に記載されている。例えば、保存剤、安定化剤、色素およびフレーバー剤が任意に添加される。これらには、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルが含まれる。さらに、酸化防止剤および懸濁化剤が任意に使用される。ここで使用する場合、「薬学的に許容可能なキャリア」という用語は、無毒の、不活性な固体、半固体または液体の、充填剤、希釈剤、封入材料またはいずれかのタイプの製剤化補助剤を意味する。薬学的に許容可能なキャリアとして任意に使用される物質のいくつかの例は、ラクトース、グルコースおよびショ糖のような糖；コーンスターチおよびポテトスターチのようなデンプン；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびセルロースアセテートのようなセルロースおよびその誘導体；粉末トラガカントゴム；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤ワックスのような賦形剤；ピーナッツ油、綿実油のような油；ベニバナ油；ごま油；オリーブオイル；コーン油および大豆油；プロピレングリコールのようなグリコール；エチルオレエートおよびエチルラウレートのようなエステル；アガー；Ｔｗｅｅｎ８０のような界面活性剤；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウムのような緩衝剤；アルギン酸；発熱物質を含まない水；等張の生理食塩水；リンゲル溶液；エチルアルコール；およびリン酸緩衝溶液であり、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムのような他の無毒の適合性の滑沢剤、ならびに着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味料、フレーバー剤および芳香剤、保存剤および酸化防止剤も、配合する者の判断により組成物中に存在させてよい。いくつかの実施態様において、ここで提供される医薬組成物は、ヒトおよび／または動物に対して、経口的に、直腸に、非経口的に、槽内に、膣内に、鼻腔内に、腹腔内に、局所的に（粉末、クリーム、軟膏または液滴により）、皮下に、頬に、または経口もしくは経鼻のスプレーとして投与される。
［００２８５］種々の実施態様において、経口投与のための液体剤形には、薬学的に許容可能なエマルジョン、ミクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップおよびエリキシルが含まれる。活性成分（例えば、ここに提供されるミセル−オリゴヌクレオチド複合体）に加えて、液体剤形は、任意に、不活性な希釈剤もしくは賦形剤をさらに含み、その非限定的な例は、水もしくは他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、エチルカルボネート、エチルアセテート、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、落花生油、コーン油、胚芽油、オリーブオイル、ヒマシ油、およびごま油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、プロピレングリコールおよびソルビタン脂肪酸エステルのような乳化剤および可溶化剤、ならびにこれらの混合物である。不活性な希釈剤に加えて、経口組成物は、任意に、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、フレーバー剤、および芳香剤も含まれる。
［００２８６］いくつかの実施態様において、注射可能な製剤（例えば、無菌の注射用水または油性懸濁液）は、例えば、分散剤、湿潤剤および／または懸濁剤を用いて、いずれかの適切な方法に従って製剤化される。無菌の注射製剤は、任意に、無毒の非経口的に許容可能な希釈剤または溶媒（例えば、１，３−ブタンジオール）中の無菌の注射可能な溶液、懸濁液、またはエマルジョンである。任意に使用される許容可能な賦形剤および溶媒は、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張の塩化ナトリウム溶液である。さらに、無菌の不揮発性油が、溶媒または懸濁媒質として慣例的に使用される。この目的のために、合成モノグリセリドまたはジグリセリドを含むいずれかの無刺激の不揮発性油が任意に使用される。さらなる実施態様において、オレイン酸のような脂肪酸が、注射可能な製剤中に使用される。特定の実施態様において、ミセル集合体粒子は、１％（ｗ／ｖ）カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ８０を含むキャリア液中に懸濁される。
［００２８７］ある実施態様において、注射可能な製剤は、例えば細菌保持フィルターを通したろ過により、または、無菌固体組成物であって、任意に使用に先立って滅菌水またはその他の無菌注射用溶媒に溶解または分散させる形態の殺菌剤を受け入れることで殺菌される。
［００２８８］ある実施態様において、直腸または膣への投与のための組成物は、坐剤である。坐剤は、任意に、ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬と、外界温度では固体であるが体温では液体であるため、直腸または膣の腔で溶解し、ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬のミクロ粒子を放出するココアバター、ポリエチレングリコール、または坐剤ワックスのような適切な無刺激の賦形剤またはキャリアとを混合することにより調製される。ここに使用されるように、「ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬」とは、１以上の治療薬を含む１以上のここに提供されるミセル集合体と互換的に使用される。
［００２８９］経口投与のための適切な固体剤形には、限定するものではないが、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、および顆粒剤が含まれる。そのような固体剤形において、治療薬（例えばオリゴヌクレオチド）を含むミセル集合体は、少なくとも１のクエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムのような不活性且つ薬学的に許容可能な賦形剤もしくはキャリアおよび／またはａ）デンプン、ラクトース、ショ糖、グルコース、マンニトール、およびケイ酸のような充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、ショ糖、およびアラビアゴムのような結合剤、ｃ）グリセロールのような湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ポテトデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウムのような崩壊剤、ｅ）パラフィンのような溶液緩染剤、ｆ）４級アンモニウム化合物のような吸収促進剤、ｇ）例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレートのような湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土のような吸収剤、およびｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体のポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムのような滑沢剤、およびこれらの混合物と混合される。カプセル剤、錠剤、および丸剤の場合、製剤は、緩衝剤を含んでもよい。
［００２９０］同様のタイプの固体組成物は、任意に、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコール等のような賦形剤を使用する軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用されてもよい。
［００２９１］いくつかの実施態様において、錠剤、ドラジェ、カプセル剤、丸剤、および顆粒剤の固体製剤は、腸溶コーティングおよび他の適切なコーティングのようなコーティングおよび外殻を用いて調製される。ある実施態様において、それらは、好ましくは腸管のある部分において、任意に遅延性の態様で、活性成分のみを放出する組成物である。適切な包埋組成物の非限定的な例には、高分子物質およびワックスが含まれる。
［００２９２］同様のタイプの固体組成物は、任意に、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコール等のような賦形剤を使用する軟ゼラチンカプセルおよび硬ゼラチンカプセルにおける充填剤として使用されてもよい。
［００２９３］本発明の医薬組成物の局所投与または経皮投与のための剤形の非限定的な例には、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、スプレー、吸入薬、またはパッチが含まれる。いくつかの実施態様において、ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬は、無菌条件下で、薬学的に許容可能なキャリアおよび任意に、１以上の保存剤、１以上のバッファー、またはこれらの組み合わせ（例えば、必要な場合）と混合される。眼用製剤、点耳薬、および点眼薬も、本発明の範囲内であると考えられる。
［００２９４］ここで提供される軟膏、ペースト、クリーム、およびゲルは、ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬に加えて、動物性脂肪および植物性脂肪、油、ワックス、パラフィン、デンプン、トラガカントゴム、セルロース誘導体、ポリエチレングリコール、シリコン、ベントナイト、ケイ酸、タルク、および酸化亜鉛、またはこれらの混合物のような賦形剤を任意に含む。
［００２９５］粉末およびスプレーは、ここに提供されるミセル集合体を含む治療薬に加えて、ラクトース、タルク、ケイ酸、水酸化アルミニウム、ケイ酸カルシウム、およびポリアミド粉末、またはこれらの物質の混合物を任意に含む。いくつかの実施態様において、スプレーは、任意に、クロロフルオロ炭化水素のような慣習的な噴霧剤を含む。
［００２９６］経皮パッチは、化合物の体への制御された送達を提供する付加的な利点を有する。そのような製剤は、いずれかの適切な方法、例えば適切な媒質中にミクロ粒子またはナノ粒子を溶解または分散することにより作られる。吸収増強剤は、任意に、皮膚中への化合物の流入を増大させるために使用される。その速度は、速度制御膜を使用するか、またはポリマーマトリックスまたはゲル中にここに提供されるミセル集合体を含む治療薬を分散させることにより制御され得る。
［００２９７］本発明のいくつかの側面において、ミセル集合体は、通常賦形剤により達成されるいくつかの特性（例えば、機械的、熱的等）を提供するため、製剤中に必要とされるそのような賦形剤の量を減らすことができる。
［００２９８］いくつかの実施態様において、ここで提供されるミセル集合体は、治療薬を送達するための他の技術に対して優れた商業的実行可能性を有し、限定するものではないが、インビボ投与を繰り返すことによりキャリアの免疫原性が低下し；送達媒体の複数の要素を集めるために必要なステップがより少ないため、商品のコストを下げることができ；製造の再現性が、繰り返しバッチで製品を製造する能力により判断した場合、生物物理学的なアッセイ特性（例えば、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、ＤＬＳ、およびＴＥＭを含むが、これらに限定されない）において、バッチ間の変動が５％未満、１０％未満、または２０％未満である。
本明細書全体にわたって、種々の既知の頭文字および略語は、モノマーの重合に由来するモノマーまたはモノマー残基を表すために使用される。限定することなく、特に示さない限り；「ＢＭＡ」（または略式表示としての文字「Ｂ」）は、ブチルメタクリレートまたはそれに由来するモノマー残基を意味し；「ＤＭＡＥＭＡ」（または略式表示としての文字「Ｄ」）は、Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレートまたはそれに由来するモノマー残基を意味し；「Ｇａｌ」は、ガラクトースまたはガラクトース残基（任意に、ヒドロキシル保護部分、例えばアセチルを含む）、またはそのＰＥＧ化誘導体（以下に記載する）を意味し；ＨＰＭＡは、２−ヒドロキシプロピルメタクリレートまたはそれに由来するモノマー残基を意味し；「ＭＡＡ」は、メチルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を意味し；「ＭＡＡ（ＮＨＳ）」は、メタクリル酸のＮ−ヒドロキシル−スクシンイミドエステルまたはそれに由来するモノマー残基を意味し；「ＰＡＡ」（または略式表示としての文字「Ｐ」）は、２−プロピルアクリル酸またはそれに由来するモノマー残基を意味し；「ＰＥＧＭＡ」は、ＰＥＧ化メタクリルモノマー、ｒＣＨ３Ｏ（ＣＨ２Ｏ）７−８ＯＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ３）ＣＨ２またはそれらに由来するモノマー残基を意味する。それぞれの場合において、そのような名称のいずれかは、モノマー（全ての塩、もしくはそのイオン性アナログを含む）またはモノマーの重合に由来するモノマー残基（その全ての塩またはイオン性アナログを含む）を示し、特に示した形態は、当業者の背景により明白である。
例１：コポリマーの調製
［００２９９］以下の一般式で表されるジブロックポリマーおよびコポリマーを調製する：
［Ａ１ｘ−／−Ａ２ｙ］ｎ−［Ｂ１ｘ−／−Ｂ２ｙ−／−Ｂ３ｚ］１−５ｎ
式中、［Ａ１−Ａ２］は、モノマーＡ１およびＡ２の残基からなる第１のブロックコポリマーであり、
［Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３］は、モノマーＢ１、Ｂ２、Ｂ３の残基からなる第２のブロックコポリマーであり、
ｘ、ｙ、ｚは、ポリマーの組成を表すモル％モノマー残基であり；
ｎは、分子量である。
［００３００］代表的なジブロックコポリマー：
［ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
［ＰＥＧＭＡｗ］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
［ＰＥＧＭＡｗ−ＤＭＡＥＭＡ］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
［ＰＥＧＭＡｗ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
［ＤＭＡＥＭＡ−／−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
［ＨＰＭＡ−／−ＰＤＳＭ］−［Ｂ−／−Ｐ−／−Ｄ］
式中：
Ｂは、ブチルメタクリレートであり、
Ｐは、プロピルアクリル酸であり、
Ｄは、ＤＭＡＥＭＡ、ジメチルアミノエチルメタクリレートであり、
ＰＥＧＭＡは、ポリエチレングリコールメタクリレートであり、例えば、ｗ＝４〜５または７〜８のエチレンオキシド単位であり、
ＭＡＡ（ＮＨＳ）は、メチルアクリル酸−Ｎ−ヒドロキシコハク酸アミドであり、
ＨＰＭＡは、Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミドであり、
ＰＤＳＭは、ピリジルジスルフィドメタクリレートである。
［００３０１］これらのポリマーは、ポリマーまたはコポリマーの第１のブロックの組成が変化し、または化学的に処理されて、第１のブロックが中性であり（例えばＰＥＧＭＡ）、カチオン性であり（ＤＭＡＥＭＡ）、アニオン性であり（ＰＥＧＭＡ−ＮＨＳ、ここで、ＮＨＳは加水分解されて酸になる）、両性であり（ＤＭＡＥＭＡ−ＮＨＳ、ここで、ＮＨＳは加水分解されて酸になる）、または両性イオン性である（例えば、ポリ［２−メタクリロイルオキシ−２’トリメチルアンモニウムエチルホスフェート］）ポリマーが作られた構造を示す。さらに、［ＰＥＧＭＡ−ＰＤＳＭ］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーは、第１のブロック中にピリジルジスルフィド官能基を含み、チオール化ｓｉＲＮＡと反応して、ポリマー−ｓｉＲＮＡ結合体を形成する。
例１．１：ＲＡＦＴ重合を用いたブロックコポリマーの合成
Ａ．ＲＡＦＴ連鎖移動剤
［００３０２］以下に示すＲＡＦＴ重合において使用される連鎖移動剤（ＣＴＡ）である４−シアノ−４−（エチルスルファニルチオカルボニル）スルファニルペンタン酸（ＥＣＴ）は、Moad et al., Polymer, 2005, 46(19): 8458-68による方法により得た。簡単に言うと、エタンチオール（４．７２ｇ，７６ｍｍｏｌ）を、０℃で１０分間にわたって、ジエチルエーテル（１５０ｍｌ）中の水素化ナトリウム（油中６０％）（３．１５ｇ，７９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に加えた。その後、溶液を１０分間撹拌し、二硫化炭素（６．０ｇ，７９ｍｍｏｌ）を加えた。粗製のＳ−エチルトリチオカルボン酸ナトリウム（７．８５ｇ，０．０４９ｍｏｌ）をろ過により回収し、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）中に懸濁し、ヨウ素（６．３ｇ，０．０２５ｍｏｌ）と反応させた。１時間後、溶液をろ過し、チオ硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを用いて乾燥させた。粗製のビス（エチルスルファニルチオカルボニル）ジスルフィドを、ロータリーエバポレーションにより単離した。酢酸エチル（５０ｍＬ）中のビス−（エチルスルファニルチオカルボニル）ジスルフィド（１．３７ｇ，０．００５ｍｏｌ）および４，４’−アゾビス（４−シアノペンタン酸）（２．１０ｇ，０．００７５ｍｏｌ）の溶液を、還流で１８時間加熱した。溶液をロータリーエバポレーションにより蒸発させ、固定相としてシリカゲル、溶出液として５０：５０の酢酸エチルおよびヘキサンを使用して、カラムクロマトグラフィーにより粗製の４−シアノ−４（エチルスルファニルチオカルボニル）スルファニルペンタン酸（ＥＣＴ）を単離した。
Ｂ．ポリ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノエチルメタクリレート）マクロ連鎖移動剤（ポリＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡ）。
［００３０３］ＤＭＡＥＭＡのＲＡＦＴ重合は、ＤＭＦ中、３０℃において、窒素雰囲気下で１８時間、ラジカルイニシエーターとしてＥＣＴおよび２，２’−アゾビス（４−メトキシ−２．４−ジメチルバレロニトリル）（Ｖ−７０）（和光化学）を用いて行った。最初のモノマーとＣＴＡとの比（［ＣＴＡ］０／［Ｍ］０）は、１００％変換における理論的なＭｎが１０，０００（ｇ／ｍｏｌ）になるようにした。最初のＣＴＡとイニシエーターの比（［ＣＴＡ］０／［Ｉ］０）は１０：１とした。結果として得られるポリＤＭＡＥＭＡマクロ連鎖移動剤を、５０：５０ ｖ：ｖのジエチルエーテル／ペンタン中に沈殿させて単離した。得られるポリマーを、アセトンに再溶解し、続いてペンタン中に沈殿させ（×３）、真空中で一晩乾燥した。
Ｃ．ポリ（ＤＭＡＭＥＡ）マクロＣＴＡからのＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡのブロック共重合。
［００３０４］望ましい化学量論的量のＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解したポリ（ＤＭＡＥＭＡ）マクロＣＴＡに加えた（溶媒に対して２５ｗｔ％のモノマーおよびマクロＣＴＡ）。全ての重合のために、［Ｍ］０／［ＣＴＡ］０および［ＣＴＡ］０／［Ｉ］０をそれぞれ２５０：１および１０：１とした。Ｖ７０の添加後、窒素を用いて溶液を３０分間浄化し、３０℃で１８時間反応させた。結果として得られたジブロックコポリマーを、５０：５０ ｖ：ｖのジエチルエーテル／ペンタンへの沈殿により単離した。その後、沈殿したポリマーをアセトンに再溶解し、続いてペンタン（×３）に沈殿させ、真空中で一晩乾燥させた。ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）を使用して、ポリメチルメタクリレート標準に関して、ＤＭＦ中のポリ（ＤＭＡＥＭＡ）マクロＣＴＡおよびジブロックコポリマーサンプルの両方の分子量および多分散性（ＰＤＩ，Ｍｗ／Ｍｎ）を測定した（ＳＥＣ Ｔｏｓｏｈ ＴＳＫ−ＧＥＬ Ｒ−３０００およびＲ−４０００カラム（Ｔｏｓｏｈ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ， Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙｖｉｌｌｅ， ＰＡ）をＶｉｓｃｏｔｅｋ ＧＰＣｍａｘ ＶＥ２００１および屈折計ＶＥ３５８０（Ｖｉｓｃｏｔｅｋ， Ｈｏｕｓｔｏｎ， ＴＸ）に直列に連結）。１．０ｗｔ％ＬｉＢｒを含むＨＰＬＣ−グレードのＤＭＦを移動相として使用した。図１Ａは、Ｐ７ ＲＡＦＴ合成ポリマーのいくつかの分子量、粗製、およびブロック比の概要を示す。
例１．２．ポリ（ＰＥＧＭＡ）マクロＣＴＡからのＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡの第２のブロック（Ｂ１−Ｂ２−Ｂ３）共重合体の調製
［００３０５］望ましい理論量のＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡを、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解したポリ（ＰＥＧＭＡ）マクロＣＴＡに加えた（溶媒に対して２５ｗｔ％のモノマーおよびマクロＣＴＡ）。全ての重合のために、［Ｍ］０／［ＣＴＡ］０および［ＣＴＡ］０／［Ｉ］０をそれぞれ２５０：１および１０：１とした。ＡＩＢＮの添加後、窒素を用いて溶液を３０分間浄化し、６８℃で６〜１２時間反応させた。結果として得られたジブロックコポリマーを、５０：５０ ｖ：ｖのジエチルエーテル／ペンタンへの沈殿により単離した。その後、沈殿したポリマーをアセトンに再溶解し、続いてペンタン（×３）に沈殿させ、真空中で一晩乾燥させた。Ｖｉｓｃｏｔｅｋ ＧＰＣｍａｘ ＶＥ２００１および屈折計ＶＥ３５８０（Ｖｉｓｃｏｔｅｋ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）により、ＤＭＦ中のポリ（ＰＥＧＭＡ）マクロＣＴＡおよびジブロックコポリマーサンプルの両方の分子量および多分散性（ＰＤＩ，Ｍｗ／Ｍｎ）を測定した。１．０ｗｔ％ＬｉＢｒを含むＨＰＬＣ−グレードのＤＭＦを移動相として使用した。ＣＤＣｌ３中のＮＭＲ分光分析は、ポリマー構造を確認し、第２のブロックの組成を計算するために使用した。
例１．３．ＰＥＧＭＡ−ＤＭＡＥＭＡコポリマーの調製および特徴づけ
［００３０６］ポリマー合成は、実施例１．１および１．２に記載したように行った。異なる添加比で個々のモノマーを使用することにより第１のブロックにおけるＰＥＧＭとＤＭＡＥＭＡの比を変化させ、図１Ｂに示すようなコポリマーを作製した。
例１．４．ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）コポリマーの調製および特徴づけ
［００３０７］ポリマー合成は、望ましい組成の第１のブロックを得られるようなモノマーの添加比を使用して、実施例１．１および１．２に記載したように行った。いくつかの場合において、［ＰＥＧＭＡｗ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーは、第１のブロックにおけるモノマーのコポリマー比が７０：３０になるように調製する。図１４は、第１ブロックにおけるモノマーのコポリマー比が７０：３０である［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［ＢＰ−Ｄ］ポリマーの合成を概説している。図１５Ａ、１５Ｂおよび１５Ｃは、第１のブロックにおけるモノマーのコポリマー比が７０：３０であるＰＥＧＭＡおよびＭＡＡ−ＮＨＳのＲＡＦＴコポリマー化によって合成されるポリマーの特徴づけを概説している。ＮＨＳ含有ポリマーを、７．４〜８．５のｐＨで、１〜４時間、室温または３７℃で、水性バッファー（リン酸塩または炭酸水素塩）中でインキュベートし、加水分解された（酸性の）形態を作る。
例１．５．ＤＭＡＥＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）コポリマーの調製および特徴づけ
［００３０８］ポリマー合成は、望ましい組成の第１のブロックを得られるようなモノマーの添加比を使用して、実施例１．１および１．２に記載したように行った。ある場合において、［ＤＭＡＥＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーは、第１のブロックにおけるモノマーのコポリマー比が７０：３０になるように調製する。ＮＨＳ含有ポリマーを、７．４〜８．５のｐＨで、１〜４時間、室温または３７℃で、水性バッファー（リン酸塩または炭酸水素塩）中でインキュベートし、加水分解された（酸性の）形態を作る。
例２．ｓｉＲＮＡドラッグデリバリーのためのＨＰＭＡ−ＰＤＳ（ＲＮＡ）コポリマー結合体の調製および特徴づけ
Ａ．ピリジルジスルフィドメタクリレートモノマー（ＰＤＳＭＡ）の合成
［００３０９］アルドリチオール−２（商標）（５ｇ，２２．５９ｍｍｏｌ）を、４０ｍｌのメタノールおよび１．８ｍｌのＡｃＯＨに溶解した。その溶液を、２０ｍｌメタノール中の２−アミノエタンチオール．ＨＣｌ（１．２８ｇ，１１．３０ｍｍｏｌ）の溶液として、３０分にわたって添加した。反応は、Ｎ２下、室温で４８時間撹拌した。溶媒を蒸発させた後、残留した油を４０ｍｌのジエチルエーテルで２回洗浄した。粗製の化合物を１０ｍｌのメタノール中に溶解し、生成物を５０ｍｌのジエチルエーテルに２回沈殿させ、所望の化合物１を淡黄色の固体として得た。収率：９５％。
［００３１０］ピリジンジチオエチルアミン（６．７ｇ，３０．０７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４．２３ｍｌ，３０．３７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍｌ）およびピリジン（２５ｍｌ）中に溶解し、メタクリロイルクロリド（３．３３ｍｌ，３３．０８ｍｍｏｌ）をシリンジを用いて０℃でゆっくりと加えた。反応混合物を、室温で２時間撹拌した。反応後、ｓａｔ．ＮａＨＣＯ３（３５０ｍｌ）により反応を停止させ、酢酸エチル（３５０ｍｌ）により抽出した。混合性の有機層を、１０％ＨＣｌ（１００ｍｌ，１回）および純水（１００ｍｌ，２回）により洗浄し、ＭａＳＯ４により乾燥した。純粋な生成物をカラムクロマトグラフィーにより精製し（ＥＡ／Ｈｅｘ：１／１０〜２／１）、黄色のシロップを得た。Ｒｆ＝０．２８（ＥＡ／Ｈｅｘ＝１／１）。収率：５５％。
Ｂ．ＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡコポリマー合成
［００３１１］Ｎ−（２−ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）およびピリジルメタクリレート（典型的に、７０：３０のモノマー比）のＲＡＦＴ重合は、ＤＭＦ中（５０重量％モノマー：溶媒）、６８℃において、窒素雰囲気下で８時間、フリーラジカルイニシエータとして２，２’−アゾビスイソブチリルニトリル（ＡＩＢＮ）を用いて行った。ＣＴＡとＡＩＢＮの比は１０：１でありモノマーとＣＴＡの比は、１００％変換の場合に２５，０００ｇ／ｍｏｌの分子量が達成されるようにした。ポリ（ＨＰＭＡ−ＰＤＳ）マクロ−ＣＴＡをジエチルエーテル中に繰り返し沈殿させることにより、メタノールから単離した。
［００３１２］マクロ−ＣＴＡを減圧下で２４時間乾燥し、その後、ジメチルアミノエチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）、プロピルアクリル酸（ＰＡＡ）、およびブチルメタクリレート（ＢＭＡ）のブロック共重合のために使用する。等モルのＤＭＡＥＭＡ、ＰＡＡ、およびＢＭＡ（［Ｍ］０／［ＣＴＡ］０＝２５０）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド中に溶解したＨＰＭＡ−ＰＤＳマクロＣＴＡに加える（溶媒に対して２５ｗｔ％のモノマーおよびマクロＣＴＡ）。ラジカルイニシエーターＡＩＢＮを、ＣＴＡ：イニシエーターの比が１０：１となるように加える。重合は、窒素雰囲気下、６８℃で８時間行う。その後、結果として得られたジブロックコポリマーを、５０：５０ ｖ：ｖのジエチルエーテル／ペンタンへの４回の沈殿により単離し、沈殿の間にエタノールに再溶解させる。その後、生成物をジエチルエーテルで１回洗浄し、真空中で一晩乾燥させる。
Ｃ．ｓｉＲＮＡのＨＰＭＡ−ＰＤＳＭＡコポリマーへの結合
［００３１３］ジスルフィド修飾された５’−センス鎖を有する二本鎖ＲＮＡとして、チオール化ｓｉＲＮＡを商業的に入手した（Ａｇｉｌｅｎｔ，Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）。結合のための遊離チオール形態は、凍結乾燥した化合物を水に溶解し、アガロースゲルに固定したジスルフィド還元剤ＴＣＥＰで１時間処理することにより調製する。その後、還元されたＲＮＡ（４００μＭ）を、５ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７）中のピリジルジスルフィド官能化ポリマーと２４時間反応させた。
［００３１４］ピリジルジスルフィドポリマーとＲＮＡチオールの反応は、２−ピリジンチオンを精製し、分光光度的に測定することにより、結合効率を特徴付けることができる。さらにジスルフィド交換を確認するために、結合体をＳＤＳ−ＰＡＧＥ１６．５％トリシンゲル上で泳動させる。並行して、一定の結合反応物を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥの前に固定化したＴＣＥＰで処理し、還元環境下でのポリマーからのＲＮＡの放出を検証した。結合反応は、１、２、および５のポリマー／ＲＮＡ化学量論で行う。２−ピリジンチオン放出に対する３４３ｎｍにおけるＵＶ分光光度吸収測定は、結合効率を測定するために使用される。
例３：細胞ターゲティング剤を有するポリマーの合成：アジド末端ポリマーとプロパルギル葉酸塩のクリック反応
［００３１５］制御されたラジカル重合とアジド−アルキンクリック化学の組み合わせは、関心のある特定の受容体（例えば、葉酸）を含む特定の組織／細胞の活性ターゲティングに対するポテンシャルを有する生物学的リガンド（例えば、葉酸塩）と結合したブロックコポリマーミセルを調製するために使用される。ブロックコポリマーは、アジド連鎖移動剤（ＣＴＡ）を使用することを除き、実施例１に示したような可逆的付加開裂連鎖移動（ＲＡＦＴ）重合により合成される。その後、ポリマーのアジド末端は、ターゲティング剤（例えば、葉酸）のアルキン誘導体と反応し、ターゲティング剤を含有するポリマーを生成する。
ＲＡＦＴ剤の合成
［００３１６］ＲＡＦＴ連鎖移動剤（ＣＴＡ）２−ドデシルスルファニルチオカルボニルスルファニル−２−メチル−プロピオン酸３−アジドプロピルエステル（Ｃ１２−ＣＴＡＮ３）は、以下のように調製する：
［００３１７］３−アジドプロパノールの合成。３−クロロ−１−プロパノール（５．０ｇ，５３ｍｍｏｌ，１．０当量）およびアジ化ナトリウム（８．５９ｇ，１３２ｍｍｏｌ，２．５当量）を、ＤＭＦ（２６．５ｍＬ）中、１００℃で４８時間反応させる。反応混合物を室温まで冷却し、エチルエーテル（２００ｍＬ）に注ぎ、飽和ＮａＣｌ水溶液（５００ｍＬ）で抽出する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４により乾燥し、ろ過する。上清を集め、生成物を得る（５．１ｇ，９５％収率）。
［００３１８］２−ドデシルスルファニルチオカルボニルスルファニル−２−メチルプロピオン酸塩化物（ＤＭＰ−Ｃｌ）の合成。２−ドデシルスルファニルチオカルボニルスルファニル−２−メチル−プロピオン酸（ＤＭＰ，Ｎｏｖｅｏｎ＞９５％）（１．０ｇ，２．７ｍｍｏｌ，１．０当量）を、５０ｍＬ丸底フラスコ中の塩化メチレン（１５ｍＬ）に溶解し、溶液を約０℃まで冷却する。塩化オキサリル（０．４１７ｇ，３．３ｍｍｏｌ，１．２当量）を窒素雰囲気下でゆっくりと添加し、室温に到達させ、全部で３時間撹拌する。結果として得られる溶液を減圧濃縮し、酸塩化物の生成物を得る（１．０ｇ，９９％収率）融点６３℃。
［００３１９］２−ドデシルスルファニルチオカルボニルスルファニル−２−メチルプロピオン酸３−アジドプロピルエステルの合成。３−アジドプロパノール（２６５ｍｇ，２．６２ｍｍｏｌ，１．０当量）を、５０ｍＬ丸底フラスコ中の塩化メチレン（５ｍＬ）に溶解し、溶液を約０℃まで冷却する。塩化メチレン（５ｍＬ）中のトリエチルアミン（０．７３ｍＬ）の溶液を１０分間にわたって滴下する。塩化メチレン（５ｍＬ）中のＤＭＰ−Ｃｌ（１．０ｇ，２．６ｍｍｏｌ）溶液を滴下し、３時間撹拌しながら溶液を室温にする。溶液を減圧濃縮し、エチルエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、炭酸水素ナトリウムの飽和溶液（５０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）、およびＮａＣｌ飽和溶液（５０ｍＬ）で続けて洗浄する。有機層を分離し、ＭｇＳＯ４（１．０ｇ）で乾燥し、ろ過する。上清を減圧濃縮し、残留油として生成物を得る（１．０５ｇ，９０％収率）。
葉酸プロパルギルの合成
［００３２０］葉酸（１．０ｇ，０．００２２ｍｏｌ）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解し、水／氷バス中で冷却する。Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（２６０ｍｇ，０．００２５ｍｏｌ）およびＥＤＣ（４４０ｍｇ，０．００２５ｍｏｌ）を加え、結果として得られる混合物を氷浴中で３０分間撹拌し、白色沈殿を得る。ＤＭＦ（５．０ｍＬ）中のプロパルギルアミン（１２４ｍｇ，２．２５ｍｍｏｌ）の溶液を加え、結果として得られる溶液を室温まで温め、２４時間撹拌する。反応混合物を水（１００ｍＬ）に注ぎ、３０分間撹拌し、沈殿を形成する。橙黄色の沈殿をろ過し、アセトンで洗浄し、６時間減圧乾燥して１．０１ｇの生成物を得る（９３％収率）。
アジド末端ポリマーと葉酸プロパルギルとのクリック反応
［００３２１］アジド末端ポリマーを以下の例示的方法により反応させる。ＤＭＦ（７ｍＬ）中のＮ３−α−［Ｄｓ−Ｘｔ］ｂ−［Ｂｘ−Ｐｙ−Ｄｚ］ａ−ω（０．０８００ｍｍｏｌ）の溶液およびペンタメチルジエチレントリアミン（ＰＭＤＥＴＡ，Ａｌｄｒｉｃｈ，９９％），（８．７ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ）を６０分間窒素でパージし、シリンジを用いて、磁気撹拌子を備え、ＣｕＢｒ（７．２ｍｇ，０．０５０ｍｍｏｌ）および葉酸プロパルギル（４２ｍｇ，０．０８８ｍｍｏｌ）を含むバイアルに窒素雰囲気下で移す。反応混合物を、酸素の非存在下、２６℃で２２時間撹拌する。反応混合物を空気に暴露し、中性アルミナのカラムを通して溶液を通過させる。ＤＭＦを減圧除去し、生成物をヘキサン中に沈殿させる。得られる葉酸末端ブロックコポリマーである葉酸−α−［Ｄｓ−Ｘｔ］ｂ−［Ｂｘ−Ｐｙ−Ｄｚ］ａ−ωをＴＨＦ中に溶解し、ろ過して過剰な葉酸プロパルギルを除去する。ＴＨＦを除去し、その後、ポリマーを脱イオン化（ＤＩ）水に溶解し、１０００Ｄａの分子量カットオフを有する分子膜を用いて６時間透析する。ポリマーを凍結乾燥により単離する。
例４：ブロックコポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６（Ｐ７ｖ６としても既知）のＮＭＲ分光分析（図２）
［００３２２］この実施例は、ＮＭＲ分光分析を用いて、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が水溶液中でミセル様の構造を形成することの証拠を提供する。
［００３２３］１Ｈ ＮＭＲスペクトルは、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ３）および重水（Ｄ２Ｏ）中、２５℃において、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＶ３０１で記録した。重水素ロック（ＣＤＣｌ３，Ｄ２Ｏ）を使用し、化学シフトは、テトラメチルシラン（ＣＤＣｌ３に対して）および３−（トリメチルシリル）プロピオン−２，２，３，３−ｄ４酸、ナトリウム塩（Ｄ２Ｏに対して）からのｐｐｍで測定した。ポリマー濃度は、６ｍｇ／ｍｌであった。
［００３２４］一例としてポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６を用いた、水性バッファー中における合成されたポリマーのＮＭＲ分光分析は、本発明のジブロックコポリマーが水溶液中でミセルを形成することの証拠を提供する。ミセルの形成は、結果として、コアセグメントを形成するプロトンの動きを制限し、溶媒とコアのプロトンとの間の重水素交換を妨げる遮蔽された粘性のある内側のコアの形成を生じる。これは、対応するプロトンの１Ｈ ＮＭＲシグナルの有意な抑制または消失により示される。我々は、ミセルのコアの疎水性ブロックが効果的に遮蔽されていることを示すために、溶液ＮＭＲ分光分析のこの特有の性質を使用した。ミセルが水性媒質中に形成される場合、疎水性コポリマーのプロトンによるシグナルの消失が生じるはずである。
［００３２５］図２は、ＣＤＣｌ３（有機溶媒）およびＤ２Ｏ（水性溶媒）におけるポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の１Ｈ ＮＭＲ実験を示す。室温でのＣＤＣｌ３中のポリマーの１Ｈ ＮＭＲスペクトル（図１Ａ）は、全てのポリマープロトンに起因するシグナルを示しており、ポリマー鎖がＣＤＣｌ３中に分散したままであり（凝集していない）、その運動を保持しているため、そのプロトンを溶媒と交換することができることを示す。これは、遮蔽されたコアを有する安定なミセルが有機溶媒中のＰＲｘ０７２９ｖ６からは形成されないことを示す。図２Ｂは、Ｄ２Ｏ中のＰＲｘ０７２９ｖ６の１Ｈ ＮＭＲスペクトルを示す。疎水性ブロック（ＢＭＡ，ＰＡＡ，ＤＭＡＥＭＡ）のプロトンを表すシグナルがスペクトルから消えている。これは、遮蔽されたコアを有する安定なミセルが、水溶液中のＰＲｘ０７２９ｖ６からは形成されることを示す。さらに、同じスペクトルにおいて、ＤＭＡＥＭＡの２つのメチル基のプロトンの共鳴に起因するシグナル（２．２８ｐｐｍ）は、有意な抑制を受け、外殻を構成する第１のポリＤＭＡＥＭＡブロックのみが水に曝露されることを意味する（すなわち、主にＤＭＡＥＭＡの電荷を有する基）。単純な計算によると、疎水性ブロックのＰＡＡ，ＤＭＡＥＭＡの積分されたパーセンテージ（２９００）をＣＤＣｌ３におけるシグナル（５６００）から減算すると、同じシグナルのＤ２Ｏにおけるおよその値（２８１１）が得られ、この結果と一致する。
［００３２６］まとめると、１Ｈ ＮＭＲ実験の結果は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が規則正しいコア−外殻構造を有するミセルを形成し、第１のブロックポリＤＭＡＥＭＡが疎水性単位（ＢＭＡ）および電気的に安定化する反対の電荷を有する単位（ＰＡＡ，ＤＭＡＥＭＡ）で構成されるコアを囲む水和した外側の外殻を形成することを示す。
例５：ｓｉＲＮＡと複合体をなすポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の粒子サイズの動的光散乱法（ＤＬＳ）による測定（図３）
［００３２７］以下の実施例は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が単独で４５ｎｍの大きさの均一な粒子を形成するか、ｓｉＲＮＡとの結合により４７ｎｍの大きさの粒子を形成することを示す。
［００３２８］ポリマー単独またはポリマー／ｓｉＲＮＡ複合体の粒子サイズは、Ｍａｌｖｅｒｎ Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ Ｎａｎｏ ＺＳを用いて、動的光散乱法により測定した。ポリマーは、ＰＲｘ０７２９ｖ６単独の場合についてはｐＨ７．４のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中、１ｍｇ／ｍｌで測定し、１μＭ ＧＡＰＤＨ−特異的２１ｍｅｒ−ｓｉＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ）と複合体を形成したＰＲｘ０７２９ｖ６については０．７ｍｇ／ｍｌで測定し、ポリマーにおける正電荷：ｓｉＲＮＡにおける負電荷の理論的な電荷比は４：１であった。ＰＲｘ０７２９ｖ６単独（４５ｎｍ）およびＰＲｘ０７２９ｖ６とｓｉＲＮＡの複合体（４７ｎｍ）（図３）は、近い一様分散を有する同様の粒子サイズを示す（ＰＤＩ＜０．１）。
例６：異なる電荷比におけるポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６／ｓｉＲＮＡ複合体のゲルシフト分析（図４）
［００３２９］以下の実施例は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が種々の電荷比でｓｉＲＮＡと結合し、その結果として電気泳動易動度の減少した複合体が生じることを示す。
［００３３０］ポリマーとｓｉＲＮＡの結合は、ゲル電気泳動により分析され（図４）、ｓｉＲＮＡとポリマーの完全な結合は、４：１以上のポリマー／ｓｉＲＮＡにおいて生じることを実証する。
例７：ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の臨界安定性濃度（ＣSＣ）（図５）
［００３３１］以下の実施例は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６のミセル粒子特性が、１００倍希釈に対して安定であることを示す。
［００３３２］ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６を、１ｍｇ／ｍｌ±０．５Ｍ ＮａＣｌの濃度でＰＢＳバッファー（ｐＨ７．４）に溶解した。粒子サイズは、ＰＢＳ±０．５Ｍ ＮａＣｌを用いて、１ｍｇ／ｍｌ〜１．６μｇ／ｍｌの５倍の範囲の連続的な希釈について動的光散乱法により測定した。図５は、約４５ｎｍの大きさの粒子が約１０μｇ／ｍｌの濃度まで下げても安定であることを示す。ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６は、約５μｇ／ｍｌ（臨界ミセル濃度またはＣＭＣ）より低い濃度では不安定になり、個々のポリマー鎖は分離し、非特異的な凝集体を形成する。
例８：有機溶媒におけるポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６粒子の安定性（図６）
［００３３３］この実施例は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６のミセル構造が有機溶媒中で分離し、ミセルコアの疎水性の性質と一致することを示す。
［００３３４］ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６を１ｍｇ／ｍｌの濃度で種々の有機溶媒に溶解し、動的光散乱法により粒子サイズを測定した。図６は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）の濃度を増大させることによりミセルが分解し、凝集鎖を生じることを示す。
例９：ｓｉＲＮＡとミセル集合体との連結
Ａ．二本鎖ｓｉＲＮＡとチオール含有ブロックコポリマーとの連結。
［００３３５］ｓｉＲＮＡ−ピリジルジスルフィドを、５０ｍＭリン酸ナトリウムおよび０．１５Ｍ ＮａＣｌの緩衝液（ｐＨ７．２）または別の非アミン緩衝液（例えばホウ酸、Ｈｅｐｅｓ、重炭酸ソーダ）にて、ＮＨＳエステル修飾に適切な範囲のｐＨ（ｐＨ７−９）で、１０ｍｇ／ｍｌでアミノ−ｓｉＲＮＡを溶解して調製した。ＳＰＤＰを、ＤＭＳＯに６．２ｍｇ／ｍｌの濃度で溶解し（２０ｍＭストック溶液）、２５ｕｌのＳＰＤＰストック溶液を、各ｍｌの修飾しようとするアミノ−ｓｉＲＮＡに添加した。溶液を混合し、室温で３０分反応させた。より長い反応時間（一晩を含む）が修飾に悪影響を及ぼすことはなかった。５０ｍＭリン酸ナトリウム、０．１５Ｍ ＮａＣｌおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡの緩衝液（ｐＨ７．２）を使用した透析（またはゲルろ過）により、修飾されたＲＮＡ（ピリジルジスルフィド）を反応副産物から精製した。ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中１０−５０ｍＭのＥＤＴＡの存在下、準備したｓｉＲＮＡ−ピリジルジスルフィドを、１：５モル比にて、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６（ω末端に遊離型チオール含む）と反応させた。反応の進行度を、ピリジン−２−チオンの放出によりおよびゲル電気泳動により、分光測光法にてモニターした。
Ｂ．一本鎖ＲＮＡとポリマーとの連結、その後の第２の鎖のアニーリング
［００３３６］一本鎖アミノ修飾ＲＮＡから開始して、上記の例の手順を使用して、一本鎖ＲＮＡピリジルジスルフィド連結を作製した。ＲＮＡピリジルジスルフィドとブロックコポリマーミセルとのカップリングの後に、相補的ＲＮＡ種を反応混合物へ添加し、２つの鎖を、二重鎖ＲＮＡのＴｍより下である２０℃の温度で１時間アニールさせた。
例１０：ｓｉＲＮＡのノックダウン活性−培養哺乳動物細胞におけるミセル集合体複合体（図７および図１２）
［００３３７］ｓｉＲＮＡ／ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６複合体のノックダウン（ＫＤ）活性は、ＰＲｘ０７２９ｖ６：ｓｉＲＮＡ複合体で２４時間処理した後、特異的な遺伝子発現を測定することにより９６ウェル型式において分析した。ポリマーおよびＧＡＰＤＨターゲティングｓｉＲＮＡまたはネガティブコントロールｓｉＲＮＡ（Ａｍｂｉｏｎ）を２５μＬ内で混合し、種々の電荷比および５倍以上の最終的な形質移入濃度を得て、３０分間混合し、１０％ＦＢＳを含有する１００μＬ通常培地中にＨｅＬａ細胞を加えた。最終的なｓｉＲＮＡ濃度は、１００、５０、２５、および１２．５μＭで評価した。ポリマーは、４：１、２：１または１：１の電荷比または１８、９、４．５、および２．２μｇ／ｍｌの固定されたポリマー濃度で加え、どの条件が最も高いＫＤ活性を生じるかを測定した。電荷比については（図７Ａ）、複合体をより高い濃度で調製し、３０分間インキュベートし、細胞を添加する直前に、グラフに示すように５倍以上の濃度で連続的に希釈した。固定されたポリマー濃度の場合（図７Ｂ）、ｓｉＲＮＡおよびポリマーをグラフに示すように５倍以上の濃度で複合体化し、３０分間インキュベートし、示される最終濃度で細胞に添加した。図７Ｃは、ネガティブコントロールを示す。ＲＮＡ全体は、処理の２４時間後に単離し、ＧＡＰＤＨ発現は、定量的ＰＣＲにより、２つの内部標準遺伝子であるＲＰＬ１３ＡおよびＨＰＲＴと比較して測定した。図７、図１２Ａおよび図１２Ｂにおける結果は、試験した全てのｓｉＲＮＡ濃度において、９μｇ／ｍｌ以上のＰＲｘ０７２９ｖ６濃度で、６０％より大きいＫＤ活性が得られた。この濃度は、粒子サイズ分析による安定なミセル形成と一致した。高いＫＤ活性は、より低い濃度における複合体形成と比較して、複合体が高い濃度で調製され、段階的に希釈された場合にのみ（４：１の電荷比）、４．５μｇ／ｍｌ ＰＲｘ０７２９ｖ６／１２．５ｎＭ ｓｉＲＮＡで観察された。さらに、１００ｎＭ ｓｉＲＮＡおよび４．５μｇ／ｍｌ ＰＲｘ０７２９ｖ６は、高いＫＤ活性を示す一方、より低いｓｉＲＮＡ濃度の場合はＫＤ活性を示さなかった。まとめると、ＰＲｘ０７２９ｖ６ミセルは、１０μｇ／ｍｌまでの濃度で安定であり、ＫＤ活性は５μｇ／ｍｌ以下で喪失し、安定なミセルはよりよいＫＤ活性を必要とすることを示す。
例１１：培養哺乳動物細胞におけるダイサー基質ＧＡＰＤＨｓｉＲＮＡ−ポリマーのノックダウン活性
［００３３８］ＧＡＰＤＨ特異的ダイサー基質ｓｉＲＮＡ／ポリマー複合体のノックダウン（ＫＤ）活性は、ポリマー：ＧＡＰＤＨダイサーｓｉＲＮＡ複合体で２４時間処理した後のＧＡＰＤＨ遺伝子発現を測定することにより、９６ウェル型式において分析する。ＧＡＰＤＨダイサーｓｉＲＮＡ配列は、センス鎖：ｒＧｒＧｒＵｒＣｒＡｒＵｒＣｒＣｒＡｒＵｒＧｒＡｒＣｒＡｒＡｒＣｒＵｒＵｒＵｒＧｒＧｒＵｒＡｄＴｄＣ、アンチセンス鎖：ｒＧｒＡｒＵｒＡｒＣｒＣｒＡｒＡｒＡｒＧｒＵｒＵｒＧｒＵｒＣｒＡｒＵｒＧｒＧｒＡｒＵｒＧｒＡｒＣｒＣｒＵｒＵである。ポリマーおよびＧＡＰＤＨターゲティングｓｉＲＮＡまたはネガティブコントロールｓｉＲＮＡ（ＩＤＴ）を２５μＬ内で混合し、種々の電荷比および５倍以上の最終的な形質移入濃度を得て、３０分間混合し、１０％ＦＢＳを含有する１００μＬ通常培地中にＨｅＬａ細胞を加える。最終的なｓｉＲＮＡ濃度は、１００、５０、２５、および１２．５μＭで評価する。ポリマーは、４：１、２：１または１：１の電荷比または４０、２０、１０、および５μｇ／ｍｌの固定されたポリマー濃度で加え、どの条件が最も高いＫＤ活性を生じるかを測定する。ＲＮＡ全体を処理の２４時間後に単離し、ＧＡＰＤＨ発現を、定量的ＰＣＲにより、２つの内部標準遺伝子であるＲＰＬ１３ＡおよびＨＰＲＴと比較して測定する。結果は、試験した全てのｓｉＲＮＡ濃度において、１０μｇ／ｍｌ以上のポリマー濃度で、６０％より大きいＫＤ活性が得られる。この濃度は、粒子サイズ分析による安定なミセル形成と一致する。
例１２：培養哺乳動物におけるＡｐｏＢ１００ｓｉＲＮＡ−ポリマー複合体のノックダウン活性
［００３３９］ＡｐｏＢ１００特異的ｓｉＲＮＡまたはダイサー基質ｓｉＲＮＡとポリマーの複合体のノックダウン（ＫＤ）活性は、ポリマー：ＡｐｏＢｓｉＲＮＡ複合体で２４時間処理した後のＡｐｏＢ１００遺伝子発現を評価することにより、９６ウェル型式において分析する。ＡｐｏＢ１００ｓｉＲＮＡ配列は：センス鎖５’−ｒＧｒＡｒＡｒＵｒＧｒＵｒＧｒＧｒＧｒＵｒＧｒＧｒＣｒＡｒＡｒＣｒＵｒＵｒＵｒＡｒＧ−３’、アンチセンス鎖：５’−ｒＡｒＡｒＡｒＧｒＵｒＵｒＧｒＣｒＣｒＡｒＣｒＣｒＣｒＡｒＣｒＡｒＵｒＵｒＣｒＡｒＧ−３’である。ＡｐｏＢ１００ダイサー基質ｓｉＲＮＡ配列は、センス鎖：５’−ｒＧｒＡｒＡｒＵｒＧｒＵｒＧｒＧｒＧｒＵｒＧｒＧｒＣｒＡｒＡｒＣｒＵｒＵｒＵｒＡｒＡｒＡｒＧｄＧｄＡ、アンチセンス鎖：５’−ｒＵｒＣｒＣｒＵｒＵｒＵｒＡｒＡｒＡｒＧｒＵｒＵｒＧｒＣｒＣｒＡｒＣｒＣｒＣｒＡｒＣｒＡｒＵｒＵｒＣｒＡｒＧ−３’である。ポリマーおよびＡｐｏＢターゲティングｓｉＲＮＡまたはネガティブコントロールｓｉＲＮＡ（ＩＤＴ）を２５μＬ内で混合し、種々の電荷比および５倍以上の最終的な形質移入濃度を得て、３０分間混合し、１０％ＦＢＳを含有する１００μＬ通常培地中にＨｅｐＧ２細胞を加える。最終的なｓｉＲＮＡ濃度は、１００、５０、２５、および１２．５μＭで評価する。ポリマーは、４：１、２：１または１：１の電荷比または４０、２０、１０、および５μｇ／ｍｌの固定されたポリマー濃度で加え、どの条件が最も高いＫＤ活性を生じるかを測定する。ＲＮＡ全体を処理の２４時間後に単離し、ＡｐｏＢ１００発現を、定量的ＰＣＲにより、２つの内部標準遺伝子であるＲＰＬ１３ＡおよびＨＰＲＴと比較して測定する。結果は、試験した全てのｓｉＲＮＡ濃度において、１０μｇ／ｍｌ以上のポリマー濃度で、６０％より大きいＫＤ活性が得られる。この濃度は、粒子サイズ分析による安定なミセル形成と一致する。
例１３：マウスモデルにおけるＡｐｏＢ１００ｓｉＲＮＡ−ポリマー複合体のノックダウン活性
［００３４０］ＡｐｏＢ１００特異的ｓｉＲＮＡ／ポリマー複合体のノックダウン活性は、肝組織および血清コレステロールレベルにおけるＡｐｏＢ１００の発現を測定することにより、マウスモデルにおいて測定する。Ｂａｌｂ／Ｃマウスに、尾静脈から、１：１、２：１または４：１の電荷比（ポリマー：ｓｉＲＮＡ）の１、２または５ｍｇ／ｋｇのＡｐｏＢ特異的なｓｉＲＮＡとポリマーの複合体を投与するか、または生理食塩水対照を投与する。最終投与の４８時間後にマウスを屠殺し、血液および肝臓のサンプルを単離する。コレステロールレベルは、血清中で測定する。全ＲＮＡが肝臓から単離し、ＡｐｏＢ１００発現を、定量的ＰＣＲにより、２つの標準遺伝子ＨＰＲＴおよびＧＡＰＤＨと比較して測定する。
例１４：培養哺乳動物におけるＡｐｏＢ１００アンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチド−ポリマー複合体のノックダウン活性
［００３４１］ＡｐｏＢ１００特異的アンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチドとポリマーの複合体のノックダウン（ＫＤ）活性は、ポリマー：ＡｐｏＢアンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチド複合体で２４時間処理した後のＡｐｏＢ１００遺伝子発現を測定することにより、９６ウェル型式において分析する。マウスＡｐｏＢに特異的な２つのＡｐｏＢ１００アンチセンスオリゴヌクレオチドは、
５’−ＧＴＣＣＣＴＧＡＡＧＡＴＧＴＣＡＡＴＧＣ−３’、コード領域の５４１位および
５’−ＡＴＧＴＣＡＡＴＧＣＣＡＣＡＴＧＴＣＣＡ−３’、コード領域の５３１位である。
［００３４２］ポリマーおよびＡｐｏＢターゲティングアンチセンスＤＮＡオリゴヌクレオチドまたはネガティブコントロールＤＮＡオリゴヌクレオチド（スクランブル配列）を２５μＬ内で混合し、種々の電荷比および５倍以上の最終的な形質移入濃度を得て、３０分間混合し、１０％ＦＢＳを含有する１００μＬ通常培地中にＨｅｐＧ２細胞を加える。最終的なオリゴヌクレオチド濃度は、１００、５０、２５、および１２．５μＭで評価する。ポリマーは、４：１、２：１または１：１の電荷比または４０、２０、１０、および５μｇ／ｍｌの固定されたポリマー濃度で加え、どの条件が最も高いＫＤ活性を生じるかを測定する。ＲＮＡ全体を処理の２４時間後に単離し、ＡｐｏＢ１００発現を、定量的ＰＣＲにより、２つの内部標準遺伝子であるＲＰＬ１３ＡおよびＨＰＲＴと比較して測定する。
例１５：ミセル集合体およびそのｓｉＲＮＡ複合体の膜不安定化活性の実証（図８）
［００３４３］ｐＨ応答性の膜不安定化活性は、ポリマー単独またはＰＲｘ０７２９ｖ６：ｓｉＲＮＡ複合体をヒト赤血球細胞（ＲＢＣ）の標本中に滴定し、ヘモグロビン放出による膜溶解活性を測定することにより分析した（５４０ｎｍにおける吸収）。３つの異なるｐＨ条件を使用し、エンドソームのｐＨ環境を模擬した（細胞外ｐＨ＝７．４、初期エンドソーム＝６．６、後期エンドソーム＝５．８）。ＥＤＴＡを含む採血管中に集めた全血から、遠心分離によりヒト赤血球細胞（ＲＢＣ）を単離した。ＲＢＣを通常の生理食塩水中で３回洗浄し、特定のｐＨ（５．８、６．６または７．４）におけるＰＢＳ中で最終濃度２％のＲＢＣとした。ＰＲｘ０７２９ｖ６単独またはＰＲｘ０７２９ｖ６／ｓｉＲＮＡ複合体を、図５に示した臨界安定性濃度（ＣＳＣ）より少し高い濃度および少し低い濃度で試験した。ポリマー／ｓｉＲＮＡ複合体の場合は、２５ｎＭのｓｉＲＮＡをＰＲｘ０７２９ｖ６に１：１、２：１、４：１および８：１の電荷比で加えた（ポリマー単独の場合と同じポリマー濃度）。ポリマー単独またはポリマー−ｓｉＲＮＡ複合体の溶液を３０分間で２０倍の最終分析濃度にし、各ＲＢＣ標本中に希釈した。２つの異なるＰＲｘ０７２９ｖ６ポリマーを入れた標本は、調製から４℃で保存し、調製の９日後および１５日後に活性の安定性を比較した。ＲＢＣとポリマー単独またはポリマー／ｓｉＲＮＡ複合体を３７℃で６０分間インキュベートし、遠心分離して完全なＲＢＣを除去した。上清をキュベットに移し、５４０ｎｍにおける吸収を測定した。パーセント溶血は、Ａ５４０サンプル／１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００処理されたＲＢＣのＡ５４０として表す（１００％溶血に対するコントロール）。結果は、ＰＲｘ０７２９ｖ６単独（図８Ａ）またはＰＲｘ０７２９ｖ６／ｓｉＲＮＡ複合体（図８Ｂ）が、ｐＨ７．４において非溶血性であり、エンドソームに付随するより低いｐＨおよびポリマーのより高い濃度において、溶血性が増大することを示す。
例１６：ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）分析（図９）
［００３４４］この例は、電子分光法を用いて、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が球状のミセル様粒子を形成することの証拠を提供する。
［００３４５］ＰＢＳ中のポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の０．５ｍｇ／ｍｌ溶液を、カーボンで被覆された銅格子に３０分間塗布した。格子をＫａｒｎｏｖｓｋｙの溶液中に固定し、カコジラートバッファー中で１回洗浄し、その後、水で８回洗浄した。格子を６％酢酸ウラニル溶液で１５分間染色し、分析まで乾燥した。透過型電子顕微鏡分析（ＴＥＭ）は、ＪＥＯＬ顕微鏡を用いて行った。図９は、動的光散乱法により溶液中で測定したのと同様のおよその直径を有する球状粒子であることを実証する、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の典型的な電子顕微鏡写真を示す。
例１７：ポリマー−ｓｉＲＮＡ複合体の細胞取り込みおよび細胞内分布の蛍光顕微鏡分析（図１０）
［００３４６］この例は、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６が、脂質ベースの形質移入試薬よりも効率的に蛍光標識したｓｉＲＮＡの細胞取り込みおよびエンドソーム放出を媒介できることを示す。
［００３４７］ＨｅＬａ細胞を、Ｌａｂ−ＴｅｋＩＩチャンバーカバーグラス上に蒔いた。一晩インキュベートした後、１００ｎＭ ＦＡＭ−ｓｉＲＮＡ／リポフェクタミン２０００または１００ｎＭ ＦＡＭ−ｓｉＲＮＡを、ポリマー−ｓｉＲＮＡ４：１の電荷比で細胞に形質移入した。ｐＨ７．４のＰＢＳ中で３０分間、５倍の濃度で複合体を形成し、１倍の最終濃度で細胞に加え、一晩インキュベートした。細胞をＤＡＰＩで１０分間染色し（核の可視化のため）、その後、３．７％ホルムアルデヒド−１ＸＰＢＳ中で５分間固定化し、ＰＢＳで洗浄した。Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ蛍光顕微鏡を用いて、サンプルを画像化した。図１０Ｂは、リポフェクタミン（図１０Ａ）と比較したポリマー−ｓｉＲＮＡの細胞取り込みおよび細胞内分布の蛍光顕微鏡写真を示す。リポフェクタミン−ｓｉＲＮＡ複合体の粒子染色は、エンドソーム領域を示唆し、一方、ポリマー−ｓｉＲＮＡ複合体の拡散性の細胞質染色は、それらがエンドソームから細胞質へ放出されたことを示す。
例１８：疎水性小分子のポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６ミセル集合体への取り込み
［００３４８］この例は、疎水性小分子が、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６の主に疎水性のミセルコアにより取り込まれることを示す。
［００３４９］ｓｉＲＮＡを有するまたは有さないポリマーミセルの形成を、ピレン（Ｃ１６Ｈ１０，ＭＷ＝２０２）を用いた蛍光プローブ技術により確認する。ここで、ピレンのミセルコアへの分配は、ピレンスペクトルの２つの発光極大を用いて決定できる。ポリマーミセル溶液におけるピレンの蛍光発光スペクトルは、３９５ｎｍの固定された励起波長を用いて、ピレンを６×１０−７Ｍの一定濃度として、３００〜３６０ｎｍで測定する。ポリマーは、１００ｎＭ ｓｉＲＮＡを有する場合と有さない場合について、０．００１％〜２０％（ｗ／ｗ）で変化する。スペクトルデータは、Ｖａｒｉａｎ蛍光分光光度計を用いて得た。全ての蛍光実験は、２５℃で行った。ポリマー濃度の関数として強度比Ｉ３３６／Ｉ３３３をプロットすることにより、臨界ミセル濃度（ＣＭＣ）を決定する。
［００３５０］同様に、モデルの小分子薬であるジピリダモール（２−｛［９−（ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ）−２，７−ビス（１−ピペリジル）−３，５，８，１０−テトラザビシクロ［４．４．０］デカ−２，４，７，９，１１−ペンタエン−４−イル］−（２−ヒドロキシエチル）アミノ｝エタノール；Ｃ２４Ｈ４０Ｎ８Ｏ４，ＭＷ＝５０５）を、以下に示すようにＰＲｘ０７２９ｖ６のミセルコアに導入する。ポリマー（１．０ｍｇ）およびジピリダモール（ＤＩＰ）（０．２ｍｇ）をＴＨＦ（０．５ｍＬ）に溶解する。脱イオン化水（１０ｍＬ）を滴下し、溶液を５０℃で６時間撹拌し、薬物をミセルの疎水性コアに導入する。溶液（２．５ｍＬ）を分取し、２５℃および３７℃において、紫外可視分光光度計により４１５ｎｍにおけるジピリダモールの吸収を測定する。対照の測定は、コポリマーの非存在下において、脱イオン化水中のジピリダモールの吸収の時間依存的な減少を測定することにより行った。２５℃および３７℃の両方における吸収を各時間点において測定し、その値は溶液において観察された値から減算される。
例１９：ポリマー構造におけるｐＨの影響（図１１）
［００３５１］この実施例は、ｐＨを７．４から４．７に下げることにより、ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６．２のミセル構造が解離することを示す。
［００３５２］ポリマーＰＲｘ０７２９ｖ６．２の粒子サイズは、ＰＢＳ中において、０．５ｍｇ／ｍｌ〜０．００４ｍｇ／ｍｌの５倍の連続した希釈において、ｐＨ４．７までの一連の酸性ｐＨ値およびｐＨ７．４で、動的光散乱法により測定した。図１１Ａは、ｐＨ７．４において、ポリマーが、凝集体を形成する形態に解離し始める４μｇ／ｍｌまでの希釈では安定であることを示す。図１１Ｂは、ｐＨ４．７まで酸性を増大させたｐＨにおいて、ミセル構造からのポリマー解離が促進されることを示し、すなわち、より高いポリマー濃度において生じ、１〜８ｎｍの大きさのポリマーモノマーのレベルを増大させることを示す。
例２０：ターゲティングリガンドおよびポリヌクレオチドをコポリマーに結合させる方法
［００３５３］以下の例は、ターゲティングリガンド（例えば、ガラクトース）またはポリヌクレオチド治療剤（例えばｓｉＲＮＡ）をジブロックコポリマーに結合させる方法を示す。（１）可逆的付加開裂連鎖移動（ＲＡＦＴ）を用いて、ポリマーを調製し（Chiefari et al. Macromolecules. 1998;31(16):5559-5562）、Ｒ基置換としてガラクトースを有する連鎖移動剤を用いて、ガラクトース末端官能化ジブロックコポリマーを形成する。（２）ジブロックコポリマーの第１のブロックは、メチルアクリル酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド（ＭＡＡ（ＮＨＳ））を含有するコポリマーとして調製し、ガラクトース−ＰＥＧ−アミンは、ＮＨＳ基と結合するか、またはアミノジスルフィドｓｉＲＮＡがＮＨＳと結合し、あるいは、ピリジルジスルフィドアミンをＮＨＳ基と反応させて、チオール化ＲＮＡとその後反応してポリマー−ＲＮＡ結合体を形成するピリジルジスルフィドを形成する。
例２０．１：ガラクトース−ＰＥＧ−アミンおよびガラクトース−ＣＴＡの調製
［００３５４］スキーム１は、ガラクトース−ＰＥＧ−アミン（化合物３）およびガラクトース−ＣＴＡ（連鎖移動剤）（化合物４）の合成スキームを示す。
［００３５５］化合物１：ペンタアセテートガラクトース（１０ｇ，２５．６ｍｍｏｌ）および２−［２−（２−クロロエトキシ）エトキシ］エタノール（５．６ｍＬ，３８．４ｍｍｏｌ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（６４ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を室温で１時間撹拌した。氷浴中で１時間にわたって、ＢＦ３．ＯＥｔ２（９．５ｍｌ，７６．８ｍｍｏｌ）を前記混合物に滴下した。反応混合物を室温で４８時間撹拌した。反応後、３０ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２を加えて反応液を希釈した。飽和ＮａＨＣＯ３（ａｑ）を用いて有機層を中和し、ブラインで洗浄し、その後ＭｇＳＯ４により乾燥した。ＣＨ２Ｃｌ２を減圧除去し、粗生成物を得た。フラッシュカラムクロマトグラフィーにより粗生成物を精製し、最終生成物１をわずかに黄色の油として得た。収率：５５％ＴＬＣ（Ｉ２およびｐ−アニスアルデヒド）：ＥＡ／Ｈｅｘ：１／１（Ｒｆ：β＝０．３３；α＝０．３２；未反応Ｓ．Ｍ０．３０）。
［００３５６］化合物２：化合物１（１．４６ｇ，２．９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＦ（３５ｍＬ）中に溶解し、ＮａＮ３（１．５ｇ，２３．２ｍｍｏｌ）を室温で混合物に加えた。反応混合物を８５〜９０℃に一晩加熱した。反応後、ＥＡ（１５ｍＬ）を溶液に加え、水（５０ ｍＬ）で有機層を５回洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４により乾燥し、フラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、無色の油として化合物２を得た。収率：８０％，ＴＬＣ（Ｉ２およびｐ−アニスアルデヒド）：ＥＡ／Ｈｅｘ：１／１（Ｒｆ：０．３３）。
［００３５７］化合物３：化合物２（１．０３４ｇ，２．０５ｍｍｏｌ）をＭｅＯＨ（２４ｍＬ）に溶解し、Ｎ２で１０分間泡立たせ、その後、Ｐｄ／Ｃ（１０％）（９０ｍｇ）およびＴＦＡ（８０ｕＬ）を前記溶液に加えた。反応混合物をＨ２で３０分間再び泡立たせ、その後、反応液を室温でＨ２下、さらに３時間撹拌した。セライトによりＰｄ／Ｃを除去し、ＭｅＯＨを蒸発させ、粘着性のゲルとして化合物３を得た。化合物３は、さらなる精製を行わずに使用することができる。収率：９５％．ＴＬＣ（ｐ−アニスアルデヒド）：ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２：１／４（Ｒｆ：０．０５）。
［００３５８］化合物４：ＥＣＴ（０．５ｇ，１．９ｍｍｏｌ）、ＮＨＳ（０．３３ｇ，２．８５ｍｍｏｌ）およびＤＣＣ（０．４５ｇ，２．１９ｍｍｏｌ）をＣＨＣｌ３（１５ｍＬ）に０℃で溶解した。反応混合物を室温で一晩連続して撹拌した。ＣＨＣｌ３（１０ｍＬ）中の化合物３（１．１３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）およびＴＥＡ（０．２８ｍＬ，２．００ｍｍｏｌ）を、前記反応液に０℃でゆっくりと加えた。反応混合物を室温で一晩、連続的に撹拌した。ＣＨ３Ｃｌを減圧除去し、粗生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、黄色のゲルとして化合物４を得た。収率（３５％）．ＴＬＣ：ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２：１／９（Ｒｆ：０．７５）。
Figure 2011522070
例２０．２：［ＤＭＡＥＭＡ］−［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］の合成
Ａ．ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡの合成
［００３５９］重合：２０ｍＬガラスバイアル（隔壁キャップ（ｓｅｐｔａ ｃａｐ）を具備する）に、３３．５ｍｇのＥＣＴ（ＲＡＦＴ ＣＴＡ）、２．１ｍｇのＡＩＢＮ（メタノールから２回再結晶）、３．０ｇのＤＭＡＥＭＡ（Ａｌｄｒｉｃｈ，９８％，阻害剤を除去するために、使用する直前に小アルミナカラムを通過させる）および３．０ｇのＤＭＦ（阻害剤がなく、高純度）を入れた。セプタカップでガラスバイアルを閉じ、乾燥窒素を３０分間パージした（撹拌しながら、氷浴中で行う）。反応バイアルを、予め７０℃に加熱した反応ブロック中に置いた。反応混合物を２時間４０分撹拌した。隔壁キャップを開き、混合物を氷浴中のバイアルにおいて２〜３分間撹拌し、重合反応を停止させた。
［００３６０］精製：３ｍＬのアセトンを反応混合物に加えた。３００ｍＬビーカーに、２４０ｍＬへキサンおよび６０ｍＬのエーテル（８０／２０（ｖ／ｖ））を入れ、撹拌しながら反応混合物をビーカーに一滴ずつ加えた。最初に、濁った溶液を遠心沈殿することにより回収される油が生成した；収率＝１．３５ｇ（４５％）。ヘキサン／エーテル（８０／２０（ｖ／ｖ））混合溶液からアセトン中に、何回かの沈殿を行った（例えば６回）。最後に、ポリマーを８時間室温で減圧乾燥した；収量ほぼ１ｇ。要約：（４５％濃度において、Ｍｎ，理論＝１１，０００ｇ／ｍｏｌ）。
Figure 2011522070
Ｂ．ＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡからの［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］の合成
［００３６１］全ての化学物質および試薬は、特に言及しない限り、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｍｐａｎｙから購入した。ブチルメタクリレート（ＢＭＡ）（９９％）、２−（ジメチルアミノ）エチルメタクリレート（ＤＭＡＥＭＡ）（９８％）を、塩基性アルミナのカラム（１５０ｍｅｓｈ）を通し、重合阻害剤を除去した。阻害剤を含まない２−プロピルアクリル酸（ＰＡＡ）（＞９９％）を購入し、入手したままの状態で使用した。アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（９９％）をメタノールから再結晶し、減圧乾燥した。上述したようにＤＭＡＥＭＡマクロＣＴＡを合成し、精製した（Ｍｎ〜１００００；ＰＤＩ〜１．３；＞９８％）。Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（９９．９９％）（ＥＭＤから購入）は試薬グレードであり、そのまま使用した。ヘキサン、ペンタンおよびエーテルはＥＭＤから購入し、それらはポリマー生成のために入手したままの状態で使用した。
［００３６２］重合：ＢＭＡ（２．１ｇ，１４．７ｍｍｏｌｅｓ）、ＰＡＡ（０．８３８９ｇ，７．５ｍｍｏｌｅｓ）、ＤＭＡＥＭＡ（１．１５６ｇ，７．３５ｍｍｏｌｅｓ）、マクロＣＴＡ（０．８ｇ，０．０８１６ｍｍｏｌｅｓ）、ＡＩＢＮ（１．３４ｍｇ，０．００８１６ｍｍｏｌｅｓ；ＣＴＡ：ＡＩＢＮ１０：１）およびＤＭＦ（５．３４ｍｌ）を窒素雰囲気下で封をしたバイアルに加えた。使用したＣＴＡ：モノマーの比は、１：３６０であった（５０％の変換を想定）。モノマー濃度は３Ｍであった。窒素を混合物中に３０分間バブリングすることにより混合物を脱気し、ヒーターブロック中に置いた（温度計：６７℃；ディスプレイ：７０〜７１；撹拌スピード３００〜４００ｒｐｍ）。反応を６時間続け、バイアルを氷中に置き、混合物を空気に曝露することにより反応を停止させた。
［００３６３］精製：ポリマー精製は、アセトン／ＤＭＦ１：１からヘキサン／エーテル７５／２５中に行った（３回）。結果として得られるポリマーを少なくとも１８時間減圧乾燥した。ＮＭＲスペクトルは、ポリマーが高純度であることを示した。ビニル基は観察されなかった。エタノールから２回脱イオン化した水に対して４日間透析し、その後凍結乾燥した。以下の条件を用いて、ゲル透過クロマトグラフィー（ＧＰＣ）によりポリマーを分析した：溶媒：ＤＭＦ／ＬｉＢｒ１％、流速：０．７５ｍｌ／ｍｉｎ、注入容積：１００μｌ。
［００３６４］カラム温度：６０℃。検出器を較正するために、ポリ（スチレン）を使用した。結果として得られるポリマーのＧＰＣ分析：Ｍｎ＝４０８８９ｇ／ｍｏｌ。ＰＤＩ＝１．４３。ｄｎ／ｄｃ＝０．０４９９６７。
例２０．３．ｇａｌ−［ＤＭＡＥＭＡ］−［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］の合成
［００３６５］合成は、例２０．２に記載したように行った。始めに、連鎖移動剤としてＥＣＴの代わりにガラクトース−ＣＴＡ（例２０．１，ｃｐｄ４）を使用したことを除いて、ガラクトース−ＤＭＡＥＭＡマクロ−ＣＴＡを調製した（例２０．２．Ａ．）。結果として、末端がガラクトースで官能化されたポリＤＭＡＥＭＡが得られた（図１３）。その後、例２０．２．Ｂに記載した第２のブロック［ＢＭＡ−ＰＡＡ−ＤＭＡＥＭＡ］を合成するために、ガラクトース−［ＤＭＡＥＭＡ］−マクロ−ＣＴＡを使用した。合成の後、１００ｍＭ炭酸水素ナトリウムバッファー（ｐＨ８．５）中で２時間インキュベーションすることにより、ガラクトースにおけるアセチル保護基を除去し、透析し、凍結乾燥した。ＮＭＲ分光分析を使用して、ポリマーにおける脱保護されたガラクトースの存在を確認した。
例２０．４．［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］およびＤＭＡＥＭＡ−ＭＭＡ（ＮＨＳ）−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ジブロックコポリマーの調製および特徴づけ
［００３６６］ポリマー合成は、第１のブロックコポリマーの所望の組成を得るためのモノマー供給比を用いて、例２０．２に記載の通りに（および図１４に概説される通りに）行った。図１５は、第１のブロックにおけるコポリマー比が７０：３０である［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］の合成および特徴づけの概要を示す。
例２０．５．ガラクトース−ＰＥＧ−アミンとＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）の結合による［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（Ｇａｌ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーの作製
［００３６７］図１６は、ガラクトース官能化ＤＭＡＥＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）またはＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）ジブロックコポリマーの調製を示す。ポリマー［ＤＭＡＥＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］または［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］を、１〜２０ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＦ中に溶解した。例２０．１（化合物３）に記載したように調製したガラクトース−ＰＥＧ−アミンを、１〜２当量のトリエチルアミンで中和し、５：１のアミン：ポリマー比で反応混合物に加えた。反応は、３５℃で６〜１２時間行い、等容量のアセトンを加え、脱イオン化水に対して１日間透析し、凍結乾燥した。
例２０．６．ｓｉＲＮＡと［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］との結合による［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＲＮＡ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーの作製
［００３６８］図１７ＡおよびＢは、例２０．４に記載のとおりに作製したＮＨＳ含有ポリマーに結合し得る２つの修飾されたｓｉＲＮＡの構造を示す。ｓｉＲＮＡｓは、Ａｇｉｌｅｎｔ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）から得た。図１７Ｃは、ＮＨＳ含有ポリマーを誘導体化してチオール化ＲＮＡ（図１７Ｂ）の結合に対するジスルフィド反応基を提供するピリジルジスルフィドアミンの構造を示す。
［００３６９］ＮＨＳ含有ポリマーとアミノ−ジスルフィド−ｓｉＲＮＡの反応。この反応は、有機溶媒からなる標準的な条件下（例えば、ＤＭＦもしくはＤＭＳＯ、または混合溶媒ＤＭＳＯ／バッファー ｐＨ７．８．）、３５℃で４〜８時間行い、等容量のアセトンを加え、脱イオン化水に対して１日間透析し、凍結乾燥した。
［００３７０］ＮＨＳ含有ポリマーとピリジル−ジスルフィド−アミンおよびチオール化ｓｉＲＮＡとの反応。ピリジルジスルフィドアミンとＮＨＳ含有ポリマーの反応を例２０．５に記載の通りに行う。続いて、凍結乾燥されたポリマーをエタノール中に５０ｍｇ／ｍｌで溶解し、ｐＨ８の炭酸水素ナトリウムバッファー中に１０倍に希釈する。チオール化ｓｉＲＮＡ（図１７Ｂ）を、ポリマーＮＨＳ基よりも２〜５モル濃度過剰に、３５℃、４〜８時間反応させ、リン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に対して透析する。
例２０．７．治療用ペプチドとピリジル−ジスルフィド修飾ポリマーの結合
［００３７１］例２０．６に記載したピリジル−ジスルフィド修飾ポリマー［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ＮＨＳ）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］は、治療用ペプチドとの結合のためにも使用し得る（図１７Ｄ）。ペプチドを合成し、結合のために調製し、結合反応を以下に示すように行い、［ＰＥＧＭＡ−ＭＡＡ（ペプチド）］−［Ｂ−Ｐ−Ｄ］ポリマーを作製する。
［００３７１］ペプチドトランスダクションドメインペプチドであるトランスポーチン（アンテナペディアペプチド（Ａｎｔｐ）配列としても既知）との融合は、カルボキシ末端システイン残基を含むＢａｋ−ＢＨ３ペプチド（Ａｎｔｐ−ＢＨ３）（ＮＨ２−ＲＱＩＫＩＷＦＱＮＲＲＭＫＷＫＫＭＧＱＶＧＲＱＬＡＩＩＧＤＤＩＮＲＲＹＤＳＣ−ＣＯＯＨ）の細胞内部移行形態を合成するために使用される。結合のための遊離チオールを保証するために、ペプチドを水中に再構築し、アガロースゲル内に固定化されたジスルフィド還元剤ＴＣＥＰで１時間処理する。還元ペプチド（４００μＭ）を、その後、５ｍＭエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有するリン酸緩衝液（ｐＨ７）中で、ピリジルジスルフィドで末端を官能化されたポリマーと２４時間反応させる。
［００３７２］ピリジルジスルフィドポリマー末端基とペプチドシステインとの反応によって２−ピリジンチオンが得られ、結合効率を特徴付けるために分光光度的に測定され得る。ジスルフィド交換のさらなる確認のために、結合体をＳＤＳ−ＰＡＧＥ１６．５％トリシンゲル上を泳動させる。並行して、結合反応の一部をＳＤＳ−ＰＡＧＥの前に固定化したＴＣＥＰで処理し、還元環境下におけるポリマーからのペプチドの放出を確認する。
［００３７３］結合反応は、１、２および５のポリマー／ペプチド化学量論で行う。２−ピリジンチオン放出に対する３４３ｎｍでのＵＶ分光光度吸収測定は、結合効率を示す。ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルは、ペプチド−ポリマー結合体をさらに特徴付けるために使用する。ポリマー／ペプチドモル比が１の場合、検出可能な量のペプチドは、末端システインを介したジスルフィド架橋によりダイマーを形成する。しかしながら、ピリジルジスルフィドに対するチオール反応が有利であり、遊離ペプチドのバンドは、等しい〜２より大きいポリマー／ペプチド比において、もはや見られない。これらのサンプルにおけるペプチドバンドの出現により示されるように、結合体を還元剤ＴＣＥＰで処理することにより、ポリマー−ペプチドジスルフィド結合を切断することができる。

Claims (77)

  1. 複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、前記コアブロックはコポリマーブロックであり、およびここにおいて前記シェルブロックはほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるミセル集合体。
  2. 複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、前記第１の帯電可能種は疎水性的に保護されており、およびここにおいて前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるセル集合体。
  3. 複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種およびほぼ中性のｐＨにおいて陽イオン性である第２の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、および前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて親水性であるセル集合体。
  4. 複数の膜不安定化ブロックコポリマーを含むミセル集合体であって、前記ミセル集合体はコアおよびシェルを含み、ここにおいて前記コアは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のコアブロックを含み、ここにおいて前記シェルは前記膜不安定化ブロックコポリマーの複数のシェルブロックを含み、ここにおいて、前記コアブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて陰イオン性である第１の帯電可能種を含むｐＨ依存性膜不安定化疎水性物質であり、および前記シェルブロックは、ほぼ中性のｐＨにおいて温度非依存性親水性物質であるセル集合体。
  5. 前記膜不安定化ブロックコポリマーは、約６．５以下、約５．０から約６．５、または約６．２以下のｐＨにおいて膜を不安定化する、請求項１から４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  6. 前記膜不安定化ブロックコポリマーはジブロックコポリマーである、請求項１から５の何れか１項に記載のミセル集合体。
  7. 前記膜不安定化ブロックコポリマーは、２．０未満、１．８未満、１．６未満、１．５未満、１．４未満、１．３未満または１．２未満の多分散指数を有する、請求項１から６の何れか１項に記載のミセル集合体。
  8. 前記膜不安定化ブロックコポリマーは第３のブロックを含む、請求項１から７の何れか１項に記載のミセル集合体。
  9. 前記シェルはポリエチレングリコール基を含む、請求項１から８の何れか１項に記載のミセル集合体。
  10. 前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックはポリエチレングリコールであるか、またはポリエチレングリコールを含む、請求項１から５の何れか１項に記載のミセル集合体。
  11. 前記シェルブロックは複数のシェルモノマー単位を含み、１以上の前記複数のシェルモノマー単位はＰＥＧ基によって置換されまたは官能化されている、請求項１０に記載のミセル集合体。
  12. 約６．２から７．５のｐＨ範囲にわたる前記ミセル集合体の形態は、ミセル、擬似ミセルまたはミセル様構造である、請求項１から１１の何れか１項に記載のミセル集合体。
  13. 約６．２から７．５のｐＨ範囲にわたる前記ミセル集合体の形態はミセルである、請求項１２に記載のミセル集合体。
  14. １以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの少なくとも１つのブロックはグラジエントブロックである、請求項１から１３の何れか１項に記載のミセル集合体。
  15. 前記ミセル集合体は少なくとも１つの研究試薬を含む、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  16. 前記ミセル集合体は少なくとも１つの診断薬を含む、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  17. 前記ミセル集合体は少なくとも１つの治療薬を含む、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  18. 前記治療薬は前記ミセル集合体の前記シェルに存在する、請求項１７に記載のミセル集合体。
  19. 前記治療薬が、共有結合、非共有結合性相互作用またはそれらの組合せによって、前記ミセル集合体における少なくとも１つの前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックに結合している、請求項１８に記載のミセル集合体。
  20. 付加的な治療薬が前記ミセル集合体の前記コア部分内に存在する、請求項１９に記載のミセル集合体。
  21. それぞれのミセル集合体が、平均で１−５、５−２５０、５−１０００、２５０−１０００、少なくとも２、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０または少なくとも５０の治療薬を含む、請求項１７に記載のミセル集合体。
  22. 前記治療薬が少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１７に記載のミセル集合体。
  23. 前記治療薬は、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、遺伝子発現修飾因子、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアプタマーである、請求項１７に記載のミセル集合体。
  24. 前記治療薬が、タンパク質、ペプチド、酵素、抗体または抗体断片である、請求項１７に記載のミセル集合体。
  25. 前記治療薬が、炭水化物または約５００ダルトンを超える分子量を有する小分子である、請求項１７に記載のミセル集合体。
  26. １以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーが治療薬に結合している、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  27. １以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーが第１の治療薬に結合しており、１以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーが第２の治療薬に結合している、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  28. １以上の複数の膜不安定化ブロックコポリマーが第１の治療薬に結合しており、１以上の付加的なポリマーが第２の治療薬に結合している、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  29. １以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックが少なくとも１つのヌクレオチド、少なくとも１つの炭水化物または少なくとも１つのアミノ酸を含む、請求項１から１４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  30. 前記少なくとも１つのヌクレオチドが少なくとも１つのリボヌクレオチドである、請求項２９に記載のミセル集合体。
  31. 前記少なくとも１つのヌクレオチドが、遺伝子発現修飾因子、ノックダウン剤、ｓｉＲＮＡ、ＲＮＡｉ剤、ダイサー基質、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはアプタマーである、請求項３０に記載のミセル集合体。
  32. 前記ノックダウン剤が、ｓｉＲＮＡ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｍｉＲＮＡまたはｓｈＲＮＡである、請求項３１に記載のミセル集合体。
  33. 前記ミセル集合体が少なくとも１つのターゲッティング成分を含む、請求項１から３２の何れか１項に記載のミセル集合体。
  34. １以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、（ａ）帯電しておりもしくは帯電可能であり、または（ｂ）帯電していない、請求項１から３２の何れか１項に記載のミセル集合体。
  35. １以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックは、（ａ）ほぼ中性のｐＨでポリカチオン性であり；（ｂ）ほぼ中性のｐＨでポリアニオン性であり；（ｃ）ほぼ中性のｐＨで帯電しておらず；または（ｄ）ほぼ中性のｐＨで両性イオン性である、請求項３４に記載のミセル集合体。
  36. 前記シェルブロックは陽イオン性帯電可能のおよび非陽イオン性のモノマー単位を含む、請求項３５に記載のミセル集合体。
  37. １以上の前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記シェルブロックがホモポリマーブロックである、請求項１から３６の何れか１項に記載のミセル集合体。
  38. 前記シェルブロックが、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレートモノマー単位、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレートモノマー単位、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリレートモノマー単位またはそれらの組合せを含む、請求項３７に記載のミセル集合体。
  39. 前記コアが少なくとも１つの第１の帯電可能種および少なくとも１つの第２の帯電可能種を含み、ここにおいて前記第１の帯電可能種は陰イオン種に帯電可能か、または帯電しており、ここにおいて前記第２の帯電可能種は陽イオンに帯電可能か、または帯電しており、および前記コアに存在する第１の帯電可能種と第２の帯電可能種との比は約１：４から約４：１である、請求項１から３８の何れか１項に記載のミセル集合体。
  40. 前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比が、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：４から約４：１である、請求項１から３９の何れか１項に記載のミセル集合体。
  41. 前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比が、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：２から約２：１である、請求項４０に記載のミセル集合体。
  42. 前記コアにおける正に帯電した基と負に帯電した基との比が、ほぼ中性のｐＨにおいて約１：１．１から約１．１：１である、請求項４１に記載のミセル集合体。
  43. 前記第１の帯電可能種が第１のモノマー単位上に存在し、前記第２の帯電可能種が第２のモノマー単位上に存在する、請求項４２に記載のミセル集合体。
  44. 前記コアに存在する第１のモノマー単位の数と第２のモノマー単位の数との比は、約１：４から約４：１である、請求項４３に記載のミセル集合体。
  45. 前記コアブロックが少なくとも１つの第１の帯電可能なモノマー単位および少なくとも１つの第２の帯電可能なモノマー単位を含む、請求項１から４４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  46. 前記第１の帯電可能なモノマー単位がブレンステッド酸である、請求項４５に記載のミセル集合体。
  47. 少なくとも８０％の前記第１の帯電可能なモノマー単位が、約７．４のｐＨにおいて、Ｈ＋の喪失によって陰イオン種に帯電している、請求項４５に記載のミセル集合体。
  48. ５０％未満の第１の帯電可能なモノマー単位が、約６のｐＨにおいて陰イオン種に帯電している、請求項４５に記載のミセル集合体。
  49. 前記第１の帯電可能なモノマー単位が（Ｃ２−Ｃ８）アルキルアクリル酸である、請求項４５に記載のミセル集合体。
  50. 前記第２の帯電可能なモノマー単位がブレンステッド塩基である、請求項４５に記載のミセル集合体。
  51. 少なくとも４０％の第２の帯電可能なモノマー単位が、約７．４のｐＨにおいて、Ｈ＋の取得により陽イオン種に帯電している、請求項４５に記載のミセル集合体。
  52. 前記第２の帯電可能なモノマー単位が、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−エタクリレート、Ｎ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−メタクリレートまたはＮ，Ｎ−ジ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アミノ（Ｃ１−Ｃ６）アルキル−アクリラートである、請求項５１に記載のミセル集合体。
  53. 前記コアブロックがさらに少なくとも１つの非帯電可能なモノマー単位を含む、請求項４５に記載のミセル集合体。
  54. 前記非帯電可能なモノマー単位が、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−エタクリレート、（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−メタクリレートまたは（Ｃ２−Ｃ８）アルキル−アクリラートである、請求項５３に記載のミセル集合体。
  55. 前記ミセル集合体が約１０ｎｍから約２００ｎｍの平均流体力学的径を有する、請求項１から５４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  56. 前記ミセル集合体が約２０ｎｍから約１００ｎｍの平均有効直径を有する、請求項６５に記載のミセル集合体。
  57. 前記ミセル集合体が約３０ｎｍから約８０ｎｍの平均有効直径を有する、請求項５６に記載のミセル集合体。
  58. 前記ミセル集合体が自己組織化する、請求項１から５７の何れか１項に記載のミセル集合体。
  59. 前記ミセル集合体が、約６．５から約７．５の範囲内のｐＨにおいて、水性媒質中で自己組織化する、請求項１から５８の何れか１項に記載のミセル集合体。
  60. 前記ミセル集合体が、約５．０から約７．４の範囲内のｐＨにおいて、水性媒質中で膜を不安定化する請求項１から５９の何れか１項に記載のミセル集合体。
  61. 前記ミセル集合体が、約７のｐＨよりも約５のｐＨにおいてより大きな正味の陽イオン性の電荷を含む、請求項１から６０の何れか１項に記載のミセル集合体。
  62. 前記ミセル集合体の電荷の絶対値が約７のｐＨよりも約５のｐＨの場合の方が大きい、請求項１から６１の何れか１項に記載のミセル集合体。
  63. 前記コアブロックの数平均分子量と前記シェルブロックの数平均分子量との比が約１：１から約５：１である、請求項１から６２の何れか１項に記載のミセル集合体。
  64. 前記コアブロックの数平均分子量と前記シェルブロックの数平均分子量との比が約２：１である、請求項６３に記載のミセル集合体。
  65. 前記コアブロックが約１０，０００ダルトンから約１００，０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有する、請求項１から６４の何れか１項に記載のミセル集合体。
  66. 前記シェルブロックが、約５，０００ダルトンから約２０，０００ダルトンの数平均分子量（Ｍｎ）を有する、請求項１から６５の何れか１項に記載のミセル集合体。
  67. 前記ミセル集合体が約７．４のｐＨにて安定である、請求項１から６６の何れか１項に記載のミセル集合体。
  68. 前記ミセル集合体が、約７．４のｐＨよりも約５．８のｐＨの場合の方が実質的に安定性が低い、請求項６６に記載のミセル集合体。
  69. 前記ミセル集合体が約１０μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定である、請求項１から６８の何れか１項に記載のミセル集合体。
  70. 前記ミセル集合体が約１００μｇ／ｍＬ以上の濃度において安定である、請求項１から６９の何れか１項に記載のミセル集合体。
  71. 前記膜不安定化ブロックコポリマーが、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第１の帯電可能種を含み、ここにおいてそれぞれの第１の帯電可能種は、陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している、請求項１から７０の何れか１項に記載のミセル集合体。
  72. 前記膜不安定化ブロックコポリマーが、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える第２の帯電可能種を含み、ここにおいてそれぞれの第２の帯電可能種が、陽イオン種に帯電可能であるか、帯電している、請求項１から７１の何れか１項に記載のミセル集合体。
  73. 前記膜不安定化ブロックコポリマーの前記コアブロックが、５を超える、２０を超える、５０を超えるまたは１００を超える帯電可能種を含み、前記帯電可能種は陰イオン種に帯電可能であるか、帯電している、請求項１から７２の何れか１項に記載のミセル集合体。
  74. 前記シェルブロックの電荷状態は、ほぼ中性のｐＨおよびほぼエンドソームのｐＨにおいて実質的に同じである、請求項１から７３の何れか１項に記載のミセル集合体。
  75. 以下を含む、複数のブロックコポリマーを含むミセル集合体：
    （ａ）正常な生理的ｐＨにおいて親水性である第１の構成単位を含む第１のブロック；および
    （ｂ）以下を含む第２のブロック：
    （ｉ）正常な生理的ｐＨにおいて陽イオン性であり、前記第１の構成単位と同一または異なるものであり得る第２の構成単位；
    （ｉｉ）正常な生理学的なｐＨにおいて陰イオン性である第３の構成単位；
    （ｉｉｉ）前記第２のブロックの前記第２の構成単位、前記第３の構成単位、第４の構成単位またはそれらの組合せに共有結合している疎水性促進成分。
  76. 前記第２のブロックが全体の電荷において実質的に中性である、請求項７５に記載のミセル集合体。
  77. 下式Ｉの複数のブロックコポリマーを含むミセル集合体：
    Figure 2011522070
     ここにおいて、
    Ａ０、Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、−Ｃ−、−Ｃ−Ｃ−、−Ｃ（Ｏ）（Ｃ）ａＣ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ（Ｃ）ａＣ（Ｏ）−および−Ｏ（Ｃ）ｂＯ−から成る群から選択され；ここにおいて、
    ａは１−４であり；
    ｂは２−４であり；
    Ｙ４は、水素、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（３Ｃ−６Ｃ）シクロアルキル、Ｏ−（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（１Ｃ−１０Ｃ）、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリールおよび（６Ｃ−１０Ｃ）およびアリールから成る群から選択され、これらのいずれかは任意に１以上のフッ素基で置換され；
    Ｙ０、Ｙ１およびＹ２は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−ＯＣ（Ｏ）（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｏ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−および−Ｓ（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６（２Ｃ−１０Ｃ）アルキル−、−（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリール−および−（６Ｃ−１０Ｃ）アリール−から成る群から独立に選択され；
    Ｙ３は、共有結合、（１Ｃ−１０Ｃ）アルキル、（４Ｃ−１０Ｃ）ヘテロアリールおよび（６Ｃ−１０Ｃ）アリールから成る群から選択され；ここにおいて
    Ｒ１−Ｒ５およびＹ０−Ｙ４で完全には置換されていないＡ１−Ａ４の４価の炭素原子は、適切な数の水素原子で補完され；
    Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、水素、−ＣＮ、アルキル、アルキニル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールから成る群から独立に選択され、これらのいずれかは１以上のフッ素原子で任意に置換され；
    Ｑ０は、生理学的なｐＨにて親水性である残基、結合可能もしくは官能化可能残基または水素から成る群から選択される残基であり；
    Ｑ１は、生理学的なｐＨにて親水性である残基であり；
    Ｑ２は、生理学的なｐＨにて正に帯電した残基であり；
    Ｑ３は、生理学的なｐＨにて負に帯電しているが、より低いｐＨにてプロトン化を受ける残基であり；
    ｍは約０から１．０未満（例えば０から約０．４９）であり；
    ｎは０より大きい値から約１．０（例えば約０．５１から約１．０）であり；ここにおいて
    ｍ＋ｎ＝１であり
    ｐは約０．１から約０．９であり；
    ｑは約０．１から約０．９であり；ここにおいて：
    ｒは０から約０．８であり；ここにおいて
    ｐ＋ｑ＋ｒ＝１であり、
    ｖは、約５から約２５ｋＤａであり；および、
    ｗは、約５から約５０ｋＤａである。
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