JP2011507903A5

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Publication number: JP2011507903A5
Application number: JP2010539882A
Authority: JP
Filing date: 2008-12-19
Publication date: 2013-01-17
Anticipated expiration: 2028-12-19

Claims

ＮｏｇｇｉｎまたはＮｏｇｇｉｎ様タンパク質による阻害に耐性であるタンパク質であって、改変骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含み、
（ａ）ヒトＢＭＰ−６の第一の置換アミノ酸Ｌｙｓ６０ならびにヒトＢＭＰ−６のＶａｌ４５、Ｇｌｎ４８、Ａｓｐ４９、Ｌｙｓ５０、Ｇｌｎ５３、Ｉｌｅ５７、Ｇｌｙ６１、Ａｌａ６３、Ａｓｎ６５、Ｔｙｒ６６、Ａｓｐ６８、Ｇｌｕ７０、Ｓｅｒ７２、Ａｓｎ７６、Ａｌａ７７、Ｈｉｓ７８、Ｍｅｔ７９およびＡｓｎ８０からなる群より選択される第二の置換アミノ酸が、野生型ＢＭＰにおける対応する位置の少なくとも２つのアミノ酸を置換し、かつ
（ｂ）前記第一および第二の置換アミノ酸が、前記野生型ＢＭＰの、対応する位置の前記少なくとも２つのアミノ酸と異なる
タンパク質。
ＮｏｇｇｉｎまたはＮｏｇｇｉｎ様タンパク質による阻害に耐性であるタンパク質であって、改変骨形成タンパク質（ＢＭＰ）を含み、
（ａ）野生型ヒトＢＭＰ−６のＶａｌ４５〜Ａｓｎ８０が、他の点では野生型のヒトＢＭＰにおける対応するセグメントを置換し、かつ
（ｂ）置換された前記対応するセグメントが、野生型ＢＭＰ−６の前記Ｖａｌ４５〜Ａｓｎ８０と同一ではない
タンパク質。
Ｄ２２Ｓ、Ｓ２４Ｑ、Ｖ２６Ｌ、Ｎ２９Ｑ、Ｖ３３Ｉ、Ｐ３６Ｋ、Ｈ３９Ａ、Ｆ４１Ｎ、Ｈ４４Ｄ、Ｐ４８Ｓ、Ａ５２Ｎ、Ｄ５３ＡおよびＬ５５Ｍからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−２タンパク質であって、一つの置換は、Ｐ３６Ｋであり、かつ他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−２と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−２のＣ末端領域における保存されたシステインドメインと少なくとも９３％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
位置Ｐ３６におけるアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−２タンパク質であって、前記改変ＢＭＰ−２は、野生型ＢＭＰ−２のＣ末端領域における保存されたシステインドメインと少なくとも９３％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｄ２４Ｓ、Ｓ２６Ｑ、Ｖ２８Ｌ、Ｎ３１Ｑ、Ｖ３５Ｉ、Ｐ３８Ｋ、Ｑ４１Ａ、Ｆ４３Ｎ、Ｈ４６Ｄ、Ｄ４８Ｅ、Ｐ５０Ｓ、Ａ５４Ｎ、Ｄ５５ＡおよびＬ５７Ｍからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−４タンパク質であって、一つの置換は、Ｐ３８Ｋであり、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−４と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−４のＣ末端領域における保存されたシステインドメインと少なくとも９３％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｒ４１Ｑ、Ｅ５３ＫおよびＦ５８Ｎからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−５タンパク質であって、一つの置換は、Ｅ５３Ｋであり、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−５と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−５のＣ末端領域における保存されたシステインドメインと少なくとも９３％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
アミノ酸置換Ｅ６０ＫならびにＲ４８Ｑ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７ＡおよびＹ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｒ４８Ｑ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２ＳおよびＳ７７Ａからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｒ４８Ｑ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７Ａ、Ｙ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
アミノ酸置換Ｅ６０ＫならびにＲ４８Ｑ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７ＡおよびＹ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも２つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｒ４８Ｑ、Ｅ６０Ｋ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７ＡおよびＹ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
アミノ酸置換Ｅ６０ＫならびにＲ４８Ｑ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７ＡおよびＹ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも３つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｒ４８Ｑ、Ｅ６０Ｋ、Ｙ６５Ｎ、Ｅ６８Ｄ、Ａ７２Ｓ、Ｓ７７ＡおよびＹ７８Ｈからなる群より選択される少なくとも４つのアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＢＭＰ−７と同一であるか、または野生型ＢＭＰ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８９％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｎ２７Ｓ、Ｋ２９Ｑ、Ｍ３１Ｌ、Ｄ３４Ｑ、Ｌ４１Ｋ、Ｅ４２Ｇ、Ｅ４４Ａ、Ｆ４６Ｎ、Ｈ４７Ｙ、Ｅ４９Ｄ、Ｌ５１Ｅ、Ｅ５３Ｓ、Ｒ５７Ｎ、Ｓ５８Ａ、Ｌ６０ＭおよびＥ６１Ｎからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む改変ＧＤＦ−５タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＧＤＦ−５と同一であるか、または野生型ＧＤＦ−５のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８７％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｎ２７Ｓ、Ｋ２９Ｑ、Ｅ３０Ｄ、Ｄ３４Ｑ、Ｌ４１Ｋ、Ｅ４２Ｇ、Ｅ４４Ａ、Ｙ４６Ｎ、Ｈ４７Ｙ、Ｅ４８Ｄ、Ｖ５１Ｅ、Ｄ５３Ｓ、Ｒ５７Ｎ、Ｓ５８Ａ、Ｌ６０ＭおよびＥ６１Ｎからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む改変ＧＤＦ−６タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＧＤＦ−６と同一であるか、または野生型ＧＤＦ−６のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも９７％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
Ｄ３６Ｓ、Ｋ３８Ｑ、Ｅ３９Ｄ、Ｄ４３Ｑ、Ｌ５０Ｋ、Ｄ５１Ｇ、Ｅ５３Ａ、Ｙ５５Ｎ、Ｈ５６Ｙ、Ｅ５８Ｄ、Ｌ６０Ｅ、Ｄ６２Ｓ、Ｒ６６Ｎ、Ｓ６７Ａ、Ｌ６９Ｍ、Ｅ７０Ｎからなる群より選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む改変ＧＤＦ−７タンパク質であって、他のすべての残基が、野生型ＧＤＦ−７と同一であるか、または野生型ＧＤＦ−７のＣ末端領域の保存されたシステインドメインと少なくとも８７％のアミノ酸配列同一性を共有する、タンパク質。
前記改変ＢＭＰを含むタンパク質が、前記改変タンパク質の野生型ＢＭＰの対応物と比較して、ＮｏｇｇｉｎまたはＮｏｇｇｉｎ様タンパク質による生物活性阻害の低減を示す、請求項１に記載のＮｏｇｇｉｎまたはＮｏｇｇｉｎ様タンパク質による阻害に耐性であるタンパク質。
請求項１に記載のタンパク質を、薬学的に許容される担体と混合されて含む医薬組成物。
アミノ酸置換Ｒ４８ＱおよびＳ７７Ａを含む、請求項８または９に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｒ４８ＱおよびＥ６０Ｋを含む、請求項７に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｅ６０ＫおよびＹ６５Ｎを含む、請求項７に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｒ４８Ｑ、Ｅ６０ＫおよびＳ７７Ａを含む、請求項１０に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｒ４８Ｑ、Ｅ６０ＫおよびＹ６５Ｎを含む、請求項１０に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｅ６０Ｋ、Ｙ６５ＮおよびＡ７２Ｓを含む、請求項１０に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｒ４８Ｑ、Ｅ６０Ｋ、Ｙ６５ＮおよびＡ７２Ｓを含む、請求項１２に記載の改変ＢＭＰ−７タンパク質。
アミノ酸置換Ｌ４１Ｋを含む、請求項１４に記載の改変ＧＤＦ−５タンパク質。
アミノ酸置換Ｌ４１Ｋを含む、請求項１５に記載の改変ＧＤＦ−６タンパク質。
アミノ酸置換Ｌ５０Ｋを含む、請求項１６に記載の改変ＧＤＦ−７タンパク質。
請求項１から１７および１９から２８に記載のタンパク質のいずれか１つをコードする核酸。
請求項２９に記載の核酸を含むベクター。
請求項１から１７および１９から２８に記載のタンパク質のいずれか１つを、薬学的に許容される担体と混合されて含む医薬組成物。
骨または軟骨修復が必要な患者を治療するための請求項３１に記載の医薬組成物。
前記患者がヒトである、請求項３２に記載の医薬組成物。
位置Ｅ６０ならびにＲ４８、Ｙ６５、Ｅ６８、Ａ７２、Ｓ７７およびＹ７８からなる群より選択される少なくとも１つの他の位置でアミノ酸置換を含む改変ＢＭＰ−７であって、ＢＭＰ−７活性を有する改変ＢＭＰ−７。
前記位置６０の置換がＫ、Ｒ、Ｈ、ＮまたはＱ残基である、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置４８で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
前記位置４８の置換がＱ、Ｎ、Ｗ、ＹまたはＦ残基である、請求項３６に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置６５で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
前記位置６５の置換がＮ、Ｑ、Ｈ、ＫまたはＲ残基である、請求項３８に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置６５および７２で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
前記位置７２の置換がＳ、Ｔ、Ｙ、ＮまたはＱ残基である、請求項４０に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置４８、６０、６５および７２で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置４８、６０および６５で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。
置換が位置４８、６０および７７で起こる、請求項３４に記載の改変ＢＭＰ−７。