JP7308151B2 - ヒトbmp7タンパク質のバリアント - Google Patents
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Description
固形腫瘍におけるがん幹様細胞(CSC)は、がんの発生及び不良な治療転帰に寄与すると言われている。自己再生し得る、分化し得る、及び抗がん療法に抵抗し得る能力は、これら希少細胞の証であり、それらを分化系列決定(lineage commitment)に導くことは、がんの発生または進行を抑える1つのストラテジーであり得る。しかしながら、この手法の認められた潜在性にもかかわらず、腫瘍細胞の分化転換を誘導しかつ従来の化学療法及び放射線療法による殺傷に対して抵抗性を示さないまたは低い抵抗性を示す系列にCSCを戻す、有効ながん療法に対する必要性が依然として残る(例えば、Li,R.,et al.,Oncotarget.2016 Oct 18;7(42):68360-68370を参照されたい)。
Xaa33はDまたはMであり;Xaa37はAまたはPであり;Xaa60はEまたはQであり;Xaa65はY、S、またはGであり;Xaa86はI、V、またはLであり;Xaa87はVまたはLであり;Xaa89はT、S、またはAであり;Xaa91はVまたはMであり;Xaa93はFまたはVであり;Xaa94はI、F、またはMであり;Xaa110はGであり;Xaa114はVまたはMであり;Xaa120はSまたはQであり;Xaa128はY、F、またはWであり;Xaa132はV、Q、またはSであり;かつXaa134はRまたはKである。
Xaa33はDまたはMであり;Xaa37はAまたはPであり;Xaa60はEまたはQであり;Xaa65はY、S、またはGであり;Xaa86はI、V、またはLであり;Xaa87はVまたはLであり;Xaa89はT、S、またはAであり;Xaa91はVまたはMであり;Xaa93はFまたはVであり;Xaa94はI、F、またはMであり;Xaa110はGであり;Xaa114はVまたはMであり;Xaa120はSまたはQであり;Xaa128はY、F、またはWであり;Xaa132はV、Q、またはSであり;かつXaa134はRまたはKであり、
当該バリアントタンパク質のN末端は、配列番号:18のヒトBMP7プロドメイン配列のC末端に共有結合で融合している。
ATRA:全トランス型レチノイン酸
BMP7:骨形態形成タンパク質7
DMSO:ジメチルスルホキシド
EGF:上皮成長因子
PBS:リン酸緩衝生理食塩水
PNPP:p-ニトロ-フェニルリン酸二ナトリウム塩
VEGF:血管内皮成長因子
WT:野生型
発現方法
本発明のヒトBMP7タンパク質及びヒトBMP7タンパク質のバリアントは、ヒトBMP7タンパク質またはそのバリアントの発現を誘導するまたは引き起こす適当な条件下で、ヒトBMP7タンパク質またはそのバリアントをコードする核酸を含有する発現ベクターで形質転換された宿主細胞を培養することによって産生され得る。一過性のまたは安定したトランスフェクション法のいずれかを用い得る。BMP7タンパク質またはそのバリアントの発現に適当な条件は、発現ベクター及び宿主細胞の選定によって変動し得、ルーチン的実験を通じて当業者によって解明され得る。
BMP7によるRARアルファ及びRARガンマの刺激
3T3-L1線維芽細胞及びMFc7マウス腎臓筋線維芽細胞は、それぞれDMEM/10%仔ウシ血清培地またはOPTI-MEM/10%FBS培地中、ルーチン的細胞培養条件下で維持され得る。細胞を、10cm組織培養プレートに500,000個細胞/プレートの播種密度で播き得る。48時間後、1μg/mLヒトBMP7タンパク質または1μg/mLのヒトBMP7タンパク質バリアントを含有するDMEM/2%透析FBSまたはOPTI-MEM/2%透析FBS培地のいずれかの添加前に、細胞をPBSで洗浄し得る。細胞を48時間インキュベートし得、次いで氷冷PBSでリンスし得、次いでタンパク質抽出試薬で溶解し得る。次いで、溶解物を、14,000×gで15分間遠心分離し得る。Bradfordタンパク質アッセイを実施して、各溶解物のタンパク質濃度を決定し得る。等量のタンパク質(例えば、25μg)をSDS-PAGEによって分解し得、次いでウェスタンブロット分析のためにニトロセルロース膜に移し得る。膜を、抗RARアルファ抗体及び/または抗RARガンマ抗体でプローブし得る。
3T3-L1及びMFc7細胞におけるヒトBMP7タンパク質及びATRAを用いた組み合わせ処理
3T3-L1線維芽細胞及びMFc7マウス腎臓筋線維芽細胞は、本質的には上の実施例2に記載されるように成長し得る。48時間後、対照ビヒクル、1μg/mlヒトプロBMP7タンパク質、1μM ATRA、またはヒトBMP7タンパク質(1μg/ml)及びATRA(1μM)の両方の組み合わせを含有するDMEM/2%透析FBSまたはOPTI-MEM/2%透析FBS培地のいずれかが48時間添加され得る前に、細胞をPBSで洗浄し得る。処理の後、細胞をPBSでリンスし得、-80℃でおよそ20分間保存し得る。細胞を37℃で30分間融解し得、100μlのPNPPを全ウェルに添加し得る。プレートを37℃で1時間インキュベートし得る。405nmにおける吸光度をプレートリーダーで読み取り得る。
ATRAと組み合わせてヒトBMP7タンパク質バリアントで処理されたGBM細胞におけるSOX2及びKi67発現
SOX2は、神経幹細胞によって発現される転写因子である。その発現は、細胞が分化した場合に失われる。それゆえ、SOX2は、多能性脳腫瘍細胞の最終分化のマーカーであると見なされる。
多形膠芽細胞腫幹細胞(GBM)は、完全なまたは部分的な外科的切除を受けた未分化脳腫瘍を有する患者から獲得され得る。これらの細胞は、滅菌蒸留水中で再構成された3.34g/LのDMEM及び2.66g/L F12を有しかつ1%グルコース、0.12%重炭酸ナトリウム、5mM hepes、2mM L-グルタミン、4mg/Lヘパリン、10ng/mL bFGF、20ng/mL EGF、0.4%BSA、100μg/mLアポトランスフェリン、25μg/mLインスリン、60uMプトレシン、30nM亜セレン酸ナトリウム、及び20nMプロゲステロンを含有する規定培地中で、ニューロスフェアとして維持され得る。細胞を、5%CO2中37℃で培養し得る。TrypLE(商標)Express細胞解離酵素との37℃で2~5分間のインキュベーションにより、スフェアを単細胞に酵素的に分散させることによって、細胞をプレートに播き得る。酵素は、Ca+及びMg+を含有するダルベッコリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)でクエンチングされ得る。次いで、細胞を遠心分離してTrypLE及びDPBSを除去し得、規定培地中に単細胞として再懸濁し得、Coulter Z2細胞及び粒子カウンターによってカウントし得る。
単一GBM細胞を、ハイコンテントイメージングに関しては2×106個細胞/15mL/T75フラスコで、または光学顕微鏡法に関しては6ウェルプレート中5×105個細胞/2mL/ウェルで規定培地中に播き得る。細胞を、0.01%DMSO、1μg/mL ATRA、100ng/mLの本発明のヒトBMP7タンパク質バリアント(例えば、ヒトBMP7タンパク質バリアントF9(配列番号:8))、または1μg/mL ATRAと100ng/mLの本発明のヒトBMP7タンパク質バリアントとの組み合わせで処理し得る。対照BMP(BMP2及びBMP4)の効果についての光学顕微鏡イメージングに関しては、細胞を上記のように6ウェルディッシュに播き得、0.01%DMSO、1μg/mL ATRA、100ng/mL BMP2、50ng/mL BMP4、または同じ濃度のBMP+1μg/mL ATRAの組み合わせで処理し得る。例となる画像を、処理後3、7、及び30日目に、例えば20×対物を用いたLeica DMIRM倒立顕微鏡で撮り得る。7日間より長い成長に関しては、10日目に始まっておよそ10日ごとに、培地及び処理を変更し得る。
MFc7バイオアッセイを用いたBMP7タンパク質バリアントの特徴付け
MFc7マウス腎臓筋線維芽細胞(マウス腎臓線維芽細胞細胞株)は、OPTI-MEM/10%FBS培地中、ルーチン的細胞培養条件下で維持され得る。細胞を、10cm組織培養プレートに500,000個細胞/プレートの播種密度で播き得る。およそ48時間後、1μg/ml BMP7タンパク質または1μg/mlのBMP7タンパク質バリアントを含有するOPTI-MEM/2%透析胎仔ウシ血清(FBS)培地の添加前に、細胞をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で洗浄し得、48時間インキュベートし得る。処理の後、細胞をPBSでリンスし得、-80℃で20分間保存し得る。細胞を37℃で30分間融解した後、100μlのパラ-ニトロフェニルリン酸(PNPP)を添加し得る。プレートを37℃で1時間インキュベートし得る。405nmにおける吸光度を、プレートリーダーを利用して読み取り得る。本発明のある特定のヒトBMP7タンパク質バリアントの平均相対効力(野生型BMP7タンパク質のEC50/BMP7タンパク質バリアントのEC50)を、そのような読み取りに基づいて算出し得る。
ヒトBMP7タンパク質及びヒトBMP7タンパク質バリアントに対する溶解度アッセイ
ヒトBMP7タンパク質及びヒトBMP7タンパク質バリアントの溶解度/物理的安定性は、撹拌誘導性凝集アッセイにおいて測定され得る。タンパク質を、2mLの総容量までアッセイバッファー(50mMリン酸ナトリウム、150mM NaCl、pH7.4)で40μg/mLに希釈する。この溶液を、1本の「ノミ」スターラーバーを含有する7mLガラスバイアルに入れ得、室温にて400rpmで撹拌し得る。周期的間隔(典型的には、0、30、60、90、120、及び150分間)で、150μLアリコートを1.5mLチューブに取り出し得、16,000×gで2分間遠心分離し得る。上清(120μL)をHPLCバイアルに移し得、残存タンパク質の量を、以下の条件下で逆相HPLCによって決定し得る:Zorbax C8 SB-300(登録商標)カラム(3.5ミクロン、4.6×50mm)、移動相:Aバッファー=水中0.1%TFA(v/v)、Bバッファー=アセトニトリル中0.085%TFA(v/v);流速1mL/分;60℃に加熱されたカラム;10℃に冷却されたオートサンプラー、214nm UV検出、80μLインジェクション、及び下で示される線形勾配を用いた20分間のラン時間。HPLCクロマトグラム(示されず)から、タンパク質の1つまたは複数のピーク(例えば、成熟及びプロドメイン)が積分され、初期ピークエリアからの変化パーセントが算出され得る。
熱アンフォールディングアッセイ
ヒトBMP7タンパク質バリアントの立体構造安定性に対する温度の効果は、熱電サンプルコンパートメントを備えたJasco J-810機器で円偏光二色性(CD)によって追跡され得る。簡潔に述べると、0.2~1.0mg/mLプロBMP7を、保存バッファー(10mMシトレート、300mM NaCl、pH7.4)中に調合し得、0.02cm光路長のCDキュベットに装填し得る。サンプルは1℃/分の線形速度で20から80度まで加熱され得、結果として生じる208nmにおけるCDシグナルは、1秒間のシグナル応答時間を用いて0.2℃おきに記録され得る。方程式1への非線形フィットをJMPプログラム(SAS Institute Inc,Cary,NC)によって実施して、熱アンフォールディング中間点(Tm)を獲得し得る。
異所性骨形成モデル
異所性骨形成(EBF)は、野生型ヒト成熟BMP7と比較して、本発明のある特定のヒトBMP7タンパク質バリアントの皮下投与があると、雌CB17SC-M SCIDマウスにおいて測定され得る。
変形性関節症疼痛のMIAラットモデル
ヒト成熟BMP7タンパク質バリアントF9(配列番号:8)の効果を、OA疼痛のヨード酢酸モノナトリウム(MIA)誘発性ラットモデルにおいて評価し得る(Bove,et.al.,Osteoarthritis and Cartilage,2003,11:821-830)。
軟骨変性の半月板断裂ラットモデル
ヒト成熟BMP7タンパク質バリアント(配列番号:8)の効果を、軟骨変性の半月板断裂(MT)誘発ラットモデルにおいて変形性関節症(OA)疼痛を用いて評価し得る。雄Lewisラット(およそ25週齢)がそのような調査に用いられ得る。簡潔に記載すると、手術前にラットに3%イソフルランで麻酔をかけ得る。右膝関節を屈曲させ得、脛骨の近位前内側面に沿って横正中切開を行い、内側対側靭帯を露出する。対側靭帯及び関節包を同時に切開し得、内側半月板の脛骨付着を解放する。半月板のおよそ3mmを、脛骨プラトーの縁へのその付着から解放し得、半月板を切断して完全な断裂を模倣し得る。切開は、外科用接着剤で閉じられ得る。
ヒト変形性関節症関節軟骨細胞におけるプロテオグリカン合成
ヒト変形性関節症(OA)関節軟骨細胞におけるプロテオグリカン合成は、軟骨細胞活性のインビトロモデルである。ヒト成熟BMP7タンパク質バリアントの効果を、インビトロでのヒトOA関節軟骨細胞におけるプロテオグリカン合成に対しても評価し得、野生型ヒト成熟プロBMP7と比較し得る。プロテオグリカン合成は、35S取り込みを用いて測定され得る。関節炎のヒト膝関節軟骨を、手術時にドナーから獲得する。軟骨片を細かく刻み得、軟骨細胞を、酵素消化によって付随マトリックスから単離し得る。軟骨を、まず、5%Fe補給仔ウシ血清(FCS)及び2%ペニシリン-ストレプトマイシン-抗真菌薬を有するDMEM/PRF(フェノールレッド不含)培地中1mg/mlプロナーゼで消化し得、その後に、5%FCS及び2%ペニシリン-ストレプトマイシン-抗真菌薬を有するDMEM/PRF培地中1mg/mlコラゲナーゼIIでの37℃で一晩の消化が続く。細胞をDMEM/F-12培地で洗浄し得、次いで5%FCSを有するDMEM/F-12中に再懸濁し得、Coulterカウンターでカウントし得る。細胞を、DMEM、5%FCS、ITS(インスリン、トランスフェリン、セレニウム)、及び1%ペニシリン-ストレプトマイシン-抗真菌薬を含有する成長培地中、96ウェルのコラーゲンコーティングされたCytoStar Tプレートに30,000個細胞/ウェルの密度で播き得る。24時間後、培地を、10μCi/ml(1μCi/ウェル)の35Sを含有する100μlの成長培地で置き換え得、様々な用量の野生型ヒトプロBMP7またはヒトプロBMP7タンパク質バリアントで処理し得る。次いで、細胞を、5%CO2を有する37℃でおよそ7日間インキュベートし得る。処理期間の終了時に、培地を除去し得、リン酸緩衝生理食塩水で置き換え得、35S取り込みをWallac 1450 MicroBeta TriLux Liquid Scintillation Counter&Luminometerを用いてカウントする。
軟骨形成アッセイ
野生型ヒト成熟BMP7及びそのバリアントの効果を、ラット初代関節軟骨細胞(RPAC)を利用したインビトロモデルにおける軟骨細胞の分化について評価し得る。RPACを獲得するために、関節軟骨を2~3日齢のラットから単離し得る。軟骨を0.4%コラゲナーゼで2時間消化し得、次いで結果として生じる細胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し得、その後、DMEM、10%FBS、及び1%ペニシリン/ストレプトマイシンを含有する培地中、5%CO2を有する加湿空気中で37℃にて培養し得る。
骨治癒モデル
野生型ヒト成熟BMP7及びそのバリアントの効果を、ラット外科的骨折モデルにおける骨の再生及び修復または骨治癒に対して評価し得る。動物を6ヶ月齢の時点で卵巣切除し得、骨折手術前に2ヶ月間骨を喪失させ得る。皮質欠損手術を、本質的には以前に記載されたように実施し得る(Komatsu,et al.,Endocrinology,150:1570-1579,2009)。簡潔には、手順は、遠位大腿骨幹を露出するために、外側大腿面の皮膚を切開すること及び大腿四頭筋の鈍的剥離を伴う。次いで、2mm整形外科用ドリルビット(Zimmer Inc,Warsaw,IN)を備えたDremelツール(Robert Bosch Tool Corp,Gerlingen,Germany)を用いて、前部及び後部皮質を通じて皮質欠損を生み出し得る。その後、筋肉を元の位置に戻し、皮膚を組織接着剤で閉じ得る。動物の群を、クエン酸ナトリウムバッファーpH3.0中に調製されかつ50μlの容量でHelistat1型コラーゲンスポンジに吸着された様々な量の野生型ヒト成熟BMP7またはそのバリアントで処理し得る。処理は、手術中に欠損の部位に局所的に施され得、35日間処理され得る。対照群は、治療用タンパク質なしでコラーゲンスポンジに同じ構成要素を含有するビヒクルを受け得る。インビボ骨折修復及び骨塩量(BMC)を、以前に記載されたように(Komatsu et al.,2008)、GE Locus Ultra CTスキャナ(GE Healthcare,London,Ontario,Canada)を用いて、定量的コンピューター断層撮影法(QCT)によって評価し得る。
確立される索アッセイ
血管新生の代理であるインビトロ内皮索(endothelial cord)形成アッセイを用いて、VEGF、塩基性FGF、及びEGFにより確立される索を含むがそれらに限定されない様々な成長因子により確立される索に対するヒトBMP7タンパク質の役割を検討し得る。内皮索形成細胞(ECFC;索形成に適した継代4~10代)を、10%FBSの最終濃度を含有するEGM-2 MV(Lonza)培地中で培養し得、インビトロでの索形成アッセイに播種する前に、I型コラーゲン(線維性)コーティングされたフラスコに継代し得る。脂肪細胞由来幹細胞(Zen-Bio、継代4代目で凍結された細胞;継代5代目またはそれを上回る代数における細胞はアッセイされない)を、共培養培地[例えば、30μg/ml L-アスコルビン酸2-リン酸、1μMデキサメタゾン、50μg/mlトブラマイシン、10μg/mlインスリン(すべてSigma-Aldrichから)、及び10μg/ml cell prime r-トランスフェリンAF(Millipore,Billerica,MA)を補給されたMCDB-131培地(Invitrogen)]中、ウェル(96ウェル黒色ポリ-D-リジンコーティングされたプレート)あたり50,000個細胞で播く前に、EGM-2 MV(Lonza)培地中で24時間培養し得る。脂肪細胞由来幹細胞(ADSC)培地を除去し得、ウェルあたり5,000個のECFC(Lonza)を上に重ねて播種し得る。ECFCを播いたおよそ4時間後、索を、10ng/ml VEGF、10ng/ml bFGF、または10ng/ml EGF(すべてBiosource Internationalから)で処理し得、成長因子への曝露をおよそ120時間継続し得る。次いで、PBS対照、本発明のヒトBMP7タンパク質バリアントを含めたヒトBMP7タンパク質(100ng/ml)、またはスニチニブを添加し得、96時間インキュベートし得る。すべての細胞培養インキュベーションは、37℃、5%CO2で行われ得る。次いで、細胞を、3.7%ホルムアルデヒド(Sigma Aldrich)で10分間直接固定し得、その後に25℃で20分間の氷冷70%エタノールが続く。細胞をPBSで1回リンスし得、1%BSAで30分間ブロッキングし得、1%BSA中1μg/mlに希釈したCD31(R&D Systems,Minneapolis,MN)に向けられた抗血清で1時間免疫染色し得る。次いで、細胞をPBSで3回洗浄し得、1%BSA中5μg/mlロバα-ヒツジ-Alexa-488(Invitrogen)、α-平滑筋アクチンCy3抱合体(1:200、Sigma-Aldrich)、及び200ng/ml Hoechst 33342(Invitrogen)とともに1時間インキュベートし得る。その後、細胞をPBSで洗浄し得、次いで、5×の画像倍率でCellomics ArrayScan VTI(Thermo Fisher Scientific,Pittsburgh,PA)にて索形成アルゴリズムを用いて撮像し得る。
ADSC/ECFC共培養物を、CD31(緑)、α-平滑筋アクチン(赤)、及びすべての核を染色するHoechst 33342(青)に対する免疫組織化学の前に、10ng/ml VEGFで刺激しない(基礎)または刺激し、PBSまたは100ng/mlヒトプロBMP7バリアントF9または100nMスニチニブで96時間同時に処理した。結果として生じるCD31陽性内皮索を可視化し、ハイコンテントイメージングを用いて定量した。結果は表12に示されている。値は、%PBS対照、平均±SDを表す;n=8/処理群、PBS対照群においてn=16。
ADSC/ECFC共培養物を、CD31(緑)、α-平滑筋アクチン(赤)、及びすべての核を染色するHoechst 33342(青)に対する免疫組織化学の前に、10ng/ml bFGFで刺激しない(基礎)または刺激し、PBSまたは100ng/mlヒトプロBMP7バリアントF9または100nMスニチニブで96時間同時に処理した。結果として生じるCD31陽性内皮索を可視化し、ハイコンテントイメージングを用いて定量した。結果は表13に示されている。値は、%PBS対照、平均±SDを表す;n=8/処理群、PBS対照群においてn=16。
ADSC/ECFC共培養物を、CD31(緑)、α-平滑筋アクチン(赤)、及びすべての核を染色するHoechst 33342(青)に対する免疫組織化学の前に、10ng/ml EGFで刺激しない(基礎)または刺激し、PBSまたは100ng/mlヒトプロBMP7バリアントF9または100nMスニチニブで96時間同時に処理した。結果として生じるCD31陽性内皮索を可視化し、ハイコンテントイメージングを用いて定量した。結果は表14に示されている。値は、%PBS対照、平均±SDを表す;n=8/処理群、PBS対照群においてn=16。
結腸癌のマウス異種移植モデルにおける腫瘍成長のBMP7タンパク質バリアント阻害異種移植動物モデルを用いて、特異的タイプのがんに対する本発明のヒトBMP7タンパク質バリアントの有効性(対応する野生型ヒトBMP7タンパク質と比較して)を査定し得る。より具体的には、免疫欠陥があるマウスまたはラットモデルにおいて、皮下または同所接種により移植されている段階的腫瘍成長に対して化合物を試験し得る。異種移植調査は、適当な動物モデルの選択、腫瘍形成細胞株の選定、投与方法、投与レジメン、投薬、腫瘍成長速度の分析、及び腫瘍分析(組織学、mRNA及びタンパク質発現レベル)に始まり、非常に複雑であり得る。
BMP7タンパク質バリアントに対する内因性BMP7阻害因子活性
ノギン、Sost、フォリスタチン、ねじれ原腸形成(twisted gastrulation)(TSG)、コーディン(chordin)、ならびにグレムリン(gremlin)、セルベラス(Cerberus)、及びDanファミリーのタンパク質のメンバーなどの内因性BMPアンタゴニストは、例えば、インビボでBMPファミリーのタンパク質に作用して、多様な細胞の成長、分化、及び活性に関係するものを含めたBMP活性を変調する。BMPそれ自身と同様に、様々なアンタゴニストの発現は、厳重な時空制御下にある。(Bone Morphogenic Proteins and Their Antagonists,Vitamins and Hormones(2015),volume99,pages63-90;Editor Gerald Litwackを参照されたい)。ヒトBMP7タンパク質及びそのバリアントに対する様々なBMPアンタゴニストの効果を、本実施例16において下で記載されるようにインビトロアッセイにおいて試験し得る。
Claims (16)
- 配列番号:8のアミノ酸配列を含むポリペプチド。
- 配列番号:4、配列番号:5、配列番号:6、配列番号:7、配列番号:9及び配列番号:10からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むポリペプチド。
- 前記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号:12、配列番号:13、配列番号:14、配列番号:15及び配列番号:16からなる群より選択される請求項1又は2に記載のポリペプチド。
- 請求項1~3のいずれかのポリペプチドと、1種以上の薬学的に許容される賦形剤、希釈剤またはキャリアとを含む薬学的組成物。
- 前記ポリペプチドは、ジスルフィド連結したホモ二量体である請求項4に記載の薬学的組成物。
- 前記組成物は、配列番号:18のアミノ酸配列を有するポリペプチドをさらに含む請求項5に記載の薬学的組成物。
- がんの治療のためのキットであって、前記キットは、
請求項1~3のいずれかのポリペプチドと、許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤とを含む第一の薬学的組成物、ならびに
1種以上の化学療法剤と、許容されるキャリア、希釈剤または賦形剤とを含む第二の薬学的組成物を含む前記キット。 - 前記第一の薬学的組成物は、配列番号:18のアミノ酸配列を有するポリペプチドをさらに含む請求項7に記載のキット。
- がん、軟骨の損傷及び変性、変形性関節症に伴う疼痛または骨治癒の治療のための医薬の製造のための、請求項1~3のいずれかのポリペプチドの使用。
- 前記がんは、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、脳腫瘍、子宮頸癌、皮膚癌、頭頸部癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫または結腸直腸癌である請求項9に記載の使用。
- 請求項1~3のいずれかのポリペプチドは、電離放射線との同時の、別個の、または逐次的な組み合わせで投与される請求項9又は10に記載の使用。
- 請求項1~3のいずれかのポリペプチドは、1種以上の化学療法剤との同時の、別個の、または逐次的な組み合わせで投与される請求項9~11のいずれか1項に記載の使用。
- がんの治療における、化学療法剤を含む薬学的組成物との同時の、別個の、または逐次的な組み合わせでの使用のための、請求項1~3のいずれかのポリペプチドを含む薬学的組成物。
- 請求項1~3のいずれかのポリペプチドを含む薬学的組成物及び/又は化学療法剤を含む薬学組成物は、電離放射線との同時の、別個の、または逐次的な組み合わせで投与されるものである、請求項13に記載の薬学的組成物。
- がんの治療における、電離放射線との同時の、別個の、または逐次的な組み合わせでの使用のための、請求項1~3のいずれかのポリペプチドを含む薬学的組成物。
- 前記がんは、肺癌、非小細胞肺癌(NSCLC)、脳腫瘍、子宮頸癌、皮膚癌、頭頸部癌、膠芽細胞腫、神経芽細胞腫、または結腸直腸癌である請求項13~15のいずれか1項に記載の薬学的組成物。
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