JP2011188745A

JP2011188745A - Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体の調製方法

Info

Publication number: JP2011188745A
Application number: JP2010054874A
Authority: JP
Inventors: Masaya Fujita; 雅也藤田; Akiko Tsuchida; 明子土田; Shinichiro Shoda; 晋一郎正田; Tomonari Tanaka; 知成田中
Original assignee: Noguchi Institute
Current assignee: Noguchi Institute
Priority date: 2010-03-11
Filing date: 2010-03-11
Publication date: 2011-09-29
Also published as: JP5892750B2; JP2011244832A

Abstract

【課題】Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）がαで結合した糖誘導体を、酵素的に調製する新規な方法を提供する。
【解決手段】バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１、Ｂ２またはＢ３を用いて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合したジメトキシトリアゾール (ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ）と糖受容体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を調製する方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、抗ピロリ菌効果等を有する機能性オリゴ糖鎖として有用な、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を、酵素的に調製する新規な方法に関する。

近年、高等生物の胃や十二指腸腺粘液中のムチン型糖タンパク質糖鎖の非還元末端にＮ-アセチルグルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ)がαでガラクトース(Ｇａｌ)に結合したオリゴ糖鎖、ＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌ−Ｒが存在することが報告されている（非特許文献１）。この糖鎖は近年、胃癌や胃潰瘍の原因とされるヘリコバクターピロリ菌を殺菌もしくは増殖抑制する物質として注目されており（非特許文献２）、最近になって、ＧｌｃＮＡｃがαで結合した種々の誘導体の抗ピロリ菌効果が報告されるようになった。

また、最近、ＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌ−Ｒに関連する糖鎖に対するいくつかのモノクローナル抗体が商品化されたことから、ＧｌｃＮＡｃがαで結合した糖鎖の新たな機能の発見が期待されている。これらの物質のうち、比較的高い抗ピロリ菌効果を有する物質は、少なくとも上記のようにＧｌｃＮＡｃがαでガラクトースに結合した物質であると考えられており、いくつかの化学的合成手法が試みられている(非特許文献３)。しかしながら、目的のオリゴ糖鎖を化学的に調製するためには、複雑で多段階の合成手法や技術が必要であるために、いまだに大量調製化への目途はたっていない。

また、上記の天然型糖鎖は、高等動物が有する糖転移酵素、α１，４−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ（α４ＧｎＴ)の働きによって生成することが知られていることから、α４ＧｎＴによる調製も試みられている（非特許文献４、特許文献１）。しかしながら、この方法は高価な基質である糖ヌクレオチドを使用し、かつα４ＧｎＴの調製においても、動物細胞等しか生産媒体にできないために、大量生産には向かない。さらにα４ＧｎＴはその糖受容体に対する構造特異性が比較的厳密であるために、ＧｌｃＮＡｃをαで結合した新しい糖鎖およびその誘導体を調製するには不向きであると考えられる。

一方、糖加水分解酵素によるオリゴ糖鎖の合成手法は、用いる糖供与体が比較的調製しやすく、酵素自体も微生物由来のものが多いために、目的とする物質の大量調製も視野に入れることができる。このような観点から、今までに多くの酵素的合成法が報告されてきた。しかしながら、ＧｌｃＮＡｃをαで結合した糖鎖およびその誘導体の酵素的調製方法は今までに報告例がなく、本発明者ら自身も、多糖類（ヘパリン硫酸など）からＧｌｃＮＡｃを遊離する酵素として報告されているヒトのα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼのアミノ酸配列に似た微生物由来の酵素ホモログ（これらのホモログはグリコシルハイドロラーゼファミリー８９（ＧＨ８９）に属する）を見出し (特許文献２)、既存の糖供与体(パラニトロフェニル誘導体（ＧｌｃＮＡｃ−α−ｐＮＰ）、およびメチルウンベリフェリル誘導体（ＧｌｃＮＡｃ−α−ＭＵ)）を糖供与体とする糖転移を試みてきたが、達成することはできなかった。したがって、新しい糖供与体と糖加水分解酵素の組み合わせによる調製方法が求められていた。

特開２００１−４６０７７号公報特開２００９−２３２８３８号公報

イシカワケー（Ishihara K）ら、バイオケミストリージャーナル（Biochemstry Journal）、1996年、第318巻、p.409-416. カワクボエム（Kawakubo M）ら、サイエンス（Science）、2004年、第305巻、p.1003-1006. マナベエス（Manabe S）ら、ジャーナルオブオルガニックケミストリー（Journal of Organic Chemistry）、2007年、第72巻、p.6107-6115. ナカヤマジェー（Nakayama J）ら、プロシーディングズオブザナショナルアカデミーオブサイエンスィズオブユーエスエー（Proceedings of the National Academy of Sciences of USA）、1999年、第96 巻、p.8991-8996.

本発明は前記の課題を解決するためになされたもので、Ｎ-アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を、簡便にかつ大量に製造できる、新規な酵素的調製方法を提供することを目的とする。

本発明者らは、上記現状にかんがみ、まずＧｌｃＮＡｃがαで結合した糖鎖からＧｌｃＮＡｃを遊離する酵素の遺伝子と考えられるいくつかのＤＮＡ配列情報を基に、いくつかの組換えタンパク質を作製したところ、あるアミノ酸配列を持つタンパク質がＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌ−Ｒの糖鎖をはじめとするいくつかのＧｌｃＮＡｃがαで結合した糖誘導体からＧｌｃＮＡｃを遊離する活性を持つことを見出していた(特許文献２)。しかしながら、既存の糖供与体（パラニトロフェニル誘導体、ＧｌｃＮＡｃ−α−ｐＮＰ、およびメチルウンベリフェリル誘導体、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＭＵ）で上記α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼによる糖転移を試みたが、目的とする糖誘導体を得ることはできなかった。

そこで、近年、糖加水分解酵素によりすみやかに加水分解されるＤＭＴ（ジメトキシトリアゾール）化糖に焦点を当て、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合したジメトキシトリアゾール（ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ。４，６-ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド）に対するα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼの水溶液中における挙動を調査したところ、上記の合成基質よりも、すみやかに加水分解されることをつきとめ、本発明の調製方法を完成するに至った。

本発明は、水溶液中一段階で調製できるジメトキシトリアゾールをαで有するＮ−アセチルグルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ)を糖供与体として、微生物由来の糖加水分解酵素の作用により、抗ピロリ菌効果を有するオリゴ糖鎖（ＧｌｃＮＡｃα１→４Ｇａｌ−Ｒ）を調製する方法である。また、用いる糖加水分解酵素により、位置特異性の異なるオリゴ糖鎖およびその誘導体を得ることもできる。

すなわち、本発明は、以下の調製方法を提供するものである。
［１］バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１、Ｂ２またはＢ３を用いて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合したジメトキシトリアゾール (ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ。４，６-ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド)と糖受容体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を調製する方法。
［２］糖受容体がアルコール類である［１］記載の調製方法。
［３］バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴとガラクトース誘導体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがガラクトース残基にα１→４で結合した糖誘導体を調製する方法。
［４］バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ-アセチルグルコサミニダーゼＢ２またはＢ３を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴとガラクトース誘導体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがガラクトース残基にα１→２で結合した糖誘導体、およびα１→６で結合した糖誘導体を調製する方法。
［５］グリコシルハイドロラーゼファミリー８９（ＧＨ８９）に属する酵素を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴと糖受容体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を調製する方法。

本発明により、ＧｌｃＮＡｃがαで結合した糖誘導体および糖鎖を、より簡単かつ大量に調製可能となる。特異的にピロリ菌増殖を抑制する化合物、およびそれを含み安全で、耐性菌を生じさせないピロリ菌増殖抑制剤の調製が可能となる。さらに、従来の方法では調製できなかった多くの種類の糖誘導体が調製可能となることから、より強い抗ピロリ剤を見出す可能性を有する。

実施例１で得た反応溶液を分析した結果を示すＨＰＬＣチャート。実施例２で得た反応溶液を分析した結果を示すＨＰＬＣチャート。実施例３で得た反応溶液を分析した結果を示すＨＰＬＣチャート。実施例４で得た反応溶液を分析した結果を示すＨＰＬＣチャート。

本発明において用いる酵素は、バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来の３種のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１，Ｂ２またはＢ３が特に好ましいが、グリコシルハイドロラーゼファミリー８９（ＧＨ８９）に属するα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼのホモログは上記以外の宿主にも多数見出すことができので、それらも本法と同様に用いることができると考えられる。特に、ヒト、マウス、蛇由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼではＧｌｃＮＡｃ−α−ｐＮＰだけでなくヘパリン構成糖であるＧｌｃＮＡｃ−α１，４−ＩｄｏＡ−ＲやＧｌｃＮＡｃ−α１，４−ＧｌｃＡ−Ｒにも加水分解活性があるので、同様に糖受容体としてイズロン酸誘導体（ＩｄｏＡ−Ｒ）やグルクロン酸誘導体（ＧｌｃＡ−Ｒ）も用いることができる。

バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来の３種のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１，Ｂ２またはＢ３は、特許文献２を参照してリコンビナント蛋白質として調製できる。グリコシルハイドロラーゼファミリー８９（ＧＨ８９）に属するα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼも、それぞれの出典の文献（ヒト由来のリコンビナント酵素調製（ウェバービー (Webber B.)ら、プロテインエクスプレッションアンドピュアリフィケーション（Protein Expression and Purification）、2001年、第21 巻2号、p.251-259）、蛇毒からの調製（アンドリュージェーエヌ（Andrew J. N.）ら、ジャーナルオブケミカルアンドモレキュラートキシコロジー（Journal of Biochemical and Molecular Toxicology）、2001年、第15巻4号、p.221-227）を参照してリコンビナント蛋白質としてもしくは天然からの抽出物として調製できる。

本発明において用いる糖受容体とは、水酸基を有する化合物であり糖供与体と反応できるものであれば特に限定しないが、具体的にはメタノール、フェニルアルコールなどのアルコール類、ベンジル β−Ｄ−ガラクトピラノシド(Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）やｐ−メトキシフェニル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｇａｌ−β−ｐＭＰ）などのガラクトース誘導体、グルクロン酸やイズロン酸の誘導体などの例を挙げることができる。

本発明において酵素を用いる糖転移反応の条件は、公知の条件を用いることができるが、具体的には以下のようになる。
溶液は、リン酸緩衝液、炭酸緩衝液などの例を挙げることができ、特にリン酸緩衝化生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｅｄｓａｌｉｎｅ，ＰＢＳ）が好ましい。
溶液のｐＨは、中性付近が好ましく、ｐＨ６．０からｐＨ８．０が特に好ましい。
反応の温度は、２５℃から４５℃が好ましく、３７℃が特に好ましい。
反応の時間は、酵素濃度が数十から数百ｎＭで数時間から２４時間が好ましく、４〜５時間程度が特に好ましい。しかしながら、酵素濃度が数十ｎＭ以下においては、反応時間が２４時間以上で、比較的高い糖転移収率を得ることがある。
反応容器においては、系内の温度を制御でき、かつ溶解しているタンパク質や糖質化合物を特に吸着させる容器でないかぎりどのようなものを用いてもよい。また、本発明において用いているリコンビナントタンパクや基質はいずれも室温から３７℃付近では比較的安定であるために、反応において、振とうや撹拌操作を行えば、出発物質の分解もほとんどなく反応時間を短縮させることができる。

本発明で調製される糖誘導体には、糖鎖、糖蛋白質、糖脂質などが含まれる。

糖供与体として用いる、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴは、次のようにして合成した。
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン(ＧｌｃＮＡｃ) ２２１ｍｇ (１．０ｍｍｏｌ)を水６．２５ｍｌに溶解し、塩化４−(４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル)−４−メチルモルホリニウム（ＤＭＴ−ＭＭ)）５５３ｍｇ（２．０ｍｍｏｌ）、次いで２，６−ルチジン０．２３ｍｌ（２．０ｍｍｏｌ）を室温で加え、反応溶液を室温で２４時間撹拌した。（化１）式の反応が進行した。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で反応終了を確認後、減圧下溶媒を除去し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィ(展開溶媒: 酢酸エチル／メタノール＝７／１)により精製して、４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ) ２８８ｍｇ (０．８０ｍｍｏｌ, ８０％)を得た。

以下に、本発明の調製方法（糖転移反応）を、実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明を何ら限定するものではない。

糖供与体としてＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ１．８ｍｇ(５μｍｏｌ, 終濃度５０ｍＭ)をＰＢＳ溶液に溶解し、糖受容体としてメタノール１２．３μｌ (３００μＭ，１２．３ｖｏｌ．％)、およびBacteroides thetaiotaomicron VPI5482由来α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ２ (４．９５μｇ、０．４９５μｇ／μｌ、特許文献２参照)のＰＢＳ溶液を加え、３７℃で２２時間インキュベートした。（化２）式の反応が進行した。反応溶液をＨＰＬＣで分析(カラム: ＴＳＫ−ＧｅｌＡｍｉｄｅ−８０ (４．６×２５０ｍｍ, ＴＯＳＯＨ)，溶離液: アセトニトリル／水＝３／１，流速: １ｍｌ／ｍｉｎ，温度: ３０℃，検出: ＵＶ（２１４ｎｍ）したところ、メチル２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α−ＯＭｅ）が２７％の収率で生成していることを確認した。その結果を図１に示す。

糖供与体としてＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ１．８ｍｇ(５μｍｏｌ, 終濃度５０ｍＭ)、糖受容体としてベンジル β−Ｄ−ガラクトピラノシド(Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）９．５ｍｇ（３５μＭ)をＰＢＳ溶液に溶解し、Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482由来α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ２ (４．９５μｇ、０．４９５μｇ／μｌ、特許文献２参照)のＰＢＳ溶液を加え、３７℃で６時間インキュベートした。（化３）式の反応が進行した。反応溶液をＨＰＬＣで分析(カラム: ＣＯＳＭＯＳＩＬＣｈｏｌｅｓｔｅｒ(４．６×２５０ｍｍ，ＮａｃａｌａｉＴｅｓｑｕｅ）, 溶離液: アセトニトリル／水＝９／９１, 流速: １ｍｌ／ｍｉｎ, 温度: ３０ ℃, 検出: ＵＶ（２５４ｎｍ））したところ、ベンジル６−Ｏ−(２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル) −β−Ｄ−ガラクトピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α１→６−Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）、ベンジル２−Ｏ−(２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル) −β−Ｄ−ガラクトピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α１→２−Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）が、各々４％、８％の収率で生成していることを確認した。その結果を図２に示す。

糖供与体としてＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ０．３６ｍｇ(１μｍｏｌ, 終濃度５０ｍＭ)、糖受容体としてベンジル β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）１．９ｍｇ(７μｍｏｌ）をＰＢＳ溶液に溶解し、Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482由来α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ３(０．１０μｇ, ０．０８６μｇ／μｌ、特許文献２参照)のＰＢＳ溶液を加え、３７ ℃で２９時間インキュベートした。（化３）式の反応が進行した。反応溶液をＨＰＬＣで分析（カラム: ＣＯＳＭＯＳＩＬＣｈｏｌｅｓｔｅｒ(４．６×２５０ｍｍ，Ｎａｋａｒａｉｔｅｓｑｕｅ）溶離液: アセトニトリル／水＝９／９１, 流速: １ｍｌ／ｍｉｎ, 温度: ３０ ℃, 検出: ＵＶ（２５４ｎｍ））したところ、ベンジル６−Ｏ−(２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル) −β−Ｄ−ガラクトピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α１→６−Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）、ベンジル２−Ｏ−(２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル) −β−Ｄ−ガラクトピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α１→２−Ｇａｌ−β−ＯＢｎ）が、各々０．４％、０．３％の収率で生成していることを確認した。その結果を図３に示す。

糖供与体としてＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ０．２２ｍｇ(０．６μｍｏｌ, 終濃度３０ｍＭ)、糖受容体としてｐ−メトキシフェニル β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｇａｌ−β−ｐＭＰ）０．１７ｍｇ（０．６μｍｏｌ）をＰＢＳ溶液に溶解し、Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482由来α−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１(１４．４μｇ, １４．４μｇ／μｌ、特許文献２参照)のＰＢＳ溶液を加え、３７ ℃で５時間インキュベートした。（化４）式の反応が進行した。反応溶液をＨＰＬＣで分析(カラム: ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ−３(４．６×２５０ｍｍ，ＧＬ−Ｓｃｉｅｎｃｅ）, 溶離液: アセトニトリル／水＝５／９５→１５／８５（０→２５ｍｉｎ）, 流速: １ｍｌ／ｍｉｎ, 温度: ３０ ℃, 検出: ＵＶ（２８０ｎｍ））したところ、ｐ−メトキシフェニル４−Ｏ−（２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシル）−β−Ｄ−ガラクトピラノシド(ＧｌｃＮＡｃ−α１→４−Ｇａｌ−β−ｐＭＰ）が、１０％の収率で生成していることを確認した。その結果を図４に示す。

Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）がαでガラクトース（Ｇａｌ）に結合したオリゴ糖鎖（αＧｌｃＮＡｃ含有オリゴ糖鎖）は、従来の抗生物質とは全く異なり、あらゆるピロリ菌の生育に必須の増殖活動を抑制するという機序でピロリ菌に対する抗菌作用を示すから、抗ピロリ菌剤として有用である。また、本発明によりαＧｌｃＮＡｃ含有オリゴ糖鎖を、人工高分子担体だけでなく、クラゲや卵白などの容易に入手可能な天然のムチン型糖蛋白質糖鎖へも導入可能であることが明らかである。

したがって、調製した物質は、ピロリ菌増殖抑制剤として、サプリメントや飲食品添加物として有用であると考えられる。またそのピロリ菌増殖抑制剤を含有する飲食品は、機能性飲食品や健康飲食品として有用である。そのピロリ菌増殖抑制剤を含有する医薬製剤は、ピロリ菌に起因する消化器系疾患、特に胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍のような胃疾患を軽減したり治癒したり予防したりする医薬品として、有用である。

Claims

バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１、Ｂ２またはＢ３を用いて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合したジメトキシトリアゾール（ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴ。４，６-ジメトキシ−１，３，５−トリアジン−２−イル２−アセタミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド）と糖受容体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を調製する方法。
糖受容体がアルコール類である請求項１記載の調製方法
バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ１を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴとガラクトース誘導体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがガラクトース残基にα１→４で結合した糖誘導体を調製する方法。
バクテロイデスセタイオタオミクロン（Bacteroides thetaiotaomicron VPI5482）由来のα−Ｎ−アセチルグルコサミニダーゼＢ２またはＢ３を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴとガラクトース誘導体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがガラクトース残基にα１→２で結合した糖誘導体、およびα１→６で結合した糖誘導体を調製する方法。
グリコシルハイドロラーゼファミリー８９（ＧＨ８９）に属する酵素を用いて、ＧｌｃＮＡｃ−α−ＤＭＴと糖受容体を反応させて、Ｎ−アセチルグルコサミンがαで結合した糖誘導体を調製する方法。