JP2011152148A - 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 - Google Patents
改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2011152148A JP2011152148A JP2011085638A JP2011085638A JP2011152148A JP 2011152148 A JP2011152148 A JP 2011152148A JP 2011085638 A JP2011085638 A JP 2011085638A JP 2011085638 A JP2011085638 A JP 2011085638A JP 2011152148 A JP2011152148 A JP 2011152148A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- nhr
- filamentous
- dna
- variant
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/38—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from Aspergillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/37—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi
- C07K14/385—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from fungi from Penicillium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
- C12N15/902—Stable introduction of foreign DNA into chromosome using homologous recombination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P23/00—Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P37/00—Preparation of compounds having a 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring system, e.g. penicillin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/80—Penicillium
- C12R2001/82—Penicillium chrysogenum
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Botany (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Mushroom Cultivation (AREA)
Abstract
【解決手段】ポリヌクレオチドは、所定の部位との相同の領域を有し、取込み経路を相同的組換え(HR)へ導くステップを含んで成る方法。親細胞に由来する糸状菌変異体は高い効率のHR経路および/または低い効率のNHR経路および/または同じ条件下の前記親細胞の前記HRおよび/またはNHR効率および/またはNHR/HR比と比べ減少した効率のNHR/HR比を有する。
【選択図】なし
Description
本発明は分子生物学の分野に関する。詳しくは、糸状菌のゲノムへの核酸の方向づけられた取込みの効率を改善する方法、およびその使用に関する。
真核細胞は、ポリペプチドおよび二次代謝産物の(組換え)生産のための好ましい生物である。例えば、タンパク質生産菌株を構成する際には、生産されるタンパク質をコードする目的とする遺伝子の取込みの部位は、目的とする取込み遺伝子の転写および/または発現の調節に重要である。大部分の真核生物におけるDNAのゲノムへの取込みは無作為に高頻度で起こるため、組換えDNA技術によるタンパク質生産菌株の構成はしばしば、生産されるタンパク質をコードする遺伝子を含んで成る発現カセットの望ましくない無作為取込みをもたらす。発現カセットのこのコントロール不良の「無作為多重取込み」は潜在的に危険な過程であり、宿主のゲノムの望ましくな修飾をもたらしうる。したがって、高い効率で発現カセットの正確な標的を確実にすることによってタンパク質生産菌株を構成することが可能であることがきわめて望ましい。さらに、生物の増大する量の完全ゲノムの配列が入手可能になっている現在、これは過剰発現および削除ライブラリーの橋渡しをするゲノムを構成する機会を開く。かかるライブラリーの効率的な構成の重要な要件は、問題の生物が効率的に形質転換されうること、および核酸のゲノムへの直接の標的取込みに必要とされる必要な相同が比較的短いことである。
本明細書で参照される、すべての特許および刊行物は、かかる特許および刊行物内で開示されたすべての配列および方法を含めて、参照により明示的に援用される。これらの特許および刊行物としては、欧州特許第357127B号明細書、同第635574B号明細書、国際公開第97/06261号パンフレット、同第98/46772号パンフレットが挙げられる。
本発明は、NHR選好を有する糸状菌細胞のゲノムへのポリヌクレオチドの所定の部位に対する標的取込みの効率を増大させるための方法に関し、前記ポリヌクレオチドは、前記所定の部位との相同の領域を有し、取込み経路をHRへ導くステップを含んで成る。本発明は、HR経路の効率を上昇させることによって、かつ/またはNHR経路の効率を低下させる(削減を意味する)ことによって、かつ/またはNHR/HR比を減少させることによって、かかる導くステップに達する。
a.組換え遺伝子操作法を使用するステップ、
b.糸状菌を変異誘発に提示するステップ。
−An activator/repressor dual system allows tight tetracycline−regulated gene expression in budding yeast:ベリ(Belli)ら、(1998年)Nucl.Acid Research.26巻、4号:942−947頁、
−A light−switchable gene promoter system:シミズ−サトウ(Shimizu Sato)ら、(2002年)Nat.Biotech.20巻、10号、:1041−1044頁。
−配列番号2または19で識別されるhdfAもしくはその相同体、または
−配列番号5または22で識別されるhdfBもしくはその相同体、またはその両方。
c.組換え遺伝子操作法を使用するステップ、
d.糸状菌を変異誘発させるステップ、
あるいは、または上記の方法と組合せ、かつ別の好ましい実施形態によれば、少なくとも1つの遺伝子またはDNA配列の発現レベルのアップレギュレーションは、糸状菌を活性化化合物/組成物に提示することによって得られうる。
−HR経路に関与する糸状菌の少なくとも1つの内在性DNA配列を過剰発現する。この場合、糸状菌はその内在性DNA配列のいくつかのコピーを含んで成る。
−HRに関与する少なくとも1つの非相同DNAを過剰発現する。この場合、糸状菌はHRに関与するその内在性DNA配列、およびさらにHRに関与する非相同DNA配列の少なくとも1つのコピーを有することになる。この非相同DNA配列はその対応する内在性DNA配列の相同体である。
したがって、本発明はさらに糸状菌それ自体に関するが、これは好ましくは、前記糸状菌細胞のゲノムへの所定の部位に対するポリヌクレオチドの標的取込みの効率を増大させるための本発明の方法において使用され、前記糸状菌はNHR選好を有し、かつ前記ポリヌクレオチドは前記所定の部位と相同の領域を有するとともに、前記方法は取込み経路をHRへ導くステップを含んで成る。この方法において使用されうる糸状菌の特徴は以前に規定されている。
好ましい実施形態によれば、少なくとも、例えば、形質転換またはエレクトロポレーションの方法、および前記ポリヌクレオチドの前記細胞の遺伝物質への取込みによって、目的とするポリヌクレオチドを本発明の糸状菌へ導入するステップを含んで成る方法が提供される。取込みは複合方法であり、核酸配列が宿主細胞の遺伝物質の一部となる。核酸取込みの方法における1つのステップは組換えであり、組換えによって、核酸配列が交換または挿入され、導入された核酸は宿主細胞の遺伝物質の一部となる。原則として、2種類の組換え法が可能である。すなわち、相同的および非正統的すなわちNHRである。大部分の(高等)真核生物はHRを実行することはなく、または少なくとも顕著に実行することはないが、かかる方法を達成する必須タンパク質は利用可能である。この現象の1つの理由は、(高等)真核生物における相同的組換えの頻繁な使用が、繰返し核酸配列の存在により望ましくない染色体再配置をもたらしうることである。本発明による方法によってHRを達成するには、所定の部位との相同性を有するポリヌクレオチドを提供することが重要である。相同の割合および相同的領域の長さが相同的組換えにおいて重要な役割を果たすことは当業者に明らかである。相同の割合はほぼ100%であることが好ましい。当業者であれば、低い割合の相同も相同的組換えの分野で使用されるが、例えば、相同の領域、およびその全体的な分布に依存し、HRの低い効率をもたらしうるが、依然として有用であり、したがって本発明に含まれることを認識している。さらに、(ほぼ)相同的領域の長さは約3kbであり、これは相同的組換えを導くのに十分である。少なくとも1つの相同的領域が組換えには必要であるが、より好ましくは、目的とする核酸をフランキングする2つの相同的領域が標的取込みのために使用される。当業者は、相同の適切な割合、相同の長さ、および相同的領域の量を選択するやり方を知っている。かかる相同を提供することによって、核酸が宿主細胞の遺伝物質内のすべての所望の位置で取込まれる。本明細書で開示された本発明が、相同の長さおよび相同の割合がHRを提供/可能にするのに十分に高い限り、すべての核酸(好ましくはDNA)を所定の部位に導くために使用されることは当業者には明らかである。
−リー(Li),Z.J.、シュクラ(Shukla),V.、フォルダイス(Fordyce),A.P.、ペデルセン(ペデルセン),A.G.、ウェグナー(Wegner),K.S.、マルテン(Marten),M.R.、Fungal morphology and fragmentation behavior in a fed−batch Aspergillus oryzae fermentation at the production scale.Biotechnol Bioeng.2000年11月5日、70(3):300−12頁
−ウィザース(Withers),J.M.、スウィフト(Swift),R.J.、ウィーベ(Wiebe),M.G.、ロブソン(Robson),G.D.、プント(Punt),P.J.、ファン・デン・ホンデル,C.A.、Optimization and stability of glucoamylase production by recombinant strains of Aspergillus niger in chemostat culture.Biotechnol Bioeng.1998年8月20日、59(4):407−18頁。
−アマルラー(Amanullah),A.、クリステンセン(Christensen),L.H.、ハンセン(Hansen),K.、ニーナウ(Nienow),A.W.、トーマス(Thomas),R.C.、Dependence of morphology on agitation intensity in fed−batch cultures of Aspergillus oryzae and its implications for recombinant protein production.Biotechnol Bioeng.2002年3月30日、77(7):815−26頁。
本発明の別の態様によれば、以下の単離cDNA配列が提供される。すなわち、
配列番号2 A.ニゲルからのhdfA
配列番号19 ペニシリウム・クリソゲヌムからのhdfA
配列番号5 A.ニゲルからのhdfB
配列番号22 ペニシリウム・クリソゲヌムからのhdfB
およびそれらの相同体。
アスペルギルス・ニゲル菌株CBS513.88のゲノムDNAを配列決定し、分析した。KU70およびKU80との相同体と注釈付きの翻訳タンパク質を有する2つの遺伝子を識別し、それぞれhdfAおよびhdfBと命名した。オープンリーディングフレーム(ORF)(イントロンを有する)および遺伝子の約1000bp5’および3’を含んで成るhdfAおよび/またはhdfB遺伝子座の配列が、配列表1および4に示されている。hdfAおよび/またはhdfBの遺伝子置換ベクターが、既知の原理に従って設計され、ルーチンのクローニング法に従って構成された(図1および2を参照)。本質的に、これらのベクターは、予定されたゲノム遺伝子座での相同的組換えのhdf ORFの約1000bpフランキング領域を含んで成る。また、それらは、A.ニドゥランス双方向amdS選択マーカー、中間直接繰返しを含有する。これら削除ベクターの一般設計は、欧州特許第635574B号明細書および国際公開第98/46772号パンフレットにおいて既述されている。
削除ベクターpDEL−HDFAの直鎖DNA(図1)を単離して使用し、以前に記載された方法(Biotechnology of Filamentous fungi:Technology and Products.(1992年)リード・パブリッシング(Reed Publishing)(米国(USA))、第6章:Transformation 113〜156頁)を使用することによりアスペルギルス・ニゲルCBS513.88を形質転換した。この直鎖DNAはhdfA遺伝子座でゲノムへ取込むことができ、したがって、図3に示されているようにamdS遺伝子によってhdfA遺伝子を置換する。形質転換体をアセトアミド培地で選択し、欧州特許第635574B号明細書に記載された標準の方法に従ってコロニーを精製した。胞子をフルオロ・アセトアミド培地上にプレーティングし、amdSマーカーを失った菌株を選択した。発育コロニーをhdfA遺伝子座での取込みについてPCRで診断し、候補の菌株をhdfA遺伝子の削除についてサザン分析で試験した。hdfA遺伝子の削除は、遺伝子座全体をカバーするDNA断片の約2.2kbサイズの削減によって検出可能であり、適切なプローブにハイブリダイズされた。約8個の菌株が、約400の初期形質転換体のプールからゲノムhdfA遺伝子の除去を示した。
削除ベクターpDEL−HDFBの直鎖DNA(図2)を単離して使用し、アスペルギルス・ニゲル菌株CBS513.88を形質転換した。この直鎖DNAはhdfB遺伝子座でゲノムへ取込むことができ、したがって、amdS遺伝子によってhdfB遺伝子を置換する(図4)。実施例2に記載されたものと同じ遺伝子置換法を使用した。形質転換体をアセトアミド培地で選択し、標準の方法に従ってコロニーを精製した。胞子をフルオロ・アセトアミド培地上にプレーティングし、amdSマーカーを失った菌株を選択した(欧州特許第635574B号明細書)。発育コロニーをhdfB遺伝子座での取込みについてPCRで診断し、候補の菌株をhdfB遺伝子の削除についてサザン分析で試験した。hdfB遺伝子の削除は、遺伝子座全体をカバーするDNA断片の約2.6kbサイズの削減によって検出可能であり、適切なプローブにハイブリダイズされた。約7個の菌株が、約370の初期形質転換体のプールからゲノムhdfB遺伝子の除去を示した。
削除ベクターpDEL−HDFBの直鎖DNA(図2)を単離して使用し、実施例2で得られた菌株dHDFAを形質転換した。この直鎖DNAはhdfB遺伝子座でゲノムへ取込むことができ、したがって、amdS遺伝子によってhdfB遺伝子を置換する(図4)。実施例2に記載されたものと同じ遺伝子置換法を使用した。形質転換体をアセトアミド培地で選択し、標準の方法に従ってコロニーを精製した。胞子をフルオロ・アセトアミド培地上にプレーティングし、amdSマーカーを失った菌株を選択した。発育コロニーをhdfB遺伝子座での取込みについてPCRで診断し、候補の菌株をhdfB遺伝子の削除についてサザン分析で試験した。hdfB遺伝子の削除は、遺伝子座全体をカバーするDNA断片の約2.6kbサイズの削減によって検出可能であり、適切なプローブにハイブリダイズされた。約15個の菌株が、約380の初期形質転換体のプールからゲノムhdfB遺伝子の除去を示した。
DNAが予定された遺伝子座でアスペルギルス・ニゲルのゲノムへ取込みうる1つの機序は、単一相同的組換えによるものである。相同的DNAは、組換えによってゲノム位置で整列して取込む(図5を参照)。2つのベクターを使用し、実施例2、3、および4で得られたアスペルギルス・ニゲル菌株の単一相同的組換えによる標的効率を試験した。2つのベクターは、組換えおよび結果として生じる取込みを導くグルコアミラーゼ(glaA)遺伝子座と相同の領域を含んで成る(図5)。
さらに、ゲノムからの遺伝子をコードする多くのアミラーゼの不活性化のために設計された削除ベクターでのdHDFA菌株の形質転換によって標的効率を測定した。遺伝子フランキング領域を実質的に実施例1に記載されているようにクローン化し、結果として生じるベクターを線状化し、これを使用してCBS513−88およびdHDFA菌株のプロトプラストを形質転換した。標的頻度をPCR分析、および対応する遺伝子の不活性化を示す活性に基づくプレートアッセイによって測定した。後者は、0.4%寒天を補充したPDAプレート上で形質転換体を増殖させ、その後にヨード/カリウムヨード溶液(ルゴール(Lugol)、シグマ(Sigma)L6146)による染色によって行われた。以下の表1でわかるように、PCR分析および/または対応する遺伝子の不活性化を示す活性に基づくプレートアッセイによって判定された標的頻度は、CBS513.88菌株で観察されたものに比べ大幅に改善された。
別個の一連の実験において、二重相同的組換えによる形質転換効率および標的頻度に対するフランキング領域長さの効果をさらに調査した。菌株CBS513.88およびdHDFAのプロトプラストを、可変長のamyBIIフランキング領域によってフランキングされたA.ニドゥランスamdSマーカーを含むPCR断片で形質転換した。表2に示されたデータは、増強された全体的な形質転換効率に加えて、統合的カセットの標的がdHDFA菌株においてはるかに改善されたことを明らかに示す。
dHDFA、dHDFB、またはdHDFAB菌株の固体培地または振盪フラスコでの発育中の表現型の差異は確認されなかった。プラスミドpGBFIN11−EPOまたはpBGFIN−PLAで形質転換されたdHDFA、dHDFB、およびdHDFAB菌株はすべて、以下の方法に従って判定されるように培地へ活性酵素を分泌した。
遺伝子標的の改善された効率を有する変異体を単離するために、典型的な変異誘発と分子生物学の組合せを適用した。ペニシリウム・クリソゲヌム(CBS 455.95)胞子をYEPD(ジフコ製の2%酵母抽出物、ジフコ製の1%ペプトン、2%グルコース)中で胞子形成するコロニーから得た。これらの胞子を滅菌水道水中で洗浄し、ml当たり108分生子を含有する懸濁液10mlを254nmでUV照射にかけた(シルバニア(Sylvania)、15ワット・ブラックライトブルー管、モデルFT15T8/BLB)。UV照射を7.5、15、または30分間当てると同時に、懸濁液をゆっくり振盪した。これらの異なる照射時間は、細胞における軽度、中等度、および強度の突然変異率レベルを得るために選択された。暗所での回収の1時間後、これら3時点からの細胞を2つの同等のアリコートに分けた。第1の試料を既述のように直接再胞子形成し(ヘルスバッハ(Hersbach),GJM、ファン・デン・ビーク(Van der Beek),CP、およびファン・ジユック(Van Dijck),PWM.The Penicillins:properties,biosynthesis and fermentation.In:Vandamme EJ(編) Biotechnology of Industrial Antibiotics(45−140頁)、マルセル・デッカー(Marcel Dekker)、ニューヨーク)、もう一方の試料をYNB培地(アミノ酸(ジフコ)、2.0%w/vグルコースとともに0.67%w/v酵母窒素塩基)中で長い回収期間、胞子形成を導入する前に4時間、25℃下にインキュベートした。
Claims (25)
- NHR選好の糸状菌細胞のゲノムへの所定の部位に対するポリヌクレオチドの標的取込みの効率を増大させるための方法であって、前記ポリヌクレオチドが、前記所定の部位との相同の領域を有し、HRの方へ取込み経路を導くステップを含んで成る、方法。
- 前記導くステップが、親糸状菌細胞の変異体を提供するステップを含んで成り、NHR/HR比が、同じ条件下で測定された前記親生物における前記比と比べ変異体において減少している、請求項1に記載の方法。
- 前記導くステップが、NHRに関与する成分をコードする遺伝子に欠ける、かつ/またはNHRに関与する成分の減少したレベルを有する変異体を提供するステップを含んで成る請求項1または2に記載の方法。
- 前記変異体が、好ましくは誘導性に、以下の遺伝子、すなわちhdfAまたはその相同体、hdfBまたはその相同体、あるいはその両方の少なくとも1つに欠け、かつ/または、好ましくは誘導性に、これらの遺伝子によってコードされたタンパク質の少なくとも1つの減少した量を有する、請求項3に記載の方法。
- NHRに関与する遺伝子が非機能的変異形によって置換されている、請求項3または4に記載の方法。
- 前記導くステップが、取込まれる前記ポリヌクレオチドに過剰な小さな二本鎖ポリヌクレオチドを添加するステップを含んで成る、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記導くステップが、前記タンパク質の阻害剤を添加することによってNHRにおいて活性の少なくとも1つのタンパク質の活性を減少させるステップを含んで成る、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変異体がHRに関与する成分の増加したレベルを有する、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- NHR/HR比が50未満、好ましくは10未満、さらにより好ましくは1未満、かつ最も好ましくは0.001未満である糸状菌が使用される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 親糸状菌細胞の変異体であって、前記親生物がNHR選好を有し、NHR/HR比が、同じ条件下で測定された前記親生物における前記比と比べ変異体が減少している変異体。
- 前記変異体が、NHRに関与する成分をコードする遺伝子を欠き、かつ/またはNHRに関与する成分の減少したレベルを有する、請求項10に記載の変異体。
- 前記変異体が、好ましくは誘導性に、以下の遺伝子、すなわちhdfAまたはその相同体、hdfBまたはその相同体、あるいはその両方の少なくとも1つに欠け、かつ/または、好ましくは誘導性に、これらの遺伝子によってコードされたタンパク質の少なくとも1つの減少した量を有する、請求項10または11に記載の変異体。
- 前記生物のゲノムにおいて、NHRに関与する遺伝子が非機能的変異形によって置換されている請求項10〜12のいずれか一項に記載の変異体。
- 前記変異体がHRに関与する成分の増加したレベルを有する、請求項10〜13のいずれか一項に記載の変異体。
- 前記変異体が組換え変異体である、請求項10〜14のいずれか一項に記載の変異体。
- NHR/HR比が50未満、好ましくは10未満、さらにより好ましくは1未満、かつ最も好ましくは0.001未満である糸状菌。
- 目的とするポリペプチドをコードする目的とする遺伝子を含んで成るDNA配列を含んで成るDNA構成物で形質転換された請求項10〜16のいずれか一項に記載の糸状菌。
- 前記糸状菌が、アスペルギルス種、ペニシリウム種、またはトリコデルマ種である、請求項10〜17のいずれか一項に記載の糸状菌。
- 前記アスペルギルスが、アスペルギルス・ニゲル種またはアスペルギルス・オリゼ種である、請求項18に記載の糸状菌。
- 前記ペニシリウムが、ペニシリウム・クリソゲヌム種またはペニシリウム・シトリナム種である、請求項18に記載の糸状菌。
- 請求項10〜20のいずれか一項に記載の糸状菌が使用される、目的とするポリペプチドを産生するための方法。
- 請求項10〜21のいずれか一項に記載の糸状菌が使用される、代謝産物を産生するための方法。
- 前記代謝産物がカルチノイド化合物またはベータ・ラクタム化合物である、請求項22に記載の方法。
- 配列番号2または5または19または22を有する単離DNA配列またはその相同体。
- 請求項24に記載のDNA配列によってコードされた単離ポリペプチドまたはその相同体。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP04076057.1 | 2004-04-02 | ||
EP04076057 | 2004-04-02 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007505561A Division JP2007530065A (ja) | 2004-04-02 | 2005-03-31 | 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011152148A true JP2011152148A (ja) | 2011-08-11 |
Family
ID=34966505
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007505561A Pending JP2007530065A (ja) | 2004-04-02 | 2005-03-31 | 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 |
JP2011085638A Pending JP2011152148A (ja) | 2004-04-02 | 2011-04-07 | 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007505561A Pending JP2007530065A (ja) | 2004-04-02 | 2005-03-31 | 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9243043B2 (ja) |
EP (3) | EP2172557B1 (ja) |
JP (2) | JP2007530065A (ja) |
CN (1) | CN101218348B (ja) |
AT (1) | ATE480632T1 (ja) |
AU (1) | AU2005229437A1 (ja) |
CA (1) | CA2559827A1 (ja) |
DE (1) | DE602005023427D1 (ja) |
DK (1) | DK1733040T3 (ja) |
ES (1) | ES2350048T3 (ja) |
PL (1) | PL1733040T3 (ja) |
WO (1) | WO2005095624A2 (ja) |
Families Citing this family (65)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK2336308T3 (da) | 2003-06-25 | 2014-11-10 | Novozymes As | Enzymer til forarbejdning af stivelse |
DE602005023427D1 (de) | 2004-04-02 | 2010-10-21 | Dsm Ip Assets Bv | Filamentöse pilzmutanten mit verbesserter homologer rekombinationseffizienz |
JP4625318B2 (ja) * | 2004-12-06 | 2011-02-02 | 財団法人野田産業科学研究所 | 相同組換え頻度が上昇した形質転換菌 |
EP2410048B1 (en) | 2005-01-24 | 2016-08-10 | DSM IP Assets B.V. | Method for producing a compound of interest in a filamentous fungal cell |
EP1856263A1 (en) * | 2005-03-01 | 2007-11-21 | DSMIP Assets B.V. | Aspergillus promotors for expressing a gene in a fungal cell |
WO2007062936A2 (en) | 2005-11-29 | 2007-06-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Dna binding site of a transcriptional activator useful in gene expression |
WO2007063133A2 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Genes useful for the industrial production of citric acid |
ES2534282T3 (es) | 2006-06-29 | 2015-04-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Un método para lograr la expresión polipeptídica mejorada |
EP2511372A1 (en) | 2006-11-02 | 2012-10-17 | DSM IP Assets B.V. | Improved production of secreted proteins by filamentous fungi |
EA018840B1 (ru) | 2007-02-15 | 2013-11-29 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Рекомбинантная клетка-хозяин для получения соединения, представляющего интерес |
WO2008113847A2 (en) * | 2007-03-21 | 2008-09-25 | Dsm Ip Assets B.V. | Improved method for homologous recombination |
DK2147107T3 (da) | 2007-05-09 | 2011-10-24 | Novozymes As | Fremgangsmåde til ekspressionskloning, som er egnet til selektion af bibliotekskloner, der producerer et polypeptid af interesse |
EP2123772A1 (en) | 2008-04-29 | 2009-11-25 | DSM IP Assets B.V. | Beta-lactam antibiotic producing strains |
EP2392649A3 (en) | 2008-08-05 | 2012-01-11 | DSM IP Assets B.V. | Adipoyl-7-ADCA producing strains |
WO2010102982A1 (en) | 2009-03-10 | 2010-09-16 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for improving the yield of a polypeptide |
DK2406372T3 (da) | 2009-03-10 | 2017-11-27 | Dsm Ip Assets Bv | Prægastrisk esterase og derivater deraf |
EA201101311A1 (ru) | 2009-03-11 | 2012-04-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Получение альфа-кетопимелиновой кислоты |
AU2010241099A1 (en) | 2009-04-22 | 2011-10-27 | Dsm Ip Assets B.V. | Process for the production of a recombinant polypeptide of interest |
EP2421965B1 (en) | 2009-04-24 | 2016-05-25 | DSM IP Assets B.V. | Carbohydrate degrading polypeptide and uses thereof |
EP2456872B1 (en) | 2009-07-22 | 2017-08-30 | DSM IP Assets B.V. | Improved host cell for the production of a compound of interest |
EA021636B1 (ru) | 2009-11-04 | 2015-07-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Трансформанты talaromyces |
EP2531590A2 (en) | 2010-02-04 | 2012-12-12 | DSM IP Assets B.V. | Process for preparing filamentous fungal strains having a sexual cycle and a process for preparing sexually crossed filamentous fungal strains |
CA2789301A1 (en) | 2010-02-11 | 2011-08-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Host cell capable of producing enzymes useful for degradation of lignocellulosic material |
EA201201126A1 (ru) | 2010-02-11 | 2013-05-30 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Полипептид, обладающий активностью целлобиогидролазы, и его применение |
AU2011273688B2 (en) | 2010-06-29 | 2014-10-30 | Versalis S.P.A. | Polypeptide having beta-glucosidase activity and uses thereof |
WO2012000888A1 (en) | 2010-06-29 | 2012-01-05 | Dsm Ip Assets B.V. | Polypeptide having acetyl xylan esterase activity and uses thereof |
EA201300058A1 (ru) | 2010-06-29 | 2013-06-28 | ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. | Полипептид, обладающий бета-глюкозидазной активностью, и его применение |
BR112012033396A2 (pt) | 2010-06-29 | 2015-06-23 | Dsm Ip Assets Bv | Polipetídeo tendo atividade swollenin e seus usos. |
CA2803986C (en) | 2010-06-29 | 2019-04-23 | Dsm Ip Assets B.V. | Polypeptide having or assisting in carbohydrate material degrading activity and uses thereof |
AU2011273689B2 (en) | 2010-06-29 | 2014-08-21 | Dsm Ip Assets B.V. | Polypeptide having carbohydrate degrading activity and uses thereof |
CA2803222A1 (en) | 2010-07-01 | 2012-01-05 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for the production of a compound of interest |
WO2012031910A2 (en) | 2010-09-10 | 2012-03-15 | Dsm Ip Assets B.V. | Method for preparing alpha-ketopimelic acid by c1-elongation |
DK2683732T3 (en) | 2011-03-11 | 2016-12-12 | Dsm Ip Assets Bv | Vector-host-system |
WO2013076280A1 (en) | 2011-11-23 | 2013-05-30 | Dsm Ip Assets B.V. | Nucleic acid assembly system |
EP2861714A1 (en) | 2012-06-19 | 2015-04-22 | DSM IP Assets B.V. | Promoters for expressing a gene in a cell |
CN105308171B (zh) | 2012-07-19 | 2019-03-08 | 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 | Agse缺陷菌株 |
JP2015530103A (ja) * | 2012-09-28 | 2015-10-15 | ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル | 組換えタンパク質を生産するための方法 |
KR102134498B1 (ko) | 2013-02-04 | 2020-07-16 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 탄수화물 분해 폴리펩티드 및 이의 용도 |
WO2014142647A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Wageningen Universiteit | Fungals strains with improved citric acid and itaconic acid production |
WO2014202622A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202620A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202624A2 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Rasamsonia gene and use thereof |
WO2014202621A1 (en) | 2013-06-20 | 2014-12-24 | Dsm Ip Assets B.V. | Carbohydrate degrading polypeptide and uses thereof |
MX370305B (es) | 2013-12-02 | 2019-12-09 | Dsm Ip Assets Bv | Proteína estructurante de hielo. |
JP6542226B2 (ja) * | 2013-12-13 | 2019-07-10 | セレクティス | ヌクレアーゼを使用して藻類形質転換細胞を選択する新しい方法 |
US11396665B2 (en) | 2015-01-06 | 2022-07-26 | Dsm Ip Assets B.V. | CRISPR-CAS system for a filamentous fungal host cell |
EP3242949B1 (en) | 2015-01-06 | 2021-11-03 | DSM IP Assets B.V. | A crispr-cas system for a yeast host cell |
US20180160695A1 (en) | 2015-06-02 | 2018-06-14 | Dsm Ip Assets B.V. | Use of ice structuring protein afp19 expressed in filamentous fungal strains for preparing food |
WO2017100158A1 (en) * | 2015-12-11 | 2017-06-15 | Danisco Us Inc. | Methods and compositions for enhanced nuclease-mediated genome modification and reduced off-target site effects |
WO2018019948A1 (en) | 2016-07-29 | 2018-02-01 | Dsm Ip Assets B.V. | Polypeptides having cellulolytic enhancing activity and uses thereof |
EP3523415A1 (en) * | 2016-10-04 | 2019-08-14 | Danisco US Inc. | Protein production in filamentous fungal cells in the absence of inducing substrates |
WO2018114938A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Lipolytic enzyme variants |
WO2018114912A1 (en) | 2016-12-21 | 2018-06-28 | Dsm Ip Assets B.V. | Lipolytic enzyme variants |
EP3559221A1 (en) | 2016-12-21 | 2019-10-30 | DSM IP Assets B.V. | Lipolytic enzyme variants |
US10918113B2 (en) | 2016-12-21 | 2021-02-16 | Dsm Ip Assets B.V. | Lipolytic enzyme variants |
WO2018166943A1 (en) | 2017-03-13 | 2018-09-20 | Dsm Ip Assets B.V. | Zinc binuclear cluster transcriptional regulator-deficient strain |
KR20200026878A (ko) | 2017-06-06 | 2020-03-11 | 지머젠 인코포레이티드 | 균류 균주를 개량하기 위한 htp 게놈 공학 플랫폼 |
US11028401B2 (en) | 2018-06-06 | 2021-06-08 | Zymergen Inc. | Manipulation of genes involved in signal transduction to control fungal morphology during fermentation and production |
EP4055170A1 (en) | 2019-11-04 | 2022-09-14 | DSM IP Assets B.V. | Low volume transfection |
CN111088173B (zh) * | 2019-12-26 | 2021-08-20 | 南京高新工大生物技术研究院有限公司 | 一株黑曲霉基因工程菌及其构建方法和应用 |
CN113106126B (zh) * | 2020-01-09 | 2023-07-18 | 中国科学院分子植物科学卓越创新中心 | 一种提高真菌的原生质体转化效率或基因编辑效率的方法及试剂盒 |
US11479779B2 (en) | 2020-07-31 | 2022-10-25 | Zymergen Inc. | Systems and methods for high-throughput automated strain generation for non-sporulating fungi |
EP4019627A1 (en) | 2020-12-28 | 2022-06-29 | Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen | New enzymes and methods for benzoic acid-related metabolic pathways |
EP4032900A1 (en) | 2021-01-21 | 2022-07-27 | Koninklijke Nederlandse Akademie van Wetenschappen | New enzymes and methods for vanillic acid-related metabolic pathways |
WO2023222614A1 (en) | 2022-05-16 | 2023-11-23 | Dsm Ip Assets B.V. | Lipolytic enzyme variants |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002052026A2 (en) * | 2000-12-22 | 2002-07-04 | Universiteit Leiden | Nucleic acid integration in eukaryotes |
JP2003526376A (ja) * | 2000-03-14 | 2003-09-09 | トランスカーヨティック・セラピーズ・インコーポレーテッド | 相同組換えを改善する方法 |
Family Cites Families (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8416212D0 (en) | 1984-06-26 | 1984-08-01 | Sturge John & E Ltd | Lactase containing compositions |
CA1341226C (en) | 1988-08-16 | 2001-05-01 | Wim Van Hartingsveldt | Gene replacement as a tool for the construction of aspergillus strains |
US5464764A (en) | 1989-08-22 | 1995-11-07 | University Of Utah Research Foundation | Positive-negative selection methods and vectors |
ATE238425T1 (de) | 1993-07-23 | 2003-05-15 | Dsm Nv | Selektionmarker-genfreie rekombinante stämme: verfahren zur ihrer herstellung und die verwendung dieser stämme |
DK0758020T3 (da) | 1995-08-03 | 2009-04-06 | Dsm Ip Assets Bv | Amds-gen fra Aspergillus niger kodende for en acetamidase |
WO1998046772A2 (en) | 1997-04-11 | 1998-10-22 | Dsm N.V. | Gene conversion as a tool for the construction of recombinant industrial filamentous fungi |
ATE419013T1 (de) | 1998-04-15 | 2009-01-15 | Hutchinson Fred Cancer Res | Methoden und vektorenkonstrukte zur erzeugung von transgene nagetieren, welche ein heterologes gen ubiquitär exprimieren |
GB9907687D0 (en) | 1999-04-01 | 1999-05-26 | Kudos Pharm Ltd | Assays methods and means |
AU1647501A (en) | 1999-12-10 | 2001-06-18 | Cytos Biotechnology Ag | Replicon based activation of endogenous genes |
EP1339837B1 (en) | 2000-12-07 | 2008-02-13 | DSM IP Assets B.V. | Prolyl endoprotease from aspergillus niger |
US20080108056A1 (en) * | 2001-03-30 | 2008-05-08 | Masayuki Machida | Method of Detecting the Expression of Aspergillus Gene |
DE10131786A1 (de) | 2001-07-04 | 2003-01-16 | Sungene Gmbh & Co Kgaa | Rekombinationssysteme und Verfahren zum Entfernen von Nukleinsäuresequenzen aus dem Genom eukaryotischer Organismen |
US20030092183A1 (en) | 2001-09-21 | 2003-05-15 | Fisher Katherine E. | Rapid creation of gene targeting vectors using homologous recombination in yeast |
AU2003231028A1 (en) | 2002-04-22 | 2003-11-03 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for increasing homologous recombination of a nucleic acid sequence |
US20070298455A1 (en) | 2003-10-14 | 2007-12-27 | Van Den Berg Marco A | Method For Preparing A Modified Host Cell |
CA2548220A1 (en) | 2003-12-01 | 2005-09-09 | Introgen Therapeutics, Inc. | Use of mda-7 to inhibit infection by pathogenic organisms |
US20050181509A1 (en) | 2004-02-12 | 2005-08-18 | The Penn State Research Foundation | Dual selection based, targeted gene disruption method for fungi and fungus-like organisms |
JP4050712B2 (ja) | 2004-02-27 | 2008-02-20 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 相同組換えを行わせる方法 |
DE602005023427D1 (de) | 2004-04-02 | 2010-10-21 | Dsm Ip Assets Bv | Filamentöse pilzmutanten mit verbesserter homologer rekombinationseffizienz |
JP2006058093A (ja) * | 2004-08-18 | 2006-03-02 | National Institute For Materials Science | 血液分析装置 |
AU2005287547B2 (en) | 2004-09-23 | 2010-09-02 | Basf Plant Science Gmbh | Recombination cassettes and methods for sequence excision in plants |
WO2007013979A2 (en) | 2005-07-20 | 2007-02-01 | Invitrogen Corporation | Methods for increasing efficiency of homologous recombination |
ATE460489T1 (de) | 2006-04-08 | 2010-03-15 | Dsm Ip Assets Bv | Verbessertes verfahren zur homologen rekombination in pilzzellen |
WO2008113847A2 (en) | 2007-03-21 | 2008-09-25 | Dsm Ip Assets B.V. | Improved method for homologous recombination |
US8597923B2 (en) | 2009-05-06 | 2013-12-03 | SyntheZyme, LLC | Oxidation of compounds using genetically modified Candida |
-
2005
- 2005-03-31 DE DE602005023427T patent/DE602005023427D1/de active Active
- 2005-03-31 WO PCT/EP2005/051464 patent/WO2005095624A2/en active Application Filing
- 2005-03-31 US US10/594,014 patent/US9243043B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-03-31 EP EP09176806.9A patent/EP2172557B1/en active Active
- 2005-03-31 JP JP2007505561A patent/JP2007530065A/ja active Pending
- 2005-03-31 EP EP18160034.7A patent/EP3351637B1/en active Active
- 2005-03-31 ES ES05740129T patent/ES2350048T3/es active Active
- 2005-03-31 CN CN200580011927.4A patent/CN101218348B/zh active Active
- 2005-03-31 PL PL05740129T patent/PL1733040T3/pl unknown
- 2005-03-31 EP EP05740129A patent/EP1733040B1/en not_active Revoked
- 2005-03-31 CA CA002559827A patent/CA2559827A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-31 AU AU2005229437A patent/AU2005229437A1/en not_active Abandoned
- 2005-03-31 AT AT05740129T patent/ATE480632T1/de active
- 2005-03-31 DK DK05740129.1T patent/DK1733040T3/da active
-
2011
- 2011-04-07 JP JP2011085638A patent/JP2011152148A/ja active Pending
-
2015
- 2015-12-28 US US14/980,425 patent/US9657301B2/en active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2003526376A (ja) * | 2000-03-14 | 2003-09-09 | トランスカーヨティック・セラピーズ・インコーポレーテッド | 相同組換えを改善する方法 |
WO2002052026A2 (en) * | 2000-12-22 | 2002-07-04 | Universiteit Leiden | Nucleic acid integration in eukaryotes |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6010035315; Nucleic Acids Research, (1996), Vol. 24, No. 11, p. 2067-2072 * |
JPN6010035318; 第26回日本分子生物学会年会プログラム・講演要旨集、2003年11月25日発行、p. 830、3PA-214 * |
JPN6010035322; Nucleic Acids Research, (1996), Vol. 24, No. 23, p. 4639-4650 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3351637B1 (en) | 2020-06-10 |
WO2005095624A3 (en) | 2006-02-16 |
DE602005023427D1 (de) | 2010-10-21 |
CA2559827A1 (en) | 2005-10-13 |
EP1733040B1 (en) | 2010-09-08 |
EP2172557A8 (en) | 2010-06-23 |
ES2350048T3 (es) | 2011-01-17 |
JP2007530065A (ja) | 2007-11-01 |
US20080227145A1 (en) | 2008-09-18 |
EP1733040A2 (en) | 2006-12-20 |
AU2005229437A1 (en) | 2005-10-13 |
DK1733040T3 (da) | 2010-11-22 |
US9657301B2 (en) | 2017-05-23 |
EP2172557B1 (en) | 2018-03-14 |
ATE480632T1 (de) | 2010-09-15 |
EP2172557A1 (en) | 2010-04-07 |
US20160130589A1 (en) | 2016-05-12 |
US9243043B2 (en) | 2016-01-26 |
CN101218348A (zh) | 2008-07-09 |
EP3351637A1 (en) | 2018-07-25 |
PL1733040T3 (pl) | 2011-01-31 |
CN101218348B (zh) | 2014-07-30 |
WO2005095624A2 (en) | 2005-10-13 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2011152148A (ja) | 改善された相同的組換え効率を有する糸状菌変異体 | |
EP1756145B1 (en) | Production of polypeptides by improved secretion | |
JP4783359B2 (ja) | 真菌細胞において遺伝子を発現させるための真菌プロモーター | |
US8642290B2 (en) | Fungal transcriptional activators useful in methods for producing a polypeptide | |
Kahana et al. | DOT4 links silencing and cell growth in Saccharomyces cerevisiae | |
JPH09511911A (ja) | インビボ遺伝子発現システム | |
JP2017532055A (ja) | 糸状真菌二重突然変異宿主細胞 | |
JP2008516594A (ja) | 選択可能なマーカーとしての相同性amds遺伝子 | |
EP2511372A1 (en) | Improved production of secreted proteins by filamentous fungi | |
US8017341B2 (en) | Transcription factors | |
US20220235378A1 (en) | Multipartite crispr donor | |
JP2016518829A (ja) | 選択的オートファジー経路の不活性化成分を含む糸状真菌細胞及びその使用方法 | |
AU2012211485A1 (en) | Filamentous fungal mutants with improved homologous recombination efficiency | |
WO2021089452A1 (en) | Low volume transfection | |
Al-Sheikh | Transcriptional regulation of the glucoamylase-encoding gene under endoplasmic reticulum stress in Aspergillus niger | |
Georgakopoulos | Regulation of carbon catabolite repression in the filamentous fungus Aspergillus nidulans. |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110509 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110509 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130723 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131021 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131024 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140401 |