JP2011041534A - 弱毒ウイルスの作出方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明の弱毒ウイルスの作出方法は、ウイルスが感染した株化細胞を培養し、次いで、ウイルス非感染細胞へのウイルスの再接種をすることなく、感染細胞を継代培養する工程を含む。ウイルスが本来はCPEを示さない非感受性の細胞株を用いて、ウイルス感染細胞自体を細胞継代することにより、ウイルス回収・再接種という操作をすることなくウイルスを維持できる。このような細胞継代を繰り返すことで、従来の継代培養法による弱毒化方法よりも少ない継代回数でウイルスを弱毒化できる。
【選択図】なし
Description
野外飼育豚から、以下に示す通りに独自に豚繁殖・呼吸障害症候群(PRRS)ウイルスを分離した。ウイルスゲノム配列の一部を解析した結果から、当該分離株は北米型PRRSウイルスであることが判明した。
MARC145細胞で培養したウイルス液(回収培養液)をベロ細胞(理研セルバンクより入手)に接種し、37℃で5〜7日間培養した。ベロ細胞はMEM培地中で培養し、単層培養に調整して接種に用いた。接種後、CPEは確認されなかったが、抗血清を用いた間接蛍光抗体法により細胞内のウイルスの存在は確認できた。
(1) 各種細胞への感受性試験
予備試験として、上記で得たウイルス株のうち33代目(PRRSVwt-7/Vero-33T)について、豚肺胞マクロファージへの感受性を確認した。コントロールのウイルス株として、MARC145細胞で7代及び27代継代(ウイルス回収・再接種)した株を用いた。回収培養液(ウイルス液)を豚肺胞マクロファージ(Mφ)、MARC145細胞、ベロ細胞に接種し、各ウイルスの力価を算出して比較した。試験に用いたウイルス株と試験の結果をそれぞれ表1及び表2に示す。
下記表3に示す通り、4週齢のPRRS陰性SPF豚5頭に1頭当たり106.8TCID50のウイルス液を筋肉内接種し、4週間観察した。比較のため、PRRSVwt-7/MARC-7T(比較例)及び市販の弱毒生ワクチン製剤(参考例)を接種した。市販のワクチンは販売者が推奨する用法・用量通りに用いた。
Claims (7)
- ウイルスが感染した株化細胞を培養し、次いで、ウイルス非感染細胞へのウイルスの再接種をすることなく、感染細胞を継代培養する工程を含む、弱毒ウイルスの作出方法。
- 前記工程が15〜35回行われる請求項1記載の方法。
- 前記細胞は、弱毒前の前記ウイルスが細胞変性効果を示さない細胞である請求項1又は2記載の方法。
- 前記ウイルスが豚繁殖・呼吸障害症候群ウイルスであり、前記細胞が非MA104系サル腎細胞である請求項3記載の方法。
- 前記細胞がベロ細胞である請求項4記載の方法。
- 請求項1ないし5のいずれか1項に記載の方法により作出された弱毒ウイルス。
- 請求項6記載の弱毒ウイルスを含むワクチン。
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