JP3040157B2

JP3040157B2 - イヌパルボウイルス（ｃｐｖ）を含む弱毒イヌパルボウイルスワクチンとイヌ科動物におけるｃｐｖ感染予防

Info

Publication number: JP3040157B2
Application number: JP02511157A
Authority: JP
Inventors: ロスマクギャヴィン，デビッド; ラヴィディス，ライネット
Original assignee: フォートドッジオーストラリアピーティワイリミテッド
Priority date: 1989-08-08
Filing date: 1990-08-08
Publication date: 2000-05-08
Anticipated expiration: 2015-05-08
Also published as: JPH05503209A

Description

【発明の詳細な説明】発明の分野イヌパルボウイルス（CPV−２）は、イヌ科動物の寄
生体であり、嘔吐、下痢、気分減退、発熱、種々の白血
球減少症、そして急激な脱水を引き起こす。このイヌパ
ルボウイルスは、ウイルスの増殖を助けるような分裂活
性の高い宿主細胞を必要とする。したがって、分裂活性
の高い細胞は、ウイルスに対する感受性がもっとも高い
ものとなる。また、組織は分化の段階で感受性が高い。

したがって、心筋炎や、より重要には腸炎がこのウイ
ルスによるもっとも一般的な疾患である。

発明の背景通常のワクチン療法の出現により、仔犬はイヌパルボ
ウイルスに特に感染しやすい動物である。ワクチン接種
されたメス犬から生まれた仔犬は、母親由来の抗体（MD
A）によって短期間ではるがその免疫が受け継がれる。
母親由来の抗体は、生後１週間にわたって受動的防御を
与える。しばしば、仔犬は、母親の50％にあたる血清中
抗体濃度が認められる。しかし、生後８−10日になる
と、母親由来の抗体の量は指数関数的に半減してしま
う。

MDAが指数関数的に減少していく一方で、この時期に
商業的に入手可能なワクチンを接種してもそれによる抗
体産生を導くことはできない。この現象は、種々の科学
論文に記載されており、例えばコルネルベテリナリアン
（Cornell Veterinarian）1982年72巻103−109頁（ポロ
ック、Pollock）およびコルネルベテリナリアン（Corne
ll Veterinarian）1981年71巻408−427頁（カルミカエ
ル他、Carumichael et al.）。

MDAが標準的な方法（例えば、血球凝集（Haemaggluti
nation）−抑制（Inhibition（HI）、エリザ（ELISA）
または血清中和等）によって検出可能であるのに対し
て、ワクチンは仔犬に活性免疫応答を誘導するにはたい
へん不安定なものである。MDAは、病気に対する有効量
よりも低い濃度に減少したとしても検出されうる。この
ような検出は、HIテストによってなされるものであり、
50μｌあたり血液凝集阻害単位（HIU/50μＬ）が約64の
タイターに値する。したがって、「免疫空白期間（immu
nity gap）」と呼ばれる時期（通常、生後８−14週の
間）があり、この時期は仔犬の母親由来抗体量が減少
し、防御が不十分なものとなり、またワクチン接種によ
る免疫応答も引き出せない時期でもある。よって、この
時期に仔犬は感染に対する感受性があり、一方でワクチ
ン接種に対する応答性を示さない。

このようなことから、従来のイヌパルボウイルスワク
チンよりも抗原性が高いワクチンが、仔犬において母親
由来の抗体にもまさり、防御抗体を産生する独自の免疫
系を刺激することは自明なことであると考えられて来
た。

そして、このことは、CPV−２の弱毒株（より一層抗
原性がある）の利用によってある程度達成されるであろ
うが、この場合、ワクチン接種された動物の便に接種さ
れたウイルスが潜在することがあり、感染の拡大や、ウ
イルスの毒性の度合いが変化する危険性がつきまとう
（欧州特許No.189958参照）。そのような株の例とし
て、CPV株Ｉ−404（パスツール研究所）がある。現在、
このウイルスは市販されているワクチン「インターベッ
ト・ノビバック・バルボ−Ｃ」（INAERVET“NOBIVAC PA
RVO−C"）に使用されている。

本発明の研究者は、従来から大きな問題とされてきた
イヌパルボウイルスによる疾患を予防するワクチンの生
産を可能とする適当な株を選別する過程において驚くべ
き発見をした。すなわち、仔犬の母親由来抗体量が検出
可能な程度に存在し、接種された動物で大量の生きたウ
イルスが潜在することによる他の犬への感染拡大に対し
て予防的効果を与えるCPV株Ｉ−404などの株を発見し
た。

パルボウイルスに対する商業的に入手可能なワクチン
がかかえる他の問題を記載した。例えば、ある品種で
は、免疫空白期間に対して特に感受性が高い。また、あ
る動物では、MDAレベル後でさえも、ワクチンの繰り返
し投与量に対して反応性を示さず、このことは正常な状
態で期待される抗体の量が消え失せてしまっていること
を示している。

発明の開示本発明は、母体由来の抗CPV−２抗体存在下において
抗体応答を引き出し、かつ毒性が低いようなCPV−２ワ
クチンを提供するものである。

本発明は、毒性が低くて、母体由来の抗CPV−２抗体
存在下において抗体応答を引き出すことが可能な弱毒パ
ルボウイルスからなるものである。

本発明の好ましい実施態様では、パルボウイルスは、
弱毒パルボウイルスを接種された犬から放出されたウイ
ルスからの感染率が非常に低いことを特徴とする。

この明細書で用いられる言葉「感染率が低い」の意味
することは、感染動物からパルボウイルスが放出されな
いことを意味し、またたとえ放出されたとしてもその放
出されたパルボウイルスに接触した犬に対して実質的な
感染能力がないことを意味している。

本発明の第一の発明にもとづく実施態様は、動物細胞
培養ヨーロピアンコレクション（ECACC,英国サリズバリ
ー、ポートドウン;Porton Down,Salsbury,U.K）に寄託
されたイヌパルボウイルスのCPV−２株を含むものであ
る。寄託番号は、V89042601である。この株は、その弱
毒イヌパルボウイルスK3iされたものの60回継代（passa
ge 69;P69）されたもので以下、CPV−２株P69と呼ぶ。

本発明のための培養ウイルスの弱毒化は、適当な培養
系で、ウイルスを継代培養することによって達成され
た。この培養系は、例えばネコ腎臓（FK）細胞系であ
る。ウイルスは、限界希釈法を用いてクローン化され、
そして継代されたウイルスに継代69（P69）と番号を付
けた。

本発明の第二の発明は、弱毒イヌパルボウイルスの有
効量を含むワクチンからなるもので、このイヌパルボウ
イルスは、低毒性を示し、また母体由来の抗CPV−２抗
体存在下において抗体応答を引き出すことが可能なもの
である。

この発明の好ましい実施態様によれば、弱毒パルボウ
イルスは、ワクチンを接種された犬から放出されたウイ
ルスによる感染率が非常に低いことを特徴とする。

特に好適な実施態様によれば本発明の第二の発明は、
CPV−２株69に該当する動物細胞培養ヨーロピアンコレ
クションに寄託された番号V89042601のCPV株あるいはこ
の株と同等なものの有効量を含むものである。

発明の詳細な説明および請求の範囲において言及され
る有効量とは、免疫応答を引き出すのに十分な量を意味
するものであり、好ましくは50％培養細胞感染量（Tiss
ue Cullture Infective Doses;TCID₅₀）／投与量の値が
少なくとも10^4.8である。

本発明のワクチンは、新規なCPV−２株P69を生きた状
態で、あるいは不活性化された致死状態で用いることが
可能である。好ましくは、本発明のワクチンは、生CPV
−２株P69を含むか、あるいはその誘導体または機能的
に等価なものを含む。

このようなワクチンは、他の成分を含むことも可能で
あり、例えばそのような成分として安定剤、アジュバン
ト、賦形剤、その他の薬剤学的に許容される化合物また
は他の抗原またはその一部分が挙げられる。ワクチン
は、既知のワクチン製造現場において一般的な凍結乾燥
試料あるいは懸濁された状態にされる。

好ましい実施態様によれば、本発明のワクチンはワク
チン接種に用いられる他のウイルスまたは生物と組み合
わされて使用されることが可能である。そのような他の
ウイルスとして例えばイヌジステンパー、感染性ヘパチ
チスウイルス、イヌパラインフルエンザまたはボルデテ
ラなどがあるが、もちろんこれらに限定されるものでは
ない。

本発明によれば,CPV−２株P69は、最適な条件下で適
当な細胞系、好ましくはFKまたはイヌ腎臓細胞（例えば
MDCK）において増殖する。そして既知の方法を用いてこ
の培養されたウイルスをワクチンの製造に用いる。

一般的にワクチン接種の妨害となるほどの量の母親由
来の抗体が存在しているにもかかわらず、ワクチンにCP
V−２株P69を取り込ませることによって、イヌパルボウ
イルスによる疾患に対する防御を提供することが可能で
ある。

本発明のV89042601株は既知のCPV−２株とは異なるも
ので、血清陽性および血清陰性のどちらの犬に対しても
血清学的な応答を示す。細胞培養系での増殖特性や、新
規な株を含むワクチンを投与された動物からの生ウイル
ス放出特性と同様に、そのDNA配列変異が認められる。

特に、本発明は、培養細胞系に接種した場合に毒性の
度合いが既知のCPV株ワクチンと顕著に異なる。CPVワク
チンの種々の株間で、異なるタイプの細胞培養、例えば
ネコの細胞培養系とイヌの細胞培養系とで増殖する能力
に違いが認められる。

本明細書中において言及する抗体力価は、二倍希釈を
用いた標準的な血球凝集阻害試験によって測定されるも
ので、豚赤血球細胞の凝集を完全に阻害させるもっとも
高い血清希釈率の逆数によって示す。

図の簡単な説明第１図は、HpH−Ｉによって消化されたCPV−２株P6
9、CPV−２株P98およびCPV株Ｉ−104について、断片の
分子量の違いを示すものである。

本発明を実施するための最良の形態 1.CPV−２の弱毒化毒性パルボウイルスから単離されたCPV−2K3i株由来
のウイルスをオーストラリアのタウンスビルにあるジェ
ームスクーク大学（James Cook University,Townsvill
e,Australisa）から入手した。このウイルスを既知の継
代方法を用いて本願出願人によりネコ腎臓（FK）細胞系
およびイヌ腎臓（MDCK）細胞系で内で継代することによ
って弱毒化した。

継代61回目で回収されたウイルスを標準的な限界希釈
法によって精製した。さらにこの精製法を２回繰り返し
て、合計３回の限界希釈による継代を実施した。FK細胞
系で３回目の限界希釈による継代から回収されたウイル
ス（すなわち継代64回）をさらにウイルスマルチプリケ
ーションステップに置いた（継代65回目）。

2.ワクチン種ロット（Vaccine Seed Lot）の調製継代65回目の精製ウイルスをさらにFK培養系に接種し
て４回継代し37℃で３ないし４日インキュベートするこ
とによって継代69回目のウイルスを得た。これを−70℃
で保存した。このウイルスは、本発明の好ましい実施態
様にもとづいたV89042601と番号が付けられた寄託され
た株である。

3.P69を含むCPV−２ワクチンの調製 FK細胞培養系にP68を接種し、そして37℃で３ないし
４日間インキュベートした。おの培養を既知の標準的な
方法（生ワクチンまたは不活性化ワクチンのどちらを求
めるかに応じて）を用いて回収してウイルスの塊を得て
さらにウイルスの力価（効力）および無効果性（steril
ity）を調べた。スタビライザーでウイルス塊を形成
し、それを−20℃で保存した。また、ワクチンを必要に
応じてさらに凍結乾燥させることも可能である。

4A.生後６週間の仔犬に対するワクチン接種の結果生後６週間の仔犬（小型フォックステリア）に、高力
価の陽性血清2mlを腹腔内注射することによって受動免
疫を与えた。前ワクチン接種（後受動免疫）力価を第１
表のように決定した。この表中、抗体レベルは、32以下
であり、疾患に対する防御性がないと思われる。しか
し、ワクチン接種に対する仔犬の応答を妨害することが
可能である。

つぎに、仔犬に前記CPV−２株P69含有ワクチンを接種
した。この際、投与量は第１表に示すように異なる。抗
体力価は、ワクチン接種後15日目で測定し、第１表に示
した。10^4.1TCID₅₀投与された一匹の犬のみが応答しな
かった。

4B.血清陽性の犬でのイヌパルボウイルスワクチンの比
較 CPV−２株P69またはノビバックパルボ・シー（NOVIVA
C PARVO−Ｃバッチ4545,これはCPVのＩ−404）のどちら
か一方を含むワクチンを接種された生後６週間目の仔犬
から得られた血清学的データを比較した。

妊娠中に不活性CPVワクチンを接種されたメスから得
た生後６週間目のビーグル犬に、適当なワクチンからな
る単一投与量を接種し、そして生後９週間目に再び同一
ワクチンを接種した。

ノビバックパルボ・シーを受けた仔犬と、CPV−２株P
69を受けた仔犬とはひと腹の子同士である。

CPV−２株P69含有ワクチンは、一回の投与量あたり10
^5.8TCID₅₀の力価で用いた。一方、ノビバックパルボ・
シーは、一回の投与量あたり10^5.4TCID₅₀の力価で用い
た（この力価は購入したパルボ・シーの力価である）。

CPVに対する抗体力価を測定するために生後６、８、
９、そして11週間目に仔犬から血を取った。お産（whel
ping）時のメス犬の力価は、32から1024HIU/50uLの範囲
内にある。生後３週間目の仔犬は、イヌパルボウイルス
に対する母親由来抗体を持っており、その力価は16ない
し512HIU/50uLである。

ワクチン接種前後の仔犬の血球凝集阻害力価は、第２
表に示した。

第２表中、★および＋は以下のことを示す。

★：ワクチン接種を２回した。

第一回生後６週間目第二回生後９週間目＋:CPV血球凝集阻害力価;HIU/50uL 生後６週間目（第一回目のワクチン接種時）の仔犬の
力価は４〜６倍減少（＜16〜64）する。33匹中23匹（70
％）の仔犬が母親由来抗体力価を生後６週時に16 HIU/5
0uL以上有していた。

生後６週間目でのワクチン接種後、24匹中23匹（95.8
％）の仔犬が、生後８週間目、力価2048から16,384でCP
V−２株P69含有ワクチンに応答した。９匹のうち２匹
（22.2％）のみが同時期にノビバックパルボ・シー（No
bivac Parvo−Ｃ）に応答した。このノビバックパルボ
・シーの力価は、2048から4096の範囲内にある。

生後６週間目時のワクチン接種に対しては応答しなか
ったそれぞれの群に含まれるすべての仔犬は、生後９週
間目に実施された２回目のワクチン接種に対しては応答
した。これらの仔犬での応答の程度は、最初のワクチン
接種で応答した個体のものと同程度であった。

弱毒生イヌパルボウイルスP69ワクチンが高い免疫原
性を有することが第２表に示された血清学的結果によっ
て明らかにされた。＜16から64にある受動的に獲得した
抗体力価を有する24匹の仔犬のうち23匹が、生後６週間
目でCPV−２株P69含有ワクチンを接種された時点で少な
くとも2048HIU/50uLからなる抗体応答を生み出した。

これとは対照的に、ノビバックパルボ・シーを生後６
週で接種された９匹の仔犬中たった３匹だけが抗体力価
の増加が認められたにすぎない。第一回目のワクチン接
種後に抗体力価の上昇を示した３匹の仔犬は、すべて前
ワクチン接種力価が16であった。残りの６匹の仔犬は、
力価が32から64であり、抗体応答が認められなかった。

血清学的データによれば、CPV−２株P69は、既知のイ
ヌパルボウイルスと干渉する受動的に獲得した抗体の力
価を克服する。

5A.毒性の変化ワクチン接種された犬から生じたウイルス性物質の毒
性および毒性の変化を調べるために、ワクチン接種され
た犬（継代１回）から糞を採取し、前CPVナイーブな犬
（previously CPV−naive dogs）に経口投与した（継代
２回目）。さらに、これらの犬から糞試料を採取し、さ
らにワクチン接種されていない犬に継代した（第３表を
見よ）。

14日目で検出可能な抗体を産生した２匹の犬からなる
Ｂ群（第３表）を除いて、ウイルスの継代が認められな
かった。

（表中、Passageは継代、Repeat Passageは繰り返し継
代を意味する）各継代につき、２匹の犬に接種した。

継代１（Passage 1）の犬：イヌパルボウイルスを皮
下より10ml、経口より1ml接種した。

継代２（Passage 2）の犬：継代１の犬から得た糞懸
濁液（2gの糞と等しい）を5ml経口投与した。

継代３（Passage 3）の犬：継代２の犬から得た糞懸
濁液（＝3g）（−30℃）を10ml経口投与。

継代1B（Passage 1B）の犬:P69イヌパルボウイルスを
皮下より10ml、経口より1ml接種した。

継代2B（Passage 2B）の犬：継代1Bの犬から得た糞懸
濁液（2gの糞と等しい）を10ml経口投与した。

継代3B（Passage 3B）の犬：継代２の犬から得た糞懸
濁液（＝15g）を30ml投与。

継代4B（Passage 4B）の犬：継代3Bから糞懸濁液（＝
15g）を30ml投与。

継代5B（Passage 5B）の犬：継代4Bから得た糞懸濁液
（＝15g）を30ml投与。

5B.血清陰性の仔犬におけるパルボウイルス株の比較 CPV株Ｉ−404またはCPV−２株P69の投与による仔犬の
ウイルス放出特性および血清学的特徴について比較検討
した。

第４表に示すように、生後８週間目から11週間目の仔
犬を、ランダムに４つのグループにふるいわけ、CPV−
２株P69（力価10^6.0TCID₅₀/投与量）またはCPV株Ｉ−40
4（力価10^6.0TCID₅₀/投与量）のどちらか一方を接種し
た。

血清抗体力価は、接種前と、接種後６日および30日目
に測定した。それぞれの仔犬から接種後２日目から全体
で12日間にわたり毎日糞試料を採取した。それぞれの糞
試料をダルベッコリン酸緩衝液に1:1の割合で懸濁し、
細菌除去のために濾過し、そしてネコ腎臓（FK）細胞に
接種した。

第４表中、★および＋は以下のことを示す。

★：仔犬一匹あたり10⁶TCID₅₀を皮下接種。

＋：仔犬一匹あたり10⁶TCID₅₀を経口接種。

なお、対照群は滅菌処理された希釈液を接種された。

皮下接種によって、CPV−２株P69を受けた仔犬の100
％が1024HIU/50uL以下の力価による接種後６日目で応答
した。一方、CPV株Ｉ−404を受けた仔犬の60％のみ（５
匹中３匹）が1024HIU/50uL以下の力価による接種後６日
目で応答した。

経口接種によって、CPV−２株P69を受けた仔犬３匹中
１匹が、接種後６日目で血清タイプの変換が生じた。13
日目では、３匹中２匹のみが血清タイプの変換が生じ
た。CPV株Ｉ−404を投与されたどちらの場合の仔犬も、
接種後６日で血清変換が生じた。

第５図に示すように、ワクチン接種されたすべての仔
犬の糞中にイヌパルボウイルスが検出された。

糞中にウイルスが検出されるのは、CPV株Ｉ−404より
もCPV−２株P69を接種されたほうの仔犬が早くて期間が
短い。また、CPV株Ｉ−404は、皮下接種された群の対照
群に広がった。一方、CPV−２株P69は対照群には感染し
なかった。

6.異なる細胞培養系におけるCPV増殖の比較 CPV−２株P69は、異なる細胞培養系において増殖する
場合に既知のCPVの株と異なった特性を示す。

本研究では、４つの異なった細胞培養系を用いてCPV
−２株P69の増殖を比較した。これらの細胞培養系は、
マジンダービー（Madin Darby）犬腎臓（MDCK）細胞、
クランデル（Crandell）猫腎臓（CrFK）細胞、ネコ腎臓
（FK）細胞、そしてA72細胞である。

5X10⁴細胞／平方センチメートル含むフラスコを２つ
用意し、それぞれCPV−２株P69またはノビバックパルボ
・シー（CPV株Ｉ−404を含むと思われる）のどちらか一
方を10^4.7〜10^5.2TCID₅₀接種した。

接種後に細胞培養系に対する細胞変性効果（CPE）に
ついて調べた（第６表参照）。どのウイルスでもひとつ
の細胞型に対して100％CPEを示した場合、その細胞型の
すべてのフラスコから細胞を回収して凍結し、かつ粉砕
した。回収産物をCrFK細胞で滴定した（第6B表および第
6C表参照）。第6A表ないし第6C表に示された結果から明
らかなように、CPV−２株P69はノビバックパルボ・シー
に比べて、細胞培養系に感染して細胞変性効果（CPE）
を示す時期が早い。また、細胞培養系によって感染性ウ
イルスの産量に違いがある。どちらのウイルス株もCrFK
懸濁培養と比較してCrFK単層培養での滴定の方が力価が
より低くなっていた。この力価測定系の違いによる違い
は、ノビバックパルボ・シーの場合の方が大きかった。
さらに、ウイルス株間の違いは、顕著であった（ｐ＜0.
01）。

7.DNA分析自己複製するパルボウイルスのゲノムは、重複し、か
つ遺伝子をコードしない領域を含むものである。このよ
うな両行きは、4513番目のヌクレオチドと5011の番目の
ヌクレオチドの間にある。この領域は約500のヌクレオ
チドからなり、1200塩基対からなるHae III断片を含
む。CPVゲノムにおけるヌクレオチド4513と5011の間に
あるこの領域の割合は、CPV株Ｉ−404と同様に、CPV−
２株P69およびCPV−２株P92について調べられた。

基本的な違いは、約4600ヌクレオチドのところにあっ
た。

CPV−２ P69 TAT_CAACTA CPV−２ P98 TAT_CAACTA CPV株Ｉ−404 TCTTCAACTA 4595^＊ 4604^＊ ^＊おおよそのヌクレオチド領域さらに、第１図を参照すると、CPV株のHph−Ｉによる
消化は、CPV−２株P69に見出される第三バンドは、CPV
−２株P92およびCPV株Ｉ−404の対応するバンドと比較
して分子量が大きい（第１図：標準は、ラムダBST E II
（Std＝LAMBDA BST E II））。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 7/08 Ｃ１２Ｒ 1:92） (72)発明者ラヴィディス，ライネットオーストラリア国 2763 ニューサウスウェールズクウェーカーズヒルキャランドラアベニュ６ (56)参考文献特開昭59−157031（ＪＰ，Ａ) 欧州特許出願公開189958（ＥＰ，Ａ１) Ｊ．Ａｍ．Ｖｅｔ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．，Ｖｏｌ．181，Ｎｏ．９, （1982），ｐ909−913 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 7/00 - 7/08 A61P 31/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】ECACC寄託番号V89042601（CPV−２ P69）
号の抗原性および毒性特性を有する弱毒イヌパルボウイ
ルスにおいて、低毒性であり、かつ母親由来イヌパルボ
ウイルス（CPV）抗体を有する仔犬において免疫応答を
引き出すことが可能であることを特徴とする弱毒イヌパ
ルボウイルス。
【請求項２】前記弱毒イヌパルボウイルスは、さらに前
記弱毒イヌパルボウイルスを接種された動物から放出さ
れたいずれのウイルスの感染率も低いことを特徴とする
請求項１記載の弱毒イヌパルボウイルス。
【請求項３】ECACC寄託番号V89042601号のウイルスであ
ることを特徴とするイヌパルボウイルス。
【請求項４】弱毒イヌパルボウイルスを有効量含むこと
を特徴とする請求項１から請求項３のいずれかに記載の
ワクチン。
【請求項５】CPVの有効量は、投与量あたりの50％培養
細胞感染量（TCID₅₀）が少なくとも10^4.8であることを
特徴とする請求項４記載のワクチン。
【請求項６】CPVを、生のかたちで、あるいは不活化の
かたちで、あるいはその両方のかたちで含むことを特徴
とする請求項４または請求項５記載のワクチン。
【請求項７】さらに他の薬剤学的に許容される化合物ま
たは任意の抗原またはそれらの一部またはウイルスまた
はウイルス粒子を含むことを特徴とする請求項４から請
求項６のいずれかに記載のワクチン。
【請求項８】凍結乾燥調製物または懸濁液のかたちにあ
ることを特徴とする請求項４から請求項７のいずれかに
記載のワクチン。
【請求項９】請求項１から請求項３のいずれかに記載の
弱毒ウイルス株を有効量含むワクチンをイヌに投与する
ことを含むことを特徴とするイヌにおけるイヌパルボウ
イルスの感染防御方法。
【請求項１０】請求項４から請求項６のいずれかに記載
のワクチンをイヌに投与することを含むことを特徴とす
るイヌにおけるイヌパルボウイルスの感染防御方法。