JP2011016756A - メラニン産生抑制剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】リーチライムエキスとアミノ酸を併用することによる、リーチライムエキス単独よりも非常に効果に優れたメラニン産生抑制剤。アミノ酸としてはグリシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸が好ましい。
【選択図】なし
Description
また、抽出原料として用いる植物の構成部位は葉、果実、果実の果皮部、果肉部、種子等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらのうち特に葉部、果皮を抽出原料として用いることが好ましい。
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、またはこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
リーチライム (Citrus hystrix A. DC)の葉の乾燥物、果実の果皮部、および果肉部の乾燥物を細切りしたものそれぞれの20gに水200mLを加え、還流抽出器で80℃、2時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮、乾燥して抽出物を得た。水の代わりに、50%エタノール(水とエタノールとの重量比1:1)または75%エタノール(水とエタノールとの重量比(2.5:7.5)を用いて同じ操作を行った。抽出物の収率は表1のとおりであった。
メラニン産生細胞の培養
培養液は牛胎児血清5.0%を加えたダルベッコMEM(D−MEM)培地を用いた。細胞はマウスメラノーマB−16
を使用し、12wellのシャーレに細胞を植え付けた。細胞の植え付け量は4×103個/wellとした。細胞を播種した翌日、各種試料を添加し、添加後3日後に試験を終了した。
メラニン量の測定は培養後、細胞を2N-NaOHに溶解し405nmの吸光度を測定した。また、細胞増殖度は2N-NaOHに溶解した細胞溶解液の一部を BCA法によるタンパク測定法により540nmの吸光度で測定し、タンパク量に換算した。メラニン産生度は、単位タンパク量あたりのメラニン量の割合で計算し評価した。また、メラニン産生抑制効果の陽性対照物質としてβ-アルブチンを用いた。
計算式:メラニン産生度(%)=(試料添加区の405nmの吸光度値/試料添加区の540nmの吸光度値)/(無添加区の405nmの吸光度値/無添加区の540nmの吸光度値)×100
メラニン産生度が100%を以下の場合、メラニン産生が抑制されていることを示すものである。
また、細胞増殖度及びメラニン産生抑制効果については標準偏差を平均値で割った変動係数を併記した。
表2に上記で得られたリーチライムエキスをマウスメラノーマB−16細胞に添加した場合の、メラニン産生抑制度を示した。リーチライムエキス10ppm、25ppm添加においては、メラニン産生度がそれぞれ99%、95%とほとんどメラニン産生抑制効果は認められなかったが、50ppm添加では、83%、100ppm添加では73%を示し、アルブチンと同等の効果を示すことがわかった。
リーチライムエキスの濃度はメラニン産生度が99%とほとんどメラニン産生を抑制しない10ppmとし、各種アミノ酸と同時に添加して試験を行った。
表3には、リーチライムエキス10ppmと各種アミノ酸5mMを同時に添加した場合のマウスメラノーマ細胞でのメラニン産生抑制試験の結果を示した。
まず、リーチライム葉エキスに非極性アミノ酸のうち、プロリンを添加したものはメラニン産生度が87%を示し高いメラニン産生抑制効果を示した。
また、細胞増殖については96%とプロリンの添加による著しい阻害は認められず、刺激性は低いと考えられる。
リーチライムエキスとアミノ酸を併用することでメラニン産生抑制効果が高まることがわかったが、比較実験としてアミノ酸単独でメラニン産生抑制効果を確認した。
表4に各種アミノ酸5mMをマウスメラノーマB−16細胞に添加した場合の、メラニン産生度を示した。
アミノ酸には、必須アミノ酸としてアラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、グリシン、セリン、スレオニン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸の11種類と非必須アミノ酸としてノルロイシン、グリシルグリシン、グリシンベタインの3種類の計14種類のアミノ酸を用いた。表4には、これら14種類のアミノ酸を極性の有無及び非極性のアミノ酸については電荷の有無によって分類して示した。
このようにアミノ酸を単独で用いた場合、非極性アミノ酸、極性アミノ酸(電荷なし・負電荷)共に顕著なメラニン産生抑制効果がないことが確認された。
チンピ(Citrus unshiu Markovich)の果皮部の乾燥物を細切りしたものそれぞれの20gに水200mLを加え、還流抽出器で80℃、2時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮、乾燥して抽出物を得た。
表5にチンピエキスをマウスメラノーマB−16細胞に添加した場合の、メラニン産生抑制度を示した。チンピエキス10ppm、25ppm添加においては、メラニン産生度がそれぞれ101%、97%とほとんどメラニン産生抑制効果は認められなかったが、50ppm添加では、88%、100ppm添加では77%を示し、リーチライム葉エキスより若干弱いながらアルブチン100ppmと同等の効果を示すことがわかった。
比較実験としてチンピエキスとアミノ酸を併用した場合のメラニン産生度を確認した。
チンピエキスの濃度はメラニン産生度が101%とメラニン産生を抑制しない10ppmとした。
表6には、チンピエキス10ppmと各種アミノ酸5mMを同時に添加した場合のマウスメラノーマ細胞でのメラニン産生抑制試験の結果を示した。
チンピエキスに非極性アミノ酸のうち、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンを添加した場合のメラニン産生度はいずれも90%以上の値を示しており、増強効果は認められなかった。
一方、比較として行ったチンピエキスにアミノ酸を加えた試験の結果、メラニン産生抑制効果の増強は認められなかった。
被験者として、20〜60歳の女性10名に1日2回(朝、夜)連続1ヵ月間、試験品と比較品1,2,3のそれぞれの皮膚外用剤を使用させ、塗布部位の状態を試験前後で比較し、改善効果を調べた。本試験には、試験品として処方例1で示した皮膚外用剤を用い、比較品1には処方例1に示した皮膚外用剤からリーチライム葉エキスを除いた皮膚外用剤を、比較品2には処方例1に示した皮膚外用剤からアスパラギン酸ナトリウムを除いた皮膚外用剤を作成し、その使用による効果について調べた。評価は表8に従って行った。本発明の有効成分を配合した皮膚外用剤を毎日使用しながら肌の美白効果を塗布開始前及び1ヶ月塗布後におけるアンケートで集計し、効果の確認を行った。結果は表9に示す。表中の数字は、人数を示している。表9からも明らかなように、リーチライム葉エキスとアスパラギン酸ナトリウムが入った試験品の皮膚外用剤では、評価点数が69点を示した。一方、試験品からリーチライム葉エキスを抜いた比較品1では、評価点数が34点であり、また試験品からアミノ酸としてアスパラギン酸ナトリウムを抜いた比較品2では評価点数が42点であった。この結果から明らかなように、リーチライム葉エキスとアミノ酸を同時に添加することにより高い美肌効果が得られることが明らかとなった。
化粧用クリーム
(重量%)
a)ミツロウ
2.0
b)ステアリン酸
5.0
c)スクワラン
10.0
d)セタノール
5.0
e)自己乳化型グリセリルモノステアレート
3.0
f)ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.)
1.0
g)リーチライム葉エキス
0.5
h)アスパラギン酸ナトリウム
0.5
i)水酸化カリウム
0.3
j)防腐剤・酸化防止剤
適量
k)精製水
残部
製法 a)〜f)までを加熱溶解し、80℃に保つ。g)〜k)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜f)に加えて乳化する。40℃まで撹拌しながら冷却する。
乳液
(重量%)
a)ミツロウ
0.5
b)ワセリン
2.0
c)スクワラン
8.0
d)ソルビタンセスキオレエート
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)
1.2
f) リーチライム果皮エキス
0.005
g)グリシン
0.001
h)精製水
残部
i)防腐剤・酸化防止剤
適量
j)エタノール
7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜i)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でj)を添加し、40℃まで攪拌冷却する。
乳液
(重量%)
a)ミツロウ
0.5
b)ワセリン
2.0
c)スクワラン
8.0
d)ソルビタンセスキオレエート 0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)
1.2
f)リーチライム果肉エキス
10.0
g)グリシン
5.0
h)精製水
残部
i)防腐剤・酸化防止剤
適量
j)エタノール
7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜i)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でj)を添加し、40℃まで攪拌冷却する。
乳液
(重量%)
a)ミツロウ
0.5
b)ワセリン
2.0
c)スクワラン
8.0
d)ソルビタンセスキオレエート
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.) 1.2
f)リーチライム葉エキス 0.5
g)プロリン 0.5
h)精製水
残部
i)防腐剤・酸化防止剤
適量
j)エタノール
7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜i)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でj)を添加し、40℃まで攪拌冷却する。
乳液
(重量%)
a)ミツロウ
0.5
b)ワセリン
2.0
c)スクワラン 8.0
d)ソルビタンセスキオレエート
0.8
e)ポリオキシエチレンオレイルエーテル(20E.O.)
1.2
f)リーチライム果皮エキス
3.0
g)グルタミン酸ナトリウム 0.1
h)精製水
残部
i)防腐剤・酸化防止剤
適量
j)エタノール
7.0
製法 a)〜e)までを加熱溶解し、80℃に保つ。f)〜i)までを加熱溶解し、80℃に保ち、a)〜e)に加えて乳化し、50℃まで撹拌しながら冷却する。50℃でj)を添加し、40℃まで攪拌冷却する。
化粧水 (重量%)
a)リーチライム果肉エキス
0.5
b)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.) 2.0
c)エタノール
6.0
d)香料
適量
e)防腐剤・酸化防止剤 適量
f)精製水
残部
g)アスパラギン酸ナトリウム 0.1
製法 a)〜e)を均一に混合する。f)、g)を均一に混合し、a)〜e)混合物に加える。
化粧水
(重量%)
a)リーチライム葉エキス
0.5
b)ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート(20E.O.) 2.0
c)エタノール
6.0
d)香料
適量
e)防腐剤・酸化防止剤
適量
f)精製水
残部
g)アスパラギン酸ナトリウム 0.1
製法 a)〜e)を均一に混合する。f)、g)を均一に混合し、a)〜e)混合物に加える。
トローチ (重量%)
a)アラビアゴム 6.0
b)ブドウ糖 73.0
c)リーチライム葉エキス 0.5
d)グルタミン酸ナトリウム 0.1
e)リン酸第二カリウム 0.2
f)リン酸第一カリウム 0.1
g)乳糖 17.0
h)香料 適量
i)ステアリン酸マグネシウム 残部
製法 a)〜h)を均一に混合し成型する。
散剤 (重量%)
a)リーチライム葉エキス 3.0
b)グルタミン酸ナトリウム 1.0
c)トレハロース 13.0
d)結晶セルロース 残部
e)10w/v%メチルセルロース水溶液 16.0
製法 e)バインダーとしてa)〜d)を均一に混合し流動層造粒機にて造粒した。造粒品を30メッシュの篩を用いて整粒し、散剤を得た。
Claims (4)
- リーチライムエキスからなることを特徴とするメラニン産生抑制剤。
- リーチライムエキスとアミノ酸からなることを特徴とするメラニン産生抑制剤。
- 請求項2のアミノ酸がグリシン、プロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸から選ばれる1種以上であることを特徴とするメラニン産生抑制剤。
- 請求項1〜3記載のメラニン産生抑制剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
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Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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JP2009162249A JP2011016756A (ja) | 2009-07-08 | 2009-07-08 | メラニン産生抑制剤 |
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JP2009162249A JP2011016756A (ja) | 2009-07-08 | 2009-07-08 | メラニン産生抑制剤 |
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-
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- 2009-07-08 JP JP2009162249A patent/JP2011016756A/ja active Pending
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