JP2010534563A - マイクロ粒子の作製のための技術 - Google Patents

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    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
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    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

溶媒中の高分子又は低分子の溶液を貧溶媒及び対イオンと接触させ、この溶液を冷却することによってマイクロスフェアが作製される。このマイクロスフェアは、定められた大きさの医薬、ニュートラシューティカル（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、美容製品等の作製に有用である。
【選択図】なし

Description

関連出願
本明細書にて、Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ．による「マイクロ粒子の作製のための技術」の表題である、２００７年７月２４日出願の米国仮特許出願第６０／９６１，８７２号の優先権を主張する。この仮出願の主題は、参照することで本明細書に組み入れられる。本出願は、共に同じ日に出願された米国特許出願第１２／１７９，５２０号（代理人Ｄｋｔ番号２１８６５‐００５００１／６５０５）に関連する。この米国特許出願の主題は、参照することで本明細書に組み入れられる。
本出願は、ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００７／００１９１４（代理人Ｄｏｃｋｅｔ番号２１８６５‐００４ＷＯ１／６５０４ＰＣ、２００７年１月２４日出願）、及び２００７年１月２４日出願の米国特許出願第１１／６５７，８１２号（代理人Ｄｏｃｋｅｔ番号２１８６５‐００４００１／６５０４）にも関連する。本出願はさらに、米国特許出願公開ＵＳ２００５０００４０２０Ａ１及びＵＳ２００５０１１２７５１Ａ１にも関連する。これらの出願の各々は、その全文が参照することで本明細書に組み入れられる。
電子出願された配列表の参照することによる組み入れ
電子形態の配列表が共に出願されており、その内容は、その全体が参照することで組み入れられる。このコンピュータ読み取り可能ファイルのサイズは４６キロバイトであり、ファイル名は６５０５ＳＥＱ．ＷＯ１．ｔｘｔである。
対象とする化合物を粉末又は粒子の形態に作製して送達することは、医薬、ニュートラシューティカル（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、及び美容品業界を含む様々な業界において集中的に研究及び開発活動が行われている分野である。最適な効力を得るためには、それがステロイドホルモン若しくはペニシリン抗生物質等の低分子であれ、又はタンパク質若しくは核酸等の高分子であれ、その化合物の均一な製剤を有することが望ましい。例えば、治療用タンパク質、抗生物質、又は化学療法薬等の化合物の肺投与では、化合物は、理想的には、０．５乃至５．０ミクロンの直径を有する固体粒子又は半固体粒子である分離したマイクロスフェアの形態で作製されるべきである。このマイクロ粒子が、集中的な送達及び治療効力のためのその活性を維持する形態で、可能な限り高い化合物含有量を有することも望ましい。
化合物のマイクロ粒子又はナノ粒子を作製するこれまでの方法は、複雑な工程が関与しており、有機ポリマーとの混合及び／若しくはポリマーを用いた格子アレイの形成；スプレードライ、スプレーフリーズドライ、若しくは専用で複雑な装置を用いる超臨界流体貧溶媒技術（ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｌｕｉｄ ａｎｔｉｓｏｌｖｅｎｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）；又は、凍結乾燥及びそれに続く、多くの場合さらに選別する必要のある不均一な粒子が得られる粉砕若しくはミリング、等である。このような方法には、加熱等、化合物を不活性化してその活性を損なう（例：タンパク質の変性）処理工程が含まれることが多い。さらに、溶液から固体マイクロ粒子製剤への化合物の定量的な回収が得られない方法もある。貧溶媒を添加することによって溶液から化合物を直接析出させる等のその他の方法では、サイズが不均一であるマイクロ粒子及び／又は凝集したマイクロ粒子を生じる制御されない形でマイクロ粒子が作製され得る。
従って、複雑な又は専用の装置を必要とせず、送達のための均一なサイズのマイクロ粒子が作製される、タンパク質及びその他の高分子マイクロ粒子、並びに低分子マイクロ粒子を作製するための方法が必要とされている。さらに、化合物をマイクロ粒子の他の成分に対して高濃度で含み、環境温度で保存した場合に安定であり、長期間にわたってその活性を維持し、著しい量の不活性化合物を含むことがない、化合物のマイクロ粒子を作製する方法も必要とされている。さらに、出発物質（例：化合物の溶液）中に存在する実質的に全ての化合物が、最小限の喪失量で、マイクロ粒子製剤として回収される、化合物のマイクロ粒子を作製する方法も必要とされている。さらに、例えば、治療薬若しくは栄養補助薬としての投与のために、又は美容製品において、このような特性を有するマイクロ粒子も必要とされている。
以下に提供するマイクロ粒子を作製する方法、マイクロ粒子自体、組み合わせ、及び製品は、種々の成分、作製の工程、並びに生物物理学的、物理学的、生化学的、及び化学的パラメーターによって特徴付けられる。当業者であれば明らかなように、本明細書で提供される組成物及び方法には、以下で述べる成分、工程、及び／又はパラメーターの、いずれかの及び全ての並べ替え並びに組み合わせが含まれる。
本明細書では、化合物のマイクロ粒子を作製するための方法が提供され、これは、複雑な又は専用の装置を必要とせず、送達のための均一なサイズのマイクロ粒子を生成する。さらに、本明細書では、化合物をマイクロ粒子の他の成分に対して高濃度で含み、環境温度で保存した場合に安定であり、長期間にわたってその活性を維持し、著しい量の不活性化合物を含むことがない、化合物のマイクロ粒子を作製する方法も提供される。さらには、出発物質中に存在する実質的に全ての化合物が、最小限の喪失量で、マイクロ粒子製剤中に回収される、化合物のマイクロ粒子を作製する方法も提供される。さらに、対象とする活性剤若しくは治療薬である分子を含有するマイクロスフェアの形成を促進するか、又は得られたマイクロスフェアの安定性を向上させるか、又は得られたマイクロスフェアの対象とする標的（細胞、組織等）への輸送を促進する担体を含むマイクロ粒子を作製する方法も提供される。ある態様では、担体は、ゼラチン又はデキストラン等、ヒドロゲルを形成する能力を有する物質であってよい。さらに、本明細書では、例えば、治療薬若しくは栄養補助薬としての投与用として、診断薬として、又は美容製品に対して、このような特性を有するマイクロ粒子が提供される。
以下に提供する、高分子マイクロ粒子及び低分子マイクロ粒子を含む化合物のマイクロ粒子を作製する方法、組成物自体、組み合わせ、並びに製品は、種々の成分、作製の工程、並びに生物物理学的、物理学的、生化学的、及び化学的パラメーターによって特徴付けられる。当業者であれば明らかなように、本明細書で提供される組成物及び方法には、以下で述べる成分、工程、及び／又はパラメーターの、いずれかの及び全ての並べ替え並びに組み合わせが含まれる。
本明細書で提供される方法は：
ａ）溶媒中に化合物を含む溶液に対イオンを添加する工程；
ｂ）この溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
ｃ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、化合物のマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
を含む。この方法では、工程ａ）、ｂ）、及びｃ）を、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序で行ってもよい。
ある例では、対イオンはポリマーではない。さらなる例では、貧溶媒はポリマーではない。これらの工程が実施される温度も、変更することができる。ある態様では、化合物は、約３０℃若しくは３０℃、又はそれ未満の温度にて工程ａ）の前に溶媒に溶解される。他の態様では、化合物は、約２５℃若しくは２５℃、又はそれ未満の温度にて溶媒に溶解される。一つの局面では、工程ａ）乃至ｃ）の溶液のいずれも、約３０℃若しくは３０℃を超える温度に加熱及び／又は維持されない。ある例では、これらの方法における化合物は、タンパク質でもポリペプチドでもない。
ある態様では、化合物を環境温度を超える温度まで加熱して、化合物を溶媒／貧溶媒系へ溶解させ、次にマイクロスフェアが形成される温度まで冷却してよい。例えば、ある高分子及び低分子に対しては、化合物を溶液中にて、約３５℃若しくは３５℃、約３７℃若しくは３７℃、約４０℃若しくは４０℃、約４５℃若しくは４５℃、約５０℃若しくは５０℃、約６０℃若しくは６０℃、約６５℃若しくは６５℃、約７０℃若しくは７０℃、約７５℃若しくは７５℃、約８０℃若しくは８０℃、約８５℃若しくは８５℃、約９０℃若しくは９０℃、約９５℃若しくは９５℃、約１００℃若しくは１００℃、約１２５℃若しくは１２５℃、約１５０℃若しくは１５０℃、約１７５℃若しくは１７５℃、約２００℃若しくは２００℃、又はこれを超える温度まで加熱し、次に、マイクロスフェアが形成される温度である、例えば、約１９０℃若しくは１９０℃、約１７０℃若しくは１７０℃、約１５０℃若しくは１５０℃、約１２５℃若しくは１２５℃、約１００℃若しくは１００℃、約８０℃若しくは８０℃、約７５℃若しくは７５℃、約６０℃若しくは６０℃、約５０℃若しくは５０℃、約４０℃若しくは４０℃、約３０℃若しくは３０℃、約２０℃若しくは２０℃、約１５℃若しくは１５℃、又はこれより低い温度まで冷却してよい。
これらの工程を実施する順序は変更してよい。例えば、工程ａ）及びｂ）を、同時に、順次に、断続的に、又はいずれかの順序で行い、続いて工程ｃ）を行ってよい。他の例では、工程ａ）に続いて、工程ｂ）及びｃ）を、同時に、順次に、断続的に、又はいずれかの順序で行う。さらなる例では、工程ａ）及びｃ）を同時に行う。他の態様では、工程ａ）、ｂ）、及びｃ）を、ａ）、次にｂ）、次にｃ）の順序で順次に行う。ある態様では、対イオン及び化合物は、互いに同一である。他の態様では、化合物及び対イオンは、互いに異なる。他の例では、対イオン及び貧溶媒は、互いに同一である。
化合物は低分子であっても又は高分子であってもよい。化合物が高分子である場合、高分子の分子量は、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０億若しくは５０億まで、又は５０億ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０億若しくは１０億まで、又は１０億ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０００万若しくは５０００万まで、又は５０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２０００万若しくは２０００万まで、又は２０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５００万若しくは１５００万まで、又は１５００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０００万若しくは１０００万まで、又は１０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００万若しくは５００万まで、又は５００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００万若しくは１００万まで、又は１００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００，０００若しくは５００，０００まで、又は５００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３００，０００若しくは３００，０００まで、又は３００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２００，０００若しくは２００，０００まで、又は２００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００，０００若しくは１００，０００まで、又は１００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０，０００若しくは５０，０００まで、又は５０，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２５，０００若しくは２５，０００まで、又は２５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５，０００若しくは１５，０００まで、又は１５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０，０００若しくは１０，０００まで、又は１０，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５，０００若しくは５，０００まで、又は５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３，０００若しくは３，０００まで、又は３，０００ダルトン；又は、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２，０００若しくは２，０００まで、又は２，０００ダルトン、であってよい。
高分子は、ポリヌクレオチド、核酸、ポリペプチド、糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、又はこれらの混合物であってよい。他の例では、高分子は、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、又はコレステロール低下薬であってよい。
一つの態様では、高分子は、低分子と抱合体形成している。ある態様では、低分子の分子量は、約５０若しくは５０乃至約１０００若しくは１０００ダルトンである。低分子は、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、又はコレステロール低下薬、の中から選択することができる。例えば、低分子は、抗生物質であってよく、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、マクロライド、ペニシリン、キノロン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンの中から選択することができる。抗生物質がアミノグリコシドである場合は、アミノグリコシドは、カナマイシン又はトブラマイシンであってよい。低分子が抗ウィルス薬である場合は、抗ウィルス薬は、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又はＲＳウィルスが媒介する感染症の治療のためのものであってよい。ある例では、抗ウィルス薬は、ザナミビル又はリン酸オセルタミビルである。低分子が化学療法薬である態様では、化学療法薬は、アルキル化薬、アントラサイクリン、細胞骨格破壊薬（ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒｓ）、エポシロン、トポイソメラーゼＩＩの阻害薬、ヌクレオチド類似体、白金を主体とする薬剤、レチノイド、及びビンカアルカロイドの中から選択することができる。ある例では、化学療法薬は、細胞骨格破壊薬であり、細胞骨格破壊薬は、パクリタキセルである。他の例では、低分子はプロスタグランジンである。
ある態様では、本明細書で提示する方法における高分子は、核酸である。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡの中から選択することができる。核酸がＲＮＡである場合は、ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ、又はリボザイムであってよい。ある例では、高分子は、ウィルスであり、ウィルスは、タバコモザイクウィルスである。他の態様では、高分子は、糖ペプチドであり、糖ペプチドは、バンコマイシンである。さらなる態様では、高分子は、ペプチドである。例えば、ペプチドは、リュープロリド又はソマトスタチンであってよい。
本明細書で提供される方法に用いられる溶媒は、貧溶媒と相溶性又は部分的に相溶性であってよい。本明細書で提供される方法は、工程ｃ）の後に、マイクロ粒子を溶液から分離してマイクロ粒子以外の成分を除去するさらなるプロセスもさらに含んでよい。一つの局面では、本方法の組成物は、化合物を含有するマイクロ粒子から本質的に構成されていてよい。一つの態様では、分離は、沈殿又はろ過によって行われる。別の態様では、分離は、凍結乾燥によって行われる。
本明細書で提供される方法に用いられる貧溶媒は、水、緩衝溶液、脂肪族アルコール、芳香族アルコール、クロロホルム、多価糖アルコール、芳香族炭化水素、アルデヒド、ケトン、エステル、エーテル、ジオキサン、アルカン、アルケン、共役ジエン、ジクロロメタン、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、酢酸エチル、ポリオール、ポリイミド、ポリイミン、ポリエステル、ポリアルデヒド、及びこれらの混合物の中から選択することができる。例えば、貧溶媒は、脂肪族アルコール又は芳香族アルコールである。貧溶媒が脂肪族アルコールである場合は、脂肪族アルコールは、イソプロパノールであってよい。
例では、本明細書で提供される方法に用いられる対イオンは、アニオン性化合物、カチオン性化合物、及び双性イオン性化合物の中から選択される。対イオンがアニオン性化合物である例では、アニオン性化合物は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、硫酸カリウム、又は硫酸カルシウムであってよい。一つの局面では、アニオン性化合物は、硫酸ナトリウムである。他の例では、対イオンは、クエン酸、イタコン酸、及びピバル酸の中から選択される。さらなる例では、対イオンは、例えばグリシン又はアルギニン等のアミノ酸である。
本明細書で提供されるマイクロ粒子を作製する方法のある態様では、対イオンはポリマーであり、高分子は、ポリヌクレオチド、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物の中から選択される。一つの局面では、ポリマーは、対イオン及び貧溶媒である。ポリマーは、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）であってよい。本明細書で提供される方法に用いられる対イオンも、ポリマーであってよい。一つの例では、ポリマーは、対イオン及び貧溶媒である。ポリマーは、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）であってよい。
本明細書で提供される方法に用いられる溶液のｐＨは、約４．０若しくは４．０乃至約９．０若しくは９．０；約４．０若しくは４．０乃至約８．０若しくは８．０；約４．５若しくは４．５乃至約７．５若しくは７．５；又は、約５．０若しくは５．０乃至約７．０若しくは７．０であってよい。
本明細書で提供される方法で形成されるマイクロ粒子は、析出、相分離、又はコロイド形成によって得ることができる。得られたマイクロ粒子組成物は、耐酸コーティング剤、耐プロテアーゼコーティング剤、腸溶コーティング剤、バルキング剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、賦形剤、不活性成分、安定性促進剤、味及び／若しくは芳香の修飾剤又はマスキング剤、ビタミン、糖、治療薬、抗酸化剤、免疫調節薬、膜貫通輸送修飾薬（ｔｒａｎｓ‐ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）、固化防止剤（ａｎｔｉ‐ｃａｋｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、キトサン、又は流動性促進剤をさらに含んでよい。ある例では、工程ａ）の溶液中における化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量は、重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約９９％超若しくは９９％超；重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約２０％若しくは２０％；重量／重量％で、約１０％若しくは１０％乃至約８５％若しくは８５％；重量／重量％で、約２０％若しくは２０％乃至約６０％若しくは６０％；重量／重量％で、約２５％若しくは２５％乃至約５５％若しくは５５％；重量／重量％で、約３０％若しくは３０％乃至約５０％若しくは５０％；又は、重量／重量％で、約８０％若しくは８０％乃至約９９％超若しくは９９％超、である。
溶液を少しずつ冷却させていく温度は、約４℃若しくは４℃乃至約−２００℃若しくは−２００℃；約２℃若しくは２℃乃至約−１８０℃若しくは−１８０℃；約２℃若しくは２℃乃至約−１７０℃若しくは−１７０℃；又は、約０℃若しくは０℃乃至約−２℃若しくは−２℃、から、約−１５０℃若しくは−１５０℃乃至約−１６５℃若しくは−１６５℃までの間、であってよい。
ある局面では、得られた組成物の保存寿命は、約５５℃若しくは５５℃、約５０℃若しくは５０℃、約４５℃若しくは４５℃、約４４℃若しくは４４℃、約４２℃若しくは４２℃、約４０℃若しくは４０℃、約３９℃若しくは３９℃、約３８℃若しくは３８℃、約３７℃若しくは３７℃、又はこれ未満の温度にて、約１週間若しくは１週間乃至約１ヶ月間若しくは１ヶ月間、約１ヶ月間若しくは１ヶ月間乃至約６ヶ月間若しくは６ヶ月間、約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間、約１年間若しくは１年間乃至約２年間若しくは２年間、又は約２年間若しくは２年間乃至約５年間若しくは５年間である。
ある態様では、溶液及び／又は得られた組成物は、活性剤をさらに含む。得られた組成物が活性剤をさらに含む態様では、活性剤は、抗生物質、化学療法薬、抗糖尿病薬、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｄｉｌａｔｏｒｓ）、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃｓ）、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｅｓ）、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ）、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬（ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｄｒｕｇｓ）、ワクチン、経膣薬（ｖａｇｉｎａｌ ｄｒｕｇｓ）、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、酵素、ホルモン、ビタミン、ミネラル、及び栄養補助薬、の中から選択することができる。
本明細書で提供される方法で形成されるマイクロ粒子の水分含量の調節を、それによって、約２５℃の温度での約６ヶ月間乃至約１年間の保存後に、化合物の活性の少なくとも約９０％若しくは９０％が維持されるように行うことができる。他の例では、マイクロ粒子の水分含量の調節を、それによって、約２５℃の温度での約６ヶ月間乃至約１年間の保存後に、マイクロ粒子の少なくとも約９０％が凝集しないように行う。ある局面では、マイクロ粒子の水分含量は、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約２０％若しくは２０％；約０．０５％若しくは０．０５％乃至約１５％若しくは１５％；約０．１％若しくは０．１％乃至約１０％若しくは１０％；約０．２％若しくは０．２％乃至約５％若しくは５％；約６％若しくは６％乃至約１２％若しくは１２％；又は、約７％若しくは７％乃至約１０．５％若しくは１０．５％、である。
本明細書で提供される方法のある態様では、溶液に添加される対イオンの濃度は、０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約１００ｍＭ若しくは１００ｍＭまで、又は１００ｍＭ；０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約５０ｍＭ若しくは５０ｍＭまで、又は５０ｍＭ；０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約２０ｍＭ若しくは２０ｍＭまで、又は２０ｍＭ；０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約１０ｍＭ若しくは１０ｍＭまで、又は１０ｍＭ；１ｍＭ、又は約１ｍＭ若しくは１ｍＭから約５ｍＭ若しくは５ｍＭまで、又は５ｍＭ；又は、約２ｍＭ若しくは２ｍＭである。
本明細書で提供される方法における溶液の少しずつの冷却は、冷やすことによって行うことができる。他の態様では、少しずつの冷却は、吸熱反応による。ある局面では、少しずつの冷却の速度は、０．０１℃／分、又は約０．０１若しくは０．０１℃／分から約２０若しくは２０℃／分まで、又は２０℃／分；約０．０５若しくは０．０５℃／分又は約０．１若しくは０．１℃／分から約１０若しくは１０℃／分又は約１５若しくは１５℃／分まで；約０．２若しくは０．２℃／分から約５若しくは５℃／分まで；約０．５若しくは０．５℃／分から約２若しくは２℃／分まで；又は、約１若しくは１℃／分、である。
一つの態様では、マイクロ粒子のサイズは、０．００１μｍ、又は約０．００１若しくは０．００１μｍから約５０若しくは５０μｍまで、又は５０μｍ；０．３μｍ、又は約０．３若しくは０．３μｍから約３０若しくは３０μｍまで、又は３０μｍ；０．５μｍ、又は約０．５若しくは０．５μｍから約１０若しくは１０μｍまで、又は１０μｍ；０．５μｍ、又は約０．５若しくは０．５μｍから約５．０若しくは５．０μｍまで、又は５．０μｍ；１．０μｍ、又は約１．０若しくは１．０μｍから約５．０若しくは５．０μｍまで、又は５．０μｍ；又は、約１．０若しくは１．０μｍから約２．０若しくは２．０μｍ、約３．０若しくは３．０μｍ、約４．０若しくは４．０μｍ、又は約５．０若しくは５．０μｍまで、である。
本明細書では、さらに、化合物のマイクロ粒子及び対イオンを含む組成物も提供され、ここで、化合物及び対イオンは互いに異なる。ある態様では、化合物は、分子量が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０億若しくは５０億まで、又は５０億ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０億若しくは１０億まで、又は１０億ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０００万若しくは５０００万まで、又は５０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２０００万若しくは２０００万まで、又は２０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５００万若しくは１５００万まで、又は１５００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０００万若しくは１０００万まで、又は１０００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００万若しくは５００万まで、又は５００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００万若しくは１００万まで、又は１００万ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００，０００若しくは５００，０００まで、又は５００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３００，０００若しくは３００，０００まで、又は３００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２００，０００若しくは２００，０００まで、又は２００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００，０００若しくは１００，０００まで、又は１００，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０，０００若しくは５０，０００まで、又は５０，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２５，０００若しくは２５，０００まで、又は２５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５，０００若しくは１５，０００まで、又は１５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０，０００若しくは１０，０００まで、又は１０，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５，０００若しくは５，０００まで、又は５，０００ダルトン；１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３，０００若しくは３，０００まで、又は３，０００ダルトン；又は、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２，０００若しくは２，０００まで、又は２，０００ダルトン、である高分子である。
ある例では、組成物中の化合物は、低分子である。低分子は、約５０若しくは５０乃至約１０００若しくは１０００ダルトンの分子量を有していてよい。組成物中の化合物が高分子である例では、高分子は、ポリヌクレオチド、核酸、ポリペプチド、糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物、の中から選択することができる。ある態様では、高分子は、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬、の中から選択することができる。
ある態様では、組成物中の高分子は、低分子と抱合体形成している。そのような場合、低分子は、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬、の中から選択される。
一つの局面では、低分子化合物は、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬、の中から選択される。低分子が抗生物質である態様では、抗生物質は、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、マクロライド、ペニシリン、キノロン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンの中から選択することができる。例えば、抗生物質は、ペニシリン又はテトラサイクリンである。他の例では、抗生物質は、例えば、カナマイシン又はトブラマイシン等のアミノグリコシドである。他の局面では、化合物は、抗ウィルス薬である。そのような場合、抗ウィルス薬は、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又はＲＳウィルスが媒介する感染症の治療のためのものであってよい。例えば、抗ウィルス薬は、ザナミビル又はリン酸オセルタミビルであってよい。さらなる態様では、化合物は、化学療法薬である。化合物が化学療法薬である場合、化学療法薬は、アルキル化薬、アントラサイクリン、細胞骨格破壊薬、エポシロン、トポイソメラーゼＩＩの阻害薬、ヌクレオチド類似体、白金を主体とする薬剤、レチノイド、及びビンカアルカロイドの中から選択することができる。ある例では、化学療法薬は、例えばパクリタキセル等の細胞骨格破壊薬である。なおさらなる例では、化合物は、プロスタグランジンである。
ある態様では、本明細書で提供される組成物中の高分子は、核酸である。核酸は、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡの中から選択することができる。核酸がＲＮＡである場合、ＲＮＡは、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ、及びリボザイムの中から選択することができる。ある例では、ＲＮＡはｓｉＲＮＡである。他の態様では、本明細書で提供される組成物中の高分子は、ウィルスである。例えば、高分子は、タバコモザイクウィルスであってよい。他の局面では、高分子は、例えばバンコマイシン等の糖ペプチドである。さらなる局面では、高分子は、ペプチドである。ペプチドは、例えば、リュープロリド又はソマトスタチンであってよい。
本明細書で提供される組成物中の化合物は、水不溶性であってよい。対イオンは、アニオン性化合物、カチオン性化合物、及び双性イオン性化合物の中から選択することができる。対イオンがアニオン性化合物である場合、アニオン性化合物は、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、硫酸カリウム、及び硫酸カルシウムであってよい。ある例では、アニオン性化合物は、硫酸ナトリウムである。他の例では、対イオンは、クエン酸、イタコン酸、及びピバル酸の中から選択される。さらなる局面では、対イオンは、例えばグリシン又はアルギニン等のアミノ酸である。他の局面では、対イオンは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である。
本明細書で提供される得られたマイクロ粒子組成物は、耐酸コーティング剤、耐プロテアーゼコーティング剤、腸溶コーティング剤、バルキング剤、賦形剤、不活性成分、安定性促進剤、味及び／若しくは芳香の修飾剤又はマスキング剤、ビタミン、糖、治療薬、抗酸化剤、免疫調節薬、膜貫通輸送修飾薬、固化防止剤、キトサン、又は流動性促進剤をさらに含んでよい。ある局面では、組成物の保存寿命は、約５５℃若しくは５５℃、約５０℃若しくは５０℃、約４５℃若しくは４５℃、約４４℃若しくは４４℃、約４２℃若しくは４２℃、約４０℃若しくは４０℃、約３９℃若しくは３９℃、約３８℃若しくは３８℃、約３７℃若しくは３７℃、又はこれ未満の温度にて、約１週間若しくは１週間乃至約１ヶ月間若しくは１ヶ月間、約１ヶ月間若しくは１ヶ月間乃至約６ヶ月間若しくは６ヶ月間、約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間、約１年間若しくは１年間乃至約２年間若しくは２年間、又は約２年間若しくは２年間乃至約５年間若しくは５年間である。
本明細書で提供される組成物は、活性剤も含んでよい。活性剤は、抗生物質、化学療法薬、抗糖尿病薬、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬、ワクチン、経膣薬、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、酵素、ホルモン、ビタミン、ミネラル、及び栄養補助薬、の中から選択することができる。
本明細書で提供される組成物のマイクロ粒子中の化合物の量は、重量／重量％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約９９％若しくは９９％又はそれを超える量；重量／重量％で、約０．２％若しくは０．２％乃至約９５％若しくは９５％又はそれを超える量；重量／重量％で、約０．５％若しくは０．５％乃至約９０％若しくは９０％又はそれを超える量；重量／重量％で、約１％若しくは１％乃至約８５％若しくは８５％又はそれを超える量；重量／重量％で、約２％若しくは２％乃至約８０％若しくは８０％又はそれを超える量；重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約７５％若しくは７５％又はそれを超える量；重量／重量％で、約６５％乃至約９０％；重量／重量％で、約７０％乃至約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、若しくは９０％；又は、重量／重量％で、約９０％乃至約９９％、であってよい。
ある局面では、マイクロ粒子の水分含量の調節が、それによって、約２５℃の温度での約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間の保存後に、化合物の活性の少なくとも約９０％若しくは９０％が維持されるように行われる。ある態様では、マイクロ粒子中の対イオンの量は、重量／重量％で、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約６０％若しくは６０％；重量／重量％で、約０．５％若しくは０．５％乃至約５０％若しくは５０％；重量／重量％で、約１％若しくは１％乃至約２％若しくは２％；重量／重量％で、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約２０％若しくは２０％；重量／重量％で、約０．０５％若しくは０．０５％乃至約１５％若しくは１５％；重量／重量％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約１０％若しくは１０％；又は、重量／重量％で、約０．２％若しくは０．２％乃至約５％若しくは５％、である。
一つの局面では、マイクロ粒子の水分含量は、約６％若しくは６％乃至約１２％若しくは１２％である。別の局面では、マイクロ粒子の水分含量は、約７％若しくは７％乃至約１０．５％若しくは１０．５％である。
本明細書で提供される組成物は、経口摂取、吸入、経口投与、静脈内、鼻腔内、非経口、経肺、皮下、点眼、又は筋肉内投与のためのものであってよい。一つの局面では、本明細書で提供される組成物のマイクロ粒子のサイズは、約０．００１μｍ若しくは０．００１μｍ乃至約５０μｍ若しくは５０μｍ；約０．３μｍ若しくは０．３μｍ乃至約３０μｍ若しくは３０μｍ；約０．５μｍ若しくは０．５μｍ乃至約１０μｍ若しくは１０μｍ；約０．５μｍ若しくは０．５μｍ乃至約５．０μｍ若しくは５．０μｍ；約１．０μｍ若しくは１．０μｍ乃至約５．０μｍ若しくは５．０μｍ；又は、約１．０μｍ乃至約２．０、３．０、４．０、若しくは５．０μｍ、である。
本明細書ではさらに、本明細書で提供される組成物、組成物のための包装材、及び組成物が治療、ニュートラシューティカル、又は美容品に適応されることを示すラベルを含む製品も提供される。ある例では、製品に用いられる組成物は、例えば、癌、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又は呼吸器障害等の治療に適応される。製品は、組成物の経肺投与のための吸入器をさらに含んでもよい。ある態様では、吸入器は、ドライパウダー吸入器、定量噴霧式吸入器、又は静電送達装置（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｄｅｖｉｃｅ）である。
本明細書では、本明細書で提供される組成物の治療効果量を対象へ投与することによって感染性疾患を予防又は治療する方法が提供される。ある局面では、感染性疾患は、アルボウィルス感染、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンジダ症、カンピロバクター症、水痘、クラミジア感染症、コレラ、コロノウィルス感染症、ブドウ球菌感染症、コクサッキーウィルス感染症、クロイツフェルト‐ヤコブ病、クリプトスポリジウム症、シクロスポラ感染症（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、サイトメガロウィルス感染症、エプスタイン‐バーウィルス感染症、デング熱、ジフテリア、耳感染症、脳炎、インフルエンザウィルス感染症、パラインフルエンザウィルス感染症、ジアルジア症、淋病、インフルエンザ菌感染症、ハンタウィルス感染症、ウィルス肝炎、単純ヘルペスウィルス感染症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヘリコバクター感染症、ヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）感染症、伝染性単核球症、レジオネラ症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、リンパ性脈絡髄膜炎、マラリア、麻疹、マルブルグ出血熱（ｍａｒｂｕｒｇ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ）、脳膜炎、サル痘、流行性耳下腺炎、マイコバクテリア感染症、マイコプラズマ感染症、ノーウォークウィルス感染症、百日咳、蟯虫感染症、肺炎球菌の疾患、ストレプトコッカスニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）感染症、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、モラクセラカタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）感染症、シュードモナスエルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症、ロタウィルス感染症、オウム病、狂犬病、ＲＳウィルス感染症（ＲＳＶ）、白癬、ロッキー山紅斑熱、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ、疥癬、性行為感染症、細菌性赤痢、帯状疱疹、スポロトリコーシス、レンサ球菌感染症、梅毒、テタヌス、旋毛虫症、結核、野兎病、腸チフス、ウィルス性髄膜炎、細菌性髄膜炎、西ナイルウィルス感染症、黄熱、アデノウィルスが媒介する感染症及び疾患、レトロウィルスが媒介する感染性疾患、並びにエルシニア感染症、人畜共通感染症、の中から選択される。例えば、感染性疾患は、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ＲＳウィルス感染症であってよい。
治療の方法は、組成物の経口、静脈内、鼻腔内、非経口、皮下、経皮、局所、関節内、筋肉内、又は吸入投与によって実施することができる。
本明細書では、ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を作製する方法も提供され、その方法は：
（ａ）水性溶媒中のｓｉＲＮＡの溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
（ｂ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
を含み、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
この方法は、対イオンを添加する工程（ｃ）をさらに含んでよく、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
ある例では、ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を作製する方法に用いられる貧溶媒は、イソプロパノールである。ある例では、溶媒は水である。
本明細書では、ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を含む組成物も提供される。ある例では、組成物は対イオンも含む。
本明細書では、ウィルスのマイクロ粒子を作製する方法も提供され、その方法は：
（ａ）水性溶媒中のウィルスの溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
（ｂ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ウィルスを含むマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
を含み、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
この方法は、対イオンを添加する工程（ｃ）も含んでよく、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。ある例では、ウィルスのマイクロ粒子を作製する方法に用いられる貧溶媒は、イソプロパノールである。
本明細書では、ウィルスのマイクロ粒子を作製する方法も提供され、その方法は：
（ａ）水性溶媒中のウィルスの溶液に対イオンを添加する工程；及び、
（ｂ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ウィルスのマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
を含み、こされ、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
この方法は、貧溶媒を添加する工程（ｃ）も含んでよく、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。ある態様では、貧溶媒はイソプロパノールである。他の態様では、溶媒は水である。
本明細書では、ウィルスのマイクロ粒子を含む組成物も提供される。そのような組成物は、対イオンも含んでよい。ある局面では、ウィルスはタバコモザイクウィルスである。
Ａ．定義
特に定義されない限り、本明細書で用いられる技術用語及び科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者に一般的に理解されるものと同一の意味を有する。本明細書の全開示内容を通して参照される全ての特許、特許出願、出願公開公報及び刊行物、Ｇｅｎｂａｎｋ配列、ウェブサイト、並びにその他の公開資料は、特に断りのない限り、その全体が参照することで本明細書に組み入れられる。本明細書の用語に対して複数の定義が存在する場合は、本セクションの定義が優先される。ＵＲＬ又はその他のこのような識別子又はアドレスが参照される場合、そのような識別子は変更される可能性があり、インターネット上の特定の情報は移り変わる可能性があるが、インターネット上での検索を行うことで同等の情報を見つけ出し得ることは理解される。これらへの参照は、そのような情報が入手可能であり、公へ普及していることを明示するものである。
「分子」という用語は、本明細書において「化合物」と交換可能に用いられ、天然の又は化学的に合成された、共有結合によって連結した２若しくは３個以上の原子又はイオンを含む実体を意味する。この原子又はイオンは、同一の化学要素に属していてよく、又は異なる要素に属していてもよい。本明細書で用いる分子又は化合物は、複合された要素を確定的で不変である重量比率にて含み、化学式によって表される。化合物は、一般に炭素‐炭素結合を持たない化合物として本明細書にて用いられる無機化合物であってよく、又は化合物は、一般に炭素及び水素の存在を特徴とし、窒素、酸素、ハロゲン、及びその他のこのような原子等のヘテロ原子を追加的に含み得る有機化合物であってもよい。無機化合物の例としては、本明細書にて他で述べるが、アルカリ金属化合物及びアルカリ土類金属化合物、並びにその塩及びその他の誘導体、配位化合物並びにその塩及びその他の誘導体を含む遷移金属化合物、ポリシロキサン等の無機ポリマー、並びに、当業者に公知のその他のこのような化合物が挙げられる。有機化合物の例としては、本明細書にて他で述べるが、脂肪族、芳香族、及び脂環式アルコール、アルデヒド、カルボン酸、エステル、ケトン、エーテル、アミン、アミド、ラクタム、これらのポリマー、並びに当業者に公知のその他のこのような化合物が挙げられる。
本明細書で用いる化合物という用語は、無機及び／又は有機化合物の集合体をも意味し、ファージ及びウィルス等の高分子の集合体を含む。
本明細書で用いる化合物は、無機であれ有機であれ、高分子であっても低分子であってもよい。「高分子」という用語は、当業者によって理解される意味で本明細書において用いられ、一般に、約１０００ダルトンを超えるか若しくはこれと等しい数のダルトンから約１兆若しくは１兆ダルトン超、約２兆若しくは２兆ダルトン超、約３兆若しくは３兆ダルトン超、約５兆若しくは５兆ダルトン超、約７兆若しくは７兆ダルトン超、約１０兆若しくは１０兆ダルトン超、又はこれを超える数のダルトンまでの分子量を持つ、天然の若しくは化学的に合成された有機分子又は無機分子を意味する。本明細書で用いる「高分子」には、共有結合、イオン結合、又は水素結合、イオン対形成、塩基対形成、若しくは電荷の分極によって形成される電荷間の電荷対形成等のその他の化学的相互作用によって連結される２個以上のモノマーサブユニットを持つ分子、又はその誘導体が含まれる。このモノマーサブユニットは、互いに異なっていても又は互いに同一であってもよく、ある態様では、ポリマーを形成することができる。ポリマーは、シリコーン、ポリシラン、ポリゲルマン、ポリスタンナン、又はポリホスファゼン等の無機ポリマー、ポリエチレン若しくはポリセン、ポリプロピレン、ナイロン、テフロン、ポリスチレン、ポリエステル、ポリメチルメタクリレート、ポリ塩化ビニル、若しくはポリイソブチレン等の有機ポリマー、又は多糖、ポリヌクレオチド、及びポリペプチド等の生物学的ポリマーであってよい。高分子は、それが２個以上のサブユニットを有すること、及び／又はそれがポリマーであることに関係なく、三次及び／又は四次構造を形成することができる分子も意味する。高分子の例としては、ポリヌクレオチド、ＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、及びリボザイムを含むＲＮＡ、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む核酸分子、リュープロリド及びソマトスタチン等のポリペプチド、バンコマイシン等の糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、若しくは脂質、又は、それぞれ、ペプチド核酸部分を含む核酸分子若しくは糖タンパク質を例とする、これらの誘導体若しくは組み合わせ、が挙げられる。高分子の例としては、さらに、高分子集合体が挙げられ、例えば、ウィルス、ウィルス粒子、ファージ、ウィロイド、プリオン、並びにこれらの組み合わせ及び抱合体である。
本明細書で用いる「高分子」という用語は、上記の説明の範囲内であり、機能を有するすべての分子を包含することも意図しており、核酸、ペプチド、タンパク質、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン等の生物学的機能を有する高分子、薬剤等の治療の機能を有する高分子、栄養補助薬等のニュートラシューティカルの機能を有する高分子、及び石鹸又はスキンクリーム等の美容品処方を有する高分子が含まれる。例えば、化合物は、高分子であってよく、さらに、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、コレステロール低下薬、及び栄養補助薬、の中から選択される化合物の分類の１若しくは２種類以上に属していてもよい。本明細書で提供され、タンパク質、ペプチド、核酸、及びウィルス等のある高分子に関連して説明される方法、組成物、組み合わせ、キット、及び製品は、本明細書で定義される及び／又は提供されるその他の高分子と共に使用されるように適合させることができる。
本明細書で用いる「ポリマー」という用語は、互いに連結した分子の２若しくは３個以上の繰り返しユニット、一般的には約５若しくは５、約１０若しくは１０、約１５若しくは１５、約２０若しくは２０、約数百若しくは数百、約数千若しくは数千、約数百万若しくは数百万個までの繰り返しユニットを有する、数多くの天然及び合成化合物のいずれをも含む。各繰り返しユニットは、一般に、当業者によってモノマーとして理解される。ポリマーは、同一の繰り返しユニットを有していてよく、又は２種類以上の繰り返しユニットを有していてもよい。代表的な繰り返しモノマーユニットとしては、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、及びＤＮＡ若しくはＲＮＡ誘導体の混合物、又はペプチド核酸（ＰＮＡ）で見られるもの等のヌクレオチド、又はヌクレオチド誘導体が挙げられる。その他のモノマーユニットとしては、合成有機ポリマーに見られるもの等を挙げることができ、これらに限定されないが、アクリルアミド、スチレン、アルキル置換スチレン、アクリレート、メタクリレート、アクリル酸、メタクリル酸、塩化ビニル、酢酸ビニル、ブタジエン、イソプレン、エチレングリコール、及びエチレンイミンが挙げられる。代表的な有機又は無機ポリマー、天然及び合成ポリマーとしては、これらに限定されないが、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロール、その他のセルロース誘導体、デキストラン、デキストラン誘導体及びデキストランコポリマー、その他の多糖、ガラス、シリカゲル、ゼラチン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリエチレンイミド、ポリビニルピロリドン、レーヨン、ナイロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリアミド、ビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリスチレン及びポリスチレンコポリマー、ジビニルベンゼン等で架橋したポリスチレン、アクリル樹脂、アクリレート及びアクリル酸、アクリルアミド、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミドブレンド、ビニル並びにアクリルアミド、メタクリレート、及びメタクリレート誘導体等のコポリマー、が挙げられる。
「低分子」という用語は、当業者によって理解される意味で本明細書にて用いられ、一般に、約１０００ダルトン未満、約１０００若しくは１０００ダルトン乃至約９５０若しくは９５０、約９００若しくは９００、約８５０若しくは８５０、約８００若しくは８００、約７５０若しくは７５０、約７００若しくは７００、約６５０若しくは６５０、約６００若しくは６００、約５５０若しくは５５０、約５００若しくは５００、約４５０若しくは４５０、約４００若しくは４００、約３７５若しくは３７５、約３５０若しくは３５０、約３２５若しくは３２５、約３００若しくは３００、約２７５若しくは２７５、約２５０若しくは２５０、約２２５若しくは２２５、約２００若しくは２００、約１７５若しくは１７５、約１５０若しくは１５０、約１２５若しくは１２５、約１００若しくは１００、約７５若しくは７５、約７０若しくは７０、約６５若しくは６５、約６０若しくは６０、約５５若しくは５５、約５０若しくは５０、約４５若しくは４５、約４０若しくは４０、約３５若しくは３５、約３０若しくは３０、約２５若しくは２５、約２０若しくは２０、約１５若しくは１５、約１０若しくは１０、約５若しくは５ダルトン、又はこれ未満の分子量である天然の若しくは化学的に合成された有機又は無機分子を意味する。当業者に理解され、本明細書で用いる低分子とは、ペニシリン抗生物質等の従来の薬剤を、タンパク質及び核酸等の遺伝子工学及びバイオテクノロジーの発展に基づく新しい種類の薬剤と区別するために導き出された用語である。低分子は、タンパク質又は核酸のような高分子ではないいずれの分子をも意味するものと理解される。本明細書で用いる「低分子」は、ジペプチド又はジヌクレオチド等の２若しくは３個以上のモノマーサブユニットを有する分子を含むことができ、一般に、分子量が約１０００ダルトン若しくは１０００ダルトン又はそれ未満である分子を意味するものと理解される。
低分子の例としては、これらに限定されないが、一酸化炭素、二酸化炭素、金属（例：アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属）炭酸塩、シアニド、シアネート、カーバイド、ハライド、チオシアネート、オキシド、ヒドロキシド、スルフィド、及びヒドロジド（ｈｙｄｒｏｚｉｄｅ）、コバルト塩［Ｃｏ（ＮＨ３）６］Ｃｌ３を例とする配位化合物、並びにＦｅ（Ｃ５Ｈ５）２を例とする有機金属化合物等の無機分子が挙げられるがこれらに限定されない。有機化合物である低分子としては、例えば、ヌクレオチド、アミノ酸、フルテレン及びトリアムテレン等のプテリジン；アセフィリン、７‐モルホリノメチルテオフィリン、パマブロム、プロテオブロミン、及びテオブロミン等のプリン；コレステロール及びラノステロール等のステロール、エストロゲン、テストステロン、カンレノン、オレアンドリン、及びスピロノラクトン等のステロイド；ペニシリン、テトラサイクリン、アセタゾラミド、アンブシド（Ａｍｂｕｓｉｄｅ）、アゾセミド、ブメタニド、ブタゾールアミド（Ｂｕｔａｚｏｌａｍｉｄｅ）、ジフェニルメタン‐４，４’‐ジスルホンアミド、ジスルファミド、フロセミド等のスルホンアミド誘導体、アミノメトラジン及びアミソメトラジン等のウラシル等、並びにプロスタグランジン、が挙げられる。
本明細書で用いる「低分子」という用語は、上記の説明の範囲内であり、機能を有するすべての分子を包含することも意図しており、ホルモン等の生物学的機能、薬剤等の治療的機能、栄養補助薬等のニュートラシューティカルの機能、及び石鹸又はスキンクリーム等の美容品処方を含む。例えば、化合物は、低分子であってよく、さらに、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、コレステロール低下薬、及び栄養補助薬、の中から選択される化合物の分類の１若しくは２種類以上に属していてもよい。本明細書で提供され、アミノグリコシド、ペニシリン、アンピシリン、及びプロスタグランジン等のある種の低分子に対して例示される方法、組成物、組み合わせ、キット、及び製品は、本明細書で定義される及び／又は提供されるその他の低分子と共に使用されるように適合させることができる。
本明細書で用いる「抱合体」という用語は、化学的な連結又は相互作用を意味する。抱合体は、２若しくは３個以上の原子、イオン、若しくは化合物の間の共有結合性又はイオン性の化学的な連結であってよく、又は、水素結合、イオン対形成、塩基対形成、若しくは電荷の分極によって形成される電荷間の電荷対形成等のその他の化学的相互作用によって形成されていてもよい。典型的な抱合体形成手段としては、ストレプトアビジン‐若しくはアビジン‐ビオチン相互作用；疎水性相互作用；磁気相互作用（例：官能化磁気ビーズを用いる）、２個の極性表面間又はオリゴ／ポリエチレングリコール間の濡れによる会合（ｗｅｔｔｉｎｇ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ）等の極性相互作用；アミド結合、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、又は架橋剤を介したもの、又は酸解離性若しくは光開裂性リンカーを介したもの、等の共有結合の形成、が挙げられる。
本明細書で用いる「実質的に（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌｌｙ）」又は「実質的な（ｓｕｂｓｔａｎｔｉａｌ）」という用語は、一般的に、例えば核酸配列若しくはタンパク質配列、又は実体の元々の組成等のレファレンスと比較して、少なくとも約６０％若しくは６０％、約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える割合であることを意味する。従って、カクテル溶液からの他の全ての混入物並びに／又は対イオン、塩、及び溶媒を含む成分から「実質的に」分離されたマイクロ粒子を含む組成物とは、少なくとも約６０％若しくは６０％、約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える量の混入物及び／又は試薬が、マイクロ粒子が形成されたカクテル溶液から除去されたことを意味する。「実質的に同一」若しくは「実質的に相同的」という用語、又は類似の用語は、当該分野の当業者によって理解されるように文脈によって異なり、一般的には、少なくとも約６０％若しくは６０％、約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える同一性を意味する。
本明細書で用いる「本質的に成る（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」又は「本質的に成っている（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」という用語は、その実体若しくはその実体の特性と関連しない実質的に全ての他の構成要素／成分が、その実体から除去されたか又は分離された状態の実体を意味する。従って、マイクロ粒子から「本質的に成っている」組成物とは、混入物及び溶媒等の全ての他の成分が、そのマイクロ粒子を含む溶液／懸濁液から実質的に除去されたことを意味する。
本明細書で用いる「マイクロ粒子」という用語は、「マイクロスフェア」と交換可能であり、約０．００１又は０．００１ミクロン（μｍ）乃至約５００又は５００ミクロンの範囲のサイズ（平均長さ、幅、若しくは直径）を有し、対象とする化合物を含む粒子を意味する。対象とする化合物は、高分子又は低分子であってよく、有機化合物又は無機化合物であってよい。対象とする化合物が活性剤であってよく、又はマイクロ粒子が追加的に活性剤を含んでいてもよい。タンパク質、核酸、脂質、若しくは多糖を含む高分子、又はステロール若しくはステロイドホルモンを含む低分子を例とするマイクロ粒子を形成する対象とする化合物は、薬剤若しくは栄養補助薬等の活性剤の担体であってよい。マイクロ粒子は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ乳酸‐グリコール酸（ＰＬＧＡ）等のポリマーを含む合成高分子、並びにアルブミン、ゼラチン、キトサン、及びデキストラン等の天然ポリマーを含んでいてもよい。本明細書に記載の「マイクロ粒子」は、１つの特定の天然化合物若しくは合成化合物のみ、又は２種類以上の同一の天然化合物若しくは合成化合物（例：２種類以上のタンパク質）、又は２種類以上の異なる種類の天然化合物若しくは合成化合物の組み合わせ（例：抗生物質及びリュープロリドペプチド）、を含み、並びにこれらから作製されるものであってよい。
本明細書で用いる「マイクロ粒子」という用語は、本明細書では高分子を含む溶液を凍結及び／又は乾燥させた粒子も意図してはいるが、一般に、この粒子が作製される溶液全体の固体形態ではない粒子も意味する。むしろ、本明細書で用いるマイクロ粒子とは、一般に、析出、沈殿、相分離、及びコロイド形成を含むがこれらに限定されないプロセスによって形成され、塩、対イオン、溶媒、及びその他の成分を含む、溶液の成分の画分の集合体である。
本明細書で用いる「析出」という用語は、それによって、マイクロ粒子の成分等の溶液中の対象とする１若しくは複数の溶質が、それ以上溶液中に留まらず、溶液の形成に用いられた１若しくは複数の溶媒とは別個の相を形成するプロセスを意味する。マイクロ粒子の析出及び析出したマイクロ粒子のサイズの制御は、温度、イオン強度、ｐＨ、誘電率、対イオン濃度、有機溶媒濃度の調整、高分子電解質若しくはポリマー、界面活性剤、洗浄剤の添加、又はこれらの組合せを含むがこれらに限定されない種々の手段によって達成することができる。
本明細書で用いる「相分離」という用語は、溶液等の単一の均一相を、溶媒又は溶液中の固体粒子の懸濁等の２若しくは３相以上に変換させることを意味する。
本明細書で用いる「沈殿」という用語は、液体中で懸濁状態であるか、又は重力、遠心力、若しくは電気力等の外力に反応して溶液中で形成されるマイクロ粒子等の粒子の移動を意味する。
本明細書では、「溶液」という用語は、「カクテル溶液」と交換可能に用いられ、単相、固体、液体、又は気体中の２若しくは３種類以上の成分の均一な混合物を意味し、ここで、個々の成分は、分子レベルでのみ認識可能である。溶液は、塩等の１若しくは２種類以上の溶質が、水若しくはアルコール等の溶媒中に溶解している液体であるか、又は水とエチルアルコールとの混合物等の相溶性溶媒の混合物中に溶解している液体であってよい。溶液は、液体溶液を凍結させた形態のものであってもよい。
本明細書で用いる「相溶性である」という用語は、液体、固体、及び気体等の１若しくは２種類以上の成分が、互いに混合されて単一の均一相を形成する能力を意味する。従って、２種類の液体を混合し、その個々の成分が分子レベルでのみ識別される単一の均一な液体相を形成可能である場合に、それらは相溶性である。成分が「部分的に相溶性である」場合、それらを混合して、特定の濃度範囲において単一の均一相を形成可能であるが、他の濃度範囲では形成可能ではないことを意味する。本明細書で用いるように、溶媒が別の溶媒と「部分的に相溶性である」場合、この溶媒は、他の溶媒と混合した際に、体積／体積（ｖ／ｖ）％にて、約５０％若しくは５０％、約４５％若しくは４５％、約４０％若しくは４０％、約３５％若しくは３５％、約３０％若しくは３０％、約２５％若しくは２５％、約２０％若しくは２０％、約１５％若しくは１５％、約１０％若しくは１０％、約９％若しくは９％、約８％若しくは８％、約７％若しくは７％、約６％若しくは６％、約５％若しくは５％、約４％若しくは４％、約３％若しくは３％、約２％若しくは２％、約１％若しくは１％、約０．５％若しくは０．５％、又はこれ未満の濃度にて相溶性であることを意味する。
本明細書で用いる「非相溶性である」とは、液体、固体、又は気体等の２若しくは３種類以上の成分を混合した場合に、これらが２つ以上の相を形成することを意味する。例えば、有機溶媒が水性溶媒と非相溶性である場合（例：ヘキサンと水）、有機溶媒は、水性溶媒の層と混合しない個別の層として視認可能である。
本明細書で用いる「ポリペプチド」という用語は、修飾されたペプチド結合であってよいペプチド結合によって連結された、少なくとも２個のアミノ酸、又は質量修飾アミノ酸（ｍａｓｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）及びアミノ酸類似体を含むアミノ酸誘導体を意味する。当業者であれば、ペプチドが、通常、約５０個乃至約１００個未満のアミノ酸残基を含むこと、及びタンパク質が、天然の供給源から得られることが多く、例えば翻訳後修飾を含み得ることを認識しているであろうが、本明細書では、「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本質的に同義で用いられる。
ポリペプチド又はタンパク質は、ポリヌクレオチドから翻訳することができ、ポリヌクレオチドは、コード配列の一部、又は、例えばコードフレーム以外のリーディングフレーム内に位置しているために、若しくは、イントロン配列、３’若しくは５’非翻訳配列、プローモーター等の制御配列等であるために自然には翻訳されないヌクレオチド配列の一部、を少なくとも包含していてよい。ポリペプチドは、化学的に合成することも可能であり、翻訳又は化学合成の後に化学的又は酵素的方法によって修飾することも可能である。ポリペプチドは、リン酸化（リン酸化タンパク質）、グリコシル化（糖タンパク質、プロテオグリカン）等により、翻訳後修飾することが可能であり、このような修飾は、細胞内又はｉｎ ｖｉｔｒｏでの反応において行うことができる。
本明細書で用いる「融合タンパク質」という用語は、２個以上のタンパク質又はポリペプチドから得られたドメインの抱合体であるタンパク質を意味する。ドメインは、Ｈｉｓ６タグ等のポリペプチドタグであってよい。抱合体は、化学的な結合、組換えＤＮＡ技術、又は組換え発現と化学的な結合との組合せによってドメインを連結させることによって作製することができる。
種々の化学的リンカーが当業者に公知であり、これらに限定されないが、通常は１乃至約６０個のアミノ酸、より一般的には約１０乃至３０個のアミノ酸を含むアミノ酸及びペプチド結合、Ｎ−スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾエート、スルホスクシンイミジル（４−ヨードアセチル）−アミノベンゾエート、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−ａ−（２−ピリジルジチオ）トルエン、スルホスクシンイミジル−６−［ａ−メチル−ａ−（ピリジルジチオール）−トルアミド］ヘキサノエート、Ｎ−スクシンイミジル−３−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオネート、スクシンイミジル６［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート、スルホスクシンイミジル６［３（−（−２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド］ヘキサノエート、３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオニルヒドラジド、エルマン試薬、ジクロロトリアジン酸（ｄｉｃｈｌｏｒｏｔｒｉａｚｉｎｉｃ ａｃｉｄ）、及びＳ−（２−チオピリジル）−Ｌ−システインを含むがこれらに限定されないヘテロ二官能性開裂性架橋剤（ｈｅｔｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｌｅａｖａｂｌｅ ｃｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｒｓ）、が挙げられる。
本明細書で用いる「シアリダーゼ融合タンパク質」という用語は、１若しくは２個以上のドメインが、少なくとも約６０％若しくは６０％、約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える触媒活性を維持するシアリダーゼ、又はその一部である融合タンパク質を意味する。本明細書で用いるシアリダーゼ融合タンパク質は、シアリダーゼに対して実質的に相同的であるタンパク質又はポリペプチドを含み、シアリダーゼの酵素活性を有する融合タンパク質を意味する場合もある
本明細書で用いるタンパク質の「触媒ドメイン」という用語は、シアリダーゼに対して実質的に相同的である配列の部分のみが、そのタンパク質の触媒活性を担うドメイン（例：配列番号１の２７４乃至６６６の残基は、アクチノミセスビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｓｕｓ）シアリダーゼの触媒ドメインとして識別されている）又はその触媒活性断片を含むアミノ酸残基の配列である、タンパク質又はポリペプチドを意味する。触媒ドメイン又はその触媒活性断片は、タンパク質の触媒活性の少なくとも約６０％若しくは６０％、約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える割合を維持する。
本明細書で用いる「核酸」という用語は、一本鎖及び／又は二本鎖ポリヌクレオチドを意味し、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）、並びにＲＮＡ若しくはＤＮＡのいずれかの類似体又は誘導体等である。「核酸」という用語にさらに含まれるのは、核酸の類似体であり、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホロチオエートＤＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、ｔＲＮＡ、リボザイム、並びにその他のこのような類似体及び誘導体、又はこれらの組み合わせ等である。核酸は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）及びリボ核酸（ＲＮＡ）等のポリヌクレオチドを意味する場合もある。この用語には、ヌクレオチド類似体から作製されたＲＮＡ又はＤＮＡのいずれかの同等体、誘導体、変異体、及び類似体として、一本鎖（センス又はアンチセンス）ポリヌクレオチド及び二本鎖ポリヌクレオチドも含まれる。デオキシリボヌクレオチドは、デオキシアデノシン、デオキシシチジン、デオキシグアノシン、及びデオキシチミジンを含む。ＲＮＡについては、ウラシル塩基はウリジンである。
本明細書で用いる「オリゴヌクレオチド」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、少なくとも２個の連結したヌクレオチド若しくはヌクレオチド誘導体を有するオリゴマー又はポリマーを意味し、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、及び、例えば、ヌクレオチド類似体を有するか、若しくはリン酸ジエステル結合以外の「バックボーン」結合、例えば、リン酸トリエステル結合、ホスホロアミデート結合、ホスホロチオエート結合、チオエステル結合、若しくはペプチド結合（ペプチド核酸）を有する、ＤＮＡ誘導体又はＲＮＡ誘導体が含まれる。当業者であれば、ＰＣＲプライマーを例とするオリゴヌクレオチドが、一般に約５０乃至１００ヌクレオチド未満の長さであることは認識されるであろうが、本明細書において「オリゴヌクレオチド」という用語は、「ポリヌクレオチド」と本質的に同義でも用いられる。
本明細書で用いる「流動性特性」という用語は、「流動する」能力を付与する性質を意味し、ここで、「流動する」とは、物質が、例えば凝集に起因する障害を起こさずに注ぎ入れられ、それが注ぎ入れられた容器の形状を呈することを可能にすることができる性質である。流体は、一般に「流動する」性質を有しており、このために、流体は一般に変形可能であり、すなわち、その形状を変化させることができる。本明細書で用いる「流体」という用語には、エマルジョンを含むコロイド含有液体、エアロゾル、及び気体が包含される。マイクロ粒子等の浮遊する固体粒子を含む液体、エアロゾル、及び気体も、本明細書にて定義する「流体」と見なされる。
本明細書で用いるエマルジョンは、２種類の非相溶性液体、第一の液体及び第二の液体、のコロイドとして定義され、ここで、第一の液体が第二の液体中に分散されている。
本明細書で用いる界面活性剤（又は「表面活性剤」）は、化学的な又は天然の実体であり、水性溶液に溶解した場合、その溶液の表面張力又は溶液中の２若しくは３つ以上の相の間の界面張力を低下させる。界面活性剤分子は、一般に両親媒性であり、親水性の頭部と疎水性の尾部を含む。界面活性剤分子は、本明細書で提供されるマイクロ粒子の安定剤として作用することができ、及び／又はその流動性特性を向上することができる。
本明細書で用いる組み合わせとは、２若しくは３個以上の要素の間の意図するいずれの関連をも意味する。例えば、マイクロ粒子と吸入器との組み合わせは、治療薬の経肺送達に用いることができる。
本明細書で用いる組成物とは、いずれの混合物をも意味する。組成物は、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、又はこれらのいずれかの組合せであってよい。
本明細書で用いるキットとは、組み合わせであって、構成成分が、任意に使用説明書、並びに／又はその組み合わせと共に使用する試薬及び装置と共に包装される、組み合わせを意味する。
本明細書で用いる「酵素」という用語は、化学反応又は生物学的プロセスを触媒するタンパク質を意味する。酵素は一般に、このような反応及びプロセスを促進及び／又は加速させる。さらに、酵素は一般に、特定の反応又はプロセスに対して特異的であり、特定の一連の反応物を特定の生成物へと変換する。
本明細書で用いる「コロイド」という用語は、マイクロ粒子等の固体粒子の、そのマイクロ粒子が形成された溶液等の液体中での分散物を意味する。「コロイド安定性」という用語は、粒子が実質的に凝集していないコロイドを意味する。例えば、安定なコロイドとは、マイクロ粒子等の固体粒子の約３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又はそれ未満が凝集体を形成したコロイドのことである。
「凝塊体（ａｇｇｌｏｍｅｒａｔｅｓ）」という用語は、ファンデルワールス力、又は表面張力、又は静電力、又はこれらの組み合わせによって互いに緩やかに保持し合う、マイクロ粒子等の１若しくは２個以上の粒子の会合を意味する。場合によっては、静電力で保持された会合は、「凝集塊（Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｅｓ）」として定義される場合がある。本明細書における目的のために、「凝塊体」には、「凝集塊」も包含される。凝塊体は一般に、空気中又は液体中のせん断力によって容易に分解され得る。「分散する」又は「分散性」という用語は、粒子が「流動する」能力、すなわち、例えば凝集体（ａｇｇｒｅｇａｔｅｓ）の存在によってその移動が妨害されない程度を意味する。
「凝集体」又は「集塊体（ｃｌｕｍｐｓ）」という用語は、マイクロ粒子、アモルファス析出物、結晶様粒子若しくはガラス様粒子、又はこれらの組合せ等の１若しくは２個以上の粒子の会合を意味する。凝集体は一般に容易には分解されず、そのため、分散、又は均一な懸濁液の形成、又は所望の性質を有するエアロゾルの形成を起こす能力が阻害される。
本明細書で用いる「非変性」という用語は、タンパク質に関するものであり、タンパク質のコンフォメーション、すなわち、その二次構造、三次構造、四次構造、又はこれらの組合せが、天然の状態のタンパク質から本質的に変化していないことを意味する。「非変性」及び「天然」という用語は、本明細書にて交換可能に用いられ、タンパク質が、その長さ及び／又は天然のコンフォメーションの全て、又は少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％を維持していることを意味する。本明細書にて交換可能に用いられる「非変性」及び「天然」という用語には、その長さ、並びに二次構造、三次構造、及び四次構造を含むコンフォメーション等の、細胞内におけるタンパク質の自然の状態が含まれる。本明細書で提供される組成物中のものを含む本明細書にて定義される「非変性」又は「天然」のタンパク質は、例えば、アミノ酸構成ブロックを提供する栄養素、抗酸化剤、酵素、抗体、遺伝子発現の制御因子、骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）等としての、自然の状態にあるタンパク質の正常な活性又は機能の全て、又は少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％ ９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％を一般に維持している。
本明細書で用いる「活性」又は「機能」という用語は、「生物活性」と交換可能であり、タンパク質、ビタミン、ミネラル、若しくは薬剤等の化合物のｉｎ ｖｉｖｏでの活性、又は化合物、組成物、若しくは他の混合物のｉｎ ｖｉｖｏでの投与の結果として生じる生理反応を意味する。従って、活性には、化合物、組成物、及び混合物の治療効果、並びに薬理活性が包含される。生物活性は、このような活性を試験又は使用するために設計されたｉｎ ｖｉｔｒｏの系において観察することもできる。
本明細書で用いる「機能活性」も、「活性」、「生物活性」、又は「機能」と交換可能であり、その自然の状態と関連する、又はそれが属する化合物の分類と関連する１若しくは２種類以上の活性を示す化合物を意味する。例えば、抗生物質であるアミノグリコシドは、その分類中のいくつかの化合物の機能活性を示す。同様に、天然若しくは非変性タンパク質と関連する１若しくは２種類以上の活性を示すポリペプチド又はその一部は、機能的に活性である。機能活性としては、これらに限定されないが、治療効果、ｉｎ ｖｉｖｏでの生物活性、触媒若しくは酵素活性、抗原性（抗ポリペプチド抗体に結合するポリペプチドに結合するか、又はこれと競合する能力）、免疫原性、多量体形成能、及びポリペプチドの受容体若しくはリガンドと特異的に結合する能力が挙げられる。
本明細書で用いる「変性」という用語は、その天然若しくは非変性コンフォメーション、すなわち、その二次構造、三次構造、四次構造、又はこれらの組合せから変化されたタンパク質を意味する。コンフォメーションの変化は一般に、低温殺菌、放射線、熱、化学物質、酵素作用、酸若しくはアルカリへの曝露、及びイオン交換、並びにこれらのいずれかの組合せを含む処理工程によって発生する。タンパク質の変性は一般に、その天然又は非変性状態であるタンパク質の活性及び機能を含む元々の性質の全て、又はその一部、一般には、５０％超及び少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、を失わせる結果となる。
本明細書で用いる「栄養補助薬」という用語は、ビタミン、ミネラル、脂肪酸、アミノ酸、炭水化物、酵素、タンパク質、生化学物質及びその代謝物、ハーブ、並びに植物を含む栄養素を、ヒトを含む動物等のホストに提供する物質又は組成物を意味する。栄養補助薬を通じてホストに供給される栄養素としては、ホストの食事習慣に欠けている若しくは不足している、生存、良好な健康状態、疾患の治癒、又は疾患の予防のために必須である栄養素、並びに、良好な健康状態を増大させ、疾患を予防若しくは疾患を治癒すると考えられるが、生存若しくは良好な健康状態のために必須であるとは見なされていない栄養素、を含むことができる。
本明細書で用いる「疎水性」とは、当業者であれば理解されるように、帯電していないか、若しくは電荷が分極していない物質、又は水若しくはその他の極性溶媒と結合するのに十分な程度には帯電していないか、若しくは電荷が分極していない物質を意味する。疎水性リガンドは、水若しくは極性溶媒の存在下にて、互いに、又は他の非極性の分子若しくは溶媒と、疎水性相互作用を通じて会合することができる。疎水性リガンドはさらに、一般に、極性溶媒中よりも非極性溶媒中の方が溶解しやすい。非極性溶媒の例としては、ヘキサン等のアルカン、ジエチルエーテル等のアルキルエーテル、ベンゼン等の芳香族炭化水素、並びに塩化メチレン及び四塩化炭素等のハロゲン化アルキル、モノ−、ジ−、及びトリグリセリド、オレイン酸、リノール酸、パルミチン酸、ステアリン酸、これらの結合した形態、及びこれらのエステル等の脂肪酸、が挙げられる。
「水不溶性」化合物という用語は、本明細書にて「疎水性」化合物と交換可能に用いられ、水性溶媒中よりも非水性溶媒中での溶解度の方が高い化合物を意味する。例えば、「水不溶性」化合物とは、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００体積％又はこれらに等しい体積％の水、又は水溶液を含有する、バッファー等の溶液中にて、完全に不溶性、又は部分的に、すなわち、約２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、若しくは１００％又はこれらに等しい割合で不溶性である化合物である。
本明細書で用いる「親水性」リガンド又は「極性」リガンドとは、電荷を有するか、又は電荷が分極したリガンドである。本明細書で用いる親水性リガンドは、カルボキシレート若しくはアンモニウム等の帯電した官能基、又はヒドロキシル若しくはスルフヒドリル等のリガンドへ電荷を提供する電荷が分極した結合を有する。親水性リガンドは、水素結合又はイオン性相互作用を通して、水、並びにアルコール、アミン、アミド、酸、カルボン酸、エステル、ニトリル、ケトン、グリコール、及びグリコールエーテルを含むその他の極性溶媒と結合することができる。親水性リガンドはさらに、非極性溶媒中よりも極性溶媒中の方が溶解度が高い。
本明細書で用いる「治療薬」という用語は、ヒトを含むホストに投与した際に、遺伝性疾患若しくは後天性疾患の症状若しくは徴候を効果的に寛解させるか若しくは除去するか、又は該疾患を治癒する薬剤を意味する。代表的な治療薬としては、当業者であれば理解されるように、例えば、化学療法薬を例とする癌治療のための化学化合物、抗生物質を例とする細菌の感染症に対して指向された化学化合物、抗ウィルス化合物等が挙げられる。
本明細書で用いる「担体」又は「マイクロ担体（ｍｉｃｒｏ‐ｃａｒｒｉｅｒ）」という用語は、対象とする活性剤又は治療薬である分子を含有するマイクロスフェアの形成を促進する、又は得られたマイクロスフェアの安定性を向上させる、又は得られたマイクロスフェアの対象とする標的（細胞、組織等）への輸送を促進する分子を意味する。ある態様では、担体を用いてマイクロスフェアへ安定性を付与することができる。マイクロスフェア中に含有される対象とする治療薬又は活性剤が高い効力を有し、比較的低い濃度（一般には、約０．００１％若しくは０．００１％、約０．００５％若しくは０．００５％、約０．０１％若しくは０．０１％、約０．０２％若しくは０．０２％、約０．０５若しくは０．０５、約０．１％若しくは０．１％、約０．２％若しくは０．２％、約０．５％若しくは０．５％、約１％若しくは１％、約２％若しくは２％、約３％若しくは３％、約５％若しくは５％、約１０％若しくは１０％、約１５％若しくは１５％、約２０％若しくは２０％、約２５％若しくは２５％、約３０％若しくは３０％、約３５％若しくは３５％、約４０％若しくは４０％、約４５％若しくは４５％、又は約５０％若しくは５０％、又は、約０．００１％若しくは０．００１％乃至約５０％若しくは５０％の範囲内）で組み込まれている態様では、担体は、それがなければ容易に分解する可能性のあるマイクロ粒子製剤を安定化させることができる。効力の高い化合物の例としては、細胞毒性抗癌薬又はｓｉＲＮＡ等の核酸を挙げることができる。代表的な担体としては、アミノ酸、カルボン酸（例：クエン酸、マレイン酸）、タンパク質及び核酸を含むポリマー、ゼラチン及び種々の多糖を含むヒドロゲルを形成する能力を有する物質、並びにこれらの組み合わせが挙げられる。ある態様では、タンパク質、又はｔＲＮＡ及びｓｉＲＮＡ等の核酸である活性剤が、デキストラン等の多糖、又はゼラチン等のタンパク質をマイクロ担体として用いて安定化されたマイクロスフェア中に組み込まれている。
担体として用いられる分子は、一般に安全性及び安定性が実証されたものである。任意の活性剤又は治療薬に対して、高スループットである方法で担体系を最適化することができる。
本明細書で用いる「保存寿命」又は「安定性」とは、マイクロ粒子組成物の作製後、この組成物が、組成物中に存在するタンパク質の初期活性、並びにサイズ、形状、及び空気力学的粒径分布等のマイクロ粒子の他の一般的な物理的特性の少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を維持している時間を意味する。従って、例えば、本明細書にて約１８℃乃至約２５℃、２６℃、２７℃、又は２８℃の範囲として定義される室温にて３０日間安定であるか又は３０日間の保存寿命を有する組成物は、１８℃乃至約２５℃、２６℃、２７℃、又は２８℃にて３０日間保存した後に、組成物中に存在するタンパク質の初期活性量の少なくとも約７０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％を有するであろう。本明細書で提供されるマイクロ粒子組成物の保存寿命は、一般に、５５℃で少なくとも約１０日間、４２℃で少なくとも約２乃至３週間、及び２５℃で少なくとも約８ヶ月以上であるが、本明細書で提供される方法によって作製された、いかなる温度で、いかなる長さの保存寿命を有するマイクロ粒子組成物も、本明細書では意図している。
本明細書で用いる「生物活性剤」、「活性剤」、「生物剤」、又は「剤」は、体内へ導入された場合に、細胞、組織、若しくは器官のレベルでの身体機能の変化、並びに／又は体重及び体型等の美容的外観の変化等、所望の生物反応を引き起こす任意の物質である。このような物質は、医薬、薬剤、治療薬、栄養補助薬、ハーブ、ホルモン等、又はこれらのいずれかの組合せを含む、合成若しくは自然の元素又は化合物、タンパク質、細胞、又は組織のいずれであってもよい。これらの用語は、塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、異性体、断片、類似体を含むがこれらに限定されない、本明細書で具体的に述べられる活性剤の薬理学的に許容され、薬理活性である誘導体も包含される。「生物活性剤」、「生物剤」、又は「剤」という用語を用いる場合、又は特定の活性剤が具体的に識別される場合は、その活性剤自体、並びに薬理学的に許容され、薬理活性である塩、エステル、アミド、プロドラッグ、活性代謝物、異性体、断片、及び類似体を含むことを意図している。
本明細書で用いる「対象」は、哺乳類を含む動物、通常はヒトとして定義される。
本明細書で用いる「治療効果量」とは、組成物を単一の剤形で対象に投与した場合に、所望の治療的、予防的、若しくはその他の生物学的な効果又は反応を得るための活性剤の量を意味する。用量中の活性剤の特定の量は、活性剤の性質、治療される状態の性質、対象の年齢及び大きさ等の条件に応じて大きく変化することになる。
本明細書で用いる、化合物の「薬理学的に許容される誘導体」には、その塩、エステル、エノールエーテル、エノールエステル、酸、塩基、溶媒和物、水和物、又はプロドラッグが含まれる。このような誘導体は、当業者であれば、そのような誘導体化の既知の方法を用いて容易に作製することができる。作製された化合物は、重大な毒性作用をもたらすことなく動物又はヒトへ投与することができ、薬理活性であるか又はプロドラッグであるかのいずれかである。薬理学的に許容される塩としては、これらに限定されないが、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、アンモニア、ジエタノールアミン及びその他のヒドロキシアルキルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、１−パラ−クロロベンジル−２−ピロリジン−１’−イルメチルベンズイミダゾール、ジエチルアミン及びその他のアルキルアミン、ピペラジン、並びにトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等であるがこれらに限定されないアミン塩；リチウム、カリウム、及びナトリウム等であるがこれらに限定されないアルカリ金属塩；バリウム、カルシウム、及びマグネシウム等であるがこれらに限定されないアルカリ土類金属塩等；亜鉛等であるがこれに限定されない遷移金属塩；並びに、リン酸水素ナトリウム及びリン酸二ナトリウム等であるがこれらに限定されないその他の金属塩が挙げられ；さらには、これらに限定されないが、塩酸塩及び硫酸塩等であるがこれらに限定されない鉱酸の塩；並びに、酢酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、酪酸塩、吉草酸塩、及びフマル酸塩等であるがこれらに限定されない有機酸の塩、が挙げられる。薬理学的に許容されるエステルとしては、これらに限定されないが、カルボン酸、リン酸、ホスフィン酸、スルホン酸、スルフィン酸、及びボロン酸を含むがこれらに限定されない酸性基の、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、及びヘテロシクリルエステルが挙げられる。
本明細書で用いる「治療」とは、状態、障害、又は疾患の１若しくは２種類以上の症状を寛解させるか、又はそうでなければ有益に変化させるいずれの方法をも意味する。治療には、インフルエンザの治療のための使用等、本明細書の組成物のいずれの医薬的使用も包含される。
本明細書で用いる「有機溶媒」とは、その分子が炭素及び水素を有する化学化合物の大きなクラスのいずれかのメンバーである有機化合物である溶媒を意味する。このような溶媒としては、例えば、以下のクラスからの化合物を挙げることができ：脂肪族又は芳香族アルコール、ポリオール、アルデヒド、アルカン、アルケン、アルキン、アミド、アミン、芳香族、アゾ化合物、カルボン酸、エステル、ジオキサン、エーテル、ハロアルカン、イミン、イミド、ケトン、ニトリル、フェノール、及びチオールである。
本明細書で用いる「水性溶媒」とは、水、又は、少なくとも約５０％若しくは５０％、少なくとも約６０％若しくは６０％、少なくとも約７０％若しくは７０％、又は約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える量の水を含む溶媒の混合物を意味する。本明細書で用いる「水性溶媒」という用語は、バッファー、塩溶液、対イオン及びその他の水に溶解する溶質を含む溶液等、溶媒として水を含む溶液も意味する。
本明細書で用いる「貧溶媒」とは、対象とするマイクロ粒子形成化合物の溶液に添加した場合に、得られた混合物中（すなわち、最終的にマイクロ粒子が得られる「カクテル溶液」）におけるその化合物の溶解度を低下させる溶媒を意味する。貧溶媒の添加量は、一般に、少しずつの冷却の工程、及びこれに続くマイクロ粒子の回収、例えば凍結乾燥、によってマイクロ粒子が形成されるまで化合物が溶解した状態で維持される量である。従って、貧溶媒は、カクテル溶液の作製に用いられる温度（一般には、環境温度）では化合物を溶液から析出させるには不十分である量で、化合物の溶液へ添加される。貧溶媒は、化合物を溶解させる溶媒、若しくは溶媒／対イオン溶液、若しくは溶媒／対イオン／化合物溶液と相溶性、又は部分的に相溶性であってよい。例えば、イソプロパノール等の有機溶媒は、水溶性である化合物に対する貧溶媒であり得、水又は水性バッファーは、水不溶性である化合物に対する貧溶媒であり得る。しかし、溶媒及び貧溶媒の両方が有機溶媒であってよい。貧溶媒及び溶媒には、対イオンとして作用し得るものもある。例えば、水性バッファー溶液は、対イオンであり、溶媒又は貧溶媒であり得る。同様に、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）等のポリマーも、貧溶媒であり、対イオンであり得る。
本明細書で用いる「溶媒／貧溶媒系」という用語は、マイクロ粒子を形成可能である化合物が、環境温度にて可溶であるが、通常は対イオンの存在下にて環境温度未満の温度へ冷却するとマイクロ粒子を形成する、溶媒の混合物を意味する。上記で述べたように、溶媒及び／又は貧溶媒は、対イオンでもあり得、追加の対イオンの必要性が排除され得る。溶媒及び貧溶媒が非相溶性である溶媒／貧溶媒系も用いることができるが、溶媒及び貧溶媒は一般に、互いに相溶性又は部分的に相溶性である。
本明細書で用いる「ｐＩ」又は「等電点」という用語は、タンパク質又はポリペプチド上に有効電荷が存在しないｐＨを意味する。
本明細書で用いる「対イオン」という用語は、タンパク質、核酸、脂質、若しくはオリゴ糖等の高分子からの、又はテトラサイクリン若しくはプロスタグランジン等の低分子からのマイクロ粒子の形成を開始させることができる、帯電した分子又は電荷の分極が可能な分子を意味する。対イオンは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）等のポリマーであってもよい。
対イオンの選択は、対象とする各化合物（高分子又は低分子）について経験的に決定することができる。例えば、ＤＡＳ１８１融合タンパク質（配列番号１７）の場合、硫酸ナトリウムが、本明細書で提供される方法におけるマイクロ粒子の形成を開始させることができることから、これが対イオンであり、一方、グリシン、塩化ナトリウム、又は酢酸ナトリウムは、一般にＤＡＳ１８１に対する対イオンとして適切ではない。カナマイシンについては、イタコン酸及びクエン酸が、本明細書で提供される方法におけるマイクロ粒子の形成を開始させることができることから、これらを適切な対イオンとして用いることができ、一方、アルギニンは、一般にカナマイシンに対する対イオンとして適切ではない。
帯電した分子が対イオンであるかどうかは、これらに限定されないが、マイクロ粒子へ製剤される分子の種類、ｐＨ、イオン強度、使用する溶媒／貧溶媒系の種類、並びに塩及び活性剤などの追加成分の存在を含むパラメーターに基づいて、経験的に決定することができる。本明細書で提供され記載されるように、対イオンは、アニオンであるか若しくは有効負電荷を有するか若しくは電荷の分極が可能な基を有する、又は、カチオンであるか若しくは有効正電荷を有するか若しくは電荷の分極が可能な基を有する、又は、双性イオンであり並びに負と正の両方の電荷を有するか若しくは電荷の分極が可能な基を有するものであってよい。
化合物はそれ自体が対イオンである場合もあり、それによって、追加のいかなる対イオンも存在しない状態でマイクロ粒子の形成が促進される。例えば、特定の条件下にて、テトラサイクリン、カナマイシン、及びアンピシリン等の低分子化合物、並びにｓｉＲＮＡ及びタバコモザイクウィルス等の高分子は、追加の対イオンが存在しない状態でマイクロ粒子を形成することができる。ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）及び酢酸ナトリウム／硫酸ナトリウムバッファー等、対象とする化合物が存在しない状態でそれ単独でマイクロ粒子を形成する能力を有するその他の対イオンは、「担体」又は「シード（ｓｅｅｄｓ）」として作用することにより、対象とする化合物のマイクロ粒子の形成及び／又は核形成を促進することができる。
本明細書で用いる「冷却」という用語は、マイクロ粒子を得るための所望の温度まで温度を低下させること、又は所望の大きさのマイクロ粒子が得られた場合は、溶媒を揮発させることによってマイクロ粒子の乾燥製剤を得るための（例：凍結乾燥のための）所望の温度までさらに温度を低下させることを意味する。本明細書で用いる「少しずつの冷却」又は「少しずつ冷却する」又は「少しずつ冷却された」という用語は、環境温度（約１５℃又は１５℃乃至約５０℃又は５０℃、通常は約１８℃又は１８℃乃至約３０℃又は３０℃）から、マイクロ粒子の形成のための所望の温度までの温度の低下を、溶液が凍結する前に溶液中でマイクロ粒子を作り出すために適切である速度又は適切な時間で行うことを意味する。従って、少しずつの冷却は、溶液全体が、分離したマイクロ粒子を作り出すことなく固体の形態に変換される、例えばスナップ凍結（ｓｎａｐ ｆｒｅｅｚｉｎｇ）、スプレードライ、又はスプレーフリーズドライとは異なる。
少しずつの冷却の速度は、高分子の種類、溶媒、対イオン、及びその他の成分、並びに冷却の方法（例：吸熱反応、熱交換器、冷蔵庫又は冷凍庫又は凍結乾燥器）に基づいて経験的に決定され、例えば、約１分若しくは１分、約２分若しくは２分、約３分若しくは３分、約５分若しくは５分、約７分若しくは７分、約１０分若しくは１０分、約１５分若しくは１５分、約２０分若しくは２０分、約２５分若しくは２５分、約３０分若しくは３０分、約１時間若しくは１時間、約２時間若しくは２時間、約５時間若しくは５時間、又は約１０時間若しくは１０時間、乃至、約１．５分若しくは１．５分、約２分若しくは２分、約３分若しくは３分、約５分若しくは５分、約７分若しくは７分、約１０分若しくは１０分、約１５分若しくは１５分、約２０分若しくは２０分、約２５分若しくは２５分、約３０分若しくは３０分、約１時間若しくは１時間、約２時間若しくは２時間、約５時間若しくは５時間、約１０時間若しくは１０時間、又は約１５時間若しくは１５時間というマイクロ粒子形成に要する時間の長さに応じて様々であり得る。
所望のサイズのマイクロ粒子は、例えば、カクテル溶液を急速に冷却し（例：熱交換器を用いて）、マイクロ粒子の懸濁液を大きな温度変化を起こさずに一定時間維持し、次にこのカクテル溶液にスナップ凍結を施すことによっても形成することができる。
マイクロ粒子が形成される温度も、高分子若しくは低分子の種類、溶媒、対イオン、及びその他の成分、並びに冷却の方法及び均一性に基づいて経験的に決定され、約１５℃若しくは１５℃から、約１０℃若しくは１０℃、約８℃若しくは８℃、約５℃若しくは５℃、約４℃若しくは４℃、約３℃若しくは３℃、約２℃若しくは２℃、約１℃若しくは１℃、約−２℃若しくは−２℃、約−５℃若しくは−５℃、約−７．５℃若しくは−７．５℃、約−１０℃若しくは−１０℃、約−１５℃若しくは−１５℃、約−２０℃若しくは−２０℃、約−２５℃若しくは−２５℃、約−３０℃若しくは−３０℃、約−３５℃若しくは−３５℃、約−４０℃若しくは−４０℃、約−４５℃若しくは−４５℃、約−５０℃若しくは−５０℃、約−５５℃若しくは−５５℃、約−６０℃若しくは−６０℃、約−７０℃若しくは−７０℃、約−８０℃若しくは−８０℃、約−８５℃若しくは−８５℃、約−９０℃若しくは−９０℃、約−１００℃若しくは−１００℃、約−１１０℃若しくは−１１０℃、約−１１５℃若しくは−１１５℃、約−１２０℃若しくは−１２０℃、約−１２５℃若しくは−１２５℃、約−１３５℃若しくは−１３５℃、約−１４５℃若しくは−１４５℃、約−１５０℃若しくは−１５０℃、約−１６０℃若しくは−１６０℃、約−１６５℃若しくは−１６５℃、約−１７０℃若しくは−１７０℃、約−１７５℃若しくは−１７５℃、約−１８０℃若しくは−１８０℃、約−１８５℃若しくは−１８５℃、約−１９０℃若しくは−１９０℃、約−１９５℃若しくは−１９５℃、又は約−２００℃若しくは−２００℃にて様々であり得る。
「環境温度」という用語は、本明細書にて「室温」と交換可能に用いられる場合があり、マイクロ粒子の形成を開始する前に、カクテル反応物が混合及び／又は維持される指定された領域の環境中の空気又はその他の媒体の温度を意味する。本明細書で用いる環境温度は、約１５℃若しくは１５℃乃至約５０℃若しくは５０℃、通常は約１８℃若しくは１８℃乃至約３０℃若しくは３０℃、又は約２５℃若しくは２５℃乃至約３０℃若しくは３０℃、であってよい。
本明細書で用いる「吸熱反応」とは、溶液を例とするその環境から熱を吸収し、従って、周囲の環境又は溶液を冷却する任意の化学反応である。例えば、硫酸アンモニウム又はアセトニトリルを水へ添加すると、吸熱反応が発生し；従って、これらの化合物は、それぞれ対イオン及び貧溶媒として作用することができ、マイクロ粒子を形成させる冷却を促進することもできる。吸熱反応のその他の例としては、これらに限定されないが、塩化アンモニウムの水への溶解、水と硝酸アンモニウムの混合、水と塩化カリウムの混合、及びエタン酸と炭酸ナトリウムとの反応が挙げられる。
本明細書で用いる「スプレードライ」という用語は、タンパク質若しくは低分子等の分子を含む溶液が、通常は約数ミリ秒乃至１から２秒乃至数十秒の間、高温の乾燥媒体中に噴霧されることによって乾燥微粒子の形態に変換されるプロセスを意味する。本明細書で用いる「スプレーフリーズドライ」という用語は、タンパク質等の高分子を含む溶液が、液体窒素等の極低温の媒体中に噴霧されることにより、後に凍結乾燥によって乾燥させることができる溶液の凍結した液滴が得られるプロセスを意味する。本明細書で交換可能に用いられる「スナップ凍結」又は「高速凍結」又は「急速凍結」又は「瞬間凍結」という用語は、溶媒、又はタンパク質等の高分子を含有する溶液を含む溶液を、この溶媒又は溶液を保持する良好な熱伝導性を有する容器（例：薄壁のガラス又はプラスチック又は金属製の試験管）の液体窒素中への浸漬、又は溶液の液体窒素中への直接の注ぎ込みによって凍結させることを意味する。「スナップ凍結」及び「高速凍結」は、通常は約数ミリ秒乃至１から２秒乃至数十秒間で行われる。
本明細書で用いる「凍結乾燥する」又は「凍結乾燥」という用語は、「フリーズドライ」と同義であり、エマルジョン、コロイド、又は懸濁液を含む溶液が凍結され、その溶媒が直接気体状態へと揮発（昇華）して後に固体成分が残るプロセスを意味する。
Ｂ．マイクロ粒子組成物の作製方法
本明細書において、化合物の含有率の高いマイクロスフェアを作製する方法が提供される。この化合物は、タンパク質等の高分子であっても、又はプロスタグランジン等の低分子であってもよい。本明細書で提供されるマイクロスフェアは、対イオン及び貧溶媒の存在下における制御された析出によって作製される。マイクロスフェアは、経肺、皮下、経皮、筋肉内、非経口、及び経口投与経路を含む種々の送達経路によって対象に送達することができる医薬組成物、診断組成物、ニュートラシューティカル組成物、又は美容組成物の作製に適している。この方法は、効率性及び生産性を高めるために、バッチモード又は連続モードで行うこともできる。
本明細書で提供される方法により得られるマイクロスフェアは、対象の疾患状態をｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで治療又は診断するための予防薬、治療薬、又は診断薬として有用である。本明細書で提供される方法によって得られるマイクロスフェアのサイズを、貧溶媒の種類及び濃度、溶媒／貧溶媒系の溶媒及び貧溶媒の種類並びに相対濃度、高分子又は低分子の濃度、イオン強度、対イオンの種類及び濃度、冷却の速度および時間、を含むパラメーターを調節して制御することにより、経肺（代表的なサイズとしては、これらに限定されないが、インフルエンザ及びその他の呼吸器感染症の治療のために咽頭、気管、及び気管支へ送達するための１ミクロン乃至５ミクロンの粒子を挙げることができる）、皮下、筋肉内、静脈内、及びその他の経路を含む所望の経路を介して（数十ミクロンのサイズの粒子を挙げることができるがこれに限定されない粒子を用いて）治療薬を送達することができる、０．００１ミクロン乃至５０ミクロン若しくはそれを超える広範囲にわたるサイズのマイクロスフェアを提供することができる。
本明細書で提供される組成物は、種々の投与モードに合わせて製剤することができる。例えば、経口摂取を例とする経口、静脈内、鼻腔内、非経口、皮下、経皮、局所、皮膚、関節内、又は筋肉内投与によって投与することができる。組成物は、経肺又は点眼投与に合わせて製剤することもできる。特定の局面では、本明細書で提供される組成物は、吸入用である。
本明細書で提供される組成物は、錠剤、カプレット、カプセル、ゲル、バイアル、プレフィルドシリンジ、吸入器、静電装置、及びその他の送達用装置として製剤することができる。組成物の送達用量は、約０．０１ｍｇ若しくは０．０１ｍｇ乃至約０．１ｍｇ若しくは０．１ｍｇ；１回の用量あたり約０．１ｍｇ若しくは０．１ｍｇの化合物乃至１回の用量あたり約１０００ｍｇ若しくは１０００ｍｇの化合物、又は、１回の用量当たり約０．２ｍｇ若しくは０．２ｍｇ、約０．３ｍｇ若しくは０．３ｍｇ、約０．５ｍｇ若しくは０．５ｍｇ、約０．６ｍｇ若しくは０．６ｍｇ、約０．７５ｍｇ若しくは０．７５ｍｇ、約１ｍｇ若しくは１ｍｇ、約１．５ｍｇ若しくは１．５ｍｇ、約２ｍｇ若しくは２ｍｇ、約３ｍｇ若しくは３ｍｇ、約５ｍｇ若しくは５ｍｇ、約１０ｍｇ若しくは１０ｍｇ、約１５ｍｇ若しくは１５ｍｇ、約２０ｍｇ若しくは２０ｍｇ、約３０ｍｇ若しくは３０ｍｇ、約４０ｍｇ若しくは４０ｍｇ、約４５ｍｇ若しくは４５ｍｇ、約５０ｍｇ若しくは５０ｍｇ、約５５ｍｇ若しくは５５ｍｇ、約６０ｍｇ若しくは６０ｍｇ、約６５ｍｇ若しくは６５ｍｇ、約７０ｍｇ若しくは７０ｍｇ、約７５ｍｇ若しくは７５ｍｇ、約８０ｍｇ若しくは８０ｍｇ、約８５ｍｇ若しくは８５ｍｇ、約９０ｍｇ若しくは９０ｍｇ、約１００ｍｇ若しくは１００ｍｇ、約１５０ｍｇ若しくは１５０ｍｇ、約２００ｍｇ若しくは２００ｍｇ、約２５０ｍｇ若しくは２５０ｍｇ、約３００ｍｇ若しくは３００ｍｇ、約３５０ｍｇ若しくは３５０ｍｇ、約４００ｍｇ若しくは４００ｍｇ、約４５０ｍｇ若しくは４５０ｍｇ、約５００ｍｇ若しくは５００ｍｇ、約６００ｍｇ若しくは６００ｍｇ、約７００ｍｇ若しくは７００ｍｇ、約８００ｍｇ若しくは８００ｍｇ、約９００ｍｇ若しくは９００ｍｇ、又は約１０００ｍｇ若しくは１０００ｍｇ、であってもよい。１回の用量の投与頻度は、例えばインフルエンザの治療又は予防に対しては、１日に３回若しくは４回以上、乃至１日に２回、乃至１日に１回、乃至１週間に２回、乃至１週間に１回、乃至２週間に１回、又は２週間に１回よりも低頻度であってよい。予防に対しては、投与は、３週間に１回又は４週間若しくはこれより長い期間に１回等、通常約２週間に１回又はこれよりも低頻度の程度であってよい。
本明細書で提供される方法に従って製剤される組成物は、疾患及び障害の防止、予防、並びに／又は治療のために用いることができる。従って、本明細書では、対象とする化合物のマイクロスフェアの治療効果量を投与することによって、疾患を防止、予防、又は治療する方法が提供される。疾患及び障害としては、これらに限定されないが、神経障害、呼吸器障害、免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、消化障害、代謝障害、心血管障害、腎臓障害、増殖性障害、癌性疾患及び炎症が挙げられる。
例えば、本明細書で提供されるマイクロスフェアは、感染性疾患の治療方法に用いることができ、アルボウィルス感染、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンジダ症、カンピロバクター症、水痘、クラミジア感染症、コレラ、コロノウィルス感染症、ブドウ球菌感染症、コクサッキーウィルス感染症、クロイツフェルト−ヤコブ病、クリプトスポリジウム症、シクロスポラ感染症、サイトメガロウィルス感染症、エプスタイン‐バーウィルス感染症、デング熱、ジフテリア、耳感染症、脳炎、インフルエンザウィルス感染症、パラインフルエンザウィルス感染症、ジアルジア症、淋病、インフルエンザ菌感染症、ハンタウィルス感染症、ウィルス肝炎、単純ヘルペスウィルス感染症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヘリコバクター感染症、ヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）感染症、伝染性単核球症、レジオネラ症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、リンパ性脈絡髄膜炎、マラリア、麻疹、マルブルグ出血熱、脳膜炎、サル痘、流行性耳下腺炎、マイコバクテリア感染症、マイコプラズマ感染症、ノーウォークウィルス感染症、百日咳、蟯虫感染症、肺炎球菌の疾患、ストレプトコッカスニューモニエ感染症、マイコプラズマニューモニエ感染症、モラクセラカタラーリス感染症、シュードモナスエルジノーサ感染症、ロタウィルス感染症、オウム病、狂犬病、ＲＳウィルス感染症（ＲＳＶ）、白癬、ロッキー山紅斑熱、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ、疥癬、性行為感染症、細菌性赤痢、帯状疱疹、スポロトリコーシス、レンサ球菌感染症、梅毒、テタヌス、旋毛虫症、結核、野兎病、腸チフス、ウィルス性髄膜炎、細菌性髄膜炎、西ナイルウィルス感染症、黄熱、アデノウィルスが媒介する感染症及び疾患、レトロウィルスが媒介する感染性疾患、エルシニア感染症、人畜共通感染症、並びにその他のいずれかの感染性呼吸器、肺、皮膚、胃腸、及び尿路疾患、等である。
対象とする化合物のマイクロスフェアの治療効果量を投与することによって治療することができるその他の疾患及び状態としては、関節炎、喘息、アレルギー状態、アルツハイマー病、癌、心血管疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病、嚢胞性線維症（ＣＦ）、糖尿病、非ウィルス性肝炎、血友病、出血障害、血液疾患、遺伝的障害、ホルモン性障害、薬物耽溺及び依存症、疼痛、腎疾患、肝疾患、血管新生、肺動脈高血圧症、神経障害、代謝疾患、皮膚状態、甲状腺疾患、骨粗鬆症、肥満、ストローク、貧血、炎症性疾患、並びに自己免疫疾患、を挙げることができる。
本明細書で提供される方法の工程に含まれるのは：化合物を含む溶液を対イオン及び貧溶媒と混合すること、並びに得られた溶液を、マイクロ粒子が形成される温度まで少しずつ冷却すること、である。一つの態様では、これらの工程は、以下のように記述することができる：
１）適切な溶媒に溶解された化合物を含む溶液に、環境温度にて化合物の析出を引き起こさない濃度で対イオン及び貧溶媒を添加すること；
２）析出：化合物／対イオン／貧溶媒カクテル溶液を、冷却（熱交換）及び吸熱反応を含む方法を介して冷却してマイクロスフェアの形成を開始させること；並びに、
３）脱水：マイクロスフェア懸濁液を凍結させ、貧溶媒及び水を昇華（例えば、約−５℃若しくは−５℃乃至約−２００℃若しくは−２００℃；又は、約−２０℃若しくは−２０℃乃至約−２００℃若しくは−２００℃、又は約−３０℃若しくは−３０℃乃至約−２００℃若しくは−２００℃、又は約−４０℃若しくは−４０℃乃至約−１８０℃若しくは−１８０℃、又は約−４５℃若しくは−４５℃乃至約−１８０℃若しくは−１８０℃、又は約−６５℃若しくは−６５℃乃至約−１７５℃若しくは−１７５℃、又は約−８０℃若しくは−８０℃乃至約−１２０℃若しくは−１２０℃、又は約−６５℃若しくは−６５℃乃至約−１００℃若しくは−１００℃、の温度でのフリーズドライ）によって除去すること。
この方法の上記工程は、順次に、断続的に、又は同時に、いかなる順序によっても行うことができるが、当業者であれば、マイクロスフェアから溶媒を分離する脱水工程は、マイクロスフェアの開始及び／又は形成の前ではなく、マイクロスフェア形成と同時に又はこれに続いて行うことができることは理解されるであろう。一つの態様では、対イオン及び貧溶媒は、化合物を含む溶液に、同時に又は順次に、いかなる順序によっても添加され、これに続いて溶液を冷却する。他の態様では、同一の物質が対イオン及び貧溶媒として作用する（例えば、ポリエチレングリコール又はポリエチレンイミン等のポリマー）。さらに他の態様では、対イオン及び貧溶媒を添加する前に、化合物を含有する溶液を、マイクロスフェア形成に適する温度まで予め冷却してよい。予めの冷却は、冷蔵庫若しくは冷凍庫等の装置を用いて、又は吸熱反応によって実施することができる。例えば、化合物の予め冷却された水溶液は、マイクロスフェアの形成の前に又はこれと同時に、溶解が吸熱反応を介して進行する硫酸アンモニウム及びアセトニトリルを添加することによって形成することができる。
得られたマイクロ粒子の懸濁液は、さらに凝固点未満の温度まで冷却し、続いて、例えば、標準的な凍結乾燥器を用いた昇華により、揮発性成分（溶媒、貧溶媒、及び所望される場合は対イオン）を除去することで、乾燥粉末に変換することができる。
ある態様では、対イオンの添加は必要ではない。例えば、特定の条件下では、適切な溶媒による溶液中のある分子は、貧溶媒の存在下、対イオンを添加せずにマイクロ粒子を形成することができる。いかなる理論にも束縛されるものではないが、このような分子は、それ自身に対する、又は溶媒、貧溶媒等の得られたカクテル溶液中のその他の成分若しくはそれらの組み合わせに対する対イオンとして作用することができる可能性がある。そのような分子のいくつかが本明細書にて例示されており、ｓｉＲＮＡ、タバコモザイクウィルス、テトラサイクリン、カナマイシン、及びアンピシリン等である。従って、本明細書でさらに提供されるのは：
（ａ）溶媒中の化合物の溶液に貧溶媒を添加すること；及び、
（ｂ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、化合物のマイクロ粒子を含む組成物を形成させること、
によってマイクロ粒子を作製する方法であり、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
他の態様では、マイクロ粒子を、貧溶媒の非存在下にて形成することができる。従って、本明細書でさらに提供されるのは：（ａ）溶媒中の化合物の溶液に対イオンを添加すること；及び、（ｂ）この溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、化合物のマイクロ粒子を含む組成物を形成させること、によってマイクロ粒子を作製する方法であり、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる。
一つの態様では、化合物を対イオン及び貧溶媒と接触させることで形成され、低温に暴露されたマイクロスフェアを、沈殿又はろ過技術を含む方法によって懸濁液から分離する。元の析出混合物からの分離後、マイクロスフェアを洗浄してもよく、並びに／又は、化合物及び／若しくはマイクロスフェアの特性を向上及び／若しくは修飾するその他の物質と混合してもよい。
別の態様では、本明細書で提供される方法によって作製されたマイクロスフェアは、直接的な治療効果を持たないが、診断マーカー及び栄養補助薬を含む他の１若しくは複数の治療薬又は活性剤のマイクロ担体として作用する。追加の剤は、析出時に添加してもよく、又は形成されたマイクロスフェアの懸濁液に、凍結乾燥前に添加してもよい。別の選択肢として、追加の剤は、マイクロスフェアを含む乾燥粉末へ混合してもよい。
いかなる理論にも束縛されるものではないが、一つの局面では、本明細書で提供される方法では：（１）対イオンによる化合物の表面電荷の中和、及び（２）添加した貧溶媒及び少しずつの冷却の効果の組合せによって引き起こされる溶媒中の化合物の溶解性の低下、によりマイクロスフェアの形成が可能となる。
経験的に決定され、化合物、対イオン、及び貧溶媒に応じて、例えば、約１．０若しくは１．０乃至約１４．０若しくは１４．０の範囲、通常は、ｐＨ約２．０若しくは２．０乃至約１０．５若しくは１０．５又は１０．５超の範囲であってよい適切なｐＨを、適切な量の対イオンの存在下において選択することにより、化合物の表面上にあるかなりの数の帯電基を、ある態様ではすべての帯電基を中和させることができる。適切な貧溶媒の添加によって溶液の極性を低下させることにより、析出、相分離、コロイド形成、又はその他のこのような方法によるマイクロスフェアの形成を開始させることができる。
別の選択肢として、いかなる理論にも束縛されるものではないが、ある態様では、観察されるマイクロスフェアの析出現象は、低温下における化合物を含有する溶媒との相互作用による、対イオン及び貧溶媒のコスモトロピック（構造形成）効果によっても説明することができる。基礎となるメカニズムに関わらず、本明細書で提供される方法では、対象とする化合物を含む溶液へ（極性化合物に対して水性又は極性溶媒；水不溶性化合物に対しては非極性又は有機溶媒）、比較的少量の貧溶媒及び対イオンを添加し、得られたカクテル溶液を冷却することにより、化合物のマイクロスフェアを含む組成物が生成される。
一つの態様では、カクテル溶液の少しずつの冷却は、カクテル溶液を熱交換器に通過させることによって行うことができる。熱交換器の温度及び、熱交換器を通過するカクテル溶液の流速を調節して、カクテル溶液をマイクロスフェアの形成前に予め冷却するか、又はマイクロスフェアが形成される温度まで冷却することができる。
別の態様では、本明細書で提供される方法によって形成されたマイクロスフェアは、沈殿又はろ過の技術等の方法により、濃縮又は懸濁液からの分離が行われる。マイクロスフェアの形成時には、イオン強度、極性、ｐＨ、又は懸濁液のその他のパラメーターを調節することで、マイクロスフェアの成長（サイズ）を制御することができる。カクテル溶液の液相からのマイクロスフェアの分離は、遠心分離、ろ過（中空糸、タンジェンシャルフロー等）、又はその他の技術によって行うことができる。得られたマイクロスフェア又はその濃縮懸濁液は、凍結乾燥してもよく、又は風乾してもよい。
ある態様では、元の析出混合物から分離したマイクロスフェア若しくは乾燥したマイクロスフェアは、投与の前に治療薬若しくは担体として再構成してよく、又はマイクロスフェアの特性を修飾する剤を含む溶液中に懸濁してもよい。修飾剤としては、これらに限定されないが、バルキング剤、賦形剤、不活性成分、安定性促進剤、味及び／若しくは芳香の修飾剤又はマスキング剤、ビタミン、糖、治療薬、抗酸化剤、免疫調節薬、膜貫通輸送修飾薬、固化防止剤、腸溶コーティング剤、消化系の酸に対する耐性等の酸耐性を付与する剤、プロテアーゼ耐性を付与する剤、キトサン、ポリマー、及び流動性促進剤が挙げることができる。
本明細書で提供される方法によって作製されるマイクロスフェアの形成及び特性は：化合物の性質及び濃度、カクテル溶液のｐＨ、対イオンの性質及び濃度、貧溶媒の性質及び濃度、イオン強度、並びに少しずつの冷却を行う冷却速度、を含むパラメーターを変化させることにより経験的に決定することができる。本明細書で提供される方法の工程により、この方法は、マイクロスフェアの作製のための、化合物、貧溶媒、対イオン、ｐＨ、イオン強度、及び冷却勾配の適切な組合せを決定するための、マイクロプレートフォーマット等による高スループットスクリーニングに適したものとなる。
分子
１若しくは２種類以上の対イオン及び貧溶媒の存在下、溶液中でマイクロ粒子を形成することができるいかなる天然若しくは合成の分子又は化合物も、本明細書で提供される方法に使用されることを意図している。化合物は、無機化合物であってよく、アルカリ金属化合物及びアルカリ土類金属化合物、並びにその塩及びその他の誘導体、配位化合物並びにその塩及びその他の誘導体を含む遷移金属化合物、ポリシロキサン等の無機ポリマー、並びに、当業者に公知のその他のこのような化合物が含まれる。無機化合物の例としては、炭素を有するが一般に炭素‐炭素結合を有しないいくつかの化合物が挙げられ；例えば、一酸化炭素、二酸化炭素、炭酸塩、シアニド、シアネート、カーバイド、及びチオシアネートである。その他の無機化合物としては、周期律表の炭素を除く元素から形成される化合物が挙げられる。例えば、任意の金属の（例：アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属）炭酸塩、シアニド、シアネート、カーバイド、ハライド（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、チオシアネート、セレノシアネート、アジド、オキシド、ヒドロキシド、スルフィド、及びヒドロジド、配位化合物、有機金属化合物、並びに当業者であれば理解されるその他のこのような化合物である。
その他の種類の無機化合物が、物質科学を学んだ化学者によって研究、開発されており、例えば、シリコン及びガリウム砒素、イットリウムバリウム銅酸化物、シリコーン、ポリシラン、ポリゲルマン、ポリスタンナン、及びポリホスファゼン等のポリマー、等のポリマー性及び／又は耐火性物質である。
化合物は有機化合物であってよく、脂肪族、芳香族、及び脂環式アルコール、アルデヒド、カルボン酸、エステル、ケトン、エーテル、アミン、アミド、ラクタム、これらのポリマー、並びに当業者に公知のその他のこのような化合物が含まれる。、脂肪族、芳香族、又は脂環式であってよい有機化合物の例としては、以下のいずれか、及び当業者に公知であり理解される類似の種類の化合物であってよい：
「アルキル」とは、直鎖又は分岐鎖で、置換又は無置換の炭化水素基を意味し、一般に、約１乃至４０個の炭素原子、１乃至２０個の炭素原子、又は１乃至１０個の炭素原子を有する。「低級アルキル」とは、一般に、炭素原子が１乃至６個であるアルキル基のことである。アルキル基は、「飽和アルキル」であってよく、これは、アルケン基もアルキン基も含まないという意味であり、又はアルキル基は、「不飽和アルキル」であってもよく、これは、少なくとも１つのアルケン基又はアルキン基を含むという意味である。少なくとも１つの炭素−炭素二重結合（Ｃ＝Ｃ）を含むアルキル基は、「アルケニル」という用語で称され、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合（Ｃ≡Ｃ）を含むアルキル基は、「アルキニル」という用語で称され、特定の態様では、アルキニル基は任意に置換されている。アルキルには、これらに限定されないが、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ターシャリーブチル、ペンチル、ヘキシル、エテニル、プロペニル、ブテニル、ヘキセニル、エチニル、プロピニル、ブチニル、ヘキシニル、ハロアルキル、及びヘテロアルキルが含まれる。
「シクロアルキル」、すなわち、環を形成する各原子が炭素原子である飽和単環式又は多環式環系。シクロアルキルは、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個以上の炭素原子によって形成されていてよい。環系は一般に、約３乃至約１２個の炭素原子を含む。「シクロアルキル」という用語には、１若しくは２つ以上の不飽和結合を有する環、及び置換されている環も含まれる。シクロアルキルの例としては、これらに限定されないが、シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロペンタジエン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、１，３‐シクロヘキサジエン、１，４−シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、及びシクロヘプテンが挙げられる。
「ヘテロ環」化合物、これは、環を形成する原子の少なくとも１つが炭素原子であり、環を形成する原子の少なくとも１つがヘテロ原子である環である。
「二環式環」、これは、縮合した２つの環を意味する。二環式環としては、例えば、デカリン、ペンタレン、ナフタレン、アズレン、ヘプタレン、イソベンゾフラン、クロメン、インドリジン、イソインドール、インドール、プリン、インドリン、インデン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチリジジン（ｎａｐｈｔｈｙｒｉｄｉｄｉｎｅ）、キノキサリン、シンノリン、プテリジン、イソクロマン、クロマン、及びこれらの種々の水素化誘導体が挙げられる。二環式環は、任意に置換されていてよい。各環は、独立して、芳香環であっても非芳香環であってもよい。
「芳香族」化合物、フェニル、ナフタレニル、フェナントレニル、アントラセニル、テトラリニル、フルオレニル、インデニル、及びインダニル等である。芳香族化合物は、環形成炭素原子の１個を介して連結し、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、非芳香族へテロ環、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、アルキルアミド、アシル、Ｃ１−６アルコキシ、Ｃ１ー６アルキル、Ｃ１ー６ヒドロキシアルキル、Ｃ１ー６アミノアルキル、Ｃ１ー６アルキルアミノ、アルキルスルフェニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、スルファモイル、又はトリフルオロメチルから選択される１若しくは２個以上の置換基を任意に有するベンゼノイド基を含む。芳香族基は、パラ、メタ、及び／又はオルソ位の１若しくは２ヶ所以上で置換されていてよい。置換基を有する芳香族基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、３−ハロフェニル、４−ハロフェニル、３−ヒドロキシフェニル、４−ヒドロキシ−フェニル、３−アミノフェニル、４−アミノフェニル、３−メチルフェニル、４−メチルフェニル、３−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、４−トリフルオロメトキシフェニル、３−シアノ‐フェニル、４−シアノフェニル、ジメチルフェニル、ナフチル、ヒドロキシナフチル、ヒドロキシメチル−フェニル、（トリフルオロメチル）フェニル、アルコキシフェニル、４−モルホリン−４−イルフェニル、４−ピロリジン−１−イルフェニル、４−ピラゾリルフェニル、４−トリアゾリルフェニル、及び４−（２−オキソピロリジン−１−イル）フェニルが挙げられる。
「アリール」化合物、これは、環にヘテロ原子を持たない、単環式、二環式、又は三環式芳香族系である。アリールの例としては、フェニル、ナフチル、アントラシル、インダニル、１，２‐ジヒドロ‐ナフチル、１，４−ジヒドロナフチル、インデニル、１，４−ナフトキノニル（１，４−ｎａｐｈｔｈｏｑｕｉｎｏｎｙｌ）、及び１，２，３，４−テトラヒドロナフチルが挙げられる。
「ヘテロアリール」化合物、これは、芳香族環を形成する少なくとも１個の原子がヘテロ原子である芳香族環を意味する。そのような基としては、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、インドリル、ベンズイミダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ピロリル、フラニル（フリル）、チオフェニル（チエニル）、イミダゾリル、ピラゾリル、１，２，３‐トリアゾリル、１，２，４‐トリアゾリル、１，３‐オキサゾリル（オキサゾリル）、１，２‐オキサゾリル（イソオキサゾリル）、オキサジアゾリル、１，３‐チアゾリル（チアゾリル）、１，２‐チアゾリル（イソチアゾリル）、テトラゾリル、ピリジニル（ピリジル）、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、１，２，３‐トリアジニル、１，２，４‐トリアジニル、１，３，５‐トリアジニル、１，２，４，５‐テトラジニル、インダゾリル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンゾチアゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾジオキソリル、アクリジニル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、フタラジニル、チエノチオフェニル、１，８‐ナフチリジニル、その他のナフチリジニル、プテリジニル、又はフェノチアジニルが挙げられる。ヘテロアリール化合物は、二環式ラジカルの形態であってよく、及び／又は任意に置換されていてもよい。置換基の例としては、ハロ、ヒドロキシ、アミノ、シアノ、ニトロ、アルキルアミド、アシル、Ｃ１‐６‐アルコキシ、Ｃ１‐６‐アルキル、Ｃ１‐６‐ハロアルキル、Ｃ１‐６‐ヒドロキシアルキル、Ｃ１‐６‐アミノアルキル、Ｃ１‐６‐アルキルアミノ、アルキルスルフェニル、アルキルスルフィニル、アルキルスルホニル、スルファモイル、又はトリフルオロメチルが挙げられる。ヘテロアリール基の例としては、これらに限定されないが、フラン、ベンゾフラン、チオフェン、ベンゾチオフェン、ピロール、ピリジン、インドール、オキサゾール、ベンゾキサゾール、イソオキサゾール、ベンズイソオキサゾール、チアゾール、ベンゾチアゾール、イソチアゾール、イミダゾール、ベンズイミダゾール、ピラゾール、インダゾール、テトラゾール、キノリン、イソキノリン、ピリダジン、ピリミジン、プリン及びピラジン、フラザン、１，２，３‐オキサジアゾール、１，２，３‐チアジアゾール、１，２，４‐チアジアゾール、トリアゾール、ベンゾトリアゾール、プテリジン、フェノキサゾール、オキサジアゾール、ベンゾピラゾール、キノリジン、シンノリン、フタラジン、キナゾリン、及びキノキサリンの無置換、及び一置換又は二置換誘導体が挙げられる。置換基としては、例えば、ハロ、ヒドロキシ、シアノ、Ｏ‐Ｃ１‐６‐アルキル、Ｃ１‐６‐アルキル、ヒドロキシ‐Ｃ１‐６‐アルキル、及びアミノＣ１‐６‐アルキルであってよい。
「非芳香族へテロ環」、すなわち、環を形成する原子の１若しくは２個以上が、ヘテロ原子である非芳香族環である。非芳香族へテロ環式環は、３、４、５、６、７、８、９、又は１０個以上の原子によって形成されていてよい。非芳香族へテロ環は、任意に置換されていてよい。非芳香族へテロ環の例としては、これらに限定されないが、ラクタム、ラクトン、環状イミド、環状チオイミド、環状カルバメート、テトラヒドロチオピラン、４Ｈ‐ピラン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、１，３‐ジオキシン、１，３‐ジオキサン、１，４‐ジオキシン、１，４‐ジオキサン、ピペラジン、１，３‐オキサチアン、１，４‐オキサチイン、１，４‐オキサチアン、テトラヒドロ‐１，４‐チアジン、２Ｈ‐１，２‐オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、バルビツル酸、チオバルビツル酸、ジオキソピペラジン、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、モルホリン、トリオキサン、ヘキサヒドロ‐１，３，５‐トリアジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、ピロリン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリジオン、ピラゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、１，３‐ジオキソール、１，３‐ジオキソラン、１，３‐ジチオール、１，３‐ジチオラン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、オキサゾリジノン、チアゾリン、チアゾリジン、及び１，３‐オキサチオランが挙げられる。
「アリールアルキル」化合物は、任意に置換されていてもよいアリールで置換されたアルキルを意味する。
「ヘテロアリールアルキル」化合物は、任意に置換されていてもよいヘテロアリールで置換されたアルキルである。
有機化合物上の置換基は：‐ＮＨ２基を含む化合物を意味する「アミノ」化合物；‐ＯＨ基を意味する「ヒドロキシ」；‐ＮＯ２基を意味する「ニトロ」；式ＲＣ（＝Ｏ）Ｏ‐の基を意味する「Ｏカルボキシ」；式Ｃ（＝Ｏ）ＯＲの基を意味する「Ｃカルボキシ」；式‐ＯＲの基を意味する「アルコキシ」；式Ｃ（＝Ｏ）ＣＨ３の基を意味する「アセチル」若しくは「アシル」；式ＣＮの基を意味する「シアノ」；ＲＣ≡Ｎの構造を有する化合物を意味する「ニトリル」；式ＮＣＯの基を意味する「イソシアネート」；式ＣＮＳの基を意味する「チオシアネート」；式ＮＣＳの基を意味する「イソチオシアネート」；式Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２の基を意味する「Ｃアミド」；式ＲＣ（＝Ｏ）ＮＲ’の基を意味する「Ｎアミド」；式‐ＳＲの基を意味する「スルフェニル」；式‐Ｓ（＝Ｏ）Ｒの基を意味する「スルフィニル」；式‐Ｓ（＝Ｏ）２Ｒの基を意味する「スルホニル」；式‐Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ２の基を意味する「スルファモイル」；式Ｘ‐Ｓ（＝Ｏ）２Ｒの化合物であって、ここでＸがハロである化合物を意味する「スルホニルハライド」；式ＲＣ（＝Ｏ）ＯＲ’の基であって、ここでＲ’≠Ｈである基を意味する「エステル」；式ＲＣ（＝Ｏ）ＮＲ’２の基を意味する「アミド」、を含むいくつかの基のうちの１つであってよい。
高分子及び低分子
本明細書で提供される方法に従うマイクロ粒子の形成に用いられる化合物は、高分子であっても、又は低分子であってもよい。「高分子」という用語は、当業者であれば理解され、一般に、分子量が、約１０００ダルトンを超えるか若しくはこれと等しい数のダルトンから約１兆若しくは１兆ダルトン超、約２兆若しくは２兆ダルトン超、約３兆若しくは３兆ダルトン超、約５兆若しくは５兆ダルトン超、約７兆若しくは７兆ダルトン超、約１０兆若しくは１０兆ダルトン超、又はこれを超える数のダルトンまで、約１０００若しくは１０００から約５０億若しくは５０億まで、約１０００若しくは１０００から約１０億若しくは１０億まで、約１０００若しくは１０００から約５０００万若しくは５０００万まで、約１０００若しくは１０００から約２０００万若しくは２０００万まで、約１０００若しくは１０００から約１５００万若しくは１５００万まで、約１０００若しくは１０００から約１０００万若しくは１０００万まで、約１０００若しくは１０００から約５００万若しくは５００万まで、約１０００若しくは１０００から約１００万若しくは１００万まで、約１０００若しくは１０００から約５００，０００若しくは５００，０００まで、約１０００若しくは１０００から約３００，０００若しくは３００，０００まで、約１０００若しくは１０００から約２００，０００若しくは２００，０００まで、約１０００若しくは１０００から約１００，０００若しくは１００，０００まで、約１０００若しくは１０００から約５０，０００若しくは５０，０００まで、約１０００若しくは１０００から約２５，０００若しくは２５，０００まで、約１０００若しくは１０００から約１５，０００若しくは１５，０００まで、約１０００若しくは１０００から約１０，０００若しくは１０，０００まで、約１０００若しくは１０００から約５，０００若しくは５，０００まで、約１０００若しくは１０００から約３，０００若しくは３，０００まで、又は、約１０００若しくは１０００から約２，０００若しくは２，０００ダルトンまで、である天然若しくは化学合成された有機又は無機分子を意味する。高分子の例としては、タンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、及びリボザイムを含む核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ホルモン、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物が挙げられる。
「低分子」という用語は、本明細書において、当業者であれば理解される意味で用いられ、一般に、分子量が、約１０００ダルトン未満、約１０００若しくは１０００ダルトン乃至約９５０若しくは９５０、約９００若しくは９００、約８５０若しくは８５０、約８００若しくは８００、約７５０若しくは７５０、約７００若しくは７００、約６５０若しくは６５０、約６００若しくは６００、約５５０若しくは５５０、約５００若しくは５００、約４５０若しくは４５０、約４００若しくは４００、約３７５若しくは３７５、約３５０若しくは３５０、約３２５若しくは３２５、約３００若しくは３００、約２７５若しくは２７５、約２５０若しくは２５０、約２２５若しくは２２５、約２００若しくは２００、約１７５若しくは１７５、約１５０若しくは１５０、約１２５若しくは１２５、約１００若しくは１００、約７５若しくは７５、約７０若しくは７０、約６５若しくは６５、約６０若しくは６０、約５５若しくは５５、約５０若しくは５０、約４５若しくは４５、約４０若しくは４０、約３５若しくは３５、約３０若しくは３０、約２５若しくは２５、約２０若しくは２０、約１５若しくは１５、約１０若しくは１０、約５若しくは５ダルトン、又はこれ未満、である天然若しくは化学合成された有機又は無機分子を意味する。低分子は、タンパク質又は核酸等の高分子ではなく、ウィルス等の高分子集合体でもないいかなる分子をも意味するものと理解される。本明細書で用いる「低分子」は、ジペプチド又はジヌクレオチド等の２若しくは３個以上のモノマーサブユニットを有する分子を含むことができ、一般に、分子量が約１０００ダルトン若しくは１０００ダルトン又はそれ未満である分子を意味するものと理解される。低分子の例としては、これらに限定されないが、一酸化炭素、二酸化炭素、金属（例：アルカリ金属、アルカリ土類金属、遷移金属）炭酸塩、シアニド、シアネート、カーバイド、ハライド、チオシアネート、オキシド、ヒドロキシド、スルフィド、及びヒドロジド、コバルト塩［Ｃｏ（ＮＨ３）６］Ｃｌ３を例とする配位化合物、並びにＦｅ（Ｃ５Ｈ５）２を例とする有機金属化合物等の無機分子が挙げられるが、これらに限定されない。有機化合物である低分子としては、例えば、ヌクレオチド、アミノ酸、フルテレン及びトリアムテレン等のプテリジン；アセフィリン、７‐モルホリノメチルテオフィリン、パマブロム、プロテオブロミン、及びテオブロミン等のプリン；コレステロール及びラノステロール等のステロール、エストロゲン、テストステロン、カンレノン、オレアンドリン、及びスピロノラクトン等のステロイド；ペニシリン、テトラサイクリン、アセタゾラミド、アンブシド、アゾセミド、ブメタニド、ブタゾールアミド、ジフェニルメタン‐４，４’‐ジスルホンアミド、ジスルファミド、フロセミド等のスルホンアミド誘導体、アミノメトラジン及びアミソメトラジン等のウラシル等、並びにプロスタグランジン、が挙げられる。
高分子及び低分子は、さらに、上記で述べたように無機化合物若しくは有機化合物、又はこれらの組み合わせであってよい。さらに、高分子及び低分子は、治療薬、診断薬、栄養補助薬、及びその他の活性剤等、種々の機能的用途を有していてよい。本明細書で提供される方法に従ってマイクロ粒子へ製剤することができる高分子及び低分子の剤は、例えば、抗生物質、化学療法薬、ワクチン、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、コレステロール低下薬、診断マーカー、及びハーブ系補助薬（ｈｅｒｂａｌ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）を含む栄養補助薬が挙げられる。
高分子及び低分子の剤は、さらに、これらに限定されないが、末梢神経、アドレナリン受容体、コリン受容体、神経系、骨格筋、心血管系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、神経効果器接合部位、内分泌系、ホルモン系、免疫系、生殖器系、骨格系、オータコイド系、消化及び排泄系、ヒスタミン系等に対して作用する薬剤を含む無機及び有機薬剤から選択することができる。本明細書で提供される組成物を用いて送達可能な活性剤としては、これらに限定されないが、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬、ワクチン、経膣薬、ビタミン、ミネラル、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、及び多糖が挙げられる。
本明細書で提供される方法に従ってのマイクロ粒子の形成に用いることができる高分子又は低分子である代表的な剤としては、以下のものが挙げられる：
高分子及び低分子の代表的な活性剤のカテゴリー
アドラフィニル、アドレノロン（Ａｄｒｅｎｏｌｏｎｅ）、アミデフリン（Ａｍｉｄｅｐｈｒｉｎｅ）、アプラクロニジン、ブドララジン、クロニジン、シクロペンタミン、デトミジン、ジメトフリン、ジピベフリン、エフェドリン、エピネフリン、フェノキサゾリン、グアナベンズ、グアンファシン、ヒドロキシアンフェタミン、イボパミン、インダナゾリン、イソメテプテン、メフェンテルミン、メタラミノール、メトキサミン塩酸塩、メチルヘキサンアミン、メチゾレン（Ｍｅｔｉｚｏｌｅｎｅ）、ミドドリン、ナファゾリン、ノルエピネフリン、ノルフェネフリン、オクトドリン（Ｏｃｔｏｄｒｉｎｅ）、オクトパミン、オキシメタゾリン、フェニレフリン塩酸塩、フェニルプロパノールアミン塩酸塩、フェニルプロピルメチルアミン、フォレドリン、プロピルヘキセドリン、シュードエフェドリン、リルメニジン、シネフリン、テトラヒドロゾリン、チアメニジン、トラマゾリン、ツアミノヘプタン、チマゾリン、チラミン、及びキシロメタゾリン等のα‐アドレナリンアゴニスト；
アルブテロール、バンブテロール、ビトルテロール、カルブテロール、クレンブテロール、クロルプレナリン、デノパミン、ジオキセテドリン（Ｄｉｏｘｅｔｈｅｄｒｉｎｅ）、ドペキサミン、エフェドリン、エピネフリン、エタフェドリン、エチルノルエピネフリン、フェノテロール、ホルモテロール、ヘキソプレナリン、イボパミン、イソエタリン、イソプロテレナール（Ｉｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎａｌ）、マブテロール、メタプロテレノール、メトキシフェナミン、オキシフェドリン、ピルブテロール、プレナルテロール、プロカテロール、プロトキロール、レプロテロール、リミテロール、リトドリン、ソテレノール、テルブテロール（Ｔｅｒｂｕｔｅｒｏｌ）、及びキサモテロール等のβ‐アドレナリンアゴニスト；
アモスラロール、アロチノロール、ダピプラゾール、ドクサゾシン、エルゴロイドメシレート、フェンスピリド、インドラミン、ラベタロール、ニセルゴリン、プラゾシン、テラゾシン、トラゾリン、トリマゾシン、及びヨヒンビン等のα‐アドレナリン遮断薬；
アセブトロール、アルプレノロール、アモスラロール、アロチノロール、アテノロール、ベフノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブクモロール、ベフェトロール（Ｂｅｆｅｔｏｌｏｌ）、ブフラロール、ブニトロロール、ブプラノロール、ブチドリン塩酸塩、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、セタモロール、クロラノロール、ジレバロール、エパノロール、エスモロール、インデノロール、ラベタロール、レボブノロール、メピンドロール、メチプラナロール（Ｍｅｔｉｐｒａｎａｌｏｌ）、メトプロロール、モプロロール、ナドキソロール、ニフェナロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プラクトロール、プロネタロール、プロプラノロール、ソタロール、スルフィナロール、タリノロール、テルタトロール、チモロール、トリプロロール、及びキシベノロール等のβ‐アドレナリン遮断薬；
クエン酸添加カルシウムシアナミド（Ｃａｌｃｉｕｍ Ｃｙａｎａｍｉｄｅ Ｃｉｔｒａｔｅｄ）、ジスルフィラム、ナダイド、及びニトレファゾール等の嫌酒薬；
エパルレスタット、ポナルレスタット、ソルビニル、及びトルレスタット等のアルドースレダクターゼ阻害剤；
アンドロイソキサゾール、アンドロステンジオール、ボランジオール、ボラステロン、クロステボール、エチルエストレノール；ホルミルジエノロン、４‐ヒドロキシ‐１９‐ノルテストステロン、メタンドリオール、メテノロン、メチルトリエノロン、ナンドロロン、デカン酸ナンドロロン、ｐ‐ヒドロキシフェニルプロピオン酸ナンドロロン、フェンプロピオン酸ナンドロロン、ノルボレトン、オキシメステロン、ピゾチリン、キンボロン、ステンボロン、及びトレンボロン等のタンパク質同化薬；
クロロブタノール、クローブ、及びオイゲノール等の鎮痛薬（歯科用）；
アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジルモルフィン、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、コデインメチルブロミド、リン酸コデイン、硫酸コデイン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジヒドロコデイノンエノールアセテート、ジヒドロモルヒネ、ジメノキサドール、ジメフェプタノール、ジメチルチアムブテン、酪酸ジオキサフェチル、ジピパノン、エプタゾシン、エトヘプタジン、エチルメチルチアムブテン、エチルモルヒネ、エトニタゼン、フェンタニル、ヒドロコドン、酒石酸水素ヒドロコドン、ヒドロモルホン、ヒドロキシペチジン、イソメタドン、ケトベミドン、レボルファノール、ロフェンタニル、メペリジン、メプタジノール、メタゾシン、メサドン塩酸塩、メトポン、モルヒネ、モルヒネ誘導体、ミロフィン（Ｍｙｒｏｐｈｉｎｅ）、ナルブフィン、ナルセイン、ニコモルヒネ、ノルレボルファノール、ノルメタドン、ノルモルヒネ、ノルピパノン、アヘン、オキシコドン、オキシモルホン、パパベレタム、ペンタゾシン、フェナドキソン、フェナゾシン、フェオペリジン（Ｐｈｅｏｐｅｒｉｄｉｎｅ）、ピミノジン、ピリトラミド、プロヘプタジン、プロメドール、プロペリジン、プロピラム、プロポキシフェン、スフェンタニル、及びチリジン等の鎮痛薬（麻酔性）；
アセトアミノフェン、アセトアミノサロール、アセトアニリド、アセチルサリチルサリチル酸、アルクロフェナク、アルミノプロフェン、アロキシプリン、アルミニウムビス（アセチルサリチル酸）、アミノクロルテノキサジン、２‐アミノ‐４‐ピコリン、アミノプロピロン、アミノピリン、サリチル酸アンモニウム、アンチピリン、サリチル酸アンチピリン、アントラフェニン、アバゾン、アスピリン、ベノリレート、ベノキサプロフェン、ベンズピペリロン、ベンジダミン、ｐ‐ブロモアセトアニリド、５‐ブロモサリチル酸アセテート、ブセチン、ブフェキサマク、ブマジゾン、ブタセチン、アセチルサリチル酸カルシウム、カルバマゼピン、カルベチジン、カルビフェン、カルサラム、クロラルアンチピリン（Ｃｈｌｏｒａｌａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ）、クロルテノキサジン、サリチル酸コリン、シンコフェン、シラマドール、クロメタシン、クロプロパミド、クロテタミド、デキソキサドロール、ジフェナミゾール、ジフルニサル、アセチルサリチル酸ジヒドロキシアルミニウム、ジピロセチル、ジピロン、エモルファゾン、エンフェナム酸、エピリゾール、エテルサレート（Ｅｔｅｒｓａｌａｔｅ）、エテンザミド、エトキサゼン、エトドラク、フェルビナク、フェノプロフェン、フロクタフェニン、フルフェナム酸、フルオレソン、フルピルチン、フルプロクアゾン、フルルビプロフェン、フォスフォサル、ゲンチジン酸、グラフェニン、イブフェナック、サリチル酸イミダゾール、インドメタシン、インドプロフェン、イソフェゾラク、イソラドール（Ｉｓｏｌａｄｏｌ）、イソニキシン、ケトプロフェン、ケトロラック、ｐ‐ラクトフェネチド、レフェタミン、ロキソプロフェン、アセチルサリチル酸リジン、アセチルサリチル酸マグネシウム、メトトリメプラジン、メトフォリン、ミロプロフェン、モラゾン、サリチル酸モルホリン、ナプロキセン、ネホパム、ニフェナゾン、５’ニトロ‐２’プロポキシアセトアニリド、パルサルミド、ペリソキサール、フェナセチン、フェナゾピリジン塩酸塩、フェノコール、フェノピラゾン、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、フェニラミドール、ピペブゾン、ピペリロン、プロジリジン、プロパセタモール、プロピフェナゾン、プロキサゾール、サリチル酸キニーネ、ラミフェナゾン、メチル硫酸リマゾリウム（Ｒｉｍａｚｏｌｉｕｍ Ｍｅｔｉｌｓｕｌｆａｔｅ）、サラセタミド、サリシン、サリチルアミド、サリチルアミドＯ‐酢酸（Ｓａｌｉｃｙｌａｍｉｄｅ Ｏ‐Ａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ）、サリチル硫酸、サルサルテ（Ｓａｌｓａｌｔｅ）、サルベリン、シメトリド、サリチル酸ナトリウム、スルファミピリン、スプロフェン、タルニフルメート、テノキシカム、テロフェナメート、テトラドリン（Ｔｅｔｒａｄｒｉｎｅ）、チノリジン、トルフェナム酸、トルプロニン、トラマドール、ビミノール、キセンブシン、及びゾメピラック等の鎮痛剤（非麻酔性）；
アンドロステロン、ボルデノン、デヒドロエピアンドロステロン、フルオキシメステロン、メスタノロン、メステロロン、メタアンドロステノロン、１７‐メチルテストステロン、１７α‐メチルテストステロン３‐シクロペンチルエノールエーテル、ノルエタンドロロン、ノルメタンドロン、オキサンドロロン、オキシメステロン、オキシメトロン、プラステロン、スタンロロン、スタノゾロール、テストステロン、テストステロン１７‐クロラールへミアセタール、テストステロン１７β‐シピオネート（Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ １７β‐Ｃｙｐｉｏｎａｔｅ）、エナント酸テストステロン、ニコチン酸テストステロン、フェニル酢酸テストステロン、プロピオン酸テストステロン、及びチオメステロン等のアンドロゲン；
アセトアミドオイゲノール（Ａｃｅｔａｍｉｄｏｅｕｇｅｎｏｌ）、アルファドロン酢酸、アルファキサロン、アムカイン（Ａｍｕｃａｉｎｅ）、アモラノン、アミロカイン塩酸塩、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタベン（Ｂｕｔａｂｅｎ）、ブタニリカイン、ブレタミン（Ｂｕｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、ブタリタールナトリウム、ブトキシカイン、カルチカイン、２‐クロロプロカイン塩酸塩、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン塩酸塩、ジメチソキン、ジメトカイン、ジぺラドン塩酸塩、ジクロニン、エクゴニジン、エクゴニン、アミノ安息香酸エチル、塩化エチル、エチドカイン、エトキサドロール、β‐オイカイン、オイプロシン、フェナルコミン、フォモカイン、ヘキソバルビタール、ヘキシルカイン塩酸塩、ヒドロキシジオンナトリウム、ヒドロキシプロカイン、ヒドロキシテトラカイン、ｐ‐アミノ安息香酸イソブチル、ケンタミン、ロイシノカインメシレート、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン塩酸塩、メタブトキシカイン塩酸塩、メトヘキシタールナトリウム、塩化メチル、ミダゾラム、ミルテカイン、ネーパイン、オクタカイン、オルトカイン、オキセサゼイン、パレトキシカイン、フェナカイン塩酸塩、フェンシクリジン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパニジド、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポフォール、プロボキシカイン塩酸塩、プソイドコカイン、ピロカイン、キニーネ尿素塩酸塩（Ｑｕｉｎｉｎｅ Ｕｒｅａ Ｈｙｄｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、リソカイン、サリチルアルコール、テトラカイン塩酸塩、チアルバルビタール、チミラール（Ｔｈｉｍｙｌａｌ）、チオブタバルビタール、チオペンタールナトリウム、トリカイン、トリメカイン、及びゾラミン等の麻酔薬；
アミノレックス、アンフェクロラール、アンフェタミン、ベンズアフェタミン（Ｂｅｎｚａｐｈｅｔａｍｉｎｅ）、クロルフェンテルミン、クロベンゾレックス、クロフォレックス（Ｃｌｏｆｏｒｅｘ）、クロルテルミン、シクルエキセドリン、硫酸デストロアンフェタミン、ジエチルプロピオン、ジフェメトキシジン、Ｎ‐エチルアンフェタミン、フェンブトラゼート、フェンフルラミン、フェンプロポレクス、フルフリルメチルアンフェタミン、レボファセトペレート（Ｌｅｖｏｐｈａｃｅｔｏｐｅｒａｔｅ）、マジンドール、メフェノレックス、メタンフェプロアモン（Ｍｅｔａｍｆｅｐｒｏａｍｏｎｅ）、メタンフェタミン、ノルプソイドエフェドリン、フェンジメトラジン、酒石酸フェンジメトラジン、フェンメトラジン、フェンペンテルミン、フェニルプロパノールアミン塩酸塩、及びピシロレックス等の食欲抑制薬；
アレコリン、アスピジン、アスピジノール、ジクロロフェン、エンベリン、コシン、ナフタレン、ニクロサミド、ペレルチエリン（Ｐｅｌｌｅｒｔｉｅｒｉｎｅ）、タンニン酸ペレルチエリン（Ｐｅｌｌｅｒｔｉｅｒｉｎｅ Ｔａｎｎａｔｅ）、及びキナクリン等の駆虫薬（条虫）；
アラントラクトン、アモスカナート、アスカリドール、ベフェニウム、ビトスカナート、四塩化炭素、カルバクロール、シクロベンダゾール、ジエチルカルバマジン、ジフェナン、ヨウ化ジチアザニン、ジマンチン、ゲンチアンバイオレット、４‐ヘキシルレゾルシノール、カイニン酸、メベンダゾール、２‐ナフトール、オキサンテル、パパイン、ピペラジン、アジピン酸ピペラジン、クエン酸ピペラジン、エデト酸ピペラジンカルシウム、酒石酸ピペラジン、ピランテル、パモ酸ピルビニウム、α‐サントニン、ヨウ化スチルバジウム、テトラクロロエチレン、テトラミソール、チアベンダゾール、チモール、チミルＮ‐イソアミルカルバメート、トリクロフェノールピペラジン、及びウレアスチバミン（Ｕｒｅａ Ｓｔｉｂａｍｉｎｅ）等の駆虫薬（線虫）；
イベルメクチン及びスラミンナトリウム等の駆虫薬（回旋糸状虫）；
アモスカナート、アンホタリド、酒石酸アンチモンカリウム、グルコン酸アンチモンナトリウム、酒石酸アンチモンナトリウム、チオグリコール酸アンチモンナトリウム（Ａｎｔｉｍｏｎｙ Ｓｏｄｉｕｍ Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ）、アンチモンチオグリコールアミド（Ａｎｔｉｍｏｎｙ Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｍｉｄｅ）、ベカントン、ヒカントン、ルカントン塩酸塩、ニリダゾール、オキサムニキン、プラジカンテル、スチボカプテート、スチボフェン、及びウレアスチバミン等の駆虫薬（住血吸虫）；
アンチオリミン及びテトラクロロエチレン等の駆虫薬（吸虫）；
アダペレン（Ａｄａｐｅｌｅｎｅ）、アルゲストンアセトフェニド、アゼライン酸、過酸化ベンゾイル、シオクトール、シプロテロン、モトレチニド、レゾルシノール、レチノイン酸、テトロキノン、及びトレチノニン（Ｔｒｅｔｉｎｏｎｉｎｅ）等の抗挫瘡薬（Ａｎｔｉａｃｎｅ ｄｒｕｇｓ）；
アンレキサノクス、アステミゾール、アゼラスチン、クロモリン、フェンピプラン、ヒスタミン、イブジラスト、ネドクロミル、オキサトミド、ペンチゲチド、ツタウルシ抽出物、有毒オーク抽出物、ドクウルシ抽出物、レピリナスト、トラニラスト、トラザノックス、及びウルシオール等の抗アレルギー薬；
アルスチノール、ビアラミコール、カルバルソン、セファエリン、クロルベタミド、クロロキン、クロルフェノキサミド、クロルテトラサイクリン、デヒドロエメチン、ジブロモプロパミジン、ジロキサニド、デフェタルソン（Ｄｅｐｈｅｔａｒｓｏｎｅ）、エメチン、フマギリン、グラウカルビン、グリコビアルソル、８‐ヒドロキシ‐７‐ヨード‐５‐キノリンスルホン酸、ロドクロルヒドロキシキン（ｌｏｄｏｃｈｌｏｒｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎ）、ロドキノール（ｌｏｄｏｑｕｉｎｏｌ）、パロモマイシン、ファンキノン、フェアルソンスルホキシレート（Ｐｈｅａｒｓｏｎｅ Ｓｕｌｆｏｘｙｌａｔｅ）、ポリベンザルソル（Ｐｏｌｙｂｅｎｚａｒｓｏｌ）、プロパミジン、キンファミド、セクニダゾール、スルファルシド、テクロザン、テトラサイクリン、チオカルバミジン、チオカルバルソン、及びチニダゾール等の抗アメーバ薬；
ビフルラノール、シオクトール、シプロテロン、デルマジノンアセテート、フルチミド、ニルタミド、及びオキセンドロン等の抗アンドロゲン薬；
アセブトロール、アルプレノロール、アミオダロン、アムロジピン、アロチノロール、アテノロール、ベプリジル、ベバントロール、ブクモロール、ブフェトロール、ブフラロール、ブニトロロール、ブプラノロール、カロゾロール（Ｃａｒｏｚｏｌｏｌ）、カルテオロール、カルベジロール、セリプロロール、マレイン酸シネパゼド、ジルチアゼム、エパノロール、フェロジピン、ガロパミル、イモラミン、インデノロール、イソソルビド二硝酸塩、イスラジピン、リマプロスト、メピンドロール、メトプロロール、モルシドミン、ナドロール、ニカルジビン、ニフェジピン、ニフェナロール、ニルバジピン、ニプラジロール、ニソルジピン、ニトログリセリン、オクスプレノロール、オキシフェドリン、オザグレル、ペンブトロール、ペンタエリスリトール四硝酸塩、ピンドロール、プロネタロール、プロプラノロール、ソタロール、テロジリン、チモロール、トリプロロール、及びベラパミル等の抗狭心症薬；
アセブトール、アセカイン（Ａｃｅｃａｉｎｅ）、アデノシン、アジマリン、アルプレノロール、アミオダロン、アモプロキサン、アプリンジン、アロチノロール、アテノロール、ベバントロール、ブレチリウムトシレート、ブブモロール（Ｂｕｂｕｍｏｌｏｌ）、ブフェトロール、ブナフチン、ブニトロロール、ブプラノロール、ブチドリン塩酸塩、ブトベンジン、カポベン酸、カラゾロール、カルテオロール、シフェンリン、クロラノロール、ジソピラミド、エンカイニド、エスモロール、フレカイニド、ガロパミル、ヒドロキニジン、インデカイニド、インデノロール、イプラトロピウムブロミド、リドカイン、ロラジミン、ロルカイニド、メオベンチン、メチプラノロール、メキシレチン、モリシジン、ナドキソロール、ニフェナロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、ピルメノール、プラクトール、プラジュマリン、プロカインアミド塩酸塩、プロネタロール、プロパフェノン、プロプラノロール、ピリノリン、硫酸キニジン、キニジン、ソタロール、タリノロール、チモロール、トカイニド、ベラパミル、ビキジル、及びキシベノロール等の抗不整脈薬；
ピリジノールカルバメート等の抗動脈硬化剤；
アロクプレイドナトリウム、オーラノフィン、アウロチオグルコース、アウロチオグリカニド、アザチオプリン、３‐アウロチオ‐２‐プロパノール‐１‐スルホン酸カルシウム、セレコシキブ、クロロキン、クロブザリト、クプロキソリン（Ｃｕｐｒｏｘｏｌｉｎｅ）、ジアセレイン、グルコサミン、金チオリンゴ酸ナトリウム、金チオ硫酸ナトリウム、ヒドロキシクロロキン、ケブゾン、ロベンザリット、メリチン、メトトレキサート、ミオラル（Ｍｙｏｒａｌ）、及びペニシラミン等の抗関節炎薬／抗リウマチ薬；
以下を含む抗菌薬（抗生物質）：アミカシン、アプラマイシン、アルベカシン、バンベリマイシン、ブチロシン、ジベカシン、ジヒドロストレプトマイシン（Ｄｉｈｄｒｏｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）、ホルチミシン、ゲンタマイシン、イスパミシン（Ｉｓｐａｍｉｃｉｎ）、カナマイシン、ミクロノマイシン、ネオマイシン、ネオマイシンウンデシレネート、ネチルマイシン、パロモマイシン、リボスタマイシン、シソマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、ストレプトニコジド、バンコマイシン（糖ペプチドとも見なされる）、及びトブラマイシン等のアミノグリコシド；
アジダムフェニコール、クロラムフェニコール、パルミチン酸クロラムフェニコール、パントテン酸クロラムフェニコール、フロルフェニコール、及びチアンフェニコール等のアンフェニコール；
リファミド、リファンピン、リファマイシン、及びリファキシミン等のアンサマイシン；
以下を含むβ‐ラクタム：イミペネム等のカルバペネム；
セファクトール（Ｃｅｆａｃｔｏｒ）、セファドロキシル、セファマンドール、セファトリジン、セファゼドン、セファゾリン、セフィキシム、セフメノキシム、セフォジジム、セフォニシド、セフォペラゾン、セフォラニド、セフォタキシム、セフォチアム、セフピミゾール、セフピリミド（Ｃｅｆｐｉｒｉｍｉｄｅ）、セフポドキシムプロキセチル、セフロキサジン、セフスロジン、セフタジジム、セフテラム、セフテゾール、セフチブテン、セフチゾキシム、セフトリアキソン、セフロキシム、セフゾナム、セファセトリルナトリウム、セファレキシン、セファログリシン、セファロリジン、セファロスポリン、セファロチン、セファピリンナトリウム、セフラジン、及びピブセファレキシン（Ｐｉｖｃｅｆａｌｅｘｉｎ）等のセファロスポリン；
セフブペラゾン、セフメタゾール、セフミノクス、セファタン（Ｃｅｆｅｔａｎ）、及びセフォキシチン等のセファマイシン；
アズトレオナム、カルモナム、及びチゲモナム等のモノバクタム；
フルモキセフ及びモキソラクタム（Ｍｏｘｏｌａｃｔａｍ）等のオキサセフェム；
アミジノシリン、アムジノシリンピボキシル、アモキシシリン、アンピシラン、アパルシリン、アスポキシシリン、アジドシラン、アズロシラン（Ａｚｌｏｃｉｌｌａｎ）、バカンピシリン、ベンジルペニシリン酸、ベンジルペニシリンナトリウム、カルベニシリン、カルフェシリンナトリウム、カリンダシリン、クロメトシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロキサシリン、ジフェニシリンナトリウム（Ｄｉｐｈｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ）、エピシリン、フェンベニシリン、フロキシシリン、ヘタシリン、レナンピシリン、メタンピシリン、メチシリンナトリウム、メズロシリン、ナフシリンナトリウム、オキサシリン、ペナンピシリン、ペネタメートヒドリオジド（Ｐｅｎｅｔｈａｍａｔｅ Ｈｙｄｒｉｏｄｉｄｅ）、ペニシリンＧベネタミン、ペニシリンＧベンザチン、ペニシリンＧベンズヒドリルアミン、ペニシリンＧカルシウム、ペニシリンＧヒドラバミン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ Ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、ペニシリンＧカリウム、ペニシリンＧプロカイン、ペニシリンＮ（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｅｎ Ｎ）、ペニシリンＯ、ペニシリンＶ、ペニシリンＶベンザチン、ペニシリンＶヒドラバミン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｖ Ｈｙｄｒａｂａｍｉｎｅ）、ペニメピサイクリン、フェネチシリンカリウム、ピペラシリン、ピバピシリン（Ｐｉｖａｐｉｃｉｌｌｉｎ）、プロピシリン、キナシリン、スルベニシリン、タランピシリン、テモシリン、及びチカルシリン等のペニシリン；
クリンダマイシン及びリンコマイシン等のリンコサミド；
アジスロイマイシン（Ａｚｉｔｈｒｏｉｍｙｃｉｎ）、カルボマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、エリスロマイシンアシストレート、エリスロマイシンエストレート、グリコヘプトン酸エリスロマイシン、ラクトビオン酸エリスロマイシン、プロピオン酸エリスロマイシン、ステアリン酸エリスロマイシン、ジョサマイシン、ロイコマイシン、ミデカマイシン、ミオカマイシン、オレアンドマイシン、プリマイシン、ロキタマイシン、ロサラミシン、ロキシスロマイシン、スピラマイシン、及びトロレアンドマイシン等のマクロライド；
アンホマイシン、バシトラシン、カプレオマイシン、コリスチン、エンデュラシジン、エンビオマイシン、フサファンギン、グラミシジン、グラミシジンＳ、ミカマイシン、ポリミキシン、ポリミキシンＢ‐メタンスルホン酸、プリスチナマイシン、リストセチン、テイコプラニン、チオストレプトン、ツベルアクチノマイシン、チロシジン、チロスリシン、バンコマイシン、バイオマイシン、パントテン酸バイオマイシン、ヴァージニアマイシン、及び亜鉛バシトラシン等のポリペプチド；
アピサイクリン、クロルテトラサイクリン、クロモサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、グアメサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、ペニメピサイクリン、ピパサイクリン、ロリテトラサイクリン、サンサイクリン、セノサイクリン（Ｓｅｎｏｃｉｃｌｉｎ）、及びテトラサイクリン等のテトラサイクリン；並びに、
サイクロセリン、ムピロシン、及びツベリン等のその他の抗生物質；
以下を含む抗菌薬（合成）：ブロジモプリム、テトロキソプリム、及びトリメトプリム等の２，４‐ジアミノピリミジン；
フラルタドン、フラゾリウムクロリド、ニフラデン、ニフラテル、ニフルホリン、ニフルピリノール、ニフルプラジン、ニフルトイノール、及びニトロフラントイン等のニトロフラン；
アミフロキサシン、シノキサシン、シプロフロキサシン、ジフロキサシン、エノキサシン、フレロキサシン、フルメキン、ロメフロキサシン、ミロキサシン、ナリジクス酸、ノルフロキサシン、オフロキサシン、オキソリン酸、ペフロキサシン、ピペミド酸、ピロミド酸、ロソクサシン、テマフロキサシン、及びトスフロキサシン等のキノロン及び類似体；
アセチルスルファメトキシピラジン、アセチルスルフィソキサゾール、アゾスルファミド、ベンジルスルファミド、クロラミン‐Ｂ、クロラミン‐Ｔ、ジクロラミンＴ、ホルモスルファチアゾール（Ｆｏｒｍｏｓｕｌｆａｔｈｉａｚｏｌｅ）、Ｎ２ホルミルスルフィソミジン（Ｎ２Ｆｏｒｍｙｌｓｕｌｆｉｓｏｍｉｄｉｎｅ）、Ｎ２‐β‐Ｄ‐グルコシルスルファニルアミド、マフェニド、４’‐（メチルスルファモイル）スルファニルアニリド、ｐ‐ニトロスルファチアゾール、ノプリルスルファミド、フタリルスルファセタミド、フタリルスルファチアゾール、サラゾスルファジミジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファベンズアミド、スルファセタミド、スルファクロルピリダジン、スルファクリソイジン（Ｓｕｌｆａｃｈｒｙｓｏｉｄｉｎｅ）、スルファシチン、スルファジアジン、スルファジクラミド、スルファジメトキシン、スルファドキシン、スルファエチドール、スルファグアニジン、スルファグアノール、スルファレン、スルファロクス酸、スルファメラジン、スルファメテル、スルファメタジン、スルファメチゾール、スルファメトミジン、スルファメトキサゾール、スルファメトキシピリダジン、スルファメトロール、スルファミドクリソイジン、スルファモキソール、スルファニルアミド、スルファニルアミドメタンスルホン酸トリエタノールアミン塩、４‐スルファニルアミドサリチル酸、Ｎ‐スルファニリルスルファニルアミド、スルファニリルウレア、Ｎ‐スルファニリル‐３，４‐キシルアミド、スルファニトラン、スルファぺリン、スルファフェナゾール、スルファプロキシリン、スルファピラジン、スルファピリジン、スルファソミゾール、スルファシマジン（Ｓｕｌｆａｓｙｍａｚｉｎｅ）、スルファチアゾール、スルファチオウレア、スルファトラミド、スルフイソミジン、及びスルフイソキサゾール等のスルホンアミド；
アセダプソン、アセジアスルホン、アセトスルホンナトリウム、ダプソン、ジアチモスルホン、グルコスルホンナトリウム、ソラスルホン、スクシスルホン、スルファニル酸、ｐ‐スルファニリルベンジルアミン、ｐ，ｐ’‐スルホニルジアニリン‐Ｎ，Ｎ’‐ジガラクトシド、スルホキソンナトリウム、及びチアゾールスルホン等のスルホン；並びに、
クロホクトール、ヘキセジン、メテナミン、メテナミンアンヒドロメチレンクエン酸（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ Ａｎｈｙｄｒｏｍｅｔｈｙｌｅｎｅ‐ｃｉｔｒａｔｅ）、馬尿酸メテナミン、マンデル酸メテナミン、スルホサリチル酸メテナミン、ニトロキソリン、及びキシボルノール等のその他のもの；
アジフェニン塩酸塩、アルベリン、アムブトノミウムブロミド（Ａｍｂｕｔｏｎｏｍｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、アミノペンタミド、アミキセトリン、リン酸アンプロトロピン、アニソトロピンメチルブロミド、アポアトロピン、アトロピン、アトロピンＮ‐オキシド、ベナクチジン、ベナプリジン、ベンゼチミド、ベンジロニウムブロミド、ベンズトロビンメシレート、メチル硫酸ベボニウム、ビペリデン、ブトロピウムブロミド、Ｎ‐ブチルスコポルアンモニウムブロミド、ブゼピド、カミロフィン、カラミフェン塩酸塩、クロルベンゾキサミン、クロルフェノキサミン、シメトロピウムブロミド、クリジニウムブロミド、シクロドリン、シクロニウムヨージド、シクリミン塩酸塩、デプトロピン、デキセチミド、硫酸ジブトリン、ジサイクロミン塩酸塩、ジエタジン、ジフェメリン、ジヘキシベリン、メチル硫酸ジフェマニル、Ｎ‐（１，２‐ジフェニルエチル）ニコチンアミド、ジピプロベリン、ジポニウムブロミド、エメプロニウムブロミド、エンドベンジリンブロミド（Ｅｎｄｏｂｅｎｚｙｌｉｎｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、エトプロパジン、エチベンズトロピン、エチルベンズヒドラミン、エトミドリン、オイカトロピン、フェンピベリニウムブロミド、フェントニウムブロミド、フルトロピウムブロミド、グリコピロレート、ヘテロニウムブロミド（Ｈｅｔｅｒｏｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、メチル硫酸ヘキソサイクリウム、ホマトロピン、ヒヨスチアミン、イプラトロピウムブロミド、イソプロパミド、レボメペート（Ｌｅｖｏｍｅｐａｔｅ）、メクロキサミン、メペンゾレートブロミド、メトカラフェン、メタンテリンブロミド、メチキセン、メトスコポラミンブロミド、オクタミルアミン、オキシブチニンクロリド、オキシフェンサイクリミン、オキシフェノニウムブロミド、ペンタピペリド、ペンチエネートブロミド、フェンカルバミド、フェングルタリミド、ピペンゾレートブロミド、ピペリドレート、ピペリレート、メチル硫酸ポルジン、プリジノール、プリフィニウムブロミド、プロシクリジン、プロパンテリンブロミド、プロペンゾレート、プロピロマジン（Ｐｒｏｐｙｒｏｍａｚｉｎｅ）、スコポラミン、スコポラミンＮ‐オキシド、スチロニウムヨージド（Ｓｔｉｌｏｎｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ）、ストラモニウム（Ｓｔｒａｍｏｎｉｕｍ）、スルトロポニウム（Ｓｕｌｔｒｏｐｏｎｉｕｍ）、チヘキシノール、チフェナミル、チエモニウムヨージド、チメピジウムブロミド、チキジウムブロミド、トリジヘキセチルヨージド、トリヘキシフェニジル塩酸塩、トロパシン、トロペンジル、トロピカミド、トロスピウムクロリド、バレタメートブロミド、及びキセニトロピウムブロミド（Ｘｅｎｙｔｒｏｐｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）等の抗コリン薬；
アセチルフェネツリド、アルブトイン、アロキシドン、アミノグルテチミド、４‐アミノ‐３‐ヒドロキシ酪酸、アトロラクダミド（Ａｔｒｏｌａｃｔａｍｉｄｅ）、ベクラミド、ブラメート（Ｂｕｒａｍａｔｅ）、臭化カルシウム、カルバマゼピン、シンロミド、クロメチアゾール、クロナゼパム、デシメミド、ジエタジオン、ジメタジオン、ドキセニトイン、エテロバルブ、エタジオン、エトスクシミド、エトトイン、フルオレソン、ガルバペンチン（Ｇａｒｂａｐｅｎｔｉｎ）、５‐ヒドロキシトリプトファン、ラモトリジン、ロマクチル（Ｌｏｍａｃｔｉｌ）、臭化マグネシウム、硫酸マグネシウム、メフェニトイン、メホバルビタール、メタルビタール、メテトイン、メトスクシミド、５‐メチル‐５‐（３‐フェナントリル）ヒダントイン、３‐メチル‐５‐フェニルヒダントイン、ナルコバルビタール、ニメタゼパム、ニトラゼパム、パラメタジオン、フェナセミド、フェネタルビタール、フェネトライド、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェンスクシミド、フェニルメチルバルビツル酸、フェニトイン、フェテニレートナトリウム、臭化カリウム、プレガバチン（Ｐｒｅｇａｂａｔｉｎ）、プリミドン、プロガビド、臭化ナトリウム、バルプロ酸ナトリウム、ソラナム（Ｓｏｌａｎｕｍ）、臭化ストロンチウム、スクロフェニド、スルチアム、テトラントイン、チアギャビン、トリメタジオン、バルプロ酸、バルプロミド、ビガバトリン、及びゾニサミド等の抗痙攣薬；
以下を含む抗うつ薬：ビネダリン、カロキサゾン、シタロプラム、ジメタザン、インダルピン、フェンカミン、マレイン酸フルボキサミン、インデロキサジン塩酸塩、ネホパム、ノミフェンシン、オキシトリプタン、オキシペルチン、パロキセチン、セルトラリン、チアゼシム、トラゾドン、ベンラファキシン、及びゾメタピン等の二環系；
ベンモキシン、イプロクロジド、イプロニアジド、イソカルボキサジド、ニアラミド、オクタモキシン（Ｏｃｔａｍｏｘｉｎ）、及びフェネルジン等のヒドラジド／ヒドラジン；
コチニン、ロリシプリン、及びロリプラム等のピロリドン；
マプロチリン、メトラリンドール、ミアンセリン、及びオキサプロチリン等の四環系；
アジナゾラム、アミトリプチリン、アミトリプチリノキシド（Ａｍｉｔｒｉｐｔｙｌｉｎｏｘｉｄｅ）、アモキサピン、ブトリプチリン、クロミプラミン、デメキシプチリン、デシプラミン、ジベンゼピン、ジメトラクリン（Ｄｉｍｅｔｒａｃｒｉｎｅ）、ドチエピン、ドキセピン、フルアシジン、イミプラミン、イミプラミンＮ‐オキシド、イプリンドール、ロフェプラミン、メリトラセン、メタプラミン、ノルトリプチリン、ノキシプチリン、オピプラモール、ピゾチリン、プロピゼピン、プロトリプチリン、キヌプラミン、チアネプチン、及びトリミプラミン等の三環系；並びに、
アドラフィニル、ベナクチジン、ブプロピオン、ブタセチン、デアノール、デアノールアセグルメート（Ｄｅａｎｏｌ Ａｃｅｇｌｕｍａｔｅ）、デアノルアセトアミドベンゾエート、ジオキサドロール、エトペリドン、フェバルバメート、フェモキセチン、フェンペンタジオール、フルオキセチン、フルボキサミン、ヘマトポルフィリン、ハイパーシニン（Ｈｙｐｅｒｃｉｎｉｎ）、レボファセトペラン、メジホキサミン、ミナプリン、モクロベミド、オキサフロザン、ピベラリン、プロリンタン、ピリスクシデアノール（Ｐｙｒｉｓｕｃｃｉｄｅａｎｏｌ）、塩化ルビジウム、スルピリド、スルトプリド、テニロキサジン、トザリノン、トフェナシン、トロキサトン、トラニルシプロミン、Ｌ‐トリプトファン、ビロキサジン、及びジメルジン等のその他のもの；
以下を含む抗糖尿病薬：ブホルミン、メトホルミン、及びフェンホルミン等のビグアニド；
グルカゴン、インスリン、インスリン注射液、インスリン亜鉛懸濁液、イソフェンインスリン懸濁液、プロタミン亜鉛インスリン懸濁液、及び亜鉛インスリン結晶等のホルモン；
アセトヘキサミド、１‐ブチル‐３‐メタニリルウレア、カルブタミド、クロルプロパミド、グリボルヌリド、グリクラジド、グリピジド、グリキドン、グリソキセピド、グリブリド、グリブチアゾール、グリブゾール、グリヘキサミド、グリミジン、グリピナミド、フェンブタミド、トラザミド、トルブタミド、及びトルシクラミド等のスルホニルウレア誘導体；並びに、
アカルボース、メソシュウ酸カルシウム、及びミグリトール等のその他のもの；
アセチルタンニン酸、タンニン酸アルブミン、アルコファノン（Ａｌｋｏｆａｎｏｎｅ）、塩基性サリチル酸アルミニウム、カテキン、ジフェノキシン、ジフェノキシレート、リダミジン、ロペラミド、メビキン、トリリウム（Ｔｒｉｌｌｉｕｍ）、及びウザリン等の抗下痢薬；
デスモプレシン、フェリプレッシン、リプレッシン、オルニプレッシン、オキシシンコフェン、下垂体後葉製剤（Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ‐Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ）、テルリプレッシン、及びバソプレッシン等の抗利尿薬；
酢酸デルマジノン、エタモキシトリフェトール、タモキシフェン、及びトレミフェン等の抗エストロゲン薬；
以下を含む抗真菌薬（抗生物質）：アムホテリシン‐Ｂ、カンジシジン、デルモスタチン、フィリピン、フンギクロミン、ハチマイシン、ハマイシン、ルセンソマイシン、メパルトリシン、ナタマイシン、ニスタチン、ペチロシン、及びペリマイシン等のポリエン；並びに、
アザセリン、グリセオフルビン、オリゴマイシン、ネオマイシンウンデシレネート、ピロールニトリン、シッカニン、ツベルシジン、及びビリジン等のその他のもの；
以下を含む抗真菌薬（合成）：ナフチフィン及びテルビナフィン等のアリルアミン；
ビホナゾール、ブトコナゾール、クロルダントイン、クロルミダゾール、クロコナゾール、クロトリマゾール、エコナゾール、エニルコナゾール、フェンチコナゾール、イソコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、オモコナゾール、オキシコナゾール、硝酸塩、スルコナゾール、及びチオコナゾール等のイミダゾール；
フルコナゾール、イトラコナゾール、及びテルコナゾール等のトリアゾール；
アクリゾルシン（Ａｃｒｉｓｏｒｃｉｎ）、アモロルフィン、ビフェナミン、ブロモサリチルクロルアニリド、ブクロサミド、プロピオン酸カルシウム、クロフェネシン（Ｃｈｌｏｐｈｅｎｅｓｉｎ）、シクロピロクス、クロキシキン、コパラフィネート（Ｃｏｐａｒａｆｆｉｎａｔｅ）、ジアムタゾール、ジヒドロクロリド、エキサラミド、フルシトシン、ハレタゾール、ヘキセチジン、ロフルカルバン、ニフラテル、ヨウ化カリウム、プロピオン酸、ピリチオン、サリチルアニリド、プロピオン酸ナトリウム、スルベンチン、テノニトロゾール、トルシクラート、トリンダート、トルナフタート、トリセチン、ユジョチオン、ウンデシレン酸、及びプロピオン酸亜鉛等のその他のもの；
アセタゾラミド、ベフノロール、ベタキソロール、ブプラノロール、カルテオロール、ダピプラゾーク（Ｄａｐｉｐｒａｚｏｋｅ）、ジクロルフェナミド、ジピベフリン、エピネフリン、レボブノロール、メタゾルアミド、メチプラノロール、ピロカルピン、ピンドロール、及びチモロール等の抗緑内障薬；
ダナゾール、ゲストリノン、及びパロキシプロピオン（Ｐａｒｏｘｙｐｒｏｐｉｏｎｅ）等の抗ゴナドトロピン薬；
アロプリノール、カルプロフェン、コルヒチン、プロべネシド、及びスルフィンピラゾン等の抗痛風薬；
以下を含む抗ヒスタミン薬；アクリバスチン、バミピン、ブロムフェニラミン、クロルフェニラミン、ジメチンデン、メトロンＳ、フェニラミン、ピロブタミン、テナルジン（Ｔｈｅｎａｌｄｉｎｅ）、トルプロパミン、及びトリプロリジン等のアルキルアミン誘導体；
ビエタナウチン（Ｂｉｅｔａｎａｕｔｉｎｅ）、ブロモジフェンヒドラミン、カルビノキサミン、クレマスチン、ジフェニルピラリン（Ｄｉｐｈｅｎｌｙｐｙｒａｌｉｎｅ）、ドキシルアミン、エンブラミン（Ｅｍｂｒａｍｍｉｎｅ）、メドリラミン、メフェンフィドラミン（Ｍｅｐｈｅｎｐｈｙｄｒａｍｉｎｅ）、ｐ‐メチルジフェンヒドラミン、オルフェナドリン、フェニルトロキサミン、ピプリンヒドリネート（Ｐｉｐｒｉｎｈｙｄｒｉｎａｔｅ）、及びセタシン（Ｓｅｔａｓｉｎｅ）等のアミノアルキルエーテル；
アロクラミド、ｐ‐ブロムトリペレンアミン、クロロピラミン、クロロセン、ヒスタピロジン、メタフリレン、メタフェニレン、メタピリレン、フェンベンザミン、ピリラミン、タラスチン、テニルジアミン、トンジルアミン塩酸塩、トリペレナミン、及びゾラミン等のエチレンジアミン誘導体；
セチリジン、クロルサイクリジン、シンナリジン、クロシニジン、及びヒドロキシジン等のピペラジン；
以下を含む三環系：アヒスタン、エチメマジン、フェネタジン、Ｎ‐ヒドロキシエキルプロメタジンクロリド、イソプロメタジン、メキタジン、プロメタジン、ピラチアジン、及びメチル硫酸チアジナミウム等のフェノチアジン；及び、
アザタジン、クロベンゼパム、シプロヘプタジン、デプトロピン、イソチペンジル、ロラタジン、及びプロチペンジル等のその他のもの；並びに、
アンタゾリン、アステミゾール、アゼラスチン、セトキシム、クレミゾール、クロベンズトロピン、ジフェナゾリン（Ｄｉｐｈｅｎａｚｏｌｉｎｅ）、ジフェンヒドラミン、プロピオン酸フルチカゾン、メブヒドロリン（Ｍｅｂｈｙｄｒｏｌｉｎｅ）、フェニンダミン、テルフェナジン、及びトリトクアリン等のその他の抗ヒスタミン薬；
以下を含む抗高リポタンパク血症薬：ベクロルブラート（Ｂｅｃｌｏｒｂｒａｔｅ）、バザフィブラート（Ｂａｚａｆｉｂｒａｔｅ）、ビニフィブラート、シプロフィブラート、クリノフィブラート、クロフィブラート、クロフィブル酸、エトンフィブラート（Ｅｔｏｎｆｉｂｒａｔｅ）、フェノフィブラート、ゲムフィブロジル、ニコフィブラート、ピリフィブラート、ロニフィブラート、シンフィブラート、及びテオフィブラート等のアリールオキシアルカン酸誘導体；
コレスチラミン樹脂、コレスチポール、及びポリデキシド（Ｐｏｌｉｄｅｘｉｄｅ）等の胆汁酸捕捉剤（Ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｓｔｅｒａｎｔｓ）；
フルバスタチン、ロバスタチン、プラバスタチンナトリウム、及びシンバスタチン等のＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害薬；
ニコチン酸誘導体、ニコチン酸アルミニウム、アシピモックス、ニセリトロール、ニコクロネート、ニコモール、及びオキシニアシン酸（Ｏｘｉｎｉａｃｉｃ Ａｃｉｄ）；
エチロキセート、チロプロープ酸、及びチロキシン等の甲状腺ホルモン及び類似体；並びに、
アシフラン、アザコステロール、ベンフルオレックス、β‐ベンザルブチルアミド、カルニチン、コンドロイチン硫酸、クロメストン（Ｃｌｏｍｅｓｔｏｎｅ）、デタクストラン（Ｄｅｔａｘｔｒａｎ）、デキストラン硫酸ナトリウム、５，８，１１，１４，１７‐エイコサペンタエン酸、エリタデニン、フラズボール（Ｆｕｒａｚｂｏｌ）、メグルトール、メリナミド、ミタトリエンジオール、オルニチン、γ‐オリザノール、パンテチン、ペナタエリスリトール四酢酸、α‐フェニルブチルアミド、ピロザジル、プロブコール、α‐シトステロール、スルトル酸、ピペラジン塩、チアデノール、トリパラノール、及びキセンブシン等のその他のもの；
以下を含む降圧薬：アモスラロール、ブフラロール、ジレバロール、ラベタロール、プロネタロール、ソタロール、及びスルフィナロール等のアリールエタノールアミン誘導体；
アセブトロール、アルプレノロール、アロチノロール、アテノロール、ベタキソロール、ベバントロール、ビソプロロール、ボピンドロール、ブニトロロール、ブプラノロール、ブトフィロロール、カラゾロール、カルテゾロール（Ｃａｒｔｅｚｏｌｏｌ）、カルベジロール、セリプロロール、セタモロール、エパノロール、インデノロール、メピンドロール、メチプラノール、メトプロロール、モプロロール、ナドロール、ニプラジロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、タリノロール、テトラオノール（Ｔｅｔｒａｏｌｏｌ）、チモロール、及びトリプロロール等のアリールオキシプロパノールアミン誘導体；
アルチアジド、ベンドロフルメチアジド、ベンズチアジド、ベンジルヒドロクロロチアジド、ブチアジド、クロロチアジド、クロルタリドン、シクロペンチアジド、シクロチアジド、ジアゾキシド、エピチアジド、エチアジド、フェンキゾン、ヒドロクロロチアジド、ヒドロフルメチアジド、メチクロチアジド、メチクラン、メトラゾン、パラフルチジド、ポリチアジド、テトラクロルメチアジド、及びトリクロルメチアジド等のベンゾチアジアジン誘導体；
アラセプリル、カプトプリル、シラザプリル、デラプリル、エナラプリル、エナラプリラート、ホシノプリル、リシノプリル、モベルチプリル、ペリンドプリル、キナプリル、及びラミプリル等のＮ‐カルボキシアルキル（ペプチド／ラクタム）誘導体；
アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、ニカルジビン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニソルジピン、及びニトレンジピン（Ｎｉｔｒｅｎｄｉｐｉｒｎｅ）等のジヒドロピリジン誘導体；
ベタニジン、デブリソキン、グアナベンズ、グアナクリン、グアナドレル、グアナゾジン、グアネチジン、グアンファシン、グアノクロル、グアノキサベンズ、及びグアノキサン等のグアニジン誘導体；
ブドララジン、カドララジン、ジヒドララジン、エンドララジン、ヒドラカルバジン、ヒドララジン、フェニプラジン、ピルドララジン、及びトドララジン等のヒドラジン及びフタラジン；
クロニジン、ロフェキシジン、フェントラミン、フェントラミンメシレート、チアメニジン、及びトロニジン等のイミダゾール誘導体；
四級アンモニウム化合物、アザメトニウムブロミド、クロルイソンダミンクロリド、ヘキサメトニウム、ペンタシニウムビス（メチル硫酸）、ペンタメトニウムブロミド、ペントリニウムタルテート、フェナクトピニウムクロリド（Ｐｈｅｎａｃｔｏｐｉｎｉｕｍ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、及びトリメチジウヌムメトサルフェート（Ｔｒｉｍｅｔｈｉｄｉｕｎｕｍ Ｍｅｔｈｏｓｕｌｆａｔｅ）；
アルフゾシン、ブナゾシン、ドキサゾシン、プラソシン（Ｐｒａｓｏｓｉｎ）、テラゾシン、及びトリマゾシン等のキナゾリン誘導体；
ビエタセルピン、デセルピジン、レシンナミン、レセルピン、及びシロシンゴピン等のレセルピン誘導体；
アンブシド、クロパミド、フロセミド、インダパミド、キネタゾン、トリパミド、及びキシパミド等のスルホンアミド誘導体；並びに、
アジマリン、γ‐アミノ酪酸、ブフェニオード、カンデサルタン、クロルタリドン、シクレタイン（Ｃｉｃｌｅｔａｉｎｅ）、シクロシドミン、タンニン酸クリプテナミン（Ｃｒｙｐｔｅｎａｍｉｎｅ Ｔａｎｎａｔｅ）、エプロサルタン、フェノルドパム、フロセキナン、インドラミン、イルベサルタン、ケタンセリン、ロサルタン、メトブタメート（Ｍｅｔｂｕｔａｍａｔｅ）、メカミルラミン、メチルドパ、メチル４‐ピリジルケトンチオセミカルバルゾン、メトラゾン、ミノキシジル、ムゾリミン、パージリン、ペンピジン、ピナシジル、ピペロキサン、プリマペロン（Ｐｒｉｍａｐｅｒｏｎｅ）、プロトベラトリン、ラウバシン、レシメトール、リルメニデン（Ｒｉｌｍｅｎｉｄｅｎｅ）、サララシン、ニトロプルシドナトリウム、チクリナフェン（Ｔｉｃｒｙｎａｆｅｎ）、カンシル酸トリメタファン、チロシナーゼ、ウラピジル、及びバルサルタン等のその他のもの；
２‐アミノ‐４‐メチルチアゾール、２‐アミノチアゾール、カルビマゾール、３，５‐ジブロモ‐Ｌ‐チロシン、３，５‐ジヨードチロシン、ヒンデリン、ヨウ素、ヨーチオウラシル、メチマゾール、メチルチオウラシル、プロピルチオウラシル、過塩素酸ナトリウム、チベンザソリン（Ｔｈｉｂｅｎｚａｚｏｌｉｎｅ）、チオバルビタール、及び２‐チオウラシル等の抗甲状腺機能亢進症薬；
メチル硫酸アメジニウム、アンジオテンシンアミド、ジメトフリン、ドーパミン、エチフェルミン、エチレフリン、ゲペフリン、メタラミノール、ミドドリン、ノルエピネフリン、フォレドリネアド（Ｐｈｏｌｅｄｒｉｎｅａｄ）、及びシネフリン等の降圧薬；
レボチロキシンナトリウム、リオチロニン、チロイド（Ｔｈｙｒｏｉｄ）、チロイジン（Ｔｈｙｒｏｉｄｉｎ）、チロキシン、チラトリコール、及びＴＳＨ等の抗甲状腺機能低下症薬；
以下を含む抗炎症薬（非ステロイド系）：エンフェナム酸、エトフェナメート、フルフェナム酸、イソニキシン、メクロフェナム酸、メファナム酸（Ｍｅｆａｎａｍｉｃ Ａｃｉｄ）、ニフルム酸、タルニフルメート、テロフェナメート、及びトルフェナム酸等のアミノアリールカルボン酸誘導体；
アセメタシン、アルクロフェナック、アンフェナック、ブフェキサマク、シンメタシン、クロピラック、ジクロフェナックナトリウム、エトドラク、フェルビナク、フェンクロフェナック、フェンクロラック、フェンクロジン酸、フェンチアザク、グルカメタシン、イブフェナック、インドメタシン、イソフェゾラック、イソキセパック、ロナゾラック、メチアジン酸、オキサメタシン（Ｏｘａｍｅｔａｃｉｎｅ）、プログルメタシン、スリンダク、チアラミド、トルメチン、及びゾメピラック等のアリール酢酸誘導体；
ブマジゾン、ブチブフェン、フェンブフェン、及びキセンブシン等のアリール酪酸誘導体；
クリダナック、ケトロラック及びチノリジン等のアリールカルボン酸；
アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシ酸、カルプロフェン、フェノプロフェン、フルノキサプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、イブプロキサム、インドプロフェン、ケトプロフェン、ロキソプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピケトプロフェン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、プロチジン酸、スプロフェン、及びチアプロフェン酸等のアリールプロピオン酸誘導体；
ジフェナミゾール及びエピリゾール等のピラゾール；
アパゾン、ベンズピペリロン（Ｂｅｎｚｐｉｐｅｒｙｌｏｎ）、フェプラゾン、モフェブタゾン、モラゾン、オキシフェンブタゾン、フェニブタゾン（Ｐｈｅｎｙｂｕｔａｚｏｎｅ）、ピペブゾン、プロピフェナゾン、ラミフェナゾン、スキシブゾン、及びチアゾリノブタゾン（Ｔｈｉａｚｏｌｉｎｏｂｕｔａｚｏｎ）等のピラゾロン；
アセトアミノサロール（Ａｃｅｔａｍｉｎｏｓａｌｏｌ）、アスピリン、ベノリレート、ブロモサリゲニン（Ｂｒｏｍｏｓａｌｉｇｅｎｉｎ）、アセチルサリチル酸カルシウム、ジフルニサル、エテルサレート、フェンドサール、ゲンチシン酸、サリチル酸グリコール、サリチル酸イミダゾール、アセチルサリチル酸リジン、メサラミン、サリチル酸モルホリン、サリチル酸１‐ナフチル、オルサラジン、パルサルミド、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、サラセタミド、サリチルアミンＯ‐酢酸（Ｓａｌｉｃｙｌａｍｉｎｅ Ｏ‐Ａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ）、サリチル硫酸、サルサレート、及びスルファサラジン等のサリチル酸誘導体；
ドロキシカム、イソキシカム、ピロキシカム、及びテノキシカム等のチアジンカルボキサミド；並びに、
ε‐アセトアミドカプロン酸、Ｓ‐アデノシルメチオニン、３‐アミノ‐４‐ヒドロキシ酪酸、アミキセトリン、ベンダザック、ベンジダミン、ブコローム、ジフェンピラミド、ジタゾール、エモルファゾン、グアイアズレン、ナブメトン、ニメスリド、オルゴテイン、オキサセプロール、パラニリン、ペリソキサール、ピフォキシム、プロカゾン、プロキサゾール、及びテニダップ等のその他のもの；
アセタプソン、アモジアキン（Ａｍｏｄｉａｑｕｉｎ）、アルテエーテル、アルテメテル、アルテミシニン、アーテスネート、ベベエリン、ベルベリン、チラタ（Ｃｈｉｒａｔａ）、クロルグアニド、クロロキン、クロルプルグアニル、キナ、シンコニジン、シンコニン、シクログアニル、ゲンチオピクリン（Ｇｅｎｔｉｏｐｉｃｒｉｎ）、ハロファントリン、ヒドロキシクロロキン、塩酸メフロキン、３‐メチルアルサセチン、パマキン、プラスモシド（Ｐｌａｓｍｏｃｉｄ）、プリマキン、ピリメタミン、キナクリン、キニーネ、硫酸水素キニーネ、炭酸キニーネ、キニーネジヒドロブロミド、二塩酸キニーネ、エチル炭酸キニーネ、ギ酸キニーネ、グルコン酸キニーネ、ヨウ化水素酸キニーネ、塩酸キニーネ、サリチル酸キニーネ、硫酸キニーネ、タンニン酸キニーネ、塩酸キニーネウレア、キノシド、キノリン、及び二塩基性ヒ酸ナトリウム等の抗マラリア薬；
アルピロプリド、ジヒドロエルゴタミン、エレトリプタン、エルゴコルニン、エルゴコルニニン、エルゴクリプチン、麦角、エルゴタミン、酢酸フルメドロキソン、ホナジン、リスリド、メチセルギド、ナラトリプタン、オキセトロン、ピゾチリン、リザトリプタン、及びスマトリプタン等の抗片頭痛薬；
アセチルロイシンモノエタノールアミン、アリザプリド、ベンズキナミド、ビエタナウチン（Ｂｉｅｔａｎａｕｔｉｎｅ）、ブロモプリド、ブクリジン、クロルプロマジン、クレボプリド、シクリジン、ジメンヒドリナート、ジフェニオドール（Ｄｉｐｈｅｎｉｏｄｏｌ）、ドンペリドン、グラニセトロン、メクリジン、メタルタール（Ｍｅｔｈａｌｌｔａｌ）、メトクロプラミド、メトピマジン、ナビロン、オンダンステロン（Ｏｎｄａｎｓｔｅｒｏｎ）、オキシペンジル、ピパマジン、ピプリンヒドリネート（Ｐｉｐｒｉｎｈｙｄｒｉｎａｔｅ）、プロクロルペラジン、スコポラミン、テトラヒドロカンナビノール、チエチルベラジン、チオプロペルザイン（Ｔｈｉｏｐｒｏｐｅｒｚａｉｎｅ）、及びトリメトベンズアミド等の制吐薬；
以下を含む抗悪性腫瘍薬：ブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン等のスルホン酸アルキル、等のアルキル化薬；
ベンゾデパ（Ｂｅｎｚｏｄｅｐａ）、カルボコン、メツレデパ（Ｍｅｔｕｒｅｄｅｐａ）、及びウレデパ（Ｕｒｅｄｅｐａ）等のアジリジン；
アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、及びトリメチロールメラミン（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）等のエチレンイミン及びメチルメラミン；
クロラムブシル、クロルナファジン（Ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、ククロホスファミド（Ｃｈｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（Ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（Ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン、トロホスファミド、及びウラシルマスタード等のナイトロジェンマスタード；
カルムスチン、クロロゾトシン（Ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、及びラニムスチン等のニトロソウレア；並びに、
カンプトテシン、ダカルバジン、マンノムスチン（Ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール、ミトラクトール（Ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、及びピポブロマン等のその他のもの；
アクラシノマイシン（Ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｃｉｎｓ）、アクチノマイシンＦ１、アントラマイシン（Ａｎｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（Ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カルビシン（Ｃａｒｕｂｉｃｉｎ）、カルチノフィリン（Ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、６‐ジアゾ‐５‐オキソ‐Ｌ‐ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、マイトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン（Ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（Ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（Ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、及びゾルビシン等の抗生物質；
以下を含む代謝拮抗薬：以下のような葉酸類似体、デノプテリン（Ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、メトトレキセート、プテロプテリン（Ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、及びトリメトレキセート；
フルダラビン、６‐メルカプトプリン、チアミプリン（Ｔｈｉａｍｉｐｒｉｎｅ）、及びチオグアナイン（Ｔｈｉｏｇｕａｎａｉｎｅ）等のプリン類似体；
アンシタビン、アザシチジン、６‐アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン、フルロオウラシル（Ｆｌｕｒｏｏｕｒａｃｉｌ）、及びテガフール等のピリミジン類似体；
Ｌ‐アスパラギナーゼ等の酵素；並びに、
アセグラトン、アムサクリン、ベストラブシル（Ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（Ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、ブリオスタチン１、カルボプラチン、シスプラチン、デホフアミド（Ｄｅｆｏｆａｍｉｄｅ）、デメコルチン、ジアジコン（Ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルホルニチン（Ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウムアセテート（Ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ Ａｃｅｔａｔｅ）、エトグルシド、エトポシド、硝酸ガリウム、ヒドロキシウレア、インターフェロン‐α、インターフェロン‐β、インターフェロン‐γ、インターロイキン‐２、レンチナン、レトロゾール、ロニダミン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール（Ｍｏｐｉｄａｍｏｌ）、ニトラクリン（Ｎｉｔｒａｃｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（Ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ポドフィリン酸（Ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃｃ Ａｃｉｄ）、２‐エチルヒドラジド、ポリニトロクバン（Ｐｏｌｙｎｉｔｒｏｃｕｂａｎｅｓ）、プロカルバジン、ＰＳＫ７、ラゾキサン（Ｒａｚｏｘａｎｅ）、シゾフィラン、スピロゲルマニウム、タキソール、テニポシド、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’‐トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビン等のその他のもの；
以下を含む抗悪性腫瘍薬（ホルモン系）：カルステロン（Ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、及びテストラクトン等のアンドロゲン；
アミノグルテチミド、ミトタン、及びトリロスタン等の抗副腎薬（Ａｎｔｉａｄｒｅｎａｌｓ）
フルタミド及びニルタミド等の抗アンドロゲン薬；並びに、
タモキシフェン及びトレミフェン等の抗エストロゲン薬；
フロリン酸（Ｆｒｏｌｉｎｉｃ Ａｃｉｄ）などの葉酸補充物（ｆｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒｓ）を含む抗悪性腫瘍薬補助薬（Ａｎｔｉｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ａｄｊｕｎｃｔｓ）；
アマンタジン、ベンセラジド、ビエタナウチン（Ｂｉｅｔａｎａｕｔｉｎｅ）、ビペリデン、ブロモクリプチン、ブジピン、カベルゴリン、カルビドパ、デプレニール（ａ／ｋ／ａ Ｌ‐デプレニール、Ｌ‐デプレニル（Ｌ‐ｄｅｐｒｅｎｉｌ）、Ｌ‐デプレナリン（Ｌ‐ｄｅｐｒｅｎａｌｉｎｅ）、及びセレギリン）、デキセチミド、ジエタジン（Ｄｉｅｔｈａｚｉｎｅ）、ジフェンヒドラミン、ドロキシドパ、エトプロパジン、エチルベンズヒドラミン、レボドパ、ナキサゴリド（Ｎａｘａｇｏｌｉｄｅ）、ペルゴリド、ピロヘプチン、プラミペキソール、プリジノール、プロジピン（Ｐｒｏｄｉｐｉｎｅ）、キンピロール、レマセミド（Ｒｅｍａｃｅｍｉｄｅ）、ロピニロール、テルグリド、チグロイジン（Ｔｉｇｌｏｉｄｉｎｅ）、及び塩酸トリヘキシフェニジル等の抗パーキンソン病薬；
メチロシン、フェノキシベンザミン、及びフェントラミン等の抗クロム親和細胞腫薬；
エフォルニチン（Ｅｆｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、ペンタミジン、及びスルファメトキサゾール等の抗ニューモシスティス薬（Ａｎｔｉｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｄｒｕｇｓ）；
カプロン酸ゲストノロン、メパルトリシン、オキセンドロン、及びプロスカー７（Ｐｒｏｓｃａｒ７）等の抗前立腺肥大薬；
グルコン酸アンチモンナトリウム、エチルスチバミン（Ｅｔｈｙｌｓｔｉｂａｍｉｎｅ）、ヒドロキシスチルバミジン、Ｎ‐メチルグルカミン、ペンタミジン、スチルバミジン、及び尿素スチバミン（Ｕｒｅａ Ｓｔｉｂａｍｉｎｅ）等の抗原虫薬（リーシュマニア（Ｌｅｓｈｍａｎｉａ））
アセタルソン（Ａｃｅｔａｒｓｏｎｅ）、アミニトロゾール（Ａｍｉｎｉｔｒｏｚｏｌｅ）、アニソマイシン、アザニダゾール、ホルミニトラゾール（Ｆｏｒｍｉｎｉｔｒａｚｏｌｅ）、フラゾリドン、ハチマイシン、ラウログアジン（Ｌａｕｒｏｇｕａｄｉｎｅ）、メパルトリシン、メトロニダゾール、ニフラテル、ニフロキシム（Ｎｉｆｕｒｏｘｉｍｅ）、ニモラゾール、セクニダゾール、ピクリン酸銀、テノニトロゾール、及びチニダゾール等の抗原虫薬（トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ））；
ベンズニダゾール、エフロールニチン、メラルソプロール、ニフルチモックス、オキソフェナルシン（Ｏｘｏｐｈｅｎａｒｓｉｎｅ）、塩酸塩、ペンタミジン、プロパミジン、ピューロマイシン、キナピラミン（Ｑｕｉｎａｐｙｒａｍｉｎｅ）、スチルバミジン、スラミンナトリウム、トリパンレッド（Ｔｒｙｐａｎ Ｒｅｄ）、及びトリパラスミド（Ｔｒｙｐａｒａｓｍｉｄｅ）等の抗原虫薬（トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｍａ））；
カンファー、シプロヘプタジン、ジクロリゾン（Ｄｉｃｈｌｏｒｉｓｏｎｅ）、グリシン、ハロメタゾン、３‐ヒドロキシカンファー、メントール、メスルフェン（Ｍｅｓｕｌｐｈｅｎ）、メトジラジン、フェノール、ポリドカノール、リゾカイン（Ｒｉｓｏｃａｉｎｅ）、カンファー精油（Ｓｐｉｒｉｔ ｏｆ Ｃａｍｐｈｏｒ）、テナルジン（Ｔｈｅｎａｌｄｉｎｅ）、トルプロパミン、及びトリメプラジン等の抗ピューリティックス薬（Ａｎｔｉｐｕｒｉｔｉｃｓ）；
アシトレチン、サリチル酸アンモニウム、アントラリン、６‐アザウリジン、ベルガプテン、クリサロビン（Ｃｈｒｙｓａｒｏｂｉｎ）、エトレチナート、及びピロガロール等の抗乾癬薬；
以下を含む抗精神病薬：ベンペリドール、ブロムペリドール、ドロペリドール、フルアニソン、ハロペリドール、メルペロン、モペロン、ピパンペロン、スニペロン（Ｓｎｉｐｅｒｏｎｅ）、チミペロン、及びトリフルペリドール等のブチロフェノン；
アセトフェナジン、ブタペラジン、カルフェナジン（Ｃａｒｐｈｅｎａｚｉｎｅ）、クロルプロエタジン、クロルプロマジン、クロスピラジン（Ｃｌｏｓｐｉｒａｚｉｎｅ）、シアメマジン、ジキシラジン、フルフェナジン、イミクロパジン（Ｉｍｉｃｌｏｐａｚｉｎｅ）、メパジン（Ｍｅｐａｚｉｎｅ）、メソリダジン、メトキシプロマジン、メトフェナゼート（Ｍｅｔｏｆｅｎａｚａｔｅ）、オクサフルマジン（Ｏｘａｆｌｕｍａｚｉｎｅ）、ペラジン、ペリシアジン（Ｐｅｒｉｃｙａｚｉｎｅ）、ペリメタジン（Ｐｅｒｉｍｅｔｈａｚｉｎｅ）、ペルフェナジン、ピペラセタジン（Ｐｉｐｅｒａｃｅｔａｚｉｎｅ）、ピポチアジン、プロクロルペラジン、プロマジン、スルホリダジン（Ｓｕｌｆｏｒｉｄａｚｉｎｅ）、チオプロパゼート、チオリダジン、トリフロペラジン、及びトリフルプロマジン等のフェノチアジン；
クロルプロチキセン、クロペンチキソール、フルペンチキソール、及びチオチキセン等のチオキサンテン；並びに、
ベンズキナミド（Ｂｅｎｚｑｕｉｎａｍｉｄｅ）、カルピプラミン、クロカプラミン、クロマクラン（Ｃｌｏｍａｃｒａｎ）、クロチアピン（Ｃｌｏｔｈｉａｐｉｎｅ）、クロザピン、オピプラモール、プロチペンジル、テトラベナジン、及びゾテピン等のその他の三環系；
アリザプリド、アミスルプリド、ブラメート（Ｂｕｒａｍａｔｅ）、フルスピリレン、モリンドン、ペンフルリドール、ピモジド、スピリレン（Ｓｐｉｒｉｌｅｎｅ）、及びスルピリド等のその他のもの；
アセトアミノフェン、アセトアミノサロール（Ａｃｅｔａｍｉｎｏｓａｌｏｌ）、アセトアニリド、アコニン（Ａｃｏｎｉｎｅ）、アコニット、アコニチン、アルクロフェナク、アルミニウムビス（アセチルサリチレート）、アミノクロルテノキサジン（Ａｍｉｎｏｃｈｌｏｒｔｈｅｎｏｘａｚｉｎ）、アミノピリン、アスピリン、ベノリレート（Ｂｅｎｏｒｙｌａｔｅ）、ベンジダミン、ベルベリン、ｐ‐ブロモアセトアニリド、ブフェキサマク、ブマジゾン（Ｂｕｍａｄｉｚｏｎ）、アセチルサリチル酸カルシウム、クロルテノキサジン（Ｃｈｌｏｒｔｈｅｎｏｘａｚｉｎ（ｅ））、サリチル酸コリン、クリダナク（Ｃｌｉｄａｎａｃ）、アセチルサリチル酸ジヒドロキシアルミニウム、ジピロセチル、ジピロン、エピリゾール、エテルサレート（Ｅｔｅｒｓａｌａｔｅ）、サリチル酸イミダゾール、インドメタシン、イソフェゾラク（Ｉｓｏｆｅｚｏｌａｃ）、ｐ‐ラクトフェネチド（ｐ−Ｌａｃｔｏｐｈｅｎｅｔｉｄｅ）、アセチルサリチル酸リジン、アセチルサリチル酸マグネシウム、メクロフェナム酸（Ｍｅｃｌｏｆｅｎａｍｉｃ Ａｃｉｄ）、モラゾン（Ｍｏｒａｚｏｎｅ）、サリチル酸モルホリン、ナプロキセン、ニフェナゾン、５１‐ニトロ‐２’‐プロポキシアセトアニリド、フェナセチン、フェニカルバジド（Ｐｈｅｎｉｃａｒｂａｚｉｄｅ）、フェノコール（Ｐｈｅｎｏｃｏｌｌ）、フェノピラゾン（Ｐｈｅｎｏｐｙｒａｚｏｎｅ）、アセチルサリチル酸フェニル、サリチル酸フェニル、ピペブゾン（Ｐｉｐｅｂｕｚｏｎｅ）、プロパセタモール、プロピフェナゾン、ラミフェナゾン（Ｒａｍｉｆｅｎａｚｏｎｅ）、サラセタミド（Ｓａｌａｃｅｔａｍｉｄｅ）、Ｏ‐酢酸サリチルアミド（Ｓａｌｉｃｙｌａｍｉｄｅ Ｏ‐Ａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ）、サリチル酸ナトリウム、スルファミピリン（Ｓｕｌｆａｍｉｐｙｒｉｎｅ）、テトランドリン（Ｔｅｔｒａｎｄｒｉｎｅ）、及びチノリジン等の解熱薬；
ｐ‐アミノ安息香酸、クロラムフェニコール、パルミチン酸クロラムフェニコール、パントテン酸クロラムフェニコール、及びテトラサイクリン等の抗リケッチア薬；
クロロキシン（Ｃｈｌｏｒｏｘｉｎｅ）、３‐Ｏ‐ラウロイルピリドキソールジアセテート（３‐Ｏ‐Ｌａｕｒｏｙｌｐｙｒｉｄｏｘｏｌ Ｄｉａｃｅｔａｔｅ）、ピロクトン（Ｐｉｒｏｃｔｏｎｅ）、ピリチオン（Ｐｙｒｉｔｈｉｏｎｅ）、レゾルシノール、硫化セレン、及びチオキソロン等の抗脂漏薬；
以下を含む防腐薬：アレキシジン（Ａｌｅｘｉｄｉｎｅ）、アンバゾン、クロルヘキシジン、及びピクロキシジン等のグアニジン；
ヨウ化酸化ビスマス、ヨウ化次没食子酸ビスマス（Ｂｉｓｍｕｔｈ Ｉｏｄｏｓｕｂｇａｌｌａｔｅ）、ビスマストリブロモフェネート（Ｂｉｓｍｕｔｈ Ｔｒｉｂｒｏｍｏｐｈｅｎａｔｅ）、塩化ボルニル（Ｂｏｒｎｙｌ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヨウ素酸カルシウム、塩素化石灰、クロフルカルバン（Ｃｌｏｆｌｕｃａｒｂａｎ）、フルロサラン（Ｆｌｕｒｏｓａｌａｎ）、ヨウ素酸、ヨウ素、一塩化ヨウ素、三塩化ヨウ素、ヨードホルム、四ヨウ化メテナミン（Ｍｅｔｈｅｎａｍｉｎｅ Ｔｅｔｒａｉｏｄｉｎｅ）、オキシクロロセン（Ｏｘｙｃｈｌｏｒｏｓｅｎｅ）、ポビドン‐ヨウ素、次亜塩素酸ナトリウム、ヨウ素酸ナトリウム、シムクロセン（Ｓｙｍｃｌｏｓｅｎｅ）、ヨウ化チモール、トリクロカルバン（Ｔｒｉｃｌｏｃａｒｂａｎ）、トリクロサン、及びトロクロセンカリウム（Ｔｒｏｃｌｏｓｅｎｅ Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ）等のハロゲン及びハロゲン化合物；
ヒドラガフェン（Ｈｙｄｒａｇａｐｈｅｎ）、メラレインナトリウム（Ｍｅｒａｌｅｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ）、メルブロミン（Ｍｅｒｂｒｏｍｉｎ）、塩化水銀（ＩＩ）、塩化水銀（ＩＩ）、アンモニア処理（Ａｍｍｏｎｉａｔｅｄ）、ｐ‐フェノールスルホン酸ナトリウム水銀（ＩＩ）（Ｍｅｒｃｕｒｉｃ Ｓｏｄｉｕｍ ｐ‐Ｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、水銀（ＩＩ）スクシンイミド、硫化水銀（ＩＩ）、レッド（Ｒｅｄ）、マーキュロフェン（Ｍｅｒｃｕｒｏｐｈｅｎ）、酢酸水銀（Ｉ）、塩化水銀（Ｉ）、ヨウ化水銀（Ｉ）、ニトロメルソール（Ｎｉｔｒｏｍｅｒｓｏｌ）、四ヨード水銀（ＩＩ）カリウム（Ｐｏｔａｓｓｉｕｍ Ｔｅｔｒａｉｏｄｏｍｅｒｃｕｒａｔｅ（ＩＩ））、三ヨード水銀（ＩＩ）カリウム溶液、チメルホネートナトリウム、及びチメロサール等の水銀化合物；
フラゾリドン、２‐（メトキシメチル）‐５‐ニトロフラン、ニドロキシゾン（Ｎｉｄｒｏｘｙｚｏｎｅ）、ニフロキシム（Ｎｉｆｕｒｏｘｉｍｅ）、ニフルジド、及びニトロフラゾン等のニトロフラン；
アセトメロクトル（Ａｃｅｔｏｍｅｒｏｃｔｏｌ）、ビチオノール、サリチル酸カドミウム、カルバクロール（Ｃａｒｖａｃｒｏｌ）、クロロキシレノール、クロロフェン（Ｃｌｏｒｏｐｈｅｎｅ）、クレゾート（Ｃｒｅｓｏｔｅ）、クレゾール、ｐ‐クレゾール、フェンチクロール（Ｆｅｎｔｉｃｌｏｒ）、ヘキサクロロフェン、サリチル酸１‐ナプチル（１‐Ｎａｐｔｈｙｌ Ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、サリチル酸２‐ナプチル（２‐Ｎａｐｔｈｙｌ Ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ）、２，４，６‐トリブロモ‐ｍ‐クレゾール、及び３’，４’，５’‐トリクロロサリチルアニリド等のフェノール；
アミノキヌリド（Ａｍｉｎｏｑｕｉｎｕｒｉｄｅ）、ベンゾキシキン（Ｂｅｎｚｏｘｉｑｕｉｎｅ）、ブロキシキノリン、クロロキシン（Ｃｈｌｏｒｏｘｉｎｅ）、クロルキナルドール、クロキシキン（Ｃｌｏｘｙｑｕｉｎ）、エチルヒドロクプレイン（Ｅｔｈｙｌｈｙｄｒｏｃｕｐｒｅｉｎｅ）、ユープロシン（Ｅｕｐｒｏｃｉｎ）、ハルキノール（Ｈａｌｑｕｉｎｏｌ）、ヒドラスチン（Ｈｙｄｒａｓｔｉｎｅ）、８‐ヒドロキシキノリン、硫酸８‐ヒドロキシキノリン、及びヨードクロルヒドロキシキン（Ｉｏｄｏｃｈｌｏｒｈｙｄｒｏｘｙｑｕｉｎ）等のキノリン；並びに、
酢酸アルミニウム溶液、塩基性酢酸アルミニウム溶液、硫酸アルミニウム、３‐アミノ‐４‐ヒドロキシ酪酸、ホウ酸、クロルヘキシジン、クロロアゾジン（Ｃｈｌｏｒｏａｚｏｄｉｎ）、酢酸ｍ‐クレシル（ｍ‐Ｃｒｅｓｙｌ Ａｃｅｔａｔｅ）、硫酸銅、ジブロモプロパミジン、イクタモール、ネガトール７（Ｎｅｇａｔｏｌ７）、ノキシチオリン、オルニダゾール、β‐プロビオラクトン、α‐テルピネオール（α‐Ｔｅｒｐｉｎｅｏｌ）等のその他のもの；
アリベンドール（Ａｌｉｂｅｎｄｏｌ）、アンブセタミド（Ａｍｂｕｃｅｔａｍｉｄｅ）、アミノプロマジン、アポアトロピン（Ａｐｏａｔｒｏｐｉｎｅ）、メチル硫酸ベボニウム、ビエタミベリン（Ｂｉｅｔａｍｉｖｅｒｉｎｅ）、ブタベリン（Ｂｕｔａｖｅｒｉｎｅ）、臭化ブトロピウム、臭化Ｎ‐ブチルスコポルアンモニウム（Ｎ‐Ｂｕｔｙｌｓｃｏｐｏｌａｍｍｏｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、カロベリン、臭化シメトロピウム（Ｃｉｍｅｔｒｏｐｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、シンナメドリン（Ｃｉｎｎａｍｅｄｒｉｎｅ）、クレボプリド、コニイン臭酸塩（Ｃｏｎｉｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｂｒｏｍｉｄｅ）、コニイン塩酸塩（Ｃｏｎｉｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ヨウ化シクロニウム（Ｃｙｃｌｏｎｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ）、ジフェメリン、ジイソプロミン、ジオキサフェチルブチレート（Ｄｉｏｘａｐｈｅｔｙｌ Ｂｕｔｙｒａｔｅ）、臭化ジポニウム、ドロフェニン（Ｄｒｏｆｅｎｉｎｅ）、臭化エメプロニウム、エタベリン（Ｅｔｈａｖｅｒｉｎｅ）、フェクレミン（Ｆｅｃｌｅｍｉｎｅ）、フェナラミド（Ｆｅｎａｌａｍｉｄｅ）、フェノベリン、フェンピプラン、フェンピベリニウムブロミド、臭化フェントニウム、フラボキセート、フロプロピオン、グルコン酸、グアイアクタミン（Ｇｕａｉａｃｔａｍｉｎｅ）、ヒドラミトラジン（Ｈｙｄｒａｍｉｔｒａｚｉｎｅ）、ヒメクロモン、レイオピロール（Ｌｅｉｏｐｙｒｒｏｌｅ）、メベベリン、モクサベリン、ナフィベリン（Ｎａｆｉｖｅｒｉｎｅ）、オクタミルアミン、オクタベリン（Ｏｃｔａｖｅｒｉｎｅ）、ペンタピペリド（Ｐｅｎｔａｐｉｐｅｒｉｄｅ）、フェナマシド塩酸塩（Ｐｈｅｎａｍａｃｉｄｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、フロログルシノール、ピナベリウムブロミド、ピペリレート（Ｐｉｐｅｒｉｌａｔｅ）、ピポキソラン塩酸塩（Ｐｉｐｏｘｏｌａｎ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、プラミベリン（Ｐｒａｍｉｖｅｒｉｎ）、臭化プリフィニウム、プロペリジン（Ｐｒｏｐｅｒｉｄｉｎｅ）、プロピバン（Ｐｒｏｐｉｖａｎｅ）、プロピロマジン（Ｐｒｏｐｙｒｏｍａｚｉｎｅ）、プロザピン（Ｐｒｏｚａｐｉｎｅ）、ラセフェミン（Ｒａｃｅｆｅｍｉｎｅ）、ロシベリン、スパスモリトール（Ｓｐａｓｍｏｌｙｔｏｌ）、ヨウ化スチロニウム（Ｓｔｉｌｏｎｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ）、スルトロポニウム（Ｓｕｌｔｒｏｐｏｎｉｕｍ）、ヨウ化チエモニウム、チキジウムブロミド、チロプラミド、トレピブトン、トリクロミル（Ｔｒｉｃｒｏｍｙｌ）、トリフォリウム、トリメブチン、Ｎ，Ｎ‐Ｉトリメチル‐３，３‐ジフェニル‐プロピルアミン（Ｎ， Ｎ‐ＩＴｒｉｍｅｔｈｙｌ‐３，３‐ｄｉｐｈｅｎｙｌ‐ｐｒｏｐｙｌａｍｉｎｅ）、トロペンジル（Ｔｒｏｐｅｎｚｉｌｅ）、塩化トロスピウム、及び臭化キセニトロピウム（Ｘｅｎｙｔｒｏｐｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）等の鎮痙薬；
アナグレリド、アルガトロバン、シロスタゾール、クリソプチン（Ｃｈｒｙｓｏｐｔｉｎ）、ダルトロバン（Ｄａｌｔｒｏｂａｎ）、デフィブロチド、エノキサパリン、フラキシパリン７（Ｆｒａｘｉｐａｒｉｎｅ７）、インドブフェン、ラモパラン（Ｌａｍｏｐａｒａｎ）、オザグレル、ピコタミド、プラフィブリド（Ｐｌａｆｉｂｒｉｄｅ）、レビパリン、テデルパリン（Ｔｅｄｅｌｐａｒｉｎ）、チクロピジン、トリフルサル、及びワルファリン等の抗血栓薬；
アロカミド（Ａｌｌｏｃａｍｉｄｅ）、アミシボン（Ａｍｉｃｉｂｏｎｅ）、ベンプロペリン、ベンゾナテート、臭化ビベンゾニウム（Ｂｉｂｅｎｚｏｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、ブロモホルム（Ｂｒｏｍｏｆｏｒｍ）、ブタミレート、ブテタメート（Ｂｕｔｅｔｈａｍａｔｅ）、エタンジスルホン酸カラミフェン（Ｃａｒａｍｉｐｈｅｎ Ｅｔｈａｎｅｄｉｓｕｌｆｏｎａｔｅ）、カルベタペンタン、クロフェジアノール（Ｃｈｌｏｐｈｅｄｉａｎｏｌ）、クロブチノール、クロペラスチン、コデイン、コデインメチルブロミド、コデインＮ‐オキシド、リン酸コデイン、硫酸コデイン、シクレキサノン（Ｃｙｃｌｅｘａｎｏｎｅ）、デキストロメトルファン、ジブネートナトリウム、ジヒドロコデイン、ジヒドロコデイノンエノールアセテート（Ｄｉｈｙｄｒｏｃｏｄｅｉｎｏｎｅ Ｅｎｏｌ Ａｃｅｔａｔｅ）、ジメモルファン、ジメトキサネート（Ｄｉｍｅｔｈｏｘａｎａｔｅ）、α，α‐ジフェニル‐２‐ピペリジンプロパノール、ドロプロピジン、ドロテバノール（Ｄｒｏｔｅｂａｎｏｌ）、エプラジノン、エチルジブナート、エチルモルヒネ、ホミノベン、グイアイアペート（Ｇｕｉａｉａｐａｔｅ）、ヒドロコドン、イソアミニル、レボプロポキシフェン（Ｌｅｖｏｐｒｏｐｏｘｙｐｈｅｎｅ）、モルクロフェン、ナルセイン（Ｎａｒｃｅｉｎｅ）、ノルメタドン、ノスカピン、オキセラジン、オキソラミン、フォルコジン、ピコぺリン（Ｐｉｃｏｐｅｒｉｎｅ）、ピパゼタート、ピぺリジオン、プレノクスジアジン塩酸塩、ラセメトルファン（Ｒａｃｅｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）、タジプリノン塩酸塩（Ｔａｚｉｐｒｉｎｏｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、チペピジン、及びジペプロール等の鎮咳薬；
アセグルタミドアルミニウム錯体、ε‐アセトアミドカプロン酸亜鉛、アセトキソロン、アルバプロスチル（Ａｒｂａｐｒｏｓｔｉｌ）、ベネキサート塩酸塩、次クエン酸ビスマスゾル（乾燥）、カルベノキソロン、セトラキサート、シメチジン、エンプロスチル、エスプラゾール（Ｅｓａｐｒａｚｏｌｅ）、ファモチジン、フタキシリド（Ｆｔａｘｉｌｉｄｅ）、ゲファルナート、グアイアズレン（Ｇｕａｉａｚｕｌｅｎｅ）、イルソグラジン、ミソプロストール、ニザチジン、オメプラゾール、オルノプロスチル、γ‐オリザノール、ピファルニン（Ｐｉｆａｒｎｉｎｅ）、ピレンゼピン、プラウノトール、ラニチジン、リオプロスチル（Ｒｉｏｐｒｏｓｔｉｌ）、ロサプロストール（Ｒｏｓａｐｒｏｓｔｏｌ）、ロトラキセート（Ｒｏｔｒａｘａｔｅ）、酢酸ロキサチジン、ソファルコン、スピゾフロン（Ｓｐｉｚｏｆｕｒｏｎｅ）、スクラルファート、テプレノン、トリモプロスチル（Ｔｒｉｍｏｐｒｏｓｔｉｌ）、トリチオジン（Ｔｈｒｉｔｈｉｏｚｉｎｅ）、トロキシピド、及びゾリミジン等の抗潰瘍薬；
アセトヒドロキサム酸、アロプリノール、クエン酸カリウム、及びスクシンイミド等の抗尿結石薬；
リオバック７抗ベニン薬（Ｌｙｏｖａｃ７ Ａｎｔｉｖｅｎｉｎ）等の抗ベニン薬；
以下を含む抗ウィルス薬；アシクロビル、シタラビン、ジデオキシアデノシン、ジデオキシシチジン、ジデオキシイノシン、エドクスジン、フロクスウリジン、ガンシクロビル、イドクスウリジン、イノシンプラノベクス、ＭＡＤＵ、ペンシクロビル、トリフルリジン、ビドラルビン（Ｖｉｄｒａｒｂｉｎｅ）、及びジドブジイン（Ｚｉｄｏｖｕｄｉｉｎｅ）等のプリン及びピリミジノン；並びに、
アセチルロイシンモノエタノールアミン、アマンタジン、アミジノマイシン（Ａｍｉｄｉｎｏｍｙｃｉｎ）、コサラン（Ｃｏｓａｌａｎｅ）、クミンアルデヒドチオセミカルバゾン（Ｃｕｍｉｎａｌｄｅｈｙｄｅ Ｔｈｉｏｓｅｍｉｃａｒｂｚｏｎｅ）、ホスカルネットナトリウム、イミキモド、インターフェロン‐α、インターフェロン‐β、インターフェロン‐γ、ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）、リゾチーム、メチサゾン（Ｍｅｔｈｉｓａｚｏｎｅ）、モロキシジン、ポドフィロトキシン、リバビリン、リマンタジン、スタリマイシン（Ｓｔａｌｌｉｍｙｃｉｎ）、スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）、トロマンタジン、キセナゾ酸（Ｘｅｎａｚｏｉｃ Ａｃｉｄ）、並びに抗インフルエンザ薬ザナミビル及びリン酸オセルタミビル等のその他のもの；
以下を含む抗不安薬：ブスピロン、ゲピロン、イプサピロン、及びトンドスピロン（Ｔｏｎｄｏｓｐｉｒｏｎｅ）等のアリールピペラジン；
アルプラゾラム、ブロマゼパム、カマゼパム、クロルジアゼポキシド、クロバザム、クロラゼペート、コチアゼパム（Ｃｈｏｔｉａｚｅｐａｍ）、クロキサゾラム、ジアゼパム、ロフラゼプ酸エチル、エチゾラム、フルイダゼパム（Ｆｌｕｉｄａｚｅｐａｍ）、フルタゾラム、フルトプラゼパム、ハラゼパム、ケタゾラム、ロラゼパム、ロクサピン、メダゼパム、メタクラゼパム（Ｍｅｔａｃｌａｚｅｐａｍ）、メキサゾラム、ノルダゼパム、オキサゼパム、オキサゾラム、ピナゼパム、プラゼパム、及びトフィソパム等のベンゾジアゼピン誘導体；
シクラルバメート（Ｃｙｃｌａｒｂａｍａｔｅ）、エミルカメート、ヒドロキシフェナメート（Ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎａｍａｔｅ）、メプロバメート、フェンプロバメート、及びチバメート（Ｔｙｂａｍａｔｅ）等のカルバメート；
アルピデム（Ａｌｐｉｄｅｍ）、ベンゾクタミン、カプトジアミン（Ｃａｐｔｏｄｉａｍｉｎｅ）、クロルメザノン、エチホキシン、フレジノキサン（Ｆｌｅｓｉｎｏｘａｎ）、フルオレソン（Ｆｌｕｏｒｅｓｏｎｅ）、グルタミン酸、ヒドロキシジン、レソピトロン（Ｌｅｓｏｐｉｔｒｏｎ）、メクロラルウレア（Ｍｅｃｌｏｒａｌｕｒｅａ）、メフェノキサロン、ミルタゼピン（Ｍｉｒｔａｚｅｐｉｎｅ）、オキサナミド（Ｏｘａｎａｍｉｄｅ）、フェナグリコドール（Ｐｈｅｎａｇｌｙｃｏｄｏｌ）、スリクロン（Ｓｕｒｉｃｌｏｎｅ）、及びザトセトロン（Ｚａｔｏｓｅｔｒｏｎ）等のその他のもの；
フルマゼニル等のベンゾジアゼピンアンタゴニスト；
以下を含む気管支拡張薬：アルブテロール、バンブテロール、ビトルテロール、カルブテロール、クレンブテロール、クロルプレナリン、ジオキシエテドリン（Ｄｉｏｘｅｔｈｅｄｒｉｎｅ）、エフェドリン、エピネフリン（Ｅｐｉｎｉｐｈｒｉｎｅ）、エプロジノール、エタフェドリン（Ｅｔａｆｅｄｒｉｎｅ）、エチルノルエピネフリン（Ｅｔｈｙｌｎｏｒｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅ）、フェノテロール、ヘキソプレナリン、イソエタリン、イソプロテレノール、マブテロール、メタプロテレノール、Ｎ‐メチルエフェドリン、ピルブテロール、プロカテロール、プロトキロール（Ｐｒｏｔｏｋｙｌｏｌ）、レプロテロール、リミテロール、サルメテロール、ソテレノール（Ｓｏｔｅｒｅｎｏｌ）、テルブタリン、及びツロブテロール等のエフェドリン誘導体；
メチル硫酸ベボニウム、臭化クルトロピウム（Ｃｌｕｔｒｏｐｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、臭化イプラトロピウム、及び臭化オキシトロピウム等の四級アンモニウム化合物；
アセフィリン（Ａｃｅｆｙｌｌｉｎｅ）、アセフィリンピペラジン、アンブフィリン（Ａｍｂｕｐｈｙｌｌｉｎｅ）、アミノフィリン、バミフィリン、テオフィリン酸コリン、ドキソフィリン、ダイフィリン（Ｄｙｐｈｙｌｌｉｎｅ）、エンプロフィリン、エタミフィリン（Ｅｔａｍｉｐｈｙｌｌｉｎ）、エトフィリン（Ｅｔｏｆｙｌｌｉｎｅ）、グアイチリン（Ｇｕａｉｔｈｙｌｉｎｅ）、プロキシフィリン、テオブロミン、１‐テオブロミン酢酸、及びテオフィリン等のキサンチン誘導体；並びに、
フェンスピリド、メジバジン（Ｍｅｄｉｂａｚｉｎｅ）、モンテクラスト（Ｍｏｎｔｅｋｕｌａｓｔ）、メトキシフェナニム（Ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎａｎｉｍｅ）、トレトキノール、及びザフィルクラスト（Ｚａｆｉｒｋｕｌａｓｔ）等のその他のもの；
以下を含むカルシウムチャネル遮断薬：ベプリジル、ジチアゼム（Ｄｉｔｉａｚｅｍ）、フェンジリン、ガロパニル（Ｇａｌｌｏｐａｎｉｌ）、プレニラミン、テロジリン、及びベラパミル等のアリールアルキルアミン；
フェロジピン、イスラジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニルバジピン、ニモジピン、ニソルジピン、及びニトレンジピン等のジヒドロピリジン誘導体；
シンナリジン、フルナリシン（Ｆｌｕｎａｒｉｓｉｎｅ）、及びリドフラジン等のピペラジン誘導体；並びに、
ベンシクラン、エタフェノン、及びペルヘキシリン等のその他のもの；
カルシフェジオール、カルシトニン、カルシトリオール、クロドロン酸、ジヒドロタキステロール、エルカトニン、エチドロン酸、イプリフラボン、パミドロン酸、副甲状腺ホルモン、及び酢酸テリパラチド等のカルシウム調節薬；
アセフィリン（Ａｃｅｆｙｌｌｉｎｅ）、アセチルジギチトキシン（Ａｃｅｔｙｌｄｉｇｉｔｉｔｏｘｉｎｓ）、２‐アミノ‐４‐ピコリン、アムリノン、ベンフロジルヘミスクシネート（Ｂｅｎｆｕｒｏｄｉｌ Ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ブクラスデシン（Ｂｕｃｌａｓｄｅｓｉｎｅ）、セレブロシド（Ｃｅｒｂｅｒｏｓｉｄｅ）、カンホタミド（Ｃａｍｐｈｏｔａｍｉｄｅ）、コンバラトキシン（Ｃｏｎｖａｌｌａｔｏｘｉｎ）、シマリン、デノパミン、デスラノシド、ジタリン（Ｄｉｔａｌｉｎ）、ジギタリス、ジギトキシン、ジゴキシン、ドブタミン、ドーパミン、ドペキサミン、エノキシモン、エリトロフレイン（Ｅｒｙｔｈｒｏｐｈｌｅｉｎｅ）、フェナルコミン（Ｆｅｎａｌｃｏｍｉｎｅ）、ギタリン（Ｇｉｔａｌｉｎ）、ギトキシン（Ｇｉｔｏｘｉｎ）、グリコシアミン（Ｇｌｙｃｏｃｙａｍｉｎｅ）、ヘプタミノール、ヒドラスチニン（Ｈｙｄｒａｓｔｉｎｉｎｅ）、イボパミン、ラノトジセス（Ｌａｎｏｔｏｄｉｓｅｓ）、メタミバム（Ｍｅｔａｍｉｖａｍ）、ミルリノン、ネリイホリン（Ｎｅｒｉｉｆｏｌｉｎ）、オレアンドリン（Ｏｌｅａｎｄｒｉｎ）、ウアバイン、オキシフェドリン、プレナルテロール、プロスシラリジン、レシブホゲニン（Ｒｅｓｉｂｕｆｏｇｅｎｉｎ）、シラレン（Ｓｃｉｌｌａｒｅｎ）、シラレニン（Ｓｃｉｌｌａｒｅｎｉｎ）、ストロファンチン（Ｓｔｒｏｐｈａｎｔｈｉｎ）、スルマゾール、テオブロミン、及びキサモテロール等の強心薬；
デフェロズミン（Ｄｅｆｅｒｏｚｍｉｎｅ）、ディチオカルブナトリウム（Ｄｉｔｉｏｃａｒｂ Ｓｏｄｉｕｍ）、エデト酸カルシウム二ナトリウム、エデト酸二ナトリウム、エデト酸ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、ペニシラミン、ペンテト酸三ナトリウムカルシウム、ペンテト酸（Ｐｅｎｔｅｃｔｉｃ Ａｃｉｄ）、サクシマー、及びトリエンチン等のキレート薬；
プログルミド等のコレシストキニンアンタゴニスト；
ケノジオール（Ｃｈｅｎｏｄｉｏｌ）、メチルｔｅｒｔ‐ブチルエーテル、モノオクタノイン（Ｍｏｎｏｏｃｔａｎｏｉｎ）、及びウルソジオール等の胆石溶解薬（Ｃｈｏｌｅｌｉｔｈｏｌｙｔｉｃ ａｇｅｎｔｓ）；
アリベンドール（Ａｌｉｂｅｎｄｏｌ）、アネトールトリチオン（Ａｎｅｔｈｏｌｅ Ｔｒｉｔｈｉｏｎ）、アジンタミド（Ａｚｉｎｔａｍｉｄｅ）、コール酸、シクロト酸（Ｃｉｃｒｏｔｏｉｃ Ａｃｉｄ）、クラノブチン（Ｃｌａｎｏｂｕｔｉｎ）、シクロブチロール、シクロバロン（Ｃｙｃｌｏｖａｌｏｎｅ）、シナリン（Ｃｙｎａｒｉｎ）、デヒドロコール酸、デオキシコール酸、ジメクロト酸（Ｄｉｍｅｃｒｏｔｉｃ Ａｃｉｄ）、α‐エチルベンジルアルコール、エキシプロベン（Ｅｘｉｐｒｏｂｅｎ）、フェグプロール（Ｆｅｇｕｐｒｏｌ）、フェンシブチロール（Ｆｅｎｃｉｂｕｔｉｒｏｌ）、フェニペントール、フロランチロン（Ｆｌｏｒａｎｔｙｒｏｎｅ）、ヒメクロモン、メンブトン（Ｍｅｎｂｕｔｏｎｅ）、３‐（ｏ‐メトキシフェニル）‐２‐フェニルアクリル酸、メトカルコン（Ｍｅｔｏｃｈａｌｃｏｎｅ）、モキゾン（Ｍｏｑｕｉｚｏｎｅ）、オサルミド、ウシ胆汁抽出物、４，４’‐オキシジ‐２‐ブタノール、ピプロゾリン、プロザピン（Ｐｒｏｚａｐｉｎｅ）、４‐サリチロイルモルホリン、シンカリド、タウロコール酸、チモナシク（Ｔｉｍｏｎａｃｉｃ）、トカンフィル（Ｔｏｃａｍｐｈｙｌ）、トレピブトン、及びバニチオリド（Ｖａｎｉｔｉｏｌｉｄｅ）等の利胆薬；
アセクリジン、臭化アセチルコリン、塩化アセチルコリド（Ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｄｅ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ナパジシル酸アクラトニウム、臭化ベンズピリニウム（Ｂｅｎｚｐｙｒｉｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、塩化ベタネコール（Ｂｅｔｈａｎｅｃｈｏｌ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、カルバコール、塩化カルプロニウム、臭化デメカリウム、デクスパンテノール、ジイソプロピルパラオクソン、ヨウ化エコチオフェート、塩化エドロホミウム（Ｅｄｒｏｐｈｏｍｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、エセリジン（Ｅｓｅｒｉｄｉｎｅ）、フルトレトニウム（Ｆｕｒｔｒｅｔｈｏｎｉｕｍ）、イソフルロフェート、塩化メタコリン、ムスカリン、ネオスチグミン、ヨウ化オキサプロパニウム（Ｏｘａｐｒｏｐａｎｉｕｍ Ｉｏｄｉｄｅ）、フィゾスチグミン、及び臭化ピリドスチグミン等のコリン作動薬；
塩化アンベノニウム、臭化ジスチグミン、及びガランタミン等のコリンエステラーゼ阻害薬；
塩化オビドキシミン（Ｏｂｉｄｏｘｉｍｉｎｅ Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）及び塩化プラリドキシム等のコリンエステラーゼ再賦活薬；
アミネプチン、アンフェタミン（Ａｍｐｈｅｔｉｍｉｎｅ）、アンフェタミニル（Ａｍｐｈｅｔａｍｉｎｉｌ）、ベメグリド、ベンズフェタミン、ブルシン（Ｂｒｕｃｉｎｅ）、カフェイン、クロルフェンテルミン（Ｃｈｌｏｒｐｈｅｎｔｅｒｍｉｎｅ）、クロフェンシクラン（Ｃｌｏｆｅｎｃｉｃｌａｎ）、クロルテルミン（Ｃｌｏｒｔｅｒｍｉｎｅ）、コカ、リン酸デマニル（Ｄｅｍａｎｙｌ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、デキソキサドロール（Ｄｅｘｏｘａｄｒｏｌ）、硫酸デキストロアンフェタミン、ジエチルプロピン（Ｄｉｅｔｈｌｐｒｏｐｉｏｎ）、Ｎ‐エチルアンフェタミン、エタミバン（Ｅｔｈａｍｉｖａｎ）、エチフェルミン（Ｅｔｉｆｅｌｍｉｎ）、エトリプタミン（Ｅｔｒｙｐｔａｍｉｎｅ）、フェンカンファミン（Ｆｅｎｃａｍｆａｍｉｎｅ）、フェネチリン（Ｆｅｎｅｔｈｙｌｌｉｎｅ）、フェノソロン（Ｆｅｎｏｓｏｌｏｎｅ）、フルロチル（Ｆｌｕｒｏｔｈｙｌ）、ガランタミン、ナトリウムヘキサシクロネート（Ｈｅｘａｃｙｃｌｏｎａｔｅ Ｓｏｄｉｕｍ）、ホモカムフィン（Ｈｏｍｏｃａｍｆｉｎ）、マジンドール、メゲキサミド（Ｍｅｇｅｘａｍｉｄｅ）、メタンフェタミン、メチルフェニデート、ニケタミド、ペモリン、ペンチレンテトラゾール、フェニジメトラジン（Ｐｈｅｎｉｄｉｍｅｔｒａｚｉｎｅ）、フェンメトラジン、フェンテルミン、ピクロトキシン、ピプラドロール、プロリンタン、及びピロバレロン（Ｐｙｒｏｖａｌｅｒｏｎｅ）等の中枢神経系刺激薬及び中枢神経系薬剤；
アミデフリン（Ａｍｉｄｅｐｈｒｉｎｅ）、カファミノール（Ｃａｆａｍｉｎｏｌ）、シクロペンタミン、エフェドリン、エピネフリン、フェノキサゾリン、インダナゾリン（Ｉｎｄａｎａｚｏｌｉｎｅ）、メチゾリン、ナファゾリン、ノルデフリン塩酸塩（Ｎｏｒｄｅｆｒｉｎ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、オクトドリン（Ｏｃｔｏｄｒｉｎｅ）、オキシメタゾリン、フェニレフリン塩酸塩、フェニルプロパノールアミン塩酸塩、フェニルプロピルメチラミン、プロピルヘキセドリン（Ｐｒｏｐｙｌｈｅｘｅｄｒｉｎｅ）、プソイドエフェドリン、テトラヒドロゾリン、チマゾリン、及びキシロメタゾリン等の鬱血除去薬；
以下を含む歯科用薬剤：アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、パミドロネート、及びチルドロネート等のビスホスホネート（抗歯周疾患及び骨吸収）；アルギニン及びフッ化ナトリウム等のう歯予防薬（Ｃａｒｒｉｅｓ Ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃｓ）；
硝酸カリウム、及びクエン酸塩、シュウ酸塩等の脱感作薬；
ヒドロキニン、ヒドロキノン、及びモノベンゾン等の脱色薬；
以下を含む利尿剤：クロルメロドリン（Ｃｈｌｏｒｍｅｒｏｄｒｉｎ）、メラルリド（Ｍｅｒａｌｌｕｒｉｄｅ）、メルカンファミド（Ｍｅｒｃａｍｐｈａｍｉｄｅ）、メルカプトメリンナトリウム（Ｍｅｒｃａｐｔｏｍｅｒｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ）、メルクマリリル酸（Ｍｅｒｃｕｍａｌｌｙｌｉｃ Ａｃｉｄ）、マーキュマチリンナトリウム（Ｍｅｒｃｕｍａｔｉｌｉｎ Ｓｏｄｉｕｍ）、塩化水銀（Ｉ）、及びマーサリル等の有機水銀化合物；
フルテレン（Ｆｕｒｔｅｒｅｎｅ）及びトリアムテレン等のプテリジン；
アセフィリン（Ａｃｅｆｙｌｌｉｎｅ）、７‐モルフォリノメチルテオフィリン、パマブロム（Ｐａｍａｂｒｏｍ）、プロテオブロミン（Ｐｒｏｔｈｅｏｂｒｏｍｉｎｅ）、及びテオブロミン等のプリン；
カンレノン、オレアンドリン（Ｏｌｅａｎｄｒｉｎ）、及びスピロノラクトン等のステロイド；
アセタゾラミド、アンブシド（Ａｍｂｕｓｉｄｅ）、アゾセミド、ブメタニド、ブタゾールアミド（Ｂｕｔａｚｏｌａｍｉｄｅ）、クロルアミノフェナミド（Ｃｈｌｏｒａｍｉｎｏｐｈｅｎａｍｉｄｅ）、クロフェナミド、クロパミド、クロレクソレン（Ｃｌｏｒｅｘｏｌｅｎｅ）、ジフェニルメタン‐４，４’‐ジスルホンアミド、ジスルファミド、エトブクスゾラミド（Ｅｔｈｂｘｚｏｌａｍｉｄｅ）、フロセミド、インダパミド、メフルシド、メタゾラミド、ピレタニド、キネタゾン、トラセミド、トリパミド、及びキシパミド等のスルホンアミド誘導体；
アミノメトラジン（Ａｍｉｎｏｍｅｔｒａｄｉｎｅ）及びアミソメトラジン（Ａｍｉｓｏｍｅｔｒａｄｉｎｅ）等のウラシル；
アマノジン（Ａｍａｎｏｚｉｎｅ）、アミロライド、アルブチン（Ａｒｂｕｔｉｎ）、クロラザニル（Ｃｈｌｏｒａｚａｎｉｌ）、エタクリン酸、エトゾリン、ヒドラカルバジン（Ｈｙｄｒａｃａｒｂａｚｉｎｅ）、イソソルビド、マンニトール、メトカルコン（Ｍｅｔｏｃｈａｌｃｏｎｅ）、ムゾリミン、ペルヘキシリン、チクリナフェン（Ｔｉｃｒｙｎａｆｅｎ）、及びウレア等のその他のもの；
ブロモクリプチン、ドペキサミン、フェノルドパム、イボパミン、リスリド、ナキサゴリド（Ｎａｘａｇｏｌｉｄｅ）、及びペルゴリド等のドーパミン受容体アンタゴニスト；
アミトラズ（Ａｍｉｔｒａｚ）、安息香酸ベンジル、カルバリル、クロタミトン、ＤＤＴ、ジキサントゲン、チオシアノ酢酸イソボルニル‐工業用（Ｉｓｏｂｏｒｎｙｌ Ｔｈｉｏｃｙａｎｏａｃｅｔａｔｅ‐Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ）、硫化石灰溶液、リンデン、マラチオン、オレイン酸水銀（ＩＩ）、メスルフェン（Ｍｅｓｕｌｐｈｅｎ）、及び硫黄‐医薬用（Ｓｕｌｐｈｕｒ‐Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）等の外部寄生生物撲滅薬；
以下を含む酵素：α‐アミラーゼ（ブタ膵臓）、リパーゼ、パンクレリパーゼ、ペプシン、及びレンニン等の消化酵素；
リゾチーム等の粘液溶解酵素；
ペニシリナーゼ等のペニシリン不活性化酵素；並びに、
コラゲナーゼ、キモパパイン、キモトリプシン、パパイン、及びトリプシン等のタンパク質分解酵素；
フルメシノール（Ｆｌｕｍｅｃｉｎｏｌ）等の酵素誘導薬（肝臓）；
以下を含むエストロゲン：ベンゼストロール（Ｂｅｎｚｅｓｔｒｏｌ）、ブロパロエストロール（Ｂｒｏｐａｒｏｅｓｔｒｏｌ）、クロロトリアニセン、ジエネストロール、ジエチルスチルベストロール、ジエチルスチルベストロールジプロピオネート、ジメストロール（Ｄｉｍｅｓｔｒｏｌ）、ホスフェストロール、ヘキセストロール、メタレネストリル、及びメテストロール（Ｍｅｔｈｅｓｔｒｏｌ）等の非ステロイド系エストロゲン；並びに、
コルポルモン（Ｃｏｌｐｏｒｍｏｎ）、抱合卵胞ホルモン（Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｅｓｔｒｏｇｅｎｉｃ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ）、エキレニン、エキリン、エストラジオール、安息香エストラジオール、エストラジオール１７β‐シピオネート、エストリオール、エストロン、エチニルエストラジオール、メストラノール、モクセストロール、ミタトリエンジオール（Ｍｙｔａｔｒｉｅｎｅｄｉｏｌ）、キネストラジオール（Ｑｕｉｎｅｓｔｒａｄｉｏｌ）、及びキネストロール等のステロイド系エストロゲン；
エンテロガストロン及びオクトレオチド等の胃酸分泌抑制薬；
２１‐アセトキシプレフネノロン（２１‐Ａｃｅｔｏｘｙｐｒｅｆｎｅｎｏｌｏｎｅ）、アールクロメタゾン（Ａａｌｃｌｏｍｅｔａｓｏｎｅ）、アルゲストン（Ａｌｇｅｓｔｏｎｅ）、アミシノニド（Ａｍｉｃｉｎｏｎｉｄｅ）、ベクロメタゾン、ベタメタゾン、ブデソニド、クロロプレドニゾン（Ｃｈｌｏｒｏｐｒｅｄｎｉｓｏｎｅ）、クロベタゾール、ブロベスタソン（Ｂｌｏｖｅｔａｓｏｎｅ）、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾン、コルチバゾール、デフラザコート、デソニド、デソキシメタゾン、デキサメサゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコルト（Ｆｌｕａｚａｃｏｒｔ）、フルクロロニド（Ｆｌｕｃｌｏｒｏｎｉｄｅ）、フルメタゾン（Ｆｌｕｍｅｈｔａｓｏｎｅ）、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチンブチル、フルオコルトロン、フルオロメトロン、酢酸フルペロロン、酢酸フルプレドニデン、フルプレドニソロン（Ｆｌｕｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、フルランドレノリド（Ｆｌｕｒａｎｄｒｅｎｏｌｉｄｅ）、ホルモコータル、ハルシノニド、ハロメタゾン、酢酸ハロプレドン、ヒドロコルタメート（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔａｍａｔｅ）、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾン（ｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、ヒドロコルチゾン２１‐コハク酸ナトリウム、ヒドロコルチゾンテブテート（Ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ Ｔｅｂｕｔａｔｅ）、マジプレドン（Ｍａｚｉｐｒｅｄｏｎｅ）、メドリゾン、メプレドニゾン、メチオルプレドニゾロン（Ｍｅｔｈｙｏｌｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、フロ酸モメタゾン、パラメタゾン、プレドニカルベート、プレドニゾロン、プレドニゾロン２１‐ジエチルアミノアセテート、プレドニゾンリン酸ナトリウム、プレドニゾロンコハク酸ナトリウム、プレドニゾロンナトリウム２１‐ｍ‐スルホベンゾエート、プレドニゾロン２１‐ステアロイルグリコレート、プレドニゾロンテブテート（Ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ Ｔｅｂｕｔａｔｅ）、プレドニゾロン２１‐トリメチルアセテート、プレドニゾン、プレドニバル（Ｐｒｅｄｎｉｖａｌ）、プレドニリデン、プレドニリデン２１‐ジエチルアミノアセテート、チキソコルタール（Ｔｉｘｏｃｏｒｔａｌ）、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド（Ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ Ｂｅｎｅｔｏｎｉｄｅ）、及びトリアムシノロンヘキサセトニド（Ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ Ｈｅｘａｃｅｔｏｎｉｄｅ）等のグルココルチコイド；
ブセレリン、クロミフェン、シクロフェニル、エピメストロール、ＦＳＨ、ＨＣＧ、及びＬＨ‐ＲＨ等の生殖腺刺激成分；
ＬＨ及びＰＭＳＧ等の性腺刺激ホルモン；
オクトレオチド及びソマトスタチン等の成長ホルモン阻害薬；
セモレリン（Ｓｅｍｏｒｅｌｉｎ）等の成長ホルモン放出因子；
ソマトトロピン等の成長刺激薬；
フェニルヒドラジン及びフェニルヒドラジン塩酸塩等の溶血薬；
臭化ヘキサジメトリン（Ｈｅｘａｄｉｍｅｔｈｒｉｎｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ）及びプロタミン等のへパリンアンタゴニスト；
Ｓ‐アデノシルメチオニン、ベタイン、カテキン、シトロン（Ｃｉｔｏｌｏｎｅ）、マロチラート、オラザミド（Ｏｒａｚａｍｉｄｅ）、ホスホリルコリン、プロトポルフィリンＩＸ、シリマリン群、チオチック酸（Ｔｈｉｏｔｉｃ Ａｃｉｄ）、及びチオプロニン等の肝臓保護薬；
アミプリローズ（Ａｍｉｐｒｉｌｏｓｅ）、ブシラミン、ジチオカルブナトリウム（Ｄｉｔｉｏｃａｒｂ Ｓｏｄｉｕｍ）、イノシンプラノベックス（Ｉｎｏｓｉｎｅ Ｐｒａｎｏｂｅｘ）、インターフェロン‐ｙ、インターロイキン‐２、レンチナン、ムロクタシン（Ｍｕｒｏｃｔａｓｉｎ）、プラトニン（Ｐｌａｔｏｎｉｎ）、プロコダゾール（Ｐｒｏｃｏｄａｚｏｌｅ）、テトラミソール（Ｔｅｔｒａｍｉｓｏｌｅ）、チモモジュリン（Ｔｈｙｍｏｍｏｄｕｌｉｎ）、チモペンチン、及びウベニメクス等の免疫調節薬；
アザチオプリン、シクロスポリン、及びミゾリビン等の免疫抑制薬；
カルバクリル樹脂（Ｃａｒｂａｃｒｙｌｉｃ Ｒｅｓｉｎｓ）、コレスチラミン樹脂、コレスチポール、ポリデキシド（Ｐｏｌｉｄｅｘｉｄｅ）、レソデック（Ｒｅｓｏｄｅｃ）、及びポリスチレンスルホン酸ナトリウム等のイオン交換樹脂；
プロラクチン等の乳汁分泌刺激ホルモン；
ブセレリン、ゴセレリン、リュープロリド、ナファレリン、及びトリプトレリン等のＬＨ‐ＲＨアゴニスト；
Ｎ‐アセチルメチオニン、塩化コリン、コリンデヒドロコレート（Ｃｈｏｌｉｎｅ Ｄｅｈｙｄｒｏｃｈｏｌａｔｅ）、クエン酸二水素コリン、イノシトール、レシチン、及びメチオニン等の脂肪作用薬；
ビスマスナトリウムトリグリコラメート（Ｂｉｓｍｕｔｈ Ｓｏｄｉｕｍ Ｔｒｉｇｌｙｃｏｌｌａｍａｔｅ）、次サリチル酸ビスマス、クロロキン、及びヒドロキシクロロキン等のエリテマトーデス抑制薬；
アルドステロン、デオキシコルチコステロン、酢酸デオキシコルチコステロン、及びフルドロコルチゾン等のミネラルコルチコイド；
カルバコール、フィゾスチグミン、ピロカルピン、及びピロカルプス等の縮瞳薬；
デプレニル、イプロクロジド、イプロニアジド、イソカルボキサジド、モクロベミド、オクトモキシン（Ｏｃｔｏｍｏｘｉｎ）、パージリン、フェネルジン、フェノキシプロパジン、ピバリルベンズヒドラジン、プロジピン（Ｐｒｏｄｉｐｉｎｅ）、トロキサトン、及びトラニルシプロミン等のモノアミンオキシダーゼ阻害薬；
アセチルシステイン、ブロムヘキシン、カルボシステイン、ドミオドール、レトステイン、リゾチーム、メシステイン塩酸塩（Ｍｅｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、メスナ、ソブレロール、ステプロニン、チオプロニン、及びチロキサポール等の粘液溶解薬；
アフロクァロン、アルクロニウム、ベシル酸アトラクリウム、バクロフェン、ベンゾクタミン、塩化ベンゾキノニウム、Ｃ‐カレバシン（Ｃ‐Ｃａｌｅｂａｓｓｉｎｅ）、カリソプロドール、クロルメザノン、カルバミン酸クロルフェネシン、クロルプロエタジン、クロゾキサゾン（Ｃｈｌｏｚｏｘａｚｏｎｅ）、クラーレ、シクラルバメート（Ｃｙｃｌａｒｂａｍａｔｅ）、シクロベンザプリン、ダントロレン、臭化デカメトニウム、ジアゼパム、エペリゾン、臭化ファザジニウム（Ｆａｚａｄｉｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、フルメトラミド（Ｆｌｕｍｅｔｒａｍｉｄｅ）、ガラミントリエチオジド、臭化ヘキサカルバコリン（Ｈｅｘａｃａｒｂａｃｈｏｌｉｎｅ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、臭化ヘキサフルオレニウム（Ｈｅｘａｆｌｕｏｒｅｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、イドロシラミド（Ｉｄｒｏｃｉｌａｍｉｄｅ）、メチル硫酸ラウエキシウム（Ｌａｕｅｘｉｕｍ Ｍｅｔｈｙｌ Ｓｕｌｆａｔｅ）、レプトダクチリン（Ｌｅｐｔｏｄａｃｔｙｌｉｎｅ）、メマンチン、メフェネシン、メフェノキサロン、メタキサロン（Ｍｅｔａｘａｌｏｎｅ）、メトカルバモール、ヨウ化メトクリン、ニメタゼパム、オルフェナドリン、臭化パンクロニウム、フェンプロバメート、フェニラミドール（Ｐｈｅｎｙｒａｍｉｄｏｌ）、臭化ピペクリウム（Ｐｉｐｅｃｕｒｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、プロモキソラン（Ｐｒｏｍｏｘｏｌａｎｅ）、硫酸キニーネ、スチラまート、臭化スクシニルコリン、塩化スクシニルコリン、ヨウ化スクシニルコリン、臭化スクセトニウム（Ｓｕｘｅｔｈｏｎｉｕｍ Ｂｒｏｍｉｄｅ）、テトラゼパム、チオコルチコシド、チザニジン、トルペリゾン、塩化ツボクラリン、臭化ベクロニウム、及びゾキソラミン（Ｚｏｘｏｌａｍｉｎｅ）等の筋弛緩薬（骨格筋）；
アミフェナゾール（Ａｍｉｐｈｅｎａｚｏｌｅ）、シクラゾシン、レバロルファン、ナダイド（Ｎａｄｉｄｅ）、ナルムフェン（Ｎａｌｍｆｅｎｅ）、ナロルフィン、ジニコチン酸ナロルフィン、ナロキソン、及びナルトレキソン等の麻薬拮抗薬；
ジゾシルピン等の神経保護薬；
アセグルタミド、アセチルカルニチン、アニラセタム、ビフェマトラン（Ｂｉｆｅｍａｔｌａｎｅ）、エキシフォン（Ｅｘｉｆｏｎｅ）、フィペキシド、イデベノン、インデロキサズン塩酸塩（Ｉｎｄｅｌｏｘａｚｕｎｅ Ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）、ニゾフェノン、オキシラセタム、ピラセタム、プロペントフィリン、ピリチノール、及びタクリン等の向知性薬；
１５‐ケトプロスタグランジン等の点眼薬；
リラキシン等の卵巣ホルモン；
カルボプロスト、カルグトシン（Ｃａｒｇｕｔｏｃｉｎ）、デアミノオキシトシン（Ｄｅａｍｉｎｏｏｘｙｔｏｃｉｎ）、エルゴノビン、ゲメプロスト、メチルエルゴノビン、オキシトシン、下垂体（後葉）製剤（Ｐｉｔｕｉｔａｒｙ（Ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ））、プロスタグランジンＥ２、プロスタグランジンＦ２ａ、及びスパルテイン等の分娩誘発薬；
ナトリウムアミロスルフェート（Ｓｏｄｉｕｍ Ａｍｙｌｏｓｕｌｆａｔｅ）等のペプシン阻害薬；
シサプリド等のぜん動刺激薬；
アリルエストレノール、アナゲストン（Ａｎａｇｅｓｔｏｎｅ）、酢酸クロマジノン、酢酸デルマジノン（Ｄｅｌｍａｄｉｎｏｎｅ Ａｃｅｔａｔｅ）、デメゲストン、デソゲストレル、ジメチステロン、ジドロゲステロン、エチステロン、エチノジオール、酢酸フルロゲストン（Ｆｌｕｒｏｇｅｓｔｏｎｅ Ａｃｅｔａｔｅ）、ゲストデン、カプロン酸ゲストノロン、ハロプロゲステロン、１７‐ヒドロキシ‐１６‐メチレン‐プロゲステロン、１７α‐ヒドロキシプロゲステロン、カプロン酸１７α‐ヒドロキシゲステロン（１７α‐Ｈｙｄｒｏｘｙｇｅｓｔｅｒｏｎｅ Ｃａｐｒｏａｔｅ）、リネストレノール、メドロゲストン、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メレンゲストロール（Ｍｅｌｅｎｇｅｓｔｒｏｌ）、ノルエチンドロン、ノルエチノドレル（Ｎｏｒｅｔｈｙｎｏｄｒｅｌ）、ノルゲステロン（Ｎｏｒｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）、ノルゲスチメート、ノルゲストレル、ノルゲストリエノン、ノルビニステロン（Ｎｏｒｖｉｎｉｓｔｅｒｏｎｅ）、ペンタゲストロン（Ｐｅｎｔａｇｅｓｔｒｏｎｅ）、プロゲステロン、プロメゲストン、キンゲストロン（Ｑｕｉｎｇｅｓｔｒｏｎｅ）、及びトレンゲストン（Ｔｒｅｎｇｅｓｔｏｎｅ）等のプロゲストーゲン；
メテルゴリン等のプロラクチン阻害薬；
アルバプロスチル（Ａｒｂａｐｒｏｓｔｉｌ）、カルボプロスト、エンプロスチル、ベメプロスト（Ｂｅｍｅｐｒｏｓｔ）、リマプロスト、ミソプロストール、オルノプロスチル、プロスタサイクリン、プロスタグランジンＥ１、プロスタグランジンＥ２、プロスタグランジンＦ２ａ、リオプロスチル（Ｒｉｏｐｒｏｓｔｉｌ）、ロサプロストール（Ｒｏｓａｐｒｏｓｔｏｌ）、スルプロストン、及びトリモプロスチル（Ｔｒｉｍｏｐｒｏｓｔｉｌ）等のプロスタグランジン及びプロスタグランジン類似体；
アプロチニン、カモスタット、ガベキセート、及びナファモスタット等のプロテアーゼ阻害薬；
アルミトリン、ベメグリド、二酸化炭素、クロプロパミド（Ｃｒｏｐｒｏｐａｍｉｄｅ）、クロテタミド（Ｃｒｏｔｅｔｈａｍｉｄｅ）、ジメフリン、ジモルホラミン、ドキサプラム、エタミバン（Ｅｔｈａｍｉｖａｎ）、ホミノベン、ロベリン、メピサノックス、メタミバム（Ｍｅｔａｍｉｖａｍ）、ニケタミド、ピクロトキシン、ピメクロン（Ｐｉｍｅｃｌｏｎｅ）、ピリドフィリン（Ｐｙｒｉｄｏｆｙｌｌｉｎｅ）、コハク酸ナトリウム、及びタクリン等の呼吸刺激薬；
エタノールアミン、エチルアミン、２‐ヘキシルデカン酸、ポリドカノール、硫酸水素キニーネ、キニーネウレア塩酸塩、リシノール酸ナトリウム、テトラデシル硫酸ナトリウム、及びトリベノシド等の硬化薬；
以下を含む、鎮静薬及び睡眠薬：アセカルブロマル（Ａｃｅｃａｒｂｒｏｍａｌ）、アプロナリド（Ａｐｒｏｎａｌｉｄｅ）、ボミソバルム（Ｂｏｍｉｓｏｖａｌｕｍ）、カプリド（Ｃａｐｕｒｉｄｅ）、カルブロマール、及びエクチルウレア（Ｅｃｔｙｌｕｒｅａ）等の非環式ウレイド；
クロルヘキサドール（Ｃｈｌｏｒｈｅｘａｄｏｌ）、エトクロルビノール、メパルフィノール（Ｍｅｐａｒｆｙｎｏｌ）、４‐メチル‐５‐チアゾールエタノール、ｔｅｒｔ‐ペンチルアルコール、及び２，２，２‐トリクロロエタノール等のアルコール；
ブトクタミド、ジエチルブロモアセトアミド、イブロタミド（Ｉｂｒｏｔａｍｉｄｅ）、イソバレリルジエチルアミド（Ｉｓｏｖａｌｅｒｙｌ Ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｄｅ）、ニアプラジン、トリセタアミド（Ｔｒｉｃｅｔａｍｉｄｅ）、トリメトジン（Ｔｒｉｍｅｔｏｚｉｎｅ）、ゾルピデム、及びゾピクロン等のアミド；
アロバルビタール、アモバルビタール、アプロバルビタール、バルビタール、ブララバルビタール（Ｂｒａｌｌａｂａｒｂｉｔａｌ）、ブタバルビタールナトリウム、ブタルビタール、ブタリロナール（Ｂｕｔａｌｌｙｌｏｎａｌ）、ブテタール（Ｂｕｔｅｔｈａｌ）、カルブバルブ（Ｃａｒｂｕｂａｒｂ）、シクロバルビタール、シクロペントバルビタール、エナリルプロピマール（Ｅｎａｌｌｙｌｐｒｏｐｙｍａｌ）、５‐エチル‐５‐（１‐ピペリジル）バルビツル酸、５‐フルフリル‐５‐イソプロピルバルビツル酸、ヘプタバルビタール、ヘキセタールナトリウム（Ｈｅｘｅｔｈａｌ Ｓｏｄｉｕｍ）、ヘキソバルビタール、メホバルビタール、メチツラール（Ｍｅｔｈｉｔｕｒａｌ）、ナルコバルビタール、ネアルバルビタール（Ｎｅａｌｂａｒｂｉｔａｌ）、ペントバルビタールナトリウム、フェナリマール（Ｐｈｅｎａｌｌｙｍａｌ）、フェノバルビタール、フェノバルビタールナトリウム、フェニルメチルバルビツル酸、プロバルビタール（Ｐｒｏｂａｒｂｉｔａｌ）、プロパリロナール（Ｐｒｏｐａｌｌｙｌｏｎａｌ）、プロキシバーバル、レポサール、セコバルビタールナトリウム、タルブタール、テトラバルビタール（Ｔｅｔｒａｂａｒｂｉｔａｌ）、ビンバルビタールナトリウム、及びビニルビタール等のバルビツル酸誘導体；
ブロチゾラム、ドキセファゼパム、エスタゾラム、フルニトラゼパム、フルラゼパム、ハロキサゾラム、ロプラゾラム、ロルメタゼパム、ニトラゼパム、クアゼパム、テマゼパム、及びトリアゾラム等のベンゾジアゼピン誘導体；
臭化アンモニウム、臭化カルシウム、カルシウムブロモラクトビオネート（Ｃａｌｃｉｕｍ Ｂｒｏｍｏｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）、臭化リチウム、臭化マグネシウム、臭化カリウム、及び臭化ナトリウム等の臭化物；
カルバミン酸ｔｅｒｔ‐アミル（Ａｍｙｌ Ｃａｒｂａｍａｔｅ‐Ｔｅｒｔｉａｒｙ）、エチナメート、ヘキサプルピメート（Ｈｅｘａｐｒｐｙｍａｔｅ）、カルバミン酸メパルフィノール（Ｍｅｐａｒｆｙｎｏｌ Ｃａｒｂａｍａｔｅ）、ノボナール（Ｎｏｖｏｎａｌ）、及びトリクロロウレタン等のカルバメート；
カルボクロラール、クロラールベタイン、クロラールホルムアミド、クロラール水和物、クロラールアンチピリン（Ｃｈｌｏｒａｌａｎｔｉｐｙｒｉｎｅ）、ジクロラールフェナゾン、ペンタエリスリトールクロラール、及びトリクロホス等のクロラール誘導体；
グルテヒミド（Ｇｌｕｔｅｈｉｍｉｄｅ）、メチプリロン、ピぺリジオン、ピリチルジオン、タグルチミド（Ｔａｇｌｕｔｉｍｉｄｅ）、及びサリドマイド等のピペリジンジオン；
エタカロン（Ｅｔａｑｕａｌｏｎｅ）、メクロカロン（Ｍｅｃｌｏｑｕａｌｏｎｅ）、及びメタカロン等のキナゾロン誘導体；並びに
アセタール、アセトフェノン、アルドール、吉草酸アンモニウム、アンフェニドン（Ａｍｐｈｅｎｉｄｏｎｅ）、α‐ブロモイソ吉草酸ｄ‐ボルニル、イソ吉草酸ｄ‐ボルニル、ブロモホルム、２‐エチルブタン酸カルシウム、カルフィネート（Ｃａｒｆｉｎａｔｅ）、α‐クロロロース（α‐Ｃｈｌｏｒｏｌｏｓｅ）、クロメチアゾール、シプリペジウム（Ｃｙｐｒｉｐｅｄｉｕｍ）、ドキシルアミン、エトドロキシジン（Ｅｔｏｄｒｏｘｉｚｉｎｅ）、エトミデート、フェナジアゾール（Ｆｅｎａｄｉａｚｏｌｅ）、ホモフェナジン（Ｈｏｍｏｆｅｎａｚｉｎｅ）、臭化水素酸、メクロキサミン（Ｍｅｃｌｏｘａｍｉｎｅ）、吉草酸メンチル（Ｍｅｎｔｈｙｌ Ｖａｌｅｒａｔｅ）、アヘン、パラアルデヒド、ペルラピン、プロピオマジン、リルマザホン、ナトリウムオキシベート（Ｓｏｄｉｕｍ Ｏｘｙｂａｔｅ）、スルホンエチルメタン、及びスルホンメタン等のその他のもの；
ＡＰＳＡＣ、プラスミン、プロ‐ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノゲン活性薬、及びウロキナーゼ等の血小板溶解薬；
ＴＲＨ及びＴＳＨ等の甲状腺刺激ホルモン；
ベンズブロマロン、エテベネシド（Ｅｔｈｅｂｅｎｅｃｉｄ）、オロト酸、オキシシンコフェン、プロベネシド、スルフィンピラゾン、チクリナフェン（Ｔｉｃｒｙｎａｆｅｎ）、及びゾキサゾラミン（Ｚｏｘａｚｏｌａｍｉｎｅ）等の尿酸排泄薬；
ベンシクラン、シンナリジン、シチコリン、シクランデラート、シクロニカート、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、エブルナモリン（Ｅｂｕｒｎａｍｏｒｉｎｅ）、フェノキセジル（Ｆｅｎｏｘｅｄｉｌ）、フルナリジン、イブジラスト、イフェンプロジル、ナフロニル（Ｎａｆｒｏｎｙｌ）、ニカメタート、ニセルゴリン、ニモジピン、パパベリン、ペンチフィリン、チノフェドリン（Ｔｉｎｏｆｅｄｒｉｎｅ）、ビンカミン、ビンポセチン、及びビキジル（Ｖｉｑｕｉｄｉｌ）等の血管拡張薬（大脳）；
アモトリフェン（Ａｍｏｔｒｉｐｈｅｎｅ）、ベンダゾール（Ｂｅｎｄａｚｏｌ）、ヘミコハク酸ベンフロジル（Ｂｅｎｆｕｒｏｄｉｌ Ｈｅｍｉｓｕｃｃｉｎａｔｅ）、ベンズヨーダロン、クロアシジン（Ｃｈｌｏａｃｉｚｉｎｅ）、クロモナール（Ｃｈｒｏｍｏｎａｒ）、クロベンフロール（Ｃｌｏｂｅｎｆｕｒｏｌ）、クロニトレート（Ｃｌｏｎｉｔｒａｔｅ）、ジラゼブ、ジピリダモール、ドロプレニルアミン（Ｄｒｏｐｒｅｎｉｌａｍｉｎｅ）、エフロキサート、エリスリトール、四硝酸エリトリチル、エタフェノン、フェンジリン、フロレジル（Ｆｌｏｒｅｄｉｌ）、ガングレフェン（Ｇａｎｇｌｅｆｅｎｅ）、ビス（β‐ジエチルアミノエチルエーテル）、ヘキセストロール（Ｈｅｘｅｓｔｒｏｌ Ｂｉｓ（β‐ｄｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ ｅｔｈｅｒ））、ヘキソベンジン、イトラミントシレート、ケリン（Ｋｈｅｌｌｉｎ）、リドフラジン、六硝酸マンニトール、メジバジン（Ｍｅｄｉｂａｚｉｎｅ）、ニコランジル、ニトログリセリン、四硝酸ペンタエリスリトール、ペントリニトロール（Ｐｅｎｔｒｉｎｉｔｒｏｌ）、ペルヘキシリン、ピメフィリン（Ｐｉｍｅｆｙｌｌｉｎｅ）、プレニラミン、硝酸プロパチル、ピリドフィリン（Ｐｙｒｉｄｏｆｙｌｌｉｎｅ）、トラピジル、トリクロミル（Ｔｒｉｃｒｏｍｙｌ）、トリメタジジン、トロールニトレートホスフェート、及びビスナジン等の血管拡張薬（冠状動脈）；
ニコチン酸アルミニウム、バメタン、ベンシクラン、ベタヒスチン、ブラジキニン、ブロビンカミン、ブホニオード（Ｂｕｆｏｎｉｏｄｅ）、ブフロメジル、ブタルラミン、セチエジル、シクロニケート、シネパジド、シンナリジン、シクランデラート、ジクロロ酢酸ジイソプロピルアミン、エレドイシン、フェノキシジル（Ｆｅｎｏｘｉｄｉｌ）、フルナリシン（Ｆｌｕｎａｒｉｓｉｎｅ）、ヘロニケート（Ｈｅｒｏｎｉｃａｔｅ）、イフェンプロジル、ニコチン酸イノシトール、イソクスプリン、カリジン、カリクレイン、モキシシリト、ナフロニル（Ｎａｆｒｏｎｙｌ）、ニカメタート、ニセルゴリン、ニコフラノース、ニコチニルアルコール、ニリドリン（Ｎｙｌｉｄｒｉｎ）、ペンチフィリン、ペントキシフィリン、ピリベジル、プロタグランジンＥ１（Ｐｒｏｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｅ１）、スロクチジル、及びニコチン酸キサンチナル（Ｘａｎｔｈｉｎａｌ Ｎｉａｃｉｎａｔｅ）等の血管拡張薬（末梢）；
ベンザロン（Ｂｅｎｚａｒｏｎｅ）、ビオフラボノイド（Ｂｉｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ）、クロモカルブ（Ｃｈｒｏｍｏｃａｒｂ）、クロベオシド（Ｃｌｏｂｅｏｓｉｄｅ）、ジオスミン、ドベシル酸カルシウム、エスシン（Ｅｓｃｉｎ）、ロレスクトール（Ｒｏｌｅｓｃｕｔｏｌ）、ロイコシアニジン（Ｌｅｕｃｏｃｙａｎｉｄｉｎ）、メテスクフィリン（Ｍｅｔｅｓｃｕｆｙｌｌｉｎｅ）、ケルセチン、ルチン、及びトロキセルチン等の血管保護薬；
ビタミンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、及びＫ、並びにこれらの誘導体、カルシフェロール、甘草、並びに、メコバラミン等のビタミン、ビタミン源、及びビタミン抽出物；
アセチルシステイン、アラントイン、アシアチコシド（Ａｓｉａｔｉｃｏｓｉｄｅ）、ヨウ化カデキソマー（Ｃａｄｅｘｏｍｅｒ Ｉｏｄｉｎｅ）、キチン、デキストラノマー、及びオキサセプロール等の傷薬；
へパリン等の抗凝固薬；
エリスロポエチン（造血薬）、フィルグラスチム、フィナステリド（良性前立腺肥大症）、及びインターフェロンβ１‐α（多発性硬化症）等の各種薬剤。
アンチセンス核酸及びｓｉＲＮＡ、又は遺伝子治療のための遺伝子等の核酸を主体とする治療薬。
ウィルス、ウィルス粒子、及びウィロイド等の遺伝子治療のための遺伝子送達運搬体。
以下を含む化学療法薬、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル及びメルファラン等のアルキル化薬；ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ミトキサントロン、バルルビシン等のアントラサイクリン；パクリタキセル及びドセタキセル、並びにその他のタキサン等の細胞骨格破壊薬；エポシロン；エトポシド、テニポシド、及びタフルポシド（Ｔａｆｌｕｐｏｓｉｄｅ）等のトポイソメラーゼＩＩの阻害薬；アザシチジン、アザチオプリン、カペシタビン、シタラビン、ドキシフルリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、メルカプトプリン、メトトレキサート、及びチオグアニン（Ｔｉｏｇｕａｎｉｎｅ）（以前はチオグアニン（Ｔｈｉｏｇｕａｎｉｎｅ））等のヌクレオチド類似体及び前駆体類似体；ブレオマイシン等のペプチド抗生物質；カルボプラチン、シスプラチン、及びオキサリプラチン等の白金を主体とする薬剤；オールトランスレチノイン酸等のレチノイド；並びに、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、及びビノレルビン等のビンカアルカロイド及び誘導体。
特定の態様では、送達される剤は、１若しくは２種類以上のタンパク質、ホルモン、ビタミン、又はミネラルである。特定の態様では、送達される剤は、インスリン、ＩＧＦ‐１、テストステロン、ビンポセチン、ヘキサレリン、ＧＨＲＰ‐６、又はカルシウムから選択される。特定の態様では、組成物には、２若しくは３種類以上の剤が含まれる。
上記の活性剤のリストは、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１２ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．（１９９６）のページＴＨＥＲ‐１乃至ＴＨＥＲ‐２８に示される薬剤の分類及び化学種に基づくものである。この参考文献は、参照することでその全体が本明細書に組み入れられる。
高分子及び低分子は、クエン酸塩（対イオン）及びイソプロパノール（溶媒）等の対イオン及び貧溶媒と相互作用を起こし、高分子又は低分子の含有量の高い無傷で分離したマイクロスフェアを形成するそれらの能力によって特徴付けることができる。マイクロスフェア内の高分子又は低分子の含有量は、マイクロスフェアに対する重量／重量（ｗ／ｗ）％で、約５％若しくは５％から、約１０％若しくは１０％、約１５％若しくは１５％、約２０％若しくは２０％、約２５％若しくは２５％、約３０％若しくは３０％、約４０％若しくは４０％、約４５％若しくは４５％、約５０％若しくは５０％、約５５％若しくは５５％、約６０％若しくは６０％、約６５％若しくは６５％、約７０％若しくは７０％、約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９１％若しくは９１％、約９２％若しくは９２％、約９３％若しくは９３％、約９４％若しくは９４％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える割合で様々に変更することができる。ある態様では、マイクロスフェアの高分子又は低分子の含有量は、マイクロスフェアを形成する前の溶液中の高分子又は低分子の初期量と実質的に同一である。
本明細書で提供される方法によるマイクロスフェアの作製に用いられる高分子は、ソマトスタチン及びリュープロリド等のペプチド、ポリペプチド及びタンパク質、バンコマイシン等の糖ペプチド、脂質、脂肪酸、多糖、及び核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＰＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ）を含む炭水化物、タバコモザイクウィルス等のウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、並びにプリオンを挙げることができる。ある態様では、高分子は、ＤＡＳ１８１（配列番号１７に示すアミノ酸残基の配列を有するシアリダーゼ融合タンパク質）、アルファ１‐抗トリプシン、ＰＩ８、エグリンｃ、エコチン、アプロチニン、組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼ、インスリン、インターフェロン、組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼ（ｒｈＤＮＡｓｅ、例えば、吸入治療薬として嚢胞性線維症の治療に有用（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；Ｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：９１８８‐９１９２（１９９０）も参照）、ヒト血清アルブミン、ヒト成長ホルモン、副甲状腺ホルモン、及びカルシトニン等の治療タンパク質を含むタンパク質である。ある態様では、タンパク質はＤＡＳ１８１であり、対イオンは硫酸ナトリウム又はクエン酸ナトリウムであり、貧溶媒はイソプロパノールである。他の態様では、高分子はｓｉＲＮＡを例とする核酸であり、対イオンはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）であり、貧溶媒はイソプロパノールである。さらに他の態様では、高分子はタバコモザイクウィルスを例とするウィルスであり、対イオンは硫酸ナトリウム／酢酸ナトリウムであり、貧溶媒はイソプロパノールである。さらなる態様では、高分子はリュープロリド又はソマトスタチンを例とするペプチドであり、対イオンはグルタミン酸ナトリウムであり、貧溶媒はイソプロパノールである。
本明細書で提供される方法によるマイクロスフェアの作製に用いられる低分子としては、アミノグリコシド、トブラマイシン及びカナマイシン、ペニシリン、並びにテトラサイクリン等の抗生物質、ステロール、ステロイドホルモン、プロスタグランジン、パクリタキセル等の化学療法薬、又は対象とするその他のいかなる低分子も挙げることができる。例えば、一つの態様では、低分子はテトラサイクリンであり、対イオンはアルギニンであり、貧溶媒はイソプロパノールである。別の態様では、低分子はカナマイシン又はトブラマイシンであり、対イオンはイタコン酸であり、貧溶媒はイソプロパノールである。さらに別の態様では、低分子はパクリタキセルであり、溶媒はｔｅｒｔ‐ブタノールであり、貧溶媒は水（ここにクエン酸ナトリウムを溶解してクエン酸バッファーを形成する）であり、対イオンはクエン酸ナトリウムである。
本明細書で提供される方法により、低分子化合物の融解又はタンパク質の変性を例とする化合物の活性を損ないその活性を低下させ得る加熱等の条件の使用を回避することができる。従って、本明細書で提供される方法に従って提供されるマイクロスフェアを用いて、タンパク質又はペプチドをその天然のコンフォメーションで存在させることを例とする、化合物の活性の維持を必要とするワクチン又はその他の治療薬を作製することができる。
マイクロスフェアの析出に用いられる溶液中の化合物の濃度は、約０．１若しくは０．１ｍｇ／ｍｌ乃至約０．２若しくは０．２ｍｇ／ｍｌ、約０５若しくは０５ｍｇ／ｍｌ、約０．８若しくは０．８ｍｇ／ｍｌ、約１．０若しくは１．０ｍｇ／ｍｌ、約２．０若しくは２．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０若しくは５．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０若しくは１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１２．０若しくは１２．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０若しくは１５．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０若しくは２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０若しくは２５．０ｍｇ／ｍｌ、約３０．０若しくは３０．０ｍｇ／ｍｌ、約３５．０若しくは３５．０ｍｇ／ｍｌ、約４０．０若しくは４０．０ｍｇ／ｍｌ、約４５．０若しくは４５．０ｍｇ／ｍｌ、約５０．０若しくは５０．０ｍｇ／ｍｌ、約６０．０若しくは６０．０ｍｇ／ｍｌ、約７０．０若しくは７０．０ｍｇ／ｍｌ、約８０．０若しくは８０．０ｍｇ／ｍｌ、約９０．０若しくは９０．０ｍｇ／ｍｌ、約１００若しくは１００ｍｇ／ｍｌ、又は約２００若しくは２００ｍｇ／ｍｌであってよい。ある態様では、濃度は、約１若しくは１ｍｇ／ｍｌ乃至約２０若しくは２０ｍｇ／ｍｌである。分子の特性（ｐＩ、疎水性、溶解性、安定性等）及びその他のプロセスパラメーターに応じて、所望のサイズのマイクロスフェアを形成させるための分子の濃度を経験的に決定することができる。一般に、対イオン及び有機溶媒の添加前の溶媒中での溶解度が低い分子は、低い濃度（０．１乃至５ｍｇ／ｍｌ）で用いて本明細書の方法に従ってマイクロスフェアを形成することができ、一方、溶解度の高い分子は、１乃至２０ｍｇ／ｍｌ又はこれを超える濃度で用いることができる。アモルファス凝集体又は凝集したマイクロスフェアの形成が観察される場合は、一般に、分子の濃度を低下させることでそのような凝集を低減又は予防するべきである。
対イオンの性質及び濃度
対イオンは、本方法を実施するｐＨにて、分子上の逆に帯電した１若しくは２つ以上の基を中和する能力を有するいずれの化合物であってもよい。分子の特性（ｐＫ、ｐＩ、帯電基の性質及び量、表面の帯電基の分布、異なるｐＨ条件下での溶解性及び構造安定性）に応じて、マイクロスフェア形成のためのｐＨを経験的に決定することができる。一般に、タンパク質等の高分子については、高分子のｐＫよりも低いｐＨにて析出を行う場合、アニオン性対イオンを用いることができる。一般に、高分子のｐＫを超えるｐＨにて析出を行う場合、カチオン性対イオンを用いることができる。対イオンは、マイクロスフェアの形成を開始させることに対する適切性に応じて経験的に選択することができる。ある態様では、対イオンは、６０ダルトン以上又は約７５ダルトン以上の分子量を有していてよい。対イオンは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）等のポリマーであってよい。
対イオンは、アニオン性、カチオン性、又は双性イオン性であってもよい。アニオン性対イオンは、無機化合物（リン酸、硫酸、チオシアン酸、チオ硫酸、ハイポクロレート（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒａｔｅ）、硝酸、臭素、ヨウ素等）、又はエノール基、ヒドロキシ基、‐ＳＨ基、カルボキシル基、カルボキシメチル基、スルホプロピル基、スルホン基、及びリン酸基を含む電荷の分極が可能である基を有する有機化合物であってもよい。その他のアニオン性基を有するか又はその他の分子特性により負電荷を有する有機化合物を用いることもできる。アニオン性対イオンとして使用可能である化合物としては、これらに限定されないが、以下のもの：オキサロ酢酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩、ピルビン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、ケトグルタル酸塩、ブタントリカルボン酸、ヒドロムコン酸、シクロブタンジカルボン酸、マレイン酸ジメチル、デオキシリボ核酸、ポリグルタミン酸、葉酸、乳酸、アスコルビン酸、カルミン酸、ソルビン酸、マロン酸、ＥＤＴＡ、ＭＯＰＳ、ＴＥＳ、ＭＥＳ、ＰＩＰＥＳ、ピリジン、トリシン、ベタイン、硫酸、チオ硫酸、リン酸、アデノシン三リン酸、硝酸、イタコン酸、ピバル酸、ジメチルマロン酸、及び過塩素酸、も挙げられる。ある態様では、本明細書で提供される方法において、イタコン酸、ピバル酸、ジメチルマロン酸、及びコハク酸が対イオンとして用いられる。
カチオン性対イオンは、無機化合物（アンモニウム、ホスホニウム、スルホニウム、セシウム、ルビジウム等）、又はアミン、アミド、イミン、イミド、グアニジン、イミダゾール、ジオキサン、アニリンとして知られる基を有する有機化合物であってもよい。その他のカチオン性基を有するか又はその他の分子特性により正電荷の分極性を有する有機化合物を用いることもできる。カチオン性対イオンとして使用可能である化合物としては、これらに限定されないが、以下のもの：トリス、ビス‐トリス、ビス‐トリスプロパン、ジアミノプロパン、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｚｉｎｅ）、ピペラジン（ｐｉｐｅｒａｄｉｎｅ）、ペンチルアミン、ジアミノブタン、プロピルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、スペルミン、スペルミジン、プトレシン、カダベリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、イミダゾール、テトラメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、アンモニウム、セシウム、ルビジウム、イミダゾール、ポリエチレンイミン（ｐｏｌｙｅｔｈｉｌｅｎｅｉｍｉｎｅ）（ＰＥＩ）、ＤＥＡＥ、ＴＥＡＥ、ＱＡＥ、も挙げられる。
いずれかの帯電基をいずれかの組合せで保持する双性イオン性対イオンを用いることもできる。双性イオン性対イオンとして使用可能である化合物としては、これらに限定されないが、以下のもの：ＨＥＰＥＳ、ＢＩＣＩＮＥ、グリシン、グリシルグリシン、６‐アミノヘキサン酸、ピペリジック酸（ｐｉｐｅｒｉｄｉｃ ａｃｉｄ）、天然及び非天然アミノ酸（例：ヒスチジン、グルタミン、アルギニン、リジン）、が挙げられる。
対イオンは、酸（例：硫酸）又は塩基（例：イミダゾール）又はそれらの塩（例：硫酸ナトリウム若しくはイミダゾール‐ＨＣｌ）として用いることができる。本明細書で提供される方法において使用可能である対イオンには、臨床上の安全性が実証された、米国国民医薬品集、米国薬局方、日本薬局方、又は欧州薬局方に掲載されるものが含まれる（クエン酸、リンゴ酸、アミノ酸、硫酸塩等）。ある態様では、本明細書で提供される方法において使用される対イオンには、安全性が確立されているか又はＧＲＡＳ（一般に安全と認められる）カテゴリーに分類されるものが含まれる。対イオン（又はその塩）は、室温（約２５℃）又は使用及び保存に意図される温度にて固体であってよい。２若しくは３種類以上の対イオンの組合せを用いることもできる。本明細書で提供される方法では、揮発性の液体対イオンを用いることもできる。
対イオンの濃度は、一般に、約０若しくは０ｍＭ乃至約０．１若しくは０．１ｍＭ、約０．２若しくは０．２ｍＭ、約０．５若しくは０．５ｍＭ、約０．８若しくは０．８ｍＭ、約１．０若しくは１．０ｍＭ、約２．０若しくは２．０ｍＭ、約３．０若しくは３．０ｍＭ、約５．０若しくは５．０ｍＭ、約７．０若しくは７．０ｍＭ、約１０．０若しくは１０．０ｍＭ、約１５．０若しくは１５．０ｍＭ、約２０．０若しくは２０．０ｍＭ、約３０．０若しくは３０．０ｍＭ、約４０．０若しくは４０．０ｍＭ、約５０．０若しくは５０．０ｍＭ、約６０．０若しくは６０．０ｍＭ、約７０．０若しくは７０．０ｍＭ、約８０．０若しくは８０．０ｍＭ、約９０．０若しくは９０．０ｍＭ、及び約１００．０若しくは１００．０ｍＭ、の範囲で維持される。ある態様では、対イオンの濃度は、約０．５ｍＭ若しくは０．５ｍＭ乃至約２０ｍＭ若しくは２０ｍＭである。高分子又は低分子の特性（ｐＩ（例：タンパク質若しくはペプチドに対して）、疎水性、溶解性、安定性等）及びその他のプロセスパラメーターに応じて、対イオンの濃度は、例えば本明細書で提供される高スループットフォーマットを用いて、経験的に決定することができる。一般に、過大サイズのマイクロスフェア、アモルファス凝集体、又は凝集したマイクロスフェアの形成は、対イオンの濃度を減少させるべきであることを示しており、一方、マイクロスフェア形成の失敗（破壊ガラス様の結晶若しくはフレーク）又は所望のサイズ未満のマイクロスフェアの形成は、対イオンの濃度を増加させるべきであることを示している。
化合物の添加なしにマイクロスフェアを生成する対イオン
対象とする各々の化合物に対して、溶媒、貧溶媒、溶媒／貧溶媒系、及び対イオン（場合によってはバッファー中、他の態様ではバッファー無しで存在）の種類並びに性質を経験的に変更することを含むマイクロスフェア形成条件のスクリーニングの過程において、化合物を添加しない状態のいくつかのコントロール反応にて対イオン／バッファーのマイクロスフェアの生成が見られた。例えば、２５％イソプロパノールを含む１５ｍＭ アルギニンの非緩衝溶液では、ある程度の結晶性を有するスコアが７のマイクロスフェアが生成した。１５％イソプロパノール中、０．２ｍＭの酢酸ナトリウムバッファーを含む２ｍＭの硫酸ナトリウムのｐＨ４又はｐＨ６の溶液では、いずれの条件においても、スコアが７のマイクロスフェアが得られた。ある程度の集塊は存在したものの、小さく、よく分離された別々であるマイクロスフェアも多く観察された。イタコン酸も、化合物を添加しない状態で、独立してマイクロスフェアを形成する傾向を示した。１５％イソプロパノールの存在下、２ｍＭのイタコン酸溶液を水酸化ナトリウムでｐＨ４に緩衝すると、マイクロスフェアが形成された。５％イソプロパノールを含有し、ｐＨ７に緩衝された２ｍＭのイタコン酸を含む同様のカクテル溶液は、吸湿性のマイクロスフェアを生成した。同様にピバル酸も、化合物の添加とは独立してマイクロスフェアを生成することが分かった。例えば、２ｍＭのピバル酸溶液を１５％イソプロパノールの存在下、水酸化ナトリウムでｐＨ５まで滴定すると、スコアが６であるピバル酸のマイクロスフェアが生成した。
上記の種類の対イオンは、それがなければマイクロスフェアを形成しない可能性のある分子において、マイクロスフェア形成を触媒するためのツールとして有用であり得る。
溶媒／貧溶媒系
本明細書で提供されるマイクロスフェア形成の方法における使用に適する溶媒／貧溶媒系は、当業者に公知であり利用可能である、その溶媒及び貧溶媒における対象とする化合物の相対溶解度に基づいていてよい。別の選択肢として、溶媒及び／又は貧溶媒における対象とする化合物の溶解度は、本明細書で提供するように、高スループットフォーマットにて種々の溶媒、貧溶媒、及び対イオンの種類並びに濃度を変化させることによって、又は溶解飽和試験を含むがこれに限定されない当業者に公知のその他の方法によって、経験的に決定することができる。
一般に、マイクロスフェアを形成させるために用いられる対象とする化合物は、選択された溶媒に可溶である（約１若しくは１ｍｇ／ｍｌ乃至約１００若しくは１００ｍｇ／ｍｌ）。貧溶媒は、対象とする化合物の溶解性が限定されているか又はそれが溶解性を持たない溶媒の群の中から選択することができる。溶媒及び貧溶媒は、一般に、カクテル溶液を調製するための溶解に用いられる温度にて、それらが相溶性であるか又は部分的に相溶性であるように選択される。しかし、ある態様では、溶媒及び貧溶媒が異なる凝固点を有し得ることも可能であり；従って、温度を下げることによって一方の成分の凍結を引き起こし、それによって貧溶媒の濃度を上昇させ、それによって析出を誘発することができる（例：５％イソプロパノールを貧溶媒として用いるＤＡＳ１８１のマイクロスフェアのいくつかの作製法において）。一般に、対象とする化合物以外の成分（例：対イオン及び賦形剤）の析出を促進しない溶媒／貧溶媒系を選択することが望ましい。溶媒及び貧溶媒は、水性液体と非水性及び／若しくは有機液体との組み合わせであってよく、又は両方が非水性及び／若しくは有機液体であってもよい。
溶媒の性質及び濃度
対象とするマイクロ粒子形成化合物の中で、数多くの高分子及び低分子が水及び水性溶液に可溶であり；従って、そのような分子に対する溶媒は、一般に水性である。水性溶媒に可溶ではない化合物の場合、本明細書で提供される方法で用いられる溶媒は、一般に、水相溶性であってよく、アルコール（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコール）、クロロホルム、塩化ジメチル、多価糖アルコール（グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール）、芳香族炭化水素、アルデヒド、ケトン、エステル、エーテル（ジエチルエーテル）、アルカン（ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル）、アルケン、共役ジエン、トルエン、ジクロロメタン、アセトニトリル、酢酸エチル、ポリオール、ポリイミド、ポリエステル、ポリアルデヒド、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、四塩化炭素、及びこれらの混合物の中から選択される。ある態様では、溶媒は揮発性であってよい。他の態様では、マイクロスフェアへの溶媒の取り込みが所望される場合、例えばマイクロスフェアに新規な特性（例：徐放性又は機械的強度の付与）を提供する、不揮発性溶媒を用いることができる。溶媒の濃度は、一般に、体積／体積（ｖ／ｖ）％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約０．５％若しくは０．５％、約１％若しくは１％、約２％若しくは２％、約５％若しくは５％、約１０％若しくは１０％、約１５％若しくは１５％、約２０％若しくは２０％、約２５％若しくは２５％、約３０％若しくは３０％、約４０％若しくは４０％、又は約５０％若しくは５０％で維持してよい。ある態様では、溶媒の濃度は、体積／体積％で、約１％又は１％乃至約３０％又は３０％である。水に対して部分的に相溶性であるか又は完全に非相溶性である有機化合物も、水不溶性化合物に対する溶媒として使用可能である。
本明細書で提供される方法において使用可能である有機溶媒には、アルコール、並びに、医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）統一三者間ガイドライン（不純物：残留溶媒に関するガイドライン）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ（ＩＣＨ）Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｉｄｕａｌ Ｓｏｌｖｅｎｔｓ））にてクラス３及び２の溶媒として指定され、製薬業界及び食品業界にて安全な取り扱いが確立されたその他の溶媒が含まれる。
分子の特性（疎水性、溶解性、安定性等）及びその他のプロセスパラメーターに応じて、例えばマイクロタイタープレート又は類似のチップ又はその他の装置上での高スループットのスクリーニングを用いて、溶媒の選択及び濃度を最適化することができる。一般に、冷却開始前の制御されない析出、過大サイズのマイクロスフェア、アモルファス凝集体、凝集したマイクロスフェア、又は粘着性凝集体の形成は、薬剤の溶解性がより高い溶媒を使用するべきであることを示しており、一方、マイクロスフェア形成の失敗（破壊ガラス様の結晶若しくはフレーク）又は所望のサイズ未満のマイクロスフェアの形成は、薬剤の溶解性がより低い溶媒の使用が有益であり得ることを示している。
貧溶媒の性質及び濃度
一般に、対象とする化合物が水溶性であり、水溶液である場合、貧溶媒は有機溶媒である。一方、対象とする化合物が非水溶性である場合、貧溶媒は水性溶媒である。しかし、溶媒及び貧溶媒がいずれも有機溶媒であってもよい。カクテル試薬の混合及び／又はマイクロスフェア形成を開始するための冷却による析出の条件下にて、貧溶媒は、一般に、マイクロ粒子を形成する化合物が溶解される溶媒と相溶性であるか又は部分的に相溶性である。そのような溶媒としては、例えば、水及びその他の水溶液が挙げられ、バッファー、アルコール（メタノール、エタノール、１‐プロパノール、イソプロパノール、ブタノール、ｔｅｒｔ‐ブチルアルコール）、クロロホルム、多価糖アルコール（グリセリン、エリスリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトール）、芳香族炭化水素、アルデヒド、ケトン、エステル、エーテル（ジエチルエーテル）、アルカン（ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル）、アルケン、共役ジエン、トルエン、ジクロロメタン、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、酢酸エチル、ポリオール、ポリイミド、ポリエステル、ポリアルデヒド、及びこれらの混合物等である。
ある態様では、有機溶媒は揮発性であってよい。他の態様では、マイクロスフェアへの有機溶媒の取り込みが所望される場合、例えばマイクロスフェアに新規な特性（例：徐放性又は機械的強度の付与）を提供する、不揮発性有機溶媒を用いることができる。有機溶媒の濃度は、一般に、体積／体積（ｖ／ｖ）％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約０．５％若しくは０．５％、約１％若しくは１％、約２％若しくは２％、約５％若しくは５％、約１０％若しくは１０％、約１５％若しくは１５％、約２０％若しくは２０％、約２５％若しくは２５％、約３０％若しくは３０％、約４０％若しくは４０％、又は約５０％若しくは５０％で維持してよい。ある態様では、有機溶媒の濃度は、体積／体積％で、約１％又は１％乃至約３０％又は３０％である。水に対して部分的に相溶性であるか又は完全に非相溶性である有機化合物も使用可能である。
本明細書で提供される方法において使用可能である有機溶媒には、アルコール、並びに、医薬品規制調和国際会議（ＩＣＨ）統一三者間ガイドライン（不純物：残留溶媒に関するガイドライン）（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｎ Ｈａｒｍｏｎｉｓａｔｉｏｎ（ＩＣＨ） Ｈａｒｍｏｎｉｓｅｄ Ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ（Ｉｍｐｕｒｉｔｉｅｓ：Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ ｆｏｒ Ｒｅｓｉｄｕａｌ Ｓｏｌｖｅｎｔｓ））にてクラス３及び２の溶媒として指定され、製薬業界及び食品業界にて安全な取り扱いが確立されたその他の溶媒が含まれる。
分子の特性（疎水性、溶解性、安定性等）及びその他のプロセスパラメーターに応じて、例えばマイクロタイタープレート又は類似のチップ又はその他の装置上での高スループットのスクリーニングを用いて、貧溶媒の選択及び濃度を最適化することができる。一般に、冷却開始前の制御されない析出、過大サイズのマイクロスフェア、アモルファス凝集体、凝集したマイクロスフェア、又は粘着性凝集体の形成は、貧溶媒の濃度を低下させるべきであることを示しており、一方、マイクロスフェア形成の失敗（破壊ガラス様の結晶若しくはフレーク）又は所望のサイズ未満のマイクロスフェアの形成は、貧溶媒の濃度を上昇させるべきであることを示している。
ｐＨ
対イオンは、マイクロスフェア形成を開始させることに加えて、バッファーとしても作用することができる。別の選択肢として、ある態様では、緩衝化合物を用いて所望のｐＨを得ることができる。ある態様では、緩衝化合物は、６０Ｄａ以上である。分子の特性（ｐＩ、特定のｐＨでの疎水性、溶解性、及び安定性等）及びその他のプロセスパラメーターに応じて、所望の大きさのマイクロスフェアの形成を達成し、分子の活性を保持するために、最適なｐＨを経験的に調節することができる。一般に、マイクロスフェア形成の失敗（破壊ガラス様結晶又はフレーク）は、用いた条件下にて分子の溶解性が高すぎる可能性があることを示している。アモルファス凝集体の形成は、析出が十分に制御されておらず、タンパク質等の分子が、用いたｐＨにおいて安定ではないか又は可溶ではない可能性があることを示している場合がある。
特定の化合物／対イオンの組み合わせが、特定のｐＨ値において、直ちに制御されない析出を引き起こし得ることが観察されている。本明細書で提供される高スループットのスクリーニング方法を用いて、所望の大きさのマイクロスフェアを形成させるのに適切なタンパク質、ｐＨ、及び対イオンの組合せを経験的に決定することができる。例えば、カクテル溶液のｐＨの変更、異なる対イオンの使用、又はカクテル溶液中の化合物濃度の低下を含む経験的な決定法を、セミ高スループット又は高スループットのフォーマットにて、都合よく迅速に実施することができる。一般に、タンパク質又はポリペプチドを主体とするマイクロスフェアを形成する場合は、そのタンパク質のｐＩ未満のｐＨ値にて最適なマイクロスフェア形成が得られる。そのような経験的な最適化法は、本明細書で提供され例示されるその他の高分子及び低分子に適用可能である。
イオン強度
カクテル溶液のイオン強度は、対イオン又は塩化物若しくは酢酸塩等のその他の塩の濃度を調節することによって調整することができる。ある態様では、マイクロスフェアの作製に追加の塩を必要としない。特定の態様では、イオン強度を調節することで、分子の構造完全性及び活性を保持することができる。特定の塩の存在が有益となり得るその他の用途の例としては、非経口及びその他の薬剤の製剤、又はマイクロスフェアの再構成の際に特定の浸透圧若しくは緩衝能が必要とされる場合のある食品が挙げられる。
冷却勾配
分子、対イオン、及び適切な溶媒／貧溶媒系を含むカクテル溶液を、冷却の前に、分子が可溶である温度、一般的には約−１５℃乃至約３０℃にて最初に調製する。ある態様では、冷却前の最初の温度は環境温度（１８℃から２５乃至３０℃まで）である。他の態様では、例えば低分子の場合、化合物はこれよりもかなり高い温度、例えば、約５０℃若しくは５０℃、約６０℃若しくは６０℃、約６５℃若しくは６５℃、約７０℃若しくは７０℃、約７５℃若しくは７５℃、約８０℃若しくは８０℃、約８５℃若しくは８５℃、約９０℃若しくは９０℃、約９５℃若しくは９５℃、約１００℃若しくは１００℃、約１２５℃若しくは１２５℃、約１５０℃若しくは１５０℃、約１７５℃若しくは１７５℃、約２００℃若しくは２００℃、又はこれを超える温度にて溶媒及び／又は貧溶媒系に溶解し、続いて、例えば、約１９０℃若しくは１９０℃、約１７０℃若しくは１７０℃、約１５０℃若しくは１５０℃、約１２５℃若しくは１２５℃、約１００℃若しくは１００℃、約８０℃若しくは８０℃、約７５℃若しくは７５℃、約６０℃若しくは６０℃、約５０℃若しくは５０℃、約４０℃若しくは４０℃、約３０℃若しくは３０℃、約２０℃若しくは２０℃、約１５℃若しくは１５℃、又はこれより低い温度であるマイクロスフェアが形成される温度まで冷却してよい。マイクロスフェアは、高分子が溶液中に溶解し、溶解された状態となる温度よりも低い温度まで少しずつ冷却することによる析出、相分離、又はコロイド形成等のプロセスによって形成される。冷却を行う速度により、マイクロスフェアの形成、及びサイズ等のその他の特性を制御することができる。一般に、高分子がタンパク質である場合は、液体窒素中での瞬間凍結ではマイクロスフェアは生成されない
カクテル溶液の冷却及び凍結を行う速度（冷却勾配）により、マイクロスフェアの最終的なサイズを決定することができる。一般に、より速い冷却勾配ではより小さなマイクロスフェアが得られ、一方、より遅い冷却勾配ではより大きなマイクロスフェアが得られる。いかなる理論にも束縛されるものではないが、冷却速度により：（１）初期のより小さなマイクロスフェアを生成する核形成の速度、及び（２）初期のマイクロスフェアが合着（凝集）してより大きなマイクロスフェアへとアニールされる融合プロセスの速度、を決定することができる。より小さな粒子からより大きな粒子への融合は、例えば、凍結の前にマイクロスフェアの懸濁液が存在する時間の長さ等によって決定することができる、時間依存的なプロセスである。本明細書で提供されるマイクロスフェア組成物中における分子間の結合の可逆性のために、より大きな粒子へアニールされるより小さなマイクロスフェアは、滑らかな表面を有するマイクロスフェアを生成することができる。所望のマイクロ粒子のサイズに応じて、冷却速度は、約０．０１℃／分若しくは０．０１℃／分乃至約２０℃／分若しくは２０℃／分；約０．０５℃／分若しくは０．０５℃／分又は約０．１℃／分若しくは０．１℃／分乃至約１０℃／分若しくは１０℃／分又は約１５℃／分若しくは１５℃／分、約０．２℃／分若しくは０．２℃／分乃至約５℃／分若しくは５℃／分、約０．５℃／分若しくは０．５℃／分乃至約２℃／分若しくは２℃／分、又は約１℃／分若しくは１℃／分、であってよい。ある態様では、冷却勾配は、毎分０．１℃乃至毎分約４０℃であってよい。他の態様では、冷却勾配は、毎分約０．５℃乃至毎分１５℃であってよい。
特定の必要性に応じて、ある態様では、作製プロセスを特定の装置へ適合させることが望ましい場合がある。ある態様では、温度が制御される棚を備えた凍結乾燥器を冷却に用いてよい。他の態様では、吸熱反応を冷却に用いてよい。作製されたマイクロスフェアが所望するよりも大きい場合、分子の濃度、貧溶媒、対イオン、イオン強度、及び／又はｐＨを含むその他のプロセスパラメーターを変更してマイクロスフェアのサイズを所望するように低下させることができる。
より高速な冷却勾配（より小さな粒子サイズ）のためには、カクテル溶液を、連続モード等で使用した熱交換器に通してよい。マイクロスフェアのサイズを増加させる必要がある場合は、カクテル溶液成分（分子、貧溶媒、対イオン）のうちの１つの濃度を増加させることによって、マイクロスフェアのサイズを所望するように増加させることができる。
一般に、冷却は、凝集体及び結晶又はガラス様の微粒子の形成を防ぐために一定の速度で均一に行うべきである。貧溶媒の濃度に応じて、いくつかの方法によって分子をマイクロスフェアへと析出させることができる。貧溶媒の濃度がより高い場合は（実際に使用する成分に応じて、約５％乃至４０％）、一般に、カクテル溶液が依然として液体の形態である時点にてマイクロスフェアの形成が可能である。貧溶媒の濃度がより低い場合は（実際に使用する成分に応じて、２乃至２５％）、氷晶がまず形成され、その後、放出された分子及び貧溶媒が局所的な臨界濃度に達して析出が可能となる。凍結乾燥器トレイの底部近辺の層の温度をさらに低下させると、懸濁液が完全に凝固し、貧溶媒がさらに最上層へと放出され得る。最上層において貧溶媒が過剰となることにより、分子の制御されない析出、及びマイクロスフェアの凝集が引き起こされ得る。通常、この効果は、カクテル溶液中の成分である、分子、対イオン、貧溶媒、塩等の適切な比率を選択することで緩和することができる。さらに、凍結乾燥トレイ中のカクテル溶液の薄い層を維持するか、又は冷却中にカクテル溶液を混合することにより、凝集体及び結晶の形成を防いで、均一なマイクロスフェアを得ることができる。例えば、比較的低濃度のイソプロパノール（例：２乃至６％）を用い、カクテル溶液の薄い層（１０乃至２０ｍｍ）をトレイ内に充填し、トレイを予め冷却した棚（通常は−３０℃乃至−７５℃）に配置した場合、均一なマイクロスフェアを得ることができる。
本明細書で提供される方法により、ある条件下にて、実質的にすべての又はすべての分子を溶液からマイクロスフェアへと取り込ませることが可能である。
マイクロ粒子形成条件の高スループットスクリーニング及び粒子形成の最適化
分子の特性に応じて、本明細書で提供される方法に従うマイクロスフェアの作製に用いられるカクテル溶液の組成を最適化することができる。最適化は、例えば、数十乃至数百乃至数千乃至数万という種類のカクテル溶液を同時にスクリーニングすることができるマイクロタイタープレート若しくはチップを用いた、中又は高スループットフォーマットにて、迅速に行うことができる。ある態様では、多くのｐＨ値を、種々の濃度のカチオン性、アニオン性、又は双性イオン性対イオン及び貧溶媒と合わせてスクリーニングすることができる。例えば、スクリーニングは、対象とする分子が種々の濃度で各々に添加された同一のマイクロタイタープレートを複数用いて行うことができる。試験条件の各セットは、２個の反復サンプルにてスクリーニングすることができる。ある態様では、平底のウェルを有するマイクロプレートを、このマイクロタイタープレートの端部を取り除いて凍結乾燥器の棚とウェルの底部との間での良好な熱伝導を可能とした状態で用いることができる。マイクロプレートを凍結乾燥器の棚に配置し、冷却してマイクロスフェアを形成させ、次いで懸濁液を凝固させることができる。ウェルの内容物の凍結の際には、真空を適用してよい。凍結乾燥の終了時に、２個の反復サンプルプレートのうち１つを水又は選択したバッファーによって再構成し、特定の条件によって分子が不溶性となったか、又はその活性が低下したかを観察することができる。容易に再溶解可能であるか又は所望の特性を有するマイクロスフェアを提供可能である物質が得られた条件を、分光アッセイ、クロマトグラフィーアッセイ、酵素アッセイ、又はその他のアッセイによるさらなる分析に掛け、天然の構造及び活性が保存されていることを確認することができる。反復サンプルプレート中の凍結乾燥した物質を用いて顕微鏡観察を行い、マイクロスフェアが形成されたかどうかを判定することができる。マイクロスフェアを生成した条件をさらに変更し、微調整を行うことで、所望のサイズ及び特性を有するマイクロスフェアを作製することができる。
高スループットスクリーニングを行うためのキットを提供することができ、このキットは、１若しくは２種類以上の分子、バッファー、予め調製した既知組成（貧溶媒、対イオン）のカクテル溶液、及び／又は塩を含む、本明細書で提供される方法に用いられるすべての成分を含むことができる。キットには、各マイクロタイタープレート中に、既定のｐＨ、対イオン、イオン強度、及び貧溶媒である３、４、５、１０、１５、２０、３０、４０、５０、１００、又はこれを超える種類の（ある態様では９６種類以上）バッファーを含むことができる。キットと共に供給されるマイクロタイタープレートは、ウェルの底部が、凍結乾燥器の棚と直接接触するように変更することができる。
Ｃ．マイクロ粒子の大スケールでの製造
本明細書で提供される方法は、マイクロスフェアの大量生産のためにスケールアップすることができる。例えば、本明細書で述べるバッチプロセスは、高品質の乾燥粉末マイクロスフェアを、混合タンクの能力及び／又は凍結乾燥器の棚のスペースに基づいて、例えば数ミリグラム乃至約１キログラムの範囲の量で製造するのに適している。本明細書で述べる別の選択肢としての「連続」プロセスを用いると、例えば、数百グラム乃至１００キログラム又はこれを超える範囲の量（１００グラム乃至１００ｋｇ、及びこれを超える量）を製造することができる。連続プロセスのさらなる利点は、カクテル溶液の冷却がより良好に制御されることである。
バッチプロセス又は連続プロセスによる大スケールの製造は、例えば、以下で述べる１若しくは２つ以上の工程のいずれかの組合せに従って行うことができる：
・マイクロスフェアへの分子の析出 この工程は、所望の濃度の分子、有機溶媒、及び対イオンを含むカクテル溶液を１若しくは複数の凍結乾燥トレイ中に配置し、この１若しくは複数のトレイを凍結乾燥器の棚に配置することにより、バッチモードで行うことができる。別の選択肢として、冷却したプラットホーム上又はその他の種類の装置（例：冷凍庫）にてトレイを冷却して凍結させ、凍結した状態である期間保存し、後に凍結乾燥してもよい。別の選択肢として、容器を冷却表面上に配置するか若しくは冷却コイルを液体中に浸漬させるか、又はぜん動式ポンプを用いてカクテル溶液を熱交換器中に再循環させながら、撹拌した状態の容器内で析出させることでマイクロスフェアを形成してもよい。別の選択肢として、ぜん動式ポンプを用いてカクテル溶液を１若しくは複数の熱交換器に一回通すことによって連続モードにて析出させることにより、マイクロスフェアを形成してもよい。
・バルク液体の除去 マイクロスフェアの懸濁液は、標準的な遠心分離、連続流遠心分離（例：ＣＡＲＲ ＶｉａＦｕｇｅ Ｐｉｌｏｔ）、又はろ過（例：グラスファイバー、焼結ガラス、ポリマーフィルター、中空糸カートリッジ（例：ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製のもの）、若しくはタンジェンシャルフローろ過カセット（ＴＦＦカセット、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ若しくはＳａｒｔｏｒｉｕｓ製のもの等））を用いることによって濃縮することができる。バルク液体の除去（５０％以上）により、乾燥サイクルの迅速化、並びに高い効率及びスループットが可能となる。
・マイクロスフェアの乾燥 いずれかのモードで形成され回収されたマイクロスフェアは、従来の凍結乾燥によって乾燥することができる。別の選択肢として、マイクロスフェアは、環境温度下及び大気圧下にて乾燥してもよく、これによって凍結乾燥器の使用が排除される。
Ｄ．マイクロ粒子組成物
本明細書で提供される方法で得られるマイクロ粒子組成物に含まれる分子は、この方法によって、構造的及び化学的に実質的に変化しない。例えば、分子が緑色蛍光タンパク質又は赤色蛍光タンパク質等の高分子である場合、それらの蛍光、並びにタンパク質の天然のコンフォメーション及び活性は、マイクロ粒子中で維持されている。マイクロスフェアに付随する溶媒及びその他の成分以外の実質的に全ての溶媒及び／又は水分を揮発させることにより得られた乾燥マイクロスフェアは、保存が可能であり、その活性は、再構成により実質的に回復することができる。本明細書で提供されるマイクロ粒子は、その比較的低い水分含有率、例えば、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約０．０５％若しくは０．０５％、約０．１％若しくは０．１％、約０．２％若しくは０．２％、約０．３％若しくは０．３％、約０．５％若しくは０．５％、約１．０％若しくは１．０％、約２．０％若しくは２．０％、約３．０％若しくは３．０％、約４．０％若しくは４．０％、約５．０％若しくは５．０％、約５．５％若しくは５．５％、約６．０％若しくは６．０％、約６．５％若しくは６．５％、約７．０％若しくは７．０％、約７．５％若しくは７．５％、約８．０％若しくは８．０％、約８．５％若しくは８．５％、約９．０％若しくは９．０％、約９．５％若しくは９．５％、約１０．０％若しくは１０．０％、約１０．５％若しくは１０．５％、約１１．０％若しくは１１．０％、約１１．５％若しくは１１．５％、約１２．０％若しくは１２．０％、約１２．５％若しくは１２．５％、約１４％若しくは１４％、約１５％若しくは１５％、約１６％若しくは１６％、約１７％若しくは１７％、約１８％若しくは１８％、約１９％若しくは１９％、又は約２０％若しくは２０％、である水分含有量により、安定性を向上させることができる。本明細書で提供される方法によって得られたマイクロスフェアは、サイズ及び形状が均一であり、所望の特性を有するものを再現性良く得ることができる。乾燥製剤の作製に従来から用いられているその他の技術（例：塩析、アルコール又はアセトン析出、凍結乾燥）は、タンパク質の変性を例とする、分子の完全な又は部分的な不活性化をもたらす可能性がある。さらに、本明細書で提供される方法によって作製されるマイクロスフェアでは、複雑な又は専用のスプレードライ、スプレーフリーズドライ、超臨界流体貧溶媒技術に基づくプロセス、又はミリングプロセスの必要性が回避される（例えば以下を参照されたい。Ｌａｕｂｅ ＢＬ．Ｔｈｅ ｅｘｐａｎｄｉｎｇ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｅｒｏｓｏｌｓ ｉｎ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ，ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，ａｎｄ ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ．Ｒｅｓｐｉｒ Ｃａｒｅ ２００５；５０（９）：１１６１‐１１７６；Ｔａｙｌｏｒ Ｇ，Ｇｕｍｂｌｅｔｏｎ Ｍ．Ａｅｒｏｓｏｌｓ ｆｏｒ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｄｅｓｉｇｎ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ａｎｄ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２００４；２（３）：１４３‐１５５；Ｓｍｙｔｈ ＨＤＣ，Ｈｉｃｋｅｙ ＡＪ．Ｃａｒｒｉｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ Ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ Ｄｅｓｉｇｎ．Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ ２００５；３（２）：１１７‐１３２；Ｃｒｙａｎ ＳＡ．Ｃａｒｒｉｅｒ‐ｂａｓｅｄ ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄｒｕｇｓ ｔｏ ｔｈｅ ｌｕｎｇｓ．ＡＡＰＳ Ｊ ２００５；７（１）：Ｅ２０‐Ｅ４１；ＬｉＣａｌｓｉ Ｃ，Ｍａｎｉａｃｉ ＭＪ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｔ，Ｐｈｉｌｌｉｐｓ Ｅ，Ｗａｒｄ ＧＨ，Ｗｉｔｈａｍ Ｃ．Ａ ｐｏｗｄｅｒ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅａｓｌｅｓ ｖａｃｃｉｎｅ ｆｏｒ ａｅｒｏｓｏｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｖａｃｃｉｎｅ ２００１；１９（１７‐１９）：２６２９‐２６３６；Ｍａａ ＹＦ，Ｐｒｅｓｔｒｅｌｓｋｉ ＳＪ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｐｏｗｄｅｒｓ：ｐａｒｔｉｃｌｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２０００；１（３）：２８３‐３０２；Ｍａａ ＹＦ，Ｎｇｕｙｅｎ ＰＡ，Ｈｓｕ ＳＷ．Ｓｐｒａｙ‐ｄｒｙｉｎｇ ｏｆ ａｉｒ‐ｌｉｑｕｉｄ ｉｎｔｅｒｆａｃｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ １９９８；８７（２）：１５２‐１５９；Ｖａｎｂｅｖｅｒ Ｒ，Ｍｉｎｔｚｅｓ ＪＤ， Ｗａｎｇ Ｊ ｅｔ ａｌ．Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｌａｒｇｅ ｐｏｒｏｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １９９９；１６（１１）：１７３５‐１７４２；Ｂｏｔ ＡＩ，Ｔａｒａｒａ ＴＥ，Ｓｍｉｔｈ ＤＪ，Ｂｏｔ ＳＲ，Ｗｏｏｄｓ ＣＭ，Ｗｅｅｒｓ ＪＧ．Ｎｏｖｅｌ ｌｉｐｉｄ‐ｂａｓｅｄ ｈｏｌｌｏｗ‐ｐｏｒｏｕｓ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ａ ｐｌａｔｆｏｒｍ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｔｒａｃｔ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ ２０００；１７（３）：２７５‐２８３；Ｍａａ ＹＦ，Ｎｇｕｙｅｎ ＰＡ，Ｓｗｅｅｎｅｙ Ｔ，Ｓｈｉｒｅ ＳＪ，Ｈｓｕ ＣＣ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｐｏｗｄｅｒｓ：ｓｐｒａｙ ｄｒｙｉｎｇ ｖｓ ｓｐｒａｙ ｆｒｅｅｚｅ ｄｒｙｉｎｇ．Ｐｈａｒｍ Ｒｅｓ １９９９；１６（２）：２４９‐２５４；Ｓｅｌｌｅｒｓ ＳＰ，Ｃｌａｒｋ ＧＳ，Ｓｉｅｖｅｒｓ ＲＥ，Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ＪＦ．Ｄｒｙ ｐｏｗｄｅｒｓ ｏｆ ｓｔａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ ｆｒｏｍ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｕｓｉｎｇ ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ ＣＯ（２）‐ａｓｓｉｓｔｅｄ ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ．Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００１；９０（６）７８５‐７９７；Ｇａｒｃｉａ‐Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ Ｌ，Ｍｏｒｃｏｌ Ｔ，Ｂｅｌｌ ＳＪ， Ｈｉｃｋｅｙ ＡＪ．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ ｆｏｒ ｉｎｓｕｌｉｎ ｉｎ ｒａｔｓ．ＡＡＰＳ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００３；５（２）：Ｅ９；Ｐｆｕｔｚｎｅｒ Ａ，Ｆｌａｃｋｅ Ｆ，Ｐｏｈｌ Ｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｉｌｏｔ ｓｔｕｄｙ ｗｉｔｈ ｔｅｃｈｎｏｓｐｈｅｒｅ／ＰＴＨ（１‐３４）‐ａ ｎｅｗ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｐａｒａｔｈｙｒｏｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ （１‐３４）．Ｈｏｒｍ Ｍｅｔａｂ Ｒｅｓ ２００３；３５（５）：３１９‐３２３； Ａｌｃｏｃｋ Ｒ， Ｂｌａｉｒ ＪＡ，Ｏ’Ｍａｈｏｎｙ ＤＪ，Ｒａｏｏｆ Ａ，Ｑｕｉｒｋ ＡＶ．Ｍｏｄｉｆｙｉｎｇ ｔｈｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｏｆ ｌｅｕｐｒｏｌｉｄｅ ｆｒｏｍ ｓｐｒａｙ ｄｒｉｅｄ ＯＥＤ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．Ｊ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｒｅｌｅａｓｅ ２００２；８２（２‐３）：４２９‐４４０；Ｇｒｅｎｈａ Ａ，Ｓｅｉｊｏ Ｂ，Ｒｅｍｕｎａｎ‐Ｌｏｐｅｚ Ｃ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｌｕｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ ２００５；２５（４‐５）：４２７‐４３７；Ｅｄｗａｒｄｓ ＤＡ，Ｈａｎｅｓ Ｊ，Ｃａｐｏｎｅｔｔｉ Ｇ ｅｔ ａｌ．Ｌａｒｇｅ ｐｏｒｏｕｓ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ．Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９７；２７６（５３２０）：１８６８‐１８７１；ＭｃＫｅｎｎａ ＢＪ，Ｂｉｒｋｅｄａｌ Ｈ，Ｂａｒｔｌ ＭＨ，Ｄｅｍｉｎｇ ＴＪ，Ｓｔｕｃｋｙ ＧＤ．Ｍｉｃｒｏｍｅｔｅｒ‐ｓｉｚｅｄ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ａｓｓｅｍｂｌｉｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｂｙ ａｃｉｄ‐ｂａｓｅ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ Ｉｎｔ Ｅｄ Ｅｎｇｌ ２００４；４３（４２）：５６５２‐５６５５；Ｏｈ Ｍ， Ｍｉｒｋｉｎ ＣＡ．Ｃｈｅｍｉｃａｌｌｙ ｔａｉｌｏｒａｂｌｅ ｃｏｌｌｏｉｄａｌ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｒｏｍ ｉｎｆｉｎｉｔｅ ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ２００５； ４３８（７０６８）：６５１‐６５４；米国特許第５，９８１，７１９号；米国特許第５，８４９，８８４号及び米国特許第６，０９０，９２５号；米国特許出願第２００５０２３４１１４号；米国特許第６，０５１，２５６号）。
本明細書で提供される方法で得られるマイクロ粒子は、どのような形状であってもよく、球形状、楕円形状、四角形状、三角形状、及び多角形状を含むがこれらに限定されない規則的な幾何学的形状、又は不規則形状であってよい。マイクロ粒子のサイズ（幅又は直径の平均）は、約０．００１若しくは０．００１ミクロン乃至約０．００２若しくは０．００２、約０．００５若しくは０．００５、約０．０１若しくは０．０１、約０．０２若しくは０．０２、約０．０３若しくは０．０３、約０．０５若しくは０．０５、約０．１若しくは０．１、約０．０２若しくは０．０２、約０．０３若しくは０．０３、約０．５若しくは０．５、約１．０若しくは１．０、約２．０若しくは２．０、約２．５若しくは２．５、約３．０若しくは３．０、約３．５若しくは３．５、約４．０若しくは４．０、約４．５若しくは４．５、約５．０若しくは５．０、約５．５若しくは５．５、約６．０若しくは６．０、約６．５若しくは６．５、約７．０若しくは７．０、約７．５若しくは７．５、約８．０若しくは８．０、約８．５若しくは８．５、約９．０若しくは９．０、約９．５若しくは９．５、約１０．０若しくは１０．０、約１５．０若しくは１５．０、約２０．０若しくは２０．０、約２５．０若しくは２５．０、約３０．０若しくは３０．０、約３５．０若しくは３５．０、約４０．０若しくは４０．０、約４５．０若しくは４５．０、又は約５０．０若しくは５０．０ミクロン、又はこれを超える範囲内であってよい。肺胞への経肺投与の場合は、用途に応じて、約０．１ミクロン若しくはそれ未満乃至約０．５若しくは０．５ミクロン、またはそれを超えるミクロン、最大約０．６若しくは０．６、約０．７若しくは０．７、約０．８若しくは０．８、約０．９若しくは０．９、約１．０若しくは１．０、約１．５若しくは１．５、約２．０若しくは２．０、又は約５．０若しくは５．０ミクロン、又はそれを超えるミクロンまで、のサイズであってよい。咽喉、気管、及び気管支への吸入による投与の場合は、約０．５若しくは０．５ミクロン乃至約１．０若しくは１．０、約１．５若しくは１．５、約２．０若しくは２．０、約２．５若しくは２．５、約３．０若しくは３．０、約３．５若しくは３．５、約４．０若しくは４．０、約４．５若しくは４．５、約５．０若しくは５．０、約５．５若しくは５．５、約６．０若しくは６．０、約６．５若しくは６．５、約７．０若しくは７．０、約７．５若しくは７．５、約８．０若しくは８．０、約８．５若しくは８．５、約９．０若しくは９．０、約９．５若しくは９．５、約９．５若しくは９．５、約１０．０若しくは１０．０、約１０．０若しくは１０．０、約１５．０若しくは１５．０、又は約２０．０若しくは２０．０ミクロン、又はそれを超えるミクロン、のサイズであってよく、又は、ある態様では、約１．０若しくは１．０ミクロン乃至約２．０若しくは２．０ミクロンであってよい。ある態様では、マイクロ粒子の形状は実質的に球形状である。
本明細書で提供される方法に従うマイクロ粒子の形成に使用可能である分子として、防止剤（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ ａｇｅｎｔｓ）、予防薬、治療薬及び診断薬、加工食品、栄養補助食品（ｄｉｅｔａｒｙ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ）、栄養補助薬、美容化合物、並びにポリマーが挙げられる。ある態様では、マイクロスフェアの溶解性の修飾及び／又はその機械的強度の向上のために、カクテル製剤中に架橋剤、塩、又はその他の化合物が含まれていてよい。ある態様では、ほとんどの水性又は有機溶媒に不溶性であるマイクロスフェアを用いて、クロマトグラフィー用樹脂及び分散性の研磨剤等の粒子を製造することができる。他の態様では、送達のための医薬運搬体等の溶媒に対して部分的な溶解性を有するマイクロスフェアが、徐放性活性剤又は治療用製剤の製造に有用であり得る。
ある態様では、本明細書で提供されるマイクロ粒子を吸入装置と組合せて用いることで、対象の呼吸気道及び肺に治療用量のマイクロスフェアを送達させることができる。例えば、分子がＤＡＳ１８１タンパク質（配列番号１７に示す配列）である場合、対イオンとして硫酸ナトリウムを、有機溶媒としてイソプロパノールを用い、本明細書で提供される方法によって、約０．５ミクロン乃至約８ミクロン、又は約１ミクロン乃至約５ミクロンのマイクロスフェアを得ることができる。インフルエンザ等の呼吸気道内で発症するウィルス感染症の予防又は治療のために投与されるＤＡＳ１８１マイクロスフェアの場合は、マイクロスフェアを咽喉、気管、及び気管支内へ沈着させることが望ましい場合がある。マイクロスフェアとして製剤されたＤＡＳ１８１融合タンパク質は、咽喉／気管／気管支において受容体シアル酸を分解することによって作用することができ、これによって、これらの部位におけるウィルスの結合及び感染が防がれる。呼吸器系ウィルス感染症が発症し得る部位、すなわち、咽喉、気管、又は気管支へＤＡＳ１８１マイクロスフェアを最適に送達するためには、マイクロスフェアは、（ａ）口の前端部で捕獲されるような大きいもの（すなわち、約８ミクロン若しくはそれより大きい、過大なマイクロスフェア）；又は（ｂ）肺深部に吸収され、肺胞を通して、これらが活性ではない、及び／又は毒性であり得る血流へと全身的に吸収されるような小さいもの（すなわち、０．５ミクロン若しくはそれより小さい）、であってはならない。咽喉、気管、及び気管支へのＤＡＳ１８１マイクロスフェアの送達のためには、約１ミクロンから約５．５乃至６ミクロンの範囲のサイズが一般に適切であり得る。本明細書で提供される方法によって作製された、これよりも非常に小さい代表的な分子、バンコマイシンのマイクロ粒子で、類似の挙動が観察される。
吸入器を用いて、吸入治療によってタンパク質又はその他の分子を投与してよいいずれの医学的状態をも治療することができる。典型的な吸入装置としては、ドライパウダー吸入器、定量噴霧式吸入器、及び静電送達装置を挙げることができる。吸入送達装置の典型的な用途としては、インスリン及びその他の治療用タンパク質、並びにバンコマイシンの肺深部への送達が挙げられる。
ある態様では、本明細書で提供される方法によって得られるマイクロスフェアは、経口摂取、鼻腔内、静脈内、筋肉内、皮下、経皮、局所、及び治療用、診断用、栄養用、又は美容用分子の送達に適したその他の送達方法によっても送達することができる。経肺送達のためのマイクロスフェア製剤は、一般に、約０．５ミクロンから約５乃至６ミクロンまでの範囲のサイズであってよく、一方、皮下送達、非経口送達、又は筋肉内送達等のその他の種類の送達に対して設計されたものは、約１０ミクロン若しくは１０ミクロン乃至約３０若しくは３０、約４０若しくは４０、又は約５０若しくは５０ミクロンの範囲であってよい。
ある態様では、本明細書で提供されるマイクロスフェアは、直接的な治療効果は有さないが、他の１若しくは複数の治療薬のマイクロ担体として作用することができる。このようなマイクロスフェアの作製に有用である分子の例としては、これらに限定されないが、多糖、グリカン、タンパク質、ペプチド、核酸、ポリマー、若しくはこれらの組合せ、又はアミノ酸、酢酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、若しくはこれらの組み合わせ等の特定の低分子が挙げられる。治療薬又はその他の活性剤は、マイクロスフェアの製剤時に添加してよく、又は形成したマイクロスフェアの懸濁液に添加してもよい。別の選択肢として、治療薬は、混合、タンブリング（ｔｕｍｂｌｉｎｇ）、又は製薬業界及び食品業界で実践されるその他の技術によって乾燥マイクロスフェア組成物と混合してもよい。
本明細書で提供されるマイクロスフェアにて、他の１若しくは複数の治療薬のマイクロ担体として作用することができるポリマーは、本明細書で定めるもののいずれであってもよく、これらに限定されないが、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、及びＤＮＡ若しくはＲＮＡ誘導体の混合物、又はペプチド核酸（ＰＮＡ）等の核酸、ポリアクリルアミド、ポリスチレン、ポリアルキル置換スチレン、ポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリ塩化ビニル、ポリ酢酸ビニル、ポリブタジエン、ポリイソプレン、ポリエチレングリコール、及びポリエチレンイミンが挙げられる。その他の代表的な有機又は無機ポリマー、天然及び合成ポリマーとしては、これらに限定されないが、アガロース、セルロース、ニトロセルロース、酢酸セルロース、その他のセルロース誘導体、デキストラン、デキストラン誘導体及びデキストランコポリマー、その他の多糖、ガラス、シリカゲル、ゼラチン等のタンパク質、ポリエチレングリコール、ポリエチレンイミン、ポリエチレンイミド、ポリビニルピロリドン、レーヨン、ナイロン、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリブチレン、ポリカーボネート、ポリエステル、ポリアミド、ビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリスチレン及びポリスチレンコポリマー、ジビニルベンゼン等で架橋したポリスチレン、アクリル樹脂、アクリレート及びアクリル酸、アクリルアミド、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミドブレンド、ビニル並びにアクリルアミド、メタクリレート、及びメタクリレート誘導体等のコポリマー、が挙げられる。
ある態様では、マイクロ担体は、ヒドロゲルを形成する能力を有する物質であってよい。ヒドロゲルは、水を吸収して弾性ゲルを形成することができる水膨潤性のポリマー性物質である。ヒドロゲル及びヒドロゲルマイクロスフェアは、目及び骨を含む種々の標的組織への局所及び全身送達のための薬物送達システムとして試験されてきた。ヒドロゲルマイクロスフェアの製造は、これまでに、油／水エマルジョン法等の複雑な方法を用いて達成されてきた。本明細書で提供される方法により、ヒドロゲルマイクロスフェアを簡便に製造することが容易となる。
ヒドロゲルを形成する能力を有する物質の例としては、これらに限定されないが、種々の天然のポリマー、遺伝子操作されたポリマー、誘導体化されたポリマー、及び合成されたポリマーが挙げられ、タンパク質（コラーゲン、ゼラチン、シルク）及び多糖（キトサン、デキストラン、ジェランガム、アガロース）等である。実施例２２及び２３は、ヒドロゲルを形成する能力を有する物質（ゼラチン、デキストラン）を、本明細書で提供される方法によって作製されたマイクロスフェア製剤へ組み込むことができ、それによってヒドロゲルを形成する能力を有するマイクロスフェアが得られることを示すものである。ヒドロゲル形成物質を含有するカクテル製剤への対象とする治療薬又は活性剤の添加は、本明細書で提供される方法に従うマイクロスフェアの形成へと至る工程の間において、いかなる時点でいかなる順序で行ってもよい。別の選択肢として、治療薬又は活性剤は、マイクロスフェアの含水／膨潤に用いられる溶液に添加してもよく、又は膨潤したマイクロスフェアの懸濁液に添加して粒子内へ浸透させてもよい。
ヒドロゲルマイクロスフェアは、架橋させることによってその溶解性／摩耗性を低減し、徐放性をより高めることができる。架橋は、カルボキシル、アミノ、ヒドロキシル、ホスフェート、及び／又はスルフヒドリル基を含むがこれらに限定されない当業者に公知の種々の架橋性官能基を用い、自然の架橋、又はＥＤＣ（１‐エチル‐３‐（３‐ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩）若しくはカルボジイミド及び非カルボジイミド化学を利用するその他の化合物等の架橋を媒介する剤を用いて実施することができる。
ある態様では、架橋剤、ポリマー、親油性物質、水性溶媒における溶解性が低いもの等の塩、若しくはこれらの組み合わせ、又はその他の化合物を製剤カクテル溶液中へ含有させることにより、マイクロスフェアの溶解度を改変し、及び／又はその機械強度を向上させることができる。マイクロスフェアの遅延溶解は、経口摂取、吸入、鼻腔内、静脈内、筋肉内、経皮、局所、皮下、及び治療用、診断用、栄養用、若しくは美容用分子の送達又は適用に適したその他の送達方法によって送達される治療薬の徐放に有用であり得る。ある態様では、マイクロスフェアは、腸溶コーティングを有する丸剤又はカプセル剤の形態で経口摂取によって送達して、十二指腸から取り込ませ、分子を血流又はその他の作用部位へと放出させることができる。
ある態様では、例えば、分子がタンパク質又はその他の高分子である場合、マイクロスフェアを、高分子の部分的変性によって不溶性とし、送達の際にこれを復元して生体利用可能とすることができる。
他の態様では、マイクロスフェアは、実質的に球形状の形体を有し、その平均直径は、約０．１ミクロン乃至３０．０ミクロンの範囲内であってよい。さらに他の態様では、マイクロスフェアの平均直径は、約０．５ミクロン乃至５．０ミクロン、又は約１．０ミクロン乃至２．０ミクロンの範囲内であってよい。
さらに別の局面では、本明細書において、医学的治療を必要とする動物又はヒトの患者等の対象へマイクロスフェアを送達するための装置及び方法が提供される。適切な送達経路としては、筋肉内、静脈内、及び皮下等の非経口送達経路、並びに、経口、頬側、くも膜下腔内、経鼻、経肺、経皮、経粘膜等の非経口ではない送達経路を挙げることができる。送達装置としては、無針及び有針の両方のシリンジ、並びに吸入器を挙げることができる。
送達装置は、ｉｎ ｖｉｖｏでの高分子の速放若しくは徐放によって治療可能である状態を治療するための単一用量のマイクロスフェアを含んでいてよく、又は複数用量のマイクロスフェアを含んでいてもよく、又は多室構造（ｍｕｌｔｉ‐ｃｈａｍｂｅｒｅｄ）の装置で、マイクロスフェアとして製剤された２種類以上の化合物を送達するものであってもよい。単一用量に存在するマイクロスフェアの数は、分子の種類及び活性に応じて異なる。単一用量は、特定の医学的状態を治療するために最適化された時間にわたっての徐放が達成されるように選択することができる。例えば、分子がＤＡＳ１８１融合タンパク質（配列番号１７）等を例とする高分子である場合、ＤＡＳ１８１を含むマイクロスフェア組成物の送達用量は、１回の用量あたり約０．５若しくは０．５ｍｇのタンパク質乃至１回の用量あたり約１００若しくは１００ｍｇのタンパク質、又は、１回の用量あたり約０．７５若しくは０．７５ｍｇ、約１若しくは１ｍｇ、約１．５若しくは１．５ｍｇ、約２若しくは２ｍｇ、約３若しくは３ｍｇ、約５若しくは５ｍｇ、約１０若しくは１０ｍｇ、約１５若しくは１５ｍｇ、約２０若しくは２０ｍｇ、約３０若しくは３０ｍｇ、約４０若しくは４０ｍｇ、約４５若しくは４５ｍｇ、約５０若しくは５０ｍｇ、約５５若しくは５５ｍｇ、又は約６０若しくは６０ｍｇのタンパク質であってよい。分子が低分子である場合、送達用量は、１回の用量あたり約０．１若しくは０．１ｍｇの化合物乃至１回の用量あたり約１０００若しくは１０００ｍｇの化合物、又は、１回の用量あたり約０．２若しくは０．２ｍｇ、約０．５若しくは０．５ｍｇ、約１若しくは１ｍｇ、約１．５若しくは１．５ｍｇ、約２若しくは２ｍｇ、約３若しくは３ｍｇ、約５若しくは５ｍｇ、約１０若しくは１０ｍｇ、約１５若しくは１５ｍｇ、約２０若しくは２０ｍｇ、約３０若しくは３０ｍｇ、約４０若しくは４０ｍｇ、約４５若しくは４５ｍｇ、約５０若しくは５０ｍｇ、約５５若しくは５５ｍｇ、約６０若しくは６０ｍｇ、約６５若しくは６５ｍｇ、約７０若しくは７０ｍｇ、約７５若しくは７５ｍｇ、約８０若しくは８０ｍｇ、約８５若しくは８５ｍｇ、約９０若しくは９０ｍｇ、約９５若しくは９５ｍｇ、約１００若しくは１００ｍｇ、約１２５若しくは１２５ｍｇ、約１５０若しくは１５０ｍｇ、約１７５若しくは１７５ｍｇ、約２００若しくは２００ｍｇ、約２５０若しくは２５０ｍｇ、約３００若しくは３００ｍｇ、約３５０若しくは３５０ｍｇ、約４００若しくは４００ｍｇ、約５００若しくは５００ｍｇ、約６００若しくは６００ｍｇ、約７００若しくは７００ｍｇ、約８００若しくは８００ｍｇ、約９００若しくは９００ｍｇ、又は約１０００若しくは１０００ｍｇの化合物であってよい。
マイクロスフェアの分子成分は、本明細書で提供される方法に従ってマイクロスフェアを形成する能力を有するいずれの分子であってもよい。例えば、治療薬、診断用分子、栄養補助薬、及び美容品を含む、当業者によって理解され、本明細書で提供されるもの等の低分子化合物が、本明細書で提供される方法に従うマイクロ粒子の作製のためのものとして意図されている。本明細書で例示される低分子は、低分子化合物の種々の分類に属するものであり、アミノグリコシドのトブラマイシン及びカナマイシン、ペニシリン化合物のアンピシリン、並びにテトラサイクリンが挙げられる。その他の低分子化合物としては、これらに限定されないが、コレステロール及びラノステロール等のステロール、エストロゲン、テストステロン、カンレノン、オレアンドリン、及びスピロノラクトン等のステロイド、アセタゾラミド、アンブシド、アゾセミド、ブメタニド、ブタゾールアミド、ジフェニルメタン‐４，４’‐ジスルホンアミド、ジスルファミド、フロセミド等のスルホンアミド誘導体、アミノメトラジン及びアミソメトラジン等のウラシル等、並びにプロスタグランジン、を挙げることができる。有機若しくは無機の天然若しくは合成医薬化合物又は薬剤は、薬剤を低分子と結合させ、続いてその分子‐薬剤複合体若しくは抱合体からマイクロスフェアを形成させることによって、マイクロスフェアに組み込むことができる。
他の態様では、分子は高分子であり、酵素及び組換えタンパク質を含むタンパク質、ソマトスタチン及びリュープロリド等のペプチド、バンコマイシン等の糖ペプチド、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ＤＮＡ、ＰＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ等の核酸、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、低分子（ハプテン等）とタンパク質との抱合体、又はこれら混合物が挙げられる。ある態様では、有機若しくは無機の天然若しくは合成医薬化合物又は薬剤は、薬剤をタンパク質等の高分子と結合させ、続いてその高分子‐薬剤複合体若しくは抱合体からマイクロスフェアを形成させることによって、マイクロスフェアに組み込むことができる。当業者であれば、高分子は、例えば、ペプチド、二本鎖核酸分子の一本鎖セグメント、若しくはウィルス粒子等の分子、又は三次及び／若しくは四次構造を有するその他の高分子、の一部分であってよいことが理解されるであろう。
ある態様では、高分子は、これらに限定されないが、シアリダーゼ、シアリダーゼ融合タンパク質、ＧＡＧ結合ドメインに融合したシアリダーゼ触媒ドメインを含む融合タンパク質、プロテアーゼ、プロテアーゼインヒビター、インスリン、インターフェロン、ヒト成長ホルモン、カルシトニン、組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼ、又は副甲状腺ホルモンを含む治療用タンパク質であり、マイクロスフェアのタンパク質含有率は、約５０％若しくは５０％乃至約６０％若しくは６０％、約６５％若しくは６５％、約７０％若しくは７０％、約７５％若しくは７５％、約８０％若しくは８０％、約８５％若しくは８５％、約９０％若しくは９０％、約９５％若しくは９５％、約９６％若しくは９６％、約９７％若しくは９７％、約９８％若しくは９８％、約９９％若しくは９９％、又はこれを超える割合であってよい。経肺投与の場合、マイクロスフェアの平均サイズは、約０．５若しくは０．５ミクロン乃至約５．０若しくは５．０ミクロンの範囲であってよく、ある態様では、約１若しくは１ミクロン乃至約２若しくは２ミクロンの範囲であってよい。
本明細書で提供される方法によるマイクロスフェアの形成に用いることができるその他のタンパク質及びペプチドとしては、これらに限定されないが、ＤＡＳ１８１（ＤＡＳ１８１；配列番号１７）、ａ１‐抗トリプシン、エコチン、エグリンｃ、セルピン、パルモザイム（組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼ）、ベタキソロール（商標）、ジクロフェナック（商標）、ドキソルビシン、アセチルシステイン、酢酸リュープロリド、黄体ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、（Ｄ‐Ｔｒｙｐ６）‐ＬＨＲＨ、酢酸ナファレリン、インスリン、インスリンナトリウム、インスリン亜鉛、プロタミン、リゾチーム、アルファ‐ラクトアルブミン、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、ベータ‐ラクトグロブリン、トリプシン、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、カルボニックアンヒドラーゼ、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、ホスホリラーゼｂ、アルカリホスファターゼ、ベータ‐ガラクトシダーゼ、ＩｇＧ、フィブリノーゲン、ポリ‐Ｌ‐リジン、ＩｇＭ、ＤＮＡ、酢酸デスモプレシン、成長ホルモン放出因子（ＧＨＲＦ）、ソマトスタチン、リュープロリド、アンチド（ａｎｔｉｄｅ）、第ＶＩＩＩ因子、Ｇ‐ＣＳＦ／ＧＭ‐ＣＳＦ、ヒト成長ホルモン（ｈＧＨ）、ベータインターフェロン、アンチトロンビンＩＩＩ、アルファインターフェロン、アルファインターフェロン２ｂ、を含む治療用タンパク質を挙げることができる。
「高分子」又は「低分子」という用語には、複数の異なる高分子及び／又は低分子が含まれる場合もあり、医薬化合物と、治療を必要とする組織、器官、又は腫瘍に対してその医薬化合物を標的化させるための親和性分子との組み合わせ等の組み合わせが含まれる。親和性分子は、例えば、リガンド又は受容体であってよい。リガンドの例としては、動物へ投与された際に抗原として作用して免疫反応を発生させ、抗体の産生を引き起こすことができるウィルス、細菌、多糖、又はトキシンを挙げることができる。本明細書で提供されるマイクロスフェアは、高分子と低分子との組み合わせ又は混合物から作製することもできる。
吸入装置を用いることで、上記で列挙されるもの等の治療用化合物又は診断用化合物を対象の呼吸気道及び肺へ送達することができる。例えば、タンパク質のマイクロスフェア、又はバンコマイシンのマイクロスフェア等の抗生物質のマイクロスフェアは、例えば、タンパク質又はバンコマイシンの水溶液を、クエン酸塩等のカルボン酸、又は硫酸塩、又はその他の対イオン、及びイソプロパノール等の有機溶媒と接触させ、この溶液を冷却してマイクロスフェアを形成させることによって作製することができる。タンパク質は、シアリダーゼ、プロテアーゼインヒビター、インスリン、ヒト成長ホルモン、カルシトニン、組換えヒトデオキシリボヌクレアーゼ、又は副甲状腺ホルモン等の治療用タンパク質であってよく、マイクロスフェアのタンパク質又はバンコマイシンの含有量は、約７０％若しくは７０％乃至約９０％若しくは９０％、又はそれを超える割合、約９５％若しくは９５％、又はそれを超える割合、又は、少なくとも約９９％若しくはそれを超える割合、であってよい。経肺投与の場合、ＤＡＳ１８１のマイクロスフェア又はバンコマイシンのマイクロスフェアを例とするマイクロスフェアは、約０．５ミクロン乃至５．０ミクロン、又は約１ミクロン乃至約２ミクロンの範囲の平均直径を有するサイズとしてよい。
マイクロスフェアを形成させるためのインキュベーションの条件は、ｐＨ、温度、分子の濃度、又は反応若しくはインキュベーションの継続時間を含むパラメーターを調節することによって最適化し、マイクロスフェアの形成前に溶液中に存在する分子の総量のうちの少なくとも約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、若しくは９９％、又はこれを超える割合を組み込ませることができる。
ある態様では、所望の特性を有するマイクロスフェアを生成しない分子又は化合物は、所望の特性を有するマイクロスフェアを形成可能である担体分子へのこの化合物の組み込み又は結合により、サイズ、送達プロファイル、機械強度を例とする所望の特性を有するマイクロスフェアに組み込むことができる。ある態様では、担体高分子はタンパク質であり、分子又は化合物は、マイクロスフェアの内部及び／又は表面上に結合している。ある態様では、分子又は化合物は対イオンとしても作用することができ、マイクロスフェアの形成を開始及び／又は促進させることができる。
タンパク質を含むマイクロスフェアを作製する場合は、グリセロール、脂肪酸、スクロース等の糖、亜鉛等のイオン、塩化ナトリウム、又は当業者に公知のその他のいずれかのタンパク質安定剤等のタンパク質安定剤を、マイクロスフェアの形成中、カクテル溶液の冷却前に添加して、タンパク質の変性を最小限に抑えることができる。このような安定剤は、その他の高分子又は低分子から製剤されたマイクロスフェアに添加してもよい。
ある態様では、マイクロスフェアは、さらに、消化酸等の酸若しくはプロテアーゼに対する耐性を付与するもの等の適切な分子及び／又はコーティング剤でその表面がコーティングされていてもよい。他の態様では、マイクロスフェアは、脂肪酸又は脂質等の化合物で非共有結合的にコーティングされていてよい。コーティングのマイクロスフェアへの塗布は、可溶化されたコーティング物質内へ浸漬し、続いて、この物質と共にマイクロスフェアを噴霧するか、又は当業者に公知のその他の方法によって行うことができる。ある態様では、脂肪酸又は脂質を、マイクロスフェア形成カクテル溶液へ直接添加する。
温度を低下させることによるマイクロスフェアの形成は、多くの従来の方法により、バッチモード又は連続モードで行うことができる。さらに、マイクロスフェアの形成はその他の方法によって誘発することもでき、これらに限定されないが、大気圧、ｇ力、又は表面膨張の調節が挙げられ、シーディング（ｓｅｅｄｉｎｇ）を含む。マイクロスフェア形成は、これらの条件に曝露することによって直ちに発生する場合もあり、又は本明細書で提供されるように長い時間を要する場合もある。
Ｄ．代表的化合物
Ａ．ペプチド
本明細書で提供される方法によるマイクロ粒子の形成に用いることができる代表的なペプチドについて以下で説明する。
ソマトスタチン
ソマトスタチン（成長ホルモン抑制ホルモン（ＧＨＩＨ）又はソマトトロピン放出抑制ホルモン（ＳＲＩＦ）としても知られる）は、内分泌系を制御し、Ｇタンパク質共役ソマトスタチン受容体との相互作用及び数多くの二次ホルモン放出の阻害を介して神経伝達及び細胞増殖に影響を与えるペプチドホルモンである。ソマトスタチンは、単一のプレプロタンパク質の別々の開裂によって産生される２種類の活性形態を有し：一方は１４アミノ酸、もう一方は２８アミノ酸である。プレプロソマトスタチン（シグナル配列及びプロペプチドを含む）、プレソマトスタチン（プロペプチドを含む）、ソマトスタチン２８（ＳＳ‐２８、２８アミノ酸のペプチド）、及びソマトスタチン１４（ＳＳ‐１４、１４アミノ酸のペプチド）に対応する代表的な配列を、それぞれ配列番号１８乃至２１に示す。
ソマトスタチンは、視床下部の脳室周囲核の神経内分泌ニューロンによって主に産生され、胃、腸、及び膵臓のデルタ細胞を含む消化系のいくつかの部位で分泌される。
ソマトスタチンは、成長ホルモン（ＧＨ）の放出の阻害、従って、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）の効果への対抗；甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）の放出の阻害；並びに、ガストリン、コレシストキニン（ＣＣＫ）、セクレチン、モチリン、血管作用性小腸ペプチド（ＶＩＰ）、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）、エンテログルカゴン（ＧＩＰ）等の胃腸ホルモン；及び、膵臓ホルモン、グルカゴン及びインスリン、の放出の抑制、を含むその種々の生物学的作用のため、神経内分泌障害及び腫瘍の治療を例とする治療上の価値を有する。
リュープロリド
リュープロレリン（ＩＮＮ）又は酢酸リュープロリド（ＵＳＡＮ）は、生殖腺刺激ホルモン放出ホルモンアゴニスト（ＧｎＲＨアゴニスト）である。下垂体ＧｎＲＨ受容体に対して一定の刺激をもたらすことによって、最初は刺激を引き起こすが（フレア（ｆｌａｒｅ））、その後、生殖腺刺激ホルモン、黄体ホルモン（ＬＨ）、及び卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）の下垂体分泌を低下させる（下方制御）。他のＧｎＲＨアゴニストと同様に、リュープロリドは、前立腺癌又は乳癌等のホルモン感受性癌、エストロゲン依存性の状態（子宮内膜症又は子宮筋腫等）の治療、思春期早発症の治療、及びＩＶＦにおける卵巣刺激の制御に用いることができる。性的倒錯の治療薬の候補としても見なされている。リュープロリドの代表的な配列を配列番号２２に示す。
Ｂ．抗生物質
抗生物質には、細菌、真菌、又は原虫等の微生物の成長を阻害又は消滅させるいかなる化合物も含まれる。本明細書で提供される方法によるマイクロスフェアの形成に用いることができる代表的な抗生物質を以下で述べる。
アミノグリコシド
アミノグリコシドは、特定の種類の細菌に対して効果を有する抗生物質の一群である。これらには、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン、及びアプラマイシンが含まれる。アミノグリコシドは、細菌の３０Ｓリボソームサブユニットと結合することによって作用すると考えられており（５０ｓサブユニットと結合して作用するものもある）、ペプチジルｔＲＮＡのＡ部位からＰ部位への転座を阻害し、さらに、ｍＲＮＡの誤読を引き起こして、細菌がその成長に不可欠であるタンパク質を合成できないようにするものである。
糖ペプチド
糖ペプチド抗生物質は、抗生物質薬剤の一種である。これらは、グリコシル化された環式又は多環式非リボソームペプチドを含む。代表的な糖ペプチド抗生物質としては、バンコマイシン、テイコプラニン、ラモプラニン、及びデカプラニン（ｄｅｃａｐｌａｎｉｎ）が挙げられる。この種類の薬剤は、ペプチドグリカン合成を阻害することによって感受性の高い微生物の細胞壁の合成を阻害し、従って微生物の成長が阻害される。
ペニシリン
ペニシリンは、β‐ラクタム抗生物質の一種であり、アンピシリン、アズロシリン、カルベニシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、メズロシリン、ナフシリン、ペニシリン、ピペラシリン、及びチカルシリン等の化合物が含まれる。β‐ラクタム抗生物質は、細菌の細胞壁内におけるペプチドグリカンの架橋の形成を阻害することによって作用する。ペニシリンのβ‐ラクタム部分が、細菌内のペプチドグリカン分子を連結する酵素（トランスペプチダーゼ）と結合し、これによって細菌の細胞壁が弱められる（すなわち、この抗生物質が細胞溶解又は細胞死を引き起こす）。
テトラサイクリン
テトラサイクリンは、天然及び合成の広範囲にわたる抗生物質の一種であり、そのメンバーとしては、例えば、テトラサイクリン、クロルテトラサイクリン、オキシテトラサイクリン、デメクロサイクリン、半合成ドキシサイクリン、リメサイクリン、メクロサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、及びロリテトラサイクリンが挙げられる。テトラサイクリンは、翻訳を阻害することによって細胞の成長を阻害する。テトラサイクリンは、３０Ｓリボソームサブユニットの１６Ｓ部分と結合して、アミノ‐アシルｔＲＮＡがリボソームのＡ部位と結合することを阻止する。
Ｃ．化学療法薬
癌の治療に有用である薬理剤は、一般的な化学療法薬の分類に属し、本明細書で提供される方法に従うマイクロスフェアの形態で作製されることを意図している。代表的な化学療法薬はパクリタキセルである。
パクリタキセル
パクリタキセルは、癌の治療に用いられる有糸分裂阻害薬剤である。パクリタキセルは、肺癌、卵巣癌、乳癌、及び進行した形態のカポジ肉腫を含む種々の癌の治療に効果的な薬剤である。ドセタキセルと共に、タキサンという薬剤の分類を形成する。パクリタキセルは、冠動脈ステントの再狭窄（再発性狭小化（ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ ｎａｒｒｏｗｉｎｇ））の予防にも用いられ；冠動脈壁へ局所的に送達されて、パクリタキセルのコーティングによってステント内での新生内膜（瘢痕組織）の成長が制限される。
Ｄ．核酸
治療的価値を有するものを含む核酸は、本明細書で提供されるマイクロスフェアの作製を意図している。代表的な治療用核酸はｓｉＲＮＡである。
ｓｉＲＮＡ
短鎖干渉ＲＮＡ又はサイレンシングＲＮＡとして知られる場合もある低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）は、生物系内で種々の役割を担う２０乃至２５ヌクレオチドの長さの二本鎖ＲＮＡ分子の一種である。ｓｉＲＮＡは、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）経路に関与し、ここで、ｓｉＲＮＡは、特定の遺伝子の発現に干渉する。ＲＮＡｉ経路での役割に加えて、ｓｉＲＮＡは、例えば、抗ウィルス機構として、又はゲノムのクロマチン構造の形成において、ＲＮＡｉ関連経路でも作用することができる。対象とするいかなる遺伝子も実質的にノックダウンする可能性のあるその能力のため、ＲＮＡｉは、ｓｉＲＮＡを介して、インフルエンザ治療等の可能性のある治療用途において大きな関心を集めてきた。種々の生物学的経路において重要な遺伝子を識別するように設計された大スケールのＲＮＡｉスクリーニングの数が増加しつつある。疾患のプロセスは複数の遺伝子の活性にも依存していることから、状況によっては、ｓｉＲＮＡによって遺伝子の活性を遮断することが治療上有益であることもあり得ると考えられる。例えば、Ｑｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００３） Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１００：２７１８‐２７２３、に記載のように、いくつかのｓｉＲＮＡが、ＰＲ８及びＷＳＮインフルエンザのＭＤＣＫ細胞中での増殖を阻害することが示されている。これらのｓｉＲＮＡの配列（センス鎖及びアンチセンス鎖）を、配列番号２３乃至２６に示す。
Ｅ．プロスタグランジン
プロスタグランジンは、脂肪酸から酵素的に誘導され、ホルモン又はホルモン様であり、動物の体内にて重要で多面的な機能及び効果を有する脂質化合物の群のいずれかのメンバーである。プロスタグランジンはすべて２０個の炭素原子を有し、炭素の５員環を含む。これらはメディエーターであり、種々の生理学的効果を有する。プロスタグランジンは、トロンボキサン及びプロスタサイクリンと共に、脂肪酸誘導体の分類プロスタノイドを形成し；プロスタノイドの分類は、エイコサノイドのサブ分類である。
その多面的な効果のために、プロスタグランジンは、種々の臨床的用途を有し、それらには：
出生、出産、又は中絶の誘発（ＰＧＥ２又はＰＧＦ２、ミフェプリストン、黄体ホルモンアンタゴニスト、を用いて又は用いずに）；
特定のチアノーゼ心疾患を有する新生児における、動脈管開存の閉鎖の予防（ＰＧＥ１）；
消化性潰瘍の予防及び治療（ＰＧＥ）；
重症であるレイノー現象又は四肢の虚血における血管拡張薬として；
肺高血圧症；
緑内障の治療；並びに、
勃起不全の治療又は手術後の陰茎リハビリテーション、
が挙げられる。
Ｆ．ウィルス
ウィルスは、担体又はベクターとして種々の用途を有し、遺伝子治療における及びワクチン中の不活性化ウィルスとしての用途が含まれる。ウィルス粒子又は不活性化ウィルス等のウィルスの誘導体の形態を含み、動物ウィルス、植物ウィルス、ファージ、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、アデノウィルス、レトロウィルス、ＲＳウィルス、ＤＮＡを主体とするウィルス、コロナウィルス、及びロタウィルスを含むがこれらに限定されないウィルスのマイクロ粒子は、本明細書で提供される方法に従って作製することを意図している。本明細書で例示するのはタバコモザイクウィルスである（ＴＭＶ）。
タバコモザイクウィルス（ＴＭＶ）
タバコモザイクウィルス（ＴＭＶ）は、植物、特にタバコ及びナス科のその他のメンバーに感染するＲＮＡウィルスである。このウィルスは、ロッド状の外観をしている。そのカプシドは、２１３０分子のコートタンパク質及び１分子の６３９０塩基の長さのゲノムＲＮＡから作られている。コートタンパク質は、自己組織化して、ヘアピンループ構造を形成するＲＮＡの周囲にロッド状のらせん構造を形成する。タンパク質単量体は、４つの主たるアルファ‐らせんに組織化される１５８のアミノ酸を有し、これらは、ビリオンの軸に近接するループ状の突出部によって連結される。
作物への損害という影響に加えて、ＴＭＶの構造に関する非常に詳細にわたる知識、及びこれが動物に感染しないという事実により、ＴＭＶは、構造分子生物学、Ｘ線回折、並びにウィルスの集合及び分解、を含む複数の分野における研究にとって価値の高いツールとなっている。
Ｇ．タンパク質
本明細書で提供される方法によるマイクロ粒子の形成に用いることができる代表的なタンパク質について以下で説明する。
シアリダーゼ
ノイラミニダーゼ及びＮ‐アシルノイラミノシルグリコヒドロラーゼ（Ｎ‐ａｃｙｌｎｅｕｒａｍｉｎｏｓｙｌｇｌｙｃｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ）とも称されるシアリダーゼは、シアロ‐グリコ抱合体からの末端シアル酸残基の除去を触媒するエキソグリコシダーゼファミリーである。シアル酸は、通常、糖タンパク質及び糖脂質に結合したオリゴ糖鎖の最外部位に見られる、炭素９個のバックボーンを有するαケト酸のファミリーである。これらの分子は、先天免疫の制御、細胞接着、及び炎症細胞と標的細胞との間の相互作用等の種々の生物機能及びプロセスに関与しており、これらは恐らくは種々のレクチンの結合を通して媒介される（Ｖａｒｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２） Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ ４：２５７‐２６６）。シアル酸は、炭素、窒素、エネルギーの優れた供給源でもあり、細胞壁生合成の前駆体でもある。なおさらに、真核細胞上のシアル酸は、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウイルス、いくつかのコロナウィルス及びロタウィルス、ヘモフィルスインフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、ストレプトコッカスニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、モラクセラカタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）、ヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ）、並びにシュードモナスエルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）を含むがこれらに限定されない病原性微生物に対する受容体又は共受容体として用いることができる。最も重要なシアル酸ファミリーのメンバーは、その他のほとんどの種類の生合成前駆体である、Ｎ‐アセチルノイラミン酸（Ｎｅｕ５Ａｃ）である。Ｎｅｕ５Ａｃと炭水化物側鎖の末端から２番目のガラクトース残基との間の２つの主たる結合、Ｎｅｕ５Ａｃ α（２，３）‐Ｇａｌ及びＮｅｕ５Ａｃ α（２，６）‐Ｇａｌが、天然で見られる。Ｎｅｕ５Ａｃ α（２，３）‐Ｇａｌ分子及びＮｅｕ５Ａｃ α（２，６）‐Ｇａｌ分子はいずれもインフルエンザウィルスによって認識可能であり、これを通してこのウィルスが結合して感染を開始する受容体として用ることができる。しかし、ヒトインフルエンザウィルスは、Ｎｅｕ５Ａｃ α（２，６）‐Ｇａｌを優先すると考えられ、一方、トリインフルエンザウィルス及びウマインフルエンザウィルスは、圧倒的にＮｅｕ５Ａｃ α（２，３）‐Ｇａｌの方を認識する（Ｉｔｏ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｍｉｃｒｏｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ４４：４２３‐７３０）。ヒトの呼吸上皮では、両方の形態のシアル酸が発現されるが、α（２，６）結合型のシアル酸が、α（２，３）結合型のシアル酸よりも豊富に存在している。α（２，３）結合型のシアル酸の存在量が少ないことは、トリウィルスに対する種間障壁の根拠として最も可能性が高く、気道上皮上で発現する受容体シアル酸のレベルを低下することによって、インフルエンザウィルスの感染性が恐らくは低下するであろうということを示すものである。従って、シアロ‐グリコ抱合体から末端シアル酸残基を除去するシアリダーゼは、受容体であるシアル酸のレベルを低下させるように機能するインフルエンザウィルス治療薬の候補であることを自ら示している。シアリダーゼはさらに、マイコプラズマニューモニエ、モラクセラカタラーリス、ヘリコバクターピロリ、ヘモフィルスインフルエンザエ、ストレプトコッカスニューモニエ、シュードモナスエルジノーサ、パラインフルエンザウイルス、並びにいくつかのコロナウィルス及びロタウィルスを含むがこれらに限定されない、その感染プロセスにおいてシアル酸を利用するその他のいかなる病原体に対しても、治療薬として作用する可能性がある。
シアリダーゼは、高い基質特異性を有する傾向にある。シアリダーゼは、糖タンパク質又は糖脂質等の特定の種類の複合分子；特定の糖結合（例：２‐３、２‐６、又は２‐８）を標的とするか；又は、結合している糖自体（例：Ｄ‐ガラクトース、Ｎ‐アセチル‐Ｄ‐ガラクトサミン）の性質に対して感受性を示す場合がある。基質分子としては、これらに限定されないが、オリゴ糖、多糖、糖タンパク質、ガングリオシド、及び合成分子が挙げられる。例えば、シアリダーゼは、シアル酸残基と基質分子の残部との間のα（２，３）‐Ｇａｌ、α（２，６）‐Ｇａｌ、又はα（２，８）‐Ｇａｌ結合を有する結合を開裂することができる。シアリダーゼは、さらに、シアル酸残基と基質分子の残部との間のいかなる結合をも又は全ての結合をも開裂することができる。微生物及び高等真核生物から数多くのシアリダーゼタンパク質が精製されており、これらの中で複数のものが、病原性微生物の受容体として作用し得る末端シアル酸残基の除去を触媒することが示されている。例えば、大型の細菌由来シアリダーゼには、インフルエンザ受容体であるシアル酸Ｎｅｕ５Ａｃ α（２，６）‐Ｇａｌ及びＮｅｕ５Ａｃ α（２，３）‐Ｇａｌを分解することができるものがあり、クロストリジウムパーフリンジェンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、アクチノミセスビスコーサス（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ ｖｉｓｃｏｓｕｓ）、アルスロバクターウレアファシエンス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｕｒｅａｆａｃｉｅｎｓ）、及びミクロモノスポラビリジファシエンス（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｖｉｒｉｄｉｆａｃｉｅｎｓ）由来のシアリダーゼが挙げられる。治療薬として作用することができるその他のシアリダーゼとしては、遺伝子ＮＥＵ２及びＮＥＵ４によってコードされるもの等のヒトシアリダーゼが挙げられる。
シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質
シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質は、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）結合配列に融合したシアリダーゼタンパク質又はその触媒活性部分から作られるタンパク質である。このように、これらのタンパク質は、実質的にアンカードメイン（ＧＡＧ結合配列）及び治療ドメイン（シアリダーゼタンパク質又はその触媒活性部分）を含む。シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質は、上皮に結合して周囲のシアル酸を除去するように設計されており、従って、その感染プロセスにおいてシアル酸を利用する病原体に対する治療薬として用いることができる。融合タンパク質の上皮に結合する能力のために、例えばインフルエンザ感染症を治療する吸入薬として融合タンパク質を投与した場合、その保持率が増加する。ＧＡＧ結合配列は、シアリダーゼを呼吸上皮に繋ぎ止める上皮アンカードメインとして作用し、その保持率と効力を高める。
へパリンと密接に関連するヘパラン硫酸は、呼吸上皮の表面を含む細胞膜上に広く存在するグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の一種である。多くのタンパク質が、へパリン／へパラン硫酸に特異的に結合し、これらのタンパク質のＧＡＧ結合配列は同定されている。例えば、ヒト血小板第４因子（ＰＦ４）（配列番号３）、ヒトインターロイキン８（ＩＬ８）（配列番号４）、ヒト抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴ ＩＩＩ）（配列番号５）、ヒトアポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）（配列番号６）、ヒト血管関連遊走細胞タンパク質（ｈｕｍａｎ ａｎｇｉｏ‐ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｃｅｌｌ ｐｒｏｔｅｉｎ）（ＡＡＭＰ）（配列番号７）、又はヒトアンフィレギュリン（配列番号８）のＧＡＧ結合配列が、へパリンに対する高い親和性を有することが示されている（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．（１９９１）ＰＮＡＳ ８８：２７６８‐２７７２；Ｇｏｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｂｉｏｃｈｅｍ．４１：１６４０‐１６４６；Ｗｉｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｃｕｒｒ Ｂｉｏ ４：３９４‐４００；Ｗｅｉｓｇｒａｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８６） Ｊ Ｂｉｏ Ｃｈｅｍ ２６１：２０６８‐２０７６）。これらのタンパク質のＧＡＧ結合配列は、その受容体結合配列とは異なっているため、完全長タンパク質又は受容体結合ドメインと関連する生物活性を誘発しない。これらの配列、又はヘパリン／へパラン硫酸と結合することができるその他の配列を、シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質中の上皮アンカードメインとして用いることができる。
シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質に関連して、シアリダーゼには、シアリダーゼタンパク質全体が含まれていてよく、又はその触媒活性部分が含まれていてもよい。例えば、シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質は、配列番号１に示すアクチノミセスビスコーサス（Ａ．ｖｉｓｃｏｓｕｓ）由来の９０１アミノ酸シアリダーゼタンパク質を含んでいてよい。別の例では、シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質は、配列番号２に示すアクチノミセスビスコーサス由来の３９４アミノ酸のシアリダーゼタンパク質の触媒活性部分を含んでいてもよい。ＧＡＧ結合配列は、組換えの方法によってシアリダーゼに結合させることができる。ある例では、融合タンパク質は、４個のグリシン残基等の、アミノ酸リンカーを含んでいてよい。さらに、結合は、ＧＡＧ結合配列のＮ末端若しくはＣ末端、又はシアリダーゼのＮ末端若しくはＣ末端を介していてよい。シアリダーゼ‐ＧＡＧ融合タンパク質の代表的な例としては、配列番号９乃至１３及び１７に示すポリペプチドが挙げられる。さらなる例では、シアリダーゼ成分及びＧＡＧ結合配列成分は、化学リンカー又はペプチドリンカーを用いて、本技術分野で公知のいずれの方法によって結合させてもよい。
プロテアーゼインビビター８
セルピンＢ８としても知られるプロテアーゼインビビター８（ＰＩ８）は、セリンプロテアーゼインビビター（セルピン）である。セルピンは、構造的に関連するタンパク質の大きなスーパーファミリーであり、ウィルス、昆虫、植物、及び高等生命体で発現されるが、細菌又は酵母内では発現されない。セルピンは、凝固、線維素溶解、炎症、細胞遊走、及び腫瘍形成を含む多くの生物学的プロセスに関与しているプロテアーゼの活性を制御している。セルピンは、表面に露出した反応部位ループ（ｒｅａｃｔｉｖｅ ｓｉｔｅ ｌｏｏｐ）（ＲＳＬ）を含み、これは、プロテアーゼの基質配列を模倣することでプロテアーゼの「ベイト」として作用する。セルピンに標的プロテアーゼが結合すると、ＲＳＬが開裂され、その後、プロテアーゼがセルピンに共有結合される。新たに形成されたセルピン‐プロテアーゼ複合体中のプロテアーゼは不活性である（Ｈｕｎｔｉｎｇｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ ４０７：９２３‐９２６）。
ＰＩ８は、チキン卵白アルブミンが原型である、セルピンのサブファミリーのメンバーである。このファミリーに属する他のセルピンと同様に、ＰＩ８には、主として細胞内に存在する３７４アミノ酸のタンパク質（配列番号１４）を生じる、典型的な開裂性のＮ末端シグナル配列が欠けている。このヒト卵白アルブミン様サブファミリーの他のメンバーとしては、プラスミノーゲン活性化因子インヒビター２型（ＰＡＩ‐２）、単球好中球エラスターゼインヒビター（ｍｏｎｏｃｙｔｅ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｅｌａｓｔａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）（ＭＮＥＩ）、扁平上皮癌抗原（ＳＣＣＡ）‐１、ロイピン（ｌｅｕｐｉｎ）（ＳＣＣＡ‐２）マスピン（ＰＩ５）、プロテアーゼインヒビター６（ＰＩ６）、プロテアーゼインビビター（ＰＩ９）、及びボマピン（ｂｏｍａｐｉｎ）（ＰＩ１０）が含まれる。このファミリーの中で、セルピンであるＰＩ６、ＰＩ８、及びＰＩ９が、最も高い構造的相同性を示す（最高で６８％のアミノ酸同一性）（Ｓｐｒｅｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ． （１９９５） Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０：２９８５４‐２９８６１）。ＰＩ‐８は、トリプシン、トロンビン、第Ｘａ因子、スブチリシンＡ、フューリン、及びキモトリプシンをｉｎ ｖｉｔｒｏで阻害することが示されている。これは血小板によって放出され、フューリン活性の制御、従って、血小板凝集の制御に関与していると考えられる（ＬｅＢｌｏｎｄ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ９５：２４３‐２５２）。
凝固等の内在性の生物学的プロセスの制御における役割に加えて、セリンプロテアーゼインヒビターは、外来性の微生物の生物活性を阻害するように機能することもできる。例えば、数多くのセリンプロテアーゼインヒビターが、培養細胞、ニワトリ胚、及び感染マウスの肺内において、インフルエンザウィルスの活性化を低減することが示されている。セルピンは、インフルエンザウィルス表面上の赤血球凝集素（ＨＡ）分子と結合してその活性を阻害し、それによってウィルスの感染性を低下させる。例えば、トリプシンインヒビターである、アプロチニン（Ｚｈｉｍｏｖ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６：８６８２‐８６８９）、ロイペプチン（Ｚｈｉｍｏｖ ｅｔ ａｌ．（２００２） Ｊ Ｖｉｒｏｌ ７６：８６８２‐８６８９；Ｔａｓｈｉｒｏ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ ６８：２０３９‐２０４３）、大豆プロテアーゼインヒビター（Ｂａｒｂｅｙ‐Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １５５：６６７‐６７２）、ｅ‐アミノカプロン酸（Ｚｈｉｍｏｖ ｅｔ ａｌ．１９８２．Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ ７３：２６３‐２７２）、及びｎ‐ｐ‐トシル‐Ｌ‐リジンクロロメチルケトン（ＴＬＣＫ）（Ｂａｒｂｅｙ‐Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １５５：６６７‐６７２）は、全てインフルエンザウィルス感染を阻害することが示されており、インフルエンザウィルス感染症の治療に用いる治療薬の候補である。従って、関連するトリプシンインヒビターとして、ＰＩ８も、インフルエンザウィルス感染症の治療における治療薬として用いることができる。
界面活性剤
本明細書で提供される組成物は、カクテル溶液及び／又はマイクロスフェアを安定化させるのに十分な量で添加された１若しくは２種類以上の界面活性剤を含んでいてよい。界面活性剤の適切な量の選択は、化合物、溶媒、及び貧溶媒の性質に依存する。
特定の態様では、界面活性剤は、ラウリル硫酸ナトリウム；ラウリン酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタン、ステアリン酸ソルビタン（商品名Ｓｐａｎ（登録商標）２０‐４０‐６０等で入手可能）；モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン（商品名ＴＷＥＥＮＳ（登録商標）２０‐４０‐６０等で入手可能）等のポリソルベート；塩化ベンザルコニウム、混合鎖リン脂質（ｍｉｘｅｄ ｃｈａｉｎ ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ）、カチオン性脂質、オリゴ脂質、リン脂質、カルニチン、スフィンゴシン、スフィンゴミエリン、セラミド、糖脂質、リポタンパク質、アポタンパク質、両親媒性タンパク質、両親媒性ペプチド、両親媒性合成ポリマー、及びこれらの組合せ、から選択することができる。本発明で用いるその他の代表的な界面活性剤としては、これらに限定されないが、以下のものが挙げられる。
ｉ）天然脂質、すなわち、コレステロール、スフィンゴシン及び誘導体、ガングリオシド、スフィンゴシン誘導体（大豆）、フィトスフィゴシン及び誘導体（酵母）、コリン（ホスファチジルコリン）、エタノールアミン（ホスファチジルエタノールアミン）、グリセロール（ホスファチジル‐ＤＬ‐グリセロール）、イノシトール（ホスファチジルイノシトール）、セリン（ホスファチジルセリン（ナトリウム塩））、カルジオリピン、ホスファチジン酸、卵由来、リゾ（モノアシル）誘導体（リゾホスファチド）、水素化リン脂質、脂質組織抽出物、
ｉｉ）合成脂質、すなわち、非対称脂肪酸、対称脂肪酸‐飽和系、対称脂肪酸‐不飽和系、アシルコエンザイムＡ（アセトイルコエンザイムＡ、ブタノイルコエンザイムＡ、クロタノイルコエンザイムＡ（Ｃｒｏｔａｎｏｙｌ Ｃｏｅｎｚｙｍｅ Ａ）、ヘキサノイルコエンザイムＡ、オクタノイルコエンザイムＡ、デカノイルコエンザイムＡ、ラウロイルコエンザイムＡ、ミリストイルコエンザイムＡ、パルミトイルコエンザイムＡ、ステアロイルコエンザイムＡ、オレオイルコエンザイムＡ、アラキドイルコエンザイムＡ、アラキドノイルコエンザイムＡ、ベヘノイルコエンザイムＡ、トリコサノイルコエンザイムＡ、リグノセロイルコエンザイムＡ、ネルボノイルコエンザイムＡ、ヘキサコサノイルコエンザイムＡ）、
ｉｉｉ）スフィンゴ脂質、すなわち、Ｄ‐エリスロ（Ｃ‐１８）誘導体（スフィンゴシン：Ｄ‐エリスロスフィンゴシン（合成）、スフィンゴシン‐１‐リン酸、Ｎ，Ｎ‐ジメチルスフィンゴシン、Ｎ，Ｎ，Ｎ‐トリメチルスフィンゴシン、スフィンゴシルホスホリルコリン、スフィンゴミエリン、及びグリコシル化スフィンゴシン等）、セラミド誘導体（セラミド、Ｄ‐エリスロセラミド‐１‐リン酸、グリコシル化セラミド）、スフィンガニン（ジヒドロスフィンゴシン）（スフィンガニン‐１‐リン酸、スフィンガニン（Ｃ２０）、Ｄ‐エリスロスフィンガニン、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ２、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ８、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ１６、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ１８、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ２４、Ｎ‐アシル‐スフィンガニンＣ２４：１）、グリコシル化（Ｃ１８）スフィンゴシン及びリン脂質誘導体（グリコシル化‐スフィンゴシン）（スフィンゴシン，βＤ‐グルコシル、スフィンゴシン，βＤ‐ガラクトシル、スフィンゴシン，βＤ‐ラクトシル）、グリコシル化‐セラミド（Ｄ‐グルコシル‐β１‐１’セラミド（Ｃ８）、Ｄ‐ガラクトシル‐β１‐１’セラミド（Ｃ８）、Ｄ‐ラクトシル‐β１‐１’セラミド（Ｃ８）、Ｄ‐グルコシル‐β１‐１’セラミド（Ｃ１２）、Ｄ‐ガラクトシルβ１‐１’セラミド（Ｃ１２）、Ｄ‐ラクトシル‐β１‐１’セラミド（Ｃ１２））、グリコシル化‐ホスファチジルエタノールアミン（１，２‐ジオレオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホエタノールアミン‐Ｎ‐ラクトース）、Ｄ‐エリスロ（Ｃ１７）誘導体（Ｄ‐エリスロスフィンゴシン、Ｄ‐エリスロスフィンゴシン‐１‐リン酸）、Ｄ‐エリスロ（Ｃ２０）誘導体（Ｄ‐エリスロスフィンゴシン）、Ｌ‐スレオ（Ｃ１８）誘導体（Ｌ‐スレオスフィンゴシン、サフィンゴール（Ｌ‐スレオジヒドロスフィンゴシン））、スフィンゴシン誘導体（卵、脳、及び乳）（Ｄ‐エリスロ‐スフィンゴシン、スフィンゴミエリン、セラミド、セレブロシド、脳スルファチド）、ガングリオシド（ガングリオシド構造、ガングリオシド‐ヒツジ脳、ガングリオシド‐ブタ脳）、スフィンゴシン誘導体（大豆）（グルコシルセラミド）、フィトスフィンゴシン誘導体（酵母）（フィトスフィンゴシン、Ｄ‐リボ‐フィトスフィンゴシン‐１‐リン酸、Ｎ‐アシルフィトスフィンゴシンＣ２、Ｎ‐アシルフィトスフィンゴシンＣ８、Ｎ‐アシルフィトスフィンゴシンＣ１８、
ｉｖ）アシルコエンザイムＡ、すなわち、アセトイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ブタノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、クロタノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ヘキサノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、オクタノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、デカノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ラウロイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ミリストイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、パルミトイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ステアロイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、オレオイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、アラキドイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、アラキドノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ベヘノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、トリコサノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、リグノセロイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ネルボノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ヘキサコサノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、ドコサヘキサノイルコエンザイムＡ（アンモニウム塩）、
ｖ） 酸化脂質、すなわち、１‐パルミトイル‐２‐アゼラオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン、１‐Ｏ‐ヘキサデシル‐２‐アゼラオイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン、１‐パルミトイル‐２‐グルタロイル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン（ＰＧＰＣ）、１‐パルミトイル‐２‐（９’‐オキソ‐ノナノイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン、１‐パルミトイル‐２‐（５’‐オキソ‐バレロイル）‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐ホスホコリン、
ｖｉ）エーテル脂質、すなわち、：ジエーテル脂質（ジアルキルホスファチジルコリン、ジフィタニルエーテル脂質）、アルキルホスホコリン（ドデジルホスホコリン）、Ｏ‐アルキルジアシルホスファチジルコリニウム（１，２‐ジアシル‐ｓｎ‐グリセロ‐３‐エチルホスホコリン）、合成ＰＡＦ及び誘導体（１‐アルキル‐２‐アシル‐グリセロ‐３‐ホスホコリン及び誘導体）、
ｖｉｉ）蛍光脂質、すなわち：グリセロール系（ホスファチジルコリン（ＮＢＤ）、ホスファチジン酸（ＮＢＤ）、ホスファチジルエタノールアミン（ＮＢＤ）、ホスファチジルグリセロール（ＮＢＤ）、ホスファチジルセリン（ＮＢＤ））、スフィンゴシン系（セラミド（ＮＢＤ）、スフィンゴミエリン（ＮＢＤ）、フィトスフィンゴシン（ＮＢＤ）、ガラクトシルセレブロシド（ＮＢＤ））、頭部基標識脂質（グリセロール系）（ホスファチジルエタノールアミン（ＮＢＤ）、ホスファチジルエタノールアミン（リサミンローダミンＢ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ダンシル、ピレン、フルオレセイン）、ホスファチジルセリン（ＮＢＤ）、ホスファチジルセリン（ダンシル））、２５‐ＮＢＤ‐コレステロール、
ｖｉｉｉ）レシチン、Ｕｌｔｒａｌｅｃ‐Ｐ（ＡＤＭ）、大豆粉末、を含むがこれらに限定されない、その他の脂質、
ｉｘ）ポリエチレングリコール４００；ラウリル硫酸ナトリウム；ラウリン酸ソルビタン、パルミチン酸ソルビタン、ステアリン酸ソルビタン（商品名Ｓｐａｎ（登録商標）２０‐４０‐６０等で入手可能）；モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン、モノパルミチン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン、モノステアリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン等のポリソルベート（商品名ＴＷＥＥＮＳ（登録商標）２０‐４０‐６０等で入手可能）；塩化ベンザルコニウム、を含むがこれらに限定されない、界面活性剤。
特定の態様では、使用するリン脂質は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、混合鎖リン脂質、リゾリン脂質、水素化リン脂質、部分水素化リン脂質、及びこれらの混合物である。
特定の態様では、界面活性剤は、ポリソルベート８０、レシチン、及びホスファチジルコリンから選択される。界面活性剤は、カクテル溶液及び／又は得られたマイクロスフェアを安定化させるのに十分な量で存在する。
界面活性剤の量は、経験的に決定することができ、選択される界面活性剤、及び得られるマイクロスフェア組成物の所望の形態に依存する。含まれる量としては、０．１重量％未満から３５重量％若しくはこれを超える量までであってよい。特定の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対する重量％で、約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１５％、２０％、２５％から約３０％までの濃度で存在する。特定の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約２０重量％までの濃度で存在する。特定の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約１５重量％までの濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約１０重量％までの濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約８重量％までの濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約６重量％までの濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％から約４重量％までの濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約２０重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１５重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１３重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１１重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約８重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約６重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約４重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約２重量％の濃度で存在する。他の態様では、界面活性剤は、組成物の総重量に対して約１重量％の濃度で存在する。
任意である追加の剤
本明細書で提供される組成物は、対象とする化合物に加えて、対象へ投与するための１若しくは２種類以上の医薬用活性剤、ニュートラシューティカル用活性剤、診断用活性剤、若しくは美容用活性剤、又はその他のこのような活性剤を任意に含んでいてよい。一般に、このような剤は、免疫制御、生化学的プロセスの制御、又は酵素活性を例とするホスト内での機能を有するものである。本明細書で述べるように製剤することができるいかなる剤も、本明細書で提供される組成物中で投与することができる。剤が治療薬である場合は、組成物には、治療効果量の送達される剤が含まれる。用量中の活性剤の個々の量は、その活性剤の性質、治療される状態の性質、対象の年齢及び大きさ、並びにその他のパラメーターに応じて大きく変化することになる。さらに、マイクロスフェアを形成する化合物は、それ自体が活性剤であってもよい。
一般に、組成物中の化合物以外の追加の活性剤又は栄養素の量は、組成物に対して約０．０１重量％未満乃至約２０重量％若しくはこれを超える量の範囲で変化し、通常は、単一の投与用量として製剤される。単一用量は、ホストの体重１キログラムあたりの剤として約０．０１μｇ乃至１０ｍｇの範囲で変化してよく、約０．１μｇ／ｋｇ乃至１ｍｇ／ｋｇの用量が一般に用いられる。しかし、これらの濃度は単に一般的なガイドラインであり、個々の量及び用量は、投与される活性剤、治療される状態、に基づいて選択することができ、用いられる治療レジメンとは、何らかの医学的治療を受ける対象に対して、適度なベネフィット／リスク比にて所望の局所的若しくは全身的な効果及び成果を提供するのに十分である薬剤又は活性剤の量を意味する。
剤としては、無機及び有機薬剤から選択することができ、これらに限定されないが、末梢神経、アドレナリン受容体、コリン受容体、神経系、骨格筋、心血管系、平滑筋、血液循環系、シナプス部位、神経効果器接合部位、内分泌系、ホルモン系、免疫系、生殖器系、骨格系、オータコイド系、消化及び排泄系、ヒスタミン系等に対して作用する薬剤が含まれる。本明細書で提供される組成物を用いて送達することができる活性剤としては、これらに限定されないが、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬、ワクチン、経膣薬、ビタミン、ミネラル、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、及びハーブ系補助薬を含む栄養補助薬が挙げられる。
送達される剤のレベルは、組成物の重量に対して、約０．０１％から約５０％まで、約０．１％から約４０％まで、約０．１％から約３０％まで、約０．１％から約２０％まで、約０．１％から約１０％まで、約０．１％から約９％まで、約０．１％から約８％まで、約０．１％から約７％まで、約０．１％から約６％まで、約０．１％から約５％まで、約０．１％から約４％まで、約０．１％から約３％まで、約０．１％から約２％まで、約０．１％から約１％まで、である。送達される剤は、水溶性、僅かに水溶性、又は有機溶媒若しくは油に対して可溶性であってよい。特定の態様では、送達される剤は、抗生物質、化学療法薬、抗ウィルス薬、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、非変性乳清タンパク質、点眼薬、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬、ワクチン、経膣薬、ビタミン、ミネラル、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、及びハーブ系補助薬を含む栄養補助薬、の中から選択される。
代表的な活性剤は、マイクロ粒子の作製に適する化合物として挙げた化合物の種類と同一であり、本明細書の「高分子及び低分子」のセクションにて、「高分子及び低分子の代表的な活性剤のカテゴリー」として示す。
Ｅ．組成物の使用
マイクロスフェアの治療及び診断用途としては、薬物送達、ワクチン接種、遺伝子治療、及びｉｎ ｖｉｖｏでの組織又は腫瘍のイメージングが挙げられる。投与経路としては、経口投与又は非経口投与；粘膜投与；点眼投与；静脈内、皮下、関節内、又は筋肉内注射；吸入投与；及び、局所投与が挙げられる。
疾患及び障害としては、これらに限定されないが、神経障害、呼吸障害、免疫系障害、筋肉障害、生殖障害、胃腸障害、肺障害、消化障害、代謝障害、心血管障害、腎臓障害、増殖性障害、癌性疾患、及び炎症を挙げることができる。
本明細書で提供されるマイクロ粒子を用いることにより、アルボウィルス感染、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンジダ症、カンピロバクター症、水痘、クラミジア感染症、コレラ、コロノウィルス感染症、ブドウ球菌感染症、コクサッキーウィルス感染症、クロイツフェルト‐ヤコブ病、クリプトスポリジウム症、シクロスポラ感染症、サイトメガロウイルス感染症、エプスタイン‐バーウイルス感染症、デング熱、ジフテリア、耳感染症、脳炎、インフルエンザウイルス感染症、パラインフルエンザウィルス感染症、ジアルジア症、淋病、インフルエンザ菌感染症、ハンタウィルス感染症、ウイルス肝炎、単純ヘルペスウイルス感染症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヘリコバクター感染症、ヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）感染症、伝染性単核球症、レジオネラ症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、リンパ性脈絡髄膜炎、マラリア、麻疹、マルブルグ出血熱、脳膜炎、サル痘、流行性耳下腺炎、マイコバクテリア感染症、マイコプラズマ感染症、ノーウォークウイルス感染症、百日咳、蟯虫感染症、肺炎球菌の疾患、ストレプトコッカスニューモニエ感染症、マイコプラズマニューモニエ感染症、モラクセラカタラーリス感染症、シュードモナスエルジノーサ感染症、ロタウイルス感染症、オウム病、狂犬病、ＲＳウイルス感染症（ＲＳＶ）、白癬、ロッキー山紅斑熱、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ、疥癬、性行為感染症、細菌性赤痢、帯状疱疹、スポロトリコーシス、レンサ球菌感染症、梅毒、テタヌス、旋毛虫症、結核、野兎病、腸チフス、ウイルス性髄膜炎、細菌性髄膜炎、西ナイルウイルス感染症、黄熱、アデノウイルスが媒介する感染症及び疾患、レトロウイルスが媒介する感染性疾患、エルシニア感染症、人畜共通感染症、及び呼吸、肺、皮膚、胃腸、及び尿路のその他のいずれかの感染性疾患、等の感染性疾患を治療することができる。
その他の疾患及び状態としては、関節炎、喘息、アレルギー状態、アルツハイマー病、癌、心血管疾患、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病、嚢胞性線維症（ＣＦ）、糖尿病、非ウイルス性肝炎、血友病、出血障害、血液疾患、遺伝的障害、ホルモン性障害、腎疾患、肝疾患、神経障害、代謝疾患、皮膚状態、甲状腺疾患、骨粗鬆症、肥満、ストローク、貧血、炎症性疾患、並びに自己免疫疾患を含む。
Ｆ．組み合わせ、キット、製品
マイクロ粒子、又は対象とする低分子若しくは高分子、対イオン、溶媒、バッファー、若しくは塩等のマイクロ粒子を形成するための成分を含み、任意に投与の説明書を含む、本明細書で提供される組み合わせを含む組み合わせ及びキットが提供される。組み合わせには、例えば、本明細書で提供される組成物、及び試薬又はヒトを含む対象ホストへの投与に対して所望される濃度までこの組成物を希釈するための溶液が含まれる。組み合わせには、本明細書で提供される組成物、並びに薬剤を含む、本明細書で提供される追加の栄養剤及び／又は治療薬が含まれていてもよい。
本明細書ではさらに、上述の組合せ、及び、送達されるタンパク質及び１若しくは複数種類の任意の追加の剤に応じて経口、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、点眼、又はその他の経路による投与のための説明書を任意に含む、キットが提供される。
本明細書で提供される組成物は、包装材、本明細書で提供される組成物、及び、ＤＡＳ１８１製剤又はバンコマイシン製剤を例とする組成物が、経口、経肺、又はその他の送達用に製剤されていることを示すラベル、を含む製品としてパッケージされていてよい。
本明細書で提供される製品には、包装材が含まれていてよい。医薬製品のパッケージングに使用するための包装材は、当業者に公知である。例えば、米国特許第５，３２３，９０７号、第５，０５２，５５８号、及び第５，０３３，２５２号を参照されたい。医薬品用包装材の例としては、これらに限定されないが、ブリスターパック、ボトル、チューブ、吸入器、ポンプ、袋、バイアル、容器、ボトル、並びに選択される製剤及び意図する投与及び治療モードに適したいずれの包装材をも挙げられる。
以下の実施例は、単に例示する目的で含まれているだけであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
実施例１
シアリダーゼ融合タンパク質ＤＡＳ１８１のマイクロスフェアの作製
Ａ．ＤＡＳ１８１の精製
ＤＡＳ１８１は、そのＮ末端を介してアクチノミセスビスコーサスの触媒ドメインのＣ末端に融合したヒトアンフィレギュリン由来のへパリン（グリコサミノグリカン、又はＧＡＧ）結合ドメインを含む融合タンパク質である（配列番号１７に示すアミノ酸の配列）。ＤＡＳ１８１の精製は、その全文が参照することで本明細書に組み入れられる、Ｍａｌａｋｈｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．，１４７０‐１４７９，２００６、に記載のようにして行った。簡潔に述べると、ＤＡＳ１８１をコードするＤＮＡ断片を、ＩＰＴＧ（イソプロピル‐β‐Ｄ‐チオガラクトピラノシド）誘導性プロモーターの支配下にてプラスミドベクターｐＴｒｃ９９ａ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ；配列番号１６）へクローン化した。得られたコンストラクトは、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）のＢＬ２１株内で発現させた。
発現されたコンストラクトを含む大腸菌細胞を、５０ｍＭのリン酸バッファー、ｐＨ８．０；０．３ＭのＮａＣｌ及び１０％のグリセロール、の中で超音波処理により溶解した。透明となったライセートを、ＳＰ‐セファロースカラムに通した。タンパク質は、０．８ＭのＮａＣｌを含む溶解バッファーを用いてカラムから溶離した。ＳＰ‐セファロースから溶離した画分を、硫酸アンモニウム（（ＮＨ４）２ＳＯ４）１．９Ｍへ調節し、遠心分離によって透明化させ、ブチル‐セファロースカラム上に充填した。カラムを、２容量分の１．３Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４で洗浄し、０．６５Ｍの（ＮＨ４）２ＳＯ４を用いてＤＡＳ１８１融合タンパク質を溶離した。
最終工程として、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で平衡化したセファクリルＳ‐２００上でサイズ排除クロマトグラフィーを行った。タンパク質の純度を、ドデシル硫酸ナトリウム‐ポリアクリルアミドゲル電気泳動、逆相高圧液体クロマトグラフィー、及び大腸菌細胞タンパク質に対して作製された抗体による酵素結合免疫吸着アッセイで評価し、９８％超であると測定された。分子量４４，８００Ｄａである精製されたＤＡＳ１８１は、２ｍＭの酢酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．０、に対して透析した。
Ｂ．ＤＡＳ１８１の活性
ＤＡＳ１８１のシアリダーゼ活性は、蛍光発生基質である４‐メチルウンベリフェリル‐Ｎ‐アセチル‐α‐Ｄ‐ノイラミン酸（４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡ；Ｓｉｇｍａ）を用いて測定した。シアリダーゼの１ユニットは、０．２ｍｌの体積中に２０ｎｍｏｌの４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡを含む反応系において、３７℃にて（５０ｍＭのＣＨ３ＣＯＯＨ‐ＮａＯＨバッファー、ｐＨ５．５）１０分間に４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡから１０ｎｍｏｌのＭＵを遊離する酵素の量として定義される（Ｐｏｔｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，９４：２８７‐２９６，１９７９）。ＤＡＳ１８１の比活性は、１３００Ｕ／ｍｇ‐タンパク質（１ユニットの活性あたり０．７７μｇのＤＡＳ１８１タンパク質）であると測定された。
Ｃ．精製ＤＡＳ１８１を用いたマイクロスフェアの作製
上記のセクションＡの記載に従って精製し、調製したＤＡＳ１８１（１０ｍｇ／ｍｌ）を用いて、以下に示す２００μｌのカクテル溶液を形成した。カクテル溶液は、対イオンとしてグリシン又はクエン酸塩のいずれかを、有機溶媒としてイソプロパノールを含んでおり、以下の通りであった：
１）ＤＡＳ１８１ ＋ ５ｍＭグリシン、ｐＨ５．０；
２）ＤＡＳ１８１ ＋ ５ｍＭグリシン、ｐＨ５．０ ＋ １０％イソプロパノール；
３）ＤＡＳ１８１ ＋ ５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０；
４）ＤＡＳ１８１ ＋ ５ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０ ＋ １０％イソプロパノール；
上記の１）乃至４）に記載する成分のカクテル溶液を含むプラスチック製マイクロ遠心チューブを以下のようにして少しずつ冷却した：
（ａ）カクテル溶液を冷蔵庫内に配置し、環境温度（約２５℃）から４℃まで冷却し、続いて：
（ｂ）（ａ）から得られたカクテル溶液を冷凍庫内に配置して−２０℃まで冷却し、続いて：
（ｃ）（ｂ）から得られたカクテル溶液を冷凍庫内に配置して−８０℃まで冷却して凍結させた。
最適条件下であれば、マイクロスフェアは、約４℃から約−２０℃の間で形成すると考えられる（一般的には、約−２℃乃至約−１５℃の範囲内）。−８０℃までの凍結は、凍結乾燥によってマイクロスフェア以外の成分（例：溶媒等）をカクテル溶液から除去するために行われる。カクテル溶液４）は、３つの反復サンプルとして調製し、２つのアリコートをプラスチックチューブで、１つのアリコートをガラスチューブで調製した。１つのアリコート（プラスチックチューブ）を上述のようにして冷却し、他の２つのアリコート（１つがプラスチックチューブ、１つがガラスチューブ）には、チューブを液体窒素内に浸漬することで、スナップ冷却／凍結を施した。
凍結の際には、全てのチューブを凍結乾燥器内に配置し、昇華によって揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、乾燥ペレットが残った。
結果： 上述のようにして処理したカクテル溶液から回収された乾燥ペレットを、マイクロスフェアの存在について試験した。上記サンプルのうち、良好な分散特性を有し、サイズが約２ミクロン（μｍ）であるマイクロスフェアは、クエン酸塩の対イオン及びイソプロパノールを含有して少しずつの冷却を施されたカクテル溶液４）でのみ観察された。グリシンの対イオンは、少しのマイクロスフェアを含むだけであるガラス様結晶と凝塊体の混合物を示し、ＤＡＳ１８１タンパク質にとって最適ではないことが分かった（カクテル溶液２））。有機溶媒が存在しない場合は、凍結乾燥したＤＡＳ１８１タンパク質のガラス様の塊が得られたが、マイクロスフェアは観察されなかった（カクテル溶液１）及び３））。ガラスチューブのカクテル溶液４）のスナップ凍結では、ガラス様の結晶が生成し、マイクロスフェアは生成しなかったが、一方、プラスチックチューブのカクテル溶液４）のスナップ凍結（プラスチックは、ガラスよりも熱の拡散が遅いため、冷却速度が僅かに遅い）では、凝塊となったマイクロスフェアが生成した。
本実施例により、本明細書で提供される方法を用いることで、粒径分布が狭く分散性が良好（最小限の凝塊形成）であるマイクロスフェアを、適切なタンパク質、対イオン、有機溶媒、及び少しずつの冷却の組み合わせによって作製可能であることが実証される。
実施例２
有機溶媒濃度の関数としてのＤＡＳ１８１マイクロスフェアのサイズ
ＤＡＳ１８１の精製、及びこれを用いたマイクロスフェアの作製を、ＤＡＳ１８１タンパク質（１０ｍｇ／ｍｌ）、クエン酸塩対イオン（クエン酸ナトリウム、５ｍＭ）、及びイソプロパノール有機溶媒（１０％、２０％、又は３０％）の組合せを用いて、上記の実施例１（カクテル溶液４）を参照）に記載のようにして行った。得られたカクテル溶液を、実施例１に記載の様に、環境温度（約２５℃）から４℃に冷却し、続いて−２０℃に冷却し、続いて−８０℃まで冷却して凍結させた。−８０℃で凍結させる際、チューブを凍結乾燥器内に配置し、昇華により揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
結果： マイクロスフェアの形成は、３種類の濃度：１０％、２０％、又は３０％の有機溶媒イソプロパノール、の全てで観察された。しかし、マイクロスフェアの大きさは、有機溶媒の濃度に応じて異なっていた。粒子を血球計数器上の格子と比較して測定したマイクロスフェアのサイズは、１０％のイソプロパノールを用いものは２ミクロン、２０％のイソプロパノールを用いたものは４ミクロン、そして３０％のイソプロパノールを用いたものは５乃至６ミクロンと測定された。これらの結果は、適切な濃度の有機溶媒を用いることで、所望されるようにマイクロ粒子のサイズを設計することが可能であることを示している。
実施例３
タンパク質濃度の関数としてのＤＡＳ１８１マイクロスフェアのサイズ
ＤＡＳ１８１の精製、及びこれを用いたマイクロスフェアの作製を、ＤＡＳ１８１タンパク質（５ｍｇ／ｍｌ又は１０ｍｇ／ｍｌ）、クエン酸塩対イオン（クエン酸ナトリウム、５ｍＭ）、及びイソプロパノール（５％又は２０％）の組合せを用いて、上記の実施例１（カクテル溶液４）を参照）に記載のようにして行った。得られたカクテル溶液を、実施例１に記載の様に、環境温度（約２５℃）から４℃に冷却し、続いて−２０℃に冷却し、続いて−８０℃まで冷却して凍結させた。−８０℃で凍結させる際、チューブを凍結乾燥器内に配置し、昇華により揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
結果： マイクロスフェアの形成は、いずれの濃度のタンパク質でも（５ｍｇ／ｍｌ及び１０ｍｇ／ｍｌ）、及びいずれの濃度の有機溶媒でも（５％又は２０％）観察された。しかし、マイクロスフェアの大きさは異なっていた。５ｍｇ／ｍｌ又は１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質、及び５％のイソプロパノールを含むカクテル溶液では、生成したマイクロスフェアのサイズは約１．５ミクロンと測定された。５ｍｇ／ｍｌのタンパク質及び２０％のイソプロパノールを含むカクテル溶液では、生成したマイクロスフェアのサイズは約３ミクロンと測定され、一方、１０ｍｇ／ｍｌのタンパク質及び２０％のイソプロパノールを含むカクテル溶液では、生成したマイクロスフェアのサイズは約４ミクロンと測定された。これらの結果は、適切なタンパク質濃度、又は有機溶媒濃度とタンパク質濃度との適切な組合せを用いることで、所望されるようにマイクロ粒子のサイズを設計することが可能であることを示している。
実施例４
対イオン濃度の関数としてのＤＡＳ１８１マイクロスフェアのサイズ
ＤＡＳ１８１の精製、及びこれを用いたマイクロスフェアの作製を、ＤＡＳ１８１タンパク質（１０ｍｇ／ｍｌ）、クエン酸塩対イオン（クエン酸ナトリウム；２ｍＭ、３ｍＭ、又は６ｍＭ）、及びイソプロパノール（２０％）の組合せを用いて、上記の実施例１（カクテル溶液４）を参照）に記載のようにして行った。カクテル溶液をガラスバイアル中で混合し、Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器内にて、＋２０℃から−４０℃まで、１分間に１℃の冷却勾配で冷却した。−３０℃で１２時間の１次乾燥及び３０℃で３時間の２次乾燥と共に、１００ｍＴｏｒｒでの昇華によって揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
結果：マイクロスフェアの形成は、試験した３種類のクエン酸塩対イオン濃度の全てで観察された。マイクロスフェアのサイズは、２ｍＭのクエン酸塩での１ミクロンから、３ｍＭのクエン酸塩での３ミクロン、６ｍＭのクエン酸塩での５ミクロンへと増加した。２ｍＭのクエン酸塩を含むカクテル溶液へ、１ｍＭの酢酸ナトリウム又は１ｍＭの塩化ナトリウムを添加しても、クエン酸塩対イオンによって誘発されるマイクロスフェアの形成に影響は無かった。これらの結果は、適切な濃度の対イオンを用いることで、所望されるようにマイクロ粒子のサイズを設計することが可能であることを示している。
実施例５
界面活性剤の存在下で形成されたＤＡＳ１８１マイクロスフェア
高分子（例：タンパク質）マイクロスフェアへの界面活性剤の添加により、鼻腔内又は経口吸入等の特定の投与経路に対して、流動性、分散性、及び消失等、対象への投与を適切なものとするマイクロスフェアの特性を向上させることができる場合が多い。本明細書で提供されるマイクロスフェアの製造方法に界面活性剤を組み込むことが可能かどうかを試験するために、溶液へさらに界面活性剤を添加したこと以外は上記の実施例１に記載のようにして、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの作製を行った。
５ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ１８１、５ｍＭのクエン酸ナトリウム、及び２０％のイソプロパノールを含むカクテル溶液へ、界面活性剤（３．５重量％のレシチン、０．７重量％のＳｐａｎ‐８５（登録商標）（トリオレイン酸ソルビタン）、又は３．５重量％のオレイン酸）を添加した。上記の実施例１に記載のように、溶液を４℃まで冷却し、続いて−２０℃まで冷却し、続いて凍結乾燥のために−８０℃まで冷却、凍結させることでマイクロスフェアを形成させた。凍結の際、チューブを凍結乾燥器内に配置し、昇華により揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
結果：上記の各カクテル溶液を上述のように処理することから得られたマイクロスフェアを、カバーガラスを用いて円形に動かして擦ることでスライドガラス上に広げた。全ての場合で効率的なマイクロスフェアの形成が観察された。界面活性剤を含むサンプルを、界面活性剤は添加していないが残りの成分は全てを含むサンプルと比較すると、界面活性剤の存在下で形成したマイクロスフェアの分散性が向上している（凝塊又は凝集がより少ない）ことが分かった。
実施例６
適切な種類及び濃度の有機溶媒並びに対イオンの選択によるウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）のマイクロスフェアの作製
本明細書で述べるように、本明細書で提供される方法を、高スループットフォーマットにて経験的に最適化することにより、サイズ、流動性、及び分散性を含む所望の特性を有するマイクロスフェアを得ることができる。本実験の目的は、有機溶媒及び対イオンの種類並びに濃度、さらにはカクテル溶液のｐＨを変えることにより、対象とするタンパク質、この場合はウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、のマイクロスフェアのサイズ及び品質を調節可能であることを実証することとした。
５ｍｇ／ｍｌのＢＳＡ、並びに種々の有機溶媒及び対イオンを、示したｐＨ及び濃度で含むカクテル溶液（表１参照）を、マイクロタイタープレート中へ配置した（１ウェルあたりの最終体積は０．１ｍｌ）。カクテル溶液を、Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器内で、＋２０℃から−４０℃まで１分間に１℃の冷却勾配にて冷却した。−３０℃で１２時間の１次乾燥及び３０℃で３時間の２次乾燥と共に、１００ｍＴｏｒｒでの昇華によって揮発性物質を除去した。
結果： 結果を以下の表１に示す。ＢＳＡタンパク質について、結晶化又は凝集が最小限で、最も均一であるマイクロスフェアを生成した組合せ（それぞれ、対イオン及び有機溶媒）には、以下のものが含まれる：
（１） クエン酸塩 ＋ イソプロパノール
（２） クエン酸塩 ＋ アセトン
（３） イタコン酸 ＋ １‐プロパノール
（４） グリシン ＋ ジオキサン
（５） グリシン ＋ １‐プロパノール
（６） ルビジウム ＋ １‐プロパノール
（７） 過塩素酸塩 ＋ １‐プロパノール
Figure 2010534563
Figure 2010534563
これらの結果は、高スループットフォーマットにて、最良のマイクロスフェア形成（所望の大きさ、均一性、分散性、最小限の凝集及び結晶形成、等）に関して、各タンパク質について複数の製剤を容易にスクリーニング可能であることを示している。最初のスクリーニングから選択された試薬及び条件の組合せ（対イオン、有機溶媒、ｐＨ、濃度）は、続いて、所望されるようにさらに微調整することができる。
実施例７
種々のタンパク質を用いたマイクロスフェアの形成
本明細書で提供される方法を用いて、種々のタンパク質を用いたマイクロスフェアを作製することができる。上記で例示したＤＡＳ１８１及びＢＳＡに加え、本方法を用いて、トリプシン、ヘモグロビン、デオキシリボヌクレアーゼＩ、リゾチーム、卵白アルブミン、リボヌクレアーゼＡ、ヘキサヒスチジン‐タグ ヒトプロテイナーゼインヒビター８（ＰＩ８、配列番号１５に示すアミノ酸配列を有する）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）からマイクロスフェアを作製した。
デオキシリボヌクレアーゼＩ、トリプシン、及びヘモグロビンは、Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎより購入した。リゾチーム、卵白アルブミン、及びリボヌクレアーゼＡは、Ｓｉｇｍａより購入した。
６×ＨｉｓタグＰＩ８、ＧＦＰ、及びＲＦＰの精製：６×ＨｉｓタグＰＩ８、ＧＦＰ、及びＲＦＰの発現及び精製は、本質的には、上記の実施例１でＤＡＳ１８１について述べたようにして行い、以下の変更を加えた：
６×ＨｉｓタグＧＦＰ及び６×ＨｉｓタグＲＦＰの精製：Ｎ末端Ｈｉｓ６タグを有する赤色蛍光タンパク質及び緑色蛍光タンパク質をコードするコンストラクトを、６×Ｈｉｓタグタンパク質として大腸菌中で発現させた。赤色蛍光タンパク質の発現は、１ｍＭのＩＰＴＧを含むＬＢ培地中で一晩かけて進行させた。緑色蛍光タンパク質は、１ｍＭのＩＰＴＧを含むＴＢ培地中で３時間誘導した。誘導された培養物４リットルからの細胞ライセートを遠心分離によって透明化し、ニッケルでチャージされＣ‐１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に充填されたＦａｓｔ‐Ｆｌｏｗ Ｃｈｅｌａｔｉｎｇ樹脂（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）上での金属キレートアフィニティークロマトグラフィーによりタンパク質を精製した。
リン酸緩衝生理食塩水で平衡化させた０．５ｃｍ×７０ｃｍのＳｅｐｈａｃｒｙｌ２００カラム上でのゲルろ過クロマトグラフィーにより、さらにタンパク質を精製した。タンパク質は、２ｍＭの酢酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．０、に対して透析を行い、Ｃｅｎｔｒｉｐｒｅｐ（Ａｍｉｃｏｎ）上で濃縮した。
６×ＨｉｓタグＰＩ８の精製：Ｎ末端Ｈｉｓ６タグを有するＰＩ８をコードするコンストラクトを、６×ＨｉｓタグＰＩ８として大腸菌中で発現させた。精製は、種々のクロマトグラフィー精製工程で用いたバッファーがすべて１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２‐カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）を含んでいたこと以外は、上記で６×Ｈｉｓ ＲＦＰ及び６×Ｈｉｓ ＧＦＰについて述べたようにして行った。
マイクロスフェアの作製：５ｍｇ／ｍｌのタンパク質、並びに以下に挙げる種々の対イオン、有機溶媒、及びｐＨを含むカクテル溶液を、上記の実施例６で述べたようにしてマイクロタイタープレート中で調製した。
Figure 2010534563
マイクロタイタープレートは、Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器内で、＋２０℃から−４０℃まで１分間に１℃の冷却勾配にて冷却した。−３０℃で１２時間の１次乾燥及び３０℃で３時間の２次乾燥と共に、１００ｍＴｏｒｒでの昇華によって揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
乾燥粉末をスライドグラス上に広げ、３２×又は１００×のいずれかの対物レンズを通して顕微鏡観察を行った。上記の表２に挙げる全ての組合せで、良好な品質（凝集体及び／又は結晶がほとんどなく、均一な粒径分布、分散性）のマイクロスフェアが生成した。マイクロスフェアのサイズはタンパク質に応じて異なり、約０．４乃至１ミクロン（リボヌクレアーゼＡ、デオキシリボヌクレアーゼＩ）から約２乃至５ミクロン（６×Ｈｉｓ ＰＩ８、リゾチーム）であった。本実施例により、本明細書で提供される方法を用いて、広範囲にわたる種々のタンパク質からマイクロスフェアを作製可能であることが実証される。
実施例８
吸入用ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの空気力学的粒径分布：本明細書で提供される方法とスプレードライとの比較
本明細書で述べるように、本明細書で提供される方法を用いて、約０．５ミクロンから約６乃至８ミクロンまでの範囲を含むあらゆる所望の範囲のサイズである、吸入による送達のためのマイクロスフェアを作製することができる。
Ａ．マイクロスフェアの作製
吸入による送達用に製剤されたＤＡＳ１８１乾燥粉末（マイクロスフェア）の空気力学的粒径分布を試験するために、以下の２種類の方法を用いてＤＡＳ１８１マイクロスフェアを作製した：
（ａ）１４ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ１８１、５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含むｐＨ５．０のＤＡＳ１８１水溶液を、５５℃にて空気流内へ向けてスプレードライし、マイクロスフェアを生成させた。
（ｂ）別の選択肢として、本明細書で提供される方法に従ってＤＡＳ１８１マイクロスフェアを作製した。１４ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ１８１、５ｍＭのクエン酸ナトリウムを含むｐＨ５．０のＤＡＳ１８１水溶液に、５％のイソプロパノールを有機溶媒として添加した。得られた溶液を、Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器内で、＋２０℃から−４０℃まで１分間に１℃の冷却勾配にて冷却した。−３０℃で１２時間の１次乾燥及び３０℃で３時間の２次乾燥と共に、１００ｍＴｏｒｒでの昇華によって揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
Ｂ．マイクロスフェアの空気力学的粒径分布
実施例８Ａで述べたようにして作製したマイクロスフェアを、アンダーセンカスケードインパクション（Ａｎｄｅｒｓｅｎ Ｃａｓｃａｄｅ Ｉｍｐａｃｔｉｏｎ）により試験した。呼吸気道内での薬剤の沈着は、カスケードインパクターのステージ／回収プレート上での粒子（マイクロスフェア）の空気力学的挙動により予測することができる。
上記のセクションＡで述べた２種類の異なる方法のうちの一方、すなわち、スプレードライ、又は本明細書で提供される方法のいずれかによって作製したＤＡＳ１８１マイクロスフェアを用いてカスケードインパクション実験を行った。マイクロスフェア（１０ｍｇ）をゼラチンカプセルへ充填した。このゼラチンカプセルを、ＣｙｃｌｏＨａｌｅｒ（ＰｈａｒｍａＣｈｅｍｉｅ）乾燥粉末吸入器に投入し、カスケードインパクションを施した。毎分９０リットルの空気流を使用するように改良し、ＵＳＰスロート（ＵＳＰ ｔｈｒｏａｔ）及び誘導コーン（ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｃｏｎｅ）を装備し、プレセパレーター（ｐｒｅｓｅｐａｒａｔｏｒ）を装備しない、８‐ステージ非生物用（ｎｏｎ‐ｖｉａｂｌｅ）アンダーセンカスケードインパクター（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ，ボストン）を用いた。吸入後の沈着の種々の領域／ステージ（気管、一次及び二次気管支、終末気管支、肺胞等）を表すインパクターの回収プレートをシリコンスプレーでコーティングし、マイクロスフェアの跳ね返りを防いだ。ステージ及び回収プレートからのマイクロスフェアを、０．１％のＴｗｅｅｎを含むリン酸緩衝生理食塩水中に回収し、各ステージ及び回収プレートから回収された沈着ＤＡＳ１８１の量を、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって定量した。
結果：２種類の方法で作製したマイクロスフェアの幾何学径を光学顕微鏡観察によって評価し、いずれの方法についても本質的に同一（１．５乃至３．０ミクロンの範囲）であることが分かった。しかし、下記の表３に示すように、この２種類の試料の空気力学的粒径分布は、２種類の方法の間で大きく異なっている。本明細書で提供される方法に従って作製したマイクロスフェア（すなわち、上記のセクションＡに示す方法（ｂ））の場合は、口腔内（インパクターアセンブリーのスロート／コーン）に捕獲されたのは２５％未満であり、一方７０％を超えるマイクロスフェアが気管及び肺へ（４０％超は終末気管支及び肺胞内へ）と送達された。これと比較して、スプレードライ（上記のセクションＡで示す方法（ａ））によって形成されたＤＡＳ１８１マイクロスフェアでは、気管及び肺へ送達されたのは５０％未満であった（終末気管支及び肺胞へは２０％未満）。この結果は、本明細書で提供される方法によって、肺深部への送達のためのマイクロスフェアを作製することができること、及び本明細書で提供される方法により作製したマイクロスフェアが、スプレードライ法で作製したマイクロスフェアと比較して、より優れた脱凝集性及び流動性を有する（より高い送達用量を提供する）ことを示している。
Figure 2010534563
実施例９
マイクロスフェアの大スケールでの製造
本実施例では、本明細書で提供される方法をＤＡＳ１８１の大量生産のためにスケールアップ可能であることを実証する。本明細書で述べるバッチプロセスは、高品質の乾燥粉末マイクロスフェアを、例えば、数ミリグラム乃至約１キログラムの範囲の量で製造するのに適しており、混合タンクの能力及び／又は凍結乾燥の棚のスペースによって制限される。本明細書で述べる別の選択肢としての「連続」プロセスを用いると、例えば、数百グラム乃至１００キログラム又はこれを超える範囲の量（１００グラム乃至１００ｋｇ、及びこれを超える量）を製造することができる。連続プロセスのさらなる利点は、カクテル溶液の冷却がより良好に制御されることである。
バッチプロセス又は連続プロセスによる大スケールでの製造は、例えば、以下で述べる１若しくは２つ以上の工程のいずれかの組合せに従うか、又は特定の別の選択肢としての方法に従って行うことができる：
・マイクロスフェアへのタンパク質の析出 この工程は、所望の濃度のタンパク質、有機溶媒、及び対イオンを含むカクテル溶液を１若しくは複数の凍結乾燥トレイ中に配置し、この１若しくは複数のトレイを凍結乾燥器の棚に配置することにより、バッチモードで行うことができる。別の選択肢として、冷却したプラットホーム上又はその他の種類の装置（例：冷凍庫）にてトレイを冷却して凍結させ、凍結した状態である期間保存し、後に凍結乾燥してもよい。別の選択肢として、容器を冷却表面上に配置するか若しくは冷却コイルを液体中に浸漬させるか、又はぜん動式ポンプを用いてカクテル溶液を熱交換器中に再循環させながら、撹拌した状態の容器内で析出させることでマイクロスフェアを形成してもよい。別の選択肢として、ぜん動式ポンプを用いてカクテル溶液を１若しくは複数の熱交換器に一回通すことによって連続モードにて析出させることにより、マイクロスフェアを形成してもよい。
・バルク液体の除去 マイクロスフェアの懸濁液は、標準的な遠心分離、連続流遠心分離（例：ＣＡＲＲ ＶｉａＦｕｇｅ Ｐｉｌｏｔ）、又はろ過（例：グラスファイバー、焼結ガラス、ポリマーフィルター、中空糸カートリッジ（例：ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ製のもの）、若しくはタンジェンシャルフローろ過カセット（ＴＦＦカセット、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ若しくはＳａｒｔｏｒｉｕｓ製のもの等））を用いることによって濃縮することができる。バルク液体の除去（５０％以上）により、乾燥サイクルの迅速化、並びに高い効率及びスループットが可能となる。
・マイクロスフェアの乾燥 いずれかのモードで形成され回収されたマイクロスフェアは、従来の凍結乾燥によって乾燥することができる。別の選択肢として、マイクロスフェアは、環境温度下及び大気圧下にて乾燥してもよく、これによって凍結乾燥器の使用が排除される。
結果：本明細書で述べる連続モードにより、ＤＡＳ１８１タンパク質を乾燥粉末（マイクロスフェア）へと加工することに成功した。１０ｍｇ／ｍｌのＤＡＳ１８１、２０％のイソプロパノール、２ｍＭの硫酸ナトリウムを含むカクテル溶液を、ぜん動式ポンプを用いてＮＥＳＬＡＢ循環式クリオスタット（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｃｒｙｏｓｔａｔ）と連結させた３５ＳＥＲＩＥＳ熱交換器（Ｅｘｅｒｇｙ、ガーデンシティ、ニューヨーク州）に通し、それにより、カクテル溶液は、通過する間に約２５℃から約−１２℃まで冷却された。熱交換器から排出される得られたマイクロスフェアの懸濁液は、予め冷却した凍結乾燥トレイ（−４０℃）内へポンプで送液し、凍結し、凍結乾燥するか、又は、別の選択肢として、液体窒素内へポンプで直接送液し、続いて凍結乾燥した。得られたマイクロスフェアは、顕微鏡観察及びカスケードインパクションで分析し、最小限の凝集と良好な分散性を有する均一なマイクロスフェアであることが示され、その大きさ及び空気力学的粒径分布は、バッチモードで作製したマイクロスフェアと類似していた。製剤されたＤＡＳ１８１カクテル溶液を冷却せず（熱交換器を通さず、従ってマイクロスフェアの析出が誘導されなかった）、液体窒素へ直接注ぎ入れた場合は、マイクロスフェアは観察されず、その代わりに凍結乾燥後にガラス様の結晶が観察された。
実施例１０
呼吸気道上部及び中央部へ送達するためのＤＡＳ１８１マイクロスフェアのバッチモードプロセス及び製剤
本実施例では、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの製剤及び製造プロセスについて説明する。ＤＡＳ１８１カクテル溶液の含有物及びその相対量を、以下の表４に示す。
Figure 2010534563
Ａ．バルク原体（Ｂｕｌｋ Ｄｒｕｇ Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ）の作製
原体、活性医薬成分、及びＡＰＩという用語は、本実施例において交換可能に用いられ、ＤＡＳ１８１タンパク質を意味する。ＤＡＳ１８１タンパク質を、以下のようにして大量に作製した。まず、本質的に実施例１で述べたようにして、大量のＤＡＳ１８１を大腸菌（ＢＬ２１株）内で発現させた。ＤＡＳ１８１タンパク質を発現する大腸菌細胞を、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌバッファー１、ＵＦＰ‐５００‐Ｅ５５中空糸カートリッジ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）、及びＷａｔｓｏｎ‐Ｍａｒｌｏｗぜん動式ポンプを用いた発酵回収物洗浄工程において、ダイアフィルトレーションにより洗浄した。
次に、この細胞から、組換えＤＡＳ１８１タンパク質を大量に精製した。ＤＡＳ１８１の大量精製で用いた成分及びバッファーの詳細な仕様を、以下の表５及び６に提供する。回収、洗浄した細胞は、Ｎｉｒｏ‐Ｓｏａｖｅ Ｐａｎｄａ細胞破壊器を用いた均質化工程に２回通すことによって溶解した。このようにして得られたホモジネートは、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌバッファー１、Ｈｙｄｒｏｓａｒｔ０．２ミクロンＴＦＦカセット、及びＷａｔｓｏｎ Ｍａｒｌｏｗポンプを用いた精密ろ過によって透明化した。透明化したホモジネートは、次に、新たにバッファーを供給することなくライセートを再循環させることによって濃縮した。次に、透明化したホモジネートからＴｏｙｏｐｅａｒｌ ＳＰ‐５５０Ｃ 樹脂上でＤＡＳ１８１タンパク質を捕獲し、この樹脂を一連のバッファー（表５参照）で洗浄した後に、ＤＡＳ１８１タンパク質を樹脂から溶離した。溶離液の塩化ナトリウム濃度を、ｐＨ８．０の５０ｍＭのリン酸塩の最終バッファー中で１．０Ｍに調節した。次に、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌバッファー４を用いてさらに精製を行うため、ＤＡＳ１８１を含む溶離液を、Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ Ｈｅｘｙｌ‐６５０Ｃ樹脂に通した。次に、ＤＡＳ１８１タンパク質を含む樹脂溶離液を、ダイアフィルトレーション工程（表５の工程８を参照）にて、５ｍＭの酢酸ナトリウムへバッファー交換した。次に、フロースルーモードでＤＮＡを除去するために、濃縮タンパク質をＳａｒｔｏｒｉｕｓ Ｑ ＳｉｎｇｌｅＳｅｐフィルターに通した。イソプロパノールを２０体積／体積％の最終濃度でＱ ＳｉｎｇｌｅＳｅｐのろ液に添加した。バッファー中のＤＡＳ１８１タンパク質を、Ａｍｂｅｒｃｈｒｏｍバッファーで平衡化させたＡｍｂｅｒｃｈｒｏｍｅ ＣＧ３００Ｍ樹脂に通した（表５の工程１１を参照）。次に、精製したバルクのＤＡＳ１８１タンパク質を製剤バッファーにバッファー交換し、ダイアフィルトレーションにより濃縮した（表５の工程１２参照）。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Ｂ．バッチ製造プロセス
上記の表４に示す成分を組み合わせて、以下で述べる大スケールのバッチプロセスによりＤＡＳ１８１マイクロスフェアを形成した。
工程Ｉ：バルク原体の解凍
プラスチックボトル内の凍結した０．２μｍフィルターを通したバルク原体を、環境温度（２５±３℃）にて一晩かけて解凍した。
工程ＩＩ：賦形剤の秤量及び溶液の調製
３５．５１ｇの無水硫酸ナトリウム粉末を秤量し、適量の灌注用の水で５００ｍＬとし、続いて撹拌して透明な溶液を得た。１８．３８ｇの無水塩化カルシウム粉末を秤量し、適量の灌注用の水で２５０ｍＬとし、続いて撹拌して透明な溶液を得た。
工程ＩＩＩ：ＤＡＳ１８１カクテル溶液の調製
３．３Ｌの濃縮原体（１９．５５ｇ／Ｌ）に、灌注用の水１．７９Ｌを撹拌しながらゆっくりと添加して、続いて０．０２１５Ｌの硫酸ナトリウム溶液、０．００２８Ｌの塩化カルシウム溶液、及び０．２６９Ｌのイソプロパノールを添加した。この溶液を撹拌して、成分を確実に完全に混合させた。
工程ＩＶ：０．２μｍフィルターによる製剤したカクテル溶液のろ過
微粒子及びバイオバーデンの抑制のため、工程ＩＩＩで製剤したカクテル溶液を、０．２μｍフィルターを通して滅菌培地バッグ内にろ過した。
工程Ｖ：凍結乾燥トレイへの充填
ろ過した製剤溶液を、加圧滅菌したＬｙｏｇｕａｒｄ凍結乾燥トレイに分取した。溶液の均一な冷却及び高品質なマイクロスフェアの形成を確実にするために、６つのトレイのそれぞれに、０．９Ｌ若しくはそれ未満のカクテル溶液を充填した。
工程ＶＩ：凍結及び凍結乾燥
トレイを−４５±５℃まで予め冷却した凍結乾燥器（Ｈｕｌｌ １２０ＦＳＸ２００）の棚に配置し、溶液を冷却、凍結させた。溶液が凍結して行く間に、マイクロスフェアが形成した。凍結は、確実に完全に凝固させるため、１乃至２時間行う。生成物の温度は、６つのトレイのうちの２つに取り付けた熱電温度計の読み取りにより確認した。
凍結乾燥サイクルの工程は以下の通りである：
ａ）真空吸引を１６０ミクロンに設定して、１００乃至２００ミクロンまで脱気する；
ｂ）３時間かけて棚の温度を＋１０℃まで勾配させる；
ｃ）棚の温度を３６時間＋１０℃に維持する（１次乾燥）；
ｄ）１次乾燥フェーズが完了し、生成物の温度が＋１０℃±５℃で１５乃至３０時間安定していることを熱電温度計の記録を調べて確認する。
ｅ）１時間かけて棚の温度を＋３０℃まで勾配させ、３乃至５時間維持する（２次乾燥）。
工程ＶＩＩ：バルクＤＡＳ１８１マイクロスフェアの容器への移動及び混合
各Ｌｙｏｇｕａｒｄ凍結乾燥トレイの底部フィルム上の一部分を消毒用ふき取り布で清浄化し、メスを用いて３×３ｃｍの開口部を設けた。乾燥マイクロスフェアをプラスチックボトルに移した。ボトルの蓋を閉め、逆向きになる毎に方向を変えながら上下を逆にする動きを４０回繰り返した。この上下を逆にする動きは、ボトルの内容物を確実に均一にするために行った。分析試験のためのサンプルを取り、再度ボトルの蓋を閉めて、保存のためのプラスチック袋の中へ密封した。
上述のＤＡＳ１８１マイクロスフェアのバルク製造プロセスにおいて、硫酸塩は、対イオンとして使用する上で安全な物質であることが実証され、狭い粒径分布のマイクロスフェアが再現性良く作製された。さらに、有機溶媒のイソプロパノールは、（１）クラス３の溶媒であること、（２）広範囲にわたる濃度（２乃至３０体積％）にてマイクロスフェアを生成することができること、及び（３）比較的高い凝固点を有しているために、その蒸気を凍結乾燥中に効率的に捕獲可能であること、の理由から、溶媒の選択として良好であった。
最終製剤中のタンパク質濃度は、マイクロスフェアの物理的性質又はマイクロスフェア中のＤＡＳ１８１タンパク質の活性に大きな影響を与えることなく、変化させることが可能であり（１０乃至１４ｍｇ／ｍｌ）、対イオンの濃度（１乃至５ｍＭ）及びイソプロパノールの濃度（２乃至３０体積％）についても同様であった。イソプロパノール濃度が高い場合は（１５乃至３０％）、カクテル溶液がまだ完全に液体である間にマイクロスフェアが形成した。より低い濃度（２乃至１５％）では、まず氷晶が形成し始め、続いて析出によってマイクロスフェアが形成した。
Ｃ．マイクロスフェア中のＤＡＳ１８１の収量
乾燥マイクロスフェア中のＤＡＳ１８１の理論収量は、以下の式に従って計算される：
理論収量＝ＤＡＳ１８１タンパク質（ｇ）÷乾燥粉末（マイクロスフェア）中のタンパク質の分率
タンパク質の分率の値（０．８６６）は、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアのいくつかの製造されたバッチを分析することにより経験的に確立した。表２に示す量に対す理論収量は、６４．５６ｇ÷０．８６６＝７４．５５ｇである。ＤＡＳ１８１乾燥粉末の実際の収量は、６４ｇであった。
結果：経口吸入による投与のために上記のセクションＢで述べるように作製したマイクロスフェアの適切性を、アンダーセンカスケードインパクションによって試験した。結果を下記の表７にまとめる。呼吸気道内での薬剤の沈着は、カスケードインパクターのステージ／回収プレート上での粒子（マイクロスフェア）の付着により予測することができる。インフルエンザ等、呼吸器内で発症するウィルス感染症を予防又は治療するために投与される、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアを例とする薬剤の場合、咽喉、気管、及び気管支（呼吸気道の上部及び中央部）に薬剤を沈着させることが望ましい。呼吸気道上部及び中央部に送達されたＤＡＳ１８１融合タンパク質は、粘膜から受容体のシアル酸を開裂させ、それによって、これらの部位におけるウィルスの結合及び感染が予防される。呼吸器系ウィルス感染が発症し得る部位、すなわち、咽喉、気管、又は気管支へＤＡＳ１８１マイクロスフェアを最適に送達するためには、マイクロスフェアは、（ａ）口の前端部で捕獲されるような大きいもの（すなわち、約８ミクロン若しくはそれより大きい、過大なマイクロスフェア）；又は（ｂ）肺深部に沈着され、血流へと全身的に吸収されるような小さいもの（すなわち、０．５ミクロン若しくはそれより小さい）、であってはならない。咽喉、気管、及び気管支へのＤＡＳ１８１マイクロスフェアの送達のためには、約１ミクロンから約５．５乃至６ミクロンの範囲のサイズが、一般的に適切である。
上述のように製造したＤＡＳ１８１マイクロスフェアを、アンダーセンカスケードインパクションにより分析し、このマイクロスフェアが、呼吸気道の上部及び中央部への送達に適しており、肺胞への沈着率は十分に低い（＜５％）ことが分かった。
Figure 2010534563
ＤＡＳ１８１マイクロスフェアをレーザー回折によってさらに分析し、本実施例で述べる方法で作製したマイクロスフェアの大部分が、１ミクロン乃至５ミクロンの範囲のサイズであることが示され、これはカスケードインパクションの結果と一致していた。本実施例で述べる方法に従って作製したＤＡＳ１８１マイクロスフェアの走査型電子顕微鏡観察（ＦＥＩ Ｑｕａｎｔａ２００走査型電子顕微鏡、Ｅｖｅｒｈａｒｔ Ｔｈｏｒｎｌｅｙ（ＥＴ）検出器）により、マイクロスフェアが、およそ０．５乃至３ミクロンのサイズにある数百から数千の個々の粒子から成る凝塊として存在していることが明らかとなった。しかし、凝塊は、乾燥粉末吸入器を通しての作動中に生じる空気の乱流によって容易に分散される（アンダーセンカスケードインパクション又はレーザー回折によって示されるように）。液体界面活性剤（例：Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ‐１００若しくはＴｗｅｅｎ２０）、又はマイクロスフェアを溶解させない非極性溶媒（例：アルコール、アセトン、若しくはアセトニトリル）中に分散したマイクロスフェアの光学顕微鏡観察により、凝集体が、容易に個々の均一なマイクロスフェアに分散されることが確認された。
実施例１１
ナトリウム塩以外の硫酸塩を用いたＤＡＳ１８１マイクロスフェアの作製
特定の場合、例えばある喘息患者において、経肺投与のための製剤中にナトリウムが存在すると、気道過敏性を誘発するリスクをもたらす可能性があることが研究によって示されている（Ａｇｒａｗａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｌｕｎｇ，１８３：３７５‐３８７（２００５））。従って、本実施例では、カリウム、マグネシウム、及びカルシウム等のその他の金属塩等の代わりとなる塩について試験した。
ＤＡＳ１８１マイクロスフェアは、上記の実施例１で述べたようにして製造した。１２ｍｇ／ｍＬのＤＡＳ１８１及び５体積％のイソプロパノールを含むカクテル溶液は、対イオンとして、示した硫酸塩を２ｍＭの濃度で含有し、ｐＨは４．５乃至５．０であった。この溶液を＋２５℃から−４５℃まで冷却することによってマイクロスフェアを形成した。凍結の際、昇華により揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
乾燥粉末の空気力学的粒径分布を、アンダーセンカスケードインパクションによって評価し、２２６ｎｍでのＵＶ測定（Ａ２２６）により、各ステージあたりのＤＡＳ１８１の量を測定した。結果を下記の表８に示す。この結果より、ナトリウム塩以外の硫酸塩を対イオンとして用いても、硫酸ナトリウムを対イオンとして用いた場合に送達される量と同程度の量で、咽喉、気管、及び気管支へその大部分が送達される範囲のサイズであるＤＡＳ１８１マイクロスフェアを得ることができることが示される。
Figure 2010534563
乾燥粉末を、表９に示す時間、＋３７℃又は＋５３℃でインキュベートし、実施例１で述べた参照することで本明細書に組み入れられる４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡアッセイを用いてシアリダーゼ活性についても試験した。−８０℃で保存した非凍結乾燥ＤＡＳ１８１マイクロスフェアと比較した相対活性を表９に示す。この結果によると、３７℃では２カ月間にわたってほとんどすべて又はすべての活性が維持され、５３℃では１０日間にわたってほとんどすべての活性（硫酸ナトリウム及び硫酸カリウム）若しくは８５％超の活性（硫酸マグネシウム及び硫酸亜鉛）が維持されており、対イオンとして種々の金属硫酸塩を用いて作製したマイクロスフェアの安定性は、硫酸ナトリウムで作製したものと同程度であったことが示される。この実験は、種々の非ナトリウム含有対イオンにより、所望の特性を有するマイクロスフェアの作製が可能であることを示している。
Figure 2010534563
実施例１２
ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの安定性
マイクロスフェア中のＤＡＳ１８１タンパク質の安定性について、実施例１で述べた参照することで本明細書に組み入れられる４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡ活性アッセイを用い、経時的にシアリダーゼ活性を測定することで評価を行った。乾燥ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの作製は、１０ｍｇ／ｍＬのＤＡＳ１８１、２ｍＭの硫酸ナトリウム、５体積／体積％のイソプロパノールを含むカクテル溶液中で行った。０．０１重量／体積％の糖（ソルビトール、マンニトール、トレハロース、又はスクロース）を添加した溶液も調製した。これらの溶液を＋２５℃から−４５℃まで冷却することによってマイクロスフェアを形成した。凍結の際、昇華により揮発性物質（水及びイソプロパノール）が除去され、マイクロスフェアを含む乾燥粉末が残った。
Ａ．糖を含まないＤＡＳ１８１マイクロスフェアの安定性
糖を添加せずに製剤したＤＡＳ１８１乾燥粉末マイクロスフェアを、Ｄｒｉｅｒｉｔｅ乾燥剤（Ｈａｍｍｏｎｄ Ｄｒｉｅｒｉｔｅｓ社，ジーニア，オハイオ州）に隣接する容器内で、室温（２５℃）にて保存した。この乾燥粉末は、少なくとも８ヶ月間、元の効力（実施例１に従い、参照することで本明細書に組み入れられる４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡ活性アッセイを用いたシアリダーゼ活性により測定；結果を表１０に示す）及び空気力学的粒径分布（アンダーセンカスケードインパクションにより測定：表１１）を維持していた。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
 表１１：空気力学的粒径分布は、アンダーセンカスケードインパクションにより評価し、回収された全ＤＡＳ１８１タンパク質の％として表した。カプセルにＤＡＳ１８１乾燥分圧を充填し、送達装置としてＣｙｃｌｏｈａｌｅｒ乾燥粉末吸入器を用いて駆動させた。空気流速は毎分６０リットルとした。アッセイは３回の反復実験で行い、平均値及び標準偏差値を示す。
Ｂ．糖と共に製剤したＤＡＳ１８１マイクロスフェアの安定性
糖を含む乾燥粉末マイクロスフェア製剤中、及び−８０℃で保存した非凍結乾燥マイクロスフェア製剤中のＤＡＳ１８１のシアリダーゼ活性を、実施例１で述べた参照することで本明細書に組み入れられる蛍光基質４‐ＭＵ‐ＮＡＮＡを用いて測定した。糖を含まない乾燥粉末製剤、又は下記の表１２に示す種々の糖を含む乾燥粉末製剤を、＋４２℃で４週間保存した（強制分解）。結果を表１２に示す。−８０℃で保存した非凍結乾燥製剤と比較して、糖を含まない製剤は、その活性のほぼ８０％を維持していた。種々の糖の添加により安定性が向上し、糖の種類に応じて、活性の約８８％乃至約９８％が維持される。
Figure 2010534563
ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの糖の含有率を増加させた場合の安定化の効果について調べた。反応カクテル溶液中にグリシンが存在すると、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの製造中の糖の結晶化を防ぐ作用を示した。この研究により、５％のグリシンと組み合わせると、最大で１５％のトレハロース、スクロース、ソルビトール、又はマンニトールを、凍結乾燥中に結晶を形成することなく、ＤＡＳ１８１マイクロスフェア形成反応系へ組み込むことができることが示された。マイクロスフェアは、光学顕微鏡観察及び走査型電子顕微鏡観察（ＳＥＭ）によるその外観から、糖を含まずに作製されたものと区別がつかなかった。マイクロスフェアの空気力学的粒径分布にも影響を及ぼさなかった。
得られたＤＡＳ１８１乾燥粉末５ｍｇを、サイズ３の透明のＨＰＭＣカプセル内へ配置し、３７℃で保存した。高分子量ＤＡＳ１８１オリゴマー（分解生成物）の量の割合を、サイズ排除ＨＰＬＣで定量分析した。表１２Ａの結果から、糖の保護効果が示され、トレハロース及びスクロースが最良の保護効果を提供している。結果は、第０月、第１月、第２月、又は第３月におけるオリゴマーの％として表す。
Figure 2010534563
スクロース及びトレハロースのＤＡＳ１８１マイクロスフェア製剤に対する安定化効果を、以下の実験によってさらに確認した。糖を含む製剤及び糖を含まないコントロール製剤を作製し、バルクの粉末（カプセル化せず）の状態又はサイズ３の透明ＨＰＭＣカプセル内に配置した状態とした。これらのサンプルを３７℃で保存した。高分子量ＤＡＳ１８１オリゴマー（分解生成物）の割合を、サイズ排除ＨＰＬＣによって定量した。表１２Ｂ（下記）の結果より、ここでも、トレハロース及びスクロースの糖が、有効な保護効果をもたらしたことが示される。結果は、第０月、第１月、第２月、又は第８月におけるオリゴマーの％として表す。
Figure 2010534563
実施例１３
様々な種類の化合物を用いたマイクロスフェアの作製
本明細書で提供される方法を用いて、様々な種類の化合物を用いたマイクロスフェアを作製することができる。上記の実施例で述べた、ＤＡＳ１８１、ＢＳＡ、トリプシン、ヘモグロビン、デオキシリボヌクレアーゼＩ、リゾチーム、卵白アルブミン、リボヌクレアーゼＡ、ヘキサヒスチジンタグヒトプロテイナーゼインヒビター８（ＰＩ８、配列番号１５に示すアミノ酸配列を有する）、赤色蛍光タンパク質（ＲＦＰ）、及び緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）等のタンパク質に加えて、本実施例では、この方法を用いて、以下に示すのもののマイクロスフェアを作製することができることを示すものである：
Ａ．抗生物質 バンコマイシン、トブラマイシン、カナマイシン、及びアンピシリン
Ｂ．核酸 ｓｉＲＮＡ
Ｃ．ウィルス タバコモザイクウィルス
Ｄ．ペプチド リュープロリド及びソマトスタチン
上記のＡ乃至Ｄから作製されたマイクロスフェアを、タンパク質であるＤＡＳ１８１のマイクロスフェアと比較した。
マイクロスフェアの作製：上記のＡ乃至Ｄに挙げた化合物の各々、及びＤＡＳ１８１について、水性溶媒に溶解した化合物２ｍｇ／ｍｌ、並びに以下に挙げる種々の対イオン、貧溶媒、及びｐＨを含むカクテル溶液を、室温にて、９６‐ウェルのマイクロタイタープレート中で調製した（０．１ｍｌカクテル溶液／ウェル）。溶媒又は貧溶媒単独を、対イオン有り又は無しで含有する溶液をコントロール溶液とした。カクテル溶液を冷凍庫内へ配置して冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
ウェルの底部から凍結乾燥した粉末をスライドグラスへ移し、外観について光学顕微鏡観察によって分析した。生成したマイクロスフェアの品質を、マイクロスフェアの均一性、望ましくない非マイクロスフェア粒子（ガラス様結晶性形態）が存在しないこと、及び凝集体が存在しないこと、に基づいて点数化した。下記の表１３に、外観に基づいた代表的な点数化システムを提供する。
Figure 2010534563
下記の表１４は、マイクロスフェアの生成に用いた化合物、溶媒、貧溶媒、及び対イオンの種々の組み合わせ、並びに得られたマイクロスフェアの品質を示す。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
バンコマイシンによる実験は、スケールアップしたもの（２０ｍｇのバンコマイシン）、すなわち、全体積５ｍｌ中の２ｍｇ／ｍｌのバンコマイシン；及び全体積２ｍｌ中の１０ｍｇ／ｍｌのバンコマイシン、でも実施した。以下に示すように、試験したカクテル混合物はすべて、非常に高品質のバンコマイシンマイクロスフェアを生成した。
Figure 2010534563
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 ＊＊上述のように、タバコモザイクウィルスでは、貧溶媒が存在しなくても、品質の良いマイクロスフェアを形成することができた。ある程度の結晶性が観察されたが、対イオンの選択に応じて（例：ピバル酸）、貧溶媒を添加せずに、均一なマイクロスフェアを得ることができた。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：これらの実験は、化合物、対イオン、及び貧溶媒の（ａ）種類並びに（ｂ）濃度の適切な組み合わせを選択することにより、広範囲にわたる種々の高分子及び低分子を用いて、品質の良い（少なくとも６、高いもので１０まで）マイクロスフェアを得ることができることを示すものである。化合物、対イオン、及び貧溶媒の特定の組み合わせによっては、マイクロスフェアの品質は、同等の条件下にてシアリダーゼ融合タンパク質、ＤＡＳ１８１を用いて得られたマイクロスフェアの品質と同じか又はこれよりも良いものが多かった。
化合物を含まないコントロールカクテル反応系において、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）及び酢酸ナトリウム／硫酸ナトリウム等の対イオンの中には、特定の条件下にてマイクロスフェアを形成可能であるものがあったことが分かった。いかなる理論にも束縛されるものではないが、対象とする化合物によっては、そのような対イオンは、核形成の補助及び／又は「非核形成」対イオンで得られたものよりも高品質のマイクロスフェアの形成の促進を行う「プライマー」又は「担体」として作用し得る可能性がある。例えば、化合物の形成（例えば上記の表１４を参照、ＰＥＩを対イオンとして用いて、ｓｉＲＮＡ及びＤＡＳ１８１から形成されたマイクロスフェア）。
この結果より、特定の条件下では、対イオン及び／又は貧溶媒の非存在下においても、マイクロスフェアを形成可能であることもさらに示される。例えば、ｓｉＲＮＡの場合、非常に高品質（スケール１０）のマイクロスフェアが、対イオンを添加しない場合に得られた。同様に、タバコモザイクウィルスは、対イオンの非存在下にて、場合によっては、貧溶媒の非存在下にて、マイクロスフェアを形成した。
実施例１４
カクテル溶液成分（化合物、対イオン、貧溶媒）の濃度の関数としてのマイクロスフェアのサイズ及び品質
本実施例は、低分子化合物のマイクロスフェアのサイズ及び品質が、高分子の場合と同様に（実施例２乃至４を参照）、化合物、対イオン、及び／又は貧溶媒の濃度等のパラメータを、高スループットフォーマットでの種々の並べ替えで変化させることにより、容易に最適化可能であることを実証するものである。このような反応を高スループットフォーマットで実施することにより、いずれの化合物に対するマイクロスフェア形成の最適条件も、迅速に識別することができる。
種々の濃度条件下のテトラサイクリン、カナマイシン、又はアンピシリンのカクテル溶液を含む９６‐ウェルプレートを、実施例１で述べるように設定した。対イオンとしてはアルギニンを、貧溶媒としてはイソプロパノールを用いた。カクテル溶液成分、化合物、対イオン、及び貧溶媒、の各々の濃度を、下記の表１５に示すように変化させ、マイクロスフェアの品質への影響を評価した。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：
テトラサイクリン：テトラサイクリンの場合、貧溶媒の非存在下では、存在したとしても極僅かのマイクロスフェアしか形成されなかった。貧溶媒の濃度の上昇に従ってマイクロスフェアの品質が向上し、イソプロパノール約３０％にて最高に達した。３０％を超えてイソプロパノール濃度を上昇させると、全体としてのマイクロスフェアの品質は低下し、マイクロスフェアのより大きく肥大した凝塊及び結晶性固体が形成された。イソプロパノールの濃度が６０％及び７０％では、カクテル混合物には凍結前の析出が見られ、大量の凝集体及び結晶が発生する結果となった。最も高いイソプロパノール濃度では、少しのマイクロスフェアが形成されたが、それらのサイズは均一ではなかった。
次に、マイクロスフェアの品質を対イオン（アルギニン）濃度の関数として評価した。貧溶媒及びテトラサイクリンの濃度が一定の場合、アルギニンの濃度の低下と共に、マイクロスフェアの粒径分布は小さくなり、その全体としての品質は向上し、３０ｍｇ／ｍｌのアルギニンの場合に光学顕微鏡観察によって視覚化した粒径分布が最も小さくなることが分かった。興味深いことには、対イオンの非存在下では、サイズ変動がほとんどない小マイクロスフェアが観察された。ある程度の量の凝集は存在したが、全体としてのその品質は高かった。
マイクロスフェアの品質を、貧溶媒及びアルギニンの濃度を一定とし、テトラサイクリンの濃度を上昇させることによっても評価した。テトラサイクリンの非存在下では、吸湿性のアルギニンマイクロスフェアが形成された。テトラサイクリンの濃度が上昇するに従い、マイクロスフェアのサイズが増加し、２５乃至３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリン濃度で最大に達し、次いで、テトラサイクリンの濃度がさらに上昇すると、再度低下することが分かった。２５乃至３０ｍｇ／ｍｌのテトラサイクリンでは、凝集も最小限であり；テトラサイクリン濃度がさらに上昇するに従い、凝集は増加した。
カナマイシン：カナマイシンからのマイクロスフェアの形成には、少なくとも２５乃至３０％の貧溶媒（イソプロパノール）が必要であり；これより低い濃度では、吸湿性の結晶が形成された。６０％のイソプロパノールでは、より良い結果が得られたが、凍結前に析出が起こり、それによってマイクロスフェアの品質が損なわれた。
カナマイシンのマイクロスフェアを種々のアルギニン濃度の関数として調べたところ、アルギニン濃度を低下させると、より高い品質の、より小さいマイクロスフェアが得られることが分かった。しかし、１０ｍｇ／ｍｌ未満のアルギニン濃度では、マイクロスフェアは大きくなり、より多くの凝塊体を形成する傾向にあった。アルギニンの非存在下では、ある程度の凝集が存在したものの、再度、高品質のマイクロスフェアが得られた。
カナマイシンの濃度を変化させた場合は、カナマイシンの濃度が上昇するに従って、マイクロスフェアの品質が向上し、サイズが減少することが分かった。
アンピシリン：アンピシリンを用いることでマイクロスフェアは得られたが、その吸湿性により、品質を明確に対応させることは困難であった。全体として、いくつかの条件で分離したマイクロスフェアが生成し、高い貧溶媒濃度（５０％）にて最良品質のマイクロスフェアが観察された。
本実施例は、種々の低分子抗生物質から、本明細書で提供される方法によってマイクロスフェアを作製可能であることを実証するものである。この実施例はさらに、特定の条件下では、対イオンの添加はマイクロ粒子の形成に必ずしも必要ではない場合があることも実証するものである。このことは、試験した３種類すべての抗生物質で観察された。いかなる理論にも束縛されるものではないが、化合物自体が対イオンとして機能するか、又は実験に用いた製剤が、対イオンとして作用する賦形剤／不純物／バルキング剤を含んでいた可能性がある。
実施例１５
水不溶性分子：パクリタキセルからのマイクロスフェアの作製
化学療法薬であるパクリタキセルは、３を超えるｌｏｇＰ値（オクタノール／水分配計数の対数）を有し（Ｂｏｍｂｕｗａｌａ ｅｔ．ａｌ．，Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００６，２：１３）、これは、現在市販されている低分子薬剤の大部分を代表する値である。従って、パクリタキセルのマイクロスフェア形成に対する条件を識別することは、治療に適する非常に数多くの化合物に適用されるはずである。
水不溶性であるパクリタキセルは、以下の有機溶媒：イソプロパノール、ｔ‐ブチルアルコール、又はＤＭＳＯ、のうちの１つに溶解した。各々の有機溶媒中の２０ｍｇ／ｍｌのパクリタキセルのストック溶液を用いて、９６‐ウェルプレート中でカクテル溶液を作製し、ここで、各ウェル（すなわち、反応系）中のパクリタキセルの有効濃度は、２ｍｇ／ｍｌのパクリタキセルとした。パクリタキセルのイソプロパノールへの溶解性が、ｔ‐ブチルアルコール及びＤＭＳＯよりも低いことから、イソプロパノールでは、２０ｍｇ／ｍｌのスラリーが得られ、これをストック溶液として用いた。２ｍＭのクエン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ５．０、を貧溶媒及び対イオンとして用いた。種々の実験条件を下記の表１６に挙げる。次に、有機溶媒の濃度に対して貧溶媒／バッファーの濃度を様々に変化させたカクテル溶液を含むプレートを、−８０℃の冷凍庫に配置して凍結乾燥させた。
Figure 2010534563
結果：
３種類すべての有機溶媒で、溶媒の濃度が２５％若しくはそれ未満の場合にパクリタキセルの析出が見られた。凍結乾燥サンプルの光学顕微鏡観察より、有機溶媒がイソプロパノールの場合、イソプロパノールの濃度が９０％から低下するに従ってマイクロ粒子の品質が向上し、５０％のイソプロパノールで最良のマイクロスフェアが形成されたことが分かった。イソプロパノールの濃度が５０％より低くなると、結晶が観察され、これは凍結前にパクリタキセルが析出したことが原因である可能性がある。クエン酸塩対イオンを含めずに５０％のイソプロパノールを用いた場合、マイクロスフェアは、２ｍＭのクエン酸塩が存在する場合よりも凝集を起こしやすい傾向を示した。１００％のイソプロパノールでクエン酸塩対イオンを用いない場合は、多くの小マイクロ粒子も観察されたが、サンプルは、結晶性が高いように思われ、凝集を起こした。
ｔ‐ブタノールの場合、最適な溶媒濃度はイソプロパノールよりも高く、９０％のｔ‐ブタノールで最も良い結果が観察され、溶媒濃度が低下するに従って凝集及びロッド状の形態が増加した。２５％及び１０％のｔ‐ブタノールでは、著しい結晶性が観察され、これは恐らく凍結前のパクリタキセルの析出によるものと考えられる。クエン酸塩対イオンを含まない１００％のｔ‐ブタノールでは、上記で考察したように、９０％のｔ‐ブタノール及び２ｍＭのクエン酸塩で観察された最高品質のマイクロスフェアとほぼ同程度の品質の高さであった。クエン酸塩対イオンの非存在下にてｔ‐ブタノールの濃度を５０％まで低下させると、凝集が増加したものの、高品質のマイクロスフェアは依然として存在した。
有機溶媒ＤＭＳＯで得られた結果は、イソプロパノール及びｔ‐ブタノールと比較して、低品質の凝集したマイクロスフェアと共に、全体として結晶量が多いものであった。これは、ＤＭＳＯの沸点が高いために、凍結乾燥の際に恐らくは溶液中の水がまず蒸発／昇華してほとんどＤＭＳＯのみの溶液が残り、そこからパクリタキセルが結晶化したことに起因する可能性がある。しかし、光学顕微鏡観察によるデータから、マイクロスフェアが存在することが分かり、最良のマイクロスフェアは５０％のＤＭＳＯを用いた場合に観察された。
実施例１６
薬剤、貧溶媒、及び対イオンの比率がマイクロスフェアの品質に与える影響
貧溶媒及び対イオンの濃度の変化がマイクロスフェアの形成に与える影響を評価するために実験を行った。リュープロリド及びソマトスタチンのペプチド、並びにバンコマイシン及びトブラマイシンの抗生物質を、種々の条件下でのマイクロスフェアの形成について試験した。表１７に、反応を実施した条件を示す。これまでの実施例で述べたようにして、サンプルを９６‐ウェルプレート中で分析した。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：
リュープロリドの実験群では、貧溶媒濃度を低下させることでマイクロスフェアの凝集が減少し、１０％のイソプロパノールが最適であり、そこからさらにイソプロパノールの濃度を０％まで低下させると、凝集は再度増加した。貧溶媒濃度を一定（５％）にして対イオン濃度を変化させた場合、１７ｍＭの対イオンで結晶形成の度合いが高かった。結晶の形成は、対イオン（バッファー）濃度を１０ｍＭまで低下させるに従って減少し、マイクロスフェアはサイズが均一で良好に分離されている。バッファー濃度を、１０ｍｍＭを超えてさらに低下させて行くと、凝集が再度増加し始め、０ｍＭのグルタミン酸塩では、中程度の結晶性が観察された。
ソマトスタチンの場合は、５０％のイソプロパノールで、サイズが均一である良好に分離されたマイクロスフェアが観察された。最適濃度である１０％のイソプロパノールまで貧溶媒濃度を低下させるに従って、凝集のレベルが増加した。１０％未満のイソプロパノールでは、結晶が再度出現し始め、貧溶媒濃度をイソプロパノール０％まで低下させるに従って増加を続け、０％では、サンプルの大部分が、凝集したマイクロスフェアを僅かに含むだけの結晶となった。貧溶媒濃度を一定（５％）として対イオン濃度を変化させた場合、１７ｍＭの硫酸塩／酢酸塩及び５％のイソプロパノールでマイクロスフェアが存在したが、高度の結晶性も観察された。対イオンの濃度が低下するに従い、１２．５ｍＭの対イオン濃度で良好に分離したマイクロスフェアが検出されるまで、結晶の存在量は減少した。硫酸塩／酢酸塩濃度がさらに低下するに従い、凝集が再度増加し始め、マイクロスフェアのサイズが低下した。ソマトスタチンは、対イオンの非存在下でもマイクロスフェアの形成が見られたが、このマイクロスフェアは凝集しており、サイズが様々（均一ではない）であった。
バンコマイシンの場合、貧溶媒濃度を変化させることにより、５０％から２．５％までで、小さいが明確な形状のマイクロスフェアが生成した。溶媒濃度をさら０％のイソプロパノールまで低下させると、少量のマイクロスフェアと共に高度の結晶性が存在した。対イオン濃度を変化させた場合は、１７ｍＭのクエン酸塩で凝集度の高いマイクロスフェアが見られ、対イオン濃度を低下させるに従って、凝集の量は減少した。７．５ｍＭ未満のクエン酸塩で最良のマイクロスフェアが形成されたが、対イオン濃度をさらにゼロまで低下させるに従って、凝集の量が再度増加した。
トブラマイシンの場合、貧溶媒濃度を変化させると、５０％のイソプロパノールで、マイクロスフェアも検出されたが、著しい量の結晶及び凝集が存在した。貧溶媒濃度を４０％から１０％へ低下させると、形成されたマイクロスフェアは、良好に分離され、高品質であることが分かった。貧溶媒濃度をさらに５％から０％へ低下させると、凝集の量は再度増加し、０％では、著しい数の凝集したマイクロスフェアが存在すると共に、結晶性の度合いが高かった。
実施例１７
吸入のためのバンコマイシンマイクロスフェアの空気力学的粒径分布
本明細書で述べるように、本明細書で提供される方法を用いて、吸入による送達のための約０．５ミクロンから約６乃至８ミクロンまでの範囲を含む、所望するいかなるサイズ範囲のマイクロスフェアをも作製することができる。
Ａ．マイクロスフェアの作製
バンコマイシンを、１０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で水性バッファーに溶解した。このカクテル溶液は、対イオンとして５ｍＭのクエン酸ナトリウム、ｐＨ５．０を、貧溶媒として１５体積／体積％のｎ‐プロパノールを含有していた。カクテル溶液のアリコート２ｍｌを、−８０℃の冷凍庫内へ１時間配置した１０ｍｌの凍結乾燥バイアル中で凍結させた。凍結させたバイアルを、−４５℃の凍結乾燥器の棚へ移し、３６時間の凍結乾燥を施した。
Ｂ．マイクロスフェアの空気力学的粒径分布
実施例５で述べたように作製したマイクロスフェアを、Ｎｅｗ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔｏｒを用いたカスケードインパクションによって試験した。医薬の気道への沈着を、カスケードインパクターのステージ／回収プレート上での粒子（マイクロスフェア）の空気力学的挙動によって予測することができる。
マイクロスフェア（１０ｍｇ）を、ＨＰＭＣ（ヒドロキシプロピルメチルセルロース）カプセルへ充填した。このカプセルを、ＣｙｃｌｏＨａｌｅｒ（ＰｈａｒｍａＣｈｅｍｉｅ）乾燥粉末吸入器に投入し、カスケードインパクションを施した。吸入後の沈着の種々の領域／ステージ（気管、一次及び二次気管支、終末気管支、肺胞等）を表すインパクターの回収プレートをシリコンスプレーでコーティングし、マイクロスフェアの跳ね返りを防いだ。ステージ及び回収プレートからのマイクロスフェアを、０．１％のＴｗｅｅｎを含むリン酸緩衝生理食塩水中に回収し、各ステージ及び回収プレートから回収された沈着バンコマイシンの量を、２８０ｎｍでの吸光度を測定することによって定量した。
結果：マイクロスフェアの幾何学径を光学顕微鏡観察によって評価し、１．０乃至３．０ミクロンの範囲であることが分かった。下記の表１８に示すように、空気力学的粒子径は、観察された幾何学径と一致していた。この結果は、本明細書で提供される方法によって、肺深部への送達のためのマイクロスフェアを作製することができること、及び本明細書で提供される方法により作製したマイクロスフェアが、優れた脱凝集性及び流動性を有する（より高い送達用量を提供する）ことを示している。
Figure 2010534563
実施例１８
プロスタグランジンを用いたマイクロスフェアの作製
プロスタグランジンは、数多くの生理的プロセスに関与し、従って臨床的用途を有するホルモン様化合物の一群である。プロスタグランジンの１種であるプロスタサイクリンＰＧＩ２は、肺高血圧症の薬剤として現在市販されている。この薬剤の生理的ｐＨにおけるＡＰＩ半減期は、数分というオーダーであり、適切な効果を得るためには、この薬剤は連続注入によって投与するする必要がある。従って、吸入可能であり、肺の標的作用部位で直接作用するＰＧＩ２製剤を作り出し、クリアランス速度及び血流中での安定性と関連する薬物動態効果を避けることが望まれる。本実施例は、本明細書で提供される方法を用いて、高品質で吸入可能であるプロスタグランジンのマイクロスフェアを作製することができることを実証するものである。
ＰＧＩ２及びＰＧＩ２の類似体シプロステン（Ｃｉｐｒｏｓｔｅｎｅ）を、２ｍｇ／ｍｌの濃度で用いて実験を行った。カクテル溶液を室温にて混合し、次に冷凍庫内へ配置して冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
得られるプロスタグランジンマイクロスフェアは吸湿性であるため、マイクロスフェア形成を開始する際、凍結乾燥器のバックフィルシステム（ｂａｃｋｆｉｌｌ ｓｙｓｔｅｍ）へ取り付けた窒素ガスタンクを用いて、実験を行う間の湿度を低いレベルに維持した。各反応管にはＮ２のフラッシングを施した。さらに、凍結乾燥器のバックフィルバルブを開けたままにし、サンプル上へ低湿度の大気による連続的なフラッシングを施した。得られたマイクロスフェアの視覚観察に用いる顕微鏡は、乾燥Ｎ２で連続的にパージされたプラスチックバッグで覆った。サンプル管は、このバッグの下におよそ３０秒間配置して平衡化させ、その後開栓してスライドグラス上へ広げた。
プロスタグランジンは、８未満のｐＨ値で不安定であり；従って、本実験では、以下の塩基性バッファーを用いた：ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、及びアルギニン。シプロステンは、水性溶液への溶解性が高くないため、この化合物を可溶とする量のｎ‐プロパノールをバッファーへ添加した。プロスタグランジンに対する溶媒／貧溶媒系は、水／ｎ‐プロパノール／ｔ‐ブタノールとした（水への溶解度が低いシプロステンに対しては、水／水性バッファーが「貧溶媒」成分としてよりふさわしく、水への溶解度が高いＰＧＩ２に対しては、ｎ‐プロパノール／ｔｅｒｔ‐ブチルアルコール（ｔ‐ブタノール、ｔＢＡ）が「貧溶媒」成分としてよりふさわしい）。結果を以下の表１９にまとめる。
Figure 2010534563
結果：
ＰＧＩ２では、いくつかのスコアが６超、最高のスコアが８である良質のマイクロスフェアを形成するための条件がいくつか識別された。バッファー／対イオンがアルギニンである場合、ｎ‐プロパノール及びｔ‐ブタノールの濃度が低い方が、より良質のマイクロスフェアの形成にとって好ましく、アルコール濃度では、結晶の形成が観察された。一方、バッファー／対イオンがＴＥＡである場合、ｔ‐ブタノールの濃度が高い方が、より高品質のマイクロスフェアの形成にとって好ましかった。バッファー／対イオンがＰＥＩである場合、ｎ‐プロパノールの濃度が高く（３０％）、ｔ‐ブタノールの非存在下にて、最良品質のマイクロスフェアが得られた。
シプロステンは、より安定であるＰＧＩ２の類似体であり、吸湿性もより低いと思われた。アルギニンバッファーの場合、濃度に依存する傾向は特に観察されなかったが、いくつかの溶媒条件で、スコア８である高品質のマイクロスフェアが作製された（例えば、ｎ‐プロパノール２０％、ｔ‐ブタノール５％、及びｎ‐プロパノール２０％、ｔ‐ブタノール５５％、を参照）。ＴＥＡの場合、ｔ‐ブタノールの非存在下、ｎ‐プロパノールで得られたマイクロスフェアの品質は低かった。カクテル溶液へｔ‐ブタノールを添加するに従って、マイクロスフェアの品質が向上し、約５％のｔ‐ブタノールが最高であった。ｔ‐ブタノールの濃度をさらに上昇させるに従って、凝集量の増加が観察された。ＰＥＩは、シプロステンに対する最適な対イオンであることが示され、ｎ‐プロパノール２０％／ｔ‐ブタノール５％にてスコア９の最高品質なマイクロスフェアが得られた。ｔ‐ブタノールの濃度をさらに上昇させるに従って、凝集量の増加が観察された。
この結果は、種々の条件下にてプロスタグランジンの高品質なマイクロスフェアを形成することが可能であることを示しており、このことにより、経肺送達のための安定な製剤の入手が促進されるはずである。
実施例１９
マイクロスフェアの品質に対する冷却速度の影響
本実施例は、瞬間凍結とは逆に、マイクロスフェアを作製するカクテル溶液が、所定の時間、特定の温度に維持される冷却速度の制御により、所望の特性を有するより高品質のマイクロスフェアが作製されることを実証するものである。本明細書で提供される方法に従って実施された標準的な凍結条件下でこれまでに非常に優れたマイクロスフェアが生成された５つの異なるカクテル溶液を用いて、瞬間凍結の実験を行った。化合物／対イオン／貧溶媒の条件は、以下の通りとした：
１）パクリタキセル／クエン酸塩 ｐＨ５．０／９０％ｔ‐ブタノール（実施例１５参照）
２）ＤＡＳ１８１／クエン酸塩 ｐＨ５／５％ｎ‐プロパノール（実施例１３参照）
３）タバコモザイクウィルス／硫酸ナトリウム‐酢酸ナトリウム ｐＨ４／５％イソプロパノール（実施例１３参照）
４）バンコマイシン／クエン酸塩 ｐＨ５／５％ｎ‐プロパノール（実施例１３参照）
５）テトラサイクリン／アルギニン／２５乃至３０％イソプロパノール（実施例１４参照）
２ｍｌの凍結乾燥ボトルに上記のカクテル溶液をそれぞれ２００μｌずつ（第一の瞬間凍結条件）、及びＰＣＲ管に上記のカクテル溶液をそれぞれ２５μｌずつ（第二の瞬間凍結条件）入れて実験を行った。凍結乾燥ボトル中のサンプルの凍結には、およそ１５秒間を要した。ＰＣＲ管中のサンプルの凍結に要したのは、およそ３秒間若しくはそれ未満であった。
結果：
サンプルの顕微鏡分析により、ほとんどの場合で、凍結速度がマイクロスフェアの形成に著しい影響を与えることが分かった。パクリタキセルサンプルは、いずれの場合でも瞬間凍結後はほどんど結晶性であったが、マイクロスフェアの形成が始まりつつある形跡が存在した。ＤＡＳ１８１カクテル溶液は、凍結乾燥ボトル中で凍結された場合、スコアが９である高品質のマクロスフェアを示した。しかし、ＰＣＲ管によるより高速の凍結実験では、ＤＡＳ１８１マイクロスフェアの品質はスコア５まで低下し；ある程度のマイクロ粒子は存在していたが、著しい量のロッド状結晶が観察された。タバコモザイクウィルスでは、いずれの瞬間凍結の場合でも、スコアが９である高品質のマイクロスフェアが形成された。従って、試験を行った条件下では、タバコモザイクウィルスのマイクロスフェアの形成は、凍結の速度に大きな影響は受けなかったと考えられる。
一方、バンコマイシンでは、凍結速度が増加するに従ってマイクロスフェアの品質は低下した。実施例１３で述べたように、バンコマイシンのカクテル溶液は、通常の凍結条件下にて、スコアが９／１０であるマイクロスフェアを生成したが、２００μｌの瞬間凍結サンプルでは、スコアが７である品質が低下したマイクロスフェアが得られ、凝集が観察された。ＰＣＲ管の瞬間凍結では、スコアが５とさらに低い品質のマイクロスフェアが生成され、凝集の量が増え、著しい量のロッド状結晶が生成した。従って、バンコマイシンの場合、凍結速度を増加させると、マイクロスフェアの品質が低下する結果となった。同様に、テトラサイクリンでは、通常の凍結条件下においては８／９のマイクロスフェアのスコアが得られたが（実施例１４参照）、瞬間凍結ではいずれの条件においても、著しい凝集を伴う、スコアが５／６である品質の低いマイクロスフェアが生成した。
この結果は、凍結速度が、本明細書で提供される方法に従って作製されたマイクロスフェアの品質に影響を及ぼし得ることを示している。しかし、この影響は、マイクロスフェアを形成する化合物に応じて異なる。本実施例で示すように、パクリタキセル、ＤＡＳ１８１、バンコマイシン、及びテトラサイクリン等、化合物によっては、凍結速度が速すぎる場合、マイクロスフェアは結晶相中に取り込まれてしまうか、又は適度なサイズへ成長する機会を得る前に凝集してしまう可能性がある。
実施例２０
マイクロスフェアへの核酸の取り込み効率
マイクロスフェアへの核酸の取り込みについてのプロセス収率を評価するために、以下の実験を行った。体積０．５ｍｌ中、１ｍｇの酵母ｔＲＮＡ（Ｓｉｇｍａ，タイプＸ‐ＳＡ）（カクテル溶液中の最終濃度２ｍｇ／ｍｌ）を、イソプロパノール（ＩＰＡ；最終濃度４０％）及びｐＨ８．０のクエン酸ナトリウム（最終濃度１００ｍＭ）と混合した。得られたカクテル溶液からのマイクロスフェアの形成は、カクテル溶液を氷上に配置することで誘発した。１０ｍｌ（２０容量分）のＩＰＡを添加することでマイクロスフェアを固定し、５０００ｒｐｍにて３分間遠心分離に掛けることによってペレット化した。このペレットを減圧乾燥した。顕微鏡分析により、サイズが１乃至２ミクロンであり、凝集体又は結晶が存在しない、高品質のマイクロスフェアの形成が確認された。
ペレット及び上清中に回収されたｔＲＮＡの量を、２６０ｎｍにおけるＵＶ吸収によって定量した。ｔＲＮＡの７８％がマイクロスフェア中に包含され、２２％のｔＲＮＡが上清中に残留していることが分かった。この結果より、ｔＲＮＡ、そして恐らくはＤＮＡ及びｓｉＲＮＡ等のその他の核酸についても、マイクロスフェア製剤中に効率よく濃縮し、包含させることが可能であることが実証された。
実施例２１
マイクロスフェア中に組み込まれてもその活性を維持するｓｉＲＮＡ
本明細書で提供されるマイクロスフェアを作製する方法が、マイクロスフェア中に組み込まれた分子の活性を阻害するかどうかを評価するために、実験を行った。
ｓｉＲＮＡマイクロスフェアの作製
本実験で用いた代表的な分子は、二本鎖ＧＡＰＤＨ ｓｉＲＮＡである（センス鎖配列５’‐ＵＧＧＵＵＵＡＣＡＵＧＵＵＣＣＡＡＵＡＵＵ‐３’（配列番号２７）；アンチセンス鎖配列５’‐ＵＡＵＵＧＧＡＡＣＡＵＧＵＡＡＡＣＣＡＵＵ‐３’（配列番号２８）；各３’末端に２個の「ＵＵ」オーバーハングを有する）。以下に示す種々のカクテル製剤のＧＡＰＤＨ ｓｉＲＮＡを含むマイクロスフェアを作製した：
１： ２ｍＭ アルギニン、ｐＨ７．０、１５％ ＩＰＡ、２ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
２： ２ｍＭ ＰＥＩ（分子量２５，０００、分岐鎖状、Ｓｉｇｍａ）、ｐＨ１０、１５％ ＩＰＡ、２ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
３： ２ｍＭ イタコン酸、ｐＨ８．０、１５％ ＩＰＡ、２ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
４： １０ｍＭ（グルタミン酸、リジン、アラニン モル比３：２：５）、５％ ＩＰＡ、１ｍｇ／ｍｌ
５： １０ｍＭ（リジン、クエン酸 モル比１：４）、１５％ ＩＰＡ、１ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
６： １０ｍＭ（リジン、クエン酸 モル比１：１）、１５％ ＩＰＡ、１ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
７： １０ｍＭ アラニン、１５％ ＩＰＡ、１ｍｇ／ｍｌ ｓｉＲＮＡ
コントロール製剤は、ｓｉＲＮＡ以外のカクテル溶液の成分すべてを含んでいた。凍結乾燥したｓｉＲＮＡコントロールは賦形剤を含まず、１５％のＩＰＡを含んでいた。
得られたカクテル溶液を冷却してマイクロスフェアを形成させ、バイアルを−８０℃の冷凍庫の棚に配置することにより、一段階で凍結させた。凍結乾燥は、棚温度＋１０℃、及び１５０ｍＴｏｒｒの減圧下で一晩行った。
マイクロスフェア製剤中のｓｉＲＮＡの活性
凍結乾燥から単離したｓｉＲＮＡマイクロスフェアを、次に再構成し、Ｈｅｐ‐２細胞へトランスフェクトした。ポジティブコントロールとして、マイクロスフェアを形成させずに、元のバッファー中の同一量のＧＡＰＤＨ ｓｉＲＮＡを凍結乾燥し、再構成し、トランスフェクトした。蛍光酵素アッセイを用いて、トランスフェクション後４８時間のＨｅｐ‐２細胞中のＧＡＰＤＨレベルを測定した。結果（表２０）より、マイクロスフェアへ加工されたｓｉＲＮＡが、対応するポジティブコントロールと同等、又は、場合によってはこれを超える遺伝子サイレンシング活性（すなわち、１００％若しくはそれを超える遺伝子サイレンシング活性）を有していることが実証された。顕微鏡分析により、高品質のマイクロスフェアの形成が確認された。
Figure 2010534563
 本明細書で述べる方法で作製されたＧＡＰＤＨ ｓｉＲＮＡを含むマイクロスフェアを、水により１０μＭ ｓｉＲＮＡへ再構成した。ネガティブコントロールは、ｓｉＲＮＡを含まない各製剤から成る。ポジティブコントロールとしては、凍結乾燥したＧＡＰＤＨ ｓｉＲＮＡを１０μＭ ｓｉＲＮＡへ再構成した。各ｓｉＲＮＡサンプルは、脂質系のｓｉＰＯＲＴ（商標）ＮｅｏＦＸ（商標）トランスフェクション試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＃ＡＭ４５１０）を用いてＨｅｐ‐２細胞へトランスフェクトした。トランスフェクションの４８時間後に、ＫＤａｌｅｒｔ（商標）ＧＡＰＤＨアッセイキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＃ＡＭ１６３９）を用いて、ＧＡＰＤＨ酵素活性を測定した。ネガティブコントロール（トランスフェクションにｓｉＲＮＡを用いなかった）における蛍光の読み取り値を用いてベースラインを設定した。ポジティブコントロール（ｓｉＲＮＡを凍結乾燥しなかった）における蛍光の読み取り値の変化を、ｓｉＲＮＡの１００％活性として設定した。
実施例２２
活性剤として核酸を、担体としてゼラチンを含むマイクロスフェア
本実施例は、本明細書で提供される方法を用いてゼラチンを含むマイクロスフェアを作製することができ、ゼラチンがマイクロスフェア中のその他の活性剤に対する担体として作用可能であることを実証するものである。ゼラチンを含むマイクロスフェアは安定であり、ゼラチンと共に核酸が組み込まれても、その安定性を維持する。以下の種々の供給源由来のゼラチンを含むマイクロスフェアを作製した：
Ａ．ウシの皮膚由来のゼラチン、タイプＢ（Ｓｉｇｍａ、Ｇ９３８２）
Ｂ．ブタの皮膚由来のゼラチン、タイプＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｇ２５００）
Ｃ．冷水魚の皮膚由来のゼラチン（Ｓｉｇｍａ、Ｇ７０４１）
ゼラチンを含むマイクロスフェアの作製： 上記Ａ乃至Ｃに挙げたゼラチン化合物の各々について、下記に挙げるように、水性溶媒に溶解した２．５ｍｇ／ｍｌ乃至２５ｍｇ／ｍｌのゼラチン、種々のｐＨの対イオン、及び貧溶媒として種々の濃度のＩＰＡを含むカクテル溶液を、９６‐ウェルマイクロタイタープレート（０．１ｍｌカクテル溶液／ウェル）中にて室温で調製した。９６‐ウェルプレート中のカクテル溶液を、冷凍庫内へ配置することで冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
ウェルの底部から凍結乾燥した粉末をスライドグラスへ移し、外観について光学顕微鏡観察によって分析した。生成したマイクロスフェアの品質を、マイクロスフェアの均一性、望ましくない非マイクロスフェア粒子（ガラス様結晶性形態）が存在しないこと、及び凝集体が存在しないこと、に基づいて点数化した。表１３に示した点数化システムを用いた。
下記の表２１は、マイクロスフェアの作製に用いた化合物、溶媒、貧溶媒、及び対イオンの種々の組み合わせ、並びに得られたマイクロスフェアの品質を示す。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
ゼラチン及び核酸を含むマイクロスフェアの作製：上記Ａ乃至Ｃに挙げた３種類のゼラチン化合物の各々について、以下に挙げるように、水性溶媒に溶解した１５ｍｇ／ｍｌのゼラチン及び種々の濃度のｔＲＮＡを、種々のｐＨの対イオン及び貧溶媒としての種々の濃度のＩＰＡと共に含むカクテル溶液を、９６‐ウェルマイクロタイタープレート（０．１ｍｌカクテル溶液／ウェル）中にて室温で調製した。本実験で用いたｔＲＮＡは、Ｂａｋｅｒｓ ＹｅａｓｔからのタイプＸ‐ＳＡ（Ｓｉｇｍａ，Ｒ８７５９）であった。カクテル溶液を冷凍庫内へ配置して冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
ウェルの底部から凍結乾燥した粉末をスライドグラスへ移し、外観について光学顕微鏡観察によって分析した。生成したマイクロスフェアの品質を、マイクロスフェアの均一性、望ましくない非マイクロスフェア粒子（ガラス様結晶性形態）が存在しないこと、及び凝集体が存在しないこと、に基づいて点数化した。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：これらの実験から、適切なパラメーターを選択することで、安定なゼラチンマイクロスフェアを得ることが可能であることが実証される。さらに、核酸等の活性剤をゼラチンマトリックス内へ組み込ませて、所定の効力を有する製剤を作製することも可能である。
実施例２３
担体として多糖を用いたマイクロスフェアの作製
本実施例は、本明細書で提供される方法を用いて、多糖を含むマイクロスフェアを作製することが可能であることを実証するものである。そして、この多糖を、マイクロスフェアに組み込まれた治療薬又は活性剤の担体として用いることができる。以下の化合物について試験した：
Ａ）デキストラン硫酸ナトリウム塩（Ｓｉｇｍａ，Ｄ６９２４）
Ｂ）ヒドロキシプロピル‐Ｂ‐シクロデキストリン（東京化成工業株式会社，Ｈ０９７９）
マイクロスフェアの作製：上記の化合物Ａ）及びＢ）について、以下に挙げるように、０．５ｍｇ／ｍｌ乃至１０ｍｇ／ｍｌの化合物を、種々のｐＨの対イオン及び貧溶媒としての種々の濃度のＩＰＡと共に含むカクテル溶液を、９６‐ウェルマイクロタイタープレート（０．１ｍｌカクテル溶液／ウェル）中にて室温で調製した。カクテル溶液を冷凍庫内へ配置して冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
ウェルの底部から凍結乾燥した粉末をスライドグラスへ移し、外観について光学顕微鏡観察によって分析した。生成したマイクロスフェアの品質を、マイクロスフェアの均一性、望ましくない非マイクロスフェア粒子（ガラス様結晶性形態）が存在しないこと、及び凝集体が存在しないこと、に基づいて点数化した。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：これらの実験から、化合物、対イオン、及び貧溶媒の（ａ）種類、並びに（ｂ）濃度の適切な組み合わせを選択することで、多糖のマイクロスフェアを得ることが可能であることが実証される。
実施例２４
アミノ酸マイクロスフェア
本実施例は、本明細書で提供される方法を用いて、それ自体が活性剤若しくは治療薬であり得、又は他の活性剤及び治療薬の担体として作用し得る種々のアミノ酸を含むマイクロスフェアを作製することが可能であることを実証するものである。以下のアミノ酸のマイクロスフェアを作製した：
Ａ．アラニン
Ｂ．グルタミン酸
Ｃ．トリプトファン
Ｄ．メチオニン
Ｅ．フェニルアラニン
Ｆ．グリシン
Ｇ．リシン（Ｌｙｃｉｎｅ）
アミノ酸マイクロスフェアの作製：上記Ａ乃至Ｇに挙げた化合物の各々について、以下に挙げるように、種々のｐＨにて水性溶媒に溶解した２０ｍＭのアミノ酸、及び貧溶媒としての種々の濃度のイソプロパノール（ＩＰＡ）を含むカクテル溶液を、９６‐ウェルマイクロタイタープレート（０．１ｍｌカクテル溶液／ウェル）中にて室温で調製した。カクテル溶液を冷凍庫内へ配置して冷却した。冷却したプレートを、予め冷却した（−４５℃）Ｍｉｌｌｒｏｃｋ Ｌａｂ Ｓｅｒｉｅｓ凍結乾燥器の棚へ移し、真空引きを施した。凍結したカクテル溶液は、１６時間凍結乾燥させた。
ウェルの底部から凍結乾燥した粉末をスライドグラスへ移し、外観について光学顕微鏡観察によって分析した。生成したマイクロスフェアの品質を、マイクロスフェアの均一性、望ましくない非マイクロスフェア粒子（ガラス様結晶性形態）が存在しないこと、及び凝集体が存在しないこと、に基づいて点数化した。表１３に示した点数化システムを用いた。
下記の表２４は、マイクロスフェアの作製に用いた化合物、溶媒、及び貧溶媒の種々の組み合わせ、並びに得られたマイクロスフェアの品質を示す。
Figure 2010534563
Figure 2010534563
結果：これらの実験から、アミノ酸、対イオン、及び貧溶媒の（ａ）種類、並びに（ｂ）濃度の適切な組み合わせを選択することで、アミノ酸から作られたマイクロスフェアを得ることが可能であることが実証される。
当業者であれば変形が明らかであることから、本発明は、添付の請求項の範囲によってのみ制限されることを意図している。

Claims (257)

  1. 化合物のマイクロ粒子を作製する方法であって：
    ａ）溶媒中に該化合物を含む溶液に対イオンを添加する工程；
    ｂ）該溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
    ｃ）該溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、該化合物を含むマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
    を含み、ここで、工程ａ）、ｂ）、及びｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、方法。
  2. 前記の対イオンがポリマーではない、請求項１に記載の方法。
  3. 前記の貧溶媒がポリマーではない、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  4. 前記の化合物が、約３０℃若しくは３０℃、又はそれ未満の温度にて、工程ａ）の前に前記の溶媒に溶解される、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 前記の化合物が、約２５℃若しくは２５℃、又はそれ未満の温度にて、工程ａ）の前に前記の溶媒に溶解される、請求項４に記載の方法。
  6. 工程ａ）及びｂ）が、環境温度にて実施される、請求項１乃至５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 工程ａ）乃至ｃ）の前記の溶液がいずれも、約３０℃若しくは３０℃、を超える温度に加熱及び／又は維持されない、請求項１乃至６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 前記の化合物がタンパク質でもポリペプチドでもない、請求項１乃至７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 工程ａ）及びｂ）が、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われ、続いて工程ｃ）が行なわれる、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 工程ａ）に続いて、工程ｂ）及びｃ）が、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の方法。
  11. 工程ａ）及びｃ）が同時に行われる、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の方法。
  12. 前記の対イオン及び前記の化合物が、互いに同一である、請求項１乃至１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記の化合物及び前記の対イオンが、互いに異なっている、請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記の対イオン及び前記の貧溶媒が、互いに同一である、請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０億若しくは５０億まで、又は５０億ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０億若しくは１０億まで、又は１０億ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５に記載の方法。
  17. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０００万若しくは５０００万まで、又は５０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２０００万若しくは２０００万まで、又は２０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５００万若しくは１５００万まで、又は１５００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０００万若しくは１０００万まで、又は１０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００万若しくは５００万まで、又は５００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２０に記載の方法。
  22. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００万若しくは１００万まで、又は１００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００，０００若しくは５００，０００まで、又は５００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２２に記載の方法。
  24. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３００，０００若しくは３００，０００まで、又は３００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２００，０００若しくは２００，０００まで、又は２００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００，０００若しくは１００，０００まで、又は１００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０，０００若しくは５０，０００まで、又は５０，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２５，０００若しくは２５，０００まで、又は２５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５，０００若しくは１５，０００まで、又は１５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０，０００若しくは１０，０００まで、又は１０，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５，０００若しくは５，０００まで、又は５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３，０００若しくは３，０００まで、又は３，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２，０００若しくは２，０００まで、又は２，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記の化合物が低分子である、請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の方法。
  35. 前記の高分子が、ポリヌクレオチド、核酸、ポリペプチド、糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物の中から選択される、請求項１５乃至３３のいずれか１項に記載の方法。
  36. 前記の化合物が高分子であり、該高分子が、ポリヌクレオチド、核酸、ポリペプチド、糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物の中から選択される、請求項２に記載の方法。
  37. 前記の高分子が、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項１５乃至３３、３５、及び３６のいずれか１項に記載の方法。
  38. 前記の高分子が、低分子と抱合体形成している、請求項３５に記載の方法。
  39. 前記の低分子が、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記の低分子の分子量が、約５０若しくは５０乃至約１０００若しくは１０００ダルトンである、請求項３４又は請求項３８に記載の方法。
  41. 前記の低分子が、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項３４又は請求項４０に記載の方法。
  42. 前記の低分子が抗生物質である、請求項４１に記載の方法。
  43. 前記の抗生物質が、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、マクロライド、ペニシリン、キノロン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンの中から選択される、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記の抗生物質が、ペニシリン又はテトラサイクリンである、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記の抗生物質がアミノグリコシドである、請求項４３に記載の方法。
  46. 前記のアミノグリコシドが、カナマイシン又はトブラマイシンである、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記の低分子が抗ウィルス薬である、請求項４１に記載の方法。
  48. 前記の抗ウィルス薬が、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又はＲＳウィルスが媒介する感染症の治療のためのものである、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記の抗ウィルス薬が、ザナミビル又はリン酸オセルタミビルである、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記の低分子が化学療法薬である、請求項４１に記載の方法。
  51. 前記の化学療法薬が、アルキル化薬、アントラサイクリン、細胞骨格破壊薬（ｃｙｔｏｓｋｅｌｅｔａｌ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒｓ）、エポシロン、トポイソメラーゼＩＩの阻害薬、ヌクレオチド類似体、白金を主体とする薬剤、レチノイド、及びビンカアルカロイドの中から選択される、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記の化学療法薬が細胞骨格破壊薬である、請求項５１に記載の方法。
  53. 前記の細胞骨格破壊薬がパクリタキセルである、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記の低分子がプロスタグランジンである、請求項４１に記載の方法。
  55. 前記の高分子が核酸である、請求項３５に記載の方法。
  56. 前記の核酸が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡの中から選択される、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記の核酸がＲＮＡである、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記のＲＮＡが、ｓｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、及びリボザイムの中から選択される、請求項５７に記載の方法。
  59. 前記のＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項５８に記載の方法。
  60. 前記の高分子がウィルスである、請求項３５に記載の方法。
  61. 前記のウィルスがタバコモザイクウィルスである、請求項６０に記載の方法。
  62. 前記の高分子が糖ペプチドである、請求項３５に記載の方法。
  63. 前記の糖ペプチドがバンコマイシンである、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記の高分子がペプチドである、請求項３５に記載の方法。
  65. 前記のペプチドがリュープロリドである、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記のペプチドがソマトスタチンである、請求項６４に記載の方法。
  67. 前記の化合物が水不溶性である、請求項１５又は請求項３４に記載の方法。
  68. 工程ａ）、ｂ）、及びｃ）が、ａ）次にｂ）次にｃ）の順序にて、順次に行われる、請求項１乃至８のいずれか１項に記載の方法。
  69. 前記の溶媒が、前記の貧溶媒と相溶性又は部分的に相溶性である、請求項１乃至６８のいずれか１項に記載の方法。
  70. 工程ｃ）の後に、前記のマイクロ粒子を前記の溶液から分離して該マイクロ粒子以外の成分を除去する工程をさらに含む、請求項１乃至６９のいずれか１項に記載の方法。
  71. 前記の組成物が、前記の化合物を含有する前記のマイクロ粒子から本質的に構成される、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記の分離が、沈殿又はろ過によって行われる、請求項７０に記載の方法。
  73. 前記の分離がフリーズドライによって行われる、請求項７０に記載の方法。
  74. 前記の貧溶媒が、水、緩衝溶液、脂肪族アルコール、芳香族アルコール、クロロホルム、多価糖アルコール、芳香族炭化水素、アルデヒド、ケトン、エステル、エーテル、ジオキサン、アルカン、アルケン、共役ジエン、ジクロロメタン、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、アセトニトリル、酢酸エチル、ポリオール、ポリイミド、ポリイミン、ポリエステル、ポリアルデヒド、及びこれらの混合物の中から選択される、請求項１乃至７３のいずれか１項に記載の方法。
  75. 前記の貧溶媒が、脂肪族アルコール又は芳香族アルコールである、請求項７４に記載の方法。
  76. 前記の貧溶媒が脂肪族アルコールである、請求項７５に記載の方法。
  77. 前記の脂肪族アルコールがイソプロパノールである、請求項７６に記載の方法。
  78. 前記の対イオンが、アニオン性化合物、カチオン性化合物、及び双性イオン性化合物の中から選択される、請求項１乃至７７のいずれか１項に記載の方法。
  79. 前記の対イオンがアニオン性化合物である、請求項７８に記載の方法。
  80. 前記のアニオン性化合物が、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、硫酸カリウム、及び硫酸カルシウムの中から選択される、請求項７９に記載の方法。
  81. 前記のアニオン性化合物が硫酸ナトリウムである、請求項８０に記載の方法。
  82. 前記の対イオンが、クエン酸、イタコン酸、及びピバル酸の中から選択される、請求項１乃至１１及び１３乃至７７のいずれか１項に記載の方法。
  83. 前記の対イオンがアミノ酸である、請求項１乃至１１及び１３乃至７７のいずれか１項に記載の方法。
  84. 前記の化合物が、グリシン又はアルギニンである、請求項８３に記載の方法。
  85. 前記の対イオンがポリマーであり、前記の高分子が、ポリヌクレオチド、核酸、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物の中から選択される、請求項３５に記載の方法。
  86. 前記のポリマーが、対イオン及び貧溶媒である、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記のポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である、請求項８６に記載の方法。
  88. 前記の対イオンがポリマーである、請求項３４又は請求項４０に記載の方法。
  89. 前記のポリマーが、対イオン及び貧溶媒である、請求項８８に記載の方法。
  90. 前記のポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である、請求項８９に記載の方法。
  91. 前記のマイクロ粒子が、析出、相分離、又はコロイド形成によって得られる、請求項１乃至９０のいずれか１項に記載の方法。
  92. 前記の溶液のｐＨが、約４．０若しくは４．０乃至約９．０若しくは９．０である、請求項１乃至９１のいずれか１項に記載の方法。
  93. 前記の溶液のｐＨが、約４．０若しくは４．０乃至約８．０若しくは８．０である、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記の溶液のｐＨが、約４．５若しくは４．５乃至約７．５若しくは７．５である、請求項９３に記載の方法。
  95. 前記の溶液のｐＨが、約５．０若しくは５．０乃至約７．０若しくは７．０である、請求項９４に記載の方法。
  96. 得られたマイクロ粒子組成物が、耐酸コーティング剤、耐プロテアーゼコーティング剤、腸溶コーティング剤、バルキング剤（ｂｕｌｋｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、賦形剤、不活性成分、安定性促進剤、味及び／若しくは芳香の修飾剤又はマスキング剤、ビタミン、糖、治療薬、抗酸化剤、免疫調節薬、膜貫通輸送修飾薬（ｔｒａｎｓ‐ｍｅｍｂｒａｎｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）、固化防止剤（ａｎｔｉ‐ｃａｋｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、キトサン、又は流動性促進剤をさらに含む、請求項１乃至９５のいずれか１項に記載の方法。
  97. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約９９％超若しくは９９％超である、請求項１乃至９６のいずれか１項に記載の方法。
  98. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約２０％若しくは２０％である、請求項９７に記載の方法。
  99. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約１０％若しくは１０％乃至約８５％若しくは８５％である、請求項９７に記載の方法。
  100. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約２０％若しくは２０％乃至約６０％若しくは６０％である、請求項９９に記載の方法。
  101. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約２５％若しくは２５％乃至約５５％若しくは５５％である、請求項１００に記載の方法。
  102. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約３０％若しくは３０％乃至約５０％若しくは５０％である、請求項１０１に記載の方法。
  103. 工程ａ）の前記の溶液中の化合物の全量に対するマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約８０％若しくは８０％乃至約９９％超若しくは９９％超である、請求項９７に記載の方法。
  104. 前記の温度が、約４℃若しくは４℃乃至約−２００℃若しくは−２００℃である、請求項１乃至１０３のいずれか１項に記載の方法。
  105. 前記の温度が、約２℃若しくは２℃乃至約−１８０℃若しくは−１８０℃である、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記の温度が、約２℃若しくは２℃乃至約−１７０℃若しくは−１７０℃である、請求項１０５に記載の方法。
  107. 前記の温度が、約０℃若しくは０℃乃至約−２℃若しくは−２℃、から、約−１５０℃若しくは−１５０℃乃至約−１６５℃若しくは−１６５℃、の間である、請求項１０６に記載の方法。
  108. 得られた組成物の保存寿命が、約５５℃若しくは５５℃、約５０℃若しくは５０℃、約４５℃若しくは４５℃、約４４℃若しくは４４℃、約４２℃若しくは４２℃、約４０℃若しくは４０℃、約３９℃若しくは３９℃、約３８℃若しくは３８℃、約３７℃若しくは３７℃、又はこれ未満の温度にて、約１週間若しくは１週間乃至約１ヶ月間若しくは１ヶ月間、約１ヶ月間若しくは１ヶ月間乃至約６ヶ月間若しくは６ヶ月間、約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間、約１年間若しくは１年間乃至約２年間若しくは２年間、又は約２年間若しくは２年間乃至約５年間若しくは５年間である、請求項１乃至１０７のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記の溶液及び／又は得られた組成物が、さらに活性剤を含む、請求項１乃至１０８のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記の活性剤が、抗生物質、化学療法薬、抗糖尿病薬、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬（ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｄｉｌａｔｏｒｓ）、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬（ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉｃｓ）、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬（ｎｅｏｐｌａｓｔｉｅｓ）、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬（ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ）、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬（ｕｒｉｎａｒｙ ｔｒａｃｔ ｄｒｕｇｓ）、ワクチン、経膣薬（ｖａｇｉｎａｌ ｄｒｕｇｓ）、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、酵素、ホルモン、ビタミン、ミネラル、及び栄養補助薬、の中から選択される、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記のマイクロ粒子の水分含量の調節を、それによって、約２５℃の温度での約６ヶ月間乃至約１年間の保存後に、前記の化合物の活性の少なくとも約９０％若しくは９０％が維持されるように行う、請求項１乃至１１０のいずれか１項に記載の方法。
  112. 前記のマイクロ粒子の水分含量が、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約２０％若しくは２０％である、請求項１乃至１１１のいずれか１項に記載の方法。
  113. 前記の化合物がマイクロ担体（ｍｉｃｒｏ‐ｃａｒｒｉｅｒ）である、請求項１に記載の方法。
  114. 前記の得られたマイクロ粒子が、前記の化合物とは異なるマイクロ担体をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  115. 前記のマイクロ担体が、アミノ酸、カルボン酸、タンパク質、核酸、多糖、及びヒドロゲルを形成する能力を有する物質の中から選択される、請求項１１３又は請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記の化合物が、核酸又はタンパク質であり、前記のマイクロ担体が、ヒドロゲルを形成する能力を有する物質である、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記のマイクロ担体が、ゼラチン又はデキストランである、請求項１１３又は請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記の化合物がｓｉＲＮＡであり、前記のマイクロ担体がゼラチンである、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約１００ｍＭ若しくは１００ｍＭまで、又は１００ｍＭである、請求項１乃至１１８のいずれか１項に記載の方法。
  120. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約５０ｍＭ若しくは５０ｍＭまで、又は５０ｍＭである、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約２０ｍＭ若しくは２０ｍＭまで、又は２０ｍＭである、請求項１２０に記載の方法。
  122. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、０ｍＭ、又は約０ｍＭ若しくは０ｍＭから約１０ｍＭ若しくは１０ｍＭまで、又は１０ｍＭである、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、１ｍＭ、又は約１ｍＭ若しくは１ｍＭから約５ｍＭ若しくは５ｍＭまで、又は５ｍＭである、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記の溶液に添加される対イオンの濃度が、約２ｍＭ若しくは２ｍＭである、請求項１２３に記載の方法。
  125. 前記の少しずつの冷却が冷やすことによって行われる、請求項１乃至１２４のいずれか１項に記載の方法。
  126. 前記の少しずつの冷却が吸熱反応によって行われる、請求項１乃至１２４のいずれか１項に記載の方法。
  127. 前記の少しずつの冷却が、０．０１℃／分、又は約０．０１若しくは０．０１℃／分から約２０若しくは２０℃／分まで、又は２０℃／分、の速度で行われる、請求項１２５又は請求項１２６に記載の方法。
  128. 前記の少しずつの冷却が、約０．０５若しくは０．０５℃／分又は約０．１若しくは０．１℃／分から約１０若しくは１０℃／分又は約１５若しくは１５℃／分まで、の速度で行われる、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記の少しずつの冷却が、約０．２若しくは０．２℃／分から約５若しくは５℃／分まで、の速度で行われる、請求項１２８に記載の方法。
  130. 前記の少しずつの冷却が、約０．５若しくは０．５℃／分から約２若しくは２℃／分まで、の速度で行われる、請求項１２９に記載の方法。
  131. 前記の少しずつの冷却が、約１若しくは１℃／分の速度で行われる、請求項１３０に記載の方法。
  132. 前記のマイクロ粒子のサイズが、０．００１μｍ、又は約０．００１若しくは０．００１μｍから約５０若しくは５０μｍまで、又は５０μｍ、である、請求項１乃至１３１のいずれか１項に記載の方法。
  133. 前記のマイクロ粒子のサイズが、０．３μｍ、又は約０．３若しくは０．３μｍから約３０若しくは３０μｍまで、又は３０μｍ、である、請求項１３２に記載の方法。
  134. 前記のマイクロ粒子のサイズが、０．５μｍ、又は約０．５若しくは０．５μｍから約１０若しくは１０μｍまで、又は１０μｍ、である、請求項１３３に記載の方法。
  135. 前記のマイクロ粒子のサイズが、０．５μｍ、又は約０．５若しくは０．５μｍから約５．０若しくは５．０μｍまで、又は５．０μｍ、である、請求項１３４に記載の方法。
  136. 前記のマイクロ粒子のサイズが、１．０μｍ、又は約１．０若しくは１．０μｍから約５．０若しくは５．０μｍまで、又は５．０μｍ、である、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約１．０若しくは１．０μｍから約２．０若しくは２．０μｍ、約３．０若しくは３．０μｍ、約４．０若しくは４．０μｍ、又は約５．０若しくは５．０μｍまでである、請求項１３６に記載の方法。
  138. 化合物のマイクロ粒子及び対イオンを含む組成物であって、ここで、該化合物及び該対イオンが互いに異なる、組成物。
  139. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０億若しくは５０億まで、又は５０億ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１３８に記載の組成物。
  140. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０億若しくは１０億まで、又は１０億ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１３９に記載の組成物。
  141. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０００万若しくは５０００万まで、又は５０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４０に記載の組成物。
  142. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２０００万若しくは２０００万まで、又は２０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４１に記載の組成物。
  143. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５００万若しくは１５００万まで、又は１５００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４２に記載の組成物。
  144. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０００万若しくは１０００万まで、又は１０００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４３に記載の組成物。
  145. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００万若しくは５００万まで、又は５００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４４に記載の組成物。
  146. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００万若しくは１００万まで、又は１００万ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４５に記載の組成物。
  147. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５００，０００若しくは５００，０００まで、又は５００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４６に記載の組成物。
  148. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３００，０００若しくは３００，０００まで、又は３００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４７に記載の組成物。
  149. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２００，０００若しくは２００，０００まで、又は２００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４８に記載の組成物。
  150. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１００，０００若しくは１００，０００まで、又は１００，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１４９に記載の組成物。
  151. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５０，０００若しくは５０，０００まで、又は５０，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５０に記載の組成物。
  152. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２５，０００若しくは２５，０００まで、又は２５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５１に記載の組成物。
  153. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１５，０００若しくは１５，０００まで、又は１５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５２に記載の組成物。
  154. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約１０，０００若しくは１０，０００まで、又は１０，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５３に記載の組成物。
  155. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約５，０００若しくは５，０００まで、又は５，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５４に記載の組成物。
  156. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約３，０００若しくは３，０００まで、又は３，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５５に記載の組成物。
  157. 前記の化合物が、１０００、又は約１０００若しくは１０００から約２，０００若しくは２，０００まで、又は２，０００ダルトンの分子量を有する高分子である、請求項１５６に記載の組成物。
  158. 前記の化合物が低分子である、請求項１３８に記載の組成物。
  159. 前記の高分子が、ポリヌクレオチド、核酸、ポリペプチド、糖ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、脂肪酸、多糖、炭水化物‐若しくは多糖‐タンパク質抱合体、ウィルス、ウィルス粒子、ウィロイド、プリオン、及びこれらの混合物の中から選択される、請求項１３９乃至１５７のいずれか１項に記載の組成物。
  160. 前記の高分子が、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項１３９乃至１５７及び１５９のいずれか１項に記載の組成物。
  161. 前記の高分子が低分子と抱合体形成している、請求項１５９又は請求項１６０に記載の組成物。
  162. 前記の低分子が、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項１６１に記載の組成物。
  163. 前記の低分子の分子量が、約５０若しくは５０乃至約１０００若しくは１０００ダルトンである、請求項１５８に記載の組成物。
  164. 前記の低分子が、ハプテン、ホルモン、プロスタグランジン、抗生物質、化学療法薬、造血薬、抗感染症薬、抗潰瘍薬、抗アレルギー薬、解熱薬、鎮痛薬、抗炎症薬、抗認知症薬、抗ウィルス薬、抗腫瘍薬、抗うつ薬、向精神薬、強心薬、利尿薬、抗不整脈薬、血管拡張薬、降圧薬、抗糖尿病薬、抗凝固薬、及びコレステロール低下薬の中から選択される、請求項１５８又は請求項１６３に記載の組成物。
  165. 前記の低分子が抗生物質である、請求項１６４に記載の組成物。
  166. 前記の抗生物質が、アミノグリコシド、アンサマイシン、カルバセフェム、カルバペネム、セファロスポリン、マクロライド、ペニシリン、キノロン、スルホンアミド、及びテトラサイクリンの中から選択される、請求項１６５に記載の組成物。
  167. 前記の抗生物質が、ペニシリン又はテトラサイクリンである、請求項１６５に記載の組成物。
  168. 前記の抗生物質がアミノグリコシドである、請求項１６５に記載の組成物。
  169. 前記のアミノグリコシドが、カナマイシン又はトブラマイシンである、請求項１６８に記載の組成物。
  170. 前記の化合物が抗ウィルス薬である、請求項１６４に記載の組成物。
  171. 前記の抗ウィルス薬が、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又はＲＳウィルスが媒介する感染症の治療のためのものである、請求項１７０に記載の組成物。
  172. 前記の抗ウィルス薬が、ザナミビル又はリン酸オセルタミビルである、請求項１７１に記載の組成物。
  173. 前記の化合物が化学療法薬である、請求項１６４に記載の組成物。
  174. 前記の化学療法薬が、アルキル化薬、アントラサイクリン、細胞骨格破壊薬、エポシロン、トポイソメラーゼＩＩの阻害薬、ヌクレオチド類似体、白金を主体とする薬剤、レチノイド、及びビンカアルカロイドの中から選択される、請求項１７３に記載の組成物。
  175. 前記の化学療法薬が細胞骨格破壊薬である、請求項１７４に記載の組成物。
  176. 前記の細胞骨格破壊薬がパクリタキセルである、請求項１７５に記載の組成物。
  177. 前記の化合物がプロスタグランジンである、請求項１６４に記載の組成物。
  178. 前記の高分子が核酸である、請求項１５９に記載の組成物。
  179. 前記の核酸が、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びＰＮＡの中から選択される、請求項１７８に記載の組成物。
  180. 前記の核酸がＲＮＡである、請求項１７９に記載の組成物。
  181. 前記のＲＮＡが、ｓｉＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｓｎＲＮＡ、及びリボザイムの中から選択される、請求項１８０に記載の組成物。
  182. 前記のＲＮＡがｓｉＲＮＡである、請求項１８１に記載の組成物。
  183. 前記の高分子がウィルスである、請求項１５９に記載の組成物。
  184. 前記のウィルスがタバコモザイクウィルスである、請求項１８３に記載の組成物。
  185. 前記の高分子が糖ペプチドである、請求項１５９に記載の組成物。
  186. 前記の糖ペプチドがバンコマイシンである、請求項１８５に記載の組成物。
  187. 前記の高分子がペプチドである、請求項１５９に記載の組成物。
  188. 前記のペプチドがリュープロリドである、請求項１８７に記載の組成物。
  189. 前記のペプチドがソマトスタチンである、請求項１８７に記載の組成物。
  190. 前記の化合物が水不溶性である、請求項１３９又は請求項１５８に記載の組成物。
  191. 前記の対イオンが、アニオン性化合物、カチオン性化合物、及び双性イオン性化合物の中から選択される、請求項１３８乃至１９０のいずれか１項に記載の組成物。
  192. 前記の対イオンがアニオン性化合物である、請求項１９１に記載の組成物。
  193. 前記のアニオン性化合物が、クエン酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸亜鉛、硫酸マグネシウム、硫酸カリウム、及び硫酸カルシウムの中から選択される、請求項１９２に記載の組成物。
  194. 前記のアニオン性化合物が硫酸ナトリウムである、請求項１９３に記載の組成物。
  195. 前記の対イオンが、クエン酸、イタコン酸、及びピバル酸の中から選択される、請求項１３８乃至１９０のいずれか１項に記載の組成物。
  196. 前記の対イオンがアミノ酸である、請求項１３８乃至１９５のいずれか１項に記載の組成物。
  197. 前記の対イオンが、グリシン又はアルギニンである、請求項１９６に記載の組成物。
  198. 前記の対イオンが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）又はポリエチレンイミン（ＰＥＩ）である、請求項１５８及び１６３乃至１７７のいずれか１項に記載の組成物。
  199. 得られたマイクロ粒子組成物が、耐酸コーティング剤、耐プロテアーゼコーティング剤、腸溶コーティング剤、バルキング剤、賦形剤、不活性成分、安定性促進剤、味及び／若しくは芳香の修飾剤又はマスキング剤、ビタミン、糖、治療薬、抗酸化剤、免疫調節薬、膜貫通輸送修飾薬、固化防止剤、キトサン、又は流動性促進剤をさらに含む、請求項１３８乃至１９８のいずれか１項に記載の組成物。
  200. 約５５℃若しくは５５℃、約５０℃若しくは５０℃、約４５℃若しくは４５℃、約４４℃若しくは４４℃、約４２℃若しくは４２℃、約４０℃若しくは４０℃、約３９℃若しくは３９℃、約３８℃若しくは３８℃、約３７℃若しくは３７℃、又はこれ未満の温度にて、約１週間若しくは１週間乃至約１ヶ月間若しくは１ヶ月間、約１ヶ月間若しくは１ヶ月間乃至約６ヶ月間若しくは６ヶ月間、約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間、約１年間若しくは１年間乃至約２年間若しくは２年間、又は約２年間若しくは２年間乃至約５年間若しくは５年間、の保存寿命を有する、請求項１３８乃至１９９のいずれか１項に記載の組成物。
  201. さらに活性剤を含む、請求項１３８乃至２００のいずれか１項に記載の組成物。
  202. 前記の活性剤が、抗生物質、化学療法薬、抗糖尿病薬、抗痙攣薬、鎮痛薬、抗パーキンソン薬、抗炎症薬、カルシウムアンタゴニスト、麻酔薬、抗菌薬、抗マラリア薬、抗寄生虫薬、降圧薬、抗ヒスタミン薬、解熱薬、アルファ‐アドレナリンアゴニスト、アルファ遮断薬、殺生物剤、殺菌剤、気管支拡張薬、ベータ‐アドレナリン遮断薬、避妊薬、心血管治療薬、カルシウムチャネル阻害薬、抑制薬、診断薬、利尿薬、電解質、酵素、睡眠薬、ホルモン、血糖降下薬、血糖上昇薬、筋収縮薬、筋弛緩薬、組織形成薬、糖タンパク質、核タンパク質、リポタンパク質、点眼薬、精神賦活薬、鎮静薬、ステロイド、交感神経刺激薬、副交感神経刺激薬、トランキライザー、経尿路薬、ワクチン、経膣薬、非ステロイド性抗炎症薬、アンギオテンシン変換酵素、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖、酵素、ホルモン、ビタミン、ミネラル、及び栄養補助薬、の中から選択される、請求項２０２に記載の組成物。
  203. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約９９％若しくは９９％、又はこれを超える量である、請求項１３８乃至２０２のいずれか１項に記載の組成物。
  204. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約０．２％若しくは０．２％乃至約９５％若しくは９５％、又はこれを超える量である、請求項２０３に記載の組成物。
  205. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約０．５％若しくは０．５％乃至約９０％若しくは９０％、又はこれを超える量である、請求項２０４に記載の組成物。
  206. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約１％若しくは１％乃至約８５％若しくは８５％、又はこれを超える量である、請求項２０５に記載の組成物。
  207. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約２％若しくは２％乃至約８０％若しくは８０％、又はこれを超える量である、請求項２０６に記載の組成物。
  208. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約５％若しくは５％乃至約７５％若しくは７５％、又はこれを超える量である、請求項２０７に記載の組成物。
  209. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約６５％乃至約９０％である、請求項２０８に記載の組成物。
  210. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約７０％乃至約８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、又は９０％である、請求項２０９に記載の組成物。
  211. 前記のマイクロ粒子中の化合物の量が、重量／重量％で、約９０％乃至約９９％である、請求項２１０に記載の組成物。
  212. 前記のマイクロ粒子の水分含量の調節を、それによって、約２５℃の温度での約６ヶ月間若しくは６ヶ月間乃至約１年間若しくは１年間の保存後に、前記の化合物の活性の少なくとも約９０％若しくは９０％が維持されるように行う、請求項１３８乃至２１１のいずれか１項に記載の組成物。
  213. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約６０％若しくは６０％である、請求項１３８乃至２１２のいずれか１項に記載の組成物。
  214. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．５％若しくは０．５％乃至約５０％若しくは５０％である、請求項２１３に記載の組成物。
  215. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約１％若しくは１％乃至約２％若しくは２％である、請求項２１４に記載の組成物。
  216. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．０１％若しくは０．０１％乃至約２０％若しくは２０％である、請求項２１３に記載の組成物。
  217. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．０５％若しくは０．０５％乃至約１５％若しくは１５％である、請求項２１６に記載の組成物。
  218. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．１％若しくは０．１％乃至約１０％若しくは１０％である、請求項２１７に記載の組成物。
  219. 前記のマイクロ粒子中の対イオンの量が、重量／重量％で、約０．２％若しくは０．２％乃至約５％若しくは５％である、請求項２１８に記載の組成物。
  220. 前記のマイクロ粒子中の水分含量が、約６％若しくは６％乃至約１２％若しくは１２％である、請求項２１７に記載の組成物。
  221. 前記のマイクロ粒子中の水分含量が、約７％若しくは７％乃至約１０．５％若しくは１０．５％である、請求項２２０に記載の組成物。
  222. 経口投与用である、請求項１３８乃至２２１のいずれか１項に記載の組成物。
  223. 経口摂取用である、請求項１３８乃至２２２のいずれか１項に記載の組成物。
  224. 静脈内、鼻腔内、非経口、経肺、皮下、点眼、又は筋肉内投与用である、請求項１３８乃至２２１のいずれか１項に記載の組成物。
  225. 吸入用である、請求項１３８乃至２２２のいずれか１項に記載の組成物。
  226. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約０．００１μｍ若しくは０．００１μｍ乃至約５０μｍ若しくは５０μｍである、請求項１３８乃至２２５のいずれか１項に記載の組成物。
  227. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約０．３μｍ若しくは０．３μｍ乃至約３０μｍ若しくは３０μｍである、請求項２２６に記載の組成物。
  228. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約０．５μｍ若しくは０．５μｍ乃至約１０μｍ若しくは１０μｍである、請求項２２７に記載の組成物。
  229. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約０．５μｍ若しくは０．５μｍ乃至約５．０μｍ若しくは５．０μｍである、請求項２２８に記載の組成物。
  230. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約１．０μｍ若しくは１．０μｍ乃至約５．０μｍ若しくは５．０μｍである、請求項２２９に記載の組成物。
  231. 前記のマイクロ粒子のサイズが、約１．０μｍ乃至約２．０、３．０、４．０、若しくは５．０μｍである、請求項２３０に記載の組成物。
  232. 請求項１３８乃至２３１のいずれか１項に記載の組成物、該組成物のための包装材、及び該組成物が治療、ニュートラシューティカル（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、又は美容品に適応されることを示すラベル、を含む製品。
  233. 前記の組成物が治療に適応される、請求項２３２に記載の製品。
  234. 前記の治療への適応が癌である、請求項２３３に記載の製品。
  235. 前記の治療への適応が、インフルエンザ、パラインフルエンザ、又は呼吸器障害である、請求項２３３に記載の製品。
  236. 前記の組成物の経肺投与のための吸入器をさらに含む、請求項２３５に記載の製品。
  237. 前記の吸入器が、ドライパウダー吸入器、定量噴霧式吸入器、又は静電送達装置（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｄｅｖｉｃｅ）である、請求項２３６に記載の製品。
  238. 請求項１３８乃至２３１のいずれか１項に記載の組成物の治療効果量を対象へ投与することを含む、感染性疾患を予防又は治療する方法。
  239. 前記の感染性疾患が、アルボウィルス感染、ボツリヌス中毒、ブルセラ症、カンジダ症、カンピロバクター症、水痘、クラミジア感染症、コレラ、コロノウィルス感染症、ブドウ球菌感染症、コクサッキーウィルス感染症、クロイツフェルト‐ヤコブ病、クリプトスポリジウム症、シクロスポラ感染症（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）、サイトメガロウィルス感染症、エプスタイン‐バーウィルス感染症、デング熱、ジフテリア、耳感染症、脳炎、インフルエンザウィルス感染症、パラインフルエンザウィルス感染症、ジアルジア症、淋病、インフルエンザ菌感染症、ハンタウィルス感染症、ウィルス肝炎、単純ヘルペスウィルス感染症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、ヘリコバクター感染症、ヒトパピローマウィルス（ＨＰＶ）感染症、伝染性単核球症、レジオネラ症、ハンセン病、レプトスピラ症、リステリア症、ライム病、リンパ性脈絡髄膜炎、マラリア、麻疹、マルブルグ出血熱（ｍａｒｂｕｒｇ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｆｅｖｅｒ）、脳膜炎、サル痘、流行性耳下腺炎、マイコバクテリア感染症、マイコプラズマ感染症、ノーウォークウィルス感染症、百日咳、蟯虫感染症、肺炎球菌の疾患、ストレプトコッカスニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）感染症、マイコプラズマニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染症、モラクセラカタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）感染症、シュードモナスエルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）感染症、ロタウィルス感染症、オウム病、狂犬病、ＲＳウィルス感染症（ＲＳＶ）、白癬、ロッキー山紅斑熱、風疹、サルモネラ症、ＳＡＲＳ、疥癬、性行為感染症、細菌性赤痢、帯状疱疹、スポロトリコーシス、レンサ球菌感染症、梅毒、テタヌス、旋毛虫症、結核、野兎病、腸チフス、ウィルス性髄膜炎、細菌性髄膜炎、西ナイルウィルス感染症、黄熱、アデノウィルスが媒介する感染症及び疾患、レトロウィルスが媒介する感染性疾患、並びにエルシニア人畜共通感染症、の中から選択される、請求項２３８に記載の方法。
  240. 前記の感染性疾患が、インフルエンザウィルス、パラインフルエンザウィルス、ＲＳウィルス感染症の中から選択される、請求項２３９に記載の方法。
  241. 前記の投与が、経口、静脈内、鼻腔内、非経口、皮下、経皮、局所、関節内、筋肉内、又は吸入投与によって実施される、請求項２３８乃至２４０のいずれか１項に記載の方法。
  242. ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を作製する方法であって：
    （ａ）水性溶媒中のｓｉＲＮＡの溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
    （ｂ）該溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ｓｉＲＮＡを含むマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
    を含み、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、方法。
  243. （ｃ）対イオンを添加する工程、
    をさらに含み、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、請求項２４２に記載の方法。
  244. 前記の貧溶媒がイソプロパノールである、請求項２４２又は請求項２４３に記載の方法。
  245. 前記の溶媒が水である、請求項２４２乃至２４４のいずれか１項に記載の方法。
  246. ｓｉＲＮＡのマイクロ粒子を含む、組成物。
  247. 対イオンをさらに含む、請求項２４６に記載の組成物。
  248. ウィルスのマイクロ粒子を作製する方法であって：
    （ａ）水性溶媒中のウィルスの溶液に貧溶媒を添加する工程；及び、
    （ｂ）該溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ウィルスを含むマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
    を含み、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、方法。
  249. （ｃ）対イオンを添加する工程、
    をさらに含み、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、請求項２４８に記載の方法。
  250. 前記の貧溶媒がイソプロパノールである、請求項２４８又は請求項２４９に記載の方法。
  251. ウィルスのマイクロ粒子を作製する方法であって：
    （ａ）水性溶媒中のウィルスの溶液に対イオンを添加する工程；及び、
    （ｂ）該溶液を少しずつ約２５℃未満の温度まで冷却し、それによって、ウィルスを含むマイクロ粒子を含む組成物を形成させる工程、
    を含み、ここで、工程（ａ）及び（ｂ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、方法。
  252. （ｃ）貧溶媒を添加する工程、
    をさらに含み、ここで、工程（ａ）、（ｂ）、及び（ｃ）は、同時に、順次に、断続的に、又はいかなる順序によっても行われる、請求項２５１に記載の方法。
  253. 前記の貧溶媒がイソプロパノールである、請求項２５２に記載の方法。
  254. 前記の溶媒が水である、請求項２５１乃至２５３のいずれか１項に記載の方法。
  255. ウィルスのマイクロ粒子を含む、組成物。
  256. 対イオンをさらに含む、請求項２５５に記載の組成物。
  257. 前記のウィルスがタバコモザイクウィルスである、請求項２５５又は請求項２５６に記載の組成物。
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