JP2017148800A

JP2017148800A - 液体サイクロンを使用する微小球の製造

Info

Publication number: JP2017148800A
Application number: JP2017041674A
Authority: JP
Inventors: サヌー，バガバティカナン，チサンバラ; Chithambara Thanoo Bagavathikanun; スミス，エドワード，コールドウェル; Caldwell Smith Edward; スミス，マーク; Smith Mark
Original assignee: Oakwood Laboratories LLC
Current assignee: Oakwood Laboratories LLC
Priority date: 2011-02-16
Filing date: 2017-03-06
Publication date: 2017-08-31
Anticipated expiration: 2032-02-16
Also published as: EP2675559B1; US20120205293A1; AU2012217620B2; WO2012112747A3; BR112013020648B1; US8708159B2; CN103732318A; AU2012217620A1; JP6180327B2; BR112013020648A2; JP2014511265A; JP6359138B2; ES2807350T3; EP2675559A4; EP2675559A2; CN103732318B; WO2012112747A2; MX2013009056A

Abstract

【課題】薬物含有微小球の製造において、望ましくない小粒子の除去した、徐放性医薬製品を製造するシステムの供給。
【解決手段】懸濁媒体に凝固した微小球の懸濁液が入っている容器と流体入口１６、第１の流体出口１８、及び第２の流体出口２０を具備する液体サイクロン（ＨＣ−１）１０であって、流体入口１６が容器に流体連絡して懸濁液を受容し、第２の流体出口２０が、容器中の懸濁液に比べて高い濃度の微小球を含む懸濁液の流れを排出し、第１の流体出口１８が、容器中の懸濁液に比べて低い濃度の微小球を含む懸濁媒体の流れを排出する、液体サイクロン１０と、第２の流体出口２０と流体連結している入口を具備する溶媒除去容器（ＳＲＶ）と、ＳＲＶの出口と流体連結している入口とＳＲＶの入口と流体連結している出口を具備する湿潤篩または中空糸フィルタと、を備える、システム。
【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、参照により本明細書に組み込まれる、２０１１年２月１６日に出願された特許出願第１３／０２８，７６４号の利益を主張する。

この分野は、徐放性医薬製品の製造である。

徐放性の注射可能な微粒子は、いくつかの利点により関心を集めている。この微粒子は、それほど頻繁に注射されないので、患者のコンプライアンスおよび利便性が高い。より高い効力は、血液中に持続的なかつ有効な薬物濃度が維持されるので、より低い用量で一般に実現された。必要に応じてこれらの製剤は、特定疾患を治療するためのより高い局所濃度を実現するように使用することができた。しかし、これら剤形の製造は、生成物を滅菌すべきであることから難題である。標準的な滅菌方法は、これらの生成物で機能せず、あるいは生成物の品質に悪影響を及ぼす。したがって生成物は、無菌条件下で製造すべきである。微粒子生成物の無菌製造は、難題である。微粒子は、いくつかの特許（第５，９４５，１２６号；第６，２７０，８０２号；第６，３６１，７９８号；第７，３００，６７１号、および第６，９３９，０３３号）で報告されたような連続プロセスによって、製造できることが確かめられた。微小球を作製する場合、所望のレベルへの粒子の濃縮、望ましくない粒子の除去、さらに望ましくない溶媒および界面活性剤の洗浄による除去など、連続プロセスで粒子を生成することが好ましい。微粒子を連続フロープロセスで生成するには、様々なサイズ範囲の機器が利用可能である。例えばインライン動的ミキサは、ＳｉｌｖｅｒｓｏｎｍａｃｈｉｎｅｓおよびＲｏｓｓｍｉｘｅｒｓなどの製造業者から様々なサイズで入手可能である。同様にインライン静的ミキサは、様々なサイズでＲｏｓｓｍｉｘｅｒｓ、Ｓｕｌｚｅｒ、およびＫｏｍａｘなどの会社から入手可能である。しかし、微小球をそのようなより速い速度で処理するのに、多くの機器の選択肢はない。処理では、溶媒および非包封薬物も含有する過剰な連続相など、望ましくない構成成分を除去する。全量濾過（例えば、Ｓｗｅｃｃｏ製ＰｈａｒｍＳｅｐ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製Ｓｔｉｒ−Ｃｅｌｌアセンブリ）、連続フロー遠心分離機（ＡｌｆａＬａｖｅｌ製遠心分離機）、および膜貫通濾過（例えば、ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｓｐｅｃｔｒｕｍ製中空糸フィルタ）などの機器は、微小球懸濁液を処理することができる。しかし全量濾過では大量に取り扱うことができず、膨大な表面積を必要としかつ可動部品を備えた扱い難い機器を使用する。また、フィルタおよび篩の目詰まりも、全量濾過中の一般的な問題であり、プロセス中の効率を犠牲にする。より大規模な操作では、目詰まりしたフィルタ／篩を交換する必要があり、この介入は、無菌操作に影響を及ぼす可能性がある。連続フロー遠心分離機には、粒子充填（凝集）の問題がある可能性があり、また無菌条件下で操作するのが難しい。膜貫通濾過には、再循環させるための膨大な表面積の要件および非常に高い流量の要件により、制限がある。フィルタ膜の目詰まりも、大規模な操作では問題である。さらに、より小さな粒子はマクロファージにより炎症を引き起こす可能性があるので、生成物から小粒子を除去することが、いくつかの状況では必要になる。Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ製スピンフィルタおよびＳｗｅｃｃｏ製振動篩は、小粒子を除去するのに利用可能な選択肢である。しかし篩の目詰まりは、両方のデバイスで主要な問題であり；したがって広く使用されているわけではない。

液体サイクロンは、大容量を迅速に処理することが可能でありかつ無菌製造に適応させることができるので使用される。液体サイクロンは、無菌領域で最小限の空間を占有し、いかなる可動部品も持たず、微小球懸濁液をより速い速度で処理して、既存の機器の欠陥を排除することができる。さらに、液体サイクロンは、生成物の品質を損なう可能性のある粒子の望ましくない画分を除去できることがわかった。微小球という用語は、この開示全体を通して使用されるが、この用語は、粒子が厳密に球形でなくてもよくかつ活性剤をポリマー全体に分散させることができまたはポリマーで包封することができるので、微粒子およびマイクロカプセルという用語と同義であることが理解される。

微小球の製造は、広範な粒度分布を有する粒子を生成する。より小さい粒子は、初期バーストおよびより速い放出速度などの問題を課す可能性がある。小粒子は、より大きい粒子よりも高い薬物負荷を含有していない可能性がある。さらに、より小さい粒子は、マクロファージの攻撃により免疫応答を誘発させる可能性がある。したがって、ある適用例では、例えば１０ミクロン未満、好ましくは５ミクロン未満の粒子を製剤が含まないことが重要である。一例として、滑液膜組織に注射することによって変形性関節症を治療する微粒子の適用では、生成物は、２０ミクロン未満の粒子を含むベきではない。液体サイクロンは、これらの小粒子を除去することができる。

望ましくない粒度の除去が、篩い分けプロセスによっても除去できるとしても、篩い分けは無菌製造条件下では難しく、特に生成物から粒子の画分を除去することは難しい。液体サイクロンは、非常に速い速度で連続相を排除することによってかつより小さい粒子を排除することによって、より速い速度で、生成された微小球を処理するのに使用することができる。このデバイスは、より大きい粒子を排除するのに使用することもできる。液体サイクロンを膜貫通濾過（例えば、中空糸フィルタ）と組み合わせ、中空糸フィルタが効率的に動作できるようにすることができる。連続相のほとんどは液体サイクロンによって排除されるので、蠕動ポンプなどの単純でより小さいポンプを用いることにより、中空糸フィルタをより低い流量（再循環速度）で動作させることが容易である。さらに、細孔を遮断することによってフィルタ膜を目詰まりさせる可能性のある、より小さい粒子は、液体サイクロンによって排除することができる。液体サイクロンを使用して、これらのより小さい粒子の膨大な画分を除去することにより、フィルタ膜の動作寿命を延ばすことができ、したがって大きいバッチサイズを生成する能力を高めることができる。これは、中空糸フィルタの交換がプロセスの無菌状態を損なって、バッチ全体が不合格になる可能性があるので、無菌製造では有用である。

同様に、液体サイクロンの動作によって、微小球懸濁液からより小さい粒子の大量の画分を排除することにより、生成された微小球を、全量濾過を使用して難無く処理することができた（例えば、Ｓｗｅｃｃｏ製の篩）。全量濾過に関する情報については：ＡＡＰＳＰｈａｒｍＳｃｉＴｅｃｈ，２００１，２（１）；米国公開特許第２００９０１０４２７４号を参照されたい。懸濁液が実質的に小粒子を含まない場合、処理（濃縮、洗浄、最終製剤の実現）は、篩システムも使用して行うことができる。

微小球は、混合の影響下で分散相と連続相とを合わせることにより生成される。分散相と連続相との適切な比を選択することにより、産出物を、凝固した微小球の懸濁液またはエマルジョンとすることができる。エマルジョンの場合、追加の流体を添加して、溶媒抽出によりエマルジョンを凝固することができる。これは、連続的にまたはバッチプロセスとして行うことができる。連続微粒子製造プロセス中、懸濁液産出速度は、インライン混合システムに応じて１から５０Ｌ／分とすることができる。懸濁液中の粒子濃度は、０．１ｇ／Ｌから１００ｇ／Ｌとすることができる。連続相の排除および懸濁液中の微粒子の濃縮は、医薬調製中に必要なステップである。これは、いくつかの手順と、単独で使用する場合には説明したように制限のある全量濾過、遠心分離、および膜貫通濾過などの関連付けられた機器とによって、行うことができる。

微小球の好ましい性質および生成物の無菌性を維持しながら微小球処理速度を増大させるために、液体サイクロンが有用であることがわかった。液体サイクロンは、処理能力と微小球の品質とを著しく高めた。液体サイクロンは、全プロセス内のいくつかの異なる点で、容易に実施し使用することができる。液体サイクロンを使用することにより、小粒子を除去してまたは除去することなく過剰な連続相（ＣＰ）を除去することができ、より大きい粒子を除去することができ、さらに洗浄ステップ中に、ＣＰおよび望ましくない構成成分、例えば残留溶媒および非包封薬物を除去することができる。

液体サイクロンは、処理効率のためにその濃度を改善するためだけではなく、より安全でより有効な製剤を提供するのを助けるために、徐放性製剤に対して重要な効果を発揮することができる。液体サイクロンは、生成物の好ましい粒度分布を選択するのを支援しうる。この選択により、潜在的に有害な（または望ましくない）画分を低減させることができる。特に、より小さい粒子を低減させまたは排除することができる。これらのより小さい粒子は、注射部位での、潜在的なマクロファージ攻撃源となる可能性がある。液体サイクロンは、その他のデバイスに比べ、非常に速い速度で微小球懸濁液を処理し、望ましくない構成成分を除去することが可能である。

高速処理では、複数の液体サイクロンを並列に使用することができる。良好な収率のために、複数の液体サイクロンを直列で使用することができる。液体サイクロンには、処理効率および収率を変化させる可能性のあるいくつかの変数がある。所与の液体サイクロンの場合、底部流およびオーバーフローが操作されるよう、種々の固定角アペックス識別子（ＩＤ）を選択することができる。

次に本開示の特定の態様の考察であるが、第１の実施形態は、容器と液体サイクロンとを含む、微小球を処理するためのシステムに関する。容器は、ポリマーおよび活性剤を含む凝固した微小球の懸濁液を収容する。液体サイクロンは、流体入口と、第１の流体出口と、第２の流体出口とを有する。流体入口は、容器に流体連絡しており、懸濁液を受容する。第２の流体出口は、濃縮された微小球を有する懸濁液の流れを含有する。第１の流体出口は、第２の流体出口からの流れと比べて相対的に大量の液体の流れを含有する。

第１の実施形態の特定の特徴を参照すると、システムは、加圧下で容器から流体入口に懸濁液をポンプ送出するために、容器と液体サイクロンとの間に配置されたポンプを含むことができる。システムは、エマルジョンが形成されるように、ポリマー、溶媒、および活性剤を合わせるミキサを含むことができる。ミキサは容器に流体連絡し、エマルジョンが容器内で凝固して、容器内に懸濁液を形成する。あるいはシステムは、懸濁液が形成されるように、ポリマー、溶媒、および活性剤を合わせる別のミキサを含むことができる。ミキサは容器に流体連絡している。本開示の第２の実施形態は、ポリマーおよび活性剤を含有してなる微小球を濃縮するためのシステムを特徴とする。システムは、ミキサと液体サイクロンとを含む。微小球懸濁液は、分散相と連続相とをミキサ内で混合することにより生成することができる。分散相は、溶媒、ポリマー、および活性剤を含む。ミキサは、微小球の懸濁液が作製されるように分散相および連続相を混合する、混合要素を含む。液体サイクロンは、流体入口と、第１の流体出口と、第２の流体出口とを有する。流体入口はミキサに流体連絡しており、懸濁液を受容する。第２の流体出口は、濃縮された微小球を有する懸濁液の流れを含有し、第１の流体出口は、第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の液体の流れを含有する。ミキサにより生成された微小球は液体サイクロンによって直接処理できるが、制御の目的で、中間容器がミキサからの懸濁液を受容し、そこから送出ポンプによって懸濁液を液体サイクロンに送出するという２ステップで行うことができる。

次に、第２の実施形態のより具体的な態様について取り組む。システムは：懸濁液を収容し撹拌するための容器と；ミキサから容器に至る第１の管材と；水または懸濁媒体の供給源と；供給源から容器に至る第２の管材と；水または懸濁媒体を、供給源から第２の管材に沿って容器内に移動させるためのポンプと；容器から流体入口に至る第３の管材と；容器から流体入口に懸濁液をポンプ送出するためのポンプとを含む。

第１の流体出口からの流れは、第２の流体出口からの流れに比べ、液体として、相対的に大量の連続相、水、または懸濁媒体を含有することができる。

第１の流体出口からの流れは、第２の流体出口からの流れに比べ、相対的に大量の微細な微小球を含有することができる。

システムは、流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）を含むこともできる。ＨＣ−２の第２の流体出口は、濃縮された微小球を有する懸濁液の流れを含有し、ＨＣ−２の第１の流体出口は、ＨＣ−２の第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の液体の流れを含有する。液体サイクロン（ＨＣ−１）の第１の流体出口は第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）の流体入口に流体連絡しており、ＨＣ−１の第２の流体出口およびＨＣ−２の第２の流体出口からの濃縮懸濁液が合わせられる。

第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）の第１の流体出口からの流れは、ＨＣ−２の第２の流体出口からの流れに比べ、相対的に大量の連続相、水、または懸濁媒体を含有することができる。

システムは、第２の液体サイクロンを、液体サイクロンと直列にまたは並列に含むことができる。

システムはさらに、残留溶媒がより少なくかつＣＰ中の界面活性剤および非包封薬物などの望ましくない構成成分を含まない、洗浄された微小球を実現するために、ＨＣ−１の第２の流体出口およびＨＣ−２の第２の流体出口からの、合わせられた濃縮懸濁液を受容する、溶媒除去容器（ＳＲＶ）を含むことができる。

システムは：中空糸フィルタ（ＨＦＦ）入口、第１のＨＦＦ出口、および第２のＨＦＦ出口を含むＨＦＦと；溶媒除去容器（ＳＲＶ）とＨＦＦ入口との間の第４の管材と；溶媒除去懸濁液をＳＲＶから第４の管材に沿ってＨＦＦ入口に移動させるためのポンプと、第２のＨＦＦ出口からＳＲＶに延びる第５の管材とを含むことができる。透過液は第１のＨＦＦ出口から除去され、濾過された懸濁液は、第２のＨＦＦ出口から第５の管材に沿ってＳＲＶに移送される。

システムは、水または懸濁媒体の第２の供給源と、第２の供給源から溶媒除去容器（ＳＲＶ）に至る第６の管材と、水または懸濁媒体を第２の供給源から第６の管材に沿ってＳＲＶ内にポンプ送出するためのポンプとを含むことができる。

システムは、１つまたは複数の液体サイクロンの第２の流体出口から移送される微小球懸濁液を受容する、中空糸フィルタを含むことができる。

システムは：懸濁液入口、液体出口、および微小球出口を有する湿潤篩と；水または懸濁媒体の供給源と；供給源から篩に至る管材と；水または懸濁媒体を供給源から管材に沿って篩内に移動させるためのポンプとを含むことができる。篩の懸濁液入口は、１つまたは複数の液体サイクロンの第２の流体出口から、濃縮懸濁液を受容する。

本開示の第３の実施形態は、微小球を処理するための方法を特徴とする。ポリマーおよび活性剤を含む、凝固した微小球の懸濁液を、容器内で循環させる。懸濁液を容器から液体サイクロンの流体入口に移動させるが、この液体サイクロンは第１の流体出口および第２の流体出口をさらに含んでいる。濃縮した微小球を有する懸濁液の流れを第２の流体出口から除去する。第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の液体の流れを、第１の流体出口から除去する。

第３の実施形態の特定の態様を参照すると、容器と液体サイクロンとの間にポンプが配置される。ポンプは、懸濁液を加圧下で容器から流体入口にポンプ送出するのに使用する。ミキサは、容器に流体連絡することができる。ポリマー、溶媒、および活性剤をミキサ内で合わせて、エマルジョンを形成することができる。エマルジョンを容器内で凝固させて、容器内で懸濁液を形成することができる。あるいは、別のミキサを容器に流体連絡することができる。ポリマー、溶媒、および活性剤をミキサ内で合わせて懸濁液を形成し、この懸濁液を、ミキサから容器に向けることができる。エマルジョンまたは懸濁液は、ポリマー、溶媒、および活性剤を含む分散相と連続相とを混合することによって、形成することができる。連続相は、水性であっても水性でなくてもよい。

本開示の第４の実施形態は、ポリマーおよび活性剤を含有してなる微小球を濃縮するための方法であって：分散相および連続相をミキサに送り込むステップであって、分散相が、溶媒、ポリマー、および活性剤を含むステップと；分散相および連続相をミキサ内で混合して、微小球の懸濁液を作製するステップと；懸濁液を、ミキサから液体サイクロンの流体入口に移動させるステップであって、液体サイクロンが、第１の流体出口および第２の流体出口をさらに含むステップと；第２の流体出口から、濃縮した微小球を有する懸濁液の流れを除去するステップと；第１の流体出口から、第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の液体の流れを除去するステップとを含む方法を特徴とする。

次に、第４の実施形態の特定の態様について記述する。方法は：懸濁液をミキサから容器に移動させて、この懸濁液を容器内で撹拌するステップと；水または懸濁媒体を容器に添加するステップと；懸濁液を容器から流体入口に移動させるステップとを含むことができる。

方法は、第１の流体出口からの流れから、相対的に大量の連続相、水、または懸濁媒体を除去するステップを含むことができる。

方法は、第１の流体出口からの流れから、第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の微細な微小球を除去するステップを含むことができる。

方法は、流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）を設けるステップを含むことができ：懸濁液を、液体サイクロン（ＨＣ−１）の第１の流体出口からＨＣ−２の流体入口に移動させるステップと；ＨＣ−２の第２の流体出口から、濃縮された微小球を有する懸濁液の流れを除去するステップと；ＨＣ−２の第１の流体出口から、ＨＣ−２の第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の液体の流れを除去するステップと；ＨＣ−１の第２の流体出口およびＨＣ−２の第２の流体出口からの、濃縮懸濁液を合わせて、合わせられた懸濁液を形成するステップとを含む。

方法は、ＨＣ−２の第１の流体出口からの流れから、ＨＣ−２の第２の流体出口からの流れに比べて相対的に大量の微細な微小球を除去するステップを含むことができる。

方法は、微小球懸濁液を、液体サイクロンから、液体サイクロンと直列状態にある、または並列状態にある第２の液体サイクロンに通すステップ含むことができる。

方法は、微小球懸濁液の流れを、液体サイクロンの第２の流体出口から中空糸フィルタに通すステップを含むことができる。

方法は、溶媒除去容器（ＳＲＶ）を設けるステップと；合わせた懸濁液をＳＲＶ内に移動させるステップと；溶媒を、ＳＲＶ内の合わせた懸濁液から除去して、溶媒除去懸濁液を形成するステップとを含むことができる。

方法は、水または懸濁媒体を溶液除去容器（ＳＲＶ）内に添加するステップを含むことができる。

方法は：中空糸フィルタ（ＨＦＦ）を設けて、ＳＲＶ内の合わせた懸濁液から溶媒を除去するステップであって、ＨＦＦが、ＨＦＦ入口、第１のＨＦＦ出口、および第２のＨＦＦ出口を含むステップと；溶媒除去懸濁液を、溶媒除去容器（ＳＲＶ）からＨＦＦ入口に移動させるステップと；水または懸濁媒体を第１のＨＦＦ出口から除去して、濾過された懸濁液を形成するステップと、濾過された懸濁液を、第２のＨＦＦ出口からＳＲＶに移動させるステップとを含むことができる。

方法は：懸濁液入口、液体出口、および微小球出口を含む湿潤篩を設けるステップと；水または懸濁媒体を篩に添加するステップとを含むことができる。篩の懸濁液入口は、濃縮懸濁液を受容する。微小球は、篩の微小球出口から除去され、液体は、液体出口から除去される。

本発明の多くの追加の特徴、利点、およびより完全な理解は、添付図面および以下に続く詳細な説明からわかるであろう。上記発明の概要は、広範な意味での記述を提供するが、以下に続く発明を実施するための形態は、より狭い範囲の記述を提供し、特許請求の範囲で定義される広範な発明の必要な限定として解釈すべきではない実施形態を提示する点が理解されるべきである。

図１Ａは、液体サイクロンの斜視図であり；図１Ｂは、液体サイクロンの側面図であり；図１Ｃは、図１Ｂの液体サイクロンの縦断面図であり；図１Ｄは、図１Ｂの１Ｄ−１Ｄに沿って見た、液体サイクロンの上面図である。連続相（ＣＰ）を除去し、微小球を洗浄し、懸濁媒体中で配合して最終的な剤形を調製するために、液体サイクロンを用いた、徐放性微小球の改善された医薬生成プロセスに関するフローダイヤグラムである。ＣＰを除去し、微小球を洗浄し、懸濁媒体中で配合して最終的な剤形を調製するために、中空糸フィルタと共に使用中の液体サイクロンによる、徐放性微小球の改善された医薬生成プロセスの、プロセスフローダイヤグラムである。ＣＰを除去し、微小球を洗浄し、乾燥して徐放性微小球を得るために、全量濾過と共に使用中の液体サイクロンを用いた、改善された医薬生成プロセスのフローダイヤグラムである。乾燥は、典型的には空気または窒素流を吹き込むことによって実施される。図５Ａは、液体サイクロン１（ＨＣ−１）のアンダーフロー画分に関する粒度分布曲線であり、これを、図５Ｂにおいて、液体サイクロンを使用してドキシサイクリン微小球を処理する間の液体サイクロン３（ＨＣ−３）のオーバーフロー画分に関する粒度分布曲線と比較する。１０ｍｇ薬物／Ｋｇラットの用量の、中空糸フィルタ（ＨＦＦ）のみにより処理されたドキシサイクリン微小球を注射する間の、ラット血液中のドキシサイクリンのレベルを示す図である。生理学的条件下（ＰＢＳ、３７℃）で行われた、液体サイクロンおよび中空糸フィルタ（ＨＣ−ＨＦＦ）対中空糸フィルタ（ＨＦＦ）のみにより処理されたドキシサイクリン微小球の、ｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出の比較を示す図である。

図１を参照すると、液体サイクロン１０は、固定入口１６を含む上部１４と、固定オーバーフロー出口１８と、固定アンダーフロー出口２０とを有する、本体１２を含む。液体サイクロンは、液体サイクロンの内部２２が中空になるように、管状である。液体サイクロンは、液体サイクロンの内壁２４によって取り囲まれたセンター空間２３を有する。液体サイクロンは、液体サイクロンの中間部分全体を通して外壁が同じ直径にある、真っ直ぐなセクション２６を有するシリンダの形をとる。上部は、内部からオーバーフロー出口１８に延びる真っ直ぐなセクション部分または渦ファインダ２８を含む。液体サイクロンの内部は、液体サイクロンの中間部分３２の真っ直ぐなセクションから、液体サイクロンの底部３４付近の縮小した直径まで傾斜する、角度付きボア３０も含む。角度付きボアの内面は、アンダーフロー出口の液体サイクロンの外側に至る。渦３６は、加圧下で（即ち、１０ｐｓｉなどの正圧下であり、動作のための実際の圧力は最適化される。）、入口１６を介して、外側からの材料の流れを受容する。角度付きボア３０に対する材料の放出により、材料の流れが液体サイクロンの上部１４と底部３４との２つの異なる経路に分離する。より重いまたはより大きい粒子は、内部の主要な渦３６に沿って下向きにかつ外向きに移送され、アンダーフロー出口２０を経て外に出る。少量のより軽いまたはより微細な粒子は、主要な渦の中心３８に沿って上向きに移送され、オーバーフロー出口１８を経てその上部付近の液体サイクロンの内部から出て行く。液体サイクロン中の大部分の流体は、オーバーフロー出口を経て外に出る。この流体は、水、連続相、もしくは希釈剤、またはこれらの組合せを含んでいてもよい。

図２は、液体サイクロンを使用して微小球懸濁液を処理するための改善された方法の、プロセスフローダイヤグラムを示す。微小球懸濁液は、溶媒および非包封薬物と共に連続相（ＣＰ）を除去し、微小球を水で洗浄し、さらに洗浄された微小球を適切な製剤溶液で懸濁させることによって、処理される。フローチャートでは、５０は連続相（ＣＰ）供給源であり、５２は分散相（ＤＰ）供給源である。ミキサ５４は、ＤＰおよびＣＰから微小球懸濁液５６を生成する。管材５８、６０によって、ＣＰおよびＤＰは、ＣＰおよびＤＰの供給源からミキサに流入することが可能になる。ミキサへの管材進入場所、および本開示のシステムのその他のデバイスに対する場所は、単に概略的なものであり、実用上は異ならせることができることを理解すべきである。ミキサからの微小球懸濁液５６は、溶媒除去容器６２（ＳＲＶ）に進入する。管材６４によって、微小球懸濁液５６は、ミキサ５４から溶媒除去容器６２に移送される。ＣＰおよびＤＰの送出では、適切な送出ポンプまたはデバイス（図示せず。）が使用される。

容器内の懸濁液は、ポンプ６８によって液体サイクロン６９に送出される。ポンプ６８は、溶媒除去容器６２から液体サイクロン６９の入口１６への管材７０に沿って位置付けられる。懸濁液からのＣＰ除去およびシステムからの小粒子の除去の程度にも応じて、複数の液体サイクロンを使用してもよい。フローチャートは、直列状態にある２つの液体サイクロンの使用について記述する。アンダーフロー出口２０からのアンダーフロー７２は、微小球の濃縮懸濁液であり、オーバーフロー出口１８からのオーバーフロー７４は主に、少量のより小さい微小球を有する連続相ＣＰである。管材７６は、第１の液体サイクロン６９のオーバーフロー出口１８から第２の液体サイクロン７８の入口１６まで延びる。オーバーフロー７４は、管材７６に沿って、第２の液体サイクロン７８（「ＨＣ−ＩＩ」）の入口ポート１６内にさらに送出される。この送出で、追加のポンプは必ずしも必要ではない。必要なら、プロセス制御およびモニタリングの目的で、流れをモニタするために、入口ポートに圧力ゲージを導入してもよい。第２の液体サイクロン７８（ＨＣ−ＩＩ）からは、濃縮懸濁液がアンダーフロー８０としてアンダーフロー出口２０から流れることになり、オーバーフロー８２は、廃棄流としてオーバーフロー出口１８を経て外に出ることになる。追加の液体サイクロンは、加工助剤用に、直列にまたは並列に使用することができる。

管材８４は、液体サイクロン６９および７８のアンダーフロー出口２０から、溶媒除去容器６２内に延びる。アンダーフロー７２および８０は、合わせられた濃縮懸濁液であり、管材８４に沿って移送されて、元の溶媒除去容器６２（ＳＲＶ）に到達する。ポンプ８５は、管材８６に沿って、洗浄水リザーバ８７から溶媒除去容器６２に延びる。洗浄水リザーバ８７からの洗浄水は、ポンプ８５を使用して、管材８６に沿ってＳＲＶ６２内にポンプ送出することができる。いくつかのプロセスでは、微小球形成ステップ中に、水も、微小球懸濁液と同時に添加する。Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサからの入口は、ＨＣで処理された微小球の濃度を増大させかつ連続相を減少させることができるように、閉じることができる。この操作は、液体サイクロンが過剰なＣＰおよびより小さい微小球を除去するために使用される状況が目的であり、この微小球は水で洗浄され、次いで希釈剤の交換が行われる。最後に、タンク６２内の希釈剤に微小球を懸濁させた懸濁液は、バイアルに充填して凍結乾燥できる状態にあり、またはバルク状凍結乾燥ができる状態にあり、出口６３を介して外に出ることができる。

体積がＳＲＶ６２内で増大しないように、限定空間で全操作を行うための、ある流量要件がある。一般に、管材６４に沿った微小球懸濁液と、管材８６に沿った洗浄水とを合わせた流量は、オーバーフロー８２の流量に類似すべきである。上述の流量が望ましいが、ＳＲＶ６２の容量が十分大きくかつ増加する体積に対応可能な場合には、必ずしもそうである必要はない。微小球洗浄ステップ中、６４内にはいかなる流れも無い。この点で、８６内の流量は８２に等しくあるべきである。

水で微小球を洗浄した後、適切な希釈剤（懸濁媒体）を、水の代わりに導入することができる。８８は希釈剤リザーバであり、９０は希釈剤投入ポンプである。希釈剤ポンプ９０は、管材９２に沿って、希釈剤リザーバ８８から溶媒除去容器６２まで延びる。希釈剤は、ポンプ９０を使用して、希釈剤リザーバ８８から管材９２に沿ってＳＲＶ６２までポンプ送出される。この操作を行うことによって、微小球を適切な懸濁媒体に懸濁させることになる。この場合も、９２内の流量は、一定の体積がＳＲＶ内で維持されるように８２に一致させるべきである。微小球の濃度は、管材６４に沿った流れを経てＳＲＶに投入することなく液体サイクロンの動作を継続させることによって増加させることができ、または、管材９２に沿った流れに希釈剤を添加しながら、液体サイクロン処理を行わない（即ち、ポンプ６８を使用してポンプ送出しない）ことにより、減少させることができる。このプロセスは、適切な薬物効力を有する最終的な製剤を実現させることになる。懸濁液を、さらにバイアルに充填し、凍結乾燥することができる。懸濁液は、バルク粉末として生成物が実現されるように、直接凍結乾燥することもできる。充填は、産業界により採用された標準的な手順によって、無菌状態で実施される。充填機は自動化され；バイアルは、ＨＥＰＡ濾過空気の層流に対して開放されることになり、手順は、媒体充填により適切なものになる。

本開示の希釈剤構成成分は、粘度増強剤、リオ保護剤としての小分子溶質、および界面活性剤を含んでいてもよい。粘度増強剤は、粒子が懸濁するのを助け、かつ混合されない場合には粒子の沈降を遅くする、水溶性ポリマーである。

適切な粘度増強ポリマーは、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ナトリウムカルボキシメチルセルロース（ＳＣＭＣ）、エチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレート、ヒドロキシメチルセルロースアセテートスクシネート、マレイン酸無水物コポリマー、ヒアルロン酸、ゼラチン、高分子量ポリエチレングリコール、およびこれらの組合せである。一実施形態では、カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）を、希釈製剤の一部として、粘度ブースタとして使用してもよい。

リオ保護剤は、小分子溶質であり、例えばマンニトール、ソルビトール、スクロース、ラクトース、ガラクトース、マルトース、トレハロース、デキストロース、フルクトース、その他の糖誘導体、シクロデキストリン、およびこれらの混合物である。デンプン、デキストラン、寒天、キサンタン、およびこれらの混合物などの多糖を使用してもよい。ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸、およびこれらの混合物などの安定化剤を使用してもよい。凍結保護剤は、溶液の張性を調整するのに使用してもよい。第１の実施形態では、マンニトールをリオ保護剤として使用する。リオ保護剤は、注射可能になるように懸濁液の等張性を保護するのに役立つこともある。

界面活性剤は、生体適合性界面活性剤の群から選択された湿潤剤である。Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ８０は、一実施形態で使用することができる。その他の適切な界面活性剤には、コール酸ナトリウム、タウロコール酸ナトリウム、タウロデオキシコール酸ナトリウム、レシチン、リン脂質、ポロキサマー、ソルビタンエステル、脂肪酸とポリオキシアルキレングリコールとのエステル、グリセロール−ポリアルキレンステアレート、ポリアルキレングリコールのホモ−およびコポリマー、ＰｌｕｒｏｎｉｃＦ６８、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｓｐａｎ２０、Ｓｐａｎ４０、Ｓｐａｎ６０、Ｓｐａｎ８０、ＨＣＯ−５０、ＨＣＯ−６０乳化剤であって例えばゼラチンなど、低分子量アルコールであって例えばプロピレングリコールなど、および低分子量脂肪酸が含まれる。

希釈剤は、製剤で使用するために滅菌濾過することができる。組成物は懸濁液として処理され、凝集体を実質的に含まない。懸濁した微小球は、容易に凍結乾燥され、添加される薬剤に適合性がある。組成物は、低い含水量を有し、長時間にわたる保存に対してより大きな安定性をもたらすこともわかっている。

図３は、微小球懸濁液が中間容器（ＩＭＶ）に受容され、連続相（ＣＰ）を除去することによって微小球を濃縮するために液体サイクロンによって処理され、その後、懸濁液は、溶媒除去容器（ＳＲＶ）内に中空糸フィルタ（ＨＦＦ）によって処理される、プロセスフローダイヤグラムを示す。図３では、１００が連続相（ＣＰ）の供給源であり、１０２が分散相（ＤＰ）の供給源である。ミキサ１０４は、ＤＰおよびＣＰを混合することによって、微小球懸濁液１０６を生成する。適切なミキサは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，９４５，１２６号に開示されている。管材１０８は、連続相の供給源１００からミキサ１０４内まで延び、管材１１０は、分散相の供給源１０２からミキサ内まで延びる。管材１１２は、ミキサから中間容器（ＩＭＶ）１１４に延びる。ミキサからの微小球懸濁液は、管材１１２に沿って移送され、中間容器（ＩＭＶ）１１４に進入する。Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎミキサから出て来た懸濁液は、ミキサから出て来た懸濁液が十分な正圧を有する場合に限り、液体サイクロンに直接通すことが可能と考えられる。代わりに、中間容器で受容し、ポンプ１１６を使用して圧力を制御することが、より容易である。これは、良好な柔軟性をもたらすことになる。ＣＰおよびＤＰの送出では、適切な送出ポンプまたはデバイスを使用してもよい（図示せず。）。

中間容器（ＩＭＶ）内の微小球懸濁液は、ポンプ１１６によって第１の液体サイクロン（ＨＣ−１）１２０の入口に送出される。ポンプ１１６は、中間容器から第１の液体サイクロン１２０の入口１６まで延びる管材１１８に沿って位置付けられる。懸濁液からのＣＰ除去およびシステムからの小粒子の除去の程度に応じて、複数の液体サイクロンを使用することができる。フローチャートは、２つの直列に並んだ液体サイクロンの使用について記述する。しかしプロセスは、２つの液体サイクロンに限定されない。第１の液体サイクロン１２０のアンダーフロー出口２０からのアンダーフロー１２２は、微小球の濃縮懸濁液であり、第１の液体サイクロンのオーバーフロー出口１８からのオーバーフロー１２４は、主に、少量のより小さい微小球を有する相対的に大量のＣＰである。管材１２６は、第１の液体サイクロン１２０のオーバーフロー出口１８から、第２の液体サイクロン１２８の入口１６まで延びる。オーバーフロー１２４は、管材１２６に沿って、第２の液体サイクロン１２８（ＨＣ−２）の入口１６内にさらに送出される。この送出では、追加のポンプを必ずしも必要としない。必要なら、プロセス制御およびモニタリングの目的で、流れがモニタされるように、圧力ゲージを入口に導入することができる。第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）１２８から、濃縮懸濁液を、アンダーフロー出口２０からのアンダーフロー１３０として流すことになり、オーバーフロー１３２は、廃棄流としてオーバーフロー出口１８から出る。

管材１３４は、第１および第２の液体サイクロン１２０、１２８のアンダーフロー出口２０から、溶媒除去容器（ＳＲＶ）１３６に延びる。液体サイクロンＨＣ−１１２０およびＨＣ−２１２８からのアンダーフロー１２２、１３０（濃縮懸濁液）を合わせ、管材１３４に沿ってＳＲＶ１３６に移送する。ＳＲＶから、ポンプ１３８を使用して、中空糸フィルタ（ＨＦＦ）１４０内で懸濁液を再循環させる。中空糸フィルタは、入口ポート１４４、透過液除去ポート１４６、および出口ポート１４８を有する本体１４２を含む。ポンプ１３８は、溶媒除去容器ＳＲＶから中空糸フィルタＨＦＦの入口１４４に延びる管材１５０に沿って配置される。懸濁液はＨＦＦループ内を再循環するが、透過液は、ポート１４６を経て除去される。ポンプ１５２は、透過液を除去するのに使用することができる。透過液の除去速度は、ＳＲＶの容積レベルを維持するために、液体サイクロンからのアンダーフローに一致させることができる。ＳＲＶ容積が十分である場合には、流れに一致させることは必ずしも必要ではない。管材１５３は、中空糸フィルタの出口１４８からＳＲＶ１３６に延びる。除去された透過液（例えば、連続相、水、または希釈剤）を有する微小球懸濁液は、中空糸フィルタから管材１５３に沿ってＳＲＶに移送される。

管材１５６は、洗浄水供給源１５４から中間容器１１４に延び、管材１５８は、洗浄水供給源１５４から溶媒除去容器１３６に延びる。ポンプ１５９は管材１５６、１５８に沿って延びる。微小球形成ステップが終了した後、ＳＲＶ１３６内の微小球を、水供給源１５４から管材１５８に沿ってＳＲＶ内に移送される水で洗浄する。水は、微小球形成中に即座になされる水の希釈をプロセスが必要とする場合も、ＩＭＶ１１４内の微小球懸濁液に添加することができる。水は、水供給源１５４から管材１５６に沿って中間容器１１４に移送するされることになる。ポンプ１６２は、希釈剤貯蔵容器１６０から溶媒除去容器１３６に延びる管材１６４に沿って位置付けられる。微小球は、ＳＲＶ１３６から出口１３７を介してバルクとして回収し、乾燥することができ、または微小球は、希釈剤貯蔵容器１６０から管材１６４に沿ってポンプ送出された適切な配合剤（希釈剤）に懸濁させることができる。希釈剤への微小球の懸濁は、ＳＲＶそのものの中で行ってもよく、または別のＨＦＦを使用する別の容器の中で行ってもよい。ＳＲＶから出口１３７を介して除去された水または希釈剤に懸濁させた微小球懸濁液を、バイアルに充填し、標準的な技法により凍結乾燥することができる。

図４は、微小球を処理するのに中空糸フィルタ（ＨＦＦ）の代わりに湿潤篩装置１８０を使用し、かつＳＲＶを含まないこと以外、図３に類似したプロセスである。本開示のいくつかの図全体を通して、同様の部品には同様の符号を付す。第１および第２の液体サイクロン１２０、１２８のアンダーフロー出口２０からの管材１３４は、湿潤篩１８０に至る。第１および第２の液体サイクロン１２０、１２８からのアンダーフロー流１２２、１３０を合わせ、管材１３４に沿って湿潤篩に移送する。供給源１５４からの洗浄水は、ポンプ１５９により篩ユニットにポンプ送出することができ、水は、ポート１８２を経て排水されることになる。微小球は、１８４を通してスラリーとして分散させることができる。また、篩ユニット内の微小球は、適切な温度で乾燥空気または不活性ガスを流すことにより、篩そのものの中で乾燥することができ、乾燥した微小球は、ポート１８４を通してバルク粉末として収集することができる。ＳＷＥＣＯ篩ユニットは、乾燥粒子（またはスラリー）を効率的に排出させるパラメータ（独自の振動パターン）の下で動作する。

徐放性微小球を形成するための液体サイクロンの評価
液体サイクロンの動作の効率は、アンダーフローを経た微小球の濃度係数および収率によって決定することができる。濃度係数は、供給材懸濁液に対するアンダーフロー内の粒子濃度の比である。より高い濃度係数は、連続相からの粒子の効果的な分離を意味する。懸濁液の、より高い入口流は、液体サイクロン内に、より高い入口圧力をもたらすことになる。より高い入口圧力は、より高い濃度係数を提供する。微小球の製造では、粒子のより高い濃度係数が適切である。アンダーフローとオーバーフローとの流量比は、効率的な分離と共に考慮すべき因子である。アンダーフローが低い場合、相対的に大量の水を、オーバーフローを通してシステムから素早く除去できるので、プロセスに有益である。しかし、オーバーフロー内の粒子の画分を失う可能性がある。適切な液体サイクロンのタイプと、その製造されたアペックスおよび入口流は、システムからの水の効率的な除去と共に、粒子の良好な収率のために選択されるべきである。アンダーフローを経た微小球の収率も、特に費用のかかる医薬製剤の処理の間は考慮すべきである。収率は、入口を経た量に対する、アンダーフロー出口を経て得られた微小球の量の比である。微小球の量は、微小球の濃度と懸濁液の流量との組合せである。必要なら、多数の直列の液体サイクロンを使用して、収率を改善しかつ所望の収率を実現することができる。

より小さい粒子の除去は、オーバーフローを経て引き起こされる。除去される小粒子の粒度範囲は、液体サイクロンのタイプと、その製造されたアペックスおよび流量に基づく。

実施例１
液体サイクロンを使用した微小球懸濁液の処理：入口流量、アペックスＩＤ，および粒子濃度が濃度係数および粒度に及ぼす影響
微小球懸濁液を、米国特許第５，９４５，１２６号の通りに、インラインＳｉｌｖｅｒｓｏｎミキサを使用した水中油プロセスによって、ジクロロメタンに溶かしたポリラクチド−ｃｏ−グリコリド溶液から調製した。ポリビニルアルコール溶液（０．３５％）を連続相として使用した。Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ混合速度は７０００ｒｐｍであった。微粒子を洗浄して残留溶媒を除去し、粒子を最後に水に懸濁した。懸濁液中の微小球の濃度は４９ｍｇ／ｇであった。引き続き、表１に示されるようなより低い濃度を有する懸濁液も、それを水でさらに希釈することにより調製した。懸濁液を、研究中に２０ＬＡｐｐｌｉｋｏｎ容器（中間容器、ＩＭＶ）内で維持し、均質性が維持されるように撹拌し続けた。ＩＭＶからの懸濁液サンプルを、液体サイクロン処理の前に、濃度および粒度の分析のために採取した。

懸濁液を、蠕動ポンプを使用して、表１に示される流量で液体サイクロンの入口ポート内にポンプ送出した。ＫｒｅｂｓＥｎｇｉｎｅｅｒｓから受け取ったＡｐｅｘ１１８を有する液体サイクロンタイプＧＭＡＸ１Ｕ−３１２５を使用した。２０ＬＡｐｐｌｉｋｏｎ（ＩＭＶ）からの懸濁液を、液体サイクロン入口にポンプ送出し、サンプルを２つの出口；アンダーフロー保持流を生成した底部出口、およびオーバーフローである上部出口から得た。これらの実験では、アンダーフローはオーバーフローの約２０％であり、しかしこれは条件に基づいて僅かに変化した。

表１は、結果を示す。流量が増加するにつれ、保持液（アンダーフロー）中の微小球の濃度が増加した。１０Ｌ／分の入口流量で４９ｍｇ／ｇの粒子濃度を有する懸濁液の場合、アンダーフロー流中の微小球の濃度は、バルク懸濁液に比べて２．５倍であった。したがって、液体サイクロンを通して２０Ｌの懸濁液を処理することにより、粒子の約５０％を２分間の所要時間で約２Ｌに収集した（体積の２０％）。より高い入口流量は、さらにより高い濃度でアンダーフロー流を生成した。希釈懸濁液を使用する実験は、表１に示されるように、さらにより高い濃度係数を示した。さらに粒度分布（体積分布）は、より小さい粒子がオーバーフロー流を通して除去されたので、アンダーフロー流は、より小さい粒子を少量含有することを示した。１０％体積分布での粒度は、最大１００％の増加を示した。したがって粒度は、システムから、より小さい粒子がかなり削減されたことを示した。

実施例２
液体サイクロンのアペックスＩＤが微小球の濃度係数および粒度に及ぼす影響を、Ｋｒｅｂｓ製の３つの異なるアペックスＩＤＡ（０．１１８）、Ｂ（０．１５７）、およびＣ（０．１９７）を使用する液体サイクロンモデルＧＭＡＸ１Ｕ−３１２５（Ｋｒｅｂｓ製）を使用して評価した。研究は、２つの異なる流量、８．７Ｌ／分および１２．６Ｌ／分で、１５ｍｇ／ｇ粒子濃度を有する微小球懸濁液を使用して行った。液体サイクロンのアペックスをＡからＣに変更した場合、濃度係数は、８．７Ｌ／分の流量で４．０から５．０に増大し、１２．６Ｌ／分の流量で４．９から６．７に増大した。さらにアペックスＣは、かなりの量の小粒子を除去した。バルク懸濁液（供給材）では、粒子の１０％が２．７６ミクロンよりも下であった。液体サイクロンを通して処理した後、アンダーフローは、その粒度について、粒子の１０％が１３ミクロンよりも下であることを示した。適切なアペックスおよび入口流量を選択することにより、より小さい粒子を生成物から様々な程度にまで排除することができた。

実施例３
中空糸フィルタおよび液体サイクロンによって処理されたドキシサイクリン微小球
ドキシサイクリンは、効力のため血液中で持続する薬物レベルを必要とする抗生剤である。２週間放出させるためのドキシサイクリン微小球を、中空糸フィルタ（ＨＦＦ）プロセスを使用して微小球を処理することにより調製した。ＨＦＦプロセスを使用して、インラインＳｉｌｖｅｒｓｏｎにより生成された懸濁液は、約５０Ｌであり、３０Ｌの水を排除するのに約５０分を要した。液体サイクロンを使用すると、３０Ｌの水を排除するのに４分しかかからなかった。また、中空糸フィルタを通して処理した微小球は、より小さい粒子を含有していた。この生成物の場合、ｉｎ−ｖｉｔｒｏおよびｉｎ−ｖｉｖｏ（ラットモデル）で行われた薬物放出動態は、初期バーストを示した。液体サイクロンを通して処理された微小球は、小粒子を実質的に含まず、低薬物含有小粒子が排除されたことがわかった。得られた微小球は、かなり低い初期バーストおよびより高い薬物負荷を示した。以下の手順は詳細を提供する。

微小球の調製：ドキシサイクリン含有ポリ（ｄ，ｌ−ラクチド−ｃｏ−グリコリド）（ＰＬＧＡ）微小球を、Ｈｏｖｉｏｎｅ製ドキシサイクリンヒクレートおよびＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍ製ＰＬＧＡ（ＲＧ５０３Ｈ）を使用して、水中油プロセスにより調製した。分散相（有機相）は、２０ｇのドキシサイクリンヒクレート、８０ｇのＲＧ５０３Ｈ（ＰＬＧＡ）、２４０ｇの塩化メチレン、および６０ｇのメタノールを溶解することによって調製した。次いで溶液を、０．２ミクロンのＰＴＦＥ（Ｓａｒｔｏｒｉｏｕｓ製Ｓａｔａｆｌｕｏｒ１５０）フィルタを使用して濾過した。連続相（水相）は、３００ｇの低分子量ＰＶＡを温水（７０から９０℃）に溶解することによって調製された、０．５％ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）水溶液であった。次いで溶液を周囲温度に冷却し、水を添加して、全体積が６０Ｌに達するようにした。連続相も、０．２ミクロンＰＶＤＦ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ製ＯｐｔｉｃａｐＸＬ１０）に通して濾過した。ドキシサイクリン微小球は、米国特許第５，９４５，１２６号に記載されているように、インラインミキサを使用して、ＣＰ流量４Ｌ／分およびＤＰ流量３０ｍＬ／分で調製した。Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎ撹拌速度は５０００ｒｐｍであった。約４Ｌ／分の速度で生成された微小球懸濁液を、１００Ｌタンクに収集し、中間容器（ＩＭＶ）内の懸濁液を、懸濁液を均質にするために撹拌した。

中空糸フィルタによる懸濁液の濃縮：懸濁液、水、および希釈剤用の入口管と、タイプ５Ａ中空糸フィルタ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ製ＨＦＦ）内を通る再循環ラインも備えたＳＲＶ（Ａｐｐｌｉｋｏｎ製３Ｌバイオリアクタ）を、懸濁液の処理に使用した。懸濁液を、中間容器ＩＭＶから６００ｍＬ／分でポンプ送出した。ＳＲＶ内の懸濁液を、ＨＦＦを通して６Ｌ／分で再循環させ、透過液を６００ｍＬ／分で除去した。したがって３０Ｌの水を除去するのに、約５０分を要した。ＩＭＶ内の全懸濁液を処理するには、約８０分を要した。懸濁液の体積１．５ＬをＳＲＶ内で維持し、全懸濁液を１．５Ｌの体積に凝縮した。

液体サイクロンによる懸濁液の濃縮：３つの液体サイクロン、アペックスＩＤ０．１９７（ＨＣ−１）、０．１９７（ＨＣ−２）、および０．１１８（ＨＣ−３）を有するタイプＧＭＡＸ１Ｕ−３１２５を、直列に接続した。ＩＭＶからの出口を、ＨＣ−１の入口に接続した。ＨＣ−１からのアンダーフローを、事前に計量したガラス容器に収集した。ＨＣ−１からのオーバーフローをＨＣ−２の入口に接続した。ＨＣ−２からのアンダーフローも、事前に計量したガラス容器に収集した。ＨＣ−２からのオーバーフローを、ＨＣ−３の入口に接続した。ＨＣ−３からのアンダーフローを、事前に計量したガラス容器に収集した。ＨＣ−３からのオーバーフローは廃棄流であり；しかしこれを、粒度および粒子濃度の測定のために収集した。ＩＭＶを含めた個々の容器からのサンプルを、分析目的で取り出した。ＩＭＶからの懸濁液を、蠕動ポンプ（ＷａｔｓｏｎＭａｒｌｏｗ）を使用して、１３Ｌ／分でＨＣ−１の入口にポンプ送出した。アンダーフローおよびオーバーフローを収集した。ＨＣ−１、ＨＣ−２、およびＨＣ−３からのアンダーフローの合計体積は、約１９Ｌであった。これをさらに、蠕動ポンプを使用して溶媒除去容器（ＳＲＶ）に移し、中空糸フィルタを使用して処理することによりＣＰを６００ｍＬ／分で排除し、微小球を１．５Ｌの体積に凝縮した。

微小球の洗浄：微小球を、ＨＦＦまたは液体サイクロン−ＨＦＦの組合せを使用して５０Ｌの体積から１．５Ｌの体積に濃縮した後、微小球を、懸濁液として室温の水で１０分間、３５℃の水で４０分間洗浄し（その温度で２０分、およびランプ時間２０分）、再度室温の水で約３０分間洗浄した。これは、米国特許第６，２７０，８０２号に記載されるように、体積交換によって行った。

回収および凍結乾燥：洗浄した微小球を、全量濾過および凍結乾燥を使用して、ＰＶＤＦ膜上に回収した。凍結乾燥は、微小球を−３５℃に１時間にわたって凍結し、−３５℃で３時間保持し、温度を−３５から−５℃に２時間にわたって上昇させ（≦１５０ｍＴ真空）、−５から＋５℃に６時間にわたって（≦１５０ｍＴ真空）、さらに＋５から＋３０℃に２時間にわたって（≦１５０ｍＴ真空）上昇させ、＋３０℃で８時間保持する（≦１５０ｍＴ真空）ことによって行った。

ＨＦＦプロセス、および液体サイクロンプロセスによって調製された微小球は、薬物含量、粒度分布、および薬物放出に関して特徴付けられる。ＨＦＦプロセスによって調製された微小球は、ラットでのｉｎ−ｖｉｖｏ薬物放出に関して評価した。液体サイクロンプロセスでは、薬物負荷および粒度を、個々の画分に関して、さらに情報の目的でも測定された。さらに、様々な懸濁液中の粒子濃度は、液体サイクロン効率比較を評価するためにも決定された。

表３は、液体サイクロンプロセスの性能を示す。示されるように、ＨＣは、約１３Ｌ／分で懸濁液を処理し、一方でＨＦＦは、６００ｍＬ／分でしか懸濁液を処理できなかった。液体サイクロンは、前述の理由により、ＨＦＦに比べてより短い所要時間で相対的に大量の処理を可能にする。微小球懸濁液は、ＨＣを使用した生成と同じ速度で処理することができ、大きい保持容器を必要としない。したがって、より小さいプロセス機器を使用することができた。例えば、微小球懸濁液の生成速度が１５Ｌ／分である場合、ＨＣは、ＣＰを１５Ｌ／分で容易に除去することができた。機器は非常にコンパクトである（長さ約１ｆｔおよび直径約１インチ）。しかし、ＨＦＦを通して１５Ｌ／分でＣＰを排除するために、この速度で動作する利用可能なＨＦＦは無く、したがって２または３のＨＦＦを並列に配置することが可能であり、ＨＦＦ内での懸濁液の再循環速度は１５０Ｌ／分でなければならない。これは、大きいポンプを必要とする。したがって機器は、大きく扱い難い。

結果は、第１のＨＣのアンダーフロー中のドキシサイクリン微小球の濃度が、入口の場合の約５倍であり、オーバーフローの場合の１４倍であったことを示す。５０Ｌ懸濁液から処理された９６ｇの微小球の中から、微小球６６ｇを、ＨＣ−１アンダーフロー内の７．２Ｌの懸濁液に収集した。したがって、ドキシサイクリン微小球の６９％が体積の１７％に収集され、これらの粒子は、より小さい粒子を実質的に含まない。これは、処理の４分以内で素早く実現された。

第２のＨＣのアンダーフロー中の微小球の濃度は、入口の粒子濃度の２．７倍であり、オーバーフローに比べると３．７倍であった。結果は、８．２ｇ（バルクの９％）がＨＣ−２アンダーフローを通して４．７Ｌの体積に回収されたことを示す。したがって当初のバルク（ＩＭＶ内）の微小球の９％が、９％体積に収集された。ＨＣ−２のアンダーフロー中の微小球の濃度は、ＩＭＶ内の当初の懸濁液の場合に類似している。粒子濃度に正味の増加はないが、この画分は、必要に応じて良好な収率で収集することができた。

ＨＣ−３のアンダーフロー中の微小球の濃度は、オーバーフロー中の粒子の濃度の２．４倍であった。アンダーフロー中の粒子の濃度はさらに低下し、ＩＭＶ中のバルク懸濁液の場合よりも低い。この場合も、粒子の収率が極めて重要な場合には、この画分を生成物に含めることができる。後続のＨＣに進入する粒子の濃度は、ＩＭＶ中の濃度に比べてますます低くなるので、アンダーフロー中の粒子の濃度は、直列に付加されたＨＣと共に低下する。単なる良好な収率の目的で、多数のＨＣがここでは導入される。

粒度は、ＨＣアンダーフローおよびオーバーフローで受容された部分の間の、大きな相違も示した。ＨＣ−１アンダーフローを経て受容された微小球は、少量の小粒子を有しており（図５Ａ）、ＨＣ−３オーバーフローは、より小さい粒子の大部分を含有していた（図５Ｂ）。

ドキシサイクリン微小球の実験では、３つのＨＣ全てからのアンダーフローをＳＲＶに送出し、ＨＦＦを使用してさらに処理した（濃縮し、洗浄した。）。得られる微小球を、薬物負荷、粒度、および薬物放出特性に関して、ＨＦＦフィルタのみで調製された微小球と比較した。ＨＣ−２およびＨＣ−３のアンダーフローは生成物とも合わせられたので、いくつかのより小さい粒子は、ＨＣで処理された微小球中にあったが；しかし、より小さい粒子の量は、ＨＦＦのみで処理された微小球バッチに比べてかなり少ない。微小球中の薬物負荷は、ＨＣ−ＨＦＦで処理された微小球に関して１２．３％であった。ＨＦＦのみで処理された微小球は、９．４％の薬物負荷しか示さなかった。これは主に、低薬物負荷を有する、より小さい粒子の存在に起因していた。ＨＣ−３のオーバーフロー中の粒子は、僅かに４．３％の薬物負荷を有していることがわかった。より低い薬物負荷の微小球は、同様の用量が得られるようにより多くの微小球を注入する必要があるので、好ましくない。

ＨＣ−ＨＦＦで処理された微小球に見出されたさらなる利益は、初期バースト放出の低減であった。ＨＦＦのみで処理された微小球をラットに注射して、ｉｎ−ｖｉｖｏ放出速度を追跡した。６匹のラットに、ＨＦＦで処理された微小球を、１０ｍｇドキシサイクリン／Ｋｇラットの用量で注射した。５匹のラットを試験群として使用した。血液サンプルを、２時間、６時間、１日、３日、６日、１０日、１５日、および２１日に採取し、血液中のドキシサイクリンの濃度を、ＨＰＬＣ−ＭＳによりアッセイした。結果は、ＨＦＦのみで処理された微小球が、膨大な初期バーストを有することを示した（図６）。これらの微小球は、約１０日間の放出持続時間を有するように調製した。低から中程度のバーストは、これらの製剤から望ましい。図６に示される、より高いバーストは、望ましくない。

ＨＦＦのみで処理された微小球およびＨＣ−ＨＦＦで処理された微小球を、生理学的条件下でｉｎ−ｖｉｔｒｏ放出に関して試験した。これは、３７℃の振盪水浴に配置された４０ｍＬスクリュキャップ付き試験管に入れられた、２０ｍＬのリン酸緩衝生理食塩液中の２０ｍｇの微小球で行った。上清全体を、アッセイのために各サンプリング点で、即ち、１時間、５時間、１日、３日、および７日に除去し、新鮮な放出媒体に交換した。上清中の薬物濃度は、較正標準に対してＵＶ分光光度計により、ドキシサイクリンに関してアッセイを行った。各時点で放出された薬物のパーセンテージを、放出媒体で見られたものと比較して、サンプル管に導入された合計薬物から計算した。結果を、時間に対する累積放出のプロットとして図７に示す。ＨＣ−ＨＦＦで処理された微小球は、ＨＦＦのみで処理された微小球に比べ、かなり低い初期バースト（５分の１）を有することがわかった。したがって、低薬物負荷およびより早い放出を有する、より小さい粒子を排除することによって、望ましくない初期バースト放出を、微小球から低減させた。ＨＣ−ＨＦＦで処理された微小球は、ほぼゼロ次放出の定常状態を示し、一方、ＨＦＦのみで処理された微小球は、初期の５日間で、５倍高い初期バーストおよび高い初期放出を示した。

本発明の多くの修正例および変形例が、前述の開示に照らして当業者に明らかにされよう。したがって、添付される特許請求の範囲内で、具体的に示され記述されてきた以外の手法により本発明を実施できることが理解される。

１０液体サイクロン
１２本体
１４上部
１６固定入口
１８固定オーバーフロー出口
２０固定アンダーフロー出口
２２内部
２３センター空間
２４内壁
２６真っ直ぐなセクション
２８渦ファインダ
３０角度付きボア
３２中間部分
３４底部
３６渦
３８中心
５０連続相（ＣＰ）供給源
５２分散相（ＤＰ）供給源
５４ミキサ
５６微小球懸濁液
５８管材
６０管材
６２溶媒除去容器
６３出口
６４管材
６８ポンプ
６９第１の液体サイクロン
７０管材
７２アンダーフロー
７４オーバーフロー
７６管材
７８第２の液体サイクロン
８０アンダーフロー
８２オーバーフロー
８４管材
８５ポンプ
８６管材
８７洗浄水リザーバ
８８希釈剤リザーバ
９０希釈剤投入ポンプ
９２管材
１００連続相の供給源
１０２分散相の供給源
１０４ミキサ
１０６微小球懸濁液
１０８管材
１１０管材
１１２管材
１１４中間容器（ＩＭＶ）
１１６ポンプ
１１８管材
１２０第１の液体サイクロン
１２２アンダーフロー
１２４オーバーフロー
１２６管材
１２８第２の液体サイクロン
１３０アンダーフロー
１３２オーバーフロー
１３４管材
１３６溶媒除去容器
１３７出口
１３８ポンプ
１４０中空糸フィルタ（ＨＦＦ）
１４２本体
１４４入口ポート
１４６透過液除去ポート
１４８出口ポート
１５０管材
１５２ポンプ
１５３管材
１５４洗浄水供給源
１５６管材
１５８管材
１５９ポンプ
１６０希釈剤貯蔵容器
１６２ポンプ
１６４管材
１８０湿潤篩装置
１８２ポート
１８４ポート

例示的な実施形態
１．ポリマーおよび活性剤を含む凝固した微小球の懸濁液が入っている容器と；
流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する液体サイクロンであって、前記流体入口が前記容器に流体連絡して前記懸濁液を受容し、前記第２の流体出口が、濃縮された前記微小球を有する前記懸濁液の流れを含有し、前記第１の流体出口が、前記第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の液体の流れを含有する液体サイクロンと
を含む、微小球を処理するためのシステム。
２．前記懸濁液を、加圧下で前記容器から前記流体入口にポンプ送出するために、前記容器と前記液体サイクロンとの間に配置されたポンプを含む、実施形態１に記載のシステム。
３．前記ポリマー、溶媒、および前記活性剤を合わせてエマルジョンを形成するミキサを含み、前記ミキサが前記容器に流体連絡しており、前記エマルジョンが前記容器内で凝固して前記容器内で前記懸濁液を形成する、実施形態１に記載のシステム。
４．前記ポリマー、溶媒、および前記活性剤を合わせて前記懸濁液を形成するミキサを含み、前記ミキサが前記容器に流体連絡している、実施形態１に記載のシステム。
５．分散相および連続相が送り込まれるミキサであって、前記分散相が、溶媒、ポリマー、および活性剤を含み、前記ミキサが、前記分散相および前記連続相を混合して微小球の懸濁液を作製する混合要素を含むミキサと；
流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する液体サイクロンであって、前記流体入口が前記ミキサに流体連絡して前記懸濁液を受容し、前記第２の流体出口が、濃縮された前記微小球を有する前記懸濁液の流れを含有し、前記第１の流体出口が、前記第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の液体の流れを含有する液体サイクロンと
を含む、ポリマーおよび活性剤を含有してなる微小球を濃縮するためのシステム。
６．前記懸濁液を収容し撹拌するための容器と；
前記ミキサから前記容器に至る第１の管材と；
水または懸濁媒体の供給源と；
前記供給源から前記容器に至る第２の管材と；
前記水または前記懸濁媒体を、前記供給源から前記第２の管材に沿って前記容器内に移動させるためのポンプと；
前記容器から前記流体入口に至る第３の管材と；
前記懸濁液を前記容器から前記流体入口にポンプ送出するためのポンプと
を含む、実施形態５に記載のシステム。
７．前記第１の流体出口からの前記流れが、前記第２の流体出口からの前記流れに比べて、前記液体として相対的に大量の前記連続相、前記水、または前記懸濁媒体を含有する、実施形態６に記載のシステム。
８．前記第１の流体出口からの前記流れが、前記第２の流体出口からの流れに比べて、相対的に大量の微細な前記微小球を含有する、実施形態７に記載のシステム。
９．流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）を含み、前記ＨＣ−２の第２の流体出口が、濃縮された前記微小球を有する前記懸濁液の流れを含有し、前記ＨＣ−２の第１の流体出口が、前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の前記液体の流れを含有し、前記液体サイクロン（ＨＣ−１）の前記第１の流体出口が前記第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）の前記流体入口に流体連絡して、前記ＨＣ−１の第２の流体出口からおよび前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの前記濃縮懸濁液が合わせられる、実施形態６に記載のシステム。
１０．前記第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）の第１の流体出口からの前記流れが、前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の前記連続相、前記水、または前記懸濁媒体を含有する、実施形態９に記載のシステム。
１１．前記液体サイクロンと直列に第２の液体サイクロンを含む、実施形態５に記載のシステム。
１２．前記液体サイクロンと並列に第２の液体サイクロンを含む、実施形態５に記載のシステム。
１３．前記ＨＣ−１の第２の流体出口から、および前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの、前記合わせた濃縮懸濁液を受容し、溶媒および望ましくない物質を実質的に含まない洗浄された微小球を形成する、溶媒除去容器（ＳＲＶ）をさらに含む、実施形態９に記載のシステム。
１４．中空糸フィルタ（ＨＦＦ）入口、第１のＨＦＦ出口、および第２のＨＦＦ出口を有するＨＦＦと、前記溶媒除去容器（ＳＲＶ）と前記ＨＦＦ入口との間の第４の管材と、前記溶媒除去懸濁液を、前記ＳＲＶから前記第４の管材に沿って前記ＨＦＦ入口に移動させるためのポンプと、前記第２のＨＦＦ出口から前記ＳＲＶに延びる第５の管材とを含み、透過液が前記第１のＨＦＦ出口から除去され、濾過された前記懸濁液が前記第２のＨＦＦ出口から前記第５の管材に沿って前記ＳＲＶに移送される、実施形態１３に記載のシステム。
１５．水または懸濁媒体の第２の供給源と、前記第２の供給源から前記溶媒除去容器（ＳＲＶ）に至る第６の管材と、前記水または前記懸濁媒体を、前記第２の供給源から前記第６の管材に沿って前記ＳＲＶ内にポンプ送出するためのポンプとを含む、実施形態１４に記載のシステム。
１６．前記第２の流体出口から移送される前記微小球懸濁液を受容する中空糸フィルタを含む、実施形態５に記載のシステム。
１７．懸濁液入口、液体出口、および微小球出口を有する湿潤篩と、水または懸濁媒体の供給源と、前記供給源から前記篩に至る管材と、前記水または前記懸濁媒体を、前記供給源から前記管材に沿って前記篩内に移動させるためのポンプとを含み、前記篩の前記懸濁液入口は、前記第２の流体出口から前記濃縮懸濁液を受容する、実施形態５に記載のシステム。
１８．容器内でポリマーおよび活性剤を含む凝固した微小球の懸濁液を循環させるステップと；
前記懸濁液を、前記容器から液体サイクロンの流体入口に移動させるステップであって、前記液体サイクロンが第１の流体出口および第２の流体出口をさらに含むステップと；
前記第２の流体出口から、濃縮された前記微小球を有する前記懸濁液の流れを除去するステップと；
前記第１の流体出口から、前記第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の液体の流れを除去するステップと
を含む、微小球を処理するための方法。
１９．前記容器と前記液体サイクロンとの間に配置されたポンプを含み、前記ポンプを使用して前記懸濁液を加圧下で前記容器から前記流体入口にポンプ送出するステップを含む、実施形態１８に記載の方法。
２０．前記容器に流体連絡するミキサを含み、前記ミキサ内で前記ポリマー、溶媒、および前記活性剤を合わせてエマルジョンを形成するステップと、前記エマルジョンを前記容器内で凝固させて、前記容器内で前記懸濁液を形成するステップとを含む、実施形態１８に記載の方法。
２１．前記容器に流体連絡するミキサを含み、前記ミキサ内で前記ポリマー、溶媒、および前記活性剤を合わせて前記懸濁液を形成するステップと、前記懸濁液を前記ミキサから前記容器に向けるステップとを含む、実施形態１８に記載の方法。
２２．分散相および連続相をミキサに送り込むステップであって、前記分散相が、溶媒、ポリマー、および活性剤を含むステップと；
前記分散相および前記連続相を前記ミキサ内で混合して、微小球の懸濁液を作製するステップと；
前記懸濁液を、前記ミキサから液体サイクロンの流体入口に移動させるステップであって、前記液体サイクロンが、第１の流体出口および第２の流体出口をさらに含むステップと；
前記第２の流体出口から、濃縮した前記微小球を有する前記懸濁液の流れを除去するステップと；
前記第１の流体出口から、前記第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の液体の流れを除去するステップと
を含む、ポリマーおよび活性剤を含有してなる微小球を濃縮するための方法。
２３．前記懸濁液を前記ミキサから容器に移動させ、前記懸濁液を前記容器内で撹拌するステップと；
水または懸濁媒体を前記容器に添加するステップと；
前記懸濁液を、前記容器から前記流体入口に移動させるステップと
を含む、実施形態２２に記載の方法。
２４．前記第１の流体出口からの前記流れから、相対的に大量の前記連続相、前記水、または前記懸濁媒体を除去するステップを含む、実施形態２３に記載の方法。
２５．前記第１の流体出口からの前記流れから、前記第２の流体出口に比べて相対的に大量の微細な前記微小球を除去するステップを含む、実施形態２４に記載の方法。
２６．流体入口、第１の流体出口、および第２の流体出口を有する第２の液体サイクロン（ＨＣ−２）を設けるステップを含み、
前記懸濁液を、前記液体サイクロン（ＨＣ−１）の前記第１の流体出口から前記ＨＣ−２の流体入口に移動させるステップと；
前記ＨＣ−２の第２の流体出口から、濃縮した前記微小球を有する前記懸濁液の流れを除去するステップと；
前記ＨＣ−２の第１の流体出口から、前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の液体の流れを除去するステップと；
前記ＨＣ−１の第２の流体出口からおよび前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの、前記濃縮懸濁液を合わせて、合わせられた懸濁液を形成するステップと
を含む、実施形態２４に記載の方法。
２７．前記ＨＣ−２の第１の流体出口の前記流れから、前記ＨＣ−２の第２の流体出口からの前記流れに比べて相対的に大量の微細な前記微小球を除去するステップを含む、実施形態２６に記載の方法。
２８．前記微小球懸濁液を、前記液体サイクロンから、前記液体サイクロンと直列状態にある第２の液体サイクロンに通すステップを含む、実施形態２２に記載の方法。
２９．前記微小球懸濁液を、前記液体サイクロンから、前記液体サイクロンと並列状態にある第２の液体サイクロンに通すステップを含む、実施形態２２に記載の方法。
３０．前記微小球懸濁液を、前記液体サイクロンの前記第２の流体出口から中空糸フィルタに通すステップを含む、実施形態２２に記載の方法。
３１．溶媒除去容器（ＳＲＶ）を設けるステップと；前記合わせた懸濁液を前記ＳＲＶ内に移動させるステップと；前記ＳＲＶ内の前記合わせた懸濁液から溶媒を除去して、溶媒および望ましくない物質を実質的に含まない洗浄された微小球を形成するステップとをさらに含む、実施形態２６に記載の方法。
３２．水または懸濁媒体を、前記溶媒除去容器（ＳＲＶ）内に添加するステップを含む、実施形態３１に記載の方法。
３３．中空糸フィルタ（ＨＦＦ）を設けて、前記ＳＲＶ内の前記合わせた懸濁液から溶媒を除去するステップであって、前記ＨＦＦが、ＨＦＦ入口、第１のＨＦＦ出口、および第２のＨＦＦ出口を含むステップと；前記溶媒除去懸濁液を、前記溶媒除去容器（ＳＲＶ）から前記ＨＦＦ入口に移動させるステップと；水または前記懸濁媒体を前記第１のＨＦＦ出口から除去して、濾過された懸濁液を形成するステップと；前記濾過された懸濁液を、前記第２のＨＦＦ出口から前記ＳＲＶに移動させるステップとを含む、実施形態３２に記載の方法。
３４．懸濁液入口、液体出口、および微小球出口を含む湿潤篩を設けるステップと、水または懸濁媒体を前記篩に添加するステップであって、前記篩の前記懸濁液入口が、前記濃縮懸濁液を受容するステップと、前記微小球を前記篩の前記微小球出口から除去するステップと、液体を前記液体出口から除去するステップとを含む、実施形態２２に記載の方法。

Claims

明細書に記載の発明。