JP2010525026A - デンタルバイオフィルムの形成または蓄積に対処するための、少なくとも1つのフッ素塩と組み合わせた水性ブドウ種子抽出物の使用およびその組合せを含んでなる組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
−いわゆるコモンプレイスネグリジェンスプラーク(commonplace negligence plaque)の存在と関連する歯肉炎、
−潰瘍壞死性急性歯肉炎、
−原因がプラークと関係のない歯肉炎:
・皮膚疾患と関連する歯肉炎、
・歯肉に限局されるかまたは頬粘膜全体に影響を及ぼす歯肉炎;
・アレルギー性歯肉炎;
・感染性の歯肉炎。
−強烈に(:活性の評価は対数低減という概念、多数の微生物の破壊または不活性化に基づいている)、
−急速に(短い接触時間および有機材料と特に接触したほとんどの分子の不活性化を考えることにより)
作用する。
−歯の表面上または歯肉上皮組織上でのデンタルバイオフィルムの形成または蓄積を予防すること;
−および/あるいはその定着した表面を低減すること
を目的とする口腔衛生組成物を製造するための、少なくとも1つのフッ素塩と組み合わせた水性ブドウ種子抽出物の使用である。
★R1=H、アルキル;
★R2=CH2−OH、カルボン酸アルキル、−CO−NH−CH2−CH2−OH、
に適合する塩から選択される。
−オリゴマー:
・B1:1%〜4%、好ましくは約2.5%
・B2:5%〜9%、好ましくは約7.5%
・B3:最大3%、好ましくは約1.7%
・B4:1%〜4%、好ましくは約2.6%
−モノマー:
・カテキン:3%〜6%、好ましくは約4.7%
・エピカテキン:12%〜15%、好ましくは約13.3%
・エピカテキン30ガラート:最大2%、好ましくは約0.7%
−不溶性懸濁物質を除去するための遠心分離;
−特に、酒石酸、糖、多糖および無機物を除去するための濾過;
−蒸発;
−その後、所望により、硫化水での新たな抽出、続いて遠心分離、濾過、蒸発(濃縮物が液体として回収されるまで);
−瞬間低温殺菌;
−抽出物を粉末の形態とすることが望ましい場合には微粒化。
−歯石の形成またはバイオフィルムの蓄積に関連する口腔歯疾患(bucco-dental diseases)の発生を予防すること;
−および/あるいはその定着した表面を低減すること
を目的とする口腔衛生組成物を製造するための、少なくとも1つのフッ素塩、特に前に述べたもの、と組み合わせた水性ブドウ種子抽出物の使用でもある。
−一方では、ヒドロキシルアパタイトのディスク上で異なる口腔細菌を含む懸濁液から作製した口腔バイオフィルムの実験モデルにおいて;
−もう一方では、グルコシルトランスフェラーゼの酵素反応に対する前記組成物の阻害活性を示すことにより
証明されている。
★R1=H、アルキル;
★R2=CH2−OH、カルボン酸アルキル、−CO−NH−CH2−CH2−OH、
に適合するものから選択してよい。
"Societe Francaise de Distilleries" (French distillery corporation)により水性ブドウ種子抽出物を準備する。当業者に周知の従来の抽出技術に従って、白ブドウの搾汁かすを硫化水で抽出することにより水性ブドウ種子抽出物を得る。
・外観:微粉末
・色:黄土色
・味:渋い
・密度:0.35〜0.55g/mL
・湿度:<8%
◆オリゴマー:
−B1 : 2.56%
−B2 : 7.51%
−B3 : 1.72%
−B4 : 2.61%
◆モノマー:
−カテキン : 4.69%
−エピカテキン :13.32%
−エピカテキン30ガラート: 0.66%
確認されたOPC総量 :33.0%
2.1)手順
a)細菌株および接種材料の製造
用いた細菌株は、
−Streptococcus mutans ATCC 25175
−Streptococcus sobrinus ATCC 33478
−Porphyromonas gingivalis ATCC 33277
である。
健康なボランティアにおいて[正しい情報による同意を得た後]、飲食または歯磨きの少なくとも1時間30分後に、刺激を与えずに唾液を採取する。
バイオフィルムを、オートクレーブ中で125℃に20分間加熱することにより滅菌したヒドロキシルアパタイトディスク上に発生させる。
によって分析バイオフィルム当たりのコロニー形成単位(すなわちCFU/バイオフィルム)で表す。
実施例1のブドウ種子抽出物だけで、ヒドロキシルアパタイトディスク上に発生したバイオフィルム中の細菌の総数の1log10より大きい大幅な減少がもたらされることが観察される。図1参照。
3.1)手順
Streptococcus sobrinus ATCC 33478株を、グルコースを多く含む(10g/L終濃度)のBHI(ブレインハートインフュージョン)培地1l中に嫌気生活において37℃で18時間入れる。次いで、この細菌培地を、NaOH 1N溶液を用いてpHを6.5に戻し、それを8,000rpmで4℃で30分間遠心分離する。上清中に存在するグルコシルトランスフェラーゼを硫酸アンモニウムでの沈殿により濃縮する。上清に硫酸アンモニウム(50%w/飽和v)を徐々に加え、攪拌下で30分間4℃に保つ。その後、この混合物を8,000rpm、4℃で30分間遠心分離する。グルコシルトランスフェラーゼを多く含むこのペレットを、次いで、リン酸/カリウムK2HPO4バッファー(10mM、pH10.5)に溶解し、16時間透析した(MWC 6−8000;幅14.6mm)後、−20℃で凍結する。これは精製GTF溶液である。
−一方は、酵素反応の初期速度(結果についての次の表では「フルクトース」と記す)の阻害率
−もう一方は、37℃での24時間のインキュベーション後にもたらされる不溶性グルカン形成の阻害率(結果についての次の表では「不溶性グルカン」と記す)。
グルコシルトランスフェラーゼ Qsp0.1〜0.4U/mL
サッカロース 50g/L
リン酸−カリウムK2HPO4バッファー 65mM、pH6.5
100mM
窒化ナトリウム 0.1g/L
デキストランT10 2g/L
ポリフェノール 0〜2,000μg/L
デキストラン粒子が光を回折し、寄生吸収を起こすことから、デキストランは、タンパク質をアッセイするための全比色法に干渉する。そのため、グルコシルトランスフェラーゼの量は、標準条件下でのその活性により測定する。グルコシルトランスフェラーゼ単位は、1分間に1マイクロモルのフルクトースを放出する酵素の量を表す。
酵素活性(U/ml)=[(速度アッセイ曲線の傾き)/(フルクトース標準曲線の傾き)]/(180x1,000x希釈係数)
酵素反応開始の24時間後に可溶性グルカンの量を測定する。この反応を停止させるために、これらのチューブをアルミニウムで覆った後、水浴中で5分間90〜100℃にする。その後、全体を氷中で5分間急冷する。さらに、媒質(2mL)を15,000rpmで、4℃で30分間遠心分離する。
フルオリノール単独では、0.68%および1.02%の濃度について、それぞれ、初期酵素反応の阻害率10.3%および20.6%となる。さらに、フルオリノールには、これらの濃度のいずれにおいても、不溶性グルカンの合成に対して効果はない。
Claims (15)
- 歯の表面上または歯肉上皮組織上でのデンタルバイオフィルムの形成および蓄積を予防および/または低減することを目的とする口腔衛生組成物を製造するための、少なくとも1つのフッ素塩と組み合わせての水性ブドウ種子抽出物の使用。
- 前記フッ素塩がフルオリノールである、請求項2に記載の使用。
- 前記フッ素塩がフッ化ナトリウムである、請求項1に記載の使用。
- 前記水性ブドウ種子抽出物が、50%より大きい、好ましくは90%より大きい質量分率のポリフェノールを含有するものである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の使用。
- 前記水性ブドウ種子抽出物が、20%〜50%の質量分率のプロアントシアニジンを含有するものである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の使用。
- 前記口腔衛生組成物が、歯石の形成またはバイオフィルムの蓄積に関連する口腔歯疾患の発生の予防を目的とするものである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の使用。
- 前記口腔歯疾患が、齲蝕、歯肉炎または歯周炎から選択されるものである、請求項7に記載の使用。
- 水性ブドウ種子抽出物とフッ素塩の組合せを含んでなる、口腔衛生組成物。
- 前記フッ素塩がフルオリノールである、請求項10に記載の組成物。
- 口内洗浄剤、練り歯磨き、歯肉ゲル、チューインガム、サッカブル錠、デンタルフロス、押出カプセル剤、歯ブラシの剛毛、粘着包帯、含浸ウェットティッシュ、義歯および補綴物用糊材または予防研磨ペーストの形態である、請求項9〜11のいずれか一項に記載の組成物。
- シリグリコールおよび/またはビタミンEをさらに含有する、請求項9〜12のいずれか一項に記載の組成物。
- 50μg/mL〜10,000μg/mL、好ましくは200μg/mL〜5,000μg/mL、より有利には1,000μg/mL〜3,000μg/mL、さらに有利には約2,000μg/mLの前記ブドウ種子抽出物を含有する、請求項9〜13のいずれか一項に記載の組成物。
- 50ppm〜10,000ppm、好ましくは500ppm〜2,000ppmのフッ素を含有する、請求項9〜14のいずれか一項に記載の組成物。
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