JP2010503620A - 胃腸の運動障害疾患の治療のためのモチリン受容体の大環状アンタゴニスト - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2006年9月11日に出願の、米国特許仮出願第60/825,237号の利益を主張し、その開示は、参照することにより、それ全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、そのサブタイプ、イソ型、および/または変異体を含む、モチリン受容体の機能モジュレーターに結合する、および/またはモチリン受容体の機能モジュレーターである、新規の配座的に定義される大環状化合物に関する。これらの大環状化合物は、一連の疾病の兆候に対する治療法として有用である十分な薬理学的特性を有する。特に、これらの化合物は、下痢、癌治療関連の下痢、癌誘発性の下痢、化学療法誘発性の下痢、放射線腸炎、放射線誘発性の下痢、ストレス誘発性の下痢、慢性下痢、AIDS関連の下痢、C.difficile関連下痢症、旅行者下痢症、移植片対宿主病誘発性の下痢、他種の下痢、消化不良、過敏性腸症候群、機能性胃腸疾患、化学療法誘発性の嘔気嘔吐(催吐)および術後嘔気嘔吐症等が挙げられるが、これらに限定されず、高モチリン血症(hypermotilinemia)または胃腸の運動過剰を特徴とする疾患の治療および予防に有用である。さらに、該化合物には、短腸症候群、セリアック病、および悪液質等の胃または腸内吸収の低下を特徴とする疾病および疾患の治療の有用性がある。また、該化合物は、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、および膵炎等の胃腸管の炎症性の疾病および疾患を治療するために使用されてもよい。
多くのペプチドホルモンは、吸収、分泌、血流、および運動性を含む、胃腸(GI)管における異なる機能の制御に関与する(Mulvihill,S.J.;et al.in Basic and Clinical Endocrinology,4th edition,Greenspan,F.S.;Baxter,J.D.,Eds.,Appleton & Lange:Norwalk,CT,1994,pp 551−570)。脳とGI系との間の相互作用が、これらの機能の適切な調節には極めて重要であるため、これらのペプチドは、GI管内において局所的に、またはCNSにおいて末端に、生成され得る。
式中、Yは、
式中、(L5)および(L6)は、それぞれ式IのL5およびL6への結合を示し、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、式中、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される。
式中、Mは、CH2、O、NH、およびNCH3からなる群から選択される。
式中、(L5)および(L6)は、それぞれL5およびL6への結合を示す。
式中、Mは、CH2、O、NH、およびNCH3からなる群から選択される。
R40、R41、R42、およびR43は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R44は、水素、アルキル、アシル、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、スルホニル、およびアミン官能基の保護基からなる群から選択され、
R45は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
R46は、水素、アルキル、アシル、スルホニル、およびヒドロキシル官能基の保護基からなる群から選択され、
L11、L12、L13、およびL14は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L15およびL16は独立して、O、CR47R48、およびNR49からなる群から選択され、式中、R47およびR48は独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R49は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される。
本発明の新規大環状化合物は、大環状化合物を形成するために環化を行うテザー(tether)要素を含むビルディングブロック構造を備える大環状化合物を含む。ビルディングブロック構造は、アミノ酸(標準的および非天然)、および本明細書に記載のテザー要素を備え得る。テザー要素は、以下の構造
式中、(NHA)は、CH(CHR7Ar)が結合される式Iにおいて窒素原子への結合を示し、(NHB)は、カルボニル(C=O)が結合される式Iにおいて窒素原子への結合を示し、R31は、水素、メチル、およびヒドロキシメチルから選択され、R32は、水素、メチル、およびヒドロキシルから選択される。
式中、Yは、
式中、(L5)および(L6)は、それぞれ式IのL5およびL6への結合を示し、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、式中、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される。
式Iの化合物は、従来の溶液合成手法または固相化学反応方法を使用して、合成され得る。大環状構造の一般型に対する合成方法は、国際特許出願第WO 01/25257号、同第WO 2004/111077号、同第WO 2005/012331号、同第WO 2005/012332号、同第WO 2006/009645号、および同第WO 2006/009674号に記載され、同第WO 2004/111077号および同第WO 2005/012331号に記載の精製手順を含む。本発明の化合物に対する代表的手順は、実施例に示される。
試薬および溶媒は、試薬特性またはよりよい特性からなり、別途記載がない限り、様々な商業的供給元から得たものを使用された。使用されるDMF、DCM(CH2Cl2)、DME、CH3CN、およびTHFは、DriSolv(登録商標)(EMD Chemicals,Inc.、Merck KGaAの一部、Darmstadt,Germany)、または(i)脱保護、(ii)樹脂キャッピング反応、および(iii)洗浄を除いて、合成グレードの特性からなる。アミノ酸(AA)カップリング反応に使用されるNMPは、分析グレードからなる。DMFは、使用する最低30分前に、真空下に置くことにより、適切に脱気された。均一触媒をStrem Chemicals,Inc.(Newbury Port,MA,USA)から得た。N−メチルおよび非天然アミノ酸からなるものを含むCbz−、Boc−、およびFmoc−保護されたアミノ酸および側鎖保護誘導体は、商業的供給元から得る、または当業者に周知の標準的な手法を通して合成される。Ddz−アミノ酸は、標準的な方法による合成、あるいはOrpegen(Heidelberg,Germany)もしくはAdvanced ChemTech(Louisville,KY,USA)から商業的に入手されるか、のいずれかである。Bts−アミノ酸は、構築された手順により合成された。分析TLCは、蛍光指示薬を含むシリカゲル60F254(厚さ0.25mm)のプレコートされたプレート上で実施され、例えば、紫外線(UV)、および/またはセリウムモリブデン酸(CMA)溶液(100mLの硫酸、10gのセリウム硫酸アンモニウム、25gのモリブデン酸アンモニウムとの混合によって調製)を使用して示される、方法および試薬を使用して可視化された。
N−メチルおよび非天然アミノ酸からなるものを含むアミノ酸、Boc−およびFmoc−保護されたアミノ酸、ならびに側鎖保護誘導体は、商業用供給者[例えば、Advanced ChemTech(Louisville,KY,USA)、Bachem(Bubendorf,Switzerland)、ChemImpex(Wood Dale,IL,USA)、Novabiochem(Merck KGaAの子会社、Darmstadt,Germany)、PepTech(Burlington,MA,USA)、Synthetech(Albany,OR,USA)、AstaTech(Bristol,PA,USA)]から得られる、または当業者に周知の標準的な方法を通して合成された。Ddz−アミノ酸は、Orpegen(Heidelberg,Germany)あるいはAdvanced ChemTech(Louisville,KY,USA)から商業的に入手される、またはDdz−OphまたはDdz−N3を利用して標準的な方法を使用して合成された(Birr,C.;Lochinger,W.;Stahnke,G.;Lang,P.Justus Liebigs Ann.Chem.1972,763,162−172)。Bts−アミノ酸は、周知の方法により合成された(Vedejs,E.;Lin,S.;Klapara,A.;Wang,J.J.Am.Chem.Soc.1996,118,9796−9797;Vedejs,E.;Kongkittingam,C.J.Org.Chem.2000,65,2309−2318、また国際特許出願第WO 01/25257号、同第WO 2004/111077号)。N−アルキルアミノ酸、特に、N−メチルアミノ酸は、複数のベンダーから市販されている(Bachem,Novabiochem,Advanced ChemTech,ChemImpex,Peptech)。さらに、N−アルキルアミノ酸誘導体は、文献の方法を通してアクセスされた(Hansen,D.W.,Jr.;Pilipauskas,D. J. Org. Chem.1985,50,945−950)。アジリジン−2−カルボン酸は、文献から報告される方法を使用して作製された(Baldwin,J.E.et al.Tetrahedron 1993,49,6309−6330;Nakajima,K.et al.Bull.Chem.Soc.Jpn.1978,51,1577−1578)。3−クロロチロシンは、文献の方法を使用して、合成された(Yu,G.;Mason,H.J.;Galdi,K.;et al.Synthesis 2003,403−407)。
式中、Mは、CH2、O、NH、およびNCH3からなる群から選択される。
テザーは、国際特許出願第WO 01/25257号、同第WO 2004/111077、同第WO 2005/012331、同第WO 2006/009645、および同第WO 2006/009674号において上述に記載の方法から得られた。本明細書に記載の代表的テザーの合成に対する手順はまた、以下の実施例に示される。本発明の化合物に有用なテザーは、周知の、ならびに上記に記載の参照において記載されるように、適したテザー、および/または本明細書に記載の新規テザーを含み得る。テザーの例としては、以下のもの
本発明の大環状化合物の合成のための特定の固相法は、国際特許出願公開第WO 01/25257号、同第WO 2004/111077号、同第WO 2005/012331号、および同第WO 2005/012332号に記載されている。より尺度の大きい製造に従う方法を含む、溶液相合成経路は、国際特許出願公開第WO 2006/009645号、同第WO 2006/009674号に記載された。本発明の代表的化合物に対するこれらの方法は、実施例にさらに記載される。表1は、本発明の90の代表的化合物の合成の概要を示す。大環状分子の構成のために使用される反応方法は、2列めに示され、合成戦略の特定のスキーム、例えば、図7に示される固相戦略、または図8に示され、実施例9に記載される溶液相方法の使用に関する。3〜6列は、それぞれの化合物に使用される個々のアミノ酸およびテザービルディングブロックを示し、標準的な術語、あるいは本願の他の部分に示されるビルディングブロック称号に関して、利用される。AA1は、式Iの化合物の−NR10a−CH(CHR7Ar)−C(=O)−部分を形成するビルディングブロックを意味し、AA2は、式Iの化合物の−NH−CHR1−C(=O)−部分を形成するビルディングブロックを意味し、AA1は、式Iの化合物の−NH−CHR2−C(=O)−部分を形成するビルディングブロックを意味し、テザーは、NR10aとNR10bとの間で、典型的にNR10aを含む式Iの化合物の残り部分を形成するビルディングブロックを意味する。1−置換テザー、例えば、T38、T90、T91、T92、T93、T94、T95、T96、T97、T98、およびT99等のために、その導入に対する反応化学は、その中心で立体化学に転化することに留意すべきである。したがって、(R)−置換テザービルディングブロックは、(S)−立体中心を有する式Iの化合物をもたらす。同様に、(S)−置換テザービルディングブロックは、(R)−立体中心を有する式Iの化合物をもたらす。テザーT90およびT91は、それぞれ、実施例6および5に記載されるように、フラグメントF2およびF1として、AA1と共に導入される。環化前駆物質のアセンブリに必要とされる関連脱保護およびカップリングプロトコルは、標準的な手順を利用して実施され、ふさわしいビルディングブロックの特性として、第WO 2004/111077号、同第WO 2006/009645号、および同第WO 2006/009674号に記載される。最終の大員環を適切な脱保護配列の適用後に得る。いかなる反応を環化後に実行する必要がある場合、それを7列めに記載する。表1に示されるすべての大員環は、精製され、内部の合否基準に合わせた。
1Hおよび13C NMRスペクトルは、Varian Mercury 300MHz スペクトロメータ(Varian,Inc.,Palo Alto,CA)上で記録され、別途記載がない限り、溶媒の残留陽子信号に対して内部で参照される。1H NMRデータは、以下のppm(多重度、積分、結合定数)における化学シフト(δ)である、標準的な略語を使用して、示される。以下の略語は、信号の多重度:s=シングレット、d=ダブレット、t=トリプレット、q=カルテット、quint=クインテット、bまたはbr=広範、およびm=マルチプレットを示すために使用される。溶液中の分子の配座についての情報は、当業者に周知の適切な2次元NMR法を利用して決定され得る(Martin,G.E.;Zektzer,A.S.Two−Dimensional NMR Methods for Establishing Molecular Connectivity:A Chemist’s Guide to Experiment Selection,Performance,and Interpretation,John Wiley & Sons:New York,1988,ISBN 0471187070)。
立体異性体純度のHPLC測定の一般法を、当業者に周知の手法に従い、使用し、本発明の化合物に対してさらに最適化した。
1. H2O中の35%のACN、65%の50mMのCH3COONH4溶液で、40分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
2. H2O中の70%のACN、30%の50mMのCH3COONH4溶液で、5分間の勾配
3. H2O中の70%のACN、30%の50mMのCH3COONH4溶液で、10分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
4. H2O中の35%のACN、65%の50mMのCH3COONH4溶液で、5分間の勾配
5. H2O中の35%のACN、65%の50mMのCH3COONH4溶液で、10分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
6. 流速:0.5mL/分
7. カラム温度:室温
8. 試料温度:室温
1. H2O中の40%のACN、60%の50mMのCH3COONH4溶液で、40分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
2. H2O中の70%のACN、30%の50mMのCH3COONH4溶液で、5分間の勾配
3. H2O中の70%のACN、30%の50mMのCH3COONH4溶液で、10分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
4. H2O中の40%のACN、60%の50mMのCH3COONH4溶液で、5分間の勾配
5. H2O中の40%のACN、60%の50mMのCH3COONH4溶液で、10分間のアイソクラチック(isocratic)プラトー
6. 流速:0.5mL/分
7. カラム温度:室温
8. 試料温度:室温
1. 40分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の55%/45%のACN/50mMのCH3COONH4
2. 5分間の勾配、H2O中の70%/30%のACN/50mMのCH3COONH4
3. 10分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の70%/30%のACN/50mMのCH3COONH4
4. 5分間の勾配、H2O中の55%/44%のACN/50mMのCH3COONH4
5. 10分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の55%/45%のACN/50mMのCH3COONH4
6. 流速:0.5mL/分
7. カラム温度:室温
8. 試料温度:室温
1. 40分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の27%/73%のACN/50mMのCH3COONH4
2. 5分間の勾配、H2O中の70%/30%のACN/50mMのCH3COONH4
3. 10分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の70%/30%のACN/50mMのCH3COONH4
4. 5分間の勾配、H2O中の27%/73%のACN/50mMのCH3COONH4
5. 10分間のアイソクラチック(isocratic)、H2O中の27%/73%のACN/50mMのCH3COONH4
6. 流速:0.5mL/分
7. カラム温度:室温
8. 試料温度:室温
本発明の化合物は、下に記載されるように、優位性のある放射性リガンド結合分析、蛍光分析、またはエクオリン機能分析を利用して、ヒトモチリン受容体で相互に作用するための能力に対して評価された。このような方法は、多くの化合物の同時評価を許可するためにハイスループット法で実行され得る。
ヒトモチリン受容体で優位性のある放射性リガンド結合分析を文献に記載の類似の分析で実行された。
・膜は、ヒトモチリン受容体で安定に導入されたCHO細胞から調製し、1.5μg/分析点の量で使用した[PerkinElmer(登録商標) SignalScreen Product#6110544]
・[125I]−モチリン(PerkinElmer,#NEX−378)、最終濃度:0.04〜0.06nM
・モチリン(Bachem(登録商標),#H−4385)、最終濃度:1μM
Multiscreen Harvestプレート−GF/B(Millipore(登録商標)、#MAHFB1H60)
・ディープウェルのポリプロピレン滴定プレート(Beckman Coulter(登録商標)、#267006)
・TopSeal−A(PerkinElmer、#6005185)
・底シール(Millipore、#MATAH0P00)
・MicroScint−0(PerkinElmer、#6013611)
・結合バッファー:50mM Tris−HCl(pH7.4)、10mM MgCl2、1mM EDTA、0.1% BSA
・150μLの結合バッファーに希釈された膜
・10μLの結合バッファーに希釈された化合物
・10μLの結合バッファーに希釈された放射性リガンド([125I]−モチリン)
10、5.0、2.0、1.0、0.50、0.20、0.10、0.050、0.020、0.010、0.0050μM。
化合物は、100%DMSOで希釈された10mMの保存濃縮でドライアイス上で冷凍し、提供され、試験日まで−20℃で保存された。試験日に、化合物を室温で解凍させた後、所望の試験濃度に従い、分析バッファーに希釈した。これらの条件下で、分析における最大最終DMSO濃度は、0.5%であった。
ディープウェルプレートにおいて、希釈した細胞膜(1.5μg/mL)を、10μLの結合バッファー(全結合、N=5)、1μMのモチリン(非特異性結合、N=3)、あるいは試験化合物の適切な濃度のいずれかで混合した。反応物をそれぞれのウェルへの10μLの[125I]−モチリン(最終濃度、0.04〜0.06nM)の添加により開始した。プレートは、TopSeal−Aで密閉され、徐々にボルテックスし、室温で2時間培養した。反応物をTomtec Harvesterを使用して、事前に浸した(0.3%ポリエチレンイミン、2時間)Multiscreen Harvestプレートにて試料を濾過することにより獲得し、500μLの冷却した50mM Tris−HCl(pH7.4)で9回洗浄した後、プレートを30分間ドラフトで風乾した。底シールを、それぞれのウェルへの25μLのMicroScint−0の添加前にプレートに適用する。その後、プレートは、TopSeal−Aで密閉され、TopCount Microplate ScintillationおよびLuminescence Counter(PerkinElmer)上でウェルごとに30秒間カウントされ、結果は、秒当たりカウント(cpm)として表される。
機能活性に対する本発明の化合物の評価は、文献の方法に従い、または下に記載されるように実行され得る(Carreras,C.W.;Siani,M.A.;Santi,D.V.;Dillon,S.B.Anal.Biochem.2002,300,146−151)。
・膜は、ヒトモチリン受容体(細胞株ES−380−A;受容体取得#AF034632)を発現するAequoScreen(登録商標)(EUROSCREEN,Belgium)細胞株を使用して調製した。本細胞株は、Gα16を共発現するCHO−K1細胞およびミトコンドリアに標的化されたエクオリン(参照#ES−WT−A5)へのヒトモチリン受容体のトランスフェクションにより実行される。
・モチリン(Bachem、#H−4385)
・分析バッファー:15mM HEPESおよび0.1%BSA(pH7.0)を有するDMEM−F12(Dulbeccoe’s Modified Eagles Medium)
・セレンテラジン(Molecular Probes(登録商標),Leiden,The Netherlands)
10、3.16、1.0、0.316、0.10μM。
化合物は、フォーマット済みの96−ウェルプレートに、約1.2μmolの量で乾燥塗膜として提供された。化合物は、10mMの濃度で100%DMSOに溶解され、さらに使用されるまで、−20℃で保存された。娘プレートは、0.1%BSAを伴う30%DMSO中の500μMの濃度で調製され、試験まで−20℃で保存された。試験日に、化合物を室温で解凍させた後、所望の試験濃度に従い、分析バッファーに希釈した。これらの条件下で、分析における最大最終DMSO濃度は、0.6%であった。
細胞は、5mM EDTAが追加されたCa2+およびMg2+−遊離リン酸緩衝生理食塩水(PBS)を有する培養プレートから回収され、1000xgで2分間ペレットされ、5×106細胞/mLの密度で、分析バッファー(上記参照)中で再懸濁し、5μMセレンテラジンの存在下で、一晩培養した。負荷後、細胞は、5×105細胞/mLの濃度まで分析バッファーで希釈された。
アゴニスト試験のために、50μLの細胞懸濁は、96−ウェルプレート(複製試料)中で、50μLの適切な濃度の試験化合物またはモチリン(参照アゴニスト)と混合した。受容体活性化から生じる光の放出は、Functional Drug Screening System6000「FDSS6000」(Hamamatsu Photonics K.K.,Japan)を使用して記録された。
材料:
・膜をヒトモチリン受容体で安定に導入されたCHO細胞から調製し、1.5μg/分析点の量で使用した[PerkinElmer(登録商標) SignalScreen Product#6110544]
・GTPγS(Sigma、#G−8634)
・[35S]−GTPγS(PerkinElmer、#NEX−030H)
・モチリン(Bachem、#H−4385)
・96−ウェルFlashPlateマイクロプレート(PerkinElmer、#SMP200)
・ディープウェルのポリプロピレン滴定プレート(Beckman Coulter、#267006)
・TopSeal−A(PerkinElmer、#6005185)
・分析バッファー:50mM Tris(pH7.4)、100mM NaCl、10mM MgCl2、1mM EDTA、1μM GDP、0.1% BSA
・25μLの分析バッファーに希釈された化合物
・25μLの分析バッファー(アゴニスト分析)、または分析バッファー(アンタゴニスト分析)で希釈された0.6μMモチリン(0.1μM 最終濃度)
・100μLの分析バッファーに希釈された[35S]−GTPγS
50、20、10、5.0、2.0、1.0、0.50、0.20、0.10、0.050、0.020、0.010μM。
化合物は、100%DMSOで希釈された10mMの保存濃縮でドライアイス上で冷凍し、提供され、試験日まで−20℃で保存された。試験日に、化合物を室温で解凍させた後、所望の試験濃度に従い、分析バッファーに希釈した。これらの条件下で、分析における最大最終DMSO濃度は、0.5%であった。
CHO膜は、96−ウェルFlashPlateマイクロプレートに固定化された。試験化合物、GTPγS、モチリンおよび[35S]−GTPγSは、上記に記載の分析体積に従い、それぞれのウェルで混合した。
生体外活性のための本発明の化合物の評価は、文献の方法に従い、ウサギの十二指腸の一片で実行された(Van Assche,G.;Depoortere,I.;Thijs,T.;Janssens,J.J.;Peeters,T.L.Eur.J.Pharmacol.1997,337,267−274;Matthijs,G.;Peeters,T.L.;Vantrappen,G.Naunyn−Schmiedeberg’s Arch.Pharmacol.1989,339,332−339)。関連方法も、この型の研究に使用され得る(Tomomasa,T.;Yagi,H.;Kimura,S.;Snape,W.J.,Jr.;Hyman,P.E.Pediatric Res.1989,26,458−461;Takanishi,H.;Yogo,K.;Ozaki,M.;Akima,M.;Koga,H.;Nabata,H.J.Pharm.Exp.Ther.1995,273,624−628)。
本発明の化合物の生体内有効性は、適切な動物モデルを用いて評価され得る。ラットモデルは、化学療法誘発性の下痢(CID)における化合物の評価のために利用されている(Takasuna,K.;Kasai,Y.;Kitano,Y.;et al.Jpn.J.Cance Res.1995,86,978−984;Tavakkolizadeh,A.;Shen,R.;Abraham,P.;et al.J.Surg.Res.2000,91,77−82;Horikawa,M.;Kato,Y.;Sugiyama.Pharm.Res.2002,19,1345−1353)。同様に、マウスモデルは、化学療法剤の胃腸毒性の改善のために薬剤を試験するために使用されている(Boushey RP,Yusta B,Drucker DJ.Cancer Res 2001,61,687−93;Zhao,J.;Huang,L.;Belmar,N.;Buelow,R.;Fong,T.Clin.Canc.Res.2004,10,2851−2859)。さらに、犬は、一般的な化学療法剤で治療中、下痢を罹患していることは周知である(Kawato,Y.;Sekiguchi,M.;Akahane,K.;Tsutomi,Y.;Hirota,Y.;Kuga,H.;Suzuki,W.;Hakusui,H.;Sato,K.J.Pharm.Pharmacol.1993,45,444−448;Kato,T.;Shimamoto,Y.;Uchida,J.;Ohshimo,H.;Abe,M.;Shirasaka,T.;Fukushima,M.Anticancer Res.2001,21,1705−12)。しかしながら、ラットおよびマウスは、機能的モチリン受容体を有さず、モチリンアンタゴニストの適切な動物モデルではないが、モチリン受容体での効果と非特異的効果に差異を認めるために使用され得た。犬は、機能的モチリン受容体を有し、モチリン調節を伴う研究に上述で使用されているため、適切なモデル種である。このような評価に適切な他の種は、ハムスター、豚、ウサギ、トガリネズミ、モルモット、およびフクロネズミを含む。さらに、ラットおよびマウスのために記載される類似の方法は、本発明の化合物を試験するために犬科または他のモデルに適合され得た。したがって、犬または他の動物モデルにおける下痢の発生の頻度および重症度の本発明の化合物での治療効果は、本発明の化合物の有効性の測定として使用され得る。
本研究の目的は、最高32日間、雄のビーグル犬(ケイネスファミリアリス)への静脈内投与後の化学療法誘発性の下痢(CID)における本発明の代表的大環状化合物の有効性を決定することである。本条件で使用される既存の薬剤、オクトレオチド、およびロペラミドとの比較は、さらなる目的であった。
21の実験未使用の雄のビーグル犬を無作為に7つの群に割り当て、以下のように処置した。
試験化合物、対照、および比較器は、適切な間隔で調製された。試験動物への投与を意図するすべての製剤は、2〜8℃で冷蔵保存された。イリノテカンは、20mg/mLの濃度で、既製のイリノテカン塩酸塩三水和物を含有する静脈注射用の滅菌溶液として得た。1群(サイクル1および2のみ)における動物への投与用のイリノテカン製剤(0.5mg/mL)は、5%デキストロース注射液で20mg/mLの製剤を希釈することにより、USPを達成された。投与製剤を、冷蔵保存し(2から8℃)、遮光し、48時間以内に使用した。
以下のプロトコルを使用した。本手順は、10mLの調製用である。本手順は、必要に応じて計測されてもよい。
1. 450mgのソルビトールおよび9mgの乳酸を正確に重さを量る/測定し、適切な大きさの容器に入れる。
2. 容器に最終体積の約90%まで注射用の滅菌水を徐々に加える。よくかき混ぜる。
3. pHを測定する。必要に応じて、水酸化ナトリウム、および/または塩酸を伴い、pHを3.0〜3.8に調整する。
4. 最終体積に十分な質。よくかき混ぜる。
以下のプロトコルを使用した。
1. 適切な量のイリノテカン塩酸塩を正確に重さを量り、適切な大きさの容器に入れる。
2. 媒体溶液の適切な体積(最終体積の約90%)を試験物質の粉末に加える。イリノテカン塩酸塩が完全に溶解されるまで、撹拌プレート上でかき混ぜる。水浴(すなわち、45〜55℃)または短期の超音波処理が、溶解を促進するために使用されてもよい。
3. pHを測定する。必要に応じて、水酸化ナトリウム、および/または塩酸を伴い、pHを3.0〜3.8に調整する。
4. 最終体積に十分な質量。よくかき混ぜる。
5. 上記の溶液は、0.22μmのフィルターにて滅菌容器に滅菌濾過される。複製試料(各1.0mL)は、得られ、出荷まで、冷凍保存(約−80℃)される。貯蔵溶液は、調製後直ちに使用されない場合、冷蔵保存(2〜8℃)され、調製してから1週間以内に使用される。
6. 動物への投与用の製剤は、5%デキストロース注射液で貯蔵剤希釈することにより、USPを達成される。投与製剤を、冷蔵保存し(2から8℃)、遮光し、48時間以内に使用した。
治療開始で5から7月齢で、治療開始で6〜9kgの体重がある21匹の雄および2匹の予備の雄の全部を商業用供給者(例えば、Marshall BioResources,North Rose,New York)から得た。動物は、動物の受け取りと処置の開始の間で順応させ、研究の開始まで、1群のために約3週間、2から4群のために5週間、5から7群のために約3週間前に、実験室環境に犬を慣れさせた。それぞれの犬は、必要に応じて、採水器で補充される自動給水システムを装備したステンレス製のケージに収容された。それぞれのケージは、研究、群、動物数、性別、および用量レベルを示す色分けされたケージカードで明確に表示された。それぞれの動物は、1つの耳介の腹側面上に入れ墨によって供給者により独自に識別された。動物の部屋環境は、指定された手順の間を除いては、制御された(標的範囲:温度21±3℃、相対湿度50±20%、12時間昼、12時間夜、1時間ごとに10〜15の換気)。温度および相対湿度は、継続的に観察され、毎日、4回記録された。
前処置期間中、すべての犬は、処置を開始する約2〜3週間前に、手術の準備がなされた。これらの動物には、外科的処置前に一晩餌を与えず、静脈内カテーテルを挿入するために手術の朝には水を除去した。犬は、手術部位の前処理用に前麻酔のカクテル(例、ブトルファノール、アセプロマジン、およびグリコピロレート)を用いて筋肉注射で注入された。手術前および手術中、動物は、イソフルラン吸入で麻酔された。医療グレードのチューブの長さからなる静脈内カテーテルを大腿静脈に挿入し、大静脈に促した。カテーテルは、鼠径部から背頸部に皮下トンネルを形成するトロカールを使用して首の上頸で露出させた。麻酔からの回復中、それぞれの動物は、清潔なジャケットを着用させた。カテーテルは、ジャケットおよびテザー系を介してスイブルデバイスに装着され、医療グレードのチューブの別部分で注射器に接続された。ポンプおよび容器は、ケージの外に設置された特別に設計された箱に含まれた。
1群の動物のために、試験物質1番(イリノテカン)での処置は、3つのサイクルからなる。サイクル1では、イリノテカンは、5日間連続で、9日間の休息期間を伴い、埋め込み型カテーテルを介して1時間の注入による4mg/kg/日の用量レベルで投与された。サイクル2では、イリノテカンは、4日間連続で、埋め込み型カテーテルを介して1時間の注入により4mg/kg/日の用量レベルで投与され、5日間の休息期間の前に、5日目に埋め込み型カテーテルを介してボーラス注射(約1分間にわたり)により8mg/kg/日の用量レベルで投与した。サイクル3では、1匹の予備動物を1群に加えた。イリノテカンの製剤は、イリノテカン塩酸塩の粉末で調製され、5日間連続で、埋め込み型カテーテルを介してボーラス注射により4mg/kg/日の用量レベルで4匹の動物に投与された。2から4、6、および7群の動物のために、イリノテカン塩酸塩の粉末で調製されたイリノテカンの製剤は、28日間の研究期間、最高2回の処置サイクルで、埋め込み型カテーテルにより投与された。それぞれの処置サイクルにおいて、動物は、治療を行わない9日間の休息期間の前に、5日間連続で、毎日1回の6mg/kgの服用で処置された。イリノテカンに対する対照/媒体物質は、イリノテカン投与の同一の投与手順に従い、5群におけるすべての犬に投与された。用量体積は、1群のサイクル1およびサイクル2の開始から4日では、8mL/kgであり、1群のサイクル2の最終日では、2mL/kgであり、2から4、6および7群では、3mL/kgであった。それぞれの犬に注入される実体積は、それぞれの動物の最新の実際の体重に基づいて算出され、調整された。
図19に示されるように、化合物552、強力かつ選択的なモチリンアンタゴニストは、現在の標準的治療に対して、犬におけるイリノテカン誘発性のCIDの処置において優良な有効性を示した。該化合物はまた、より速い発現で、作用の持続時間が長く、さらに有効であることが証明された。
シトクロムP450酵素は、薬物のI相の代謝に関わっている。薬物薬物相互作用の大部分は、代謝ベースであり、さらに、これらの相互作用は、典型的に、シトクロムP450の抑制を伴う。6つのCYP450酵素(CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、およびCYP3A4)は、ほとんどの薬物の代謝および関連の薬物薬物相互作用に対して一般に関与するように思われる。シトクロムP450の代謝酵素の様々な代謝的に重要なイソ型への本発明の化合物の結合を測定するための分析は、例えば、NoAb BioDiscoveries(Mississaugua,ON,Canada)およびAbsorption Systems(Exton,PA,USA)で市販されている。なお、多くの適切な方法は、文献において記載、または概説されている(White,R.E.Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.2000,40,133−157;Li,A.P.Drug.Disc.Today 2001,6,357−366;Turpeinen,M.;Korhonen,L.E.Tolonen,A.;et al.Eur.J.Pharm.Sci.2006,29,130−138)。
・分析は、個々のヒトCYP−450サブタイプを発現する昆虫細胞から調製されたミクロゾーム(Supersomes(登録商標),BDGentest,Becton−Dickinson)上で実施された、具体的には、
− CYPサブタイプ:1A2、2A6、2B6、2C8、2C9、2C19、2D6、2E1、3A4
− 2つの基質が、複雑な抑制反応速度論を示す酵素としてCYP−3A4に対して一般的に試験される。
・蛍光検出を介して分析は、特異的CYP基質でのミクロソームの培養後、蛍光代謝体の形成を観察した。
・本発明の化合物は、3倍の連続希釈法を使用して8つの試験濃度(0.0457から100μMの濃度範囲)で複製試料において試験された。
・それぞれのCYP−450酵素のために、特異的阻害剤は、陽性対照として8つの濃度で複製において試験された。
・50%(IC50)で代謝物生成を抑制した阻害剤または試験化合物の濃度は、抑制率に対するログ濃度(M)曲線の非線形回帰分析で算出された。
薬物の薬物動態および薬理学的特性は、主として、アルブミンおよびα1−酸性糖タンパク質等の血漿または血清タンパク質への薬物の可逆的結合の機能である。一般に、非結合の薬物のみが細胞膜をわたって拡散または輸送、および薬理学的標的での相互作用に使用可能である。他方では、低血漿タンパク質結合を有する薬物は、非結合薬物のみが、糸球体濾過、時には、肝クリアランスに使用可能であるため、通常、大量の分布および迅速なクリアランスを有する。従って、血漿タンパク質結合の限度は、有効性、分布、および排出に影響を及ぼし得る。血漿タンパク質結合の理想的範囲は、ほとんどの薬物製品に対して87〜98%である。
ヒト結腸直腸癌に由来しているCaco−2細胞株は、ヒト腸にわたり薬物吸収の予想のための構築された体外モデルになっている(Sun,D.;Yu,L.X.;Hussain,M.A.;Wall,D.A.;Smith,R.L.;Amidon,G.L.Curr.Opin.Drug Discov.Devel.2004,7,75−85;Bergstrom,C.A.Basic Clin.Pharmacol.Toxicol.2005,96,156−61;Balimane,P.V.;Han,Y.H.;Chong,S.AAPS J.2006,8,E1−13;Shah,P.;Jogani,V.;Bagchi,T.;Misra,A.Biotechnol.Prog.2006,22,186−198)。半透性の膜上に培養される場合、Caco−2細胞は、顕著な小腸円柱上皮との形態および生化学的な類似点を有する高度に官能基化された上皮バリアに分化する。十分に分化した細胞単分子層は、新規化合物の膜輸送特性を評価するために使用され得る。さらに、Caco−2細胞輸送研究から得られた見掛け透過係数(Papp)は、ヒト腸内吸収と適度に相関があることを示されている。
Caco−2細胞層にわたる透過性は、2つ(ドナーおよびアクセプタ−)の室の間に設置された膜上で細胞を増殖させることにより測定された。薬物候補は、細胞層の先端(A)側に典型的に加えられ、基底外(B)側の外観は、培養時間にわたり測定される。本方向の透過性は、腸内吸収を示す。透過性はまた、Caco−2細胞の基底外側から先端側まで測定され得る。担体輸送の指標は、基底外側から先端のPappと比較して、先端から基底外側のPappがより高い。先端から基底外側のPappに対して基底外側から先端のPappの方が高いことが観察される場合、P−gp媒介輸送が提案される。
本発明の化合物の薬物動態学的挙動は、当業者に周知の方法で確認され得る(Wilkinson,G.R.“Pharmacokinetics:The Dynamics of Drug Absorption,Distribution,and Elimination”in Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics,Tenth Edition,Hardman,J.G.;Limbird,L.E.,Eds.,McGraw Hill,Columbus,OH,2001,Chapter1)。以下の方法は、本発明の化合物の静脈内、皮下、および経口投与のための薬物動態パラメーター(排出半減期、全血漿クリアランス等)を調査するために使用された。
ラット:雄、Sprague−Dawley(約250g)
ラット/処置群:6(それぞれ3匹のラットからなる2つのサブセット、代替種)
試験化合物のそれぞれの試料は、投与に適している製剤(シクロデキストリン等を有する)において、溶液に送られた。本プロトコルへの適切な修正が、分析下で、化合物の特性を適切に試験するために必要とされるように作製され得ることを当業者は理解するであろう。
1. 静脈(i.v.):2mg/kg
2. 皮下(s.c):2mg/kg
3. 経口(p.o.):8mg/kg
1. すべての投与群に対する同一プロトコル
2. それぞれの群のために、3匹のラット/サブセットの2つのサブセット(AおよびB)
カラム:WatersからのAtlantis dC18(2.1×30mm)
移動相:
A:95%MeOH、5%水、0.1%TFA
B:95%水、5%MeOH、0.1%TFA
流速:0.5mL/分
勾配(線状):
上述の研究は、モチリンがウサギの胃前庭部(Van Assche,G.;Depoortere,I.;Thijs,T.;Janssens,J.J.;Peeters,T.L.Concentration−dependent stimulation of cholinergic motor nerves or smooth muscle by [Nle13]−motilin in the isolated rabbit gastric antrum.Eur.J.Pharmacol.1997,337,267−274.)から、または上記の方法3−Dに記載されるように、環状筋から摘出された平滑筋片における収縮性活性を刺激することが示されている。モチリン(10−8Mの閾値濃度)は、コリン作動性神経伝達での神経節相互作用後により電場刺激(4Hz)で誘発された収縮性を増強する。濃度が高くなると、モチリンは、膣の平滑筋と直接相互作用する持続性収縮を生じる。同様に、モチリンおよび[Nle13]−モチリン(Calbiochem)の効果は、モチリン受容体の選択的なアゴニストとして、トガリネズミの胃前庭部、十二指腸の環状筋、および結腸から摘出された平滑筋片上で調査された。免疫組織化学研究は、ジャコウネズミの胃腸管における内分泌細胞は、モチリンを発現することが示されている(Kanamori,Y.;Nakazawa,S.;Kitoh,J.;Hoshino,M.The distribution of endocrine cells in the mucosa of the gastrointestinal tract of the house musk shrew,Suncus murinus(Insectivora).Cell.Tissue Res.1989,258,365−71;Kitamura,N.;Yamada,J.;Watanabe,T.;Yamashita,T.An immunohistochemical study on the distribution of endocrine cells in the gastrointestinal tract of the musk shrew,Suncus murinus.Histol Histopathol.1990,5,83−88)。トリネズミは、8〜10時間絶食させ、CO2吸入で安楽死させ、胃、十二指腸、および結腸を直ちに摘出し、95%O2および5%CO2で通気したKrebsバッファーに入れた。特に、粘膜がない環状筋片を、解剖顕微鏡を使用して、膣領域、十二指腸、および結腸を摘出した。等尺性収縮は、PowerLabデータ収集システムを使用して、器官槽内で、最適な張力で平衡を記録された。電場刺激(EFS:0.5msのパルス幅、1〜32Hzのパルス周波数)を神経的に媒介された濃度を誘発するために使用した。特に、4つの結腸部分(10〜12mm)は、それぞれの動物から用意された。該部分を、10mLの器官槽で1gの初張力で懸濁し、90分間平衡した。実験は、a)自発的な一過性収縮の自然張力(basal tone)および進行;b)EFSで誘発された神経的媒介の収縮反応における、モチリンおよび[Nle13]−モチリン(10−9−10−7M)の効果を調査するために実施された。0.3μMの浴濃度で適用されたモチリンまたは[Nle13]−モチリンで誘発された収縮性の効果は、処置開始から4分以内に、最大値に達し、8〜10分以内に減少した。結果は、モチリン受容体がトガリネズミの胃腸筋収縮性の調整に関与することを確定する。
動物モデルは、異なる様式、特に、ストレスまたはPGE2において誘発された下痢の進行からなる症状または予防の改善における本発明の代表的化合物での処置の効果を調査するために使用され得る。ラットおよびマウスは、モチリン受容体を発現しないため、ジャコウネズミ(スンクス(Suncus murinus))は、モチリン受容体を発現し、本研究に適しているある適切な動物モデルである。さらに、フクロネズミ、ウサギ、または豚も、本評価型の適した動物モデルである。
実験用のジャコウネズミ(スンクス(Suncus murinus))が本研究で使用された。ジャコウネズミは、社会集団で生活せず、一緒に入れた場合、攻撃的な行動を有するため、動物は、寝床用にマツの木の削りくずおよび細断された紙を有するプレキシガラス(Plexiglas)ケージに単独で収容した(適切な取り扱い手順に関しては、Temple,J.L.The musk shrew(Suncus murinus):a model species for studies of nutritional regulation of reproduction.ILAR J.2004,45,25−34を参照)。研究を通して、温度は、70〜72oFで保たれ、14:10時間(昼:夜)サイクルを維持した。トガリネズミは、夜明けおよび夕暮れで最も活動的であるため、実験は、light−on相の第1の時間以内に開始された。飼料および水は、種の要件に従い、随意に提供された:飼料:3部のPurina Cat Chowおよび1部のMink Chow(例えば、Wisconsin「Mink Complete Pellets−Grow−Fur」:粗タンパク質<34%、粗脂質>20%、粗繊維>4%)。飼料は、ケージ内の小型プラスチック皿に置かれた。水:水道水の供給の汚染を減らすために弱酸性(pH5.5)の蒸留水。ケージおよび採水器は、週ごとに交換した。すべての動物は、研究を開始する少なくとも1週間前に動物施設に順応させた。
まず、トガリネズミにおける正常の飼料摂取量および糞粒の排せつ量に関する情報を得た。動物は、取り扱いに順応させ、日常の飼料摂取量および糞粒の排せつ量を1群の12匹のトガリネズミにおいて測定した。動物は、家庭用のケージで研究室に持ち込まれ、3時間放置した。本期間中、それぞれの動物は、ケージから出され、折り畳まれたタオルで覆われた。背上部の皮膚は、皮下注射を投与するために使用される手順を模倣するために、穏やかに押され、持ち上げられた。その後、動物は、家庭用ケージに戻され、糞粒の排せつ量を2時間観察した。データは、PGE2誘発性の排便のモデルを構築する場合、実験未使用の動物の参照としての役目を果たした。取り扱いに順応させてから、トガリネズミは、2つの群(群あたりn=6)に無作為に割り当てられ、下痢を連想させる糞粒の排せつ量を誘発する異なる手順に従った。第1の群において、トガリネズミを室温で個々の拘束ケージに入れた。糞の排せつ量(糞粒の数)を固定化してから1時間、拘束ストレス後1時間以内に測定した。一貫性を3レベルの採点システム:0、正常;1、軟;2、形を成さない、を使用して評価した(Saito,T.;Mizutani,F.;Iwanaga,Y.;Morikawa,K.;Kato,H.Laxative and anti−diarrheal activity of polycarbophil in mice and rats.Jpn.J.Pharmacol.2002,89,133−141)。第2の群において、糞の排せつ量の増加をPGE2の投与(0.3mg/kg、腹腔内)で誘発し、便の硬さの変化を2時間観察した。便の硬さを3レベルの採点システムを使用して評価した。マウスにおけるSaitoにより得られた文献結果に基づいて、軟便または形を成さない便は、PGE2投与してから15〜30分以内に生成されるべきである。PGE2投与から下痢の誘発までに測定された時間(軟性の水様便の第1の出現)も記録された。さらに、糞粒の湿重量/乾重量の割合をPGE2の投与または拘束の前後で測定した。
すべての値は、それぞれの処置群に対する8つの成功した実験から平均値±SEを示す。値の統計的有意性は、一元分散分析(one−way ANOVA)およびダネット多重比較テスト(Dunnett´s multiple−comparison test)(媒体対照との差異)で決定した。<5%(p<0.05)の確率は、有意であると見なされる。
炎症、特に、炎症性疾患および胃腸管の疾患の多くの動物モデルは、当技術分野において定着しており、胃腸の炎症の治療における本発明の代表的化合物を評価するために使用され得る(Wirtz,S.;Neurath,M.F.Int.J.Colorectal.Dis.2000,15,144−160;Powrie,F.;Ulbig,H.Novartis Found.Symp.2004,263,164−178;Jurjus,A.R.;Khoury,N.N.;Reimund,J.−M.J.Pharmacol.Toxicol.Methods 2004,50,81−92;Eckmann,L.Ann.NY Acad.Sci.2006,1072,28−38;Byrne,F.R.;Viney,J.L.Curr.Opin.Drug Disc.Develop.2006,9,207−217)。
本発明に従い、本発明の大環状化合物またはその薬理学的に許容される塩は、様々な剤形の医薬組成物に調合され得る。本発明の医薬組成物を調製するために、活性成分として、光学異性体、鏡像体、ジアステレオマー、ラセミ化合物、もしくは立体化学的混合物、またはその薬学的に許容される塩を含む、1つ以上の化合物は、製剤処方の分野の当業者に周知の手法に従い、適切な担体と添加物で密に混合した。
本発明の式Iの化合物は、運動過剰または高モチリン血症(hypermotilinemia)により特徴付けられる一連の消化器疾患の予防および治療のために使用され得る。
Boc−Dap(チアゾール−2−イル)の合成のための標準的な手順(Boc−AA1、図1)
ステップ1−1.[2−ヒドロキシ−1−(メトキシ−メチル−カルバモイル)−エチル]−カルバミン酸tert−ブチルエステル(AA1−1)。DMF(40mL)中のBoc−Ser−OH(AA1−0、3.0g、0.015mol)の溶液に、DIPEA(2.6mL、15.0mmol)およびHBTU(5.53g、15.0mmol)を添加した後、混合物は、均一溶液を得るまで、室温で撹拌した。その後、N,O−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(1.60g、16.5mmol)およびDIPEA(2.85mL、16.0mmol)を添加した。溶液を室温で一晩撹拌した。混合物を、0℃で、NaHCO3飽和水溶液の添加で反応停止した後、酢酸エチルで抽出した。有機相をNa2SO4で乾燥させ、乾燥するまで減圧下で濃縮した。溶離液として酢酸エチルを使用し、フラッシュクロマトグラフィーは、収率85%のAA1−1を供給した。
TLC(100%酢酸エチル):Rf=0.40(CMA)。
TLC(石油エーテル/酢酸エチル 8:2):Rf=0.30(CMA)
TLC(酢酸エチル:メタノール、8:2):Rf=0.40(CMA);
1H NMR(CD3OD):δ1.28(s,9H)、4.48(m,2H)、4.63(m,1H)、5.30(s,2H)、7.09(m,1H)、7.34−7.39(m,4H)、7.47(m,1H);
LC−MS(Grad_A4):tR=7.67分;C19H23N3O6Sに対し計算した質量:421.4674、結果:421
Boc−イミダゾール−1−イル−Ala(AA2)の合成のための標準的な手順
TLC(Hex/EtOAc、60/40):Rf=0.55(CMA)
TLC(酢酸エチル:メタノール:水、8:2:1):Rf=0.30(CMA);
1H NMR(D2O):δ1.20(s,9H)、4.20(m,2H)、4.50(M,1H)、7.30(s,1H)、7.32(s,1H)、8.50(s,1H);
LC−MS(Grad_A4):tR=3.02分;C11H17N3O4に対し計算した質量:255.2704;結果:255。
Boc−ピラゾール−1−イル−Ala(AA3)の合成のための標準的な手順
TLC(酢酸エチル:メタノール、8:2):Rf=0.30(CMA);
LC−MS(Grad_A4):tR=5.14分;C11H17N3O4に対し計算した質量:255.2704、結果:255。
Ddz−Dap(Boc−Me)−OHの合成のための標準的な手順(Ddz−AA4、図2)
ステップ4−1.Z−セリン−β−ラクトン(AA4−2)。本中間体は、Boc誘導のAA3−1のために上述に記載の類似した方法において、調製された。機械撹拌機を装備する乾燥した250mLの3口フラスコに、窒素雰囲気下で、トリフェニルホスフィン(4.5g、17.1mmol、1.1当量)、100mLの無水THF:CH3CN(1:9)の溶媒混合物の順次で加えた。混合物を、溶液を得るまで撹拌した後、−55℃(浴温)まで冷却し、ジメチルアゾジカルボン酸(DMAD、1.9mL、17.1mmol、1.1当量)を10分間にわたり滴下した。添加が完了した後、混合物を20分間撹拌した後、50mLの無水THF:CH3CN(1:9)中のZ−Ser−OH(AA4−1、3.7g、15.5mmol、1.0当量)の溶液を30分間にわたり滴下した。反応混合物を−55℃で1.5時間撹拌した後、冷却槽から除去し、溶液を室温までゆっくり温めた。混合物が室温に達すると、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られる黄色油をフラッシュクロマトグラフィー[勾配、ヘキサン/EtOAc、(80:20)〜(60:40)]で精製し、収率72%の白色固体として、2.5gのAA4−2を得た。原油の精製は、分解を避けるために、同日に優先的に行われる。DCMは、残渣の可溶化を促進するために添加され得る。
TLC(ヘキサン/EtOAc(60/40):Rf=0.55(UV、CMA)
1H NMR(DMSO−d6):δ12.65(s,1H)、7.45−7.35(dd,1H)、6.50(s,2H)、6.35(2,1H)、4.10(q,1H)、3.70(s,6H)、3.65−3.55(dd,1H)、3.25−3.15(dd,1H)、2.75(d,3H)、1.60(d,6H)、1.35(s,9H)。
フラグメントF1の合成のための標準的な手順(図3)
ステップ5−1.3−(3−フルオロフェニル)−2−ヒドロキシ−プロピオン酸ベンジルエステル(F1−2)。亜硝酸ナトリウム(3.77g、54.6mmol)を、熱電対を担持するために氷水中への浸水により室温で維持される酢酸(82mL)中のL−3−フルオロフェニルアラニン(F1−1、5.0g、27.3mmol)の溶液に数回加えた。溶液を室温で1時間撹拌した後、減圧下で濃縮した。その後、水を残渣に加え、生成物をEt2Oで抽出し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、2.57g(42%)の対応する酸を得た。粗生成物をトルエン(120mL)に溶解した後、p−トルエンスルホン酸(pTSA、216mg、1.14mmol)およびBnOH(5.62mL、56.9mmol)を加え、溶液をDean−Stark装置で一晩還流した。得られる溶液を室温まで冷却し、減圧下で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー(勾配、100%ヘキサン〜ヘキサン/酢酸エチル、4/1)で精製され、不純な留分(3.14g)と共に1.63g(52%)のベンジルエステルF1−2を得た。
TLC:Rf=0.5(4/1ヘキサン/酢酸エチル);
1H NMR(CDCl3):δ2.77(br s,1H,OH);2.95(dd,J=4.39および13.67Hz,1H,CH 2CHOH);3.11(dd,J=6.45および13.78Hz,1H,CH 2CHOH);4.48(m,1H,CH2CHOH);5.18(s,2H,PhCH 2O);6.86−6.93(m,3H);7.17〜7.20(m,1H);7.31〜7.39(m,5H);
LC−MS(Grad_A4):tR=7.16分;(M+Na)+297。
1H NMR(CDCl3):δ1.01(d,J=6.7Hz,3H,CH 3CH);1.02(d,J=6.7Hz,3H,CH 3CH);1.22〜1.28(m,1H);1.43(s,9H,(CH3)3C);2.01〜2.16(m,1H,CHCH(CH3)2);3.79〜3.84(m,1H);3.99〜4.03(m,1H);4.08〜4.15(m,2H);5.04(br.S,1H);5.12(s,2H,PhCH 2O);5.28(d,J=9.4Hz,1H);6.83(d,J=8.2Hz,1H);6.90(t,J=7.6Hz,1H);7.21〜7.37(m,7H);
LC−MS(Grad_A4):tR=12.45分、(M+H−Boc)+367。
1H NMR(CDCl3):δ0.99(d,J=6.39Hz,6H,(CH 3)2CH);1.44(s,9H,(CH 3)3C);1.79(quint.,J=6.45Hz,(CH3)2CH);2.66(t,J=7.62Hz,2H);2.98〜3.00(m,1H);3.09〜3.11(m,2H);3.80(t,J=8.21Hz);3.99(dd);5.04〜5.06(m);6.82〜6.91(m,2H);7.11〜7.18(m,2H)。
フラグメントF2の合成のための標準的な手順
関連フラグメントF2は、図4に例示されるように、フラグメントF1に記載の同一の合成経路に従い、作製された。
保護されたテザーDdz−T38(S)の合成のための標準的な手順(図5)
ステップ7−1.ヨードアルコールT38−2(S)。アセトン(150mL)中の2−ヨードフェニル(T38−1、19.0g、86.2mmol、1.0当量)の溶液に、炭酸カリウム(13.1g、94.8mmol、1.1当量)、(S)−(−)−酸化プロピレン(T38−A、30.1mL、0.431mol、5.0当量)の順次で加えた。混合物を密閉された高圧フラスコ内で75℃で一晩撹拌した。混合物を室温まで冷却し、濾過し、フィルターをアセトンで2回洗い流した。混合した濾液およびすすぎ水を減圧下で濃縮し、得られる残渣をEt2O(150mL)に溶解した。有機層を1N NaOH(3×100mL)および塩水(2×100mL)で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させ、定量的収率において、黄色油として、23.9gのT38−2(S)を得た。本ステップにおいて、(R)−(+)−酸化プロピレンの使用は、同一の手順を介して鏡像異性体の保護されたテザー[Ddz−T38(R)]の形成をもたらす。
1H NMR(CDCl3):δ7.20−7.10、(m,2H)、6.95−6.80(m,2H)、6.55(bs,2H)、6.35(s,1H)、5.18(bt,1H)、4.12(m,1H)、3.95(m,2H)、3.80(s,6H)、3.15(bq,2H)、2.65(t,2H)、1.98(bs,2H)、1.65(bs,6H)、1.25(m,3H)。
13C NMR(CDCl3):δ160.8、156.6、155.8、149.6、130.4、127.5、121.3、111.7、103.2、98.4、80.7、73.5、66.6、55.5、40.2、30.5、29.3、29.1、27.3、19.5。
LC−MS(Grad_A4):tR=8.46分
さらに、保護されたテザーの誘導体T92およびT93は、それぞれ、3−フルオロ−2−ヨードフェニルおよび6−フルオロ−2−ヨードフェニル、または対応する2−ブロモフェノールを根幹として、実施例7の誘導体に対して類似の方法を使用して得られ得る。
保護されたテザーBoc−T81(1R,8S)の合成のための標準的な手順(図6)
ステップ8−1.3−(2−メトキシ−フェニル)−2−メチル−アクリル酸エチルエステル(T81−2)。THF(746mL)中の水酸化ナトリウム(油中65%、26.4g、661mmol、ヘキサンで十分に洗浄し、油を除去した)の懸濁液に、0℃で、(EtO)2P(O)CH(Me)CO2Et(144mL、661mmol)を加えた。混合物を室温で30分間撹拌した後、溶液を0℃まで冷却し、アルデヒドT81−1(60.0g、441mmol)をゆっくり加えた。反応物を一晩撹拌し、TLC[(酢酸エチル:ヘキサン、2:7)、Rf=0.49(UV、CMA)]によって観察された。塩化アンモニウム飽和溶液を加え、水相をEt2O(3×)で抽出し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン、2/8)で精製し、黄色油としてT81−2(収率97〜100%)を得た。
1H NMR(CDCl3):δ0.9(d,3H)、1.25(d,3H)、1.42(s,9H)、1.90(m,1H)、2.30(m,1H)、2.80−3.05(m,4H)、3.82(m,1H)、4.01(m,1H)、4.25(m,1H)、6.85(m,2H)、7.15(m,2H);
LC−MS(Grad_A4):tR=8.52分;結果質量:323;
13C NMR(CDCl3):δ19.01 29.10、35.10、36.20、38.10、46.20、62.20、70.00、80.10、115.20、120.15、128.10、130.00、132.10、158.50。
本発明の化合物の溶液相合成の一般的手順
A.)フラグメント1合成
ステップ9−1.Dean−Stark装置を装備する丸底フラスコにおいて、トルエン(0.2molあたり1L、手順における溶媒/洗浄量は、縮小拡大されれる)中のアミノ酸G−1(0.2mol、1.0当量)に懸濁された。p−トルエンスルホン酸(pTSA、1.2当量)およびベンジルアルコール(5.0当量)を加え、混合物を16〜18時間、還流撹拌した。混合物を室温まで冷却し、白色沈殿物を形成した。沈殿物をMTBE(500mL)で希釈し、濾過し、MTBE(3×500mL)で粉砕された。固体を高真空下で、16〜18時間乾燥させ、中間型トシラート塩を得た。
ステップ9−6.アミノ酸ベンジルエステル塩(G−8、1当量、15mmolの縮尺で記載)のために、固体を1M Na2CO3(50mL)水溶液に吸収した。塩基性水相をEtOAc(4×50mL)で抽出し、混合した有機相を塩水(1×600mL)で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、高真空下で4〜6時間乾燥させ、遊離アミノエステルG−9を得た。
ステップ9−8.無水THF/DCM(1:1)(10mL、1.50mmolのために記載)中の酸フラグメントG−7(1.0当量)およびジペプチド塩酸塩G−11(1.05当量)の溶液に、0℃でDIPEA(5.0当量)、HATU(1.05当量)の順次で加えた。混合物を0℃で1時間撹拌し、室温まで温め、窒素下で16〜18時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をEtOAc(50mL)に溶解した。有機相を水性クエン酸塩緩衝剤(1M、pH3.5)(2×25mL)、NaHCO3(2×25mL)飽和水溶液、塩水(1×25mL)の順次で連続して洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィーで精製し、所望の保護されたアルキル化トリペプチドG−12を得た。
化合物552の合成のための標準的な手順(図9)
ステップ10−1.H−(D)Tyr−Omeの塩素化。氷酢酸(550mL)中のH−(D)Tyr−OMe(遊離塩基、10−1、0.11mol、21.7g)の溶液に、5℃でSO2Cl2(12.1mL、0.15mmol、1.35当量)を滴下した。1時間撹拌後、Et2Oを加え、生成物を沈殿した。それを濾過し、Et2Oで洗浄し、20.8g(85.4%)の10−2を得た。
LC−MS(UV,CLND,ELSD):98.2/98.4/99.4;tR=3.39分、(M+H)+229。
1H NMR(CDCl3):構造で一致
LC−MS(UV,CLND,ELSD):94.2/95.2/100;tR=8.88分、(M+H)+624
LC−MS(UV,CLND,ELSD):91/80/100;tR=14.53分、(M+H)+229
LC−MS(UV,CLND,ELSD):65/98/100(16%ベンゾチアゾール付加物残留、tR=5.05分):tR=6.48分;(M+Na)+507。
LC−MS(UV,CLND,ELSD):90.7/100/98.7;tR=11.33分;(M+H)+761。
LC−MS(UV,CLND,ELSD):92.9/100/98.6;tR=5.84分;(M+H)+586。
1H NMR:構造で一致
LC−MS:tR=5.86分;(M+H)+272。
代表的化合物556の合成のための標準的な手順(図10)
A.)AA 1 −テザーフラグメント合成
ステップ11−1.Dean−Stark装置を装備する丸底フラスコにおいて、トルエン(1L)中のH−(D)Phe(3F)−OH(11−1、35.6g、194mmol、1.0当量)を懸濁した。para−トルエンスルホン酸(44.3g、233mmol、1.2当量)、ベンジルアルコール(101mL、970mmol、5.0当量)を加え、混合物を16〜18時間還流撹拌した。混合物を室温まで冷却し、白色沈殿物を形成した。沈殿物をMTBE(500mL)で希釈し、濾過し、MTBE(3×500mL)で粉砕された。固体を高真空下で16〜18時間乾燥させ、白色固体として、トシラート塩(85.1g、98.6%)を得た。
TLC[ヘキサン:EtOAc(1:1)]:Rf=0.30(UV,CMA)。
TLC[ヘキサン:EtOAc(1:1)]:Rf=0.67(UV,CMA)。
TLC[ヘキサン/EtOAc(1:1)]:Rf=ベースライン(UV,CMA);
LC−MS(Grad_A4):7.04分。
ステップ11−6.市販のH−Leu−OBnトシラート塩(11−8、6.1g)を1M Na2CO3水溶液(50mL)に吸収した。塩基性水相をEtOAc(4×50mL)で抽出し、混合した有機相を塩水(1×580mL)で洗浄し、MgSO4で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、真空下で4〜6時間乾燥させ、黄白色の油として、遊離アミノエステル11−9(3.44g、100%)を得た。
TLC[ヘキサン/EtOAc(1:1)]:Rf=0.40(UV,CMA)。
TLC[ヘキサン:EtOAc(1:1)]:Rf=ベースライン(UV,ニンヒドリン);
LC−MS(Grad_A4):6.59分。
ステップ11−8.無水THF:DCM(1:1、10.5mL)中の11−7(750mg、1.58mmol、1.0当量)および11−11(591g、1.66mmol、1.05当量)の溶液に、0℃でDIPEA(1.4mL、7.9mmol、5.0当量)、HATU(631mg、1.66mmol、1.05当量)の順次で加えた。混合物を0℃で1時間撹拌し、室温まで温め、窒素下で16〜18時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をEtOAc(50mL)に溶解した。有機相を水性クエン酸塩緩衝剤(1M、pH3.5、2×25mL)、NaHCO3飽和水溶液(2×25mL)、塩水(1×25mL)の順次で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥させ、濾過した後、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー[勾配、ヘキサン:EtOAc(75:25)〜ヘキサン:EtOAc(6:4)]で精製し、黄白色の粘着性固体として、所望の保護されたアルキル化トリペプチド11−12(988mg、81%)を得た。
TLC[ヘキサン/EtOAc(1:1)]:Rf=0.43(UV,CMA)。
TLC:[ヘキサン/EtOAc(1:1)]:Rf=ベースライン(UV,CMA)。
TLC:[EtOAc:MeOH(9:1)]:Rf=ベースライン(UV,ニンヒドリン);
TLC[EtOAc/MeOH(9:1)]:Rf=0.45(UV,CMA);
LC/MS(Grad_B4):10.88分。
イミダゾリニルおよび大環状ジヒドロピリミジニルの合成のための標準的な手順
グアニジニル大員環の合成のための標準的な手順
TLC[MeOH:DCM(1:9)]:Rf=0.57(UV,CMA)。
大環状シアノグアニジニルの合成のための標準的な手順
Boc−AA5の合成のための標準的な手順(図11)
ステップ15−1.(Panda,G.;Rao,N.V.Synlett 2004,714.)160mLの無水DMF中のBoc−L−Ser−OH(15−1、5.0g、24.5mmol、1.0当量)の撹拌した懸濁液に、室温でN,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA、4.25mL、24.5mmol、1.0当量)を加えた。混合物に、HBTU(9.30g、24.5mmol、1.0当量)、および室温で5〜10分間活発に撹拌した反応物を加えた後、氷水浴で冷却し、N,O−ジメチルヒドロキシルアミンHCl塩(2.65g、27mmol、1.1当量)、N,N−ジイソプロピルエチルアミン(4.70mL、27mmol、1.1当量)の順次で加えた。混合物を1時間撹拌した後、氷浴から除去し、反応物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を0℃まで冷却し、NaHCO3飽和水溶液(200mL)をゆっくり加えた。反応混合物を酢酸エチル(4×200mL)で抽出した。混合した有機抽出物を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー(100%EtOAc)で精製し、無色の固体として、15−2(5.50g、90%)を得た。
TLC(100%EtOAc):Rf=0.40(ニンヒドリン)。
TLC[ヘキサン:EtOAc(1:1)]:Rf=0.5(ニンヒドリン);
1H NMR(CDCl3,):δ1.42(s,9H)、3.21(s,3H)、3.45−3.55(m,2H)、3.75(s,3H)、4.80(m,1H)、5.50(br s,1H);
LC−MS:tR=5.66分;[M+H]+:275。
大員環のBoc保護のための標準的な手順
大環状アジドから大環状アミンの形成のための標準的な手順
モルホリン含有の大員環の合成のための標準的な手順
ピロール含有の大員環の合成のための標準的な手順
ピロリジン含有の大員環の合成のための標準的な手順
5−メチル−トリアゾール含有の大員環の合成のための標準的な手順
4,5−ジメチル−トリアゾール含有の大員環の合成のための標準的な手順
5−メチル−テトラゾール含有の大員環の合成のための標準的な手順
4−アミノメチル−トリアゾール含有の大員環の合成のための標準的な手順
モノメチルアミノ含有の大員環の合成のための標準的な手順
ピリミジン含有の大員環の合成のための標準的な手順
ジメチルアミノ含有の大員環状の合成のための標準的な手順(図12A)
ステップ27−1.TFA(50mL、0.653mol、180当量)中の27−1(ステップ11−2に記載されるものと同様に、Bts−Clでの処置、次いで、標準的な条件下で、Bocの脱保護による、遊離第2級アミンおよび保護された第1級アミンを含む対応する大員環から合成、3.3g、3.63mmol、1当量)の溶液に、室温でポリスチレン(PS)スルホンアミド樹脂(Argonaut Technologies、現在はBiotage ABの一部、Uppsala,Sweden、1.1mmol/g、16.8g、18.2mmol、5当量)を加えた。混合物を70℃で2時間撹拌した。樹脂を濾過し、TFAおよびDCMで数回洗浄した。濾液および洗浄剤を減圧下で除去した。得られる残渣をフラッシュクロマトグラフィー(100%酢酸エチル)で精製し、27−2(収率70%)を得た。
ジメチルアミノ含有の大員環の合成のための追加の標準的な手順(図12B)
ステップ28−1.DCM(2mL)中の538(0.200g、0.352mmol、1当量)の溶液に、室温でトリフルオロ酢酸無水物(TFAA、122μL、0.882mmol、2.5当量)およびトリエチルアミン(TEA、250μL、1.76mmol、5当量)を加えた。反応物を0℃で1時間撹拌した。その後、混合物を10mLのジクロロメタンで希釈し、0.1N HClおよび塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で乾燥するまで濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィー(酢酸エチル:ヘキサン、1:1)で精製し、28−1(収率35%)を得た。
本発明含有のAA1の化合物の脱保護のための標準的な手順
側鎖スルホンアミドの合成のための標準的な手順
TLC[MeOH:DCM(5:95)]:Rf=0.24(UV,CMA)。
側鎖カルボキサミドの合成のための標準的な手順
側鎖アルキルアミンの合成のための標準的な手順
アミジニル含有の大員環の合成のための標準的な手順
テザーBoc−T94(R)の合成のための標準的な手順(図14)
ステップ34−1.3−(2−(R)ヒドロキシエチル−1−オキシ)−2−ブロモピリジン[T94−2(R)]。2−ブロモ−3−ピリジノールT94−1、2.0g、12mmol、1当量)を窒素雰囲気下で、室温でDMF(無水、50mL)に溶解した。炭酸カリウム(1.6g、12mmol、1当量)および(R)−炭酸メチル(1mL、12mmol、1当量)を加え、混合物を15分間活発に撹拌した。その後、反応物を油浴処理をして、85℃まで72時間加熱した。混合物に、100mLの水を加え、水層を酢酸エチル(5×100mL)で抽出した。混合した有機層を塩水(200mL)で洗浄し、MgSO4で乾燥させた。有機層を減圧下で濃縮した。得られる残渣をフラッシュクロマトグラフィー(100%酢酸エチル)に施し、黄白色の油として、T94−2(R)(2.12g、76%)を得た。
TLC(100%酢酸エチル):Rf:0.55(UV,CMA)
TLC(100%酢酸エチル):Rf:0.33(UV,CMA)
TLC(100%酢酸エチル):Rf:0.33(UV,CMA)
1H NMR(CDCl3):δ1.30(d,3H)、1.4(s,9H)、1.90(m,2H)、2.80(m,2H)、3.15(m,2H)、3.80−3.90(m,2H)、4.150(m,1H)、5,01(m,1H)、7.10(m,2H)、8.01(sb,1H)。
13C NMR(CDCl3):δ19.69、28.62、29.77、40.25、66.07、73,62、76.90、77.32、79.18、118.21、122.19、128.80、132.49、140.74、151.63、153.08、156.41。
LC−MS(Condition Grad_A4):tR=4.71分;[M+H]+411。
テザーBoc−T95(R)の合成のための標準的な手順(図15)
配列は、文献に報告された反応の方法論に基づいた(Lin,N.Bioorg.Med.Chem.Lett 1998,8,249−254;Swindell,C.Heterocycles 1986,24,3373−3377;Shimano,Masanao,Tetrahedron Lett.1998,39,4363−4366;Snieckus,V. J.Org.Chem.1985,50,5436−5438)。
LC−MS(Grad B4):tR=4.83分
テザーBoc−T96(R)の合成のための標準的な手順(図16)
配列は、文献に報告された反応の方法論に基づいた(Meana,A.Synlett 2003,1678−1682;Canibano,V.Synthesis 2001,2175−2179)。
ステップ36−4.DIPEA(20mL)中のT96−4(R)(1.25g、3.56mmol)の溶液に、Boc−プロパルギルアミンを加え、混合物をアルゴンで10分間脱気した。その後、トリフェニルホスフィン(121mg)、CuI(29mg)、およびPd(Cl)2PPH3(160mg)を加えた。溶液を70℃で一晩撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られる残渣をフラッシュクロマトグラフィー(勾配、40%〜90% EtOAc/ヘキサン)で精製し、1.3g(80%)のT96−5(R)を得た。
1H NMR(CDCl3):δ1.4(d,CH3)、1.5(s,Boc)、1.8(t,CH2)、2.6(t,CH2)、3.15(t,CH2)、4.0(m,2×CH)、4.3(m,1H)、4.98(1H,NH)、6.8(d,1H芳香族)、8.3(d,1H)、8.4(s,1H芳香族)。
化合物565の合成のための標準的な手順(図17)
ステップ37−1.Boc−T95(R)(901mg、2.90mmol)、トリフェニルホスフィン(762mg、2.90mmol)、およびBts−(D)Phe(3F)−OBn(976mg、2.07mmol)を無水THF(10mL)に溶解した。溶液を氷水浴で0℃まで冷却し、ジイソプロピルアゾジカルボン酸(DIAD、551μL)を滴下した。添加が完了した時点で、混合物を0℃で1時間撹拌した後、室温までゆっくり温め、窒素下で、さらに16〜18時間撹拌した。THFを減圧下で除去し、得られた粗残渣をフラッシュクロマトグラフィー(勾配、50/50 EtOAc/ヘキサン〜80/20 EtOAc/Hex)で精製し、858mgの37−1を得た。本ステップに対する収率は、一般に、80〜90%である。
LC/MS(Grad_B4):tR=5.26分。
PPh3−DIAD付加物の合成
本発明の化合物の代表的製剤の調製
薬物の溶解性を強化するために設計された製剤は、しばしば、経口バイオアベイラビリティと臨床効果の双方の増加をもたらす。最も人気の高い手法は、油(Burcham,D.L.;Maurin,M.B.;Hausner,E.A.;Huang,S.M.Improved oral bioavailability of the hypocholesterolemic DMP 565 in dogs following oral dosing in oil and glycol solutions.Biopharm.Drug Dispos.1997,18,737−742)、界面活性剤分解(Serajuddin,A.T.M.;Sheen,P.−C.;Mufson,D.;Bernstein,D.F.;Augustine,M.A.Effect of vehicle amphiphilicity on the dissolution and bioavailability of a poorly water−soluble drug from solid dispersion.J.Pharm.Sci.1988,77,414−417)、自己乳化性製剤(Charman,S.A.;Charman,W.N.;Rogge,M.C.;Wilson,T.D.;Dutko,F.J.;Pouton,C.W.Self−emulsifying drug delivery systems:formulation and biopharmaceutical evaluation of an investigational lipophilic compound.Pharm.Res.1992,9,87−93;Craig,D.Q.M.;Lievens,H.S.R.;Pitt,K.G.;Storey,D.E.An investigation into the physicochemical properties of self−emulsifying systems using low frequency dielectric spectroscopy,surface tension measurements and particle size analysis.Int.J.Pharm.1993,96,147−155;Shah,N.H.;Carvajal,M.T.;Patel,C.I.;Infeld,M.H.;Malick,A.W.Self−emulsifying drug delivery systems(SEDDS)with polyglycolysed glycerides for improving in vitro dissolution and oral absorption of lipophilic drugs.Int.J.Pharm.1994,106,15−23)、および乳剤(Palin,K.J.;Phillips,A.J.;Ning,A.The oral absorption of cefoxitin from oil and emulsion vehicles in rats.Int.J.Pharm.1986,33,99−104、Kararli,T.T.;Needham,T.E.;Grif謔氏CM.;Schoenhard,G.;Ferro,L.J.;Alcorn,L.Oral delivery of a renin inhibitor Compound using emulsion formulations.Pharm.Res.1992,9,888−893)等の不活性脂質賦形剤(Christopher J.H.Porter & al.Lipid and lipid−based formulation;optimizing the oral delivery of lipophilic drugs.Nat.Rev.Drug.Disc.2007,6,231−246;Aungst,B.J.Novel formulation strategies for improving oral bioavailability of drugs with poor membrane permeation or presystemic metabolism.J.Pharm.Sci.1993,82,979−987)に活性親油性成分を組み込む。
Claims (40)
- 式I
式中、Yは、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2、または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、ここで、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される化合物。 - 前記Arが、
- 前記R1が、メチル、エチル、イソプロピル、およびシクロプロピルからなる群から選択される請求項1に記載の化合物。
- 前記R2が、(CH2)mCH3、(CH2)n1R11、CH2N3、(CH2)n2NR12R13、(CH2)n3C(=NR14)NR15R16、(CH2)n4NR17C(=NR18)NR19R20、および(CH2)n5NHC(=O)NR21R22からなる群から選択され、式中、mは、0、1、2、または3であり、n1、n2、n3、n4、およびn5は独立して、1、2、3または4であり、R11、R13、R16、R17、R20、R21、およびR22は独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R12、R15、およびR19は独立して、水素、低アルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、およびスルホニルからなる群から選択され、R14およびR18は独立して、水素、低アルキル、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、スルホニル、およびシアノからなる群から選択される請求項1に記載の化合物。
- 前記R2が、
式中、Mは、CH2、O、NH、およびNCH3からなる群から選択される請求項1に記載の化合物。 - 前記L1、L2、L3、およびL4が、それぞれCHであり、前記L5がOであり、前記L6がCH2である請求項1に記載の化合物。
- 前記R3、R4、R5およびR6が、それぞれ水素である、または、前記R3がメチルであり、前記R4、R5およびR6が、それぞれ水素である、または、前記R3がヒドロキシメチルであり、前記R4、R5およびR6が、それぞれ水素である、または、前記R3、R4およびR6が、それぞれ水素であり、前記R5がメチルである、または、前記R3およびR5が、それぞれメチルであり、前記R4およびR6が、それぞれ水素である請求項1に記載の化合物。
- 前記Yが、
式中、(L5)および(L6)は、それぞれ前記L5およびL6への結合を示す請求項1に記載の化合物。 - 以下の構造
- 以下の構造
式中、R25は、水素、アルキル、アリール、シクロアルキル、複素環、およびヘテロアリールからなる群から選択され、R26は、水素、アルキル、アリール、アシル、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、スルホニル、およびアミノ酸に使用される標準的な保護基からなる群から選択され、R27は、水素およびアルキルからなる群から選択され、R28は、
式中、Mは、CH2、O、NHおよびNCH3からなる群から選択される化合物。 - 以下の構造
式中、X10およびX11は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
R40、R41、R42、およびR43は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R44は、水素、アルキル、アシル、カルボキシアルキル、カルボキシアリール、スルホニル、およびアミン官能基の標準的な保護基からなる群から選択され、
R45は、水素およびアルキルからなる群から選択され、
R46は、水素、アルキル、アシル、スルホニル、およびヒドロキシル官能基の標準的な保護基からなる群から選択され、
L11、L12、L13、およびL14は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2、または3でなければならず、
L15およびL16は独立して、O、CR47R48、およびNR49からなる群から選択され、式中、R47およびR48は独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R49は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される化合物。 - 以下の構造
式中、PG1は、水素およびアミン官能基の保護基からなる群から選択され、PG2は、水素およびヒドロキシ官能基の保護基からなる群から選択される請求項11に記載の化合物。 - (a)ビルディングブロック構造と、
(b)請求項1に記載の式Iの化合物と
を含む大環状化合物。 - 式Iの化合物を合成するための請求項11に記載の化合物の使用方法。
- (a)請求項1に記載の式(I)の化合物と、
(b)薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と
を含む医薬組成物。 - (a)請求項9に記載の化合物と、
(b)薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と
を含む医薬組成物。 - (a)請求項13に記載の化合物と、
(b)薬学的に許容される担体、賦形剤、または希釈剤と
を含む医薬組成物。 - 胃腸の運動過剰または高モチリン血症(hypermotilinemia)により引き起こされる1つ以上の疾患に罹患する対象に、有効量の式I
式中、Yは、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、式中、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される方法。 - 前記化合物が、以下の構造
またはそれらの光学異性体、鏡像体、ジアステレオマー、ラセミ化合物、もしくは立体化学的混合物の構造を有する請求項14に記載の方法。 - 前記化合物が、経口的に投与される請求項18に記載の方法。
- 前記化合物が、非経口的に投与される請求項18に記載の方法。
- 前記対象が、哺乳動物である請求項18に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである請求項18に記載の方法。
- 前記化合物が、胃腸の運動を抑制するために有用である追加の薬剤と併用投与される請求項18に記載の方法。
- 前記胃腸疾患が、下痢、癌治療関連の下痢、癌誘発性の下痢、化学療法誘発性の下痢、放射線腸炎、放射線誘発性の下痢、ストレス誘発性の下痢、慢性下痢、AIDS関連の下痢、C.difficile関連下痢症、旅行者下痢症、移植片対宿主病誘発性の下痢、消化不良、過敏性腸症候群、化学療法誘発性の嘔気嘔吐(催吐)および術後嘔気嘔吐症、ならびに機能性胃腸疾患から選択される請求項18に記載の方法。
- 治療有効量の式I
式中、Yは、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、式中、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される方法。 - 前記化合物が、以下の構造
またはそれらの光学異性体、鏡像体、ジアステレオマー、ラセミ化合物、もしくは立体化学的混合物の構造を有する請求項26に記載の方法。 - 前記疾患が、短腸症候群またはセリアック病である請求項26に記載の方法。
- 前記疾患が、悪液質である請求項26に記載の方法。
- 前記疾患が、癌による悪液質、AIDSによる悪液質、または腎臓病による悪液質である請求項29に記載の方法。
- 前記対象が、哺乳動物である請求項26に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである請求項26に記載の方法。
- 前記対象が、胃または腸内吸収を調節する追加の化合物で治療される請求項26に記載の方法。
- 治療有効量の式I
式中、Yは、
Arは、
R1は、低アルキルおよびシクロアルキルからなる群から選択され、
R2は、低アルキル、置換低アルキル、シクロアルキル、および置換シクロアルキルからなる群から選択され、
R3、R4、R5、およびR6は独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
R7は、水素、低アルキル、ヒドロキシ、およびアミノからなる群から選択され、
R10aおよびR10bは独立して、水素、低アルキル、および置換低アルキルからなる群から選択され、
X1、X2、X6、X7、X8、およびX9は独立して、水素、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
X3、X4、およびX5は独立して、水素、ヒドロキシル、アルコキシ、ハロゲン、トリフルオロメチル、および低アルキルからなる群から選択され、
L1、L2、L3、およびL4は独立して、CHおよびNからなる群から選択されるが、ただし、環中の窒素の総数は、0、1、2または3でなければならず、
L5およびL6は独立して、O、CR8aR8b、およびNR9からなる群から選択され、式中、R8aおよびR8bは独立して、水素および低アルキルからなる群から選択され、R9は、水素、低アルキル、ホルミル、アシル、およびスルホニルからなる群から選択される方法。 - 前記化合物が、以下の構造
またはそれらの光学異性体、鏡像体、ジアステレオマー、ラセミ化合物、もしくは、立体化学的混合物の構造を有する請求項34に記載の方法。 - 前記疾患が、胃または腸にある請求項34に記載の方法。
- 前記疾患が、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、または膵炎である請求項34に記載の方法。
- 前記対象が、哺乳動物である請求項34に記載の方法。
- 前記対象が、ヒトである請求項34に記載の方法。
- 前記対象が、炎症を調節する追加の化合物で治療される請求項34に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
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---|---|---|---|
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