JP2009544281A - プロテインキナーゼ3の発現を阻害するための手段 - Google Patents
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Abstract
Description
二本鎖構造は、第1の鎖と第2の鎖とを含み、
第1の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第1のストレッチを含み、上記第1のストレッチは、少なくとも部分的に標的核酸と相補的であり、かつ
第2の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第2のストレッチを含み、上記第2のストレッチは、少なくとも部分的に第1のストレッチと相補的であり、かつ
標的核酸は、PKN3をコードしているmRNAである。
二本鎖構造は、第1の鎖と第2の鎖とを含み、
第1の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第1のストレッチを含み、上記第1のストレッチは、少なくとも部分的に標的核酸と相補的であり、かつ
第2の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第2のストレッチを含み、上記第2のストレッチは、少なくとも部分的に第1のストレッチと相補的であり、
第1のストレッチは、少なくとも部分的に配列番号1(NM_013355)に記載の核酸配列のヌクレオチドコア配列またはその部分と相補的である核酸配列を含み、
ヌクレオチドコア配列は、ヌクレオチド配列
配列番号1のヌクレオチド位置482〜500(配列番号2)、
配列番号1のヌクレオチド位置1555〜1573(配列番号4)、
配列番号1のヌクレオチド位置1556〜1574(配列番号6)、
配列番号1のヌクレオチド位置1559〜1577(配列番号8)、
配列番号1のヌクレオチド位置1566〜1584(配列番号10)、
配列番号1のヌクレオチド位置2094〜2112(配列番号12)、
配列番号1のヌクレオチド位置2102〜2120(配列番号14)、
配列番号1のヌクレオチド位置2286〜2304(配列番号16)、
配列番号1のヌクレオチド位置2761〜2779(配列番号18)、
配列番号1のヌクレオチド位置2763〜2781(配列番号20)、
配列番号1のヌクレオチド位置2764〜2782(配列番号22)、
配列番号1のヌクレオチド位置2843〜2861(配列番号24)、
配列番号1のヌクレオチド位置2844〜2862(配列番号26)、または
配列番号1のヌクレオチド位置2846〜2864(配列番号28)を含み、
好ましくは、ヌクレオチドコア配列は、ヌクレオチド配列
配列番号1のヌクレオチド位置1555〜1573(配列番号4)、
配列番号1のヌクレオチド位置1556〜1574(配列番号6)、
配列番号1のヌクレオチド位置1559〜1577(配列番号8)、
配列番号1のヌクレオチド位置1566〜1584(配列番号10)、
配列番号1のヌクレオチド位置2094〜2112(配列番号12)、または
配列番号1のヌクレオチド位置2286〜2304(配列番号16)を含み、
好ましくは、第1のストレッチは、さらに、少なくとも部分的にヌクレオチドコア配列の5’末端に先行する領域と、かつ/またはヌクレオチドコア配列の3’末端の後に続く領域と相補的である。
第1のストレッチは、配列番号3に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号2に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは配列番号5に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号4に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号7に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号6に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号9に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号8に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号11に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号10に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号13に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号12に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号15に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号14に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号17に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号16に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号19に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号18に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号21に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号20に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号23に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号22に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号25に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号24に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号27に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号26に記載のヌクレオチド配列からなり、または
第1のストレッチは、配列番号29に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号28に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号31に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号30に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号33に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号32に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号35に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号34に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号37に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号36に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号39に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号38に記載のヌクレオチド配列からなり、
好ましくは、
第1のストレッチは、配列番号5に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号4に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号7に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号6に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号9に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号8に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号11に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号10に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号13に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号12に記載のヌクレオチド配列からなり、
第1のストレッチは、配列番号17に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号16に記載のヌクレオチド配列からなり、または
第1のストレッチは、配列番号31に記載のヌクレオチド配列からなり、第2のストレッチは、配列番号30に記載のヌクレオチド配列からなる。
a)約50モル%のβ−アルギニル−2,3−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミドトリヒドロクロリド、好ましくは、(β−(L−アルギニル)−2,3−L−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミドトリ−ヒドロクロリド);
b)約48〜49モル%の1,2−ジフィタノイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DPhyPE);および
c)約1〜2モル%の1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−ポリエチレン−グリコール、好ましくは、N−(カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−2000)−1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミンナトリウム塩
からなる。
a)約50モル%のβ−アルギニル−2,3−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミドトリヒドロクロリド、好ましくは、(β−(L−アルギニル)−2,3−L−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミド トリ−ヒドロクロリド)、
b)約48〜49モル%の1,2−ジフィタノイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DPhyPE)、および
c)約1〜2モル%の1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−ポリエチレン−グリコール、好ましくは、N−(カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−2000)−1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミンナトリウム塩
からなる、正に荷電したリポソームである。
[インビトロトランスフェクションおよび免疫ブロット法;抗体]
細胞株に、上に記載される陽イオン性リポソームを用いてsiRNAをトランスフェクトした。簡潔に述べると、細胞の播種から約12時間後、10%血清含有培地に希釈した異なる量のsiRNA−リポプレックス溶液を細胞に添加して、1〜50nM siRNAの範囲のトランスフェクション濃度を達成した。トランスフェクション後(48時間)、細胞を溶解させ、説明されるように免疫ブロット法に供した(Klippel et al.,1998)。タンパク質濃度をDCプロテインアッセイ(BioRad)で測定し、次の抗体:ウサギ抗PTEN(Ab−2、Neomarkers)、Akt−1、ウサギ抗PKN3(Leenders et al.,2004)を用いて、免疫ブロット(immunobot)分析のために等量を負荷した。
PC−2、HeLa、HUVEC(ヒト臍帯(umbical)静脈内皮細胞)、およびEOMA細胞株であり、ATCCの推奨に従って培養した。
雄Hsd:NMRI−nu/nuマウス(8週齢)を本研究に使用した。定着腫瘍異種移植片での腫瘍治療実験のため、合計5.0×106腫瘍 細胞/100μl PBS)を皮下に移植した。キャリパーを用いて腫瘍体積を測定し、式:腫瘍体積=(長さ×幅2)/2に従って算出した。腫瘍治療実験のため、siRNA−リポプレックス溶液を、低圧、少量の尾静脈注射により静脈内投与した。同所性腫瘍モデルにおいて、2.0×106PC−3細胞/30μl PBSを前立腺の左背側葉に全身麻酔下で注射した(Stephenson et al.,1992)。動物を手術後50日目に殺処分し、腫瘍(前立腺)および局所転移(尾部、腰部および腎リンパ節転移)の体積を上に述べたように測定した。
データは、平均値±平均値の標準誤差として表される。差異の統計的有意性は、マンホイットニーのU検定により判定した。P値<0.05を統計上有意であるとみなした。
マトリゲルマトリックスでの細胞増殖を検定するため、HUVECに、siRNAを48時間トランスフェクトした。トリプシン処理の後、250μlマトリゲル基底膜マトリックスでプレコートした24ウェルプレート(110,000細胞/ウェル)に細胞を2通り播種し、リプレーティングから20時間後、Axiovert S100顕微鏡に接続されたAxiocamカメラを用いて1.25×または2.5×の倍率で顕微鏡写真を撮影した。
本明細書においてsiRNA分子とも称され(AtuRNAi、表1aおよび1b参照)、本研究で使用された、本発明による分子は記載される通りであり(Czauderna et al.,2003)、BioSpring(Frankfurt a.M.,Germany)により合成された。
リポプレックス製剤を、本質的にSantelに記載されるように調製した(Santel et al.2006)。
実施例3で特定された脂質とともにPKN3(3)分子により形成されるリポプレックス(siRNA−PKN3(3)−リポプレックスとも称される)のIC50を、HeLaおよびHUVEC細胞でのトランスフェクションの後に測定した。トランスフェクションの48時間後にタンパク質溶解物を調製し、PKN3およびPTEN特異的抗体で免疫ブロットする。
PKN3特異的siRNA分子、すなわちsiRNA−PKN−3(3)の、およびPKN3特異的アンチセンス分子(GB対照)(Leenders et al.,2004)のノックダウン効果の一時的な特徴を示すため、これらの分子をHeLa細胞にトランスフェクトした。タンパク質溶解物を48時間、96時間、144時間および192時間に調製した。いずれの場合も、細胞を、PKN3(3)分子を含有するsiRNAリポプレックスに実施例3に記載のように24時間曝露し、上記siRNAリポプレックスは上記24時間の後に除去した。
この実施例では、本発明による二本鎖構造もしくは分子を形成するセンスおよびアンチセンス鎖の両方の3’末端での3’−ホスフェート修飾の影響を研究した。PKN3(3)をノックダウン介在性核酸分子として用い、調製された実施例3に記載されるそれぞれのリポプレックスが形成されるように上記核酸分子を処方した。このようにして得られたリポプレックスをHeLa細胞で試験し、異なる量の上記siRNA分子およびリポプレックスを、それぞれ、トランスフェクトし、トランスフェクション48h後にタンパク質溶解物を調製した。免疫ブロットを本明細書に記載されるように分析した。結果を図5に示す。
本発明による分子を用いるPKN3のノックダウンの際に、一部の生理学的かつ形態学的変化も存在することをさらに示すため、細胞外マトリックス増殖アッセイを用いた(Leenders et al.,2004)。
PC−3異種移植腫瘍モデルをPC3細胞の皮下注射により作成した。このようにして作成した腫瘍を、その後、実施例3に説明されるリポプレックスで処理した。このようなリポプレックスの中に含められたsiRNA分子はPKN3(3)であった。基本的な実験デザインを図7Aに表す。合計3つの異なる治療群を確立した(各群は6匹のマウスから構成される)。第1の群にはスクロースのみを投与し、第2の群にはルシフェラーゼに対するsiRNAを含有するリポプレックス(siRNALuc−リポプレックス(lipolex))を投与し、第3の群にはPKN3に特異的なsiRNAを含有するリポプレックス(siRNA PKN3−リポプレックス)を投与した。
異なるリポプレックス用量の皮下PC−3異種移植腫瘍増殖の阻害への影響を調査するために、基礎的実験を行った。より具体的には、siRNA PKN3(3)リポプレックスを使用した。これらのリポプレックスは実施例3に記載されるように調製された。実験デザインは図8Aから得ることができる。投与群は6匹のマウスからなり、一方の動物群は陰性対照としてスクロースを投与され、それに対してもう一方の群はsiRNA PKN3−リポプレックス、より具体的にはsiRNA PKN3(3)リポプレックスを投与された。皮下への腫瘍細胞接種後、動物に22日から38日まで11回の静脈内注射を毎日投与し、67日までの生存を検定した。
異なるリポプレックス用量は次の通りであった。
−0.94mg/kg siRNA 毎日 22日〜32日
−1.88mg/kg siRNA 毎日 22日〜32日
−1.88mg/kg siRNA 1日2回(bidaily)50%用量 22日〜28日
−1.88mg/kg 2日に1回 22日〜38日
実験デザインは、実施例8に関して説明されるとおりであった。
この実験は、同所性異種移植腫瘍モデルにおける腫瘍増殖への、siRNA PKN3リポプレックス、より具体的にはsiRNA−PKN3(3)リポプレックスを用いる、マウスへの全身投与の影響を研究するために行われた。(実験の詳細については(Santel et al.,2006a)参照)。
この実験は、同所性異種移植腫瘍モデルにおけるsiRNA−PKN3−リポプレックス、より具体的にはsiRNA−PKN3(3)リポプレックスを用いるマウスへの全身投与に関して異なる投与スケジュールを試験するために行った。
この実験は、同所性異種移植腫瘍モデルにおいて、異なる用量のsiRNA−PKN3リポプレックスを、このようなリポプレックス、より具体的にはsiRNA−PKN3(3)リポプレックス(図11)、さらにsiRNA−PKN3−23−v1(図17)を用いるマウスへの全身投与に関して試験するために行った。
先行技術の様々な文献が本明細書において言及される程度まで、その完全な文献データが次の通り記載されるこのような文献は、引用することにより本明細書の一部をなすものとする。
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Claims (37)
- 二本鎖構造を含む核酸分子であって、
前記二本鎖構造は、第1の鎖と第2の鎖とを含み、
前記第1の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第1のストレッチを含み、前記第1のストレッチが、標的核酸と少なくとも部分的に相補的であり、かつ
前記第2の鎖は、隣接するヌクレオチドからなる第2のストレッチを含み、前記第2のストレッチが、少なくとも部分的に第1のストレッチと相補的であり、
前記第1のストレッチが、配列番号1(NM_013355)に記載の核酸配列のヌクレオチドコア配列またはその部分と少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、
前記ヌクレオチドコア配列は、ヌクレオチド配列
配列番号1のヌクレオチド位置482〜500(配列番号2);
配列番号1のヌクレオチド位置1555〜1573(配列番号4);
配列番号1のヌクレオチド位置1556〜1574(配列番号6);
配列番号1のヌクレオチド位置1559〜1577(配列番号8);
配列番号1のヌクレオチド位置1566〜1584(配列番号10);
配列番号1のヌクレオチド位置2094〜2112(配列番号12);
配列番号1のヌクレオチド位置2102〜2120(配列番号14);
配列番号1のヌクレオチド位置2286〜2304(配列番号16);
配列番号1のヌクレオチド位置2761〜2779(配列番号18);
配列番号1のヌクレオチド位置2763〜2781(配列番号20);
配列番号1のヌクレオチド位置2764〜2782(配列番号22);
配列番号1のヌクレオチド位置2843〜2861(配列番号24);
配列番号1のヌクレオチド位置2844〜2862(配列番号26);または
配列番号1のヌクレオチド位置2846〜2864(配列番号28)を含み、
好ましくは、前記ヌクレオチドコア配列は、ヌクレオチド配列
配列番号1のヌクレオチド位置1555〜1573(配列番号4);
配列番号1のヌクレオチド位置1556〜1574(配列番号6);
配列番号1のヌクレオチド位置1559〜1577(配列番号8);
配列番号1のヌクレオチド位置1566〜1584(配列番号10);
配列番号1のヌクレオチド位置2094〜2112(配列番号12);または
配列番号1のヌクレオチド位置2286〜2304(配列番号16)を含み、
好ましくは、前記第1のストレッチが、さらに、前記ヌクレオチドコア配列の5’末端に先行する領域、および/または前記ヌクレオチドコア配列の3’末端の後に続く領域と少なくとも部分的に相補的である核酸分子。 - 前記第1のストレッチが、前記ヌクレオチドコア配列またはその一部と相補的である、請求項1に記載の核酸。
- 前記第1のストレッチが、さらに、前記ヌクレオチドコア配列の3’末端の後に続く領域、および/または前記ヌクレオチドコア配列の5’末端に先行する領域と相補的である、請求項1および2のいずれかに記載の核酸。
- 前記第1のストレッチが、18を超え29までのヌクレオチド、好ましくは19〜25ヌクレオチド、より好ましくは19〜23ヌクレオチドの標的核酸と相補的である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記ヌクレオチドが連続したヌクレオチドである、請求項4に記載の核酸。
- 前記第1のストレッチおよび/または第2のストレッチが、18〜29の連続したヌクレオチド、好ましくは19〜25の連続したヌクレオチド、より好ましくは19〜23の連続したヌクレオチドを含む、請求項1に記載の核酸。
- 前記第1の鎖が、前記第1のストレッチからなり、および/または、前記第2の鎖が、前記第2のストレッチからなる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の核酸。
- 二本鎖構造を含む核酸分子、好ましくは、請求項1〜7のいずれか一項に記載の核酸分子であって、前記二本鎖構造が、第1の鎖と第2の鎖とにより形成され、前記第1の鎖が、隣接するヌクレオチドからなる第1のストレッチを含み、前記第2の鎖が、隣接するヌクレオチドからなる第2のストレッチを含み、前記第1のストレッチが、前記第2のストレッチと少なくとも部分的に相補的であり、
前記第1のストレッチが、配列番号3に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号2に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号5に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号4に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号7に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号6に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号9に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号8に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号11に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号10に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号13に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号12に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号15に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号14に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号17に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号16に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号19に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号18に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号21に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号20に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号23に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号22に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号25に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号24に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号27に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号26に記載のヌクレオチド配列からなり;または
前記第1のストレッチが、配列番号29に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号28に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号31に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号30に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号33に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号32に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号35に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号34に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号37に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号36に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号39に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号38に記載のヌクレオチド配列からなり;
好ましくは、
前記第1のストレッチが、配列番号5に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号4に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号7に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号6に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号9に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号8に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号11に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号10に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号13に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号12に記載のヌクレオチド配列からなり;
前記第1のストレッチが、配列番号17に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号16に記載のヌクレオチド配列からなり、または
前記第1のストレッチが、配列番号31に記載のヌクレオチド配列からなり、前記第2のストレッチが、配列番号30に記載のヌクレオチド配列からなる核酸分子。 - 前記第1のストレッチおよび/または前記第2のストレッチが、規則的な位置パターン、好ましくは交互の位置パターンを形成する修飾を2’位に有する複数の群の修飾されたヌクレオチドを含み、好ましくは、前記ストレッチの内部では、修飾されたヌクレオチドの各群が、片側または両側を1つの隣接するヌクレオチドの群によりフランクされ、前記隣接するヌクレオチドの群を形成する隣接するヌクレオチドが、修飾されていないヌクレオチドであるか、または修飾されたヌクレオチドの修飾とは異なる修飾を有するヌクレオチドである、請求項1〜8のいずれか一項に記載の核酸分子。
- 前記第1のストレッチおよび/または前記第2のストレッチが、修飾されたヌクレオチドの群からなる1つのパターンおよび/または隣接するヌクレオチドの群からなる1つのパターンを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記第1のストレッチおよび/または前記第2のストレッチが、3’末端にジヌクレオチドを含み、該ジヌクレオチドが、好ましくはTTである、請求項1〜10、好ましくは、請求項1〜8のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記第1のストレッチおよび/または前記第2のストレッチの長さが、19〜21ヌクレオチドからなる、請求項11に記載の核酸。
- 前記第1のストレッチおよび/または前記第2のストレッチが、3’末端に1〜5ヌクレオチドのオーバーハングを含む、請求項1〜10、好ましくは、請求項1〜8のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記二本鎖構造の長さが、約16〜24ヌクレオチド対、好ましくは、20〜22ヌクレオチド対である、請求項13に記載の核酸。
- 前記第1の鎖と前記第2の鎖とが、相互に共有結合し、好ましくは、前記第1の鎖の3’末端が前記第2の鎖の5’末端に共有結合している、請求項1〜14のいずれか一項に記載の核酸。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸を含むリポソーム製剤。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸と、リポソームとを含むリポプレックス。
- 前記リポソームが、
a)約50モル%のβ−アルギニル−2,3−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミドトリヒドロクロリド、好ましくは、(β−(L−アルギニル)−2,3−L−ジアミノプロピオン酸−N−パルミチル−N−オレイル−アミドトリ−ヒドロクロリド);
b)約48〜49モル%の1,2−ジフィタノイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DPhyPE);および
c)約1〜2モル%の1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン−ポリエチレン−グリコール、好ましくは、N−(カルボニル−メトキシポリエチレングリコール−2000)−1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミンナトリウム塩
からなる、請求項18に記載のリポプレックス。 - 前記リポプレックスのゼータ電位が、約3540〜6055mV、好ましくは約45〜50mVである、請求項19に記載のリポプレックス。
- QELSにより測定されるリポプレックスのサイズが、約50〜400nm、好ましくは約100〜140nm、より好ましくは約110nm〜130nmである、請求項19または20に記載のリポプレックス。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸を含むまたはコードするベクター、好ましくは発現ベクター。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸、または請求項22に記載のベクターを含む細胞。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸、請求項17に記載のリポソーム製剤、18〜21のいずれか一項に記載のリポプレックス、請求項22に記載のベクターおよび/または請求項23に記載の細胞を含む組成物、好ましくは、医薬組成物。
- 前記組成物が、任意選択的に、医薬品として許容されるビヒクルをさらに含む、医薬組成物である、請求項24に記載の組成物。
- 前記組成物が医薬組成物であり、前記医薬組成物が、血管新生依存性疾患、好ましくは、不十分、異常もしくは過剰な血管新生により特徴付けられるか、またはそれらに起因する疾患の治療のためのものである、請求項25に記載の組成物。
- 前記血管新生が、脂肪組織、皮膚、心臓、眼、肺、腸、生殖器、骨および関節の血管新生である、請求項26に記載の医薬組成物。
- 前記疾患が、感染症、自己免疫障害、血管奇形、アテローム性動脈硬化症、移植後動脈疾患、肥満、乾癬、疣贅、アレルギー性皮膚炎、持続性過形成硝子体症候群、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、加齢性黄斑疾患、脈絡膜血管新生、原発性肺高血圧症、喘息、鼻茸、炎症性腸疾患および歯周病、腹水、腹膜癒着、子宮内膜症、子宮出血、卵巣嚢胞、卵巣、卵巣過剰刺激、関節炎、滑膜炎、骨髄炎、骨棘形成を含む群から選択される、請求項26または27に記載の医薬組成物。
- 腫瘍性疾患、好ましくはがん疾患、より好ましくは固形腫瘍の治療のための、請求項25〜28のいずれか一項、好ましくは、請求項25に記載の医薬組成物。
- 骨癌、乳癌、前立腺癌、消化器系の癌、結腸直腸癌、肝癌、肺癌、腎癌、泌尿生殖器癌、膵癌、下垂体癌、精巣癌、眼窩癌、頭頸部癌、中枢神経系の癌および呼吸器系の癌を含む群から選択される疾患の治療のための、請求項25〜29のいずれか一項、好ましくは請求項29に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜16のいずれか一項に記載の核酸、請求項17に記載のリポソーム製剤、請求項18〜21のいずれか一項に記載のリポプレックス、請求項22に記載のベクターおよび/または請求項23に記載の細胞の、薬剤の製造のための使用。
- 前記薬剤が、請求項26〜30のいずれか一項に定義されるいずれかの疾患の治療のためのものである、請求項31に記載の使用。
- 前記薬剤が、1種または数種類の他の治療と併用して用いられる、請求項32に記載の使用。
- 前記治療法が、化学療法、寒冷療法、温熱療法、抗体療法、放射線療法および抗血管新生療法を含む群から選択される、請求項33に記載の使用。
- 前記治療法が抗体療法であり、より好ましくは、抗VEGF抗体または抗アンジオポエチン抗体を用いる抗体療法である、請求項34に記載の使用。
- 前記抗血管新生療法が、キナーゼ受容体阻害剤、好ましくはチロシンキナーゼ受容体阻害剤を使用し、該受容体が、VEGF受容体、PDGF受容体、Tie−2、FGFRおよびEGFRを含む群から選択される、請求項34に記載の使用。
- 前記阻害剤が、siRNA、アンチセンス分子、アプタマー、スピーゲルマー、高親和性結合ペプチド、ペプチドアプタマー、アンチカリンおよび抗体を含む群から選択される、請求項36に記載の使用。
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