JP2009541352A - 治療方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、子宮内膜症を治療するためのスルホンアミド置換ジフェニル尿素化合物の使用に関する。

Description

本発明は、ＩＬ−８、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２、およびＥＮＡ−７８媒介疾患、特に、子宮内膜症を処置するためのスルホンアミド置換ジフェニル尿素化合物の使用に関する。

子宮内膜症は、子宮外部位での子宮内膜組織（いわゆる、病変）の増殖を特徴とする疾患である。この病変付着は、疼痛、月経困難症、性交疼痛症および不妊症を引き起こすことがある。慢性骨盤痛患者の８０％を超える患者が実際に子宮内膜症であると診断されると推測される。該疾患の罹患率は、生殖年齢の女性の約７〜１０％であり、家族性関連リスク増加は１０倍である。確定診断は、唯一、腹腔鏡検査によって行われるが、典型的には、疾患発症から最終的な診断までに約１０年間の遅れがある。それらの子宮起源と一致して、子宮内膜病変は、ホルモン的にエストロゲンに依存している。プロゲスチンおよびゴナドトロピン放出ホルモン（ＧｎＲＨ）アナログのようなエストロゲン生産または作用を機能的にアンタゴナイズする療法は、症状の緩和および疾患の程度の軽減に有効である。現行の治療目的は、抗炎症薬で痛みを軽減することおよびホルモン調節薬を使用して卵巣周期を一時中断することを含む。

これらの治療はすべて、作用機序に対して特異的な治療制限を有する。プロゲスチンは子宮内膜症を処置するために使用されるが、これらの薬剤は、破綻出血、情緒の変動、挫創、体重増加および乳房圧痛を含む多くの副作用を生じる。ＧｎＲＨアナログは、骨量減少および血管運動症状を含む副作用を伴う低エストロゲン状態を誘発する。ホルモン調節は、逆説的に多くの患者が子宮内膜症の治療を求める理由である受精能には禁忌である。投与される抗炎症薬は、ＮＳＡＩＤまたはシクロオキシゲナーゼ２選択的（ＣＯＸ−２）阻害薬である傾向にある。非選択的ＮＳＡＩＤは胃腸への副作用があるが、一方、ＣＯＸ−２阻害薬は心臓血管への副作用のリスクが増大する。子宮内膜症はまた、免疫疾患でもあり、高レベルのサイトカイン、ケモカイン、マクロファージおよび好中球に関連していることが実質的に立証されている。多くの場合にサイトカイン／ケモカインレベルは、疾患の重篤度と相互に関連している。したがって、受精能を保存しながら子宮内膜症に対する選択性を増強する免疫調節療法が非常に望まれている。

ケモカインは、子宮内膜および他の子宮細胞種類によって生産され、ＩＬ−８:ＣＸＣＲ２シグナル伝達経路は、正常な生理機能および子宮内膜症に特に関連している。ＩＬ−８発現は周期的であり、月経周期の後期分泌期および月経期の間、最高レベルであり、逆行作用によって腹膜腔中に移動する月経デブリ中の最高ＩＬ−８レベルと一致する。ＣＸＣＲ２は、上皮ＩＬ−８に対する受容体であり、子宮内膜上皮および間質の両方において発現し、尖端上皮において最高レベルである。このパターンは、ＩＬ−８の発現パターンに類似している。ＣＸＣＲ２は、異所性子宮内膜組織および子宮腺筋症を有意に増加させる。ＩＬ−８発現は、正所性子宮内膜細胞よりも異所性子宮内膜細胞における方が高い。さらにまた、腹水および血清中のＩＬ−８は、子宮内膜症の病態および不妊症と相互に関連している。

他のＣＸＣＲ２リガンドもまた、子宮内膜症に関与していた。上皮好中球活性ペプチド−７８（ＥＮＡ−７８）の腹水濃度は、子宮内膜症の重篤度と相互に関連している。正常な子宮内膜組織におけるＩＬ−８の発現およびその同種受容体ＣＸＣＲ２は、子宮内膜症における見掛けの調節不全と相まって、ＣＸＣＲ２の阻害が子宮内膜症の女性に治療効果を提供することができることを示唆している。

本発明は、子宮内膜症であると診断された女性における子宮内膜症の治療方法に関する。該方法は、子宮内膜症である女性に、該女性の子宮内膜組織のサイズを減少させるのに有効な量のＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩を投与することを含む。

本発明はまた、子宮内膜症の発症または再発のリスクが通常よりも高い女性における子宮内膜症の予防方法に関する。該方法は、該女性に、該女性の子宮内膜組織の増殖または肥厚を減少または予防させるのに有効な量のＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩を投与することを含む。

本発明は、子宮内膜症の治療方法であって、かかる治療を必要とする哺乳動物（特に、ヒトの女性）に、Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩の有効量を投与することを含む方法を提供する。該方法は、子宮内膜症の女性または子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性に、Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩の、該女性の子宮内膜組織のサイズを減少させるかまたは子宮内膜組織の増殖もしくは肥厚を阻害するのに十分な量を投与することを含む。

本発明の目的のために、本発明の方法による成功した子宮内膜症治療は、女性に存在する子宮内膜組織のサイズを減少させることを包含するが、これに限定されるものではない。本発明の方法によると、子宮内膜組織の「サイズの減少」とは、該子宮内膜組織の質量もしくは重量、直径、長さ、幅、外周、および／または厚さもしくは高さの減少を包含する。また、本発明の方法による成功した治療の指標としては、子宮内膜組織のサイズが実際に測定されるかどうかに関係なく、子宮内膜症の症状の検知可能な改善、例えば、妊娠および／または該女性が経験する骨盤痛の軽減もまた挙げられる。

本発明の目的のために、子宮内膜症の予防は、子宮内膜組織のサイズが実際に測定されるかどうかに関係なく、女性に存在する子宮内膜組織のサイズの阻害または減少および／または子宮内膜症の発症の予防を包含する。

本発明によると、女性は、初潮後のヒトの女性であり、定期的に月経がくる思春期および成人の女性、閉経期の女性および閉経後の女性が挙げられる。子宮内膜症の女性とは、子宮内膜症であると医学的に診断された女性をいう。子宮内膜症は、子宮以外の部位で子宮内膜組織の異常な形成が発生する状態である。子宮内膜組織は、子宮内膜に似ており、肥厚によりエストロゲンに反応する。典型的には、子宮内膜症の診断は、腹腔鏡検査または開腹手術のような手術によって行われ、子宮内膜組織の直接観察を含む。しかしながら、本発明の目的のために他の医学的に許容される診断手段が考えられる。子宮内膜症の臨床症状もまた、該状態の診断に寄与することがある。症状としては、一般的に、不妊症および骨盤痛、下仙骨背部痛、血尿もしくは血便、排便、排尿もしくは性交に伴う疼痛または出血、骨盤の不快感もしくは圧、および月経前の出血が挙げられる。

子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性は、初めて子宮内膜症を発症しているかまたは子宮内膜症を再発している女性の一般的な集団よりも高いリスクを有する女性である。これは、子宮内膜症の発症のリスクが高い未処置の女性が確実に該症状を発症するであろうということを意味するのではなく、単に、その女性の凝集したリスクファクターが平均よりも大きいことを意味する。子宮内膜症について知られているリスクファクターとしては、早発初経（１３歳以前）、頻発月経（例えば、２７日またはそれ以下の月経周期）、異常に長い月経期間（５〜７日間またはそれ以上）、慢性骨盤痛（特に、外子宮口の狭窄に伴う）、高齢、アジア系民族、ミュラー管異常の存在（例えば、２つの子宮頚部および膣）、長期間の終わり無き月経周期、長期間の子宮内避妊器具（ＩＵＤ）の使用、不妊症、未経産、一回だけの生児出産、または最後の出産から１０年後が挙げられる。

頸部円錐切除術または婦人科開腹手術、卵巣手術または子宮摘出術を受けたことがある女性もまた、子宮内膜症のリスクが通常よりも高い。経口避妊薬を使用したことがある女性もまた、子宮内膜症発症のリスクが通常よりも高い。子宮内膜症と診断されたことがある姉妹、母親、おば、または従姉妹のような家族性のリスクファクターもまた、子宮内膜症発症のリスクが通常よりも高いことの一因となり得る。

上記のことは、単に、子宮内膜症発症のリスクが通常よりも高い女性の一因となり得るファクターの例示であり、網羅的リストではない。

本発明の方法によると、子宮内膜症の女性または子宮内膜症発症のリスクがある女性をＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩で処置する。

本発明の方法で使用される化合物は、医薬上許容される塩として投与され得る。適当な医薬上許容される塩は、当業者に周知であり、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、酢酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、安息香酸、サリチル酸、フェニル酢酸およびマンデル酸のような無機酸または有機酸の塩が挙げられる。

加えて、医薬上許容される塩はまた、医薬上許容される陽イオンを用いて形成され得る。好適な医薬上許容される陽イオンは、当業者に周知であり、アルカリ陽イオン、アルカリ土類陽イオン、アンモニウム陽イオンおよび第４アンモニウム陽イオンが挙げられる。

一の実施態様では、本発明の方法で使用される化合物は、Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素の塩酸塩である。

別の実施態様では、本発明の方法で使用される化合物は、Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素のｐ−トルエンスルホン酸塩である。

核磁気共鳴スペクトルは、それぞれＢｒｕｋｅｒ ＡＲＸ ３００またはＢｒｕｋｅｒ ＡＶＡＮＣＥ ４００分光計を使用して３００または４００ＭＨｚで記録された。ＣＤＣｌ₃はジューテリオクロロホルムであり、ＤＭＳＯ−ｄ₆はヘキサジューテリオジメチルスルホキシドであり、ＣＤ₃ＯＤは、テトラジューテリオメタノールである。内部標準テトラメチルシランから低磁場側への化学シフトを百万分率（Δ）で報告する。ＮＭＲデータについての略語は以下のとおりである：ｓ＝一重線、ｄ＝二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｍ＝多重線、ｄｄ＝二重の二重線、ｄｔ＝二重の三重線、ａｐｐ＝みかけ、ｂｒ＝幅広。Ｊは、ヘルツで測定したＮＭＲ結合定数を示す。フーリエ変換赤外（ＦＴＩＲ）スペクトルは、Ｎｉｃｏｌｅｔ ５１０赤外分光計で記録した。ＦＴＩＲスペクトルは、転送モードで記録され、バンドの位置は、波数の逆数（ｃｍ^-1）で記録される。マススペクトルは、エレクトロスプレー（ＥＳ）イオン化技術を用いてＳＣＩＥＸ５またはＭｉｃｒｏｍａｓｓ装置にて得られる。元素分析は、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ ２４０Ｃ元素分析器を用いて得られた。融点は、Ｔｈｏｍａｓ−Ｈｏｏｖｅｒ融点測定装置で得られ、未校正である。温度は全て摂氏で報告される。

薄層クロマトグラフィーには、Ａｎａｌｔｅｃｈ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ＧＦおよびＥ. Ｍｅｒｃｋ Ｓｉｌｉｃａ Ｇｅｌ ６０ Ｆ−２５４薄層プレートを用いた。フラッシュおよび重力クロマトグラフィーは、Ｅ. Ｍｅｒｃｋ Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０（２３０〜４００メッシュ）シリカゲルにて行われた。分析用または分取用ＨＰＬＣは、ＲａｉｎｉｎまたはＢｅｃｋｍａｎクロマトグラフにて行われた。ＯＤＳとは、オクタデシルシリル誘導体化シリカゲルクロマトグラフィー支持体をいう。５μ Ａｐｅｘ−ＯＤＳは、コロラド州リトルトンのJones Chromatography社製の、公称粒径５μのオクタデシルシリル誘導体化シリカゲルクロマトグラフィー支持体を示す。ＹＭＣ ＯＤＳ−ＡＱ（登録商標）は、ＯＤＳクロマトグラフィー支持体であり、日本国京都の株式会社ワイエムシィの登録商標である。ＰＲＰ−１（登録商標）は、高分子（スチレン−ジビニルベンゼン）クロマトグラフィー支持体であり、Hamilton Co.（ネバダ州リーノー）の登録商標である。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）は、酸洗浄した珪藻シリカからなる濾過助剤であり、Manville Corp.（コロラド州デンバー）の登録商標である。

以下の実施例は、単に例示するものであり、如何なる場合も限定するものではない。

実施例１
Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・塩酸塩
１ａ） ２−クロロ−３−フルオロ安息香酸
３−フルオロ安息香酸（４.０２ｇ、２８.７１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ ２０ｍＬ中溶液をテトラメチレンジアミン（ＴＭＥＤＡ）（１０.００ｍＬ、６６.３ｍｍｏｌ）および１.３Ｍ sec−ＢｕＬｉ（４８ｍＬ、６２.４ｍｍｏｌ）の−９０℃でのＴＨＦ ５０ｍＬ中懸濁液に滴下した。該混合物を−９０℃で３５分間撹拌した。ヘキサクロロエタン（２７.０g、１１３.９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ ５０ｍＬ中溶液を添加した後、該混合物を−７８℃に加温した。２０時間後、該反応物を水でクエンチし、ジエチルエーテルで希釈した。二層を濃ＨＣｌでｐＨ約１〜２に調整した。有機層を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、濃縮して、黄褐色の固体として粗物質３０.４ｇを得、これをヘキサンで洗浄して、標記生成物１ａ（淡褐色の固体）（３.７２８ｇ、７４％）を得た。ＭＳ（ｍ／ｚ）１７５.２（Ｍ＋Ｈ）。

１ｂ） ３−クロロ−２−フルオロ−ベンゾイルアジド
２−クロロ−３−フルオロ安息香酸（２.７０４ｇ、１５.５４ｍｍｏｌ）の塩化オキサリル２５ｍＬ中懸濁液を２時間加熱還流した。該溶液を冷却し、濃縮して、粗酸塩化物３.１３ｇを茶色の液体として得、これを次工程で直接使用した。

ＮａＮ₃（２.７９ｇ、４３ｍｍｏｌ）の水１０ｍＬ中溶液を該粗酸塩化物（３.１３ｇ）の０℃のアセトン２０ｍＬ中溶液に滴下した。１５分後、該溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂で希釈し、水およびブラインで洗浄した。有機層を乾燥させ、濃縮して、茶色の液体を得、これを、酢酸エチル／ヘキサン（５／９５、ｖ／ｖ）を使用してシリカゲルで濾過して、１ｂ（無色の液体）（２.９７ｇ、９６％）を得た。該化合物をそれ以上精製せずに使用した。

１ｃ） ２−(２−tert−ブチル−６−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−スルホニル)−ピペラジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル
２−tert−ブチル−６−クロロ−ベンゾオキサゾール−７−スルホニルクロリド（１０.７５ｇ、３４.９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ １００ｍＬ中溶液を０℃に冷却し、Ｅｔ₃Ｎ（３.４７ｍＬ、２４.９ｍｍｏｌ）、次いで、Ｂｏｃ−ピペラジン（５.０ｇ、２６.８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を２０時間撹拌し、室温に加温した。該混合物を水中に注ぎ、ＥｔＯＡｃで抽出し、さらなる水で洗浄した；有機層を乾燥せさ、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して酢酸エチル／ヘキサン（３０／７０、ｖ／ｖ）で溶離して、所望の生成物１ｃ（１１.１２ｇ、９１％）得た。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４５８.２（Ｍ＋Ｈ）。

１ｄ） ４−(３−アミノ−６−クロロ−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニル)−ピペラジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル
出発物質１ｅ（１１.１２ｇ）のジオキサン（２０ｍＬ）中溶液を水（１１ｍＬ）および濃Ｈ₂ＳＯ₄（１１ｍＬ）で処理した。該混合物を１２時間加熱還流した。反応混合物を濃縮し、次いで、５０％ＮａＯＨ水溶液を用いて該残留物をｐＨ約１４に塩基性化した。(Ｂｏｃ)₂Ｏ（５.６ｇ、１.０５当量）およびＡｃＯＥｔ １００ｍＬを添加し、得られた混合物を室温で１６時間撹拌した。該混合物を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出し、有機層を合わせ、乾燥させ、濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して酢酸エチル／ヘキサン（３０／７０、ｖ／ｖ）で溶離して、所望の生成物１ｄ（８.１８ｇ、８５％）を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃)：δ ６.８５（ｍ，２Ｈ）、３.４８（ｔ，４Ｈ）、３.２５（ｔ，４Ｈ）、１.４７（ｓ，９Ｈ）。

１ｅ） ４−(６−クロロ−３−[３−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−ウレイド]−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニル)−ピペラジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル
４−(３−アミノ−６−クロロ−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニル)−ピペラジン−１−カルボン酸tert−ブチルエステル （３.８ｇ、９.７ｍｍｏｌ）および３−クロロ−２−フルオロベンゾイルアジド（２.９ｇ、１４.５ｍｍｏｌ）のＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド５ｍＬ中溶液を室温で１８時間撹拌した。該混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄して、粗物質を得た。シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して酢酸エチル／ヘキサン（２０／８０、ｖ／ｖ）で溶離して、１ｅ（３.６ｇ、６６％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）５６２.８（Ｍ＋Ｈ）。

１ｆ） Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル)−フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・塩酸塩
Ｂｏｃ−生成物（１ｇ）３.６ｇのジオキサン中４Ｎ ＨＣｌ ２０ｍＬ中溶液を室温で２時間撹拌し、溶媒を蒸発させた。残留物をメタノールおよび酢酸エチルから再結晶して、標記生成物（２.９ｇ、６０％）を得た。ＬＣ−ＭＳ（ｍ／ｚ）４６３.０（Ｍ＋Ｈ）。

実施例２
Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(４−メチル−ピペラジン −１−スルホニル)−フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−尿素・ｐ−トルエンスルホン酸塩

２ａ） 化合物１の製造
３,４−ジクロロアニリン（１００ｇ）をＴＢＭＥ（６６０ｍＬ）に溶解し、１０〜１５℃に冷却した。水酸化ナトリウム（３０％水溶液９４ｇ）を添加し、該溶液を機械的撹拌器により強く撹拌した。トリメチルアセチルクロリド（８４ｍＬ）を、内部温度が３５℃以下に保持されるような速度で添加した。添加が完了した後（１０〜１５分）、該混合物を３０〜３５℃で約３０分間維持し、次いで、３０〜４０分間にわたって０〜５℃に冷却した。該反応混合物を０〜５℃で１時間保持し、次いで、濾過し、最初に水／メタノール（９０：１０）（４００ｍＬ）で洗浄し、次いで、水（６００ｍＬ）で洗浄した。５０〜５５℃で真空乾燥させて、オフホワイト色の結晶として生成物を得た。１２７ｇを得た。

２ｂ） 化合物２の製造
化合物１（５０ｇ）のテトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中溶液を窒素の不活性雰囲気下で−５０〜−４０℃に冷却した。Ｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２.５Ｍ、１７９ｍＬ）を、溶液の内部温度を−４５〜−３０℃に保持するような速度で添加した（約１５〜３０分添加）。ＨＰＬＣが最初の反応が完了したことを示すまで、該溶液を約−３５〜−２５℃に保持した。次いで、該溶液を−４５〜−４０℃に再冷却し、内部温度を約−１４℃以下に保持しながら該溶液が酸性になるまで二酸化硫黄（約１６.９ｇ）を該溶液に通気した。反応が完了した後、該混合物を−１０〜０℃に加温した。−２〜３℃で開始し、温度を約２２℃以下に保持しながら、該テトラヒドロフラン溶液に塩化スルホニル（２５.２ｍＬ）を５〜１５分間にわたって滴下した。５分後、該溶液を約１０〜１５℃に保持しながらＨＰＬＣにより反応の完了を確認した。該混合物を減圧下にてα,α,α−トリフルオロトルエンへと溶媒交換し、濾過し、部分的に（約１００ｍＬに）真空濃縮し、次いで、ジクロロメタン（３５０ｍＬ）を添加した。この混合物にピペラジン（６１.２ｇ）の周囲温度でのジクロロメタン（６２５ｍＬ）中溶液を、溶液の内部温度を１５〜２７℃に保持しながら滴下した（２時間の添加）。反応が完了するまで２０〜２４℃に維持した。該混合物を脱イオン水（２００ｍＬ）で洗浄し、有機層を濃縮し、次いで、ヘプタン（４５０ｍＬ）を添加した。濾過により該生成物（７０.５ｇ）を単離し、ヘプタン（５０〜１００ｍＬ）で洗浄し、５０〜５５℃で真空乾燥させた。

２ｃ） 化合物３の製造
化合物２（３０ｇ）を水中約１６％（ｗ／ｗ）の硫酸（３００ｍＬ）に添加した。得られた混合物を９９〜１０３℃で約６時間加熱還流した。反応が完了した後、該溶液を４０〜５０℃に冷却し、次いで、約６０ｍＬに減圧濃縮した。アセトニトリル（２２５ｍＬ）を添加し、得られた懸濁液を２０〜２５℃で約１時間撹拌した。濾過により該生成物を単離し、アセトニトリル（１３５ｍＬ）で洗浄し、４５〜５０℃で真空乾燥させた。３３.３４ｇを得た。

２ｄ） 化合物４の製造
化合物３（２０ｇ）を脱イオン水（２００ｍＬ）に添加した。内部温度を２０〜３０℃に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（約６.３５ｍＬ）を添加することにより、得られた溶液のｐＨを６.５〜７.０に調整した。次いで、ジ炭酸ジ−tert−ブチル（８.９ｇ）の酢酸エチル（８０ｍＬ＋２０ｍＬリンス）中溶液を添加した。内部温度を２０〜３０℃に維持しながら、５０％水酸化ナトリウム水溶液（２.４５ｍＬ）を添加することにより、得られた混合物のｐＨを６.８〜７.０に調整した。反応が完了した後、該反応溶液を濾過して、少量の沈殿物を除去した。二層の濾液を分取し、水性層を酢酸エチル（１４０ｍＬ）で抽出した。合わせた酢酸エチル層を水（４０ｍＬ）で洗浄し、１００ｍＬに濃縮した。ヘプタン（１００ｍＬ）を添加し、得られた懸濁液を６０ｍＬに濃縮した。この工程をもう一回繰り返した。次いで、ヘプタン（１４０ｍＬ）を添加し、得られた懸濁液を２０〜２５℃で約１時間撹拌した。該生成物を濾過により単離し、ヘプタン（８０ｍＬ）で洗浄し、４０〜４５℃で真空乾燥させた。１５.３ｇを得た。

２ｅ） 化合物５の製造
化合物４（１０ｇ）をジメチルホルムアミド（２０ｍＬ）およびアセトニトリル（８０ｍＬ）に添加した。内部温度を２０〜３０℃に維持しながら２−クロロ−３−フルオロフェニルイソシアナート（４.７７ｇ）を添加し、次いで、アセトニトリルリンス１０ｍＬを添加した。得られた混合物を２０〜２５℃で約２時間撹拌した。反応が完了した後、メタノール（５０ｍＬ）を添加した。得られた懸濁液を２０〜２５℃で約１０分間撹拌した。脱イオン水（１５０ｍＬ）を添加し、得られた懸濁液を２０〜２５℃で約１時間撹拌した。該生成物を濾過により単離し、脱イオン水（１００ｍＬ）およびメタノール（１５〜２０ｍＬ）で洗浄し、次いで、４０〜４５℃で真空乾燥させた。１４.１５ｇを得た。

２ｆ） 化合物６の製造 − 製造方法１
化合物５（５０ｇ）をテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２００ｍＬ）に溶解し、３３〜３７℃に加熱し、３３〜３７℃に保持した。別の反応容器中にて、アセトニトリル（２５０ｍＬ）、ＴＨＦ（５０ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸・一水和物（４３.９ｇ）の溶液を調製した。得られた溶液を３３〜３７℃に加熱し、３３〜３７℃に保持した。該ｐ−トルエンスルホン酸溶液を濾過し、温度を３３〜３７℃に維持しながら、化合物５およびＴＨＦを含有する反応容器中に移した。出発物質が消費された後、生成物の微粒シード（０.５ｇ）を最少量のアセトニトリル（５ｍＬ）に加えた。次いで、該反応混合物を約４０分間にわたって５３〜５７℃に加熱し、この温度で少なくとも４時間保持した。反応物を０〜５℃に冷却し、生成物を濾過により単離し、アセトニトリル（２５０ｍＬ）で洗浄し、５５〜６０℃で真空乾燥させた。５２.２４ｇを得た。

２ｆ） 化合物６の製造 − 製造方法２
化合物５（５００ｇ）を反応容器１に添加し、次いで、アセトニトリル（ＣＡＮ、３７５０ｍＬ）およびテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、１２５０ｍＬ）を添加した。次いで、該溶液を６０〜６５℃に加熱し、透明溶液が観察されると、反応容器２への清澄濾過を行った。反応容器１にｐ−トルエンスルホン酸・一水和物（ＴｓＯＨ・Ｈ₂Ｏ、４３９ｇ）を添加し、次いで、ＡＣＮ（７５０ｍＬ）およびＴＨＦ（２５０ｍＬ）を添加した。該混合物を４０〜４５℃に加熱し、透明溶液が観察されると、反応容器２（出発物質溶液を含有している）へ該溶液を添加しながら、かつ、反応容器２の温度を５０〜６０℃に維持しながら清澄濾過を行った。該混合物を加熱還流し、反応が完了するまで７０〜８０℃に維持した。大気中蒸留によって溶媒約３５００ｍＬを除去した。次いで、該反応容器に水２.５Ｌを添加し、次いで、ＡＣＮ ４Ｌを添加し、温度を７０〜８０℃に調整した。溶解が観察された後、得られた溶液を６４〜６８℃に冷却した。５〜１０分後、粉砕生成物Ｆｏｒｍ ＩＩＩシード（５ｇ）を最少量のアセトニトリルに添加し、６４〜６８℃で１時間保持した。該混合物を２時間にわたって０〜５℃に冷却し、０〜５℃に約３０分間保持した後、濾過により生成物を単離した。固体生成物をアセトニトリル２.５Ｌで洗浄し、５０〜６０℃で真空乾燥させた。４８０ｇを得た。

本発明の方法は、ケモカイン機能、特に、ＧＲＯα、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＮＡＰ−２およびＥＮＡ−７８を阻害する化合物を使用し、子宮内膜症の治療に有用である。

本明細書で使用する場合、「ケモカイン」なる用語は、細胞の機能に影響を及ぼすいずれかの分泌ポリペプチドをいい、免疫反応、炎症反応または造血反応における細胞間の相互作用を調節する分子である。ケモカインは、主に細胞膜貫通を介して分泌され、特異的な白血球、好中球、単球、マクロファージ、Ｔ−細胞、Ｂ−細胞、上皮細胞および平滑筋細胞の走化作用および活性化を生じる。ケモカインの例としては、ＩＬ−８、ＧＲＯ−α、ＧＲＯ−β、ＧＲＯ−γ、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ＩＰ−１０、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−β、ＰＦ４、ならびにＭＣＰ１、２および３が挙げられるが、これらに限定されるものではない。

本発明の化合物を治療に使用するためには、通常、標準的な製薬プラクティスに従って、医薬組成物に製剤化される。

本発明の化合物および該化合物を配合している医薬組成物は、好都合には、薬物投与に慣用的に使用されるいずれかの経路によって、例えば、経口、局所または非経口（好ましくは、経口）投与され得る。本発明の化合物は、慣用的な方法に従って、標準的な医薬担体と組み合わせることによって調製された慣用的な投与剤形で投与され得る。

本発明の化合物はまた、公知の別の治療活性化合物と組み合わせて、慣用の投与剤形で投与され得る。これらの方法は、所望の製剤に応じて、成分の混合、顆粒化および圧縮または溶解を含んでよい。当然のことながら、医薬上許容される特性または希釈剤の形態および特性は、組み合わせようとする活性成分の量、投与経路および他の周知の可変要素によって決まる。担体は、製剤の他の成分と適合し、その受容者に対して有害ではないという意味で「許容」されなければならない。

使用された医薬担体は、例えば、固体または液体のいずれであってもよい。固体担体の例は、ラクトース、白土、シュークロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アカシア、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸および同類のものである。液体担体の例は、シロップ、落花生油、オリーブ油、水および同類のものである。同様に、担体または希釈剤は、当該技術分野で周知の時間遅延物質、例えば、単独の、またはワックスと合わせた、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが挙げられる。

幅広い種類の医薬剤形を使用することができる。かくして、固体担体が使用される場合、該製剤は、錠剤化されるか、粉末もしくはペレットの形態でハードゼラチンカプセル中に入れられるか、またはトローチ剤またはロゼンジ剤の剤形であり得る。固体担体の量は、大きく異なるが、好ましくは、約２５ｍｇ〜約１ｇである。液体担体を使用する場合、該製剤は、シロップ剤、乳剤、ソフトゼラチンカプセル剤、滅菌注射液剤、例えば、アンプル剤または非水性液体懸濁剤の剤形である。

本発明の化合物は、局所的に、すなわち、非全身投与により、投与され得る。これは、化合物が血流中に有意には侵入しないように表皮への本発明の化合物の外用を含む。

これに対して、全身投与とは、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与および筋肉内投与をいう。

局所投与に適している製剤としては、皮膚を通って炎症部位への浸透に適している液体または半液体製剤、例えば、リニメント剤、ローション剤、クリーム剤、軟膏剤またはペースト剤、および滴剤が挙げられる。活性成分は、局所投与については、製剤の０.００１％〜１０％ｗ／ｗ、例えば、１重量％〜２重量％を構成し得る。しかしながら、それは、製剤の１０％ｗ／ｗ程度を構成し得るが、好ましくは、５％ｗ／ｗ、より好ましくは、０.１％〜１％ｗ／ｗを構成する。

本発明によるローション剤としては、皮膚への適用に適しているものが挙げられる。皮膚への適用のためのローション剤またはリニメント剤はまた、乾燥を速めて皮膚を冷却する剤、例えば、アルコールまたはアセトン、および／または保湿剤、例えば、グリセロールまたは油、例えば、ヒマシ油または落花生油を含むことができる。

本発明のクリーム剤、軟膏剤またはペースト剤は、外用の活性成分の半固体製剤である。それらは、微粉または粉末形態の活性成分を、単独で、または、水性もしくは非水性流体中の溶液または懸濁液中にて、適当な機械の助けを借りて、グリース状または非グリース状の基剤と混合することによって調製され得る。該基剤は、アルコール、例えば、プロピレングリコールまたはマクロゲルと一緒に、炭化水素、例えば、固形、軟質もしくは流動パラフィン、グリセロール、蜜ロウ、金属石けん；粘液；扁桃油、コーン油、落花生油、ヒマシ油またはオリーブ油のような天然起源の油；羊毛脂もしくはその誘導体または脂肪酸、例えば、ステアリン酸またはオレイン酸を含むことができる。

該製剤は、いずれかの好適な界面活性剤、例えば、陰イオン型、陽イオン型または非イオン型界面活性剤、例えば、ソルビタンエステルまたはそのポリオキシエチレン誘導体を配合することができる。懸濁化剤、例えば、天然ガム、セルロース誘導体または無機物質、例えば、ケイ酸含有シリカ、およびラノリンのような他の成分を含むこともできる。

本発明の化合物は、非経口的に、すなわち、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、鼻腔内投与、直腸内投与、膣内投与または腹腔内投与により投与され得る。かかる投与に適している投与剤形は、慣用の技術によって調製され得る。

本発明の化合物について本明細書に記載した使用方法の全てについて、１日経口投与計画は、好ましくは、全体重１ｋｇあたり約０.０１〜約８０ｍｇｇである。１日非経口投与計画は、全体重１ｋｇあたり約０.００１〜約８０ｍｇである。１日局所投与計画は、好ましくは、０.１ｍｇ〜１５０ｍｇであり、１日１〜４回、好ましくは、１日２回または３回投与される。本発明の化合物の最適な量および個々の投与間隔が、処置される状態の性質および程度、投与の剤形、経路および部位、ならびに、処置される特定の患者によって決定されるであろうし、かかる最適値が慣用の技術によって決定され得ることも当業者によって認識されるであろう。また、最適な治療方針、すなわち、所定の日数の間の１日に投与される本発明の化合物またはその医薬上許容される塩の投与回数が慣用の治療方針決定試験を使用して当業者によって確認され得ることは当業者であれば当然のことである。

本発明は、単なる例示であって本発明の範囲を限定するものではない以下の生物学的実施例を参照することにより説明される。

生物学的実施例
本発明の方法で使用される化合物は、以下のアッセイで試験される。

受容体結合アッセイ：
比活性２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌを有する[¹²⁵Ｉ]ＩＬ−８（ヒト組換え体）をイリノイ州アーリントンハイツのAmersham Corp.から入手した。ＧＲＯ−αをNEN - New England Nuclearから入手した。他の化学物質は全て分析用のものである。高レベルの組換えヒトＩＬ−８タイプαおよびβ受容体が、Holmes, et al., Science, 1991, 253, 1278（本アッセイを行うのに必要な程度に本明細書に取り込む）に記載されているように、チャイニーズハムスター卵巣細胞中で個々に発現された。ホモジナイゼーションバッファーを１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ、１ｍＭ ＭｇＳＯ₄、０.５ｍＭ ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）、１ｍＭ ＰＭＳＦ（α−トルエンスルホニルフルオリド）、０.５ｍｇ／Ｌ Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ｐＨ ７.５に変更した以外は、Haour, et al., J. Biol. Chem., 249 pp 2195-2205(1974)（本アッセイを行うのに必要な程度に本明細書に取り込む）に従って該チャイニーズハムスター卵巣膜をホモジナイズした。

標準としてウシ血清アルブミンを使用するＰｉｅｒｃｅ Ｃｏ. マイクロアッセイキットを使用して膜タンパク質濃度を測定した。全てのアッセイは、９６ウェルマイクロプレートフォーマットで行った。各反応混合物は、１.２ｍＭ ＭｇＳＯ₄、０.１ｍＭ ＥＤＴＡ、２５ｍＭ Ｎａおよび０.０３％ＣＨＡＰＳを含有する２０ｍＭ Ｂｉｓ−Ｔｒｉｓｐｒｏｐａｎｅおよび０.４ｍＭ Ｔｒｉｓ ＨＣｌバッファー、ｐＨ８.０中に¹²⁵Ｉ ＩＬ−８（０.２５ｎＭ）または¹²⁵Ｉ ＧＲＯ−αおよび０.５μｇ／ｍＬのＩＬ−８Ｒαまたは１.０μｇ／ｍＬのＩＬ−８Ｒβ膜を含有した。加えて、０.０１ｎＭ〜１００μＭの最終濃度に達するようにＤＭＳＯに前溶解された目的化合物を添加した。¹²⁵Ｉ−ＩＬ−８の添加によりアッセイを開始した。室温で１時間後、Ｔｏｍｔｅｃ ９６ウェルハーベスターを使用して１％ポリエチレンイミン／０.５％ＢＳＡでブロックしたガラス繊維フィラメント上に該プレートを収穫し、２５ｍＭ ＮａＣｌ、１０ｍＭ ＴｒｉｓＨＣｌ、１ｍＭ ＭｇＳＯ₄、０.５ｍＭ ＥＤＴＡ、０.０３％ＣＨＡＰＳ、ｐＨ７.４で３回洗浄した。次いで、フィルターを乾燥させ、Ｂｅｔａｐｌａｔｅ液体シンチレーションカウンターで計数した。ここでは、組換えＩＬ−８ＲαまたはＴｙｐｅ Ｉ受容体は非許容受容体と称され、組換えＩＬ−８ＲβまたはＴｙｐｅ ＩＩ受容体は、許容受容体と称される。

本アッセイでは、＜１０μＭのＩＣ₅₀値を活性であると見なした。実施例１の化合物のＩＣ₅₀は約１３ｎＭであった。

ラットのエストロゲン対抗モデル： 子宮内栄養モデルアッセイ
ラットのエストロゲン対抗モデル（Lundeen, S.G. et al., (2001) Rat Uterine Complement C3 Expression as a Model for Progesterone Receptor Modulators: Characterization of the New Progestin Trimegestone. J. Steroid Biochem. & Mol. biol. 78, 137-143（本アッセイを行うのに必要な程度に本明細書に取り込む））を使用して、３０ｍｇ／ｋｇ／日での実施例２ｆの効力を測定した。これは、化合物の前処理に続いて２日間のエストロゲン（０.０８ｍｇ／ｋｇ）と化合物の併用処置を含む４８時間齧歯類モデルであった。後に、ラットから子宮を取り出し、計量し、後の生化学的分析のために薄片を作成した。このモデルにおけるエストロゲンは、炎症誘発性であり、浮腫を誘発し、子宮内膜への好中球の浸潤により子宮の重量を４〜５倍増加させた。化合物による処置の子宮重量に対する有意な効果は、約２５％減であると見なされた。化合物による処置の効果はまた、補体３（Ｃ３）遺伝子発現およびＦＢＪネズミの骨肉腫ウイルス発癌ホモログ（ｃｆｏ）の検出によってモニターされ、これらは共に子宮におけるエストロゲン刺激によってアップレギュレートされた。マトリックスメタロプロテアーゼ９（ＭＭＰ９）の遺伝子発現もまた測定され、これは、ＣＸＣＲ２活性化（Arici, A., Uterine Chemokines in Reproductive Physiology and Pathology, American Journal of reproductive Immunology 47(4), 213-221（本アッセイを行うのに必要な程度に本明細書に取り込む））によって有意に調節されることが示された。

３０ｍｇ／ｋｇ／日の実施例２ｆは、エストロゲン誘発性子宮湿重量を有意に減少させた（６６％＋／−５％）。Ｃ３およびｃｆｏの遺伝子発現は、エストロゲンのみによる処置と比べて、それぞれ８４％および５０％有意に減少した。ＭＭＰ−９の遺伝子発現レベルは、ビヒクル対照およびエストロゲン処置ラットと比べて、有意に５０％低下した。これらの結果は、実施例２ｆが、子宮内膜症のようなエストロゲン誘導子宮増殖性疾患における増殖およびプロテアーゼ誘発性リモデリングを阻害したことを示している。

上記説明は、好ましい実施態様を含む本発明を十分に開示している。本明細書に詳細に記載されている実施態様の改変および改良は、特許請求の範囲の範囲内である。さらなる詳述を伴わなくとも、当業者であれば上記の記載を用いて本発明を最大限に利用することができるものと考えられます。したがって、本明細書中の実施例は、単に例示的なものであり、いかなる場合も本発明の範囲を限定するものではない。独占的な所有権または独占権を主張する本発明の実施態様は、特許請求の範囲に記載のとおりである。

Claims (14)

1. 子宮内膜症の治療方法であって、かかる治療を必要とする女性にＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩である化合物を投与することを含む方法。
2. 化合物がＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・塩酸塩である、請求項１記載の方法。
3. 化合物がＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・ｐ−トルエンスルホン酸塩である、請求項１記載の方法。
4. 化合物が経口投与される、請求項１記載の方法。
5. 子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性における子宮内膜症の予防方法であって、Ｎ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素またはその医薬上許容される塩である化合物を投与することを含む方法。
6. 化合物がＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・塩酸塩である、請求項５記載の方法。
7. 化合物がＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・ｐ−トルエンスルホン酸塩である、請求項５記載の方法。
8. 化合物が経口投与される、請求項５記載の方法。
9. 子宮内膜症の治療用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−尿素またはその医薬上許容される塩の使用。
10. 子宮内膜症の治療用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・塩酸塩の使用。
11. 子宮内膜症の治療用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)尿素・ｐ−トルエンスルホン酸塩の使用。
12. 子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性における子宮内膜症の予防用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−尿素またはその医薬上許容される塩の使用。
13. 子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性における子宮内膜症の予防用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−尿素・塩酸塩の使用。
14. 子宮内膜症の発症のリスクが通常よりも高い女性における子宮内膜症の予防用薬物の製造におけるＮ−[４−クロロ−２−ヒドロキシ−３−(ピペラジン−１−スルホニル)フェニル]−Ｎ'−(２−クロロ−３−フルオロフェニル)−尿素・ｐ−トルエンスルホン酸塩の使用。