JP2009531412A - カンプトテシン−細胞透過性ペプチド複合体及びそれを含む医薬組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、標的細胞又は組織への治療的薬剤の改善された送達において使用する新規化合物、それを含有する組成物及びその使用に関する。本化合物は、より詳細には、ペプチド部分及びカンプトテシンの複合体、それらの誘導体又は類似体であり、これは、水への溶解度、薬物動態及び組織分布の増大、治療係数の増加、並びに患者間代謝変動の限定、更には生物学的活性成分の標的細胞又は組織への送達の改善を含む、多くの恩恵を提供する。

Description

本発明は、標的細胞又は組織への治療薬の改善された送達において使用する新規化合物、それを含有する組成物及びそれらの使用に関する。より詳細に述べると、本化合物は、水への溶解度、薬物動態及び組織分布に関する増強、治療係数の増大、並びに患者間代謝変動の制限、更には生物学的活性成分の標的細胞又は組織への送達の改善を含む、多くの恩恵を提供する、ペプチド性部分とカンプトテシン、それらの誘導体又は類似体の複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）である。

発明の背景
カンプトテシン（ＣＰＴ）は、１９６０年代に発見された、カンプトテカ・アキュミナタ（Ｃａｍｔｐｏｔｈｅｃａ ａｃｕｍｉｎａｔａ）木から抽出されたアルカロイドである（Ｗａｌｌら，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８８：３８８８−３８９０（１９６６））。この水に不溶性の分子は、非常に強力な抗腫瘍活性を示したが、臨床におけるその利用は、非常に強力な膀胱毒性及び重度の下痢のために制限された（Ｇｏｔｔｌｉｅｂら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．５４：４６１−４７０（１９７０）；Ｍｏｅｒｔｅｌら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．５６：９５−１０１（１９７２））。構造−活性試験は、現在市販されている２種の水溶性の抗−新生物形成性誘導体を同定した：イリノテカン（ＣＰＴ−１１，Ｃａｍｐｔｏ（登録商標），Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））及びトポテカン（Ｈｙｃａｍｔｉｎ（登録商標）、水溶性カンプトテシン誘導体）。これら２種の分子は、ＤＮＡの１本鎖破壊を誘導し、その後ＤＮＡ複製を妨害する、ＤＮＡトポイソメラーゼＩの特異的阻害剤である（Ｈｓｉａｎｇら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６０：１４８７３−１４８７８（１９８５）；Ｋａｗａｔｏら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５１：４１８７−４１９１（１９９１）；Ｓａｔｏｈら，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１７：６６２−６６４（１９９４））。

イリノテカンは、ＳＮ３８（７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）の水溶性プロドラッグであり、その活性代謝産物は、イリノテカンが肝臓で酵素的に切断された後に放出される。ＳＮ３８は、強力なトポイソメラーゼＩ阻害剤であり、抗増殖剤としてイリノテカンよりも少なくとも２０００倍より活性がある。しかしＳＮ３８は、非常に水に不溶性であり、その適切な投与及びバイオアベイラビリティを可能にする送達システムを必要とする。多くのカンプトテシン誘導体のように、ＳＮ３８は、抗−腫瘍効果に非常に重要であるラクトン環を含む。このラクトン環は、生理的ｐＨ又は塩基性ｐＨでは不安定であり、この活性薬物の不活性カルボキシラート型への転換を生じる（Ｃｈａｂｏｔ，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，３３：２４５−２５９（１９９７））。

イリノテカンは、結腸癌の治療に広く使用されている。しかしこれは、いくつかの制限に遭遇している。イリノテカンは投与後、活性があるようＳＮ３８へ転換される。イリノテカンの活性薬物ＳＮ３８への肝臓での酵素的転換は、ヒトにおいては非常に部分的である（Ｒｏｈｔｅｎｂｅｒｇら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１１：２１９４−２２０４（１９９３）；Ｓｅｎｔｅｒら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１２：１０７４−１０８０（２００１））。投与されたイリノテカン投与量のわずかに２〜８％が、肝臓及び腫瘍カルボキシルエステラーゼ（ＣＥＳ）により親油性代謝産物ＳＮ３８へ切断される（Ｓｅｎｔｅｒら，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１２：１０７４−１０８０（２００１）；Ｘｕら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．８：２６０５−２６１１（２００２））。この異化作用の速度論の分析は、最大１０倍まで酵素活性が影響される、遺伝的及び環境的要因に起因した、実質的患者間の不均一性を明らかにした（Ｃｈａｒａｓｓｏｎら，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．３０：７３１−７３３（２００２））。このことは、イリノテカン代謝における高レベルの個体間変動につながり、イリノテカンの耐性及び有効性に影響を及ぼし、並びに患者のケアを著しく複雑にする（Ｏｈｅら，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８４：９７２−９７４（１９９２）；Ｇｕｐｔａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５４：３７２３−３７２５（１９９４）；Ｓｌａｔｔｅｒら，Ｄｒｕｇ Ｍｅｔａｂ．Ｄｉｓｐｏｓ．２８：４２３−４３３（２０００）；Ｋｒａｕｔら，ＡＳＣＯ要約集：２５０１，２００４）。ＳＮ３８は更に、肝臓において、ウリジン二リン酸グルクロノシル転移酵素１Ａ１（ＵＧＴ１Ａ１）により、不活性グルクロノ−複合体であるＳＮ３８−グルクロニド（ＳＮ３８−Ｇ）へ転換（解毒）される。グルクロン酸抱合は、この分子を親水性とし、このことは胆汁によるその胃腸排出を可能にする。ＳＮ３８−Ｇは、一旦腸において、腸の細菌叢（β−グルクロニダーゼ酵素）によりＳＮ３８へ再転換される。イリノテカンそれ自身は主に胆汁へ排泄され（＞２６％）、腸のＣＥＳによりＳＮ３８へ転換され得る（Ｍ．Ｈｏｒｉｋａｗａ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｒｅｓ．，１９：１３４５−１３５３（２００２））。この腸内のＳＮ３８の局所的蓄積は、イリノテカン治療後に認められる高レベルの遅延型の腸毒性（下痢）の原因であり、これはイリノテカンの主要な用量規定毒性のひとつである（Ｘｉｅら，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ；７２：２６５−２７５（２００２）；Ａｌｉｍｏｎｔｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｖ．３０：５５−５６２（２００４））。遅延型の下痢は重症であり（例えば致命的）、時には発熱を伴い出現する。別のイリノテカンの重大な毒性は、白血球減少症（例えば好中球減少症）である。血液学的障害は、時には全身の感染症と合併した重症の形成不全を生じることがある。これらの治療後に認められる重症の副作用は、患者に追加の病院治療（より長い入院期間；下痢止め治療；予防的抗生物質療法）を生じる（Ｋｅｈｒｅｒら，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：１１３６−１１４１（２００１））。イリノテカン投与量の漸増／増強は、改善された治療的反応を生じることが、臨床試験において示されている。この投与量−効果は、結腸直腸の転移性癌の患者において証明されている（Ｙｃｈｏｕら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５０：３８３−３９１（２００２）；Ｖａｎ Ｃｕｔｓｅｍら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．９２：１０５５−１０６２（２００５））。しかし、先に説明された重症の副作用は、個体へ投与することができる投与量を制限し、イリノテカンの有効性の見込みを低下する。

ヒト癌のカンプトテシン誘導体への反復曝露（ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ）は、薬物耐性の発生に繋がり得る（Ｎａｋａｇａｗａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔｅｒｓ，印刷中（２００５））。この特徴は、カンプトテシン誘導体による治療後のみではなく、通常使用される他の抗癌剤によっても、有効性の低下を誘導する。

従って先に説明されたカンプトテシン誘導体（例えばＳＮ３８）の制限を克服するために、好適な送達システムを開発する実質的関心が存在する。

カンプトテシン誘導体の送達に関して、様々な戦略が、提唱されており、例えばＳＮ３８のリポソーム製剤（ＮＥＯＰＨＡＲＭにより出願されたＷＯ ２００４／０３５０３２で公開されたＰＣＴ特許出願において開示）、ＳＮ３８のナノ粒子製剤（ＩＭＡＲＸにより出願されたＷＯ０３／１０３５９６号で公開されたＰＣＴ特許出願において開示）、ポリグルタミン酸−カンプトテシン複合体（ＣＥＬＬ ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳにより出願されたＷＯ０１／７０２７５で公開されたＰＣＴ特許出願において開示）、又はＰＥＧ−カンプトテシン複合体（ＥＮＺＯＮにより出願されたＷＯ０３／０９７３５６及びＤＥＢＩＯにより出願されたＷＯ０３／０３１４６７で公開されたＰＣＴ特許出願において開示）もしくは２０−Ｏ−［グリシル−アミノアシル−グリシル］−カンプトテシン（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ ＆ ＵＰＪＯＨＮにより出願されたＷＯ９９／１７８０４で公開されたＰＣＴ特許出願において開示）のポリマー複合体のような、カンプトテシンのポリマー誘導体がある。

１０−ヒドロキシカンプトテシンのような様々な薬物の送達を促進することを目的として、ペプチド性薬物送達システムも、ＣＹＣＬＡＣＥＬにより出願されたＷＯ００／０１４１７号で公開されたＰＣＴ特許出願において開示されている。この特許出願は、多くの細胞毒性薬への複合、その結果それらの送達及び／又は治療作用を増強することに関して、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）アンテナペディアホモタンパク質に由来するホメオボックスペプチド（好ましくはペネトラチンと称される細胞−透過性ペプチド（ＣＰＰ））の使用を開示している。しかしこの特許出願は、これらの複合体と共に行われたインビトロ又はインビボ実験は示していない。結果的にこの出願人は、この特許出願ＷＯ００／０１４１７号の実施例２９において説明された複合体を用い、インビトロヒト血清安定性試験を行った。これらの試験は、この複合体の半減期（安定性）は、３分未満であり、これはインビボにおける治療的有効量のカンプトテシン誘導体の細胞内送達に十分であるようには見えないことを示した。

ＤＩＡＴＯＳにより出願されたＷＯ０１／６４７３８号で公開されたＰＣＴ特許出願は、アミノグリカンと反応し、及び広範な活性物質（すなわち核酸、タンパク質、薬物、抗原又は抗体）を外側培地から細胞内部、より詳細には細胞の核へ移動するアミノ酸配列に関連している。このような配列は、ヒトタンパク質に由来し、従って治療的処置の必要なヒトへ投与される場合、非−免疫性細胞−透過性ペプチド（ＣＰＰ）である。

結果的に活性化合物（例えばＳＮ３８）の増強された送達の効率、安全性及び有効性が必要である。

本発明につながる研究のフレームワーク内で、本出願者は、様々なＣＰＰ−カンプトテシン誘導体の複合体を合成した。その後これらの複合体を、それらの安定性、有効性及び毒性について、インビトロ及びインビボにおいて評価した。

特に本発明の目的は、イリノテカンのようなカンプトテシン誘導体に関して先に説明された欠点及び望ましくない副作用を緩和又は軽減する化合物を提供することである。特に本発明は、医薬として許容される形で生物学的活性物質の溶解度を改善し、効果的な細胞内送達を可能にするのに十分な安定性を有し、毒性又は望ましくない副作用を軽減し、望ましい治療作用の作動開始を増強し、薬物の投与のための別の経路を提供し、患者間変動を減少し、並びに／又は薬物の組織分布及び代謝を変更することができる化合物を提供することを目的としている。

発明の概要
第一の態様に従い、本発明は、担体部分に連結された薬物部分を含む複合体に関し、ここで該担体部分は、ペイロード（例えば薬物部分）の細胞又は組織への透過を促進し、かつ溶解度を増大し、薬物動態、代謝及び組織分布特性を修飾し、並びに／又は薬物耐性の発生を減少する能力を有する、ペプチド又はそれらの類似体を含み、並びにこの薬物部分は、任意のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体である。該ペプチド又はそれらの類似体は、本明細書において細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）とも称される。

本発明は、そのような複合体を含有する医薬組成物、それらの治療的使用、特に癌を含む様々な種類の疾患の治療のための使用にも関する。

発明の詳細な説明
特定の実施態様に従い、本発明は、好ましくはリンカー基により、担体部分へ連結された、少なくとも１種のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体、より好ましくは化合物ＳＮ３８を含む複合体を提供する。

この担体部分は、ペイロード（例えば薬物部分）の細胞又は組織への透過を促進し、かつ薬物部分の溶解度を増大し、薬物部分の薬物動態、代謝及び組織分布特性を修飾し、患者間の変動を低下し、並びに／又は薬物耐性の発生を減少する能力を有する、ペプチド又はそれらの類似体を含む。

本発明の複合体は、それらの塩、光学及び幾何異性体、又はそれらの混合物を含む。
この複合体の塩は、特に塩基付加塩又は酸付加塩であり、好ましくは医薬用途に適合可能である。医薬として許容される無機酸の中で、非限定的例は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、及び硝酸を含む。医薬として許容される有機酸の中で、非限定的例は、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマル酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、安息香酸、アスコルビン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸及び樟脳酸である。医薬として許容される塩基の中で、非限定的例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、トリエチルアミン及びｔｅｒｔ−ブチルアミンである。好ましくは本発明の複合体は、塩酸塩の形である。

有利なことに、担体部分の薬物（すなわちカンプトテシン誘導体）への複合は、複合されない薬物と比べて、薬物の薬物動態挙動の修飾につながる。

有利なことに、担体部分は、本複合体の水溶液中の低いｐＨ（例えば＜６．５のｐＨ値）を誘導する、正帯電した部分（すなわち塩基性アミノ酸）を含む。この酸性のｐＨは、医薬組成物中のカンプトテシン誘導体（ラクトン型＞９５％）上のラクトン基の安定化にとって好ましく、その結果生存動物又はヒト個体への注射後に、ラクトン型とカルボキシラート型の間の血漿平衡をもたらし、ラクトン型が好ましい（＞約５５％がラクトン型）（Ｋａｎｅｄａら，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：９９２−９９６（１９９７））。

本発明の別の利点は、薬物の組織分布及びその結果のインビボ代謝も、その担体部分への複合により変更される（すなわち修飾される）ことである。代謝の修飾は、イリノテカン活性化のための肝臓カルボキシルエステラーゼと比べると、血漿エステラーゼに加え組織エステラーゼによる本発明の複合体の切断を含む。まとめると、修飾された組織分布（すなわち肝臓の取り込みの減少）及び本発明の複合体の肝臓による活性化の必要性を避ける本発明の送達システムは、治療の個体間変動の減少及び腸毒性の減少（イリノテカンと比べて）、更には活性代謝産物（すなわちその治療的活性型の薬物）、例えばＳＮ３８の６０％を超える送達につながる。

有利なことに、本発明の複合体は、循環及び細胞カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体の治療的有効量の送達をもたらすのに十分な安定性を示す。好ましくは本発明の複合体は、リンカー基を介して担体部分に連結した少なくとも１種のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体を含み、ここで担体部分は細胞透過性ペプチドであり、並びにヒト血漿中のその複合体の３７℃、インビトロでの半減期（すなわち本発明の複合体により放出された遊離のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体が５０モル％である時間）は、５分と等しいか又はそれよりも長い。

用語「複合体」又は「複合された」は、共有的、イオン的、又は疎水的相互作用を意味し、これにより分子の部分は、まとめられかつ隣接して保存される。

用語「反応した」は、化学技術分野の業者にとって一般的な意味を有する。
用語「リンカー」又は「クロスリンカー」は、本明細書において互換的に使用され、２つの部分が一緒に複合／連結しかつ１個又は複数の原子を含む鎖を意味する。

用語「インビトロ」は、精製された試薬又は細胞抽出物のような抽出物が関連する、例えば細胞培養物などの、その技術分野が認める意味を有する。用語「インビボ」も、例えば生物の生存細胞、及び／又は生物の任意の細胞が関連する、その技術分野が認める意味を有する。

用語「薬物動態」は、薬物が、体により吸収、分布、代謝、及び排泄されるプロセスを意味する。薬物動態挙動は一般に、時間の関数としての、薬物及びその代謝産物の血液、血漿又は血清中の濃度の展開（ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）から評価される。観察時間は、約５分から約２４時間又はそれよりも長い時間で構成することができる。用語「血漿薬物動態」は、経時的な薬物及びその代謝産物の血液、血漿又は血清中の濃度の展開を意味する。

用語「組織分布」は、様々な組織、すなわち肝臓、肺、胃、腸、膵臓、脳、膀胱、卵巣、睾丸、前立腺、子宮、皮膚、筋肉、脾臓、リンパ節、腫瘍、又は任意の他の関連臓器の、規定された時間での薬物又はその代謝産物への相対又は絶対曝露として定義される。組織分布は、時間の関数としての組織中の薬物又は代謝産物の濃度の展開から決定される。

用語「ペプチド（複数）」は、記載の慣例上、Ｎ端又はアミノ末端が左側であり、並びにＣ端又はカルボキシ末端が右側である、アミノ酸のポリマーを意味する。あるいは２０種の最も一般的な天然のＬ−アミノ酸は、３文字又は１文字のコードにより指定される。本明細書において使用されるペプチドは、Ｌ−アミノ酸側鎖へ又はα−アミノ酸骨格への１つ又は複数の修飾を含む、「ペプチド類似体」の構造修飾を含むと考えられる。骨格修飾されたペプチド類似体の例は、Ｎ−メチルグリシン「ペプトイド」である（Ｚｕｃｋｅｒｍａｎｎら，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１４：１０６４６−４７（１９９２））。

用語「細胞透過性ペプチド（複数）」（ＣＰＰ）は、生体膜又は生理的障壁を超えることが可能である担体ペプチドとして定義される。細胞透過性ペプチドは、細胞透過可能なペプチド、タンパク質−伝達ドメイン（ＰＴＤ）又は膜−移行配列（ＭＴＳ）とも称される。ＣＰＰは、インビトロ及び／又はインビボにおいて哺乳類の細胞膜を移行し、細胞及び／又は細胞核に侵入し、並びに薬物又はマーカーのような関心対象の複合された化合物を所望の細胞の目的地へ向ける能力を有する。従ってＣＰＰは、関心対象の化合物の、リン脂質膜、ミトコンドリア膜、エンドソーム膜又は核膜を超える透過を指示するか又は促進することができる。ＣＰＰは、関心対象の化合物を、細胞の外側から形質膜を通り、細胞質もしくはサイトゾルへ、又は細胞内の所望の位置、例えば核、ミトコンドリア、小胞体、リソソーム、もしくはペルオキシソームへ指示することもできる。あるいは又は加えてＣＰＰは、関心対象の化合物が、血液−脳障壁もしくは血管腎臓（ｈｅｍａｔｏｒｅｔｉｎａｌ）障壁、経粘膜障壁、皮膚障壁、胃腸障壁及び／又は肺障壁を越えることを指示することができる。いくつかのタンパク質及びそれらのペプチド誘導体が、細胞内在化特性を有することはわかっており、これは１型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）タンパク質Ｔａｔ（Ｒｕｂｅｎら Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３，１−８（１９８９））、ヘルペスウイルス・テグメントタンパク質ＶＰ２２（Ｅｌｌｉｏｔｔ及びＯ’Ｈａｒｅ，Ｃｅｌｌ ８８，２２３−２３３（１９９７））、ペネトラチン（Ｄｅｒｏｓｓｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，１８１８８−１８１９３（１９９６））、プロテグリン１（ＰＧ−１）抗−微生物ペプチドＳｙｎＢ（Ｋｏｋｒｙａｋｏｖら，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３２７，２３１−２３６（１９９３））、及び塩基性線維芽細胞増殖因子（Ｊａｎｓ，Ｆａｓｅｂ Ｊ．８，８４１−８４７（１９９４））を含むが、これらに限定されるものではない。これらの担体ペプチドは、互いに配列相同性をほとんど示さないが、全て高度に陽イオン性であり、及びアルギニン又はリシンリッチである。実際合成ポリ−アルギニンペプチドは、高レベルの効率でインターナライズされることが示されている（Ｆｕｔａｋｉら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１６，２６０−２６４（２００３）；Ｓｕｚｕｋｉら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１））。

結果的に特定の実施態様において、本発明の複合体は、細胞内在化特性を有する、１型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）タンパク質Ｔａｔ、ヘルペスウイルス・テグメントタンパク質ＶＰ２２、ペネトラチン、プロテグリン１（ＰＧ−１）抗−微生物ペプチドＳｙｎＢ、塩基性線維芽細胞増殖因子、合成ポリ−アルギニンペプチド、又はそれらのペプチド誘導体から選択されたＣＰＰを示す。

本発明の特定の態様に従い、ＣＰＰは、下記式（Ｉ）を有するアミノ酸配列を含む：
Ｃ（Ｘ１）_ｐ［（Ｘ）_ｏ（Ｂ）_ｎ（Ｘ）_ｓＢＸ（Ｘ）_ｒＸＢ］_ｍ（Ｘ２）_ｑＣ （Ｉ）
（式中、
Ｘ１及びＸ２は独立して、１〜２０個のアミノ酸のアミノ酸配列であり；ｐ及びｑは独立して、０〜５の間の整数、好ましくは０又は１であり；
Ｂは独立して、塩基性アミノ酸であり；Ｘは独立して、非−塩基性アミノ酸であり；
Ｃは、独立して存在しないか、又は複合体の残りの部分に連結されたチオエーテル結合を含むいずれかの部分であり、好ましくはこの部分はシステイン又はシステアミンであり；
ｍは、１又は２であり；
ｎは、１、２又は３であり；
ｏは、０又は１であり；
ｒは、０又は１であり；
ｓは、０、１、２又は３である）。

好ましい実施態様において、ＣＰＰは、ヒトタンパク質に由来し、従ってヒトへ投与された場合に免疫原性は避けられる。前述の特定の実施態様に従い、ＣＰＰは、先に定義されたように式（Ｉ）により表されるアミノ酸配列を含むペプチドである。

より好ましい実施態様において、本発明のＣＰＰは、本発明のＣＰＰに複合されない該分子と比べ、高度に親油性の分子を溶解し、並びに／又はそれらの薬物動態及び組織分布を修飾することもできる。

特定の実施態様において、本発明の担体部分は、インビトロ及び／又はインビボにおいて、細胞表面グリコサミノグリカンと反応することが可能であるＣＰＰを含む。このようなＣＰＰは、ＤＩＡＴＯＳにより出願されたＰＣＴ特許出願ＷＯ０１／６４７３８及びＷＯ０５／０１６９６０、並びにＤｅ Ｃｏｕｐａｄｅらの論文（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．３９０：４０７−１８（２００５））に開示されている。これらのペプチドは、以下からなる群より選択される、ヒトヘパリン結合タンパク質及び／又は抗−ＤＮＡ抗体を起源とするアミノ酸配列である：ヒトアポリポタンパクＢ又はＥのような、リポタンパク（Ｃａｒｄｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｓｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．１５４：７４１（１９８８））、アグリン（Ｃａｍｐａｎｅｌｌｉら，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ １２２：１６６３−１６７２（１９９６））、インスリン増殖因子結合タンパク質（Ｆｏｗｌｋｅｓら，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１３８：２２８０−２２８５（１９９７））、ヒト血小板−由来増殖因子（Ｍａｈｅｒら，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２２５１−２２５３（１９８９））、ヒト細胞外スーパオキシドジスムターゼ（ＥＣ−ＳＯＤ）（Ｉｎｏｕｅら， ＦＥＢＳ ２６９：８９−９２（１９９０））、ヒトヘパリン−結合上皮増殖因子−様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）（Ａｒｋｏｎａｃら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：４４００−４４０５（１９９８））、酸性線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）（Ｆｒｏｍｍら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈ．３４３：９２（１９９７））、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）（Ｙａｙｏｎら，Ｃｅｌｌ ６４：８４１−８４８（１９９１））、ヒト腸ムチン２配列（Ｘｕら，Ｇｌｙｃｏｎｊｕｇ Ｊ．１３：８１−９０（１９９６））、ヒトγインターフェロン（Ｌｏｒｔａｔ−Ｊａｃｏｂ及びＧｒｉｍａｕｄ，ＦＥＢＳ ２８０：１５２−１５４（１９９１））、ヒトインターロイキン１２のサブユニットｐ４０（Ｈａｓａｎら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：１０６４−１０７０（１９９９））、ストローマ細胞由来の１α因子（Ａｍａｒａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２００−２０４（１９９９））、ヒト好中球由来の「ヘパリン結合タンパク質」（ＣＡＰ３７／アズロシジン）（Ｐｏｈｌら，ＦＥＢＳ ２７２：２００−２０４（１９９０））、マウス抗−ＤＮＡモノクローナル抗体Ｆ４．１のＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３領域のような、免疫グロブリン分子（Ａｖｒａｍｅａｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９５：５６０１（１９９８））、ヒト抗−ＤＮＡモノクローナル抗体ＲＴＴ７９の超可変ＣＤＲ３領域（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら，Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ ６：８０９（１９９３））、ヒト抗−ＤＮＡモノクローナル抗体ＮＥ−１の超可変領域ＣＤＲ２及び／又はＣＤＲ３（Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉら，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：５３３（１９９３））、ヒト抗−ＤＮＡモノクローナル抗体ＲＴ７２の超可変領域ＣＤＲ３（Ｋａｌｓｉら，Ｌｕｐｕｓ ４：３７５（１９９５））。

ＣＰＰのグリコサミノグリカン（ＧＡＧ）と反応／結合する能力は、当該技術分野において公知の直接的又は間接的グリコサミノグリカン−結合アッセイ、例えばＰＣＴ特許出願ＷＯ ００／４５８３１に開示されているペプチドグリコサミノグリカン結合に関するアフィニティ共電気泳動（ＡＣＥ）アッセイにより決定することができる。当該技術分野において周知のいくつかの他の方法が、ＧＡＧ−ペプチド相互作用の分析に利用可能であり、例えば、ＰＣＴ特許出願ＷＯ０１／６４７３８又はＷｅｉｓｇｒａｂｅｒ及びＲａｉｌの論文（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６２（３３）：１１０９７−１０３）（アポリポタンパクＢ−１００の具体例）に説明された方法；又は、改変されたＥＬＩＳＡ試験：９６−ウェルプレートを、特異的ＧＡＧ（コンドロイチン硫酸Ａ、Ｂ及びＣ、ヘパリン、ヘパリン硫酸、ヒアルロン酸、ケラチン硫酸、シンデカン）によりコートし、その後マーカーに複合されたペプチドを指定された時間添加し；十分に洗浄した後、ペプチド結合を、そのマーカーに関連した特異的分析を用いて決定する方法である。

ＣＰＰは、任意の長さであることができる。例えばＣＰＰは、アミノ酸の長さが５００、２５０、１５０、１００、５０、２５、１０、６又は４個と等しいか又はそれ未満である。例えば、ＣＰＰは、アミノ酸の長さが４、６、１０、２５、５０、１００、１５０、２５０又は５００個と等しいか又はそれ以上である。ＣＰＰの好適な長さ及びデザインは、当業者は容易に決定することができる。ＣＰＰに関する全般的参照は、以下に列挙することができる：ＣＥＬＬ ＰＥＮＥＴＲＡＴＩＮＧ ＰＥＰＴＩＤＥＳ：ＰＲＯＣＥＳＳＥＳ ＡＮＤ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ、Ｕｌｏ Ｌａｎｇｅｌ編集（２００２）；又は、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ５７：４８９−６６０（２００５）。

好ましい実施態様において、ＣＰＰは、アミノ酸の長さが５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４又は２５個である。

好ましい実施態様において、ＣＰＰは、アミノ酸の長さが５０個未満、好ましくは２５個未満の式（Ｉ）のアミノ酸配列を含む。一般に式（Ｉ）のアミノ酸配列は、８個よりも多い、好ましくは１０個よりも多いアミノ酸を有する。

特定の実施態様に従い、担体部分は、式（Ｉ）のアミノ酸配列を含むペプチドであり、ここでＣは、存在しないか、又はアミノ酸配列の任意の位置であり、より好ましくは該アミノ酸配列のＣもしくはＮ末端位置である。チオエーテル結合を介してペプチドをカンプトテシン、それらの誘導体もしくは類似体に複合するために、チオール基を含む部分を、式（Ｉ）のアミノ酸配列の任意の位置に付加することができる。より好ましくは、チオール基を含む部分は、該アミノ酸配列のＣ又はＮ末端のいずれかの位置である（すなわち、この部分は、Ｃ及びＮ末端位置の一方にのみ存在し、他方のＣ又はＮ位置では、式（Ｉ）のＣが存在しない）。具体的には、この部分は、システイン又はシステアミンである。

好ましくは、Ｘ１及びＸ２は独立して、２〜１５個のアミノ酸、より好ましくは２〜１０個のアミノ酸のアミノ配列である。これらは、塩基性アミノ酸であるか又は非塩基性アミノ酸のいずれかを含むことができる。より詳細に述べると、Ｘ１及びＸ２は、システインアミノ酸を欠いている。

用語「塩基性アミノ酸」は、ｐＨ７で正帯電した任意のアミノ酸、特にグアニジル、アミジニル又はアミノ部分を有する任意のアミノ酸である。用語「グアニジル」及び「グアニジン」は、式−ＨＮ＝Ｃ（ＮＨ_２）ＮＨ（非プロトン化型）を有する部分を意味するように互換的に使用される。例として、アルギニンは、グアニジル（グアニジノ）部分を含み、及び２−アミノ−５−グアニジノ吉草酸又はａ−アミノ−６−グアニジノ吉草酸とも称される。用語「アミジニル」及び「アミジノ」は、式−Ｃ（＝ＮＨ）（ＮＨ_２）を有する部分を意味するように互換的に使用される。好ましい高度に塩基性のアミノ酸は、ヒスチジン（Ｈ）、アルギニン（Ｒ）及び／又はリシン（Ｋ）であり、より好ましくはＫ及びＲである。

用語「非塩基性アミノ酸」は、ｐＨ７又はそれ未満で正帯電していない任意のアミノ酸残基を意味する。これは結果的に、ｐＨ７の無極性アミノ酸（すなわち疎水性アミノ酸）、極性非帯電アミノ酸及び負帯電したアミノ酸のいずれかを含む。本明細書において使用される無極性アミノ酸は、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｆ、Ｐ、Ｗ、及びＶである。極性非帯電アミノ酸は、Ｎ、Ｃ、Ｑ、Ｇ、Ｓ、Ｔ及びＹである。負帯電したアミノ酸は、Ｄ及びＥである。好ましい実施態様に従い、式（Ｉ）のＢＸ（Ｘ）_ｒＸＢ部分に含まれる非塩基性アミノ酸は、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、及びシトルリンからなる群より選択される。

本発明の好ましいアミノ酸配列は：
−ｏは、１であり、及び／又は
−ｐ及び／もしくはｑは、１であり、並びに／又は
−Ｘ１は、３〜１２個のアミノ酸の配列であり、及び／又は
−Ｘ２は、２〜１０個のアミノ酸の配列であり、及び／又は
−ｒは、０であり、及び／又は
−ｍは、１であるものである。

従って、ヒトヘパリン結合タンパク質に由来しかつ細胞へ特異的に透過することが可能である好ましいＣＰＰは、以下からなる群より選択される：
−ＤＰＶ３（配列番号：１）：ヘパリンと反応し、及びヒト細胞外スーパオキシドジスムターゼ（ＥＣ−ＳＯＤ）の配列のＣ−末端部分に由来するペプチドの二量体である、ＣＰＰ（Ｉｎｏｕｅら，ＦＥＢＳ ２６９：８９−９２（１９９０））、
−ＤＰＶ６（配列番号：２）：ヘパリンと反応し、及びヒト血小板−由来増殖因子のＡ鎖のＣ−末端部分のアミノ酸配列に由来する、ＣＰＰ（Ｍａｈｅｒら，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．９：２２５１−２２５３（１９８９））、
−ＤＰＶ７（配列番号：３）及びＤＰＶ７ｂ（配列番号：４）：ヘパリンと反応し、及びヒトヘパリン−結合上皮増殖因子−様増殖因子（ＨＢ−ＥＧＦ）の配列のＣ−末端部分に由来する、ＣＰＰ（Ａｒｋｏｎａｃら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：４４００−４４０５（１９９８））、

−ＤＰＶ１０（配列番号：５）：ヘパリンと反応し、及びヒト腸ムチン２配列のＣ−末端部分に相当する、ＣＰＰ（Ｘｕら，Ｇｌｙｃｏｎｊｕｇ Ｊ．１３：８１−９０（１９９６））、
−ＤＰＶ３／１０（配列番号：６）：ヘパリンと反応し、並びにヒト細胞外スーパオキシドジスムターゼ（ＥＣ−ＳＯＤ）の配列のＣ−末端部分（上記参照）及びヒト腸ムチン２配列のＣ−末端部分（上記参照）に由来する、ＣＰＰ、
−ＤＰＶ１０／６（配列番号：７）：ヘパリンと反応し、並びにヒト腸ムチン２配列のＣ−末端部分（上記参照）及び血小板−由来増殖因子のＡ鎖のＣ−末端部分（上記参照）に由来する、ＣＰＰ、
−ＤＰＶ１０４７（配列番号：８）及びＤＰＶ１０４８（配列番号：９）：ヘパリンと反応し、並びにヒトリポタンパクＢのアミノ酸配列（３３５８−３３７２）（Ｃａｒｄｉｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｓｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍ．１５４：７４１（１９８８））及びヒト抗−ＤＮＡモノクローナル抗体ＮＥ−１の超可変領域ＣＤＲ３に対応するペプチドの配列（Ｈｉｒａｂａｙａｓｈｉら，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３７：５３３（１９９３））に由来する、ＣＰＰ、
−ＤＰＶ１５（配列番号：１０）及びＤＰＶ１５ｂ（配列番号：１１）：ヘパリンと反応し、及び「ヘパリン結合タンパク質」ＣＡＰ３７の配列の一部を含む、ＣＰＰ。

本発明に従い、細胞透過性ペプチドは、より詳細には下記表１ａに同定されたペプチドのひとつから選択される。

前述のように、表１ａに同定された各ペプチドは、有利なことにアミノ酸配列のＣ又はＮ位置にシステインを示す。

本発明の細胞透過性ペプチドは、先に説明されたもの又はそれらの類似体であることができるが、これらに限定されるものではない。「類似体」は、それらと少なくとも約５０％、好ましくは少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％〜８５％、好ましくは少なくとも約９０％、及び最も好ましくは少なくとも約９５％〜９９％同一である。例えばペプチドは、１、２、３、４個又はそれ以上の残基に置換を有することができる。ＣＰＰは、それらのモノマー型（前述のようなもの）又はポリマー型（二量体、三量体など）で使用することができる。

必要ならば、ＣＰＰを、増大したインビボ安定性及び／又は生物学的活性を伴う薬物候補へ転換するために、いくつかの周知の戦略を当業者は使用することができ、例えば：
−エキソペプチダーゼ分解、Ｃ−末端アミド化、又はＮ−末端アセチル化を防止するための、Ｎ−及びＣ−末端修飾、
−ジスルフィド橋形成による環化、
−エンドペプチダーゼ分解を防止するための、アミド窒素のアルキル化、
−エンドペプチダーゼの認識部位を修飾するための、非天然アミノ酸の導入（２−メチルアラニン、α−ジアルキル化グリシン、オリゴカルバメート、オリゴ尿素、グアニジノ又はアミジノ骨格）、
−遺伝的にコードされないアミノ酸（グリシン又はフェニルアラニンのメチル化、ハロゲン化又は塩素化）のＣＰＰアミノ酸配列への組込、
−Ｌ−アミノ酸の一部又は全てさえもの、それらの対応するＤ−アミノ酸又はβ−アミノ酸類似体との置き換え。このようなペプチドは、「インベルソ」又は「レトロ−インベルソ」型として、すなわちその配列のＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸と置き換えるか、又はアミノ酸の配列を逆転し、及びＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸と置き換えることにより、合成することができる。構造的に、レトロ−インベルソペプチドは、単純なＤ−類似体よりも当初のペプチドにはるかによく似ている。Ｄ−ペプチドは、それらのＬ−ペプチド対応物と比べ、ペプチダーゼに実質的により抵抗性であり、その結果血清及び組織中でより安定している。好ましい実施態様において、Ｌ−アミノ酸を含むＣＰＰは、エキソペプチダーゼ破壊を阻害するために、単独のＤ−アミノ酸でキャッピングされる、
−ＣＰＰ−由来のオリゴカルバメートの合成；オリゴカルバメート骨格は、比較的堅固なカルバメート結合により連結されたキラルエチレン骨格からなる（Ｃｈｏら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６１：１３０３−１３０５（１９９３））。

本発明の複合体は、カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体を更に含む。
本明細書において使用される「カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体」は、インビトロ及び／又は特にインビボにおいて、酵素ＤＮＡトポイソメラーゼＩに結合する特性を有し、並びに、下記式（ＩＩ）により表されるカンプトテシン骨格を含む、生物学的活性化合物を意味する：

（式中、ｔは、０、１又は２であり、及びＺは、−ＣＯＯ−基（−ＣＯＯ−基の配向は、式（ＩＩ）が記された様式に従い、底から頂上である）又は置換もしくは非置換の二価のアルキル基である）。

より詳細に述べると、カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体は、式（ＩＩ）のカンプトテシン骨格を含み、ここでそこに示された任意の炭化水素基は置換され、好ましくは１、２、３又は４個の炭化水素基が置換されている。式（ＩＩ）の置換基は、カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体が、インビトロ及び／又は特にインビボで酵素ＤＮＡトポイソメラーゼＩへ結合する特性を示す程度まで広い範囲にわたり変動してよい。

置換基は、独立して同じ又は異なっており、並びに好ましくは、アルキル基、アリール基、ハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ_２、−Ｒ’、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルであるか、又は２個の隣接基はそれらを担持する炭素原子と一緒に、式−Ｏ（ＣＨ_２）_ｕＯ−の基（式中、ｕは整数１又は２を表す）を形成することができ；並びにここでＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは独立して、水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_８）ヘテロアルキル、アリール及びヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、及び（非置換アリール）オキシ−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルから選択される。本発明のカンプトテシン類似体が１個又はそれよりも多いＲ基を含む場合、例えば、各Ｒ基は、これらの基の１個又はそれよりも多くが存在する場合の各々のＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基として独立して選択される。該置換基も、置換され得る。例えば任意の基は、アルキル基、アリール基、ハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＮＲ’、＝Ｎ−０Ｒ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ_２、−Ｒ’、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルの少なくとも１種により置換されてよい。特に置換基は、アルキル基、好ましくは低級アルキル基；−ＯＲ’（式中、Ｒ’は、Ｈである）；−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’（式中、Ｒ’は、ヘテロアルキル基、及びより好ましくはヘテロシクロアルキル基、例えばピペリジン又はピペラジン基を含むアルキル基である）；−ＮＲ’Ｒ’’により置換されたアルキル基、又はヘテロアルキル基、及びより好ましくはヘテロシクロアルキル基、例えばピペリジン又はピペラジン基からなる群より選択され；２個の隣接基はそれらを保持する炭素原子と一緒に、式−Ｏ（ＣＨ_２）_ｕＯ−の基（式中、ｕは整数１又は２、好ましくは２を表す）を形成することができる。

用語「アルキル」は、それ自身又は別の置換基の一部として、特に指定しない限りは、任意にＯ、Ｎ、Ｓｉ及びＳを含むヘテロ原子（以下に定義される）の少なくとも１個、又はそれらの組合せにより中断された、直鎖又は分枝鎖、又は環式炭化水素ラジカルを意味し、これは完全に飽和された、モノ−もしくはポリ不飽和であってよく、並びに指定された数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ_１−Ｃ_１０は、１〜１０個の炭素を意味する）、二価及び多価のラジカルを含むことができる。飽和炭化水素ラジカルの例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）メチル、シクロプロピルメチル、例えばｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルのホモログ及び異性体などの基を含むが、これらに限定されるものではない。不飽和アルキル基は、１個又は複数の二重結合を有するもの（例えばアルケニル基）又は三重結合を有するもの（例えばアルキニル基）である。不飽和アルキル基の例は、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−及び３−プロピニル、３−ブチニル、並びにより高次のホモログ及び異性体を含むが、これらに限定されるものではない。用語「アルキル」は、特に記さない限り、以下により詳細に定義されたアルキルの誘導体、例えば「ヘテロアルキル」を含むことも意味する。炭化水素基に限定されるアルキル基は、「ホモアルキル」と称される。

用語「アルキル」は、それ自身又は別の置換基の一部として、アルカン由来の一価又は二価のラジカルを含む。二価のラジカルの中で、−ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２−を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。

典型的にはアルキル基は、１〜２４個の炭素原子を有し、１０個又はそれよりも少ない炭素原子を有するこれらの基が、本発明において好ましい。「低級アルキル」は、より短い鎖のアルキル基であり、一般に８個又はそれよりも少ない炭素原子を有する。

用語「ヘテロアルキル」は、それ自身又は他の用語と組合せて、特に指定しない限りは、言及された数の炭素原子並びにＯ、Ｎ、Ｓｉ及びＳからなる群より選択される少なくとも１個のヘテロ原子からなる、安定した直鎖もしくは分枝鎖、もしくは環状の炭化水素ラジカル、又はそれらの組合せを意味し、ここで窒素、炭素及び硫黄原子は任意に酸化されてよく、かつ窒素ヘテロ原子は、任意に四級化されてよい。ヘテロ原子（類）Ｏ、Ｎ及びＳ及びＳｉは、ヘテロアルキル基の内側位置のいずれかに、又はアルキル基がその分子の残りの部分へ結合する位置に、配置されてよい。例は、−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_３、−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ_３、−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｓ（Ｏ）_２−ＣＨ_３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ_３、−Ｓｉ（ＣＨ_３）_３、−ＣＨ_２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ_３及びＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ_３）−ＣＨ_３を含むが、これらに限定されるものではない。ケイ素基は、ヘテロアルキル基の内側位置のいずれかに、又はアルキル基がその分子の残りの部分へ結合する位置に配置されたＳｉを意味する。例えば−ＣＨ_２−ＮＨ−ＯＣＨ_３及び−ＣＨ_２−Ｏ−Ｓ−（ＣＨ_３）_３など、最大２個のヘテロ原子が連続してよい。

同様に、用語「ヘテロアルキル」は、それ自身又は別の置換基の一部として、ヘテロアルキル由来の二価のラジカルを含み、これは−ＣＨ_２−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−及び−ＣＨ_２−Ｓ−ＣＨ_２−ＣＨ_２−ＮＨ−ＣＨ_２−により例証されるが、これらに限定されるものではない。用語「ヘテロアルキル」は、ポリ（エチレングリコール）及びその誘導体を包含している。更に二価のアルキル及びヘテロアルキル基に関して連結基の配向がないことは、その基の式が記されている方向により暗示される。例えば式−Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’−は、−Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’−及び−Ｒ’Ｃ（Ｏ）_２−の両方を表している。用語「ヘテロアルキル」と組合せた用語「低級」は、１〜８個の炭素原子を有する部分を意味する。

用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」及び「アルキルチオ」（又はチオアルコキシ）は、通常の意味で使用され、並びに各々酸素原子、アミノ基又は硫黄原子を介してその分子の残りの部分に結合したそれらのアルキル基を意味する。

一般に「アシル置換基」も、前述の基より選択される。本明細書において使用される用語「アシル置換基」は、本発明の化合物へ直接的又は間接的のいずれかで結合しているカルボニル炭素に結合し、かつその原子価を満たしている基を意味する。

用語「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」は、それ自身又は他の用語と組合せて、特に指定しない限りは、各々、置換又は非置換の「アルキル」（より好ましくはＣ_１−Ｃ_１０シクロアルキル）及び置換又は非置換の「ヘテロアルキル」（より好ましくはＣ_１−Ｃ_１０ヘテロシクロアルキル）の環状型を表す。加えてヘテロシクロアルキルに関して、ヘテロ原子は、ヘテロ環がその分子の残りの部分に結合されている位置を占拠することができる。シクロアルキルの例は、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキセニル、３−シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどを含むが、これらに限定されるものではない。ヘテロシクロアルキルの例は、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルなどを含むが、これらに限定されるものではない。環構造のヘテロ原子及び炭素原子は、任意に酸化される。

用語「ハロ」又は「ハロゲン」は、それら自身又は別の置換基の一部として、特に指定しない限りは、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素原子を意味する。加えて「ハロアルキル」のような用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば用語「ハロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル」は、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、４−クロロブチル、３−ブロモプロピルなどを含むが、これらに限定されるものではないことを意味する。

用語「アリール」は、特に指定しない限りは、単環式環又は互いに縮合もしくは共有結合した多環式の環（好ましくは１〜３個の環）であることができる、置換又は非置換のポリ不飽和の芳香族炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択された１〜４個のヘテロ原子を含むアリール基（又は環）を意味し、ここで窒素、炭素及び硫黄原子は、任意に酸化され、並びに窒素原子（複数）は任意に四級化される。ヘテロアリール基は、ヘテロ原子を介して分子の残りの部分へ結合され得る。アリール及びヘテロアリール基の非限定的例は、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンズイミダゾリル、５−インドリル、ｌ−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、及び６−キノリルを含む。

前述のアリール及びヘテロアリール環システムの各々に関する置換基は、以下に説明された許容できる置換基の群から選択される。「アリール」及び「ヘテロアリール」は、１個又は複数の非−芳香環システムが、アリール又はヘテロアリールシステムに縮合されるか、そうでなければ結合されている環システムも包含している。

簡略のために用語「アリール」は、他の用語と組合せて使用される場合（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）、先に定義されたようなアリール及びヘテロアリール環の両方を含む。従って用語「アリールアルキル」は、アリール基が、炭素原子（例えばメチレン基）が例えば酸素原子により置換されているようなアルキル基を含むアルキル基（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）に結合しているようなラジカル（例えば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル、３−（１−ナフチルオキシ）プロピルなど）を含むことを意味する。

カンプトテシン、それらの類似体及び誘導体の中で、より好ましくは、以下の特許／特許出願に開示された化合物を挙げることができ：ＷＯ９９／０９９９６、ＷＯ９９／６５４９３、ＷＯ００／５３６０７、ＥＰ１１０１７６５、ＥＰ１３７，１４５、ＥＰ０７４，２５６、ＵＳ４，６０４，４６３、ＥＰ５６，６９２、ＥＰ８８，６４２、ＥＰ２９６，６１２、ＥＰ３２１，１２２、ＥＰ３２５，２４７、ＥＰ５４０，０９９、ＥＰ７３７，６８６、ＷＯ９０／０３１６９、ＷＯ９６／３７４９６、ＷＯ９６／３８１４６、ＷＯ９６／３８４４９、ＷＯ９７／００８７６、ＵＳ７，１０４，８９４、これらの各々の開示は、本明細書に参照として組入れられている。

好ましい実施態様において、前記式（ＩＩ）のカンプトテシン骨格（式中、ｔは０であり、及びＺはＣＯＯ基である）は、下記式（ＩＩＩ）により表すことができる：

より好ましい実施態様に従い、カンプトテシン骨格は、下記式（ＩＶ）により表される：

より具体的には、カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体は、式（ＩＩＩ）のカンプトテシン骨格、より好ましくは式（ＩＶ）（式中、そこに示された炭化水素基のいずれかは先に定義されたように置換されてよい）を含む。

特に、カンプトテシン、それらの類似体及び誘導体は、イリノテカン、トポテカン、ＧＩ−１４７２１１Ｃ、ＳＮ３８、７−ヒドロキシメチルカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン（９−ＡＣ）、７−アミノメチルカンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン及び（２０Ｓ）−カンプトテシン（いわゆるカンプトテシン）から選択される。該化合物の構造は以下である：

この薬物部分は、担体部分へ直接的又は間接的に連結されてよい。薬物部分が担体へ間接的に連結されている好ましい実施態様において、連結は、以下に説明されるような中間の結合基であってよく、以下に説明されたそのような連結基及び他のものは全て、以後リンカー部分と称し、又は以下に定義された架橋試薬に由来する。

本発明に従い、各担体部分は、少なくとも１種の薬物部分、より好ましくは１種の薬物部分へ連結される。

特定の実施態様において、担体部分は、各薬物部分は同じ又は異なる、１種よりも多い薬物部分への連結を促進するように調製される。例えば、担体部分は、システインなどの天然のアミノ酸の誘導体のような薬物部分の１種よりも多くの結合、又は多価合成アミノ酸もしくは複数の活性部位を伴うリンカーの挿入をそれら自身促進する成分を含むことができる。この様式において、単独の担体部分は、２〜１０種、又はより好ましくは４〜５種の薬物部分を保持してよい。この更なる実施態様において、各薬物部分は、同じ又は異なるリンカー部分により担体部分へ直接的又は間接的に連結されてよい。１種よりも多い異なる種類の薬物部分が結合される場合は、特定の薬物組合せの投与を促進するように、個々の薬物の比及び用量を調和させることが可能である。

直接的連結は、ヒドロキシ、カルボキシ又はアミノ基などの、薬物部分上の通常の官能基のいずれかを介して生じることができる。

優先的である間接的連結は、連結部分を介して生じる。連結部分は、分子内の柔軟性、又は複合されたドメイン間の分子内の距離の調節も提供することができ、これにより生物学的活性の保存を助ける。好適な連結部分は、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、アルデヒド、酸、エステル、酸無水物、スルフヒドリル又はカルボキシル基、例えば以下に定義されるマレイミド誘導体、マレイミドシクロヘキサン誘導体、マレイミド安息香酸誘導体、マレイミドカプロン酸誘導体及びスクシンイミド誘導体などから独立して選択される、二官能性及び多官能性有機ラジカルを含むか、又は臭化シアン又は塩化シアン、スクシンイミジルエステルもしくはスルホン酸ハライドなど又はそれらの組合せに由来してよい。

前記用語は各々（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）は、示されたラジカルの置換型及び非置換型の両方を含む。各種類のラジカルにとって好ましい置換基を、以下に記す。

アルキル、及びヘテロアルキルラジカル（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニルと称されることが多い基を含む）に関する置換基は一般に、各々「アルキル置換基」及び「ヘテロアルキル置換基」と称され、これらは、０〜（２ｍ’＋１）の範囲の数で（ここでｍ’は、そのようなラジカル内の炭素原子の総数である）、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−０Ｒ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ_２Ｒ’、ＮＲＲ’ＳＯ_２Ｒ’’、−ＣＮ及び−ＮＯ_２から選択されるが、これらに限定されるものではない様々な基の１種又は複数であることができる。Ｒ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は各々好ましくは独立して、水素、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、例えば、１〜３個のハロゲンで置換されたアリール、置換又は非置換のアルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、又はアリールアルキル基を意味する。本発明の化合物が１個よりも多いＲ基を含む場合、例えばＲ基の各々は、これらの基の１よりも多くが存在する場合のＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基の各々として、独立して選択される。Ｒ’及びＲ’’が同じ窒素原子に結合する場合、これらは窒素原子と一緒に、５−、６−又は７−員の環を形成することができる。例えばＮＲ’Ｒ’’は、１−ピロリジニル及び４−モルホリニルを含むことを意味するが、これらに限定されるものではない。前述の置換基の説明から、当業者は、用語「アルキル」は、水素基以外の基に結合した炭素原子を含む基、例えばハロアルキル（例えば−ＣＦ_３及び−ＣＨ_２ＣＦ_３）及びアシル（例えば−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ_３、Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２ＯＣＨ_３など）を含むことを意味することを理解するであろう。

アルキルラジカルについて説明された置換基と同じく、アリール置換基及びヘテロアリール置換基は一般に、各々、「アリール置換基」及び「ヘテロアリール置換基」と称され、様々であり、かつ例えば以下から選択され：ハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（０）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ_２、−Ｒ’、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、及びフルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル；数は、０から芳香環システム上の開放原子価の総数までであり；並びに、ここでＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は好ましくは独立して、水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル及びヘテロアルキル、非置換のアリール及びヘテロアリール、（非置換のアリール）−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、並びに（非置換のアリール）オキシ−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルから選択される。本発明の連結部分が１個よりも多いＲ基を含む場合、例えばＲ基の各々は、これらの基の１よりも多くが存在する場合のＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’基の各々として、独立して選択される。

アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の２個のアリール置換基は、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＲＲ’）_Ｖ−Ｕ−の置換基（式中、Ｔ及びＵは独立して、ＮＲ−、−Ｏ−、−ＣＲＲ’−又は単結合であり、及びｖは、０〜３の整数である）と任意に交換されてよい。あるいは、アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の２個のアリール置換基は、式−Ａ−（ＣＨ_２）_ｘ−Ｂ−の置換基（式中、Ａ及びＢは独立して、−ＣＲＲ’−、−０−、−ＮＲ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’−又は単結合であり、及びｘは、１〜４の整数である）と任意に交換されてよい。そのように形成された新規環の単結合のひとつは、二重結合と任意に交換されてよい。あるいは、アリール又はヘテロアリール環の隣接原子上の２個の置換基は、式−（ＣＲＲ’）_ｂ−Ｘ−（ＣＲ’’Ｒ’’’）_ｄ−の置換基（式中、ｂ及びｄは独立して０〜３の整数であり、及びＸは、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）_２−、又は−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’−である）と任意に交換されてよい。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ’’、及びＲ’’’は、水素又は置換もしくは非置換の（Ｃ_１−Ｃ_６）アルキルから独立して選択されることが好ましい。

本明細書において使用される用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、硫黄（Ｓ）及びケイ素（Ｓｉ）を含む。

先に使用されたように記号「Ｒ」は、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、及び置換又は非置換のヘテロ環式基から選択される置換基を表す一般的略号である。

一方でリンカーと薬物の間の共有結合に加え、他方でリンカーと担体部分の間の共有結合の形成に使用されるリンカー部分上の官能基（すなわち反応基）は、同じであってよいか（すなわちホモ官能基）、又は好ましくは異なる種類の官能基であってよく（すなわちヘテロ官能基）、これはより特定するとアミノ、ヒドラジノ、ヒドロキシル、チオール、マレイミド、カルボニル、及びカルボキシル基を含む。好ましい実施態様に従い、これらの官能基は、カルボキシル（−ＣＯＯＨ）及びマレイミド基から選択される。リンカー部分は、それを介してリンカー部分が担体部分に結合するチオール基を任意に含む、１〜４個のアミノ酸残基の短い配列を含むことができる。

特定の実施態様において、担体部分と薬物部分のカップリングは、架橋試薬により実現することができる。利用することができる分子間架橋試薬がいくつか存在し、例えば、Ｍｅａｎｓ及びＦｅｅｎｅｙの「ＣＨＥＭＩＣＡＬ ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ」Ｈｏｌｄｅｎ−Ｄａｙ、１９７４年、３９−４３頁を参照のこと。これらの試薬の中で、例えば、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）又はＮ，Ｎ’−（１，３−フェニレン）ビスマレイミド（両方ともスルフヒドリル基に高度に特異的であり、及び不可逆的結合を形成する）；Ｎ，Ｎ’−エチレン−ビス−（ヨードアセトアミド）又は６〜１１個の炭素メチレン橋を有する他のそのような試薬（これはスルフヒドリル基にやや特異的である）；並びに、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン（これはアミノ基及びチロシン基と不可逆的結合を形成する）がある。この目的に有用な他の架橋試薬は、ｐ，ｐ’−ジフルオロ−Ｎ，Ｎ’−ジニトロジフェニルスルホン（これはアミノ基及びフェノール基と不可逆的架橋結合を形成する）；アジピン酸ジメチル（これはアミノ基に特異的である）；フェノール−１，４−ジスルホニルクロリド（これは主にアミノ基と反応する）；ヘキサメチレンジイソシアナート又はジイソチオシアナート、又はアゾフェニル−ｐ−ジイソシアナート（これは主にアミノ基と反応する）；グルタルアルデヒド（これはいくつかの異なる側鎖と反応する）、並びにジジアゾベンジジン（ｄｉｓｄｉａｚｏｂｅｎｚｉｎｅ）（これは主としてチロシン及びヒスチジンと反応する）；Ｎ−３−マレイミドプロパン酸；Ｎ−６−マレイミドカプロン酸；Ｎ−１１−マレイミドウンデカン酸、４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸；４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４ カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸を含む。

前述のように、架橋試薬は、ホモ二官能性、すなわち、同じ反応を受ける２個の官能基を有する。ホモ二官能性架橋試薬の例は、ビスマレイミドヘキサン（「ＢＭＨ」）がある。ＢＭＨは、２個のマレイミド官能基を有し、これらはスルフヒドリル−含有化合物と穏やかな条件（ｐＨ６．５〜７．７）下で特異的に反応する。この２個のマレイミド基は、炭化水素鎖により接続される。従ってＢＭＨは、システイン残基を含むポリペプチドの不可逆的架橋結合に有用である。架橋試薬は、ヘテロ二官能性であってもよい。ヘテロ二官能性架橋試薬は、２個の異なる官能基、例えばアミン−反応基及びチオール−反応基を有し、これらは各々遊離のアミン及びチオールを有するふたつの部分と架橋結合する。好ましいヘテロ二官能性架橋試薬は、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシラート（「ＳＭＣＣ」）、スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ（６−アミドカプロエート）（「ＬＣ−ＳＭＣＣ」）、Ｎ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（「ＭＢＳ」）、及びスクシンイミド４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチラート（「ＳＭＰＢ」）、ＭＢＳの伸長鎖類似体がある。これらの架橋試薬のスクシンイミジル基は、第１級アミンと反応し、アミド結合を形成し、並びにチオール−反応性マレイミドは、チオール基（例えばシステインの）と共有チオエーテル結合を形成する。

架橋試薬は、水への溶解度が低いことが多い。その水溶解度を改善するために、スルホネート基のような親水性部分を、架橋試薬へ追加してよい。スルホ−ＭＢＳ及びスルホ−ＳＭＣＣは、水溶解度に関して修飾された架橋試薬の例である。
多くの架橋試薬は、細胞条件下で本質的に切断不可能である複合体を生じる。しかし一部の架橋試薬は、ジスルフィドのような、細胞条件下で切断可能である共有結合を含む。例えばトラウト試薬、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオネート）（「ＤＳＰ」）、及びＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（「ＳＰＤＰ」）は、周知の切断可能な架橋試薬である。直接のジスルフィド連結も有用である。

先に考察されたものを含む多くの架橋試薬が、市販されている。それらの使用に関する詳細な指示は、商業的供給業者から容易に入手可能である。タンパク質の架橋及び複合体の調製に関する一般的参考文献は、Ｗｏｎｇ、「ＣＨＥＭＩＳＴＲＹ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮ ＣＯＮＪＵＧＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＣＲＯＳＳ−ＬＩＮＫＩＮＧ」、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ（１９９１年）である。

本発明で使用することができるリンカーは、複合された時点での生物学的流体（例えばヒト血漿）中でのそれらの安定性が互いに異なってよい。用語「安定性」は、本発明の複合体からのカンプトテシン誘導体放出の半減期として定義され、これは選択されたリンカーに左右される。有利なことに本発明の複合体は、安定しており、特にこれは１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０時間の半減期を示す。不安定な複合体は、例えば＜５分間のような、より短い半減期で薬物部分を放出する。高度に安定した複合体は、１１時間を上回る血漿半減期を有する。好ましくは本複合体は、ヒト血漿中、インビトロで安定しており、３７℃で約１〜６．５時間の半減期を有する。本複合体の半減期は、実施例ＩＩに説明したように決定される。

好ましい本発明のヘテロ二官能性架橋試薬は、遊離の−ＣＯＯＨ基及び遊離のマレイミド基を有する。そのような架橋試薬の中で、下記化合物を挙げることができる：

Ｎ−３−マレイミドプロパン酸、ＰＩＥＲＣＥより販売（照会番号：２２２９６）
及びより特定すると、本発明の複合体は、下記の架橋試薬に由来する：

Ｎ−６−マレイミドカプロン酸、Ｓｉｇｍａより販売（照会番号：Ｍ８９０４）

Ｎ−１１−マレイミドウンデカン酸、ＰＩＥＲＣＥより販売（照会番号：２２２１１）

４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸

４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸

４−［（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドヘキサンカルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸

４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸

本内容において、本発明の別の目的は、特に下記式（Ｖ）により表された架橋試薬として適している、新規化合物：

（式中、Ｂは、置換又は非置換のシクロアルキル基であり、並びにＲ１及びＲ２は独立して、存在しない（すなわち共有結合）か、もしくは置換又は非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリール又はヘテロアリール基である）、それらの塩及び／又は異性体に関する。

このような架橋試薬は、それから得られた複合体は、ヒト血漿中インビトロにおいて有利に安定し、３７℃で５分よりも長い半減期を持つので、非常に有用である。
式（Ｖ）で言及された基は、先に定義されている。

特定の実施態様において、本化合物は、式（Ｖ）（式中、Ｒ１は、置換又は非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリール又はヘテロアリール基であり、並びにＲ２は、存在しないか、もしくは置換又は非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリール又はヘテロアリール基である）で表される。

別の特定の実施態様において、本化合物は、式（Ｖ）（式中、Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つは、−０−、−ＮＲ’−、−ＳＲ’−、−ＳｉＲ’Ｒ’’−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−から選択された少なくとも１個の二価のラジカルにより中断され、ここでＲ’及びＲ’’は独立して先に定義されたものであり、特にＲ’及びＲ’’は、先に定義された水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_８）ヘテロアルキル、アリール及びヘテロアリール基から選択される）で表される。

Ｒ１及び／又はＲ２が、少なくとも１つの二価のラジカルにより中断される場合、該中断は、Ｒ１及び／又はＲ２基の内部位置のいずれか、もしくはそこでＲ１及び／又はＲ２基が式（Ｖ）の化合物の残りの部分に結合される位置に配置されてよい。

特定の実施態様において、本発明は、式（Ｖ）の化合物に関し、ここで：
−Ｂは、シクロ（Ｃ_３−Ｃ_８）アルキル、好ましくはシクロペンチルもしくはシクロヘキシルラジカルを含む、非置換のシクロアルキルであり、及び／又は
−Ｒ１は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
−Ｒ１は、線状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
−Ｒ１は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１もしくは２個の二価のラジカルにより任意に中断された（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖は、先に定義された少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含み、及び／又は

−Ｒ２は、存在しないか、及び／又は
−Ｒ２は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
−Ｒ２は、線状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−、もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
−Ｒ２は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１又は２個の二価のラジカルにより任意に中断された、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖は、先に定義されたような少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含む。

特に、式（Ｖ）の化合物は、先に同定された化合物により例証することができ、すなわち：
４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸、
４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、
４−［（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドヘキサンカルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、又は
４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸である。

式（Ｖ）の化合物は、当該技術分野において周知の様々な方法により調製することができる。特に式（Ｖ）の化合物は、実施例に説明された方法により調製される。本発明の特定の態様に従い、本複合体は、先に定義されたように担体部分に連結された薬物部分を含み、ここで薬物部分は、先に定義されたような式（Ｖ）の化合物（架橋試薬）から生じるリンカーにより担体部分へ共有的に連結されている。

この特定の実施態様に従い、本発明の複合体は、より特定すると下記式（ＶＩ）を表す：

（式中、Ｘは、先に定義されたような担体部分（ＣＰＰ）であり、特に式（Ｉ）により表され、これは、チオエーテル結合により、化合物の残りの部分に結合され、並びにＢ、Ｒ１、Ｒ２は、先に定義された基であり、並びにＹは、先に定義された薬物部分、特にＳＮ３８部分である）。

更に特定の実施態様において、本複合体は、式（ＶＩ）により表される（式中、Ｙは、チオエーテル、ヒドラゾン、アミド、エステル、エーテル、カルバメート、又はチオカルバメート結合を介して、より特定するとエーテル結合（−Ｏ−）、ジスルフィド又はチオエーテル結合を介して、複合体の残りの部分へ結合される）。

式（ＶＩ）の複合体を含む、本明細書において説明された複合体は、新規化学実体である。本発明の特定の態様において、本発明の複合体は、担体部分が、式（Ｉ）（先に確定された好ましい実施態様のいずれかを含む）により表され、並びにここで任意にリンカー基は、遊離−ＣＯＯＨ基及び遊離マレイミド基を含む架橋試薬に、特にＮ−６−マレイミドカプロン酸及び４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸に由来するものを含む。

本明細書において開示された具体的化学実体は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：

（式中、Ｘは先に定義されたもの、特にＤＰＶ３、ＤＰＶ３．１０、ＤＰＶ６、ＤＰＶ７、ＤＰＶ７ｂ、ＤＰＶ１５、ＤＰＶ１５ｂ、ＤＰＶ１０４７、ＤＰＶ１０４８、ＤＰＶ１０又はＤＰＶ１０／６であり、なおより好ましくはＤＰＶ３、ＤＰＶ１５、ＤＰＶ１５ｂ、又はＤＰＶ１０４７である）。

本発明は、前述のものの調製法にも関する。
本発明の複合体は、当該技術分野において公知の方法のいずれかにより調製することができる。

例えば、担体部分（又はペプチド）は、通常の液相又は固相ペプチド合成法を用いて調製することができる。その後このペプチドは、薬物部分、薬物部分の好適な反応性誘導体、又は架橋試薬と直接反応することができる。

薬物部分又はそれらの誘導体は、例えば、チオエーテル、ヒドラゾン、アミド、エステル、エーテル、カルバメート、チオカルバメート又はジスルフィド結合形成を介して、担体部分へ結合されてよい。

あるいは、先に説明されたようなリンカー基、特に式（ＶＩ）の複合体の調製に使用されるものは、担体部分の好適な官能基、特にチオール基との架橋試薬、特に式（Ｖ）の架橋試薬の反応により導入され、引き続きリンカー基と薬物部分の間に共有結合が形成される。式（ＶＩ）の複合体の特定の実施態様において、薬物は、リンカーとの共有結合を形成するのに好適な官能基を示す。該好適な官能基は、リンカー基と薬物部分の間にエステル結合を形成するために、ヒドロキシル基がより好ましい。とりわけ例えば二価又は三価の化学基により、担体部分の好適な官能基を連続して伸長することにより、多価薬物−送達複合体を得ることができる。

別の好ましい実施態様に従い、架橋試薬は、担体部分と反応する前に、薬物部分とカップリングされる。

これらの方法を用い、当業者は、様々なリンカー部分を利用し、多種多様な薬物−担体複合体を調製することが可能である。以下に例証したように、薬物部分上の好適な基は、担体部分へ結合するため、並びに望ましいならば、それらのカップリング前に薬物部分又は担体部分、又はそれら両方に接続したリンカーに結合するために、選択することができる。あるいは、薬物は、複合を可能にするように修飾されてもよい。

本発明の複合体は、様々な方法により、獣医学、例えば、哺乳類、特にヒト使用の両方のための医薬品として使用するために、生理的に許容できる支持体、ビヒクル又は賦形剤と共に製剤することができる。

本発明は、以下に説明されるような治療的処置のための本発明の複合体の使用に関する。従って本発明の範囲は、先に説明されたような障害を治療又は予防するための薬剤（又は医薬品）の製造のための、本発明の化合物の使用に拡大される。従って本発明の複合体は、投与に適した組成物、好ましくは医薬組成物へ混和することができる。そのような組成物は典型的には、少なくとも１種の本発明の複合体、又は複合体の混合物及び任意に医薬として許容されるビヒクルを含有する。

本明細書において使用される「医薬として許容されるビヒクル」は、医薬投与に適合性がある、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌薬及び抗真菌薬、等張剤及び吸収遅延剤などのいずれか又は全てを含むことが意図されている。医薬としての活性物質のためのそのような媒体及び作用物質の使用は、当該技術分野において周知である。通常の媒体又は作用物質が本発明の活性複合体と不適合である場合を除き、それらの組成物中での使用が企図されている。補充の活性化合物も、この組成物に混和することができる。

本発明の組成物、好ましくは医薬組成物は、その意図された投与経路と適合するように製剤される。投与経路の例は、静脈内ボーラス又は注入、皮内、皮下、腹腔内、筋肉内、経口（例えば吸入）、経皮（例えば外用）、頭蓋内、髄腔内、及び経粘膜的投与を含む。これらの投与経路に使用される溶液又は懸濁液は、以下の成分を含有することができる：無菌の希釈剤、例えば注射用水、生理食塩水、不揮発性油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒；抗菌剤、例えばベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えばアスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウム；キレート剤、例えばエチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩、及び張度調節物質、例えば塩化ナトリウム又はデキストロース。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムのような、酸又は塩基により調節することができる。非経口調製品は、ガラス又はプラスチックで製造されたアンプル、使い捨てシリンジ又は反復投与用バイアルに封入することができる。

注射用途に適した医薬組成物は、無菌水溶液（水に可溶性の場合）又は分散液、及び無菌注射用液剤又は分散剤の即時調製のための無菌粉末を含む。静脈内投与のために適したビヒクルは、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，パルシパニー，ＮＪ）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を含む。全ての場合において、本組成物は、無菌でなければならず、かつ投与することが可能である程度に流動性がなければならない。これは、製造及び貯蔵条件下で安定していなければならず、かつ細菌及び真菌などの微生物の夾雑作用に対し保存されなければならない。このビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、並びにそれらの好適な混合物を含む、溶媒又は分散媒であることができる。例えば、レシチンのようなコーティングを使用すること、分散剤の場合に必要な粒子サイズを維持すること、及び界面活性剤を使用することにより、適度の流動性を維持することができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成することができる。多くの場合に、組成物中に等張化剤、例えば糖類、ポリアルコール、例えばマンニトール、ソルビトール、塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射可能な組成物の持続吸収は、組成物中に、吸収を遅延する物質、例えばアルミニウムモノステアレート及びゼラチンを含有することによりもたらすことができる。

無菌注射用液剤は、先に列記された成分の一つ又は組合せと共に適当な溶媒中の必要量の本発明の複合体の混和、必要ならばその後の滅菌濾過により調製することができる。一般に、分散剤は、本発明の活性複合体の、基本の分散媒及び先に列記されたものからの必要な他の成分を含む無菌のビヒクルへの混和により調製される。無菌注射用液剤の調製のための無菌粉末の場合、好ましい調製法は、予め滅菌濾過されたそれらの溶液から、活性成分と任意の追加の所望の成分の粉末を得る、真空乾燥及び凍結乾燥である。

経口組成物は一般に、不活性希釈剤又は可食性ビヒクルを含む。これらは、ゼラチンカプセル内に封入されるか、又は錠剤に圧縮され得る。経口の治療的投与の目的に関して、本発明の活性複合体は、賦形剤と共に混和され、錠剤、トローチ剤、又はカプセル剤の形で使用することができる。経口組成物は、含嗽剤として使用するために流体ビヒクルを用いて調製することもでき、ここでは流体ビヒクル内の本発明の複合体は、経口適用、ガラガラいわせるか（ｓｗｉｓｈ）、吐出又は嚥下される。医薬として相溶性のある結合物質、及び／又は補助物質を、本組成物の一部として含むことができる。錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下の成分又は同様の性質の化合物のいずれかを含有することができる：微晶質セルロース、トラガカントガム又はゼラチンなどの結合剤；デンプン又は乳糖などの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル、又はトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステロートなどの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの直打用滑沢剤；ショ糖又はサッカリンなどの甘味剤；もしくは、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ香料などの香味剤。

吸入による投与に関して、本発明の複合体は、好適な噴射剤、例えば二酸化炭素のような気体を含む加圧容器もしくはディスペンサーからのエアゾールスプレー、又はネブライザーの形で送達される。

全身投与も、経粘膜的又は経皮的手段による。経粘膜的又は経皮的投与に関して、透過されるべき障壁に適した浸透剤が、製剤中で使用される。そのような浸透剤は一般に当該技術分野において公知であり、並びに例えば経粘膜的投与に関して、界面活性剤、胆汁塩、及びフシジン酸誘導体である。経粘膜的投与は、鼻腔内スプレー又は坐薬の使用により実現することができる。経皮投与に関して、本発明の活性複合体は、当該技術分野において一般に公知のように軟膏、塗り薬（ｓａｌｖｅ）、ゲル、又はクリームに製剤される。
本発明の複合体は、直腸送達のために坐薬（例えば、カカオバター及び他のグリセリドのような通常の坐薬基剤と共に）又は持続浣腸の形に調製することもできる。

ひとつの実施態様において、本発明の活性複合体は、例えばインプラント及びマイクロカプセルもしくはマクロカプセル封入された送達システムを含む放出制御製剤のように、体内からの迅速な排泄に対し本発明の複合体を保護するビヒクルと共に調製される。
エチレン酢酸ビニル、ポリアンヒドリド、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、ポリエチレングリコール、及びポリ乳酸、又はそれらの組合せのような、生分解性ポリマー、生体適合性ポリマーを使用することができる。

そのような製剤の調製法は、当業者には明らかであろう。
これらの材料は、例えば、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されており、医薬として許容されるビヒクルとして使用することもできる。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に開示されたような、当業者に公知の方法で調製することができる。

投与を容易にするための単位剤型及び均一用量の経口又は非経口組成物を製剤することは、特に有利である。本明細書において使用される単位剤型は、治療される対象への均一用量として適した物理的に個別の単位を意味し；各単位は、必要な医薬ビヒクルに会合した、所望の治療作用を生じるように計算された予め決められた量の本発明の活性複合体を含む。本発明の単位剤型に関する仕様は、本発明の活性複合体特有の特性、及び実現されるべき特定の治療作用、並びに個体の治療のためにそのような本発明の活性複合体を配合する技術分野に固有の制限によって支配されかつ直接左右される。

そのような本発明の複合体の毒性及び治療効能は、例えばＭＴＤ（最大耐量）、ＴＧＩ（１００−Ｔ／Ｃ（％）として規定される腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％））及びＴ／Ｃ（治療された動物の平均腫瘍容積、対、対照群の平均腫瘍容積の比）を決定することで、細胞培養物又は実験動物モデルにおいて、標準の医薬手法により決定することができる。治療作用と毒性の間の投与量比は、治療係数であり、これは比ＥＤ５０／ＬＤ５０として表すことができる。比較的大きい治療係数を示す本発明の複合体が好ましい。毒性の副作用を示す本発明の複合体を使用することはできるが、非腫瘍細胞への損傷の可能性を最小にし、これにより副作用を軽減するために、そのような本発明の複合体を罹患組織部位へ標的化する送達システムをデザインする際には慎重でなければならない。

動物試験から得られたデータは、ヒトにおいて使用するための用量範囲の設定において使用することができる。そのような本発明の複合体の用量は、許容できかつ無毒である有効投与量レベルを含む範囲内にあることが好ましい。この用量は、使用される剤形及び利用される投与経路に応じてこの範囲内を変動してよい。本発明の方法で使用される任意の本発明の複合体に関して、治療的に有効な投与量は、最初に動物モデルでのアッセイから概算することができる。そのような情報を使用し、ヒトにおける有用な投与量をより正確に決定することができる。

本発明の複合体を含有する組成物の治療的有効量（すなわち有効量）は、当業者により容易に決定される。例えば、治療的有効量は、異種移植されたヒト癌の腫瘍増殖を、少なくとも２０％阻害する量である。より高い阻害率、例えば４５、５０、７５、８５、９０％又はそれ以上が、ある実施態様において好ましいことがある。投与量の例は、対象の体重１ｋｇ当たり本発明の化合物が数ｍｇ又は数μｇの量である（例えば、約１μｇ／ｋｇ〜約１ｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ〜約５０μｇ／ｋｇ、又は約５０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ）。本組成物は、少なくとも週１回投与することができるが、同じく１日１回、又は２、３、４、５もしくは６日に１回で、約１〜１０週間の間、例えば２〜８週間の間、又は約３〜７週間の間、又は約４、５、もしくは６週間投与することもできる。

当業者は、疾患又は障害の重症度、先行する治療、対象の全身の健康状態及び／又は年齢、並びに存在する他の疾患を含むが、これらに限定されるものではない、ある種の要因が、対象の効果的な治療に必要な用量及び時期に影響することがあることを理解するであろう。更に治療的有効量の組成物による対象の治療は、単回治療又は連続治療を含むことができる。

組成物の好適な投与量は、変更される発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）又は活性に関する組成物の効能によって決まることが更に理解される。

これらの本発明の化合物の１種又は複数が動物（例えばヒト）に投与される場合、医師、獣医師又は研究者は、例えば最初に比較的低い投与量を処方し、その後適切な反応が得られるまで投与量を増大することができる。加えて、任意の特定の対象に関する具体的な投与量レベルは、使用される具体的本発明の化合物の活性、対象の年齢、体重、全身の健康状態、性別、及び食事、投与時間、投与経路、排泄率、いずれかの併用薬、並びに変更される発現又は活性の程度を含む、様々な要因によって決まることが理解される。
本医薬組成物は、容器、パック、又はディスペンサー内に、添付文書と共に含まれることができる。

特定の実施態様において、本発明の化合物は、治療的有効量で、他の治療的投薬計画又は薬剤（例えば多剤投薬計画）と同時に又は逐次投与されてよい。特に他の治療的投薬計画又は作用物質は、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、オキサリプラチン、カペシタビン、ビンクリスチン、セレブレックス、テモゾロミド、オリゴ元素（例えばセレニウム）、サリドマイド、セツキシマブ、ゲムシタビン、ドセタキセル、３−ＡＰ（Ｔｒｉａｐｉｎｅ（登録商標））、カルボプラチン、ボルテゾミブ、ベバシズマブ、ソラフェニブ、シスプラチン、ゲフィチニブ、フラボピリドール、エルボリン（ｅｌｖｏｒｉｎ）、カルボプラチン、アムルビシン、トラスツズマブ、ペメトレキセド、エルロチニブ、マイトマイシンＣ、ＡＭＧ７０６、パニツマブ、パクリタキセル、ラルチトレキセド、イマチニブ、アブシキシマブ、インフリキシマブ、パリビズマブ、リツキシマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタンなどの抗癌治療又は薬物に対応している。

同時投与が行われる場合、これらの活性物質は、同じ又は異なる組成物で投与することができる。この同時治療は、治療的恩恵の増大及び／又は毒性の低下を目的としている。

別の特定の実施態様において、本発明は、放射線療法及び同時又は逐次のいずれかで投与される本発明の化合物の組合せに関連している。

別の態様に従い、本発明は、疾患、特に癌の治療のための医薬組成物の調製に関する、先に定義された本発明の化合物の少なくとも１種の有効量の使用に関する。

本発明に従い使用するのに好ましい化合物は、先に定義されたいずれかの亜群及び先に定義されたいずれかの具体的化合物を含む。

本発明の更なる目的は、先に定義された化合物の少なくとも１種の有効量をそのような治療を必要とする患者へ投与することを含む、癌の治療法である。

本発明の複合体で構成された薬物部分のために、本発明の複合体は、様々な状態における様々な疾患の治療に適している。これに関して、「治療」又は「治療する」は、治療的処置及び予防的処置の両方を含む。従って本複合体は、非常に早期の疾患、又は転移を含む著しく進行した後で使用することができる。用語「治療」又は「治療する」は、細胞増殖率の低下、罹患した増殖性細胞の破壊、腫瘍塊又は腫瘍サイズの低下、腫瘍転移の低下、腫瘍進行の遅延に加え、完全な腫瘍抑制、生存又は他の適当な臨床評価項目の改善のような、患者の負荷を軽減することを特に示す。

本発明の複合体は、固形腫瘍又はリンパ系腫瘍のような、癌の治療に特に適している。具体例は、結腸癌、肺癌（すなわち小細胞癌、非小細胞癌、気管支癌）、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、肝癌、頭部、胃及び頸部の癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫、メラノーマ、白血病、神経芽細胞腫、又は膠芽細胞腫を含む。

本複合体は、様々な経路で、典型的には全身注射のような注射により、投与することができる。好ましい投与経路は、１５分から１日又は２日と長い期間のボーラス又は注入のいずれかによる静脈内である。しかし筋肉内、皮内、皮下、腫瘍内などの他の投与経路も使用することができる。更に必要ならば反復注射を行うことができる。

本発明の更なる目的は、本発明の複合体の有効量を、癌を有する対象へ投与することによる、癌細胞増殖を低下する方法である。

本発明の更なる目的は、本発明の複合体の有効量を、そのような治療を必要とする対象へ投与することによる、転移性癌を治療する方法である。

本発明の更なる目的は、転移性癌の治療又は癌細胞増殖を軽減するための医薬組成物の調製のために、先に定義された複合体を使用することである。

本発明の更なる態様及び利点は、本出願の範囲を例証するが限定するものではないとみなされるべき、以下の実施例において明らかにされる。

実施例
Ｉ．材料及び方法
Ｉ．１ａ 細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）
ＤＰＶ３：Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ （配列番号：１）；
ＤＰＶ１０４７：Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｖａｌ（配列番号：８）；
ＤＰＶ１５：Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ （配列番号：１０）；
ＤＰＶ１５ｂ：Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ （配列番号：１１）；
ＤＰＶ７：Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｐｒｏ （配列番号：３）；
Ｔａｔ_{４８−６０}：Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｎ （配列番号：４４）；
ペネトラチン：Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｔｒｐ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｌｙｓ （配列番号：２９）；
ＤＰＶ５１_（Ｄ）：Ｄ−Ｌｙｓ Ｄ−Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｄ−Ｌｅｕ Ｄ−Ｌｙｓ Ｄ−Ｌｅｕ Ｄ−Ａｒｇ Ｄ−Ｈｉｓ （配列番号：５１）；
ＤＰＶ１０４７_（Ｄ）：Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｖａｌ （配列番号：８、Ｄ配座）

ＣＰＰとリンカー−ＳＮ３８部分の間の複合を可能にするために（実施例Ｉ．４を参照されたい）：
−ＤＰＶ３、ＤＰＶ１５、ＤＰＶ７及びＴａｔ_{４８−６０}は、アミノ酸配列のＣ末端位置にシステイン（Ｃｙｓ）をさらに含み、
−ＤＰＶ１０４７、ＤＰＶ１５ｂ、ペネトラチン及びＤＰＶ５１は、アミノ酸配列のＮ末端位置にシステイン（Ｃｙｓ）をさらに含む。これらのアミノ酸配列は、Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ（フランス）において合成した。

Ｉ．１ｂ 非細胞透過性ペプチド
ポリＥ_（１６）：Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ （配列番号：５２）
ポリＥ_（１６）とリンカー−ＳＮ３８部分の間の複合を可能にするために（実施例Ｉ．４を参照のこと）、ポリＥ_（１６）は、アミノ酸配列のＮ末端位置にシステイン（Ｃｙｓ）を更に含む。これらのアミノ酸配列は、Ｎｅｏｓｙｓｔｅｍ（フランス）において合成した。

Ｉ．２ 連結部分（リンカー）
リンカー＃１：
Ｎ−３−マレイミドプロパン酸
（ＰＩＥＲＣＥ、フランス、製品番号：２２２９６）

リンカー＃２（「ＭＩＣ」とも称す）：
Ｎ−６−マレイミドカプロン酸
（ＳＩＧＭＡ、フランス、製品番号：Ｍ８９０４）

リンカー＃３：
Ｎ−１１−マレイミドウンデカン酸
（ＰＩＥＲＣＥ、フランス、製品番号：２２２１１）

リンカー＃４：
４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸

リンカー＃５（「ＢＣＨ」とも称す）：
４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸

リンカー＃６：
４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸

リンカー＃７：
４−［（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドヘキサンカルボキシアミド メチル］シクロヘキサンカルボン酸

Ｉ．３ リンカー４から７の合成
Ｉ．３．１ リンカー＃４の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＰＩＥＲＣＥ、照会番号：２２３６０）（２５ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間攪拌し、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）中の６−アミノヘキサン酸（５０ｍｍｏｌ）（ＳＩＧＭＡ、照会番号：Ａ２５０４）の溶液へ、室温で添加した。この混合物を、室温で４時間攪拌した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加し、有機層を水（３ｘ１５０ｍＬ）で、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、過剰な６−アミノヘキサン酸を除去した。有機層を、真空下で乾燥し、得られた白色粉末を、−２０℃で貯蔵した。

Ｉ．３．２ リンカー＃５（「ＢＣＨ」）の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシラート（ＰＩＥＲＣＥ、照会番号：２２３６０）（２５ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間攪拌し、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）中のｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（５０ｍｍｏｌ）（ＳＩＧＭＡ、照会番号：０８４５５）の溶液へ室温で添加した。この混合物を、室温で４時間攪拌した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加し、有機層を水（３ｘ１５０ｍＬ）で、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、過剰なｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を除去した。有機層を、真空下で乾燥し、得られた白色粉末を、−２０℃で貯蔵した。

Ｉ．３．３ リンカー＃６の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のＭａｌ−ｄＰｅｇ_４−ＮＨＳ（Ｑｕａｎｔａ ＢｉｏＤｅｓｉｇｎ、照会番号：１０２１４）（２５ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間攪拌し、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）中のｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（５０ｍｍｏｌ）（ＳＩＧＭＡ、照会番号：０８４５５）の溶液へ室温で添加した。この混合物を、室温で４時間攪拌した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加し、有機層を水（３ｘ１５０ｍＬ）で、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、過剰なｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を除去した。有機層を、真空下で乾燥し、得られた白色粉末を、−２０℃で貯蔵した。

Ｉ．３．４ リンカー＃７の合成
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中のスクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシ−［６−アミドカプロエート］）（ＰＩＥＲＣＥ、照会番号：２２３６２）（２５ｍｍｏｌ）の溶液を、５分間攪拌し、Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）中のｔｒａｎｓ−Ａ−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸（５０ｍｍｏｌ）（ＳＩＧＭＡ、照会番号：０８４５５）の溶液へ室温で添加した。この混合物を、室温で４時間攪拌した。ジクロロメタン（１００ｍＬ）を添加し、有機層を水（３ｘ１５０ｍＬ）で、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１５０ｍＬ）で洗浄し、過剰なｔｒａｎｓ−４−（アミノメチル）シクロヘキサンカルボン酸を除去した。有機層を、真空下で乾燥し、得られた白色粉末を、−２０℃で貯蔵した。

Ｉ．４ カンプトテシン及びそれらの誘導体

Ｉ．５ ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体の調製法
ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体は、以下に説明された方法に従い調製した。同じ方法を使用し、様々なＣＰＰを、先に説明された様々なリンカーを用いＳＮ３８に複合する。

１０−Ｏ−リンカー−ＳＮ３８の調製
ＳＮ３８及び「リンカー」は、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン中のＯ−（１Ｈ−６クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムにより媒介された縮合を受ける。ジクロロメタンで抽出し及びＮ−メチル−２−ピロリジノンを水性洗浄により除去した後、中間体リンカー−ＳＮ３８を単離し、ジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから沈殿することにより精製した。

合成経路の例：

Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）（５０ｍＬ）中のリンカー（１５．２９ｍｍｏｌ，例えばＭＩＣについて３．２３ｇ）及び０−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（ＨＣＴＵ）（６．１ｇ， １４．７４ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５．４ｍＬ，３０．９ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で１５分間攪拌した。この反応混合物に、ＳＮ３８（５ｇ，１２．７５ｍｍｏｌ）を黄色固形粉末として添加した。この混合物を、０℃で２時間攪拌した。この溶液を、ジクロロメタン（１３０ｍＬ）に溶かし、ＮａＣｌ １Ｍ（３ｘ１３０ｍＬ）、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１３０ｍＬ）で連続して抽出した。有機層を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（６００ｍＬ）へ、０℃でゆっくり添加した（最低３０分間かけて）。その後形成された黄色沈殿を濾過し、真空下で（２００ｍＢａｒ）一晩乾燥した。

ＣＰＰの１０−Ｏ−リンカー−ＳＮ３８へのカップリング
リンカー−ＳＮ３８部分を、ＣＰＰへ複合し、ＤＭＦ（ジメチルホルムアミド）中のＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体の混合物を得た。この生成物を水で抽出し、凍結乾燥し、黄色固形物を得た。

合成経路の例：

ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（２００ｍＬ）中の、例えばＮ−末端位置にシステインを含むＤＰＶ１０４７（２１．４９ｇ）のような、ＣＰＰ−ＳＨ（５．６９ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で５分間攪拌した。その後１０−Ｏ−リンカー−ＳＮ３８（５ｇ，８．５４ｍｍｏｌ）を、黄色固形粉末として添加した。この混合物を、室温で３時間攪拌した。水を添加し（２００ｍＬ）、水層をジクロロメタン（５ｘ１５０ｍＬ）で抽出し、過剰な１０−Ｏ−リンカー−ＳＮ３８を除去した。水層を、−８０℃で４時間貯蔵し、その後凍結乾燥した。ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体は、−２０℃で貯蔵した。ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８の正味含量は、ＨＰＬＣにより決定した。ＳＮ３８標準曲線（３６４ｎｍ）との比較は、正味含量の算出を可能にした。

１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンの調製
１０−ヒドロキシカンプトテシン及び「リンカー」は、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン中でＯ−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムにより媒介された縮合を受けた。ジクロロメタンによる抽出及び水洗浄によるＮ−メチル−２−ピロリジノンの除去後、中間体１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンを単離し、ジクロロメタン／メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから沈殿し精製した。

合成経路の例：

Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）（５０ｍＬ）中のリンカー（１６．４７ｍｍｏｌ、例えばＢＣＨについて６．２０ｇ）及び０−（１Ｈ−６−クロロベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウム（ＨＣＴＵ）（６．５３ｇ，１５．７８ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）（５．７４ｍＬ，３２．９４ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃で１５分間攪拌した。この反応混合物へ、１０−ヒドロキシカンプトテシン（５ｇ，１３．７２ｍｍｏｌ）を黄色固形粉末として添加した。この混合物を、０℃で２時間攪拌した。この溶液を、ジクロロメタン（１３０ｍＬ）に溶かし、ＮａＣｌ １Ｍ（３ｘ１３０ｍＬ）、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１３０ｍＬ）で連続して抽出した。有機層を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（６００ｍＬ）へ、０℃でゆっくり添加した（最低３０分間かけて）。その後形成された黄色沈殿を濾過し、真空下で（２００ｍＢａｒ）一晩乾燥した。

ＣＰＰの１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンへのカップリング
１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンを、ＣＰＰへ複合し、ジメチルホルムアミド中のＣＰＰ−１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシン複合体の混合物を得た。この生成物を水で抽出し、凍結乾燥し、黄色固形物を得た。

合成経路の例：

ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）中の、例えばＮ−末端位置にシステインを含むＤＰＶ１０４７（１７．４２ｇ）のような、ＣＰＰ−ＳＨ（４．６１ｍｍｏｌ）の溶液を、室温で５分間攪拌した。その後１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシン（５．０ｇ，６．９２ｍｍｏｌ）を、黄色固形粉末として添加した。この混合物を、室温で３時間攪拌した。水を添加し（２００ｍＬ）、水層をジクロロメタン（５ｘ１５０ｍＬ）で抽出し、過剰な１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンを除去した。水層を、−８０℃で４時間貯蔵し、その後凍結乾燥した。ＣＰＰ−１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシン複合体は、−２０℃で貯蔵した。ＣＰＰ−１０−Ｏ−リンカー−ヒドロキシカンプトテシンの正味含量は、ＨＰＬＣにより決定した。１０−ヒドロキシカンプトテシン標準曲線（３６４ｎｍ）との比較は、正味含量の算出を可能にした。

２０−Ｏ−リンカー＃１−カンプトテシンの調製
合成経路の例：

ジクロロメタン１ｍＬ中のリンカー＃１（１６．４７μｍｏｌ，２．７８ｍｇ）及びジシクロヘキシルカルボジイミド（６．８ｍｇ，３３μｍｏｌ）の溶液を、０℃で、１２時間攪拌した。形成された沈殿（ＤＣＵ，Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素）を、濾過により除去し、濾液をカンプトテシン（３．４ｍｇ，９．７μｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２ｍｇ，１６．４７μｍｏｌ）へ＋０℃で添加した。混合物を０℃で４時間攪拌し、その後ＮａＣｌ １Ｍ（３ｘ１ｍＬ）、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１ｍＬ）で連続して抽出した。有機層を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（１０ｍＬ）へ、０℃でゆっくり添加した。その後形成された黄色沈殿（２０−Ｏ−リンカー＃１−カンプトテシン）を濾過し、真空下で（２００ｍＢａｒ）一晩乾燥した。

ＣＰＰの２０−Ｏ−リンカー＃１−カンプトテシンへのカップリング
合成経路の例：

ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の、例えばＮ−末端位置にシステインを含むＤＰＶ１０４７（１６．６ｍｇ）のような、ＣＰＰ−ＳＨ（４．６１μｍｏｌ）の溶液を、室温で５分間攪拌した。その後２０−Ｏ−リンカー＃１−カンプトテシン（３．４ｍｇ，７μｍｏｌ）を、黄色固形粉末として添加した。この混合物を、室温で３時間攪拌した。水を添加し（１ｍＬ）、水層をジクロロメタン（５ｘ１ｍＬ）で抽出し、過剰な２０−Ｏ−リンカー−カンプトテシンを除去した。水層を、−８０℃で２時間貯蔵し、その後凍結乾燥した。ＣＰＰ−２０−Ｏ−リンカー−カンプトテシン複合体は、−２０℃で貯蔵した。ＣＰＰ−２０−Ｏ−リンカー−カンプトテシンの正味含量は、ＨＰＬＣにより決定した。カンプトテシン標準曲線（３６４ｎｍ）との比較は、正味含量の算出を可能にした。

２０−Ｏ−リンカー＃５−カンプトテシンの調製
合成経路の例：

ジクロロメタン（１０ｍＬ）中のカンプトテシン（１０ｍｇ，２８．７μｍｏｌ）の溶液へ、ＤＭＡＰ（１０．５ｍｇ，８６．２μｍｏｌ）及びリンカー＃５（ＢＣＨ，２１．６ｍｇ，５７．７μｍｏｌ）を添加した。この溶液を５分間攪拌し、その後ジクロロメタン（５０．５ｍＬ）中のＥＤＣ（１１．１ｍｇ，５７．７μｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１２μｌ，８６．２μｍｏｌ）の溶液を添加した。この混合物を室温で１８時間攪拌した。この溶液を、ＮａＣｌ １Ｍ（３ｘ１０ｍＬ）、次に５％クエン酸水溶液（３ｘ１０ｍＬ）で連続して抽出した。有機層を、容量１ｍＬが得られるまで蒸発させ、この溶液を、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２０ｍＬ）へ、０℃でゆっくり添加した（最低５分間かけて）。その後形成された黄色沈殿を濾過し、真空下で（２００ｍＢａｒ）一晩乾燥した。

ＣＰＰの２０−Ｏ−リンカー＃５−カンプトテシンへのカップリング
合成経路の例：

ジメチルホルムアミド（１ｍＬ）中の、例えばＮ−末端位置にシステインを含むＤＰＶ１０４７（１６．６ｍｇ）のような、ＣＰＰ−ＳＨ（４．６１μｍｏｌ）の溶液を、室温で５分間攪拌した。その後２０−Ｏ−リンカー−カンプトテシン（５ｍｇ，７μｍｏｌ）を、黄色固形粉末として添加した。この混合物を、室温で３時間攪拌した。水を添加し（１ｍＬ）、水層をジクロロメタン（５ｘ１ｍＬ）で抽出し、過剰な２０−Ｏ−ＢＣＨ−カンプトテシンを除去した。水層を、−８０℃で２時間貯蔵し、その後凍結乾燥した。ＣＰＰ−２０−Ｏ−ＢＣＨ−カンプトテシン複合体は、−２０℃で貯蔵した。ＣＰＰ−２０−Ｏ−リンカー−カンプトテシンの正味含量は、ＨＰＬＣにより決定した。カンプトテシン標準曲線（３６４ｎｍ）との比較は、正味含量の算出を可能にした。

ＩＩ 安定性試験
リンカーの複合体の安定性に対する影響を試験するために、様々な複合体を、同じＣＰＰで、しかし異なるリンカーで合成した。

これらの複合体の安定性は、様々な種から得たクエン酸添加した血漿（１０％（ｖ／ｖ）クエン酸ナトリウム緩衝液、０．１０６Ｍ）において試験した（下記表１参照）。複合体は、２．５５μＭで、３７℃の血漿中でインキュベーションした。試料は、ＴＦＡ／アセトニトリル抽出後に、以下に説明したＨＰＬＣ蛍光法を用いて分析し（「クロマトグラフィーの装置及び条件」参照）、複合体により放出された遊離のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体（例えばＳＮ３８）の量を測定した。

クロマトグラフィーの装置及び条件：各試料１５０μＬを、１．５ｍＬの微量遠心管に入れた。Ｈ_２Ｏ中５％（ｖ／ｖ）ＴＦＡの４５０μＬを各チューブに添加し、この混合物を５秒間ボルテックスにかけた。その後試料を、１６０００ｇで３分間、＋４℃で遠心した。上清１００μＬを、１．５ｍＬの微量遠心管に入れた。その後直ちにメタノール（１００μＬ）を添加し、５秒間ボルテックスにかけた。その後試料を、１６０００ｇで３分間、室温で遠心した。

上清１５０μＬを、ＨＰＬＣ分析のために回収した。複合体、代謝産物及びカンプトテシン誘導体（すなわちＳＮ３８）を、４．６ｘ１００ｍｍ（３μｍ粒子サイズ）Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）カラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ 参考番号：００Ｄ−４２５１−Ｅ０，Ｌｅ Ｐｅｃｑ，フランス）を用いる、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ；蛍光検出器を装備したＡｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ）により分離した。移動相（Ａ）の水性成分は、水を溶媒とする０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡであった。有機修飾剤（Ｂ）は、０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡを含有するアセトニトリルであった。複合体及びその代謝産物に関して、Ｂの割合が２分間で１５％から３７％へ、６分間で３７％から４７％へ、その後２分間９０％へ線形で増大する溶出勾配を、定流量１．２ｍＬ／分で適用した。その後Ｂの割合を、最初の条件に３．０分間戻した。

複合体の半減期は、本発明の複合体により放出される遊離のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体を５０モル％有するのに必要な時間に相当する。ヒト血漿において、複合体ＤＰＶ１０４７−リンカー＃１−ＳＮ３８の半減期（５分未満）は、複合体ＤＰＶ１０４７−リンカー＃２−ＳＮ３８の半減期（６〜７分）よりも短く、これは次に複合体ＤＰＶ１０４７−リンカー＃３−ＳＮ３８の半減期（１２分）よりも短かった。最も安定した複合体は、ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８（４００分）であることがわかり、その半減期は、ＤＰＶ１０４７−リンカー＃２−ＳＮ３８複合体よりも６０倍長い。リンカー＃５を含む複合体は、ラット血漿中でも最も安定している。

ＩＩＩ ヌードマウスに移植されたヒトＨＣＴ１１６異種移植片結腸腫瘍モデルにおける４種のＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体の有効性の決定
抗腫瘍有効性試験を、関心対象のＣＰＰ−リンカー＃２−ＳＮ３８複合体（複合体は、実施例Ｉ．４に説明したように作製）を同定するために、ヒト起源のＨＣＴ１１６腫瘍を有する雌のＮＭＲｉヌードマウス（６週齢）（Ｊａｎｖｉｅｒ，フランス）において、Ｑ４Ｄｘ３投与スケジュール（４日毎に１回注射を３回反復）を用いて行った。ＨＣＴ１１６腫瘍細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＣｌ−２４７）は、マウスの右側腹部への細胞浮遊液の皮内移植により確立した。１回目の薬物注射は、腫瘍がサイズおおよそ１００ｍｍ^３（下記式で算出：［長さｘ幅^２］／２）に到達した時、腫瘍細胞移植後３日目に行い、マウスは、６匹の群にランダム化し、ＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８のそれらの予め決定された最大許容量（ＭＡＤ）で、外側尾静脈への１０μＬ／ｇのボーラス静脈内注射を、Ｑ４Ｄｘ３投与スケジュールに従い処置した。

最小Ｔ／Ｃ％は、達成された最大腫瘍増殖阻害を反映している。
注射された複合体の有効性及び毒性を評価するために、処置時及び処置後の臨床徴候、体重及び腫瘍サイズを記録した。薬物処置群、対、ビヒクル処置群の平均腫瘍容積の百分率比（Ｔ／Ｃｘ１００）及び１００−Ｔ／Ｃ（％）として定義された腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を用い、治療有効性を評価した。
４種のＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体の治療パラメータを、下記表２にまとめた。

ＨＣＴ１１６腫瘍モデルにおいて、３種のＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体（ＤＰＶ１５ｂ−ＭＩＣ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１５−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８）は、生理食塩水対照と比べ、著しい抗腫瘍活性（ＴＧＩ＝６０〜６３％）を示したのに対し、ＤＰＶ３−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体は、中等度の抗腫瘍活性（ＴＧＩ＝３２％）を示したのみであった。ＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体がそれらのＭＡＤで投与された場合に、本試験時に、体重減少、下痢又は脱毛症のような毒性の臨床徴候は、認められなかった。

ＤＰＶ１５ｂ−ＭＩＣ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１５−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８で示されたように、高投与量レベル（３０〜５０μｍｏｌ／ｋｇ）で投与可能な複合体は、生理食塩水対照と比べ、最大の抗腫瘍活性を示した。

ＩＶ ヌードマウスに移植されたヒトＨＣＴ１１６異種移植片結腸腫瘍モデル又はヌードラットに移植されたヒトＬＳ１７４Ｔ異種移植片腫瘍結腸モデルにおけるＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体の治療有効性に対するリンカー安定性の影響の評価
ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８の有効性に対するリンカー安定性の影響を、２種の異種移植片モデルにおいて評価した。これらのリンカーは、それらのインビトロ血漿安定性を基に選択した：ＭＩＣリンカー（リンカー＃２）は、ヒト血漿中でかなり不安定であるのに対し、ＢＣＨリンカー（リンカー＃５）は、高いヒト血漿中安定性を示した。４種の複合体ＤＰＶ１５−ＭＩＣ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１５−ＢＣＨ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８を、マウスにおいて特徴付けた。２種の複合体ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、ラットにおいて特徴付けた。

移植及びＨＣＴ１１６腫瘍増殖は、実施例ＩＩＩに説明したように行った。１回目の注射の日に、マウスは、６匹の群にランダム化し、ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体の同じ等モル投与量（３０μｍｏｌ／ｋｇ）で、外側尾静脈への１０μＬ／ｇのボーラス静脈内注射を、Ｑ４Ｄｘ３（４日に１回の注射を３回）投与スケジュールに従い処置した。

ＬＳ１７４Ｔ試験を、Ｈａｒｌａｎ ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｃｅｎｔｅｒ（Ｇａｎｎａｔ， フランス）から購入した雌のヌードラット（８週齢）を用いて行った。ＬＳ１７４Ｔ腫瘍は、動物の右側腹部への細胞（ＡＴＣＣ番号：ＣＣｌ−１８８）浮遊液の皮下移植により確立した。１回目の薬物注射は、腫瘍サイズがおおよそ１０００ｍｍ^３に達した時に行った。腫瘍容積は下記式で算出した：［長さｘ幅^２］／２。１回目の注射の日に、ラットは８匹の群にランダム化し、ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体のそれらの予め決定されたＭＡＤで、外側尾静脈への１０μＬ／ｇのボーラス静脈内注射を、Ｑ３／４Ｄｘ５投与スケジュール（１日３又は４回を５回）に従い処置した。

実験の過程で、臨床徴候、体重及び腫瘍サイズを、毎週２回管理した。処置群、対、ビヒクル（対照）処置群の平均腫瘍容積の百分率比（Ｔ／Ｃｘ１００％）、並びに１００−Ｔ／Ｃ（％）として定義された腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を用い、治療有効性を評価した。

最小Ｔ／Ｃ％は、達成された最大腫瘍増殖阻害を反映している。
ＨＣＴ１１６腫瘍を持つマウスにおける４種のＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体の治療パラメータを、下記表３にまとめた。

４種の複合体は全て、ＨＣＴ１１６腫瘍モデルにおいて、著しい抗腫瘍を示した。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（ＴＧＩ＝８０％）は、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８（ＴＧＩ＝６０％）、ＤＰＶ１５−ＢＣＨ−ＳＮ３８（ＴＧＩ＝６１％）よりも有意により大きい活性があり、並びにＤＰＶ１５−ＭＩＣ−ＳＮ３８（ＴＧＩ＝６３％）よりもより大きい活性があった。

ＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８又はＣＰＰ−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体がそれらのＭＡＤで投与された場合に、本試験時に、体重減少、下痢又は脱毛症のような毒性の臨床徴候は、検出されなかった。

ＬＳ１７４Ｔ腫瘍を持つラットにおける２種のＤＰＶ１０４７−リンカー−ＳＮ３８複合体の有効性を、表４に示している。

ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（ＴＧＩ＝５６〜５７％）の両方は、ＬＳ１７４Ｔ腫瘍モデルにおいて同程度有意な抗腫瘍活性を示した。

ＣＰＰ−ＭＩＣ−ＳＮ３８又はＣＰＰ−ＢＣＨ−ＳＮ３８がそれらのＭＡＤで投与された場合に、本試験時に、体重減少、下痢又は脱毛症のような毒性の臨床徴候は、検出されなかった。

この腫瘍を持つマウスにおいて、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、試験した４種の複合体で最も活性があった。腫瘍を持つラットにおいて、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、同じ活性を示した。

Ｖ ヌードマウスに移植されたヒトＨＣＴ１１６結腸腫瘍モデルにおけるＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体及び他のＳＮ３８−誘導体の比較有効性
活性分子の可溶化を可能にする他の送達システムを使用し、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（＝ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８）複合体及びＳＮ３８誘導体の活性を、比較した。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（試験した全てのＣＰＰ及びリンカーで最大のインビボ有効性を有することが先に示された）を、イリノテカン、ＳＮ３８の市販の可溶性プロドラッグ（Ｃａｍｐｔｏ（登録商標），Ａｖｅｎｔｉｓ）及び（グルタミン酸）_１６Ｃｙｓ−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体（ＰｏｌｙＥ_（１６）−ＭＩＣ−ＳＮ３８）と比較した。ＰｏｌｙＥ_（１６）ペプチドは、本発明の細胞−非透過性ペプチドとして、その生体適合性、無毒特性、親水性及び可溶化特性のために選択した。

移植及びＨＣＴ１１６腫瘍増殖は、先に説明したように行った。注射の１日目に、マウスは、６匹の群にランダム化し、異なる複合体で、それらの最適な投与条件に従い、外側尾静脈への１０μＬ／ｇのボーラス静脈内注射により処置した（表５参照）。

実験の過程で、臨床徴候、体重及び腫瘍サイズを、毎週２回管理した。薬物処置群、対、ビヒクル処置群の平均腫瘍容積の百分率比（Ｔ／Ｃｘ１００％）、並びに１００−Ｔ／Ｃ（％）として定義された腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を用い、治療有効性を評価した。

最小Ｔ／Ｃ％は、達成された最大腫瘍増殖阻害を反映している。
様々なＳＮ３８複合体の治療パラメータを、下記表５にまとめた。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、ＨＣＴ１１６腫瘍モデルのいずれの投与スケジュールにおいても、類似したＴＧＩを示した。Ｑ２Ｄ３ｘ３Ｗスケジュールは、他の２種のスケジュールよりもより持続された活性を誘導した。

ＰｏｌｙＥ_（１６）−ＭＩＣ−ＳＮ３８は、Ｑ４Ｄｘ３投与スケジュールを用いる高い投与量レベル（４０μｍｏｌ／ｋｇ）で投与したにもかかわらず、このモデルにおいて活性はなかった。親水性ペプチド配列ＰｏｌｙＥ_（１６）を伴う複合体によるＳＮ３８の可溶化は、インビボにおいて活性型でのＳＮ３８の有効な送達をもたらすのに十分ではなかった。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８及びイリノテカンは、Ｑ２Ｄ３ｘ３Ｗスケジュールで最良の有効性を示し、これは２８日後に最小のＴ／Ｃ％で延長された腫瘍増殖阻害を示した。

マウスにおける有効性試験において、イリノテカンはいずれの投与スケジュールにおいても、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８と同様の活性を示した。マウスにおいて、イリノテカンのＳＮ３８への転換は、カルボキシルエステラーゼの種間変動のために、ヒトにおけるよりも有意に高く、従ってイリノテカンの有効性はマウスモデルにおいて過剰刺激される（Ｊ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎら，ＢＢＡ １９９８；１４００：３０１−３１９）。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体がそのＭＡＤで投与された場合に、本試験時に、体重減少、下痢又は脱毛症のような毒性の臨床徴候は、認められなかった。

ＶＩ イヌにおけるＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びイリノテカンの比較毒性及び薬物動態試験
イリノテカンと比較したＤＰＶ１０４７−リンカー−ＳＮ３８複合体の腸毒性及び血液毒性を、ビーグル犬において評価した。イヌ種でのイリノテカンの代謝は、ヒトのそれに類似していること（Ｍ．Ｉｎａｂａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４１：１３０−１０８（１９９８））、並びにイヌはヒトにおいて認められる後期下痢と同じ症状を示すことから、イヌは適当なモデルである。

成体の雌及び雄のビーグル犬を、個飼いにし、水道水を自由摂取させた。ペレット状飼料は毎日配布した。

イヌ（各薬物及び投与量につきイヌ１匹）に、橈側皮静脈又は伏在静脈を介して静脈内注入した。これらの静脈内注入は、使い捨てカテーテル（Ｉｎｔｒａｆｌｏｎ（登録商標））及びシリンジポンプに接続されたプラスチック製シリンジを用いて行った。注射時に、動物はハンモックに拘束した。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８）を、５、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ、４５分間の注入（０．３〜０．４ｍＬ／分）で投与した。ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８（ＤＰＶ１０４７−リンカー＃２−ＳＮ３８）は、１０及び２０ｍｇ／ｋｇ、２０分間の注入で、並びに５０及び７０ｍｇ／ｋｇ、４５分間の注入（０．３〜０．４ｍＬ／分）で投与した。イリノテカン（臨床用）は、その最大耐量（ＭＴＤ）、すなわち３０ｍｇ／ｋｇ（Ｆ．Ｌａｖｅｌｌｅら，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（１９９６））の、２０分間の注入（０．３〜０．４ｍＬ／分）で投与した。複合体は、注射用水に溶解し（最終容積の１０％）、０．９％ＮａＣｌでそれらの最終濃度に希釈した。各動物への投与容積は、体重に従い調節した。

注入後１５日間に、臨床徴候、血液毒性及び腸毒性をモニタリングした。各動物は、死亡率又は罹患徴候について、少なくとも１日２回チェックした。
各動物の体重は、−１、４、１０及び１３日目に記録した。

末梢血試料は、−１、５、１１及び１４日目に、ＥＤＴＡチューブに採取し、以下のパラメータを決定した：赤血球、ヘモグロビン、平均赤血球容積、赤血球沈殿容積、平均細胞ヘモグロビン濃度、平均細胞ヘモグロビン、血小板、白血球、細胞形態学による白血球分類。

イリノテカンで処置したイヌは、イリノテカン毒性の古典的臨床徴候を示した（Ｆ．Ｌａｖｅｌｌｅ Ｉ，Ｓｅｍｉｎａｒ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，１９９６）：早期（１日目）及び後期（４〜６日目）の下痢、体重減少（−８．５％）、嘔吐及び重症だが可逆性の血液毒性が、５日目に報告された（９２％の白血球枯渇、下記表６参照）。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の５及び１０ｍｇ／ｋｇで処置したイヌは、臨床徴候を示さず、中等度であるが用量非依存型の白血球（ＷＢＣ）数の減少のみを示し、これはそれらのＭＴＤを下回る多くの細胞毒性分子において認められた。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の２０ｍｇ／ｋｇで、白血球の有意な減少（ＷＢＣの９３％の低下）が認められ、一緒に食物摂取が減少し、このことは最大耐量（ＭＴＤ）に到達したことを示唆している。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の３０ｍｇ／ｋｇは、下痢及び重症の血液毒性を含む、明確な毒性徴候を示した。

ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８の１０、２０、４０及び５０ｍｇ／ｋｇで処置したイヌは、臨床徴候を示さず、中等度の白血球（ＷＢＣ）数の減少のみを示した。ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８の７０ｍｇ／ｋｇは、胃腸毒性、下痢及び嘔吐を含む毒性徴候を示した。重症の血液毒性が報告された（９４％のＷＢＣ枯渇）。

これらの結果は、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８のＭＴＤは、おおよそ２０ｍｇ／ｋｇ（ＳＮ３８の２．６ｍｇ等量）、及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８については５０〜７０ｍｇ／ｋｇ（ＳＮ３８の６．５〜９．１ｍｇ等量）であることを示している。結果的にＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８よりもより毒性がある。
２種の異なるＳＮ３８複合体のビーグル犬における毒性試験を、表６にまとめている。

これらの試験の一部として、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８、イリノテカン、及びそれらの主要代謝産物の薬物動態を比較した。薬物動態分析のために、末梢血試料を、注入後様々な時点で採取した。イリノテカン及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８の１０及び２０ｍｇ／ｋｇについては、０時点（注入前）、注入終了の直前（２０分）、及び注入終了後１０、２０、４０、２２０、４６０分に血液を採取した。他の群全てについて、０時点（注入前）、注入終了の直前（４５分）、及び注入終了後１０、２０、４０、１２０、２２０分に血液を採取した。

血液試料（２．５ｍＬ）は、５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）２．５ｍＬが入った５ｍＬのクエン酸三ナトリウムチューブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ Ｓ−Ｍｏｎｏｖｅｔｔｅ（登録商標）９ＮＣ）に収集し、５秒間ボルテックスにかけ、その後−８０℃で貯蔵した（２週間未満）。

その後ＴＦＡ及びアセトニトリル抽出後、以下に説明したＨＰＬＣ蛍光法により試料を分析した。これらは、室温の水浴で５分間解凍し、２．５％ＴＦＡ（ｖ／ｖ）を含有するＨ_２Ｏ ５ｍＬで、２倍に希釈した。全血液試料を、加水分解に対する複合体のエステル結合を防ぐために、ＴＦＡで酸性とし、複合体及びＳＮ３８の回収を改善するために、タンパク質を沈殿させた。

次に各試料５００μＬを、１．５ｍＬの微量遠心管に入れ、１６０００ｘｇで３分間、＋４℃で遠心した。上清１００μＬを、１．５ｍＬの微量遠心管に入れ、その後新たに調製した１．１２μｇ／ｍＬカンプトテシン溶液２０μＬ（内部標準；４時間を超えず氷水浴で＋４℃に維持）を入れた。次にメタノール（１００μＬ）を直ぐに添加し、この混合物を５秒間激しく攪拌した（ボルテックス）。その後試料を、１６０００ｘｇで３分間室温で遠心した。
上清１５０μＬを、ＨＰＬＣ分析のために回収した。

ＨＰＬＣ分析
ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８及びその代謝産物ＳＮ３８を、以下の方法を用い、高速液体クロマトグラフィー（蛍光検出器を備えたＨＰＬＣ Ａｇｉｌｅｎｔ １１００）により分離した：
溶媒Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
カラム：Ｌｕｎａ，Ｃ１８（２），３μＭ，１００ｘ４．６ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ照会番号：００Ｄ−４２５１−Ｅ０）
溶出：Ｂの１５％から３７％を２分間、３７％から４７％を６分間、Ｂの９０％までを０．５分間、それに続くＢの９０％で２分間、Ｂの１５％で２分間
注入量：１００μＬ
流量：１．２ｍＬ／分
検出：蛍光；励起３７５ｎｍ、発光５６０ｎｍ（感度１８）

ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８、イリノテカン及びそれらの代謝産物ＳＮ３８を、以下の方法を用い、高速液体クロマトグラフィー（蛍光検出器を備えたＨＰＬＣ Ａｇｉｌｅｎｔ １１００）により分離した：
溶媒Ａ：Ｈ_２Ｏ中０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
溶媒Ｂ：アセトニトリル中０．１％（ｖ／ｖ）ＴＦＡ
カラム：Ｌｕｎａ，Ｃ１８（２），３μ，１００ｘ４．６ｍｍ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ照会番号：００Ｄ−４２５１−Ｅ０）
溶出：Ｂの１５％から５０％を１０分間、Ｂの９０％までを０．５分間、それに続くＢの９０％で２分間、Ｂの１５％で２分間
注入量：１００μＬ
流量：１．２ｍＬ／分
検出：蛍光；励起３７５ｎｍ、発光５６０ｎｍ（感度１８）

図１は、イリノテカン３０ｍｇ／ｋｇと比較した、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８の異なる投与量の注入後の、ＳＮ３８に対する血液曝露（ＡＵＣ）を比較している。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（投与量≦２０ｍｇ／ｋｇ）及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８（投与量≦％５０ｍｇ／ｋｇ）の無毒の投与量で、ＳＮ３８のＣ_ｍａｘ及びＡＵＣは両方共、複合体の投与量に比例して増大した。イリノテカン３０ｍｇ／ｋｇ（そのＭＴＤ）の注入後、ＳＮ３８（イリノテカンの活性代謝産物）のＡＵＣは、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８又はＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８のほぼそれらの各ＭＴＤでの投与量の注入後のＳＮ３８のＡＵＣの、８０分の１倍よりも低かった。イリノテカンとは対照的に、ＤＰＶ１０４７−リンカー−ＳＮ３８複合体は、無毒の投与量で、血中で、有意に高い量の活性代謝産物ＳＮ３８を送達した。ＳＮ３８のＡＵＣは、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８注入後、等モル投与量のＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８と比べ、有意に大きかった（図１）。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８により送達されるＳＮ３８のＡＵＣは、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８により放出されるものよりも大きいことの結果として、血中のＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の循環半減期は、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８についてよりも長い（図２）。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８で認められた増大した毒性は、活性（細胞毒性）分子ＳＮ３８の増大したＡＵＣとよく相関している。

イヌにおける毒性試験は、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体は、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８複合体よりもより毒性があることを示した。ＢＣＨ及びＭＩＣの両複合体は、胃腸毒性及び血液毒性により特徴付けられる同じ毒性プロファイルを示した。ＢＣＨ複合体のＭＴＤは、ＭＩＣ複合体のほぼ３分の１倍であるが、これはＢＣＨ複合体からの有意により多いＳＮ３８の遊離によく相関している。ＳＮ３８のＡＵＣの投与量依存型の増加は、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８が５〜２０ｍｇ／ｋｇの間の投与量で注射された場合、及びＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８が１０〜５０ｍｇ／ｋｇで注射された場合に認められる。

これらの結果は、ＤＰＶ１０４７−リンカー−ＳＮ３８複合体は、イリノテカンよりも有意に多い循環ＳＮ３８を、有意に低い毒性で送達することができることを明らかにしている。このことは、ヒトにおけるイリノテカンの投与量増加は、活性代謝産物ＳＮ３８へのより高い曝露に起因した治療に対する反応を改善することは周知であり（ｄｅ Ｊｏｎｇｅ Ｍ．Ｊ．ら，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ，１８：１９５−２０３，２０００；Ｙｃｈｏｕ，Ｍ．ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，５０：３８３−３９１，（２００２））、並びにそのような投与量増加は、イリノテカンの用量規定毒性のために可能であることは稀であるので、極めて重要である。

ＶＩＩ げっ歯類に移植された様々なヒト腫瘍モデルにおけるＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体のインビボ有効性の評価
ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体の活性を、この複合体の広範な腫瘍型への適用可能性を決定するために、多くの異なる腫瘍モデルにおいて評価した。５種のヒト腫瘍モデルを選択した：ＨＣＴ１１６結腸直腸癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＣＣｌ−２４７）、ＬＳ１７４Ｔ結腸直腸癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＣＣｌ−１８８）、ＨＴ−２９結腸直腸癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−３８）、ＮＣＩ−Ｈ４６０肺癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−１７７）、及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−２６）。

ＨＣＴ１１６、ＨＴ−２９、ＮＣＩ−Ｈ４６０及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍は、７週齢の雌のＮＭＲｉヌードマウスの右側腹部への細胞の皮内又は皮下移植により確立した（各々、１ｘ１０^７、１ｘ１０^７、３ｘ１０^６、及び３ｘ１０^６個細胞を注射）（Ｊａｎｖｉｅｒ，フランス）。ＬＳ１７４Ｔ腫瘍細胞は、Ｒｈ ｒｎｕ／ｒｎｕヌードラットに移植した（２ｘ１０^７個細胞）。腫瘍がマウスではサイズ１００ｍｍ^３に、又はラットでは１０００ｍｍ^３に到達した時点で、治療を開始した（下記式を用いて算出：［長さｘ幅^２］／２）。１回目の注射の日、動物は異なる群にランダム化し（１群に動物６又は８匹）、生理食塩水に溶解したＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８を、外側尾静脈への１０μＬ／ｇのボーラス静脈内注射（ｉ．ｖ．）により送達した（表７）。

実験の過程で、臨床徴候、体重及び腫瘍サイズを、毎週２回管理した。薬物処置群、対、ビヒクル処置群の平均腫瘍容積の百分率比（Ｔ／Ｃｘ１００％）、並びに１００−Ｔ／Ｃ（％）として定義された腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ％）を用い、治療有効性を評価した。
最小Ｔ／Ｃ％は、達成された最大腫瘍増殖阻害を反映している。
様々な腫瘍モデルにおけるＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体の有効性を、表７にまとめた。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（＝ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８）複合体は、試験した結腸直腸癌、肺癌及び乳癌モデルの全てで有意なレベルの抗腫瘍活性を示し、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、広範なヒト腫瘍において活性を有することを明らかにしている。更に様々な投与量を試験した場合、投与量依存性の有効性が観察された。

ＶＩＩＩ ベバシズマブ又は５−フルオロウラシルと併用するＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８複合体のインビボ有効性評価
臨床においてイリノテカンは、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）（Ｔｅｖａ（登録商標），Ｐｈａｒｍａ）及びベバシズマブ（アバスチン（登録商標），Ｒｏｃｈｅ）のような薬剤と相乗作用を有することが示されている。従ってこれらの薬剤と組合せたＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の作用を評価するために、併用試験を行った。マウスに、ＨＴ−２９腫瘍を移植し、１０μＬ／ｇの腹腔内投与（ベバシズマブ）又はボーラス静脈内注射（５−ＦＵ又はＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８）により処置した。実験で規定された最適以下の投与量のＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８、５−ＦＵ及びベバシズマブを、Ｐｒｅｗｅｔｔら（Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｍａｙ；８（５）：９９４−１００３（２００２））及び、Ａｚｒａｋら（Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｆｅｂ １；１０（３）：１１２１−９．（２００４））により確立されたスケジュールに従い、投与した。ベバシズマブ、５−ＦＵ又はＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８のいずれかによる治療後に、Ｔ／Ｃ比を算出した。これらのＴ／Ｃ比を用い、ベバシズマブ及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８、又は５−ＦＵ及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の併用療法について予想されたＴ／Ｃを評価した（ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８のＴ／Ｃ×ベバシズマブ又は５−ＦＵのＴ／Ｃ）。併用療法後に観察されたＴ／Ｃは、実験的に規定した。これら２種の分子の併用指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ）は、予想されたＴ／Ｃを、観察されたＴ／Ｃで除算することにより算出した。指数＞１は、相乗作用を表し、約１の指数は相加作用を示し、指数＜１は拮抗作用を示している。これらの実験の結果を、表８にまとめた。

これらの実験において、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８は、５−ＦＵ又はベバシズマブのいずれかとの併用において、抗瘍有効性を増大した。５−ＦＵに関して、併用作用は相乗的である（併用指数＞１）のに対し、ベバシズマブについては、併用作用は相加的であった（併用指数は約１）。

ＩＸ ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＴＦＡのＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌと比較したインビトロ及びインビボ活性の評価
ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＴＦＡ及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌ化合物の両方の有効性及び毒性を比較した。

ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８塩酸塩（ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌ）は、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＴＦＡのイオン交換クロマトグラフィーにより形成した。アンバーライトＩＲＡ−４１０イオン交換樹脂（４７５ｇ）（Ｆｌｕｋａ）を、２Ｎ ＨＣｌ中で３０分間攪拌した。その後樹脂をカラムに充填し、水で洗浄した。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＴＦＡ ２４ｇを、水１２５ｍＬに溶解し、カラム上に装荷し、水で溶出した。異なる画分中のＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌの濃度を、ＨＩＡＣＨＩ Ｕ−２０００分光光度計を使用し、３６４ｎｍでのＵＶ吸収により決定した。その後関連画分をプールし、冷凍し、凍結乾燥した。その後ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌ複合体を、アルゴン下で−２０℃で貯蔵した。ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８の２種の塩の間で、有効性に差異は認められなかった；ＮＣＩ−Ｈ４６０肺腺癌モデル（ＡＴＣＣ番号：ＨＴＢ−１７７）におけるインビトロ細胞毒性及びインビボ有効性試験は、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌは活性を保持し、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＴＦＡ及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌについて、各々、インビボ至適Ｔ／Ｃが２２．９％及び１８．４％であることを確認した（表９参照）。

Ｘ ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８溶解度の評価
水中のＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（＝ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８）の溶解度は、ＳＮ３８又はイリノテカンのいずれかよりもはるかに大きいことがわかった：ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８・ＨＣｌ≧１ｇ／ｍＬ、イリノテカン≦２．５ｍｇ／ｍＬ及びＳＮ３８≦５μｇ／ｍＬ。

ＸＩ 広範なＣＰＰ−リンカーカンプトテシン誘導体の安定性及びインビトロ有効性の評価
イヌにおける比較トキシコキネティクス試験は、ＤＰＶ１０４７とＳＮ３８の間のリンカーの安定性は、ＳＮ３８の血漿中ＡＵＣの増加に相関することを示した（実施例ＶＩ参照）。

従って、様々なＣＰＰ−リンカー−カンプトテシン誘導体のインビトロ安定性を評価するために、試験を行った。複合体を、様々なＣＰＰ、様々なリンカー及び２種類のカンプトテシン：ＳＮ３８又は１０−ヒドロキシカンプトテシンのいずれかで合成した。

ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体：
ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８
ＤＰＶ１０４７−リンカー＃１−ＳＮ３８
ペネトラチン−リンカー＃５−ＳＮ３８
ペネトラチン−リンカー＃１−ＳＮ３８
ＤＰＶ７−リンカー＃５−ＳＮ３８
Ｔａｔ−リンカー＃５−ＳＮ３８
ＤＰＶ１０４７_Ｄ−リンカー＃５−ＳＮ３８
ＤＰＶ５１_Ｄ−リンカー＃５−ＳＮ３８

ＣＰＰ−リンカー−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体：
ペネトラチン−リンカー＃５−１０−ヒドロキシカンプトテシン
ペネトラチン−リンカー＃１−１０−ヒドロキシカンプトテシン（ＰＣＴ特許出願ＷＯ００／０１４１７に開示）
ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−１０−ヒドロキシカンプトテシン
ＤＰＶ１０４７−リンカー＃１−１０−ヒドロキシカンプトテシン
Ｔａｔ−リンカー＃４−１０−ヒドロキシカンプトテシン
Ｔａｔ−リンカー ＃７−１０−ヒドロキシカンプトテシン

実施例ＩＩのように、これらの複合体の安定性を、ヒト又はイヌのいずれかの血漿中で試験した。３７℃でインキュベーションした後、実施例ＩＩにおいて説明されたＨＰＬＣ蛍光法によるＴＦＡアセトニトリル抽出の後、試料を分析した。これらの化合物のインビトロ細胞毒性（ＩＣ_５０）も評価した。

細胞毒性評価を、治療的化合物の添加前２４時間に播種した細胞で行った。細胞を、異なる希釈の治療的化合物と共に、４８時間（３７℃）インキュベーションした。その後細胞生存度を、ＷＳＴ−１アッセイ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて評価した。結果を、Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ３．０２ソフトウェアを用い、Ｓ字回帰から推定した、平均細胞毒性濃度（細胞生存度を５０％阻害するＩＣ_５０値又はモル濃度）として表した。

２種の細胞株を、本試験において用いた：
−ＨＣＴ１１６（ＡＴＣＣ＃：ＣＣＬ−２４７）：ヒト上皮結腸癌細胞。細胞は、Ｍｃ Ｃｏｙ’ｓ ５ａ培地＋１．５ｍＭ Ｌ−グルタミン及び１０％ウシ胎仔血清において培養した。細胞は、９６−ウェルプレートにおいて密度８０００個細胞／ウェルで播種した。

−ＮＣＩ−Ｈ４６０（ＡＴＣＣ＃：ＨＴＢ−１７７）：ヒト上皮肺癌細胞。細胞は、ＲＰＭＩ １６４０＋グルタマックス及び１０％ウシ胎仔血清において培養した。細胞は、９６−ウェルプレートにおいて密度１０，０００個細胞／ウェルで播種した。

ＣＰＰ−リンカー−ＳＮ３８複合体：
表１０に示されたように、ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８が、最も安定した複合体であり（ヒト及びイヌの血漿中半減期が、各々、３６０分及び２６０分）、安定性は、より早期に観察されたものと一致した（実施例ＩＩ参照）。ＣＰＰがＳＮ３８に依然カップリングされたイヌ及びヒトの両血漿において、ＣＰＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８複合体は、ＣＰＰ−リンカー＃１−ＳＮ３８複合体よりも常により安定しており、リンカー＃５（＝ＢＣＨ）は、リンカー＃１よりもより安定していることを確認した。

最も安定した化合物（リンカー＃５を含む）のインビトロ細胞毒性を評価し、これらの化合物の細胞毒性の性質が保持されるかどうかを決定した。表１１は、試験した２種の細胞株において、全てのＣＰＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８複合体は、ＳＮ３８の細胞毒性活性と同等の細胞毒性活性を保持したことを確認している。

Ｄ立体配座でＣＰＰを伴うＣＰＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８複合体のインビトロ血漿安定性及び細胞毒性も評価した。表１２に示したように、ＣＣＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８ Ｄ−アイソフォーム複合体の両方の安定性は、ＣＰＰ−リンカー＃１−ＳＮ３８複合体（表１０参照）について観察された安定性よりも、有意に高かった。ＣＣＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８ Ｄ−アイソフォーム複合体の安定性は、ヒト血漿中で１００分より長い半減期を有するにもかかわらず、これはＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８複合体の安定性よりも低かった。結果は、下記表１２に示す。

これらの複合体のインビトロ細胞毒性を評価し、これらの化合物の細胞毒性の性質が保持されるかどうかを決定した。表１３は、２種のＣＰＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８ Ｄ−アイソフォーム複合体は、ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８の細胞毒性活性と同等の細胞毒性活性を保持したことを確認している。結果を、下記表１３に示す。

ＣＰＰ−リンカー−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体：
様々なＣＰＰ−リンカーの組合せの安定性も、１０−ヒドロキシカンプトテシンで試験した。ＣＰＰ−リンカー＃５−ＳＮ３８複合体のように、ＣＰＰ−リンカー＃５−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体は常に、ＣＰＰ−リンカー＃１−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体よりも安定していた。ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−ＳＮ３８について認められるように、ＤＰＶ１０４７−リンカー＃５−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体の安定性は、ヒト及びイヌの両方の血漿中で、他のＣＰＰ−リンカー＃５−１０−ヒドロキシカンプトテシン複合体よりも大きかった。結果を、下記表１４に示す。

これらの化合物の細胞毒性の性質が保持されるかどうかを決定するために、最も安定した化合物（リンカー＃５を含む）のインビトロ細胞毒性を評価した。表１５は、全てのＣＰＰ−リンカー＃５−１０ヒドロキシカンプトテシン複合体は、試験した両方の細胞株において、１０−ヒドロキシカンプトテシンのそれと同様の活性、わずかに低いが、同等であることを示したことを確認した。

リンカー＃４及び＃５は、試験した全てのＣＰＰ複合体で、リンカー＃１よりもより大きい安定性を示す。これらのリンカー＃５の安定性も、ＳＮ３８及び１０−ヒドロキシカンプトテシン誘導体の両方について、リンカー＃１よりも大きかった。

図１は、イヌにおける、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８（１０、２０、５０ｍｇ／ｋｇ、黒色バー）、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（５、１０（ｎ＝２）、２０ｍｇ／ｋｇ、灰色バー）、及びイリノテカン（３０ｍｇ／ｋｇ、白色バー）の注入後の、ＳＮ３８の血中ＡＵＣを示す。 図２は、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８（５０ｍｇ／ｋｇ）及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８（１０ｍｇ／ｋｇ）の注入後の、ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８、ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８及びＳＮ３８の血中ＡＵＣを示す。上向き黒三角：ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８；下向き黒三角：ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８由来のＳＮ３８；黒四角：ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８；黒丸：ＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８由来のＳＮ３８。ＡＵＣは、注入終了時から定量限界まで測定した（７．８ｎｇ／ｍＬ ｅｑ ＳＮ３８）；ＤＰＶ１０４７−ＭＩＣ−ＳＮ３８及びＤＰＶ１０４７−ＢＣＨ−ＳＮ３８について、それらの各々の投与量でのＡＵＣ＝ＡＵＣ ０−４．４２時。

Claims (42)

1. リンカー基を介して担体部分に連結された少なくとも１種のカンプトテシン、それらの類似体又は誘導体を含有する複合体（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）であり、ここで、該担体部分が、細胞透過性ペプチドであり、該複合体の半減期は、インビトロにおいてヒト血漿中３７℃で５分に等しいか又はそれを上回る前記複合体。
2. 前記リンカー基が、
   Ｎ−６−マレイミドカプロン酸、及び
   Ｎ−１１−マレイミドウンデカン酸
   から選択される架橋試薬に由来する、請求項１記載の複合体。
3. 前記複合体が、下記式（ＶＩ）：
   

   

   （式中、
   Ｘは、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）を表し、これはチオエーテル結合により、複合体の残りの部分に結合し、
   Ｙは、カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体を表し、
   Ｂは、置換又は非置換のシクロアルキル基であり、Ｒ１及びＲ２は、独立して、存在しないか又は置換もしくは非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール基である）
   を有する、請求項１記載の複合体。
4. Ｙが、チオエーテル、ヒドラゾン、アミド、エステル、エーテル、カルバメート又はチオカルバメート結合により、より具体的にはエーテル結合、ジスルフィド又はチオエーテル結合により、複合体の残りの部分に結合している、請求項３記載の複合体。
5. カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体が、インビトロ及び／又は特にインビボにおいて、酵素ＤＮＡトポイソメラーゼＩに結合する特性を有し、かつ下記式（ＩＩ）：
   

   

   （式中、ｔは、０、１又は２であり、及びＺは、−ＣＯＯ−基又は置換もしくは非置換の二価のアルキル基である）
   により表されるカンプトテシン骨格を含む、生物学的活性化合物である、請求項１〜４のいずれか１項記載の複合体。
6. 前記カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体が、式（ＩＩ）で表されるカンプトテシン骨格を含み、ここでそこに示された炭化水素基の少なくとも１個が置換され、好ましくは１、２、３又は４個の炭化水素基が置換されている、請求項５記載の複合体。
7. 前記置換基が、アルキル基、アリール基、ハロゲン、−ＯＲ’、＝Ｏ、−ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ’’、−ＳＲ’、−ＳｉＲ’Ｒ’’Ｒ’’’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ_２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ’’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ’’Ｒ’’’、−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２Ｒ’、−ＮＲ−Ｃ（ＮＲ’Ｒ’’）＝ＮＲ’’’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ’Ｒ’’、−ＮＲＳＯ_２Ｒ’、−ＣＮ及び−ＮＯ_２、−Ｒ’、−Ｎ_３、−ＣＨ（Ｐｈ）_２、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルコキシ、フルオロ（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルから選択されるか又は２個の隣接基はそれらを担持する炭素原子と一緒に、式−Ｏ（ＣＨ_２）_ｕＯ−の基（式中、ｕは整数１又は２を表す）を形成することができ；並びにここでＲ’、Ｒ’’、Ｒ’’’及びＲ’’’’は、好ましくは独立して、水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_８）ヘテロアルキル、アリール及びヘテロアリール、（非置換アリール）−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキル、及び（非置換アリール）オキシ−（Ｃ_１−Ｃ_４）アルキルから選択され、該置換基は前述の基のいずれかにより任意に置換される、請求項６記載の複合体。
8. 置換基が、アルキル基、好ましくは低級アルキル基；−ＯＲ’（式中、Ｒ’は、Ｈである）；−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’（式中、Ｒ’は、ヘテロアルキル基、及びより好ましくはヘテロシクロアルキル基、例えばピペリジン又はピペラジン基を含むアルキル基である）；−ＮＲ’Ｒ’’により置換されたアルキル基、又はヘテロアルキル基、及びより好ましくはヘテロシクロアルキル基、例えばピペリジン又はピペラジン基からなる群より選択され；２個の隣接基はそれらを担持する炭素原子と一緒に、式−Ｏ（ＣＨ_２）_ｕＯ−の基（式中、ｕは整数１又は２、好ましくは２を表す）を形成してよい、請求項７記載の複合体。
9. カンプトテシン骨格が、式（ＩＩ）であり、ここでｔは０であり、及びＺはＣＯＯ基であり、これは下記式（ＩＩＩ）：
   

   

   により表すことができる、請求項５〜８のいずれか１項記載の複合体。
10. カンプトテシン骨格が、下記式（ＩＶ）：
    

    

    により表される、請求項５〜９のいずれか１項記載の複合体。
11. カンプトテシン、それらの類似体及び誘導体が、イリノテカン、トポテカン、ＧＩ−１４７２１１Ｃ、ＳＮ３８、７−ヒドロキシメチルカンプトテシン、９−アミノカンプトテシン、７−アミノメチルカンプトテシン、１０−ヒドロキシカンプトテシン及び（２０Ｓ）−カンプトテシンから選択される、請求項１〜１０のいずれか１項記載の複合体。
12. 少なくとも１種のＲ１及びＲ２が、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−ＳＲ’−、−ＳｉＲ’Ｒ’’−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−から選択される少なくとも１種の二価のラジカルにより中断されており、ここでＲ’及びＲ’’は、独立して、水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_８）ヘテロアルキル、アリール及びヘテロアリール基から選択される、請求項３〜１１のいずれか１項記載の複合体。
13. Ｒ１が、置換又は非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリール又はヘテロアリール基であり、及びＲ２が、存在しないか、又は置換もしくは非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール基である、請求項３〜１２のいずれか１項記載の複合体。
14. 複合体が、式（ＶＩ）を有し、ここで：
    −Ｂは、シクロ（Ｃ_３−Ｃ_８）アルキル、好ましくはシクロペンチルもしくはシクロヘキシルラジカルを含む、非置換のシクロアルキルであり、及び／又は
    −Ｒ１は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
    −Ｒ１は、直鎖状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
    −Ｒ１は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１又は２個の二価のラジカルにより任意に中断された、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキレン鎖は、少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含み、及び／又は
    −Ｒ２は、存在しないか、及び／又は
    −Ｒ２は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
    −Ｒ２は、直鎖状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
    −Ｒ２は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１又は２個の二価のラジカルにより任意に中断された（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖は、少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含む、請求項３〜１３のいずれか１項記載の複合体。
15. カンプトテシン、それらの類似体又は誘導体が：
    ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸、
    ４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、
    ４−［（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドヘキサンカルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、及び
    ４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸
    から選択される化合物により生じるリンカーにより、担体部分へ共有的に連結される、請求項１〜１４のいずれか１項記載の複合体。
16. 複合体が、以下：
    

    

    （式中、Ｘは、請求項３において定義されたものである）
    から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項記載の複合体。
17. 細胞透過性ペプチド（又はＸ）が、高度に陽イオン性であり及びアルギニン又はリシンリッチである、請求項１〜１６のいずれか１項記載の複合体。
18. 細胞透過性ペプチドが、細胞内在化特性を有するタンパク質又はそれらのペプチド誘導体を表している、請求項１〜１７のいずれか１項記載の複合体。
19. 細胞透過性ペプチドが、細胞内在化特性を有する、１型ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−１）タンパク質Ｔａｔ、ヘルペスウイルス・テグメントタンパク質ＶＰ２２、ペネトラチン、プロテグリン１（ＰＧ−１）、抗微生物ペプチドＳｙｎＢ、塩基性線維芽細胞増殖因子、合成ポリアルギニンペプチド、又はそれらのペプチド誘導体である、請求項１〜１８のいずれか１項記載の複合体。
20. 担体部分が、下記式（Ｉ）：
    Ｃ（Ｘ１）_ｐ［（Ｘ）_ｏ（Ｂ）_ｎ（Ｘ）_ｓＢＸ（Ｘ）_ｒＸＢ］_ｍ（Ｘ２）_ｑＣ （Ｉ）
    （式中、
    Ｘ１及びＸ２は、独立して、１〜２０個のアミノ酸のアミノ酸配列であり；ｐ及びｑは独立して、０〜５の間の整数、好ましくは０又は１であり；
    Ｂは独立して、塩基性アミノ酸であり；
    Ｘは独立して、非塩基性アミノ酸であり；
    Ｃは、独立して存在しないか又は複合体の残りの部分に連結されたチオエーテル結合を含むいずれかの部分であり、好ましくはこの部分はシステイン又はシステアミンであり；
    ｍは、１又は２であり；
    ｎは、１、２又は３であり；
    ｏは、０又は１であり；
    ｒは、０又は１であり；
    ｓは、０、１、２又は３である）
    を有するアミノ酸配列を含むペプチドである、請求項１〜１８のいずれか１項記載の複合体。
21. ペプチドが、長さが５０個未満、好ましくは２５個未満のアミノ酸の式（Ｉ）のアミノ酸配列を含む、請求項１〜２０のいずれか１項記載の複合体。
22. Ｃが、存在しないか又はアミノ酸配列の任意の位置であるかもしくはより好ましくは該アミノ酸配列のＣもしくはＮ末端位置である、請求項２０又は２１記載の複合体。
23. Ｘ１及びＸ２が、独立して、２〜１５個のアミノ酸、より好ましくは２〜１０個のアミノ酸のアミノ配列である、請求項２０〜２２のいずれか１項記載の複合体。
24. 塩基性アミノ酸が、リシン、アルギニン又はヒスチジンであり、より好ましくはリシン又はアルギニンである、請求項２０〜２３のいずれか１項記載の複合体。
25. 式（Ｉ）のＢＸ（Ｘ）_ｒＸＢ部分に含まれる非塩基性アミノ酸が、グルタミン酸（Ｅ）、グリシン（Ｇ）、グルタミン（Ｑ）、セリン（Ｓ）、トレオニン（Ｔ）、ロイシン（Ｌ）、バリン（Ｖ）、プロリン（Ｐ）、及びシトルリンからなる群より選択される、請求項２０〜２４のいずれか１項記載の複合体。
26. アミノ酸配列が、式（Ｉ）により表され、式中：
    −ｏは、１であり、及び／又は
    −ｐ及び／もしくはｑは、１であり、並びに／又は
    −Ｘ１は、３〜１２個のアミノ酸の配列であり、及び／又は
    −Ｘ２は、２〜１０個のアミノ酸の配列であり、及び／又は
    −ｒは、０であり、及び／又は
    −ｍは、１である、請求項２０〜２５のいずれか１項記載の複合体。
27. ペプチドが、ヒトヘパリン結合タンパク質に由来し、かつ細胞又は組織を透過することが可能であり、並びに：
    −ＤＰＶ３（配列番号：１）：Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ
    −ＤＰＶ６（配列番号：２）：Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｐｒｏ
    −ＤＰＶ７（配列番号：３）：Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｐｒｏ
    −ＤＰＶ７ｂ（配列番号：４）：Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ａｒｇ
    −ＤＰＶ１０（配列番号：５）：Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
    −ＤＰＶ３／１０（配列番号：６）：Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｌｅｕ
    −ＤＰＶ１０／６（配列番号：７）：Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｌａ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｒｇ
    −ＤＰＶ１０４７（配列番号：８）：Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｍｅｔ Ａｓｐ Ｖａｌ
    −ＤＰＶ１０４８（配列番号：９）：Ｖａｌ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｖａｌ
    −ＤＰＶ１５（配列番号：１０）：Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ
    −ＤＰＶ１５ｂ（配列番号：１１）：Ｇｌｙ Ａｌａ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ａｒｇ
    からなる群、特に配列番号：１、配列番号：１０、配列番号：１１、及び配列番号：８から選択される、請求項２０〜２６のいずれか１項記載の複合体。
28. ペプチドが、Ｃ又はＮ位置にシステインを示す、請求項２７記載の複合体。
29. 以下：
    

    

    から選択される、請求項１〜２８のいずれか１項記載の複合体。
30. 請求項１〜２９のいずれか１項に定義される化合物の少なくとも１種を、医薬として許容される担体に含有する医薬組成物。
31. 経口、頭蓋内、髄腔内、経腸又は非経口的投与が意図されている、請求項３０記載の医薬組成物。
32. 他の治療的投薬計画又は薬剤と同時又は逐次投与が意図されている、請求項３０又は３１記載の医薬組成物。
33. 癌の治療のための、請求項３０〜３２のいずれか１項記載の医薬組成物。
34. 結腸癌、肺癌（すなわち小細胞癌、非小細胞癌、気管支癌）、膵臓癌、卵巣癌、乳癌、前立腺癌、肝癌、頭部、胃及び頸部の癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫癌、メラノーマ、白血病、神経芽細胞腫又は膠芽細胞腫の治療のための、請求項３０〜３３のいずれか１項記載の医薬組成物。
35. 他の治療的投薬計画又は薬剤、例えば５−フルオロウラシル、ロイコボリン、オキサリプラチン、カペシタビン、ビンクリスチン、セレブレックス、テモゾロミド、セレニウム、サリドマイド、テモゾロミド、セツキシマブ、ゲムシタビン、ドセタキセル、３−ＡＰ、カルボプラチン、ボルテゾミブ、ベバシズマブ、ソラフェニブ、シスプラチン、ゲフィチニブ、フラボピリドール、エルボリン（ｅｌｖｏｒｉｎ）、カルボプラチン、アムルビシン、ロイコボリン、トラスツズマブ、ペメトレキセド、エルロチニブ、マイトマイシンＣ、ＡＭＧ７０６、パニツマブ、パクリタキセル、ラルチトレキセド、イマチニブ、アブシキシマブ、インフリキシマブ、パリビズマブ、リツキシマブ、ゲムツズマブ・オゾガマイシン、アレムツズマブ、イブリツモマブチウキセタンの同時又は逐次治療を伴う抗−癌治療のための、請求項３２記載の医薬組成物。
36. 癌の治療用の医薬組成物の調製のための、請求項１〜２９のいずれか１項に定義される化合物の少なくとも１種の有効量の使用。
37. 下記式（Ｖ）：
    

    

    （式中、Ｂは、置換又は非置換のシクロアルキル基であり、Ｒ１及びＲ２は、独立して、存在しないか又は置換もしくは非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール基である）
    により表される化合物、それらの塩及び／又は異性体。
38. Ｒ１が、置換又は非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリール又はヘテロアリール基であり、Ｒ２が、存在しないか又は置換もしくは非置換の二価のアルキル、ヘテロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール基である、請求項３７記載の化合物。
39. Ｒ１及びＲ２の少なくとも１つが、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−ＳＲ’−、−ＳｉＲ’Ｒ’’−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−から選択される少なくとも１個の二価のラジカルにより中断され、ここでＲ’及びＲ’’は独立して先に定義されたものであり、特にＲ’及びＲ’’は、水素、（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル、（Ｃ_１−Ｃ_８）ヘテロアルキル、アリール及びヘテロアリール基から選択される、請求項３７又は３８記載の化合物。
40. −Ｂは、シクロ（Ｃ_３−Ｃ_８）アルキル、好ましくはシクロペンチルもしくはシクロヘキシルラジカルを含む、非置換のシクロアルキルであり、及び／又は
    −Ｒ１は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
    −Ｒ１は、直鎖状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
    −Ｒ１は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１もしくは２個の二価のラジカルにより任意に中断された（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖は、先に定義された少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含み、及び／又は
    −Ｒ２は、存在しないか、及び／又は
    −Ｒ２は、ヘテロアルキル基であり、特にポリ（エチレングリコール）（すなわちＰＥＧ）及びＰＥＧ−３、−４、−５、もしくは−６のようなその誘導体を包含し、及び／又は
    −Ｒ２は、直鎖状（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖、特に−ＣＨ_２−もしくは−ＣＨ_２ＣＨ_２−であり、及び／又は
    −Ｒ２は、−ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＯ_２−、−ＣＯＮＲ’−、−ＮＲ’ＣＯ−、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’−、及び−ＮＲ’’Ｃ（Ｏ）_２−、好ましくは−ＣＯＮＲ’−もしくは−ＮＲ’’ＯＣ（Ｏ）−から選択される少なくとも１個、好ましくは１又は２個の二価のラジカルにより任意に中断された（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖であり、ここでＲ’及びＲ’’は互いに独立して、水素及び（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキルから選択されることが好ましく、並びに任意に該（Ｃ_１−Ｃ_８）アルキル鎖は、少なくとも１個のシクロアルキル鎖を含む、請求項３７〜３９のいずれか１項記載の化合物。
41. Ｒ１及び／又はＲ２が、少なくとも１個の二価のラジカルにより中断され、該中断が、Ｒ１及び／又はＲ２基の任意の内部位置に、又はＲ１及び／もしくはＲ２基が式（Ｖ）の化合物の残りの部分へ結合された位置に配置される、請求項３７〜４０のいずれか１項記載の化合物。
42. ４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドカプロン酸、
    ４−［（Ｎ−マレイミドエチル）カルボキシアミドエチル（Ｐｅｇ）_４カルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、
    ４−［（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−６−アミドヘキサンカルボキシアミドメチル］シクロヘキサンカルボン酸、及び
    ４−［（（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシアミド）メチル］シクロヘキサンカルボン酸
    から選択される、請求項３７〜４１のいずれか１項記載の化合物。

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