KR20210047317A - 링커, 항체-약물 접합체와 동일한 것 및 이의 용도를 포함하는 항체-약물 접합체 (Linker, antibody-drug conjugate including same and use thereof) - Google Patents

링커, 항체-약물 접합체와 동일한 것 및 이의 용도를 포함하는 항체-약물 접합체 (Linker, antibody-drug conjugate including same and use thereof) Download PDF

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얀밍 왕
시용 판
송 리
위 쫑
쥔하이 시아오
쯔빙 쩡
싱쪼우 리
디엔 시아오
윈더 시에
시아오퀴 왕
루이위엔 카오
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Abstract

본 발명은 화학식 I 또는 I'로 표시되는 링커, 이를 포함하는 항체-약물 접합체, 및 항체-약물 접합체를 포함하는 약제학적 조성물의 용도, 및 질병을 치료 및/또는 예방하기 위한 항체-약물 접합체의 용도에 관한 것이다.
Figure pct00536

<화학식 I>
Figure pct00537

<화학식 I'>

Description

링커, 항체-약물 접합체와 동일한 것 및 이의 용도를 포함하는 항체-약물 접합체 (Linker, antibody-drug conjugate including same and use thereof)
본 출원은 2018 년 8 월 17 일에 출원된 중국 출원 (출원번호 201810939770.0)을 기초로 하고 우선권을 주장하며, 그 개시 내용 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 출원은 의약 화학 분야에 속하며, 구체적으로 링커 (linker), 항체-약물 접합체 및 링커의 용도를 포함하는 링커, 질병의 치료 및/또는 예방을 위한 항체-접합 약물 및 항체-약물 접합체의 용도를 포함하는 제약 조성물에 속한다.
종양은 여전히 질병으로 인한 인간 사망의 주요 원인이다. 새로운 치료법의 지속적인 출현은 암 치료에 혁명적인 변화를 가져오고 있다. 최근 몇 년 동안 CAR-T 세포 요법과 PD-1/PD-L1 항체 면역 요법이 획기적인 발전을 이루었지만, CAR-T 세포 요법의 적응증은 혈액 악성 종양으로 제한되며 PD-1/PD-L1 항체 면역 요법의 객관적인 반응률은 20 % 내지 30 %에 불과하다. 대부분의 악성 종양의 경우 치료 방법이 여전히 제한적이며 기존 치료법을 확장하고 지속적인 혁신을 통한 시너지 창출이 여전히 필요하다.
최근에는 악성 종양 치료 전략이 전통적인 화학 요법에서 항체 기반 표적 요법으로 점차 이동하고 있다. 그러나 일반적으로 전통적인 치료법은 임상 실습에서 여전히 첫번째 선택이며 화학 요법 약물은 여전히 산출물 개수 측면에서 암 치료 시장에서 가장 큰 점유율을 차지한다. 낮은 표적화 및 생체 분포로 인해 소분자 화학 요법 약물은 심각한 독성 및 부작용을 발생시키는 경향이 있어 환자의 순응도가 떨어지고 만족스러운 임상 적 이점을 얻는 데 어려움이 있다. 화학 요법 약물과 비교하여 모노클로날항체 약물은 더 나은 표적화 및 약동학적 특성을 가지고 있으며 악성 종양 치료에서 점점 더 중요한 역할을 수행하고 있지만, 조직 침투 불량, 약한 생물학적 활성 및 저항 생성 용이성과 같은 결함도 있다.
신약 개발을 위한 전반적인 고품질 표적이 심각하게 부족한 상황에서 항체-약물 접합체 (ADC)의 출현은 소분자 화학 요법 약물과 항체의 장점을 강력하게 결합했으며 종양 면역 요법 외에 가장 유망한 방향 중 하나가 되었다. 항체-약물 접합체의 구조는 항체, 소분자 세포 독소 및 이전 두 부분의 유기적 조합을 실현하는 링커의 세 부분으로 구성된다. 항체의 표적화 특성에 의해 ADC의 세포 독소는 종양 표적 부위에 축적되어 효능 증가 및 독성 감소 효과를 달성하고 방출된 세포 독소는 방관자 효과를 통해 주변 종양 세포를 더욱 죽일 수 있다. 세포 독소의 IC50은 일반적으로 10-10 내지 10-12 mol/L이고 일반적인 세포 독소는 튜불린 억제제 MMAE 및 DM1이다. 기존의 화학 요법 약물에 비해 ADC는 치료 지수가 크게 향상되었다.
항체를 기반으로 한 표적 약물 전달 외에도 ADC의 또 다른 주요 장점은 ADC의 효능이 항체가 아닌 세포 독소에 주로 의존하기 때문에 모노클로날항체에 의한 2 차 약물 내성을 어느 정도 극복할 수 있다는 것이고, 그것의 표적 결합은 어느 정도의 종양 돌연변이에 의해 영향을 받지 않는다는 것이다. 예를 들어, 모노클로날항체 허셉틴 (Herceptin) 및 세포 독소 DM1로 구성된 ADC 약물 캐사일라 (Kadcyla)는 허셉틴 내성 후에도 HER2+ 유방암을 여전히 효과적으로 치료할 수 있고 카페시타빈/라파티닙 (capecitabine/lapatinib)의 표준 요법과 비교하여 비해 전체 생존 (OS)을 거의 6 개월까지 실질적으로 연장할 수 있다. 또한 MARIANNE, KAMILLA 등의 코드명을 사용한 임상III상 증거 기반 의학 연구에서 캐사일라 단일 약물이 표준 요법보다 열등하지 않은 효능을 보였으며 더 나은 안전성을 보여주었다는 것을 확인했다. 이 약물은 현재 1차 항HER2 요법으로 유방암 지침에 포함되었다. AD는 높은 활성, 낮은 독성 및 부작용, 장기간의 작용이 특징이며 이러한 약물의 출현은 종양의 "정밀 치료"를 위한 새로운 전략을 제공한다.
항체와 같은 생물학적 거대 분자에서 중쇄 및 경쇄는 종종 정의된 위치에서 이황화 결합에 의해 연결된다. 항체 분자의 경쇄와 중쇄 사이의 이황화 결합을 선택적으로 환원하여 생성된 프리 설프히드릴기 (free sulfhydryl groups)는 항체 변형 부위로 널리 사용되어 항체 시스테인 잔기 (cysteine residues)가 결합 부위로 사용되는 ADC 약물을 얻었다. 최초의 성공적인 시판 ADC 약물 브렌툭시맙 베도틴 (Brentuximab Vedotin, Adcetris®)는 이 결합 방식을 채택한다. 또한, 새롭게 등장하는 설프히드릴 부위지정 돌연변이 유발 항체 (THIOMAB)는 ADC 약물의 개선된 균일성을 어느 정도 가지고 있으며 이러한 유형의 항체의 결합 부위도 설프히드릴 커플링 위치이다. 위에서 언급한 다양한 종류의 ADC의 제조 과정에서 티오숙신이미드 (thiosuccinimide)는 항체 구조의 프리 설프히드릴기와 말레이미드기 (maleimide group) 사이의 마이클 첨가 반응 (Michael addition reaction)에 의해 생성되어 항체의 소분자 약물 변형 과정을 실현할 수 있고 (그림 1) 이 첨가 반응은 현재 시장에 나와있는 ADC의 준비 과정과 임상 연구에서 없어서는 안될 도구가 되었다.
티오숙신이미드의 구조는 ADC 링커에서 널리 사용된다. 현재 두 가지 주류 ADC 약물 Adcetris®및 Kadcyla®와 임상적으로 연구된 많은 ADC에는 모두 티오숙신이미드 구조 단편이 포함되어 있다.
생물학적 결합에서 티오숙신이미드 구조의 광범위한 적용은 주로 두 가지 점에 근거한다: (1) 구조는 온화한 생물학적 조건에서 말레이미드 구조와 설프히 드릴 그룹 사이의 마이클 첨가 반응을 통해 직접 얻을 수 있고; (2) 첨가 반응은 선택성이 높고 반응 동역학적 특성이 좋으며, 과잉 기질없이 매우 짧은 시간에 결합 과정을 정량적으로 완료할 수 있다.
Figure pct00001
<Kadcyla>
Figure pct00002
<Adcetris>
비록 티오숙신이미드가 명백한 장점 및 광범위한 적용성을 가지고 있더라도, 많은 생물학적 결합 분야 연구자들은 티오숙신이미드의 자발적인 역 결합 마이클 첨가 반응이 거의 절반의 접합체를 천천히 분해하여 (도 2) 독소가 표적을 놓치게 할 것이라는 사실을 깨달았다. 위에서 언급한 특성으로 인한 불안정성에 대한 비표적 독소는 의심할 여지없이 ADC 효능 감소 및 독성 부작용 증가로 이어질 것이다. (Nature Biotech., 2014, 32(10): 1059-1062.; Nature Biotech., 2012, 30(2): 184-189.; Bioconjugate Chem., 2008, 19(3): 759-765.; Bioconjug Chem., 2016, 27(7): 1588-1598.; J Med Chem., 2014, 57(19): 7890-7899.).
연구자들은 ADC에서 비표적 독소가 티오숙신이미드로 인해 발생하는 문제를 오랫동안 알고 있었으며 전 세계의 많은 제약회사도 위의 문제를 해결하기위한 솔루션을 찾기 위해 노력하고 있다. ADC 제약회사 Genentech의 연구원인 Junutula M의 연구 결과에 따르면 티오숙신이미드의 구조가 역마이클 첨가 반응을 겪을 때 경쟁적인 가수분해 개환 반응 (hydrolysis ring-opening reaction)이 동시에 일어나고, 가수분해 개환 반응에 의해 얻어진 생성물의 구조가 안정적이며, 결합된 독소는 장기간에 걸쳐 표적이 되지 않는다 (Nature Biotech., 2012, 30(2): 184-189., 도 3). 추가 연구에 따르면 개환 구조는 매우 안정적이며 분해 반감기는 2년까지 길 수 있다. (Bioconjug Chem., 2015, 26(1): 145-152.) 그러나 Genentech에서 위의 연구 및 분석 작업은 생체내 (in vivo) 약동학만을 포함하며 ADC 제품의 안정적인 수준을 얻지 못했다. 연구 문헌의 결론과 우리의 추가 실험은 구조안정 링커 개환 커플링 제품 (the structure-stable linker ring-opening coupling product)이 커플링 반응에 의해 직접 제조될 수 없음을 확인한다 (Biochem J., 1979, 179(1): 191-197.).
석신이미드 (succinimide) 구조로 인한 ADC불안정성 문제는 아직 효과적으로 해결되지 않았으며 개환 링커를 사용하는 안정적인 ADC를 준비하는 것은 여전히 큰 도전에 직면해 있다. 석신이미드의 불안정성으로 인한 독소의 오프 타겟팅을 극복하기 위한 개환 제품을 얻기 위해, Pfizer의 L. Nathan Tumey는 알칼리성 조건에서 가열하여 ADC 구조 과정에서 숙신이미드의 개환을 수행하려고 시도했다 (도 4). 그러나 항체 및 항체의 약 70%의 구조 및 성질을 파괴하는 것을 유발하는 항체의 등전점에 가까운 알칼리 상태 (pH = 9.2)에서 장시간 (48 시간) 가열 (45 °C)은 아스파라긴의 탈아미드화 돌연변이를 갖는다. (Bioconjug Chem., 2014, 25(10): 1871-1880.) 이 방법은 ADC 개발에 사용될 때 여전히 상당한 결함과 한계가 있다.
Seattle Genetics의 연구원 Lyons RP는 숙신이미드의 개환 과정을 유도하고 가속화하기 위해 숙신이미드 그룹 근처에 분자내 아미노 그룹을 도입했다 (Nature Biotech., 2014, 32(10): 1059-1062., 도 5). 그러나 이 전략은 준비 과정에 제어할 수 없는 다양한 요소를 가져왔고, 구조의 변화는 최종 제품의 분포, 대사, 약동학 및 효능에 다양한 영향을 미칠 수 있고; 개환 구조를 유도하기 위한 준비 과정이 복잡하여, 새로운 화학 물질의 약물 가능성과 약물 안전성을 추가로 확인해야한다.
현재 연구에서 티오숙신이미드 링커 구조를 더 잘 대체할 수 있는 이상적인 선택은 아직 없다. 주류 ADC에서 일반적인 티오숙신이미드 구조에 의한 독소의 표적을 벗어난 문제를 해결하는 방법은 여전히 큰 도전에 직면해 있다.
출원발명은 개환 링커를 갖는 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 부류를 제공하며, 화합물은 생물학적 특성과 유사한 온화한 조건하에서 신속하게 제조될 수 있다. 이 화합물은 안정성이 높고 현재 단계 ADC에서 흔히 볼 수 있는 티오숙신이미드의 불안정성으로 인한 독소오프타겟 문제를 효과적으로 극복할 수 있다.
출원발명의 첫번째 측면은 화학식 I 또는 화학식 I'로 표시되는 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고,
Figure pct00003
<화학식 I>
Figure pct00004
<화학식 I'>
여기서:
W는
Figure pct00005
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00006
,
Figure pct00007
,
Figure pct00008
,
Figure pct00009
,
Figure pct00010
,
Figure pct00011
및
Figure pct00012
;
L2는
Figure pct00013
또는
Figure pct00014
이고;
L3는
Figure pct00015
이고;
R2는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
Figure pct00016
,
Figure pct00017
,
Figure pct00018
및
Figure pct00019
;
R'2는 할로겐이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
q는 0 또는 1 이고;
m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
출원발명의 두번째 측면은 화학식 II 또는 화학식 II'로 표시되는 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고,
Figure pct00020
<화학식 II>
Figure pct00021
<화학식 II'>
여기서:
W는
Figure pct00022
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고; 또는 B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 L3에 결합되고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00023
,
Figure pct00024
,
Figure pct00025
,
Figure pct00026
,
Figure pct00027
, 및
Figure pct00028
;
L2는
Figure pct00029
또는
Figure pct00030
이고;
L3는
Figure pct00031
이고;
R3는: 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
q는 0 또는 1이고;
m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
출원발명의 세번째 측면은 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고,
Figure pct00032
<화학식 III>
Figure pct00033
<화학식 III'>
여기서:
A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 상기 표적화합물 분자에서 # 또는 ## 위치에 S원자를 통해 커플링되고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고; 또는 B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 L3에 결합되고;
n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00034
,
Figure pct00035
,
Figure pct00036
,
Figure pct00037
,
Figure pct00038
,
Figure pct00039
, 및
Figure pct00040
;
L2는
Figure pct00041
또는
Figure pct00042
이고;
L3는
Figure pct00043
이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
q는 0 또는 1이고;
m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-인 것에 관한 것이다.
출원발명의 일 실시예에 따르면, 출원발명은 화학식 I, 화학식 I', 화학식 II, 화학식 II', 화학식 III, 화학식 III', 이의 염 또는 용매화물로 표시되는 화합물로,
여기서:
W는
Figure pct00044
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00045
,
Figure pct00046
,
Figure pct00047
,
Figure pct00048
,
Figure pct00049
,
Figure pct00050
및
Figure pct00051
;
L2는
Figure pct00052
또는
Figure pct00053
이고;
L3는
Figure pct00054
이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
q는 0 또는 1 이고;
m, t, r 은 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
출원발명의 일 실시예에 따르면, 출원발명은 화학식 I, 화학식 I', 화학식 II, 화학식 II', 화학식 III, 화학식 III', 이의 염 또는 용매화물로 표시되는 화합물로,
여기서:
W는
Figure pct00055
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g- 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-;
L2는
Figure pct00056
또는
Figure pct00057
이고;
L3는
Figure pct00058
이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
q는 0 또는 1 이고;
e, f, g, h, i, j 및 k는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기: A는 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1에 나타낸 바와 같이, 표적화합물 분자에서 위치 #에 S 원자를 통해 커플링되고:
Figure pct00059
<화학식 III-1>
Figure pct00060
<화학식 III'-1>
여기서 치환기의 정의는 출원발명에 기재된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 I', 화학식 II, 화학식 II', 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 이의 염 또는 용매화물에서,
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00061
,
Figure pct00062
,
Figure pct00063
및
Figure pct00064
;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군에서 선택되고;
m은 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, m은 0, 1, 2, 3, 4로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 I', 화학식 II, 화학식 II', 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 이의 염 또는 용매화물에서,
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00065
, 및
Figure pct00066
;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군에서 선택되고;
m은 0, 1, 2, 3, 4로 구성된 군으로부터 선택되고
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 III-1, 이의 염 또는 용매화물에서
L2는
Figure pct00067
이고, 여기서:
Y는 Val-Cit 또는 Val-Ala에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z는 -CH2-이고;
R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 III-1로 표시되는 화합물에서,
L2는
Figure pct00068
이고, 여기서:
Y는 Val-Cit에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z, R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 III-1로 표시되는 화합물에서,
L2는
Figure pct00069
이고, 여기서:
Y는 Val-Ala에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
Z, R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 이의 염 또는 용매화물에서, R2는
Figure pct00070
및
Figure pct00071
로 구성된 군으로부터 선택된다
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 이의 염 또는 용매화물에서,
R2는
Figure pct00072
이고;
q는 0이고; 또는
R2는
Figure pct00073
이고, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같고;
q는 1이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 이의 염 또는 용매화물에서,
R2는
Figure pct00074
이고;
q는 0이고; 또는
R2는
Figure pct00075
이고, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같고;
q는 1이다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 I, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 여기서 R2는
Figure pct00076
이고, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 I, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 IV로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00077
<화학식 IV>
여기서,
W는
Figure pct00078
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하며;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고 R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00079
,
Figure pct00080
,
Figure pct00081
,
Figure pct00082
,
Figure pct00083
,
Figure pct00084
, 및
Figure pct00085
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00086
,
Figure pct00087
,
Figure pct00088
및
Figure pct00089
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
R2는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
Figure pct00090
및
Figure pct00091
;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시 로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸 로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 IV로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j, k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 IV로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00092
,
Figure pct00093
,
Figure pct00094
,
Figure pct00095
,
Figure pct00096
,
Figure pct00097
, 및
Figure pct00098
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 I', 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 IV'로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00099
<화학식 IV'>
여기서,
W는
Figure pct00100
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하며;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고 R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00101
,
Figure pct00102
,
Figure pct00103
,
Figure pct00104
,
Figure pct00105
,
Figure pct00106
, 및
Figure pct00107
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00108
,
Figure pct00109
,
Figure pct00110
및
Figure pct00111
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
R'2는 할로겐이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 IV'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 IV'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00112
,
Figure pct00113
,
Figure pct00114
,
Figure pct00115
,
Figure pct00116
,
Figure pct00117
, 및
Figure pct00118
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 II', 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 V 로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00119
<화학식 V>
상기:
W는
Figure pct00120
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00121
,
Figure pct00122
,
Figure pct00123
,
Figure pct00124
,
Figure pct00125
,
Figure pct00126
, 및
Figure pct00127
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00128
,
Figure pct00129
,
Figure pct00130
, 및
Figure pct00131
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸 로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 V로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 V로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00132
,
Figure pct00133
,
Figure pct00134
,
Figure pct00135
,
Figure pct00136
,
Figure pct00137
, 및
Figure pct00138
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 II', 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 V' 로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00139
<화학식 V'>
여기서:
W는
Figure pct00140
이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 **위치에 커플링되고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00141
,
Figure pct00142
,
Figure pct00143
,
Figure pct00144
,
Figure pct00145
,
Figure pct00146
, 및
Figure pct00147
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00148
,
Figure pct00149
,
Figure pct00150
, 및
Figure pct00151
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸 로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 V'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 V'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00152
,
Figure pct00153
,
Figure pct00154
,
Figure pct00155
,
Figure pct00156
,
Figure pct00157
, 및
Figure pct00158
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 III, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 VI로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00159
<화학식 VI>
여기서,
A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치 또는 ##위치에 커플링되고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고; B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고;
n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고: 할로겐 및 C1-4 알콕시;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00160
,
Figure pct00161
,
Figure pct00162
,
Figure pct00163
,
Figure pct00164
,
Figure pct00165
, 및
Figure pct00166
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00167
,
Figure pct00168
,
Figure pct00169
및
Figure pct00170
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'은 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
각각의 R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, 각각의 R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, I, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00171
,
Figure pct00172
,
Figure pct00173
,
Figure pct00174
,
Figure pct00175
,
Figure pct00176
, 및
Figure pct00177
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 III', 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 화합물은 화학식 VI'로 표시되는 화합물이고,
Figure pct00178
<화학식 VI'>
여기서,
A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치 또는 ##위치에 커플링되고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고; B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 **위치에 커플링되고;
n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고: 할로겐 및 C1-4 알콕시;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00179
,
Figure pct00180
,
Figure pct00181
,
Figure pct00182
,
Figure pct00183
,
Figure pct00184
및
Figure pct00185
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00186
,
Figure pct00187
,
Figure pct00188
및
Figure pct00189
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'은 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
각각의 R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, 각각의 R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, I, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, p는 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, p는 0, 1 또는 2이고, p는 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI'로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00190
,
Figure pct00191
,
Figure pct00192
,
Figure pct00193
,
Figure pct00194
,
Figure pct00195
, 및
Figure pct00196
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 VI 또는 화학식 VI'로 표시되는 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 상기 A는 화학식 VI 또는 화학식 VI'에 나타낸 바와 같이, 표적화합물 분자에서 위치 #에 S 원자를 통해 커플링되고:
Figure pct00197
<화학식 VI-1>
Figure pct00198
<화학식 VI'-1>
여기서,
A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치에 커플링되고;
B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고; B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치 또는 **위치에 커플링되고;
n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고: 할로겐 및 C1-4 알콕시;
L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
Figure pct00199
,
Figure pct00200
,
Figure pct00201
,
Figure pct00202
,
Figure pct00203
,
Figure pct00204
및
Figure pct00205
;
바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
Figure pct00206
,
Figure pct00207
,
Figure pct00208
및
Figure pct00209
;
R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'은 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
e, f, g, h, I, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
각각의 p는 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 0, 1 또는 2이고, p는 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI'-1로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고:
-(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 및
-(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
여기서 e, f, g, h, i, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 VI'-1로 표시되는 화합물에서, L1은 다음으로 구성된 그룹에서 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
Figure pct00210
,
Figure pct00211
,
Figure pct00212
,
Figure pct00213
,
Figure pct00214
,
Figure pct00215
, 및
Figure pct00216
, 여기서 R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1 은 -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-이고, 여기서 e, f 및 g의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1 은 -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-이고, 여기서 h, I, j 및 k의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e, f 및 g는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및10로 구성된 군으로부터 선택된다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h, I, j 및 k는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 및10로 구성된 군으로부터 선택된다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e는 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e는 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, e는 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, f는 8, 10 또는 11이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, g는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, g는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, g는 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, g는 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h는 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h는 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, h는 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, i는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, i는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, i는 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, i는 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, i는 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 3, 4 또는 5이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 6 또는 7이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 8 또는 9이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, j는 9 또는 10이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, k는 1, 2, 3, 4 또는 5이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, k는 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, k는 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, k는 3, 4 또는 5이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, q는 0이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, q는 1이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 수소이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 할로겐이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 메틸이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 에틸이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 니트로이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 메톡시이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, R3는 에톡시이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1은 -(CH2)m-이고, m은 1 또는 2이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1은 -(CH2)m-이고, m은 3 또는 4이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1은 -(CH2)m-이고, m은 5 또는 6이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1은 -(CH2)m-이고, m은 7 또는 8이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I 내지 VI, 화학식 I' 내지 VI', 화학식 III-1, 화학식 III'-1, 화학식 VI-1, 또는 화학식 VI'-1에서, L1은
Figure pct00217
이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 I, 화학식 II, 화학식 III, 화학식 I', 화학식 II', 화학식 III', 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, R1은 C1-4 알킬기이고, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸, 바람직하게는 메틸이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 II, 화학식 III, 화학식 II' 또는 화학식 III'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, B는 아우리스타틴, 메틸-아우리스타틴E (MMAE), 메이탄신 또는 이의 유도체 (예를 들어 메이탄시노이드, DM1, DM3, DM4), 파클리탁셀, 칼리케아미신, 듀오카르마이신, 독소루비신, 캄프토테신, PBD (피롤로벤조디아제핀) 세포독소 및 이의 유도체 로 구성된 군으로부터 선택되는 것이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 II, 화학식 III, 화학식 II' 또는 화학식 III', 화학식 III-1, 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, B는 모노메틸-아우리스타틴E (MMAE)이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, A는 모노클로날항체 (MAB)이고, 또는
A는 항체단편 또는 대체제 또는 이의 변이체, 단백질 리간드 또는 단백질 스캐폴드를 포함하고;
바람직하게는, A는 A의 S원자를 통해 #위치에 커플링되고,
바람직하게는, A는 A의 시스테인 잔기의 S원자를 통해 #위치에에 커플링된다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, A는 커플링 위치로서 설프히드릴을 갖는 모노클로날항체, 또는 커플링 위치로서 설프히드릴을 갖는 위치지정 돌연변이 또는 변형을 갖는 모노클로날항체이다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, A는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (anti-HER2 humanized monoclonal antibody mil40), 항-HER2 모노클로날항체 트라스투주맙 (trastuzumab, HERCEPTIN) 및 퍼투주맙 (pertuzumab, PERJETA), 항-EGFR 모노클로날항체 세툭시맙 (cetuximab, ERBITUX) 및 파니투무맙 (panitumumab, VECTIBIX), 항-CD20 모노클로날항체 리툭시맙 (rituximab, RITUXAN), 항-CD52 모노클로날항체 알렘투주맙 (alemtuzumab, CAMPATH), 항-CD20 모노클로날항체 이브리투주맙 (ibritumomab, CAMPATH), 항-CD20 모노클로날항체 토시투모맙 (tositumomab, BEXXAR), 항-CD20 모노클로날항체 오파투무맙 (ofatumumab, ARZERRA), 항-VEGF 모노클로날항체 베바시주맙 (bevacizumab, AVASTIN), 항-CTLA-4 모노클로날항체 이필리무맙 (ipilimumab, YERVOY), 항-RANKL 모노클로날항체 데노수맙 (denosumab, XGEVA), 항-PD-1 모노클로날항체 펨브롤리주맙 (pembrolizumab, KEYTRUDA), 니볼루맙 (nivolumab, Opdivo) 및 아벨루맙 (Avelumab, Bavencio), 항- PD-L1 모노클로날항체 아테졸리주맙 (Atezolizumab, Tecentriq) 및 두르발루맙 (durvalumab, Imfinzi), 항-TROP-2 모노클로날항체 사시투주맙 (Sacituzumab), 항- DLL-3 모노클로날항체 로발피투주맙 (rovalpituzumab), 및 이들의 생물학적 유사체로 구성된 군에서 선택된다.
일 실시예에서, 출원발명에서 설명된 바와 같이 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물에서, A는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40이다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 III, 화학식 III', 화학식 III-1, 화학식 III'-1의 화합물 또는 화학식 VI, 화학식 VI', 화학식 VI-1, 화학식 VI'-1의 화합물, 이의 염 또는 용매화물이고, 여기서 A는 모노클로날항체 (MAB)이고, n은 DAR (약물/항체 몰비)이다.
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 I의 화합물, 이의 염 또는 용매화물이고, 여기서 상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
Figure pct00218
,
Figure pct00219
,
Figure pct00220
,
Figure pct00221
,
Figure pct00222
,
Figure pct00223
,
Figure pct00224
,
Figure pct00225
, 및
Figure pct00226
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 II의 화합물, 이의 염 또는 용매화물이고, 여기서 상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다:
Figure pct00227
,
Figure pct00228
,
Figure pct00229
,
Figure pct00230
,
Figure pct00231
,
Figure pct00232
일 실시예에서, 출원발명은 화학식 III의 화합물, 이의 염 또는 용매화물이고, 여기서 상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
Figure pct00233
,
Figure pct00234
,
Figure pct00235
,
Figure pct00236
,
Figure pct00237
,
Figure pct00238
, 및
Figure pct00239
여기서 MAB는 항체이고, n은 출원발명에서 설명된 바와 같이 정의되고; 바람직하게는, n은 약 4 또는 8이고,
바람직하게는, MAB는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40, 트라스투주맙 (HERCEPTIN), 퍼투주맙 (PERJETA), 세툭시맙 (ERBITUX), 파니투무맙 (VECTIBIX), 리툭시맙 (RITUXAN), 알렘투주맙 (CAMPATH), 이브리투주맙 (ZEVALIN), 토시투모맙 (BEXXAR), 오파투무맙 (ARZERRA), 베바시주맙 (AVASTIN), 이필리무맙 (YERVOY), 데노수맙 (XGEVA), 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA), 니볼루맙 (Opdivo), 아벨루맙 (Bavencio), 아테졸리주맙 (Tecentriq), 두르발루맙 (Imfinzi), 사시투주맙, 로발피투주맙, 및 이들의 생물학적 유사체,
더 바람직하게는, MAB는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40이다.
출원발명의 네번째 측면은 출원발명의 첫번째 측면에 기재된 화학식 I 또는 화학식 I '로 표시되는 화합물 또는 출원발명의 두번째 측면에 기재된 화학식 II 또는 화학식 II'로 표시되는 화합물의 용도, 또는 항체-약물 접합체의 제조에서 이의 염 또는 용매화물에 관한 것이고, 바람직하게는, 항체-약물 접합체는 출원발명의 세번째 측면에 기재된 화학식 III 또는 화학식 III '로 표시되는 화합물이다.
출원발명은 또한 항체-약물 접합체의 제조에 있어서 화학식 I'로 표시되는 화합물 또는 화학식 II'로 표시되는 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물의 용도에 관한 것이고; 바람직하게는, 상기 항체-약물 접합체는 출원발명에 기재된 화학식 III-1 또는 화학식 III'-1로 표시되는 화합물이다.
출원발명의 다섯번째 측면은 출원발명의 첫번째 측면에 기재된 화학식 I로 표시되는 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물의 제조 방법에 관한 것으로,
1) q가 0이고, R2가
Figure pct00240
인 경우, 제조방법은 다음 단계를 포함하고:
a) 말레산 무수물을 화학식 i의 화합물과 반응시켜 화학식 ii의 화합물을 생성하는 단계;
Figure pct00241
<말레산 무수물> <화학식 i> <화학식 ii>
b) 화학식 ii의 화합물을 N-하이드록시숙신이미드 (SuOH)와 반응시켜 화학식 iii의 화합물을 생성하는 단계;
Figure pct00242
<화학식 ii> <화학식 iii>
c) 화학식 iii의 화합물을 요오도알킬 R1-I와 반응시켜 표적화합물 I-1을 생성하는 단계;
Figure pct00243
<화학식 iii> <표적화합물 I-1>
2) q가 1이고, R2가
Figure pct00244
인 경우, 제조방법은 다음 단계를 포함하고:
a) Fmoc-Y-OH를 화학식 iv의 화합물과 반응시켜 화학식 v의 화합물을 생성하는 단계;
Figure pct00245
<Fmoc-Y-OH> <화학식 iv> <화학식 v>
b) 화학식 v의 화합물에서 Fmoc 보호기를 제거하여 화학식 vi의 화합물을 얻는 단계;
Figure pct00246
<화학식 v> <화학식 vi>
c) 화합물 I-1을 화학식 vi의 화합물과 반응시켜 화학식 vii의 화합물을 생성하는 단계;
Figure pct00247
<화학식 vi> <화합물 I-1> <화학식 vii>
d) 화학식 vii의 화합물을 화학식 viii의 화합물과 반응시켜 표적화합물 I-2를 생성하는 단계;
Figure pct00248
<화학식 vii> <화학식 viii> <표적화합물 I-2>
여기서, L1, Y, Z, R1, R3 및 p의 정의는 출원발명에서 설명된 바와 같다.
출원발명의 여섯번째 측면은 출원발명의 두번째 측면에 기재된 화학식 II 또는 화학식 II'로 표시되는 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물의 제조 방법에 관한 것으로, 다음 하기 단계를 포함하고:
출원발명의 첫번째 측면에 기재된 화학식 I 또는 화학식 I'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 화학식 II 또는 화학식 II '로 표시되는 화합물을 얻기 위하여 B로 표시되는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 또는 표적화담체와 반응시키고,
Figure pct00249
<화학식 I> <화학식 II>
Figure pct00250
<화학식 I'> <화학식 II'>
여기서 치환기는 각각 출원발명에서 정의된 바와 같다.
출원발명의 일곱번째 측면은 출원발명의 세번째 측면에 기재된 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물, 또는 이의 염 또는 용매화물의 제조 방법에 관한 것으로, 다음 하기 단계를 포함하고:
출원발명의 두번째 측면에 기재된 화학식 II 또는 화학식 II'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 화학식 III 또는 화학식 III '로 표시되는 화합물을 얻기 위하여 A와 반응시키고, 여기서 A는 표적 화합물 분자의 S원자를 통해 #위치 또는 ##위치에 결합되고,
Figure pct00251
<화학식 II> <화학식 III>
Figure pct00252
<화학식 II'> <화학식 III'>
바람직하게는, 반응은 pH = 5 내지 10 및 온도 0 내지 40 °C의 조건에서 수행되고,
여기서 치환기는 각각 출원발명에서 정의된 바와 같다.
출원발명의 여덟번째 측면은 출원발명의 세번째 측면에 기재된 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물, 및 하나 이상의 제약 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
출원발명의 아홉번째 측면은 진단, 예방 또는 질병 또는 질환 또는 질병 또는 질환의 중증도 감소를 위한 치료용 약제의 제조에 있어 출원발명의 세번째 측면에 기재된 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물의 용도에 관한 것이다.
출원발명의 열번째 측면은 질병 또는 질환의 진단, 예방 또는 치료 또는 질병 또는 질환의 중증도 감소 방법에 관한 것으로, 상기 방법은 이러한 치료를 필요로하는 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함한다.
출원발명의 열한번째 측면은 질병 또는 질환의 진단, 예방 또는 치료 또는 질병 또는 질환의 심각도 감소에 사용하기 위한 화학식 III 또는 화학식 III '로 표시되는 화합물 또는 그의 염 또는 용매화물에 관한 것이다.
출원발명은 또한 질병 또는 질환의 진단, 예방 또는 치료 방법에 관한 것으로, 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 치료학적 유효량의 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시예에 따르면, 출원발명에 기재된 질환 또는 질환은 종양, 감염성 질환, 혈액 질환, 대사 질환, 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되며,
바람직하게는, 종양은 암, 림프종, 림프종종양, 모세포종, 육종 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되고,
바람직하게는, 암은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 유방암 (예를 들어, HER2-양성 유방암); 편평세포 암종 (예를 들어, 상피편평세포 암종); 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐선암 및 폐편평세포 암종을 포함하는 폐암; 복막암; 간암; 위암; 위장암; 췌장암; 교모세포종; 자궁경부암; 난소암; 간암; 방광암; 요도암; 간세포종양; 유방암; 장암; 결장암; 직장암; 대장암; 자궁내막암; 자궁암; 침샘암; 콩팥암 또는 신장암; 전립선암; 외음부암; 갑상선암; 간암; 항문암; 음경암; 흑색종; 다발성골수종 및 B세포림프종; 뇌암; 담낭암; 식도암; 담관암; 두경부암 및 관련 전이성 종양.
정의
본 명세서상 용어 "항체"는 일반적인 면역 글로불린이고, 면역계가 외부 물체 (예를 들어, 박테리아 및 바이러스)를 인식하고 중화하는데 사용하는 Y형 단백질이다. Y 자형 단백질 항체의 각 끝에는 항원을 특이 적으로 인식할 수 있는 부위가 포함되어 있기 때문에 항체는 외래 표적 (항원이라고 함)의 고유한 부분을 특이적으로 인식할 수 있다. 항체가 특정 항원에 결합한 후에는 여러 관련 생물학적 효과를 매개할 수 있다. 항체는 2개의 동일한 중쇄와 2개의 동일한 경쇄로 구성되며, 사슬은 시스테인 잔기에서 설프히드릴 그룹에 의해 형성된 이황화 결합으로 연결된다. "모노클로날항체"는 모든 항체 분자가 유일한 모세포의 클론인 동일한 면역 세포로 구성되어 모든 항체 분자가 동일한 단일 특이적 항체이다.
본 명세서상 용어 "세포독소"는 세포에서 방출된 후 암세포에 독성을 가질 수 있는 분자를 의미한다. 본 출원에서 특히 우려되는 독소는 메틸-아우리스타틴E (MMAE), 아우리스타틴, 메이탄시노이드 또는 이들의 유도체 (예를 들어, 메이탄시노이드, DM1, DM3, DM4), 칼리케아미신, 듀오카르마이신, 독소루비신, 캄프토테신 또는 PBD 유형 세포독소를 포함한다.
Figure pct00253
본 명세서상 용어 "링커"는 2개의 반응성 말단을 갖는 분자이며, 그 한쪽 말단은 항체에 결합될 수 있고 다른 말단은 세포독소와 같은 활성화합물에 결합하는데 사용된다. 링커의 항체결합 말단은 일반적으로 항체에서 시스테인의 설프히드릴 또는 리신의 아미노를 통해 결합될 수 있는 부위이고, 링커의 독소결합 말단은 일반적으로 독소분자에서 설프히드릴, 아미노, 카르복실 또는 히드록실과 같은 활성 부위를 통해 결합될 수 있는 부위이다. 용어 "링커"가 커플링 형태의 링커를 설명하는데 사용되는 경우, 링커가 항체 및 세포독소 중 하나 또는 두개와 반응하여 공유 결합을 형성하기 때문에, 더 이상 반응성 말단에 하나 또는 두 개의 반응성 부위를 포함 할 수 없다 (예를 들어, 설프히드릴 반응성기에 대한 이탈기, 아미노 반응성기에 대한 이탈기).
본 명세서상 용어 "항체-약물 접합체" 또는 "ADC"는 여러 분자 (일반적으로 1 내지 8 개)의 세포 독소가 각각 링커를 통해 결합된 항체 분자에 의해 형성된 생성물, 즉, 하나 이상의 세포 독소에 접합된 항체이다. 항체는 일반적으로 암 특이적 항원에 대한 선택성을 보여주는 모노클로날 항체이다.
본 명세서상 용어 "약"은 언급된 값의 +/-20%, +/-18%, +/-15%, +/-12%, +/-10%, +/-9%, +/-8%, +/-7%, +/-6%, +/-5%, +/-4%, +/-3%, +/-2%, +/-1%, +/-0.5%, +/-0.4%, +/-0.3%, +/-0.2%, +/-0.1% 이내의 값으로 이해될 수 있다. 문맥상 명백하지 않는한, 출원발명에 제공된 모든 수치는 용어 "약"에 의해 수정된다.
본 명세서에서 사용되는 약어의 정의는 다음과 같다:
ADC: 항체-약물 접합체 (antibody-drug conjugate);
Ala: 알라닌 (Alanine);
Boc: tert-부틸옥시카르보닐 (tert-Butyloxy carbonyl);
Cit: 시트룰린 (Citrulline);
DAR (약물-항체 비율): 약물/항체 몰비 (drug/antibody molar ratio);
DCC: 디시클로헥실카르보디이미드 (Dicyclohexylcarbodiimide);
DCM: 디클로로메탄 (Dichloromethane);
DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민 (N,N-Diisopropylethylamine);
DMAC: N,N-디메틸아세트아미드 (N,N-Dimethylacetamide);
DMF: N,N-디메틸포름아미드 (N,N-Dimethylformamide);
DMSO: 디메틸설폭사이드 (Dimethyl sulfoxide);
EEDQ: N-에톡시카르보닐-2-에톡시-1,2-디히드로퀴놀린 (N-Ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline);
Fmoc: 플루오레닐메틸옥시카르보닐 (Fluorenylmethyloxycarbonyl);
HER2: 인간 표피성장인자 수용체 2 (Human epidermal growth factor receptor 2);
HIC: 소수성 상호작용 크로마토그래피 (Hydrophobic interaction chromatography);
His: 히스티딘 (Histidine);
mM: 밀리몰 (Millimoles);
Ma: 말레이미드 (Maleimide);
Maa: 말레산아미드 (Maleic acid amide);
Mm: 말레산메틸 (Methyl maleate);
Mf: 메틸푸마레이트 (Methyl fumarate);
MAB: 단일클론항체 (Monoclonal antibody);
MMAE: 모노메틸-아우리스타틴E (Monomethyl-auristatin E);
NHS/SuOH: N-히드록시숙신이미드 (N-Hydroxysuccinimide);
NMM: N-메틸모르폴린 (N-Methylmorpholine);
NAC (N-아세틸-L-시스테인): N-아세틸시스테인 (N-Acetylcysteine);
PAB: p-아미노벤질알코올 (p-Aminobenzyl alcohol);
Su: 숙신이미드 (Succinimide);
TCEP: 트리스 (2-카르복시에틸)포스핀 (Tris(2-carboxyethyl)phosphine);
TFA: 트리플루오로아세트산 (trifluoroacetic acid);
THF: 테트라히드로푸란 (Hetrahydrofuran);
Tris: 트리스 (히드록시메틸)아미노메탄 (Tris(hydroxymethyl)aminomethane);
VA (Valine-Alanine, Val-Ala): 발린-알라닌디펩티드 (valine-alanine dipeptide);
Val: 발린 (valine);
VC (발린-시트룰린, Val-Cit): 발린-시트룰린디펩티드 (valine-citrulline dipeptide);
DCU: 디시클로헥실우레아 (dicyclohexylurea);
HOBT: 1-히드록시벤조트리아졸 (1-hydroxybenzotriazole);
EDCI: 1- (3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드히드로클로라이드 (1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride);
TEA: 트리에틸아민 (triethylamine);
Lys: 라이신 (lysine);
Gly: 글리신 (glycine);
Thr: 트레오닌 (threonine);
Leu: 류신 (leucine);
Ile: 이소류신 (isoleucine);
Asn: 아스파라긴 (asparagine);
Phe: 페닐알라닌 (phenylalanine).
본 명세서상 용어 "염"은 염이 유래된 화합물의 생물학적 효과 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. 많은 경우에, 출원발명에 개시된 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 또는 유사한 기의 존재를 통해 산 및/또는 염기염을 형성할 수 있다. 산 부가 염은 무기산 또는 유기산으로 형성될 수 있다. 유도체화되어 염을 형성할 수 있는 무기산은 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다. 유도체화되어 염을 형성할 수 있는 유기산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 구연산, 벤조산, 신남산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산 등을 포함한다. 염기 부가 염은 무기염기 또는 유기염기로 형성될 수 있다. 유도체화되어 염을 형성할 수 있는 무기염기는, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 리튬, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 아연, 구리, 망간, 알루미늄 등이고; 더욱 바람직하게는 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘의 염이다. 유도체화되어 염을 형성할 수 있는 유기염기는, 예를 들어 1차, 2차 및 3차 아민, 자연발생 치환 아민을 포함하는 치환 아민, 사이클릭 아민, 염기성 이온교환수지 등을 포함하고, 구체적으로는 예를 들어 이소프로필아민, 트리메틸아민, 디에틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필 아민 및 에탄올아민을 포함한다.
본 명세서상 용어 "C1-6 선형 또는 분지형 알킬"에서, “”및 “6”은 그룹내의 탄소 원자 수를 의미한다. 즉, "C1-6 선형 또는 분지형 알킬"은 "1" 내지 "6"의 수로 탄소 원자를 포함할 수 있다. 따라서, 예를 들어, "C1-4 알킬"은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 모든 알킬 그룹, 즉 CH3-, CH3CH2-, CH3CH2CH2-, (CH3)2CH-, CH3CH2CH2CH2-, CH3CH2 CH(CH3)- 및 (CH3)3C-이다.
본 명세서상 용어 "C1-6알콕시"는 "C1-6알킬-O-"구조를 갖는 기를 지칭하고, 여기서 C1-6알킬은 전술한 "C1-6 선형 또는 분지형 알킬"과 동일한 의미를 갖는다. 예를 들어, C1-4알콕시, C1-2알콕시, C1알콕시, C2알콕시, C3알콕시, C4알콕시, C5알콕시 또는 C6알콕시, 바람직하게는 C1-4 알콕시이다. 구체적인 예는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, n-부톡시, 2-부톡시, 이소프로폭시, sec-부 톡시, tert-부톡시, n-펜톡시, n-헥실옥시 등을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아니다.
본 명세서상 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 주기율표의 7열에 있는 방사성 안정 원자 중 임의의 하나이고, 예를 들어 불소, 염소, 브롬, 요오드 등을 지칭한다.
본 명세서상 기재된 약제학적 조성물은 출원발명에 기재된 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물, 및 통상적인 약제학적 담체 또는 부형제를 포함한다. 약제학적 조성물은, 예를 들어 경구 또는 비경구 투여에 의해 투여될 수 있다.
본 명세서상 용어 "유효량"은 원하는 치료 효과를 달성하기에 충분한 양, 예를 들어 치료할 질환과 관련된 증상의 완화를 달성하는 양을 지칭한다.
또한, 출원발명의 화합물의 투여량 및 사용량은 연령, 체중, 성별, 환자의 자연 건강상태 및 영양상태, 화합물의 활성강도, 투여시간, 대사율, 질병의 중증도, 진단 및 치료에 대한 의사의 주관적 판단 등을 포함하는 많은 요소에 의존한다. 바람직한 투여량은 0.01 내지 100 mg/kg 체중/일 (mg/kg body weight/day)이다.
출원발명의 일 실시예에 따르면, 출원발명과 관련된 Val-Cit 디펩티드 함유 개환 ADC의 전형적인 합성 경로는 다음과 같다:
Figure pct00254
Figure pct00255
N-Fmoc-L-Va은 DCC축합제의 작용하에 SuOH (NHS)와 축합되어 활성에스테르 Fmoc-Val-OS를 형성하고, 활성에스테르 Fmoc-Val-OSu 및 L-Ala는 아실화 반응을 거쳐 Fmoc-Val-Cit을 얻고, Fmoc-Val-Ci은 EED의 작용하에 p-아미노 벤질 알코올 (PAB)과 응축되어 Fmoc-Val-Cit-PA를 형성하고, Fmoc-Val-Cit-PAB는 알칼리성 조건에서 보호기를 제거하여 Val-Cit-PAB를 얻고, Val-Cit-PA는 Mm-C6-Val-Cit-PAB를 얻기 위해 메틸말레이트 구조를 포함하는 활성에스테르링커 Mm-C6-OSu와 반응하고, Mm-C6-Val-Cit-PA는 bis (p-nitrophenyl) 탄산염과 추가로 반응하여 링커 Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 얻고, 링커는 세포 독소 MMAE와 반응하여 ADC의 소분자 부하 Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE를 얻으며, 마지막으로 Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE는 항체와 결합되어 안정한 링커 W'를 갖는 ADC MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE를 얻는다.
출원발명은 개환 링커를 갖는 화학식 III 또는 화학식 III'로 표시되는 화합물 부류를 제공하며, 화합물은 생물학적 특성과 유사한 온화한 조건하에서 신속하게 제조될 수 있다. 이 화합물은 안정성이 높고 현재 단계 ADC에서 흔히 볼 수 있는 티오숙신이미드의 불안정성으로 인한 독소오프타겟 문제를 효과적으로 극복할 수 있다.
도 1은 항체 커플링 동안 티오숙신이미드를 생성하는 과정의 개략도를 보여준다.
도 2는 티오숙신이미드 구조의 불안정성으로 인한 독소오프-표적화의 개략도를 보여준다.
도 3은 티오숙신이미드 구조의 두가지 분해 모드의 개략도를 보여준다.
도 4는 온화하지 않은 조건에서 숙신이미드의 가수분해의 개략도를 보여준다.
도 5는 숙신이미드의 개환과정을 유도하고 가속화하기 위해 숙신이미드 그룹 근처에 아미노 그룹을 도입하는 개략도를 보여준다.
도 6은 시간에 따른 서로 다른 구조의 링커를 포함하는 ADC의 DAR곡선을 보여주며, DAR의 초기 값은 약 8이었다. 결과는 메틸말레에이트링커 (W')를 포함하는 ADC가 숙신이미드링커 (Su)를 사용하는 ADC보다 체외 안정성이 훨씬 더 우수하다는 것을 보여주었고, 포획 제 NAC의 존재 하에 21일 이내에 유의한 독소오프-표적화를 나타내지 않았고; 대조적으로, 숙신이미드링커 (Su)를 포함하는 ADC는 동일한 조건에서 약 35 %의 독소오프-타겟팅을 나타냈다.
도 7은 투여 후 시간에 따른 종양 부피의 곡선을 보여준다. 결과는 용매 대조군에 비해 양성 대조군 1의 모든 동물의 종양이 줄어들었지만 부분적으로만 억제되었으며 모든 동물의 종양이 여전히 존재함을 보여주었고; 시험 화합물 처리군 (2.5 mg/kg)에서는 모든 시험 동물의 종양이 사라지고 오랜 시간 동안 나타나지 않았으며 약물 중단 후 1개월 후 종양이 재발한 동물은 없었다.
도 8은 동일한 용량에서 다른 구조적 링커를 포함하는 ADC의 항종양 효과를 보여준다. 결과는 2.5 mg/kg 투여 시 양성 대조군 2의 마우스 종양은 완전히 사라지지 않았고, 시험 화합물 처리군 마우스의 종양은 완전히 사라진 것으로 나타났고 (처리 종료 시, p = 0.0061), 이는 고리-폐쇄 숙신이미드 링커를 포함하는 ADC와 비교할 때, 출원발명에서 제공된 개환 메틸말레이트 링커를 포함하는 ADC가 더 나은 효능을 가짐을 나타냈다.
도 9는 다양한 용량에서 ADC의 항종양 효과를 보여준다. 결과는 출원발명의 개방형 메틸말레에이트링커 (W')를 포함하는 ADC가 상당한 용량 의존적 항종양 활성을 나타내었고, 중용량 및 고용량 그룹 모두에서 종양이 사라 졌음을 보여주었다.
도 10은 출원발명의 개환 메틸말레에이트링커 (W')를 포함하는 ADC 처리 후 동물 체중변화 곡선을 보여준다. 결과는 시험 화합물 처리군과 용매 대조군 사이에 기본적으로 유의한 차이가 없었고 모든 시험 동물의 체중이 꾸준한 증가를 보였으며, 이는 제공되는 개환 메틸말레에이트 링커를 포함하는 ADC가 현재 응용 프로그램은 거의 부작용이 없음을 나타냈다.
도 11은 출원발명에서 3개 투여군 (1 mg/kg, 2.5 mg/kg, 5 mg/kg)의 개환 메틸말레에이트 링커 (W')를 포함하는 ADC 처리 후 동물에 대한 혈액분석 결과를 보여주고, 여기서 숫자 "1" 및 "2"는 각각 투여 후 28일 및 58일에 시험동물의 전혈 분석결과를 나타낸다. 결과는 용매 대조군과 시험 화합물 처리군 (1mg/kg, 2.5mg/kg, 5mg/kg)간에 유의한 차이가 없는 것으로 나타났다. 위의 결론은 출원발명에서 제공된 개환 메틸말레이트 링커를 포함하는 ADC가 낮은 혈액독성 및 표적외 골수독성을 가지고 있음을 나타냈으며, 이는 또한 그것이 잘견디는 주된 이유일 것이다.
도 12는 현미경으로 촬영한 조직절편과 골수도말 검사 결과를 보여주고, 여기서 각 투여군은 6마리의 동물을 포함하고, 사진의 원래 크기는 425 × 320μm였다. 결과는 대조군과 비교하여 시험 화합물 처리군은 유의한 차이를 보이지 않는 것으로 나타났다. 이 실험은 출원발명에서 제공하는 ADC의 약물 안전성을 더욱 확인했다.
이하, 출원발명의 실시예를 실시예와 결합하여 상세하게 설명하나, 당업자는 다음 실시예가 출원발명을 설명하기 위해서만 사용되며 출원발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다는 것을 이해할 것이다. 실시예에 특정 조건이 표시되어 있지 않은 경우에는 기존 조건 또는 제조업체가 권장하는 조건에 따라 수행해야 한다. 제조업체를 제공하지 않고 사용된 시약 또는 기기는 모두 시판되는 기존 제품이다.
실시예 1: 링커 Mm-C 3 -OSu의 합성:
1) Maa-C3-OH의 제조:
Figure pct00256
3-아미노프로피온산 (3-Aminopropionic acid, 4.13g, 46.35mM)을 아세트산 (200mL)에 용해시키고, 교반하여 용해시키고, 말레산무수물 (maleic anhydride, 5.0g, 51mM)을 첨가하고 실온에서 교반 하였고, 생성된 반응액은 맑고 투명하였고, 1 시간 동안 교반하면서 반응한 후 백색 불용성 물질이 침전되었으며, 10 시간 동안 반응을 계속한 후 여과하고, 필터케이크를 아세토니트릴로 세척하여 백색분말 고체를 얻었으며, 백색분말 고체의 무게는 7.72g이고 수율은 89 %였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.28(br, 1H), 12.72(br, 1H), 9.09(s, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.24(d, J = 12.6, 1H), 3.37(t, 2H), 2.47(t, 2H). MS m/z 186.04([M-H]-)였다.
2) Maa-C3-OSu의 제조:
Figure pct00257
Maa-C3-OH (2.0g, 10.68mM, 1당량)를 N,N-디메틸포름아미드 (DMF, 45mL)에 용해시키고, 교반하여 용해시키고, N-히드록시숙신이미드 (SuOH, 2.46g, 21.37mM, 2당량)를 첨가하고, 실온에서 교반하고, -5 °C 콜드트랩에 넣어 20분 동안 냉각시킨 다음, 2,4,6-트리메틸피리딘 (4.21 mL, 32.04 mM, 3당량)을 첨가하고 20 분 동안 -5 °C에서 20분 동안 연속적으로 교반하였다. 트리플루오로아세트산무수물 (4.50 mL, 3당량)을 30분 이내에 천천히 적가했다. 첨가가 완료된 후 반응액을 1 mol/L 염산용액 (HCl)에 적하한 후 클로로포름으로 3 내지 4 회 추출하였다. 유기상을 합하여 물로 3회 세척, 1 mol/L HCl로 2회 세척, 포화 식염수로 3회 세척, 무수 황산 마그네슘으로 건조 및 유기상을 농축하여 무색 오일 형태의 목적 생성물을 얻었고, 이는 백색 고체가 되었으며, 저온에 두었을 때 건조 후 백색 고체의 무게는 2.5g이고 수율은 81 %였다. 1H-NMR (400M, DMSO-d6): δ 8.22(t, 1H), 6.39(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.33(d, J = 12.6 Hz, 1H), 2.95(q, 2H), 2.89(s, 4H). MS m/z 283.2([M-H]-); 285.2([M+H]+)였다.
3) Mm-C3-OSu의 제조:
Figure pct00258
Maa-C3-OSu (2.4g, 9.27mM, 1당량)를 DMF (30mL)에 용해시키고, 교반하여 용해시키고, 무수탄산칼륨 (2.56g, 18.53mM, 2당량)을 첨가하고, 요오도메탄 (2.63g, 18.53mM, 2eq)을 적가하고, 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후 불용성 물질을 여과하여 제거하였다. 용매를 감압 농축하여 제거하고, 에틸아세테이트를 가하여 잔류물을 용해시키고, 여과한 후 여과액을 포화식염수로 3회 세척한 후 무수황산마그네슘으로 건조하고, 농축하여 Mm-C3-OSu의 조생성물인 백색 반고체 물질을 얻었다.
실시예 2: 링커 Mm-C 6 -OSu의 합성:
1) Maa-C6-OH의 제조:
Figure pct00259
6-아미노헥산산 (6-Aminohexanoic acid, 3.94g, 30mM)을 아세트산 (100mL)에 용해시키고 교반하여 용해시키고, 말레산무수물 (2.94g, 30mM)을 첨가하고, 실온에서 교반하여 생성된 반응용액은 맑고 투명하였고, 지속적으로 교반하여 실온에서 1시간 동안 반응시키고, 백색 불용성 물질이 침전되었다. 반응은 10 시간 동안 계속되었고, 여과를 수행하고, 필터케이크를 아세토니트릴로 세척하여 백색 분말 고체를 수득하였으며, 백색 분말 고체의 무게는 5.7g이고 수율은 82 %였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 15.08(br, 1H), 11.92(br, 1H), 9.12(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.25(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.16(t, 2H), 2.20(t, 2H), 1.54-1.43(m, 4H), 1.29(m, 2H). MS m/z 228([M-H]-)였다.
2) Maa-C6-OSu의 제조:
Figure pct00260
Maa-C6-OH (4.00g, 17.45mM, 1당량)를 DMF (70mL)에 용해시키고, 용해되도록 교반하고, N-히드록시숙신이미드 (8.03g, 69.80mM, 4당량)를 첨가하고, 실온에서 교반하고, -5 °C 콜드트랩에 넣어 20분 동안 식힌 다음, 이어서 2,4,6- 트리메틸피리딘 (9.31 mL, 69.80 mM, 4당량)을 첨가하고 -5 °C에서 20분 동안 연속적으로 교반하였다. 트리플루오로아세트산무수물 (9.80 mL, 4당량)을 0.5시간 이내에 천천히 적가 하였다. 적가 완료된 후, 반응용액을 1 mol/L HCl에 적가하고 클로로포름으로 3 내지 4회 추출하였다. 유기상을 합하여 물로 3번 씻고, 1 mol/L HCl로 2회 세척, 포화염수로 3회 세척하고, 무수황산마그네슘으로 건조하고, 유기상을 농축하여 백색 고체의 목적 생성물을 얻었고, 건조 후 백색 고체의 무게는 5.11g이고 수율은 89.74%였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 15.13(1H), 9.11(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.25(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.17(q, 2H), 2.81(s, 4H), 2.76(t, 2H), 1.639(m, 2H), 1.50(m, 2H), 1.38(m, 2H). MS m/z 325.4([M-H]-); 327.5([M+H]+)였다.
3) Mm-C6-OSu의 제조:
Figure pct00261
Maa-C6-OSu (1.50g, 4.6mM, 1당량)를 DMF (25mL)에 용해시키고, 교반하여 용해시키고, 무수탄산칼륨 (1.27g, 9.2mM, 2당량)을 첨가하고, 이어서 요오도메탄 (1.3g, 9.2mM, 2당량)을 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 불용성 물질은 여과에 의해 제거되었고, 용매를 감압 농축하여 제거하고, 에틸 아세테이트를 첨가하여 잔류물을 용해시키고, 필터링 한 다음, 여액을 포화염수로 3회 세척하고, 무수황산마그네슘으로 건조하고, 감압 농축하고, 에틸아세테이트에 재용해한 다음 실리카겔과 혼합하고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 흰색 고체의 목적물을 얻었고, 건조 후 백색 고체의 무게는 1.1g이고 수율은 66%였다. 1H-NMR(400M, CDCl3): δ 8.21(br, 1H), 6.35(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.13(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.80(s, 3H), 3.35(q, 2H), 2.84(s, 4H), 2.63(t, 2H), 1.80(m, 2H), 1.63(m, 2H), 1.49(m, 2H). MS m/z 341.2([M+H]+); 363.2 ([M+Na]+)였다.
실시예 3: 링커 Mm-CR-OSu의 합성:
1) Maa-CR-OH의 제조:
Figure pct00262
4-(아미노 메틸)시클로헥산-1-카르복실산 (4-(Aminomethyl)cyclohexane-1-carboxylic acid, 2.0g, 20.4mM)을 아세트산 (100mL)에 용해시키고, 교반하여 용해시키고, 말레산무수물 (3.2g, 20.4mM)을 첨가하고, 상온에서 교반하고, 생성된 반응용액은 맑고 투명하였고, 상온에서 1시간 동안 계속 교반하여 반응시켰고, 백색 불용성 물질이 침전되었으며, 반응은 10 시간 동안 계속되었다. 반응 용액을 여과하고, 필터케이크를 아세토니트릴로 세척하여 백색 분말 고체를 얻었으며, 백색 분말 고체의 무게는 2.91g이고 수율은 56 %였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.92(br, 1H), 12.13(br, 1H), 9.08(t, 1H), 6.42(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.03(t, 2H), 2.13(tt, 1H), 1.90(dd, 2H), 1.74(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.26(qd, 2H), 0.94(qd, 2H). MS m/z 254.3([M-H]-)였다.
2) Maa-CR-OSu의 준비:
Figure pct00263
Maa-CR-OH (0.64g, 2.5mM)를 DMF (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, N-히드록시숙신이미드 (0.58g, 5.0mM)를 첨가하고, 이를 녹이기 위해 저어주고, -5 °C 콜드트랩에 넣어 식히고, 2,4,6-트리메틸피리딘 (1.3mL, 10mM)을 첨가하고 10분 동안 계속 교반하고, 트리플루오로아세트산무수물 (1.40mL, 10mM)을 천천히 적가 하였다. 반응이 완료된 후, 반응용액을 1 mol/L HCl에 적가하였으며, 0.69g의 백색 미세 분말 고체가 침전되었고, 수율은 78%였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 14.99(br, 1H), 9.09(t, 1H), 6.42(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.06(t, 2H), 2.80(s, 4H), 2.69(tt, 1H), 2.02(dd, 2H), 1.79(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.50(m, 1H), 1.42(qd, 2H), 1.03(qd, 2H)였다.
3) Mm-CR-OSu의 준비:
Figure pct00264
Maa-CR-OSu (1.62g, 4.6mM)를 DMF (15mL)에 용해시키고, 용해되도록 교반하고, 무수탄산칼륨 (1.27g, 9.2mM, 2eq)을 첨가하고, 그 다음 요오도메탄 (1.3g, 9.2mM, 2 당량)을 적가하고, 실온에서 2 시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 불용성 물질을 여과에 의해 제거하고, 용매를 감압 농축하여 제거하고, 에틸아세테이트를 첨가하여 잔류물을 용해시키고, 필터링 한 다음, 여액을 포화염수로 3회 세척하고, 무수 황산 마그네슘으로 건조하고, 감압 농축하였으며, 에틸아세테이트에 다시 용해시켜 실리카겔과 혼합시키고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 목적물을 얻었다. 건조된 백색 고체의 무게는 0.91g이고 수율은 54 %였다. 1H-NMR(400M, DMSO-d6): δ 9.09(t, 1H), 6.40(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.18(d, J = 12.6 Hz, 1H), 3.81(s, 3H), 3.06(t, 2H), 2.80(s, 4H), 2.69(tt, 1H), 2.02(dd, 2H), 1.79(dd, 2H), 1.43(m, 1H), 1.50(m, 1H), 1.42(qd, 2H), 1.03(qd, 2H).
실시예 1 내지 3에서 제조된 말레산메틸을 포함하는 링커의 구조를 다음 표 1에 나타내었다.
링커 코드 링커 구조
Mm-C3-OSu
Figure pct00265
Mm-C6-OSu
Figure pct00266
Mm-CR-OSu
Figure pct00267
실시예 4: 링커 Mm-C 3 -Val-Ala-PAB-PNP의 합성:
1) Fmoc-Val-Ala의 준비:
Figure pct00268
THF용액 (250mL) 중의 Fmoc-Val (25.0g, 74.0mM), SuOH (NHS, 8.52g, 74.0mM) 및 디시클로헥실-카르보디이미드 (DCC, 15.27g, 74.0mM)를 실온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0 °C로 냉각하고 2시간 동안 교반하고, 불용성 고체 부산물인 디시클로헥실우레아 (DCU)를 제거하기 위해 여과하고, 여액을 수집하고, 필터케이크를 THF로 더 세척하고, 세척액과 여액을 합치고, 감압 하에서 농축하여 유리질 고체의 조생성물을 얻었으며, 이는 추가 정제없이 다음 단계에서 직접 사용되었다.
유리질 고체를 DME (200 mL)와 THF (100 mL)의 혼합물에 재용해시켰고, 이어서 중탄산나트륨 수용액 중의 L-알라닌 (6.95g, 78mM)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 15% 시트르산 수용액 (400mL)에 부었고, 여과하고, 필터케이크를 감압하에 건조시켜 조생성물을 얻었다. 조생성물을 디에틸에테르에 분산시키고, 초음파 및 여과로 3회 정제하여 백색 고체 (16.2g, 53% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.48 (s, 1H), 8.25(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.43(m, 3H), 7.33(m, 2H), 4.22(m, 4H), 3.89(q, 1H), 1.96(m, 1H), 1.27(d, 3H), 0.88(dd, 6H). MS(ESI)m/z : 411.3 [M+H]+; 433.4 [M+Na]+였다.
2) Fmoc-Val-Ala-PAB의 제조:
Figure pct00269
Fmoc-Val-Ala (2g, 4.87mM) 및 4-아미노벤질알코올 (1.2g, 9.75mM)을 디클로로 메탄/메탄올 혼합 용매 (100mL, 디클로로메탄/메탄올의 부피비는 2 : 1)에 용해 시키고, 이어서 2-에톡시-1-에톡시카르보닐-1,2-디히드로퀴놀린 (EEDQ, 2.41g, 9.75mM)을 첨가하고, 생성된 혼합 용액을 실온의 어두운 곳에 두고 12시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 증류로 제거하여 백색 고체 잔류물을 얻었고, 이를 디 에틸에테르 (300 mL)에 첨가하고, 생성된 현탁액을 초음파로 5분 동안 처리한 다음 30분 동안 방치하고, 여과한 후 필터케이크를 디에틸에테르로 세척하여 백색 고체를 얻었다(1.92g, 77 % 수율). 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ9.96(s, 1H), 8.22(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.75(t, 2H), 7.52(q, 3H), 7.41(t, 2H), 7.34(t, 2H), 7.24(t, 2H), 5.13(t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.42(d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.40(br, 1H), 4.30(t, 1H), 4.22(q, 2H), 3.91(t, J = 8.4 Hz, 1H), 2.00(m, 1H), 1.30(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.88(dd, 6H). MS(ESI)m/z : 516.4 [M+H]+; 538.3 [M+Na]+였다.
3) Val-Ala-PAB의 제조:
Figure pct00270
Fmoc-Val-Ala-PAB (4.0g, 7.76mM)를 DMF (40mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후 피페리딘 (2mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 용매를 감압 증류로 제거하여 조생성물을 얻었고, 실리카겔컬럼 크로마토그래피 (DCM/MeOH (v/v) = 20 : 1)로 정제하여 백색 고체 (2.1g, 90 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.0(s, 1H), 8.18(s, 1H), 7.53(d, 2H), 7.24(d, 2H), 5.13(s, 1H), 4.48(t, 1H), 4.43(s, 1H), 3.00(d, 1H), 2.80(d, 1H), 1.92(m, 1H), 1.29(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 294.2 [M+H]+; 316.2 [M+Na]+였다.
4) Mm-C3-Val-Ala-PAB의 제조:
Figure pct00271
Mm-C3-OSu (0.6g, 2.0mM)의 조생성물을 무수DMF (20mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, Val-Ala-PAB (0.59g, 2.0mM)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, DMF를 감압 농축으로 제거하여 조생성물을 얻었고, 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 백색 분말상의 고체 (0.59g, 62 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ 9.85(s, 1H), 8.24(t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.19(d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.96(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.54(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.23(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J=12.6 Hz, 1H), 5.11(t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.42(d, J = 5.6 Hz, 2H), 4.39(t, J = 7.0 Hz, 1H), 4.19(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.64(s, 3H), 3.27(q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.38(t, J = 7.0 Hz, 2H), 1.97(m, J = 6.8Hz, 1H), 1.30(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.85(dd, J 1 = 15.7 Hz, J 2 = 6.8 Hz, 6H).MS(ESI)m/z: 477.24 [M+H]+; 499.22 [M+Na]+; 975.45 [2M+Na]+였다.
5) Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP의 제조:
Figure pct00272
Mm-C3-Val-Ala-PAB는 용해가 완료된 후 무수DMF (15 mL)에 용해되었고, 비스 (p-니트로페닐) 카보네이트 (360mg, 1.2mM) 및 DIPEA (104mg, 0.9mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 12시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 용매를 감압 하에서 농축하여 제거하고, 잔류물을 디에틸에테르에 분산시키고 슬러리화 한 다음 여과하여 조생성물을 얻었고, 컬럼 크로마토그래피로 더 정제하여 백색 고체 분말 (55% 수율)의 목적 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ10.01(s, 1H), 8.31(d, J = 9.2 Hz, 2H), 8.24(m, 1H), 7.97(d, J=8.4 Hz, 1H), 7.64(d, J=8.7Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.3 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.39(m, 1H), 4.19(t, J = 15.1Hz, 1H), 3.64(s, 3H), 3.28(q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.39(t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.96(m, 1H), 1.31(d, J = 7.0 Hz, 3H), 0.86(dd, J = 6.7 Hz, 6H).MS (ESI) m/z : 642.4 [M+H]+; 664.5 [M+Na]+; 680.4 [M+K]+였다.
실시예 5: 링커 Mm-C 6 -Val-Ala-PAB-PNP의 합성:
1) Mm-C6-Val-Ala-PAB의 제조:
Figure pct00273
Mm-C6-OSu를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB는 Mm-C3-Val-Ala-PAB와 유사한 방법으로 합성하여 담황색 고체 분말 (60% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 9.99(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.54(d, 2H), 7.46(d, 1H), 7.41(m, 2H), 7.32(m, 2H), 7.23(d, 2H), 5.98(t, J = 5.5 Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12(t, 1H), 4.41(q, 3H), 4.30(q, 1H), 4.23(q, 2H), 3.92(q, 1H), 3.00(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.57(m, 1H), 1.41(m, 2H), 0.86(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 602.7 [M+H]+; 624.5 [M+Na]+였다.
2) Mm-C6-Val-Ala-PAB-PNP의 준비:
Figure pct00274
중간체 Mm-C6-Val-Ala-PAB를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB-PNP는 Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP와 유사한 제조 방법으로 합성하여 담황색 고체 분말 (86% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 10.03(s, 1H), 8.31(d, J = 9.3Hz, 2H), 8.20(m, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.64(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.28(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.38(t, J = 7.0Hz, 1H), 4.18(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.62(s, 3H), 3.05(q, J = 6.3 Hz, 2H), 2.15(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.49(m, 2H), 1.40(m, 2H), 1.31(d, J = 7.0 Hz, 3H), 1.25(m, 2H), 0.86(m, 6H). MS(ESI)m/z: 684.30 [M+H]+; 706.28[M+Na]+였다.
실시예 6: 링커 Mm-C 6 -Val-Cit-PAB-PNP의 합성:
1) Fmoc-Val-Cit의 준비:
Figure pct00275
Fmoc-Val-Ala와 유사한 제조 방법을 이용하여 Fmoc-Val-Ci를 합성하여 연황색 고체 (70% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 12.61(s, 1H), 8.21(d, J = 6.7Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.76(t, 2H), 7.43(q, 3H), 7.33(t, 2H), 5.98(t, J = 5.2 Hz, 1H), 5.43(s, 2H), 4.25(m, 3H), 4.16(q, 1H), 3.94(t, 1H), 2.96(q, 2H), 1.98(m, 1H), 1.72(m, 1H), 1.58(m, 1H), 1.42(m, 2H), 0.89(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 497.6 [M+H]+; 519.6[M+Na]+였다.
2) Fmoc-Val-Cit-PAB의 제조:
Figure pct00276
Fmoc-Val-Ci를 원료로 사용하고, Fmoc-Val-Ala-PAB와 유사한 제조방법으로 Fmoc-Val-Cit-PAB를 합성하여 담황색 고체 분말 (60% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.99(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7Hz, 2H), 7.74(t, 2H), 7.54(d, 2H), 7.46(d, 1H), 7.41(m, 2H), 7.32(m, 2H), 7.23(d, 2H), 5.98(t, J = 5.5Hz, 1H), 5.42(s, 2H), 5.12(t, 1H), 4.41(q, 3H), 4.30(q, 1H), 4.23(q, 2H), 3.92(q, 1H), 3.00(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.57(m, 1H), 1.41(m, 2H), 0.86(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 602.7 [M+H]+; 624.5 [M+Na]+였다.
3) Val-Cit-PAB의 제조:
Figure pct00277
Fmoc-Val-Cit-PAB를 원료로 사용하였고, Val-Ala-PAB와 유사한 제조 방법으로 Val-Cit-PAB를 제조하여 담황색 고체분말 (84% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6)δ10.07(s, 1H), 8.17(br, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 6.01(br, 1H), 5.44(d, 2H), 5.13(br, 1H), 4.47(s, 1H), 4.43(s, 2H), 3.05(d, 1H), 2.95(m, 2H), 1.94(m, 1H), 1.64(m, 2H), 1.38(m, 2H), 0.86(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 380.3 [M+H]+; 402.3 [M+Na]+였다.
4) Mm-C6-Val-Cit-PAB의 제조:
Figure pct00278
Mm-C6-OSu (1.0g, 2.94mM)를 무수DMF (30mL)에 녹인 후, 용해가 완료되면 Val-Cit-PAB (1.11g, 2.94mM)를 첨가하여 실온에서 밤새 교반 반응시켰다. 반응이 완료된 후, DMF를 감압 농축으로 제거하여 노란색 점성 물질의 조생성물을 얻고, 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 담황색 분말상의 고체 (1.19 g, 41% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.92(s, 1H), 8.20(t, 1H), 8.09(d, 1H), 7.85(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.22(d, 2H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.99(br, 1H), 5.43(s, 2H), 5.11(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.37(m, 1H), 4.19(t, 1H), 3.63(s, 3H), 3.05(q, 2H), 2.95(m, 2H), 2.17(m, 2H), 1.95(m, 1H), 1.74-1.55(m, 2H), 1.51-1.48(m, 2H), 1.45-1.37(m, 4H), 1.24(m, 2H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 605.7 [M+H]+; 627.7 [M+Na]+였다.
5) Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP의 준비:
중간체 Mm-C6-Val-Cit-PAB를 원료로 사용하고, Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 Mm-C6-Val-Ala-PAB-PNP와 유사한 제조방법으로 합성하여 담황색 고체 분말 (85% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.08(s, 1H), 8.31(d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.20(t, J = 5.2 Hz, 1H), 8.13(d, J = 7.3 Hz, 2H), 7.83(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.24 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.28(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.99(s, 1H), 5.43(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.38(t, J = 6.8 Hz, 1H), 4.19(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.63(s, 3H), 3.08-2.92(m, 4H), 2.17(m, 2H), 1.71(m, 1H), 1.60(m, 2H), 1.52-1.37(m, 6H), 1.25(q, 2H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 770.7 [M+H]+; 792.6 [M+Na]+였다.
실시예 4 내지 6에서 제조된 말레산메틸을 포함하는 링커의 구조를 다음 표 2에 나타내었다.
링커 코드 링커 구조
Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP
Figure pct00279
Mm-C6-Val-Ala-PAB-PNP
Figure pct00280
Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP
Figure pct00281
실시예 7-1: 링커-세포 독소접합체 (1)의 합성:
1) Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조:
Figure pct00282
링커 Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, 무수DMF (3 mL)에 용해하고, 용해가 완료된 다음 HOBt (8.28mg, 0.06mM), MMAE (40mg, 0.06mM) 및 DIPEA (10.68μL)를 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후 용매를 감압 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 백색 고체 분말 (69% 수율)의 목적 생성물을 얻었다. MS(ESI)m/z: 1220.72 [M+H]+; 610.87 [M+2H]2+였다.
2) Mm-C6-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조:
Figure pct00283
링커 Mm-C6-Val-Ala-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB-MMAE는 Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE와 유사한 제조방법으로 합성하여 백색 고체 분말 (75% 수율)을 얻었다. MS(ESI)m/z: 1284.75 [M+H]+; 642.88 [M+2H]2+였다.
3) Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE의 제조:
Figure pct00284
링커 Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE는 Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE와 유사한 제조방법으로 합성하여 백색 고체 분말 (68% 수율)을 얻었다. MS(ESI)m/z: 1349.6 [M+H]+; 1371.3 [M+Na]+; 675.6 [M+2H]2+였다.
4) Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
4.1) Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB의 제조
Figure pct00285
Mm-C6-PEG4 (200mg, 0.34mM)를 무수DMF (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, Val-Ala-PAB (110mg, 0.37mM)를 첨가하고, 그 다음 HoBt (69mg, 0.51mM) 및 DIPEA (65mg, 0.51mM)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, DMF를 감압 농축으로 제거하여 옅은 노란색 고체 물질의 조생성물을 얻었으며, 컬럼 크로마토그래피로 더 정제하여 투명한 무색 유리 고체 (137 mg, 53% 수율)를 얻었다. MS(ESI)m/z: 766.4229[M+H]+; 788.4050 [M+Na]+. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 8.19(m, 2H), 7.92(d, 1H), 7.85(t, 1H), 7.55(d, 2H), 7.24(d, 2H), 6.26(dd, 2H), 5.13(t, 1H), 4.43(d, 2H), 4.38(m, 1H), 4.27(m, 1H), 3.62(s, 3H), 3.59(m, 2H), 3.49(m, 12H), 3.39(m, 2H), 3.19(m, 2H), 3.07(m, 2H), 2.43(m, 1H), 2.07(m, 2H), 1.45(m, 3H), 1.31(d, 3H), 1.23(m, 2H), 0.88(d, 3H), 0.84(d, 3H)였다.
4.2) Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00286
중간체 Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB를 원료로 사용하였고, Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP와 유사한 제조 방법으로 합성하여 황색 점성 고체인 Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-PNP을 얻었으며, 이를 DCM으로 플래시컬럼 크로마토그래피로 정제하여 최종적으로 옅은 노란색 점성 고체 (70% 수율)를 얻었다. Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-PNP (128mg, 0.14mM)를 즉시 무수DMF (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후 MMAE (98mg, 0.14mM)를 첨가하고, 이어서 HoBt (28mg, 0.21mM) 및 DIPEA (35mg, 0.27mM)를 첨가하여 실온에서 36시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후 DMF를 감압 농축으로 제거하여 옅은 노란색 점성 물질의 조생성물을 얻었으며, 컬럼 크로마토그래피로 더 정제하여 투명한 무색 유리 고체 (100 mg, 63% 수율)를 얻었다. MS(ESI)m/z: 755.4581[M+2H]2+였다.
5) Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
5.1) Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB의 제조
Figure pct00287
Mm-C6-PEG8 (220mg, 0.33mM)을 무수DMF (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후 Val-Ala-PAB (96mg, 0.33mM)를 첨가하고, 그 다음 HoBt (95mg, 0.50mM) 및 DIPEA (63mg, 0.50mM)를 첨가하여, 실온에서 24시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후 DMF를 감압 농축으로 제거하여 담황색 고체의 조생성물을 얻었고, 이를 컬럼 크로마토그래피로 더 정제하여 투명한 무색 유리 고체 (260 mg, 78% 수율)를 얻었다. MS(ESI)m/z: 942.5281[M+H]+; 964.5099 [M+Na]+였다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.33(m, 2H), 8.06(d, 1H), 7.99(t, 1H), 7.69(d, 2H), 7.38(d, 2H), 6.40(dd, 2H), 4.56(s, 2H), 4.36(m, 1H), 3.76(s, 3H), 3.73(m, 2H), 3.62(m, 30H), 3.53(m, 2H), 3.19(m, 2H), 2.61(m, 2H), 1.57(m, 2H), 1.44(m, 3H), 1.23(m, 4H), 1.02(d, 3H), 0.97(d, 3H)였다.
5.2) Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00288
Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE를 Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE와 유사한 제조 방법으로 합성하여 무색의 점성 고체 (43% 수율)를 얻었다. MS(ESI)m/z: 843.5101[M+2H]2+였다.
6) Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE의 합성
6.1) Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB의 제조
Figure pct00289
Mm-C6-PEG8'(252mg, 0.33mM)을 무수DMF (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, Val-Ala-PAB (96mg, 0.33mM)를 첨가하고, 그 다음 HoBt (95mg, 0.50mM) 및 DIPEA (63mg, 0.50mM)를 첨가하여, 실온에서 24시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, DMF를 감압 농축하여 옅은 노란색 고체 물질인 조생성물을 얻었고, 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 투명한 무색 유리 고체 (161 mg, 47% 수율)를 얻었다.
6.2) Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00290
Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE는 Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE와 유사한 제조방법을 사용하여 합성되었으며, 담황색 점성 고체 (31% 수율)를 얻었다. MS(ESI) m/z: 893.5463[M+2H]2+였다.
실시예 7에서 제조된 MMAE의 접합체 및 메틸말레에이트를 포함하는 링커의 구조를 다음 표 3에 나타내었다:
링커-MMAE 접합체
Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00291
Mm-C6-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00292
Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE:
Figure pct00293
Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00294
Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00295
Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00296
실시예 8: 링커-(MMAE 치환체) 접합체의 합성:
8.1 MMAE 대체물 (Val'-Val-An)의 합성
합성 경로는 다음과 같다:
Figure pct00297
1) Boc-Val-An의 준비:
Figure pct00298
N-Boc-Valine (Boc-Val, 2.17g, 10mM)을 무수THF (30mL)에 용해시키고, 그런 다음 아닐린 (0.93g, 10mM) 및 DCC (2.39g, 11mM)를 첨가하여, 실온에서 밤새 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 불용성 물질 (DCU)은 여과에 의해 제거되었고, 얻어진 여액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 백색 고체 분말 (2.2 g, 75% 수율)의 목적 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.98(s, 1H), 7.60(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.04(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.90(d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.91(t, J = 7.0 Hz, 1H), 1.96(m, 1H), 1.39(s, 9H), 0.88(d, J = 6.7 Hz, 6H). MS(ESI)m/z: 293.1 [M+H]+; 315.2 [M+Na]+였다.
2) Val-An의 제조:
Figure pct00299
단계 1)에서 얻은 생성물 Boc-Val-An (5.85g, 20mM)을 DCM (50mL)에 용해시키고, 이어서 TFA (12.5 mL)를 생성된 반응 용액에 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하면서 반응을 수행하였다. 반응이 완료된 후, 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 담황색 유성 액체 (2.8g, 88% 수율)의 목적물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.84(br, 1H), 7.63(dd, J = 8.7 Hz, 2H), 7.30(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.03(td, J = 7.4Hz, 1H), 3.10(d, J = 5.6 Hz, 1H), 1.93(m, 1H), 0.88(d, J = 6.7 Hz, 6H). MS(ESI)m/z: 193.1 [M+H]+; 215.1 [M+Na]+였다.
3) Boc-Val'-Val-An의 제조:
Figure pct00300
N-메틸-N-Boc-발린 (Val', 0.58g, 2.5mM)을 DCM (10mL)에 용해시키고, 이어서 EDCI (0.58g, 3mM), HOBt (0.41g, 3mM) 및 DIPEA (0.51mL, 3.0mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하여 반응시키고, 이어서 Val-An (0.48g, 2.5mM)을 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하면서 반응을 계속 하였다. 반응이 완료된 후, 용매를 농축함으로써 제거하여 조생성물을 얻었으며, 이를 더 건조하여 연분홍색 고체 분말 (0.43g, 42% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.11(d, 1H), 7.95(d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.58(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.31(t, J = 8.0 Hz, 2H), 7.05(t, J = 7.4 Hz, 3H), 4.23(t, J = 9.4 Hz, 2H), 2.77(s, 1H), 2.04(m, 2H), 1.43(s, 9H), 0.87-0.78(m, 12H). MS(ESI)m/z: 406.2 [M+H]+; 428.3 [M+Na]+였다.
4) Val'-Val-An의 제조:
Figure pct00301
단계 3)에서 얻은 Boc-Val'-Val-An (0.42g, 1.04mM)을 DCM (5mL)에 용해시키고, 이어서 TFA (1.25 mL)를 반응용액에 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하면서 반응을 수행하였다. 반응이 완료된 후, 농축은 감압 하에서 수행되었으며, 잔류물을 에틸아세테이트로 재용해시키고 포화중탄산나트륨 용액으로 2회 세척하고, 그 다음 농축하여 생성된 생성물을 에틸아세테이트로부터 재결정하여 백색 분말 고체 (0.31g, 99% 수율)의 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.16(s, 1H), 8.03(d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.59(d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.30(t, J = 7.1 Hz, 2H), 7.04(t, J = 7.4 Hz, 1H), 4.39(t, J = 8.0 Hz, 1H), 2.69(d, J = 6.2 Hz, 1H), 2.20(s, 3H), 2.03(m, 1H), 1.76(m, 1H), 0.89(m, 12H). MS(ESI)m/z: 306.22 [M+H]+; 328.20 [M+Na]+였다.
8.2 링커-(MMAE 치환) 접합체의 합성
Figure pct00302
링커 Mm-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, 무수 DMF (10 mL)에 용해되고, 용해가 완료된 후 HOBt (44.6mg, 0.33mM), MMAE 대체물 (Val'-Val-An, 100mg, 0.33mM) 및 DIPEA (85.3mg, 0.66mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 용매를 감압 하에서 농축함으로써 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 추가 정제하여 백색 고체 분말 (86% 수율)의 목적 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.07-9.97(m, 2H), 8.19(t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.12(d, J = 7.3Hz, 1H), 7.94(d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.83(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.60-7.57(m, 4H), 7.34-7.28(m, 4H), 7.05(t, J = 7.4 Hz, 1H), 6.27(d, J = 12.6 Hz, 2H), 6.23(d, J = 12.6Hz, 2H), 5.98(t, J = 5.6Hz, 1H), 5.43(s, 1H), 5.11-5.01(m, 2H), 4.39(m, 2H), 4.18(q, J = 8.2Hz, 2H), 3.63(s, 3H), 3.08-2.95(m, 4H), 2.85(s, 3H), 2.17(m, 2H), 2.09(s, 1H), 1.97(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.61(m, 1H), 1.53-1.31(m, 6H), 1.23(m, 2H), 0.87-0.77(m, 18H). MS(ESI)m/z: 936.8 [M+H]+; 959.1 [M+Na]+였다.
실시예 8에서 제조된 말레산메틸과 MMAE 치환체를 포함하는 링커의 접합체 구조를 다음 표 4에 나타내었다.
Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE 대체물:
Figure pct00303
출원발명에 의해 제공된 링커가 세포독소와 결합될 수 있음이 실시예 7 및 8에 의해 확인되었다.
실시예 9: 링커-(설프히드릴-함유 소분자) 접합체의 합성
9.1 다음 경로에 따라 W'-함유 링커-(설프히드릴-함유 소분자) 접합체의 합성:
Figure pct00304
여기서, R은:
Figure pct00305
R-SH는:
Figure pct00306
1) Maa-C6-An의 제조:
Figure pct00307
Maa-C6-OH (3.0g, 13.1mM)를 THF (50mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, 생성된 혼합물을 -20 °C의 저온 반응탱크에 넣고 냉각을 위해 10분 동안 교반 하였다. NMM (1.59g, 15.7mM) 및 이소부틸클로로포르메이트 (2.14g, 15.7mM)를 적가하고, -20 °C의 저온에서 각각 20분간 반응시킨 후 아닐린 (An, 1.83g, 19.6mM)을 적가하고, 계속 교반하여 2시간 동안 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 1 mol/L HCl을 반응용액에 첨가하고 에틸아세테이트로 추출하였다. 유기상을 합하여 포화 소금물로 세 번 씻고, 무수 황산나트륨으로 건조하고 농축하여 잔류물을 실리카겔컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체의 순수한 생성물 (3.2g, 81% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.98(br, 1H), 11.35(s, 1H), 8.68(t, 1H), 7.61(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32(t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07(t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.26(dd, 2H), 3.12(q, 2H), 1.54-1.42(m, 4H), 1.30(m, 2H).
2) Mm-C6-An의 제조:
Figure pct00308
Maa-C6-An (0.33g, 1.1mM)을 DMF에 용해시키고 탄산칼륨 (0.23g, 1.63mM) 및 요오드화메틸 (0.23g, 1.63mM)을 첨가하고, 실온에서 4시간 동안 교반하면서 반응시켰다. 반응이 완료된 후, 불용성 염을 여과하여 제거하였고, 생성된 여액을 에틸아세테이트에 분산시키고, 실리카겔과 혼합하여 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (0.32g, 93% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 11.33(s, 1H), 8.67(t, 1H), 7.61(d, J = 7.6 Hz, 2H), 7.32(t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.07(t, J = 7.4 Hz, 2H), 6.26(dd, 2H), 3.57(s, 3H), 3.12(q, 2H), 2.29(t, 2H), 1.57-1.41(m, 4H), 1.30(m, 2H).
3) S1-W'-C6-An의 준비:
Figure pct00309
Mm-C6-An (0.11g, 0.35mM)을 메탄올에 녹인 후 S1 (0.1g, 0.38mM)과 촉매량의 트리에틸아민 (TEA)을 첨가하여 반응을 수행하였다. 30분 후 반응이 완료되면, 용매를 감압 하에서 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 약 1:1의 함량을 갖는 백색 고체 분말 (0.2g, 약100% 수율)로서 한 쌍의 거울상 이성질체를 수득하였다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.53(t, 1H), 8.23(d, 2H), 7.97(t, 1H), 7.55(d, 2H), 7.32-7.21(m, 7H), 7.02(t, 1H), 4.49(q, 1H), 4.27(m, 2H), 3.75(t, 2H), 3.57(s, 3H), 3.03(q, 2H), 2.98-2.88(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.66(dd, 1H), 2.24(t, 2H), 1.87(s, 3H), 1.48(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.23(m, 2H).
4) S2-W'-C6-An의 제조:
Figure pct00310
Mm-C6-An (0.15g, 0.47mM)을 메탄올에 녹인 후, S2 (52μL, 0.7mM)를 첨가하여 반응을 수행하였다. 30분 후 반응이 완료되면, 감압 농축하여 용매를 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체 분말 (0.2g, 80% 수율)의 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.00(s, 1H), 8.09(d, 2H), 7.28(t, 2H), 7.01(t, 1H), 4.83(br, 1H), 3.70(t, 1H), 3.57(s, 3H), 3.51(t, 2H), 3.02(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.67(m, 3H), 2.25(t, 2H), 1.49(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.25(m, 2H)였다.
5) S3-W'-C6-An의 제조:
Figure pct00311
Mm-C6-An (0.15g, 0.47mM)을 메탄올에 용해시키고, 이어서 S3 (164μL, 1.41mM)을 첨가하여 반응을 수행하였다. 30분 후 반응이 완료되면, 용매를 감압 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체 분말 (0.17g, 82% 수율)의 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 10.02(s, 1H), 8.09(t, 2H), 7.57(d, 2H), 7.32-7.22(m, 7H), 7.02(t, 1H), 3.86(m, 2H), 3.76(t, 1H), 3.56(s, 3H), 3.05(m, 2H), 2.91(m, 1H), 2.67(m, 1H), 2.24(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.25(m, 2H)였다.
6) S4-W'-C6-An의 제조:
Figure pct00312
Mm-C6-An (0.15g, 0.47mM)을 메탄올/디클로로메탄 혼합 용매에 용해시켰고 (둘의 부피비는 1 : 2), 이어서 S4 (0.23g, 1.41mM)와 촉매량의 트리에틸아민을 첨가하여 반응을 수행하였다. 4 시간 후 반응이 완료되면, 용매를 감압 하에서 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 고체 분말 (0.17g, 75% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.77(br, 1H), 10.00(s, 1H), 8.23(s, 1H), 7.55(d, 2H), 7.22(m, 2H), 7.02(t, 1H), 4.49(q, 1H), 4.27(m, 2H), 3.75(t, 2H), 3.57(s, 3H), 3.03(q, 2H), 2.98-2.88(m, 2H), 2.80(m, 1H), 2.66(dd, 1H), 2.24(t, 2H), 1.87(s, 3H), 1.48(m, 2H), 1.38(m, 2H), 1.23(m, 2H)였다.
메틸말레에이트를 포함하는 링커와 실시예 9.1에서 제조된 소분자의 접합체의 구조를 다음 표 5에 나타내었다:
코드 링커-(소분자) 접합체 구조
S1-W'-C6-An(접합체-1)
Figure pct00313
S2-W'-C6-An(접합체-2)
Figure pct00314
S3-W'-C6-An(접합체-3)
Figure pct00315
S4-W'-C6-An(접합체-4)
Figure pct00316
출원발명에서 제공하는 링커의 메틸말레에이트 그룹 (Mm)은 다양한 유형의 설프히드릴 그룹과 효과적으로 결합될 수 있음을 실시예 9.1에 의해 확인하였다.
9.2 다음 경로에 따라 숙신이미드 (Su) 함유 링커-(설프히드릴 함유 소분자) 접합체의 합성:
Figure pct00317
여기서, R은:
Figure pct00318
R-SH는:
Figure pct00319
1) Ma-C6-OH의 제조:
Figure pct00320
말레산무수물 (4.86g, 49.55mM)을 아세트산 (150mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, 6-아미노헥산산 (5.0g, 38.11mM)을 첨가하고, 그 후 생성된 반응 용액을 120 ℃로 가열하고 6시간 동안 환류시켰다. 반응이 완료된 후, 반응액을 상온으로 식힌 후 증류수에 붓고 에틸아세테이트로 여러 번 추출한 후 유기상을 혼합하였다. 에틸아세테이트 유기상을 포화 NaCl 용액으로 세척하고 무수 Na2SO4상에서 밤새 건조시켰다. 용매를 감압 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (5.92g, 수율 74%)를 얻었다.
2) Ma-C6-An의 제조:
Figure pct00321
Ma-C6-OH (1.0g, 4.73mM)를 테트라하이드로푸란 (15mL)에 용해시키고, 용해가 완료된 후, 생성된 혼합물을 -20 °C의 저온 반응탱크에 넣어 냉각시키고, 10분 동안 저어주고, 이어서 NMM (0.63 mL, 5.68 mM) 및 이소부틸클로로포르 메이트 (0.74 mL, 5.68 mM)를 순차적으로 적가하고, 드롭와이즈 추가가 완료된 후, 생성된 반응용액을 30분 동안 -20 °C에서 연속적으로 교반하였다. 그런 다음 아닐린 (0.65 mL, 7.1 mM)을 적가하고, 반응을 -20 °C에서 2시간 동안 계속했다. 반응이 완료된 후, 포화 중탄산나트륨 수용액 (30 mL)을 반응용액에 첨가하고, 이어서 반응용액을 에틸아세테이트로 추출하고, 유기상을 혼합하였다. 생성된 유기상을 포화 NaCl 용액으로 세척하고 무수 Na2SO4로 밤새 건조시켰다. 용매를 감압 농축하여 제거하고, 잔류물을 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (0.8g, 59% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.85(s, 1H), 7.57(d, 2H), 7.28(t, 3H), 7.03-6.99(m, 3H), 3.40(t, 2H), 2.28(t, 2H), 1.61-1.47(m, 4H), 1.28-1.20(m, 2H)였다.
3) S1-Su-C6-An의 제조:
Figure pct00322
Ma-C6-An (150mg, 0.52mM)을 메탄올/디클로로메탄 혼합 용매 (15mL, 부피비 1 : 2)에 용해시키고, 용해 완료 후 S1 (140mg, 0.55mM)을 첨가하고, 상온에서 10분간 반응시킨 후, 용매를 감압 증류로 제거하여 조생성물을 얻었다. 조생성물을 분산시키고 정제하기 위해 디에틸에테르 (10 mL)에 슬러리화하여 백색 고체 분말 (0.3g, 82% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.87(s, 1H), 8.63(m, 1H), 8.28(t, 1H), 7.58(d, 2H), 7.33-7.21(m, 7H), 7.01(t, 1H), 4.52(q, 1H), 4.29(d, 2H), 4.00(m, 1H), 3.37(t, 2H), 3.19-3.11(m, 2H), 3.00(d, 1H), 2.82(t, 1H), 2.28(m, 2H), 1.87(t, 3H), 1.61-1.46(m, 4H), 1.26(m, 2H)였다.
4) S2-Su-C6-An의 제조:
Figure pct00323
Ma-C6-An (200mg, 0.69mM)을 메탄올/디클로로메탄 혼합 용매 (15mL, 부피비 1 : 2)에 용해시키고, 용해 완료 후 S2 (77μL, 1.05mM)를 첨가하고, 상온에서 10분간 반응시킨 후, 감압 증류로 용매를 제거하여 조생성물을 얻고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (0.24g, 99% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 7.57(d, 2H), 7.28(t, 2H), 7.01(t, 1H), 4.90(s, 1H), 3.58(t, 2H), 3.37(t, 2H), 3.16(m, 1H), 2.87(m, 1H), 2.71(m, 1H), 2.52(t, 1H), 2.48(t, 1H), 2.28(t, 2H), 1.58(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.26(m, 2H)였다.
5) S3-Su-C6-An의 제조:
Figure pct00324
Ma-C6-An (200mg, 0.69mM)을 메탄올/디클로로메탄 혼합 용매 (15mL, 부피비 1 : 2)에 용해시키고, 용해 완료 후 S3 (123μL, 1.05mM)를 첨가하고, 상온에서 10분간 반응시킨 후, 감압 증류로 용매를 제거하여 조생성물을 얻고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (0.27g, 95 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 7.58(d, 2H), 7.37-7.24(m, 7H), 7.01(t, 1H), 4.05-4.00(m, 2H), 3.91(d, 1H), 3.75(dd, 1H), 3.35(t, 2H), 3.09(m, 1H), 2.28(t, 2H), 1.58(m, 2H), 1.49(m, 2H), 1.26(m, 2H)였다.
6) S4-Su-C6-An의 제조:
Figure pct00325
Ma-C6-An (100mg, 0.35mM)을 메탄올/디클로로메탄 혼합 용매 (15mL, 부피비 1 : 2)에 용해시키고, 용해 완료 후 S4 (57mg, 0.35mM)를 첨가하고, 상온에서 10분간 반응시킨 후, 감압 증류로 용매를 제거하여 조생성물을 얻고, 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 백색 분말상의 고체 (120 mg, 76 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.57(br, 1H), 9.86(s, 1H), 8.32(t, 1H), 7.58(d, 2H), 7.27(d, 2H), 7.01(t, 1H), 4.43(m, 1H), 4.00(m, 1H), 3.29(t, 2H), 3.15(m, 1H), 3.04(m, 0.5H), 2.85(m, 0.5H), 2.28(d, 4H), 1.61-1.46(m, 4H), 1.26(m, 2H)였다.
실시예 9에서 제조된 석신이미드 함유 링커 및 소분자의 접합체 구조를 다음 표 6에 나타내었다.
코드 링커-소분자 접합체 구조
S1-Su-C6-An(접합체-1')
Figure pct00326
S2-Su-C6-An(접합체-2')
Figure pct00327
S3-Su-C6-An(접합체-3')
Figure pct00328
S4-Su-C6-An(접합체-4')
Figure pct00329
실시예 10: 말레산아미드 구조 (Maa) 및 세포독소 MMAE를 포함하는 링커의 접합체 제조
10.1 Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE의 준비
1) Maa-C6-Val-Ala-PAB의 준비
Figure pct00330
Mm-C6-OSu를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB와 유사한 방법으로 Maa-C6-Val-Ala-PAB를 합성하여 담황색 고체 분말 (78% 수율)을 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 15.09(br, 1H), 12.03 (br, 1H), 9.86(s, 1H), 9.43(s, 1H), 8.12(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 2H), 7.53(t, 2H), 7.23(d, 2H), 6.31(d, 1H), 6.21(d, 1H), 5.12(t, 1H), 4.42(s, 2H), 4.37(q, 1H), 4.17(t, 1H), 3.14(q, 2H), 2.24-2.10(m, 2H), 1.97(m, 1H), 1.48(m, 4H), 1.31-1.24(m, 5H), 0.85(dd, 6H)였다.
2) Maa-C6-Val-Ala-PAB-PNP의 준비:
Figure pct00331
중간체 Maa-C6-Val-Ala-PAB를 원료로 사용하였고, Mm-C3-Val-Ala-PAB-PNP와 유사한 제조방법으로 Maa-C6-Val-Ala-PAB-PNP를 합성하여 옅은 노란색 고체 분말 (20% 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 15.22(br, 1H), 10.03(s, 1H), 9.18(br, 1H), 8.32(d, J = 9.3Hz, 2H), 8.22(d, 1H), 7.84(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.64(d, J = 8.4Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.37(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.24(d, J = 12.6 Hz, 1H), 5.24(s, 2H), 4.40(m, 1H), 4.18(t, J = 7.6 Hz, 1H), 3.16(q, 2H), 2.22-2.18(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.47(m, 4H), 1.28(m, 5H), 0.86(m, 6H)였다.
3) Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00332
링커 Maa-C6-Val-Ala-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB와 유사한 제조방법으로 Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE를 합성하여 옅은 백색 고체 분말 (57% 수율)를 얻었다. MS(ESI)m/z: 1249.2 [M+H]+; 1266.2 [M+NH4]+; 625.3 [M+2H]2+; 1247.1 [M-H]-였다.
10.2 Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE의 제조
1) Maa-C6-Val-Cit-PAB의 준비
Figure pct00333
Maa-C6-OSu를 원료로 사용하고, Mm-C6-Val-Cit-PAB와 유사한 방법으로 Maa-C6-Val-Cit-PAB를 합성하여 담황색 고체 분말 (84 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 11.60(br, 1H), 9.91(s, 1H), 9.62(br, 1H), 8.11(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.89(d, J = 6.7 Hz, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 6.21(m, 1H), 6.05(m, 1H), 5.45(d, 2H), 5.11(br, 1H), 4.42(s, 2H), 4.37(t, 1H), 4.19(t, 1H), 3.14(m, 2H), 3.05-2.91(m, 2H), 2.23-2.11(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.70(m, 1H), 1.59(m, 1H), 1.54-1.33(m, 6H), 1.26(m, 2H), 0.84(dd, 6H).
2) Maa-C6-Val-Cit-PAB-PNP의 준비
Figure pct00334
중간체 Maa-C6-Val-Cit-PAB를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-PAB-와 유사한 제조 방법으로 Maa-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 합성하여 담황색 고체 분말 (16% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 15.22(br, 1H), 10.10(s, 1H), 9.31(br, 1H), 8.31(d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.15(t, J = 5.2 Hz, 1H), 7.86(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.57(d, J = 9.24 Hz, 2H), 7.41(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.22(d, 1H), 6.36(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.23(d, J = 12.6 Hz, 1H), 6.03(s, 1H), 5.46(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.42(m, 1H), 4.19(m, 1H), 3.16(q, 2H), 3.05-2.92(m, 2H), 2.17(m, 2H), 1.97(m, 1H), 1.73-1.57(m, 2H), 1.52-1.44(m, 6H), 1.27(m, 2H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 756.7 [M+H]+; 778.4 [M+Na]+; 754.6 [M-H]-였다.
3) Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00335
링커 Maa-C6-Val-Cit-PAB-PNP를 원료로 사용하였고, Mm-C6-Val-Ala-와 유사한 제조 방법으로 Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE를 합성하여 백색 고체 분말 (57% 수율)을 얻었다. MS(ESI)m/z: 1334.3 [M+H]+; 689.5 [M+2Na]2+였다.
실시예 10에서 제조된 말레산아미드 (Maa) 및 MMAE를 포함하는 링커의 접합체 구조를 다음 표 7에 나타내었다.
링커-MMAE 접합체
Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00336
Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE:
Figure pct00337
실시예 11: 메틸푸마레이트구조 (Mf) 및 세포독소 MMAE를 포함하는 링커의 접합체 제조
11.1 Mf-C6-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
1) Mf-C6-OH의 제조
Figure pct00338
모노메틸푸마레이트 (2.0g, 15.37mM)를 디클로로메탄 (50mL)에 용해시키고, 4-메틸모르폴린 (2.54mL, 23.06mM)을 첨가하고 생성된 혼합용액을 -20 ℃로 냉각시켰다. 이소부틸클로로포르메이트 (2 mL)를 적가하고, -20 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 초음파 처리된 6-아미노헥산산 (2.02g, 15.37mM)의 DMF (60mL) 현탁액을 첨가하고, -20 °C에서 1시간 동안 교반하고, 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반한 후 증발시켜 용매를 제거하였다. 생성된 잔류물은 오렌지색 오일이었고, 물 (150mL)을 잔류 물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 농축 염산으로 pH 1로 조정하여 고체를 침전시키고, 고체를 흡입 여과로 여과하고, 건조시켜 연분홍색 고체 (3.33g, 89 % 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.02(s, 1H), 8.54(t, 1H), 7.00(d, 1H), 6.57(d, 1H), 3.72(s, 3H), 3.15(m, 2H), 2.19(t, 2H), 1.49(m, 2H), 1.43(m, 2H), 1.27(m, 2H). MS(ESI)m/z: 242.10 [M-H]-였다.
2) Mf-C6-VA-PAB의 제조
Figure pct00339
Mf-C6-OH (0.61g, 2.5mM)를 DMF (8mL)에 용해시키고, EDCI (0.71g, 3.7mM), HOBt (0.5g, 3.7mM) 및 DIPEA (0.61mL, 3.7mM)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 DMF (12 mL) 용액 중 Val-Cit-PABOH (0.87 g, 3.0 mM)를 첨가하고, 실온에서 10시간 동안 교반하고, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 생성된 잔류물을 조실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 컬럼에서 분리하여 백색 고체 생성물 (1.05g, 81% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.91(s, 1H), 8.56(t, 1H), 8.19(d, 1H), 7.86(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.13(br, 1H), 4.42(s, 2H), 4.38(m, 1H), 4.17(q, 1H), 3.72(s, 3H), 3.12(m, 2H), 2.16(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.43(m, 4H), 1.31(s, 2H), 1.30(s, 3H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 541.26 [M+H]+였다.
3) Mf-C6-VA-PAB-PNP의 준비
Figure pct00340
Mf-C6-VA-PAB (0.5g, 0.96mM)를 DMF (8mL)에 용해시키고, 비스 (4-니트로페닐) 카보네이트 (0.88g, 2.89mM) 및 DIPEA (0.34mL, 1.92mM)를 첨가하고, 실온에서 10시간 동안 교반하고, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 무수디에틸 에테르로 초음파 처리하고, 흡입 여과방법으로 여과하고, 건조시키고 분쇄하고, 에틸아세테이트를 20 mL/g의 비율로 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하고, 흡입 여과방법으로 여과하여 고체 (0.49 g, 75% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.04(s, 1H), 8.53(br, 1H), 8.31(d, 2H), 8.22(d, 1H), 7.85(d, 1H), 7.64(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.24(s, 2H), 4.39(t, 1H), 4.18(t, 1H), 3.71(s, 3H), 3.13(q, 2H), 2.16(m, 2H), 1.95(m, 1H), 1.49(br, 2H), 1.43(t, 2H), 1.31(d, 3H), 1.24(m, 2H), 0.85(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 684.29 [M+H]+; 706.27 [M+Na]+; 722.24 [M+K]+였다.
4) Mf-C6-VA-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00341
Mf-C6-Val-Ala-PAB-PNP (29.99 mg, 0.04387 mM)를 DMF (2 mL)에 용해시키고, HOBt (5.93mg, 0.04387mM), MMAE (30mg, 0.04178mM) 및 DIPEA (0.0056g, 0.04387mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 생성된 반응용액을 분별 깔때기로 옮기고, 15mL의 물을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20 mL의 에틸아세테이트로 4회 추출하였다. 유기상을 합하여, 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척한 다음 1시간 동안 방치하고, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 생성된 잔류물을 100mg의 조실리카겔과 혼합하고, 구배 용리로 실리카겔 컬럼으로 분리하여 백색 고체 (37mg, 71% 수율)의 생성물을 수득하였다. 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 9.21(br, 1H), 7.52(t, 4H), 7.31(m, 5H), 7.21(m, 3H), 6.84(dd, 1H), 6.74(m, 1H), 6.56(m, 0.5H), 5.06(m, 2H), 4.91(s, 1H), 4.73(m, 3H), 4.46(t, 1H), 4.23(m, 1H), 4.12(m, 1H), 4.02(m, 1H), 3.79(s, 4H), 3.46(m, 1H), 3.36(s, 5H), 3.25(d, 4H), 3.12(d, 1H), 2.99(s, 2H), 2.88(d, 3H), 2.73(d, 0.5H), 2.43(m, 2H), 2.28(s, 2H), 2.17(m, 1H), 2.02(m, 3H), 1.81(s, 2H), 1.63(m, 3H), 1.51(m, 2H), 1.38(d, 2H), 1.30(t, 3H), 1.21(d, 4H), 1.01(m, 8H), 0.79(m, 24H). MS(ESI)m/z: 1280.3 [M+NH4]+; 1285.0 [M+Na]+였다.
11.2 Mf-C3-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
1) Mf-C3-OH의 제조
Figure pct00342
모노메틸푸마레이트 (2.0g, 15.37mM)를 디클로로메탄 (50mL)에 용해시키고, 4-메틸모르폴린 (2.54mL, 23.06mM)을 첨가하고, 생성된 용액을 -20℃로 냉각시켰다. 이소부틸클로로포르메이트 (2mL)를 적가하고, -20 ℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 초음파 처리된 β알라닌 (1.37g, 15.37mM)의 DMF (60mL) 현탁액을 첨가하고, -20 °C에서 1시간 동안 교반한 다음 실온으로 가온하고 2 시간 동안 교반하고, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 무수디에틸에테르로 초음파 처리하고, 흡입 여과방법에 의해 여과하여 갈색 고체를 얻었고, 갈색 고체를 조실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 백색 분말 고체 (0.72g, 23% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 12.32(s, 1H), 8.68(t, 1H), 7.01(d, 1H), 6.60(d, 1H), 3.72(s, 3H), 3.36(t, 2H), 2.44(t, 2H). MS(ESI)m/z: 200.06 [M-H]-였다.
2) Mf-C3-Val-Ala-PAB의 제조
Figure pct00343
Mf-C3-OH (0.51g, 2.53mM)를 DMF (10mL)에 용해시키고, EDCI (0.73g, 3.79mM), HOBt (0.51g, 3.75mM) 및 DIPEA (0.66mL, 3.79mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 DMF 용액 (20 mL) 중의 Val-Ala-PABOH (0.89 g, 3.03 mM)를 첨가하고, 실온에서 12 시간 동안 교반하고, 용매를 제거하기 위해 증발시켰다. 생성된 잔류물을 조실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼으로 분리하여 담황색 고체 (0.7g, 58% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.86(s, 1H), 8.63(t, 1H), 8.21(d, 1H), 7.98(d, 1H), 7.54(d, 2H), 7.23(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.12(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.39(m, 1H), 4.19(t, 1H), 3.71(s, 3H), 2.41(m, 2H), 1.96(m, 1H), 1.30(d, 3H), 0.85(q, 6H). MS(ESI)m/z: 477.3 [M+H]+; 494.4 [M+NH4]+; 499.4 [M+Na]+였다.
3) Mf-C3-Val-Ala-PAB-PNP의 준비
Figure pct00344
Mf-C3-VA-PAB (0.3g, 0.63mM)를 DMF (6mL)에 용해시키고, 비스 (4-니트로페닐) 카보네이트 (0.57g, 1.89mM) 및 DIPEA (0.22mL, 1.26mM)를 첨가하고, 실온에서 10 시간 동안 교반하였다. 생성된 반응용액을 증류수 (60 mL)에 적가하고 흡입 여과방법으로 여과하여 회색 고체를 얻었다. 회색 고체를 건조시키고 무수디에틸에테르 (15 mL)로 초음파 처리하고, 흡입 여과방법에 의해 여과하고, 생성된 잔류물을 에틸아세테이트 (15 mL)와 혼합하고 실온에서 3시간 동안 교반하여 암적색 고체 (0.3 g, 74% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.02(s, 1H), 8.62(br, 1H), 8.32(d, 2H), 8.26(d, 1H), 8.00(d, 1H), 7.64(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.24(s, 2H), 4.38(m, 1H), 4.20(t, 1H), 3.71(s, 3H), 2.41(br, 2H), 1.96(m, 1H), 1.31(d, 3H), 0.86(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 642.3 [M+H]+; 659.6 [M+NH4]+; 664.4 [M+Na]+였다.
4) Mf-C3-Val-Ala-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00345
Mf-C3-VA-PAB-PNP (46.89 mg, 0.07312 mM)를 DMF (4 mL)에 용해시키고, HOBt (9.88 mg, 0.07312 mM), MMAE (50 mg, 0.07312 mM) 및 DIPEA (13 μL, 0.07312 mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 8 시간 동안 교반하였다. 생성된 반응용액을 분별 깔때기에 붓고, 40mL의 물을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20mL의 에틸아세테이트로 3회 추출하였다. 유기상을 합하고 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 생성된 포화 염화나트륨 용액을 에틸아세테이트로 1회 추출하였다. 유기상을 합하고, 1시간동안 방치시킨 후, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 생성된 잔류물을 180mg의 조실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 컬럼으로 분리하여 백색 고체의 생성물 (61 mg, 68% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, CDCl3): δ 7.63(m, 1H), 7.34(m, 6H), 7.16(d, 1H), 6.78(d, 1H), 5.30(s, 2H), 5.01(m, 0.5H), 4.92(m, 1H), 4.73(m, 1H), 4.64(m, 1H), 4.42(m, 0.5H), 4.21(m, 3H), 4.03(m, 0.5H), 3.88(m, 0.5H), 3.76(s, 4H), 3.54(m, 3H), 3.40(s, 5H), 3.36(m, 1H), 3.29(s, 3H), 3.01(s, 2H), 2.89(t, 4H), 2.64(m, 2H), 2.42(m, 2H), 2.19(m, 1H), 2.03(m, 5H), 1.84(br, 6H), 1.45(m, 4H), 0.98(m, 8H), 0.84(m, 24H). MS(ESI)m/z: 1221.0 [M+H]+; 1238.0 [M+NH4]+; 1243.1 [M+Na]+였다.
11.3 Mf-C6-Val-Cit-PAB-MMAE의 제조
1) Mf-C6-VC-PAB의 제조
Figure pct00346
Mf-C6-OH (0.53g, 2.20mM)를 DMF (10mL)에 용해시키고, EDCI (0.63g, 3.29mM), HOBt (0.44g, 3.29mM) 및 DIPEA (0.57mL, 3.29mM)를 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하고; DMF 용액 (20mL) 중의 Val-Cit-PABOH (1g, 2.64mM)를 첨가하고, 실온에서 10시간 동안 교반하고, 용매를 제거하기 위해 증발시키고, 생성된 잔류물을 조실리카겔과 혼합하고, 실리카겔 컬럼으로 분리하여 백색 고체 생성물 (0.52g, 39% 수율)을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 9.93(s, 1H), 8.54(t, 1H), 8.07(d, 1H), 7.83(d, 1H), 7.55(d, 2H), 7.22(d, 2H), 7.01(d, 1H), 6.56(d, 1H), 6.03(t, 1H), 5.42(s, 2H), 5.10(t, 1H), 4.42(d, 2H), 4.37(m, 1H), 4.19(m, 1H), 3.72(s, 3H), 3.15(m, 2H), 2.99(m, 2H), 2.16(m, 2H), 1.98(m, 1H), 1.66(m, 2H), 1.44(m, 6H), 1.25(m, 2H), 0.84(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 605.5 [M+H]+; 627.5 [M+Na]+였다.
2) Mf-C6-VC-PAB-PNP의 준비
Figure pct00347
Mf-C6-Vit-Cit-PAB (0.3g, 0.496mM)를 DMF (8mL)에 용해시키고, 비스 (4-니트로페닐) 카보네이트 (0.45g, 1.49mM) 및 DIPEA (0.17mL, 0.99mM)를 첨가하고,
12 시간 동안 실온에서 교반하였다. 생성된 반응용액을 70mL의 증류수에 적가하고, 흡입 여과방법에 의해 여과하고, 수득된 고체를 건조시키고, 무수디 에틸에테르로 처리하고, 에틸아세테이트와 20 mL/g의 비율로 혼합하고 실온에서 3시간 동안 교반하고, 흡입 여과방법에 의해 여과하여 담황색 고체 (0.27 g, 71% 수율)를 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.09(s, 1H), 8.53(br, 1H), 8.32(d, 2H), 8.15(d, 1H), 7.84(d, 1H), 7.65(d, 2H), 7.57(d, 2H), 7.41(d, 2H), 6.98(d, 1H), 6.56(d, 1H), 5.99(br, 1H), 5.45(s, 2H), 5.24(s, 2H), 4.38(br, 1H), 4.19(t, 1H), 3.71(s, 3H), 3.13(d, 2H), 3.03(m, 1H), 2.93(m, 1H), 2.16(m, 2H), 1.99(s, 1H), 1.93(m, 1H), 1.69(m, 1H), 1.60(m, 1H), 1.49(m, 1H), 1.43(t, 2H), 1.25(m, 4H), 0.84(dd, 6H). MS(ESI)m/z: 770.6 [M+H]+; 792.4 [M+Na]+였다.
3) Mf-C6-Vit-Cit-PAB-MMAE의 제조
Figure pct00348
Mf-C6-Val-Cit-PAB-PNP (68mg, 0.0877mM)를 DMF (6mL)에 용해시키고, HOBt (11.86mg, 0.0877mM), MMAE (60mg, 0.0836mM) 및 DIPEA (15μL, 0.0877mM)를 순서대로 첨가하고, 실온에서 8시간 동안 교반하였다. 생성된 반응 용액을 분별 깔때기에 붓고, 40mL의 물을 첨가하고 생성된 혼합물을 20 mL의 에틸아세테이트로 6회 추출하였다. 유기상을 합하고, 포화 염화나트륨 용액으로 2회 세척하고, 생성된 포화 염화나트륨 용액을 에틸아세테이트로 2회 추출하였다. 유기상을 결합하고, 1시간 동안 방치시킨 후, 용매를 제거하기 위해 증발시키고 생성된 잔류물을 200 mg의 조실리카겔과 혼합하고 실리카겔 컬럼으로 분리하여 백색 고체 (63 mg, 56% 수율)의 생성물을 얻었다. 1H-NMR(400 MHz, DMSO-d6): δ 10.01(br, 1H), 8.54(t, 1H), 8.13(d, 1H), 7.92(d, 0.5H), 7.84(d, 1H), 7.67(d, 0.5H), 7.58(d, 2H), 7.30(m, 6H), 7.16(m, 1H), 7.01(d, 1H), 6.57(d, 1H), 6.00(br, 1H), 5.45(br, 2H), 5.37(d, 0.5H), 5.01(m, 2H), 4.74(m, 0.5H), 4.64(m, 0.5H), 4.42(m, 3H), 4.23(m, 2H), 3.98(m, 2H), 3.71(s, 3H), 2.91(m, 8H), 2.41(d, 1H), 2.21(m, 6H), 1.98(m, 4H), 1.74(m, 4H), 1.49(m, 8H), 1.26(m, 6H), 1.02(m, 9H), 0.91(m, 4H), 0.82(m, 24H). MS(ESI)m/z: 1349.3 [M+H]+; 1371.0 [M+Na]+였다.
실시예 11에서 제조된 메틸푸마레이트 및 MMAE를 포함하는 링커의 접합체의 구조를 다음 표 8에 나타내었다:
링커-MMAE 접합체
Mf-C6-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00349
Mf-C3-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00350
Mf-C6-Val-Cit-PAB-MMAE:
Figure pct00351
실시예 12: ADC의 제조
실시예 7에서 제조된 링커-MMAE 접합체를 항-HER2 인간화 모노클로날항체에 결합시켰다.
1) 일반적으로 사용되는 완충염 용액의 준비:
완충염 용액-1 (완충액-1): 3.11g의 L-히스티딘을 취하여 1L의 이중 증류수에 용해시키고, 용해가 완료된 후, 생성된 혼합물을 약용 빙초산을 사용하여 pH가 약 5.50 (±0.05)이 되도록 조정한 다음 0.22μm 필터멤브레인으로 여과하여 멸균하고, 병에 담아 4 °C에서 보관하여 사용할 때까지 단기 보관한다.
완충염 용액-2 (완충액-2): 6.06의 TRIS 베이스 및 0.93g의 EDTA 2Na를 칭량하고, 용해시키고, 100 mL로 희석하였고; 7.88의 TRIS HCl 및 0.93g의 EDTA 2Na를 칭량하고, 용해시키고, 100 mL로 희석시키고; 생성된 TRIS HCl 용액을 생성된 TRIS 베이스 용액에 첨가하고, pH = 8.50 (±0.05)을 갖도록 상호 조정하고; 생성된 혼합물을 0.22μm 필터멤브레인으로 여과하여 멸균하고, 병에 담아 4 °C에서 보관하여 사용할 때까지 단기 보관한다.
완충염 용액-3 (완충액-3): 피펫을 사용하여 1.715 m의 의료용 빙초산을 취하고, 200 mL의 이중 증류수에 녹이고, 잘 혼합한 후 0.22μm 필터멤브레인으로 여과 멸균하고, 그 후 병에 담아 4 °C에서 사용할 때까지 단기 보관한다.
2) 항체 결합 반응:
① 약용 항체의 대체: 커플링에 사용된 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입)은 Herceptin의 바이오시 밀러였고, 초기 제조용액은 히스티딘하이드로클로라이드 (일 수화물) 0.616 mg/ml, L-히스티딘 0.364 mg/ml, 트레할로스 22.727 mg/mL, Tween-20 100 mg/mL 및 기타 약제학적 부형제를 함유했다. 부형제의 간섭을 제거하기 위해, 동결 및 해동된 항체의 저장용액을 실온에서 서서히 해동하고, G25 덱스트란겔컬럼을 통과하여 완충액-1으로 교체하였다. 교체가 완료된 후 완충액-1 용액에서 생성된 항체를 한외 여과 및 원심 분리 (최종 농도> 5 mg/mL)로 농축하고, 그 농도를 자외선 분광 광도계로 측정하였다.
② 커플링 반응용액의 준비: 필요한 결합항체 (1당량)의 양에 따라, 완충액-1 용액의 항체는 피펫을 사용하여 정확하게 피펫팅되었으며, 항체 농도를 약 10mg/mL로 만들기 위해 일정량의 완충액-1을 첨가했다. 완충액-1 용액에서 생성된 항체를 완충액-2로 pH가 약 6 내지 8이 되도록 조정하고, 피펫으로 깨끗한 반응바이알로 옮겼다.
③ 항체환원: 바이알의 반응액을 천천히 교반 (100rpm)하고 2.87mg/mL TCEP HCl 용액 2 내지 5 당량을 첨가하였다. 첨가가 완료된 후 실온에서 60 내지 180분 동안 천천히 교반하였다.
④ 항체결합: 첨가되는 유기용매 (DMAC 또는 DMSO)의 부피는 총 부피의 5 내지 15 %를 차지하는 것으로 계산되었고, 동시에 첨가할 소분자 부하 (링커-MMAE 접합체)의 질량을 계산하였고, 여기서 일반적으로 소분자 부하가 약간 과도 (보통 8당량)하며, 추가할 유기용매의 부하 농도를 계산했다. 적재된 용액을 정확하게 준비한 다음, 환원된 항체 반응용액에 천천히 떨어 뜨려서 실온에서 천천히 저어주고 특정 커플링 상황에 따라 0.5 내지 5 시간 동안 반응시켰다.
⑤ 반응종료: 소정의 결합 시간에 도달한 후 과량의 수용성 환원성 설 프히드릴함유 소분자 N-아세틸시스테인 용액 (1.63 mg/mL)을 반응용액에 첨가하고 천천히 교반하여 반응을 30 분간 계속한다.
⑥ 제품의 예비정제: 커플링 종료반응이 완료된 후, 완충액-3을 첨가하여 반응용액의 pH가 약 5.50이되도록 조정하였고; 생성된 반응용액을 여과하고, 그 다음 예비 정제를 위해 G25 덱스트란겔컬럼을 사용하여 정제한다. 성분 용출액의 앞부분 (약 80%)을 수집하고, 한외 여과로 농축하고, 그 후 무균 여과하고 서브패키지에에 적용했고; 제품분석을 위해 예약된 일부 샘플을 제외하고 단기 보관을 위해 4 °C에 두었고, 다른 제품은 나중에 사용하기 위해 -80 °C에서 보관했다.
위의 방법을 사용하여 Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C6-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE 및 Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE 대체물을 각각 항체에 결합시키고 다음 ADC를 준비했다.
ADC-I: MAB-W'-C3-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00352
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
ADC-II: MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00353
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
ADC-III: MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE:
Figure pct00354
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
ADC-IV: MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE
Figure pct00355
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
ADC-A: MAB-W'-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00356
여기서: MAB는 항체이고 n은 약 4 또는 8이다.
ADC-B: MAB-W'-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE
Figure pct00357
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
ADC-C: MAB-W'-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE:
Figure pct00358
여기서: MAB는 항체이고, n은 약 4 또는 8이다.
실시예 13: 상이한 구조를 갖는 링커를 포함하는 ADC (DAR: 약 8)의 안정성 실험
실시예에서 숙신이미드 링커를 포함하는 ADC는 (MAB-Su-C6-Val-Cit-PAB-MMAE, Su-E8; 제조 방법은 Int J Mol Sci., 2017, 18 (9): 1860에 언급됨.) 메틸말레에이트 링커를 포함하는 ADC (MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE, W'-E8, 실시예 12에서 제조됨)를 과량의 유리 설프하이드릴 물질 N-아세틸시스테인 (NAC)의 존재하에 독소오프-표적화 상황을 결정하기 위해 평가하였고, 모니터링 지표는 두 ADC에 대한 시간 경과에 따른 DAR의 변화였다. 테스트할 ADC는 PBS 버퍼 (NAC, 0.41 mg/mL, pH=7.4 포함)로 교체하여 옮기고 37 °C 인큐베이터에서 인큐베이션했으며, 각 미리 결정된 시점 (0, 1, 2, 4, 8, 12, 24, 48, 72 시간 및 7 일)에서 200μL의 샘플을 별도로 수집했으며, 샘플링 후 -20 °C에서 동결되었다. 샘플링 종료 후 HPLC-HIC를 사용하여 ADC에 대한 시간 경과에 따른 DAR의 변화를 감지했으며 (도 6), 여기서 DAR의 초기 값은 약 8이었다.
도 6에 표시된 실험 데이터는 메틸말레에이트 링커 (W')를 포함하는 ADC가 숙신이미드 링커 (Su)를 포함하는 ADC보다 훨씬 더 우수한 시험관내 안정성을 가짐을 나타냈고, 21일 이내에 포획제 (trapping agent) NAC의 존재 하에서 유의한 독소오프-표적화를 나타내지 않았으며; 대조적으로, 숙신이미드 링커 (Su)를 포함하는 ADC는 동일한 조건에서 약 35%의 독소오프-타겟팅 비율을 나타냈다.
본 실시예에서 사용된 화합물 MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE 및 MAB-Su-C6-Val-Cit-PAB-MMAE (DAR: 약 8)의 구조식은 다음과 같다:
Figure pct00359
Figure pct00360
실시예 14: 서로 다른 구조를 갖는 소분자 및 링커의 접합체의 안정성 실험
실시예에서, 메틸말레에이트 링커 (실시예 9에서 제조된 접합체-1, 접합체-2 및 접합체-3)를 포함하는 소분자 접합체 및 숙신이미드 링커 (실시예 9에서 접합체-1', 접합체-2' 및 접합체-3')를 포함하는 소분자 접합체는 과잉의 유리 설프 하이드릴 (Cys)이 존재할 때의 안정성을 결정하기 위해 평가되었고, 모니터링 지표는 용액에서 시간에 따른 두 개의 서로 다른 링커를 포함하는 작은 분자 접합체의 나머지 양의 변화였다. 시험할 물질을 각각 DMSO에 용해시키고, 시스테인 (Cys의 농도는 0.41 mg/mL, pH=7.4)을 포함하는 PBS완충액의 10배 부피로 희석하고 37 °C 인큐베이터에서 배양하였고; t=0에서, 각 샘플의 또 다른 200μL을 취해 대조군으로 -80 °C에서 보관했다. 각 용액을 7일 동안 배양한 후 샘플을 개별적으로 채취하고 RP-HPLC를 사용하여 시간에 따른 기질의 잔류량 변화를 감지했으며, t = 0에서 기질의 피크 면적을 100 %로 정의했다. 실험 결과는 아래 표 9에 나와 있다.
코드 접합체 구조 남은 양
접합체-1
Figure pct00361
 96%
접합체-1'
Figure pct00362
 53%
접합체-2
Figure pct00363
 98%
접합체-2'
Figure pct00364
 61%
접합체-3
Figure pct00365
 93%
접합체-3'
Figure pct00366
 49%
위의 안정성 실험 데이터는 포획제 Cys의 존재 하에서, 개환 말레일모노메틸에스테르 (W')의 링커를 포함하는 소분자 접합체 (접합체-1, 접합체-2 및 접합체-3)가 숙신이미드 링커 (Su)를 포함하는 소분자 접합체 (접합체-1', 접합체-2' 및 접합체-3')에 비해 시험관내 안정성이 훨씬 더 우수했음을 보여주었다. 37 °C 및 pH=7.4의 온화한 조건하에서, 7일의 인큐베이션 후, 말레이미드 링커를 포함하는 소분자 접합체는 중요한 오프 타겟팅이 없음 (<10 %)을 보여주었고; 대조적으로, 숙신이미드 링커를 포함하는 소분자 접합체는 동일한 조건에서 약 50%의 표적화 해제율을 나타냈다.
실시예 15: 상이한 구조를 갖는 항체 및 링커의 커플링 실험
15.1 말레산아미드 구조 (Maa)를 포함하는 링커와 항체의 결합
Figure pct00367
<Maa 링커가 있는 ADC>
출원발명에서, 말레이미드의 개환에 의해 얻어진 말레산아미드 구조 (Maa)의 링커를 사용하여 항체 커플링을 시도하였고, 원스텝 방법을 통해 Maa 링커로 안정된 ADC의 준비를 실현한다. 먼저, 말레산아미드 구조 (Maa)를 갖는 링커를 합성하고 독소 MMAE와 결합하여 두 개의 상응하는 부하를 얻었다: Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE 및 Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE (실시예 10에 기재된 방법에 따라 제조됨). 말레산아미드 구조 (Maa)를 갖는 앞서 언급한 두 개의 접합체로드는 각각 항체와 결합되었고, 공정 최적화를 통해 안정적인 카르복시산형 링커로 표적 ADC를 얻을 수 있을 것으로 기대했다. 그러나 인산염 완충액 (PBS), 히스티딘 완충액 (L-His), 트리스 (하이드록시메틸) 아미노메탄 완충액 (TRIS) 및 기타 시스템에서는 pH, 온도, 반응시간, 재료비 등의 조건을 최적화한 후, 아주 적은 양의 Maa-C6-Val-Ala-PAB-MMAE 또는 Maa-C6-Val-Cit-PAB-MMAE가 항체에 결합되었다는 것만 알게되었고, 결합결과는 표 1에 나타내었다. 획득된 ADC에서, 운반된 독소 MMAE의 양이 너무 적어 제품이 요구 사항을 충족하지 못했다. 이상적인 DAR (Drug-Antibody ratio, DAR)은 약 4이다.
Figure pct00368
표 10: 항체와 말레산아미드 (Maa) 구조를 포함하는 커플링 링커의 결과
ADC 구조 n(DAR)
Figure pct00369
 0.27
Figure pct00370
 0.22
상기 실험은 말레산아미드 구조 (Maa)를 갖는 링커를 포함하는 ADC, 즉 석신이미드 개환 구조를 갖는 링커를 포함하는 ADC는 제조로 직접 얻을 수 없음을 보여주었다.
15.2 메틸푸마레이트 (Mf) 구조를 포함하는 링커와 결합 항체
새로운 안정된 링커 구조를 포함하는 종합적으로 구하기 쉽고 구조적으로 안정된 ADC를 얻기 위해, 우리는 역합성 분석을 통해 메틸푸마레이트 링커 (Mf)와 메틸말레에이트 링커 (Mm)를 가진 접합체를 추가로 설계했다. 이론적으로, 메틸푸마레이트 링커 (Mf)와 메틸말레에이트 링커 (Mm)는 모두 개환 링커 구조를 갖는 메틸에스테르 유형 생성물을 얻기 위해 설프히드릴과 마이클 첨가 반응을 할 수 있다.
Figure pct00371
실시예에서, 메틸푸마레이트 구조 (Mf), Mf-C6-Val-Ala-PAB-MMAE, Mf-C3-Val-Ala-PAB-MMAE 및 Mf-C6-Val-Cit-PAB를 포함하는 3개의 링커-세포 독소 접합체-MMAE를 먼저 제조하고 (실시예 11에 기재된 방법에 따라 제조), 각각 항체에 결합시키고, 결합결과를 표 2에 나타내었다. 14.1과 유사하게, 다양한 결합 조건의 최적화 후 소량의 링커-세포 독소 접합체만 항체에서 변형될 수 있었으며, 이는 메틸푸마레이트 링커가 개환 ADC의 결합을 달성할 수 없음을 확인했다. 결합모드는 다음과 같다.
Figure pct00372
표 11: 메틸푸마레이트 (Mf) 구조를 포함하는 항체 및 링커의 결합결과
ADC 구조 n(DAR)
Figure pct00373
 0.31
Figure pct00374
 0.58
Figure pct00375
 0.79
15.3 말레산메틸 (Mm) 구조를 포함하는 항체와 링커의 결합
출원발명의 실시예 7에서 제조된 메틸말레에이트 구조 (Mm)를 포함하는 링커-세포 독소 접합체: Mm-C6-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C3-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C6-Val-Cit-PAB-MMAE, Mm-C6-PEG4-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C6-PEG8-Val-Ala-PAB-MMAE, Mm-C6-PEG8'-Val-Ala-PAB-MMAE를 각각 항체와 접합시켰다. 결합결과는 15.1 및 15.2의 결합결과와 완전히 상이하였다. 메틸말레에이트 구조 (Mm)를 포함하는 링커는 이상적인 항체 결합 성능을 보여주었고, 온화한 조건 (pH = 5 내지 10, 0 °C 내지 40 °C)의 다양한 버퍼시스템 (PBS, L-His, TRIS)에서 빠르고 효과적인 결합을 달성할 수 있었다. 결합결과는 표 3에 나타냈고, 결합 모드는 다음과 같다.
Figure pct00376
표 12: 말레산메틸 (Mm) 구조를 포함하는 항체 및 링커의 결합결과
ADC 구조 n(DAR)
Figure pct00377
 3.91
Figure pct00378
 3.99
Figure pct00379
 3.96
Figure pct00380
 3.55
Figure pct00381
 4.11
Figure pct00382
 4.15
상기 실험결과는 출원발명에서 제공한 말레산메틸 링커 구조 (Mm)를 갖는 링커가 예상치 못한 효과를 달성했음을 보여주었다. 메틸말레에이트 링커 구조 (Mm)는 온화한 생물학적 조건에서 항체의 설프히드릴에 빠르게 결합될 수 있다. 개환 메틸에스테르 링커 구조 (W')를 갖는 활성제 접합체는 원스텝 방법으로 제조될 수 있다. 결합과정이 빠르고 효과적이며, 메틸말레에이트 링커 구조 (Mm) 및 관련 링커-세포 독소 접합체를 갖는 링커의 제조과정이 간단하고 대규모로 쉽게 수행될 수 있다.
실시예 16: 개환 및 개환 링커를 사용한 ADC의 시험 관내 세포 독성 시험 (DAR: 약 4)
테스트 화합물에는 3 쌍이 포함되었다: MAB-W'-C6-Val-Cit-PAB-MMAE (W'-C6-VC) 및 MAB-Su-C6-Val-Cit-PAB-MMAE (Su-C6-VC), MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE (W'-C6-VA) 및 MAB-Su-C6-Val-Ala-PAB-MMAE (Su-C6-VA), MAB-W'-C3-Val-Ala-PAB-MMAE (W'-C3-VA) 및 MAB-Su-C3-Val-Ala-PAB-MMAE (Su-C3-VA) 및 PEG를 포함하는 3개의 ADC (ADC-A, ADC-B, ADC-C) 구조 링커. 그 구조는 다음과 같다.
Figure pct00383
대조군: 고리 폐쇄 구조를 갖는 ADC (제조방법은 Int J Mol Sci., 2017, 18 (9): 1860 참조):
Figure pct00384
Figure pct00385
Figure pct00386
양성 대조군 약물은 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (MAB) (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.에서 구입), 및 세포 독소 MMAE (Concortis Biosystems에서 구입)였다. 선택된 세포주는 항원 HER2 양성 유방암 세포주 (antigen HER2-positive breast cancer cell) BT-474 및 HCC1954, 및 항원 HER2-양성 난소암 세포주 SK-OV-3, 항원 HER2-양성 위암 세포주 NCI-N87, 및 항원 HER2-약양성 유방암 세포주 MCF-7및 항원 HER2-음성 유방암 세포주 MDA-MB-468 (ATCC에서 구입)를 포함했다.
테스트 중에 사용된 시약, 기기 및 소모품은 다음 표 13에 설명되어 있다.
시약 및 소모품 공급업체 Cat#
RPMI 1640 Invitrogen A10491-01
FBS Invitrogen 10099
Penicillin-Streptomycin Invitrogen 15140
Mccoy's 5A Invitrogen 16600-082
DMEM Invitrogen 10569010
CellTiter Glo kit Promega G9243
기기 공급업체 번호
Enspire PE 2300
테스트 프로세스는 다음과 같다:
1) 세포해동
a) 바이알을 37 °C 수조에서 부드럽게 흔들어 해동시키고; b) 모든 내용물이 해동된 후, 바이알을 수조에서 꺼내 70% 에탄올에 담그거나 분무하여 소독하고; c) 바이알의 내용물을 9mL의 완전배지가 들어있는 원심분리 튜브로 옮기고 (DMEM 배지는 세포주 BT-474 및 MCF-7에 사용됨; RPMI1640 배지는 세포주 NCI-N87, HCC1954 및 MDA-MB-468에 사용됨; 및 Mccoy의 5A 배지는 세포주 SK-OV-3에 사용됨; 아래 설명된 배지는 이와 동일함), 약 200xg에서 5분 동안 원심분리되었고; d) 세포펠렛을 배지에 재현탁하고 75cm2 배양플라스크에 분배하였고; e) 생성된 배양물을 37 °C, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이션했다.
2) 세포확장
a) 세포를 10% FBS (열 비활성화) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신 용액을 포함하는 배지에서 1 : 4의 비율로 주 3회 계대배양 하였고; b) 계대된 세포의 경우 부착세포를 먼저 0.05% 트립신/EDTA 용액 (3mL)으로 세척한 다음 트립신/EDTA (3mL)를 첨가하고 볼텍싱하여 세포를 균일하게 코팅한다. 생성된 배양물은 세포가 분리될 때까지 37 °C에서 배양되었다 (세포가 분리되었는지 확인하기 위해 현미경으로 관찰함). 트립신을 비활성화시키기 위해 동일한 부피의 세포배양배지를 첨가하고, 분리된 세포를 수집하고, 200xg에서 5분 동안 원심분리 한 다음 새로운 배양배지에 재현탁시켰다.
3) 화합물의 제조
a) 화합물 스톡용액을 1 : 3의 비율로 연속 희석하여 서로 다른 농도로 10 개의 희석된 용액을 생성했고 (화합물 스톡용액은 농도가 약 2mg/mL 인 L-His 완충염 용액이었고, PBS로 희석하고 테스트 지점에서 초기 최대농도는 약 500μg/mL였다); b) 농도가 다른 화합물 희석용액 4 μL를 384-웰 플레이트에 분배했다.
4) 세포파종
a) 세포를 수집하고 계수하여 세포수를 결정했고; b) 조정된 밀도를 갖는 36 μL의 세포 현탁액을 지정된 384-웰 세포 배양 플레이트에 첨가하였고; 최종 세포밀도는 웰당 약 1,000 개 세포였으며; c) 플레이트를 뚜껑으로 덮고 인큐베이터에 넣어 37 °C, 5% CO2, 0.1% O2에서 96시간 동안 인큐베이션 하였다.
5) 판독판
a) 96시간 후, 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고 실온에서 10분 동안 평형화시켰고; b) CellTiter Glo 시약은 실험전에 37 ° C에서 배양되었으며; c) 40μL의 CellTiter-Glo 시약을 테스트할 각 웰에 첨가했으며 (CellTiter-Glo 시약대 배지의 비율은 1 : 1이었음); d) 플레이트를 30분 동안 실온에 놓은 다음, 세포 계수를 위해 EnSpire 판독기에서 판독을 수행했다.
6) 데이터분석
남은 활동은 다음 공식을 사용하여 계산되었다.
남은 활동량 (%) = 100 % × (S-M)/(V-M)
S: 테스트 샘플 판독
V: 차량 샘플 판독
M: 화합물 처리 우물 판독
Xlfit (v5.3.1.3), 방정식 201을 사용하여 곡선을 맞추고 IC50 값을 계산했다.
7) 실험결과
실험결과를 표 4에 나타내었다. 결과는 개환 메틸말레에이트 링커를 포함하는 ADC 및 개환 숙신이미드링커를 포함하는 ADC가 실질적으로 유사한 시험관내 세포독성을 가짐을 나타냈다.
표 14: 시험관내 세포독성 테스트 결과
세포주 cmpds (IC50 nM) 테스트
MAB MMAE W'-C3-VA W'-C6-VC Su-C3-VA W'-C3-VA Su-C6-VC Su-C6-VA
BT-474 1.5406 0.2986 0.0937 0.1026 0.0900 0.1038 0.0777 0.0783
NCI-N87 0.3599 0.1611 0.0513 0.0536 0.0498 0.0587 0.0523 0.0563
HCC1954 0.2739 0.1164 0.0201 0.0258 0.0229 0.0232 0.0242 0.0231
Sk-OV-3 2762.6134 0.6444 0.2151 0.2074 0.2181 0.2372 0.1627 0.1518
MCF-7 >3438 0.2227 >1.4570 >1.5316 >1.6314 >1.6814 >1.6590 >1.6495
MDA-MB-468 552.5534 0.0669 >1.4570 >1.5316 >1.6314 >1.6814 >1.6590 >1.6495
PEG 구조 링커를 포함하는 ADC의 시험관내 세포독성 테스트 결과를 표 5에 나타냈다. 결과는 PEG 구조 링커를 포함하는 3개의 테스트된 ADC (ADC-A, ADC-B, ADC-C)가 HER2-양성BT-474에 대한 시험관 세포 독성 (0.064 내지 0.075 nmol/L); 항원 HER2-음성 MCF-7과 비교할 때, HER2-양성 BT-474에 대한 PEG 구조 링커를 포함하는 ADC의 시험관내 세포독성은 472에서 1865배까지 크게 증가할 수 있으며, 이는 ADC 유형이 더 높은 항원 선택성을 가짐을 나타냈다.
표 15: PEG 구조 연결을 포함하는 ADC의 시험관내 세포독성 테스트 결과
ADCs IC50 (nM) 테스트
BT-474(HER2+) MCF-7(HER2-)
ADC-A 0.069 98.357
ADC-B 0.075 139.901
ADC-C 0.064 30.219
실시예 17: 개환 및 개환 커를 포함하는 ADC의 생체내 약력학 (DAR: 약 4)
실험예에서, HER2 (ATCC에서 구입)로 발현된 인간 유방암 세포주 BT-474의 이종이식모델을 사용하여 테스트 화합물의 약력학을 평가했으며, 시험 화합물은 MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE (W'-C6-VA, ADC-II), 세 가지 용량 그룹이 설정되었고 용량은 각각 1mg/kg, 2.5mg/kg, 5mg/kg이었다. 동시에 양성대조군과 용매대조군이 설정되었다. 양성대조군 1은 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (MAB) 및 MMAE의 혼합물을 동일한 용량으로 투여하였고, 양성대조군 2는 고리-폐쇄 숙신이미드 링커 (Su)를 포함하는 ADC (MAB-Su-C6-Val-Ala-PAB-MMAE (Su-C6-VA))의 동일한 용량으로 제공하였다. 용매대조군은 동일한 용량의 생리식염수를 투여하였다. 시험약물을 생리 식염수에 녹여 꼬리정맥주사로 투여하였다. MMAE는 물에 불용성이기 때문에 항 HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (MAB)과 MMAE의 혼합 용액을 준비할 때, 1 mg/mL 용액을 준비하기위해 MMAE는 먼저 DMSO에 용해되었고, 그 후 용액을 밀40 항체가 포함된 생리 식염수에 녹여 잘 혼합하였다.
10% 비활성화된 소태아혈청, 100 U/mL 페니실린, 100 μg/mL 스트렙토 마이신 및 2mM 글루타민을 포함하는 DMEM 배지에서 BT-474 인간 유방암세포 (ATCC에서 구입)를 37º5 % CO2 인큐베이터에서 배양했다. 세포의 초기농도는 배양 중 1x106 세포/ml였고, 세포는 3 내지 4 일 마다 계대를 위해 병으로 나누어졌다. 대수 성장기의 암세포를 SCID 마우스 (암컷, 생후 6 내지 8 주, 18 내지22g, Beijing Ankai Yibo Biotechnology Co., Ltd.에서 구입)의 오른쪽 측면 흉부 피부 아래에 접종하고, 종양이 발생했을 때 부피가 150mm3로 증가하여 모델링이 성공적이었다. 그 후 투여를 시작하고, 각 투여군에서 6마리의 마우스를 주 1회 정해진 투여량으로 투여하고, 투여량은 5mL/kg으로 총 4회 투여하였다. 모든 마우스는 암세포 접종 전날부터 실험이 끝날 때까지 일주일에 2회 에스트로겐 (수의사 에스트라디올벤조에이트 주사, 4mg/2mL, 사천란성 제약사에서 구입)을 매번 40 μg/20μL 피하주사 하였다. 종양부피는 버니어 캘리퍼로 종양의 길고 짧은 지름을 측정하여 일주일에 두 번 측정했다. 부피 계산공식은 부피 = 0.5 x 긴지름 x 짧은지름2이다. 종양 부피를 측정하는 동안 마우스의 무게를 측정했다. 마우스 체중의 변화와 투여시간 사이의 관계를 기록했다. 동시에, 투여기간 동안 동물활동 및 식사와 같은 마우스의 생존 및 건강 상태를 관찰하였다.
투여 후 시간 경과에 따른 종양부피곡선은 도 7에 도시되어 있다. 결과는 용매대조군과 비교하여 양성대조군 1의 모든 동물의 종양이 축소되었지만 부분적으로만 억제되었으며 모든 동물의 종양이 여전히 존재함을 보여주었고; 시험화합물 처리군 (2.5 mg/kg)에서는 모든 시험동물의 종양이 사라지고 오랫동안 나타나지 않았으며, 약물을 중단한지 한 달 후에 종양이 재발한 동물은 없었다.
동일한 용량에서 서로 다른 구조의 링커를 포함하는 ADC의 항종양 효과가 도 8에 도시되어 있다. 결과는 2.5mg/kg의 용량에서, 양성대조군 2의 마우스종양은 완전히 사라지지 않았고, 시험화합물 처리군 생쥐의 종양은 완전히 사라졌지만, 이는 고리 폐쇄 숙신이미드 링커를 포함하는 ADC와 비교할 때, 출원발명에서에서 제공되는 개환 메틸말레에이트 링커를 포함하는 ADC는 더 나은 효능을 가졌다 (p = 0.0061).
용량 의존성 연구에서 1.0 mg/kg, 2.5 mg/kg 및 5.0 mg/kg의 세 가지 용량 그룹이 테스트 화합물에 대해 설정되었다. 다른 용량에서 ADC의 항종양 효과는 도 9에 도시되어 있다. 그 결과, 출원발명의 개환 메틸말레에이트 링커 (W')를 포함하는 ADC의 항종양 활성은 상당한 용량 의존성을 보였으며, 중간 및 고용량 그룹에서는 종양이 사라졌다.
출원발명의 개환 메틸말레에이트 링커 (W ')를 포함하는 ADC의 처리를 받은 후, 동물 체중변화 곡선은 도 10에 나와 있다. 결과는 기본적으로 시험화합물 처리 군과 용매 대조군간에 유의한 차이가 없는 것으로 나타났으며, 모든 실험동물은 체중이 꾸준히 증가하여 출원발명에서 제공된 ADC가 부작용이 거의 없음을 나타냈다.
실시예 18: 이종이식모델에서 치료용량의 MAB-W'-C 6 -Val-Ala-PAB-MMAE의 혈액학적 분석
메틸말레에이트 링커 (W')를 포함하는 ADC (MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE) 사용의 안전성을 추가로 검증하기 위해, BT-474 이종이식모델의 투여가 완료되고 (즉, 최초투여 후 28일) 관찰기간이 완료되었을 때 (즉, 최초투여 후 58 일), 시험동물은 혈액 샘플링 및 전혈 분석을 받았다. 주요 혈액검사 지표에는 백혈구 (WBC), 적혈구 (RBC), 혈소판 (PLT), 호중구 (Neuts) 및 림프구 (림프) 등이 포함되었다. 각 시험 동물로부터 100μL의 전혈을 수집하였다. 부피의 제한때문에 이러한 샘플은 최종 혈액세포수를 달성하기 위해 3배 희석되었다. 수정된 희석 인자의 정량적분석을 기반으로 결과는 평균 ± SD로 표시되었다.
출원발명의 개환 메틸말레에이트 링커 (W')를 포함하는 ADC의 처리를 받은 후, 3가지 용량그룹 (1mg/kg, 2.5mg/kg, 5mg/kg)의 동물의 혈액학적 분석을 받았고 그 결과는 도 11에 도시되어 있다. 여기서 숫자 "1" 및 "2"는 각각 투여 후 28일 및 58일에 시험동물의 전혈분석 결과를 나타냈다. 두 배치 혈액샘플의 혈액학적 매개변수에 대한 ANOVA 분석결과는 용매대조군과 시험화합물 처리군 (1mg/kg, 2.5mg/kg 및 5mg/kg)간에 유의한 차이가 없음을 보여주었다. 결론은 출원발명에서 제공된 개환 메틸말레에이트 링커를 포함하는 ADC가 낮은 혈액독성 및 표적외 골수독성을 가짐을 나타냈으며, 그것이 잘 견디는 주된 이유이기도 했다.
실시예 19: 이종이식모델에서 치료용량의 MAB-W'-C 6 -Val-Ala-PAB-MMAE의 조직병리학적 분석
BT-474 이종이식모델의 테스트가 완료되었을 때, 본 발명자들은 개환 메틸에스테르 링커 (W')를 포함하는 ADC (MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE)로 처리된 동물에 대해 조직병리학적 연구를 수행했다. 검사기관은 주로 골수, 심장, 간 및 폐를 포함했다. 심장, 간, 폐의 조직샘플을 24시간 동안 10% 포르말린에 고정하고 70% 에탄올로 옮기고 70% 에탄올, 85% 에탄올, 90% 에탄올, 95% 에탄올, 100% 에탄올로 탈수하고, 자일렌으로 3 회 처리한 후, 파라핀을 묻혀서 절편하고 H&E 염색을 했다. 골수가 번짐 (smear)으로 만들어졌다. 조직절편과 골수도말을 확대경으로 관찰하고 현미경으로 사진을 찍었다. 결과는 도 12에 나타내었다. 각 투여 그룹은 6마리의 동물을 포함하고, 사진의 원래 크기는 425 × 320 μm이다.
그 결과 용매대조군과 비교하여 시험화합물 처리군도 유의한 차이를 보이지 않는 것으로 나타났다. 이 실험은 출원발명에서 제공하는 ADC 사용의 안전성을 더욱 확인했다.
실시예 20: MAB-W'-C 6 -Val-Ala-PAB-MMAE의 대용량 내성 시험 (DAR: 약 4)
실시예에서, 정상 CD-1 마우스 모델의 개환 메틸에스테르 링커 (W)를 포함하는 ADC (MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE, DAR는 약 4)의 최대 내성용량을 평가했다.
실험에 사용된 CD-1 마우스 [Crl: CD-1 (ICR)]는 약 7 내지 9 주된 것으로 베이징 바이탈 리버 실험동물기술 유한회사에서 구입했으며, 수컷은 약 22 내지 40g, 암컷의 경우 20 내지 35g무게였다. 각 시험 약물투여 그룹은 6마리의 동물 (수컷 절반, 암컷 절반)이였고; 바닥이 폴리카보네이트로되어 있고 옥수수 속대가 깔려있는 마우스 상자에 별도로 먹이를 주었다. 동물들은 설치류 사료를 자유롭게 먹고 병에 담긴 물을 자유롭게 마셨다. 온도는 20 °C 내지 26 °C, 상대습도는 40 % 내지 70 %로 환경을 조절하였으며, 동물실의 조명은 12시간마다 명/암 교대로 유지하였다.
시험약물을 생리식염수에 녹여 꼬리정맥을 통해 주입하였다. 10mg/kg, 20mg/kg, 40mg/kg, 80mg/kg 및 120mg/kg의 5가지 용량그룹이 투여용으로 설정되었다. 투여용적은 5 mL/kg이었다. 투여 후 동물의 관찰기간은 15일이었으며, 실험 종료시 동물 또는 실험 중 죽어가는 동물은 70% CO2/30% O2를 흡입하여 안락사시켰다. 투여 후 관찰기간 동안 케이지측 관찰 (동물의 죽음 또는 사망, 동물의 일반적인 건강상태 및 약물독성증상 포함)을 하루에 두 번 수행했다. 투여 하루 전과 이후 연속 14일, 시험동물은 하루에 한 번 체중테스트와 상세한 임상관찰을 받았다 (동물의 피부, 외투, 눈, 점막의 변화, 호흡기, 순환계, 자율신경계 및 중추신경계, 신체적 움직임 및 행동패턴 등의 변화 포함).
앞서 언급한 테스트약물의 내성연구에서, 10mg/kg, 20mg/kg, 40mg/kg 및 80mg/kg 용량 그룹의 동물에게 테스트약물 ADC-II (MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE)를 투여한 후, 유의하게 허용 가능한 독성 및 동물사망은 발생하지 않았다. 120 mg/kg의 최대투여량 그룹에서 마우스의 체중은 투여 후 1일에서 5일까지 지속적으로 감소했으며, 실험동물이 사망이 했습니다 (실험동물 6마리 중 2마리가 사망). 또한 120 mg/kg의 모든 생존동물은 투여 후 9일째부터 목, 복부, 사지에 다양한 정도의 탈모를 보였으며, 일부 실험동물은 탈모 부위와 과립에 딱지가 있었다. 그리고 이러한 증상은 시험 기간이 종료될 때까지 (투여 후 15 일) 크게 개선되지 않았다. 이는 120 mg/kg의 용량이 ADC-II (MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE)의 최대 내성 용량 (MTD)에 도달했음을 보여준 것이다.
ADC-II를 예로 들어, HER2 발현 인간 유방암 세포주 BT-474의 마우스 이종이식 모델 테스트에서, 용량이 2.5 mg/kg인 경우, 시험동물의 모든 종양이 사라지고 약물 중단 후 1개월 이내에 재발하지 않았다 (실시예 16). 내약성 및 안전성 평가 연구에서 80 mg/kg의 용량은 시험물질의 용량 관련 독성을 나타내지 않았으며 일부 동물은 용량이 120mg/kg 일 때 사망했다. 이는 ADC 테스트 화합물 MAB-W'-C6-Val-Ala-PAB-MMAE가 상대적으로 더 나은 내약성과 더 높은 치료 지수를 가짐을 나타낸다.
마지막으로, 전술한 실시예는 출원발명의 기술적 솔루션을 설명하기 위해서만 사용되며 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니라는 점에 유의해야한다. 출원발명이 바람직한 실시예를 참조하여 상세하게 설명되었지만, 당업자는 다음을 이해해야 한다: 출원발명의 특정 구현은 본 출원의 기술적 솔루션의 정신을 벗어나지 않고 수정되거나 일부 기술적 특징이 동등하게 대체될 수 있고, 이들 모두는 본 출원에서 보호하고자 하는 기술적 솔루션의 범위에 포함된다.

Claims (29)

  1. 화학식 I 또는 화학식 I'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물,
    Figure pct00387

    <화학식 I>
    Figure pct00388

    <화학식 I'>
    여기서:
    W는
    Figure pct00389
    이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00390
    ,
    Figure pct00391
    ,
    Figure pct00392
    ,
    Figure pct00393
    ,
    Figure pct00394
    ,
    Figure pct00395
    및
    Figure pct00396
    ;
    L2는
    Figure pct00397
    또는
    Figure pct00398
    이고;
    L3는
    Figure pct00399
    이고;
    R2는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00400
    ,
    Figure pct00401
    ,
    Figure pct00402
    및
    Figure pct00403
    ;
    R'2는 할로겐이고;
    R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
    q는 0 또는 1 이고;
    m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
    Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
  2. 제1항에 있어서,
    상기:
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
    Figure pct00404
    ,
    Figure pct00405
    ,
    Figure pct00406
    ,
    Figure pct00407
    ,
    Figure pct00408
    ,
    Figure pct00409
    , 및
    Figure pct00410
    ;
    m, t 및 r은 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화학식 I 또는 화학식 I '의 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  3. 화학식 II 또는 화학식 II'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물,
    Figure pct00411

    <화학식 II>
    Figure pct00412

    <화학식 II'>
    상기:
    W는
    Figure pct00413
    이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
    B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
    B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고; 또는 B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 L3에 결합되고;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00414
    ,
    Figure pct00415
    ,
    Figure pct00416
    ,
    Figure pct00417
    ,
    Figure pct00418
    ,
    Figure pct00419
    , 및
    Figure pct00420
    ;
    L2는
    Figure pct00421
    또는
    Figure pct00422
    이고;
    L3는
    Figure pct00423
    이고;
    R3는: 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
    q는 0 또는 1이고;
    m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
    Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
  4. 제3항에 있어서,
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
    Figure pct00424
    ,
    Figure pct00425
    ,
    Figure pct00426
    ,
    Figure pct00427
    ,
    Figure pct00428
    ,
    Figure pct00429
    , 및
    Figure pct00430
    ;
    m, t 및 r은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 것인, 화학식 II 또는 화학식 II'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  5. 화학식 III 또는 화학식 III'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물,
    Figure pct00431

    <화학식 III>
    Figure pct00432

    <화학식 III'>
    상기:
    A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 상기 표적화합물 분자에서 # 또는 ## 위치에 S원자를 통해 커플링되고;
    바람직하게는, A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치에 커플링되고;
    B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
    B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치에 커플링되고; 또는 B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 L3에 결합되고;
    n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00433
    ,
    Figure pct00434
    ,
    Figure pct00435
    ,
    Figure pct00436
    ,
    Figure pct00437
    ,
    Figure pct00438
    , 및
    Figure pct00439
    ;
    L2는
    Figure pct00440
    또는
    Figure pct00441
    이고;
    L3는
    Figure pct00442
    이고;
    R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고;
    q는 0 또는 1이고;
    m, r, t, e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고;
    Y는 Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys, Val-Gly, Val-Thr, Val-Val, Val-Leu, Val-Ile, Val-Asn 및 Phe-Lys로 구성된 군으로부터 선택된 디펩티드에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
    Z는 -CH2-, -CH(CH3)- 또는 -C(CH3)2-임.
  6. 제5항에 있어서, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-,
    Figure pct00443
    ,
    Figure pct00444
    ,
    Figure pct00445
    ,
    Figure pct00446
    ,
    Figure pct00447
    ,
    Figure pct00448
    , 및
    Figure pct00449
    ;
    m, t 및 r은 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 것인, 화학식 III 또는 화학식 III'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  7. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기:
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
    Figure pct00450
    ,
    Figure pct00451
    ,
    Figure pct00452
    및
    Figure pct00453
    ;
    R3는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시, 및 에톡시; 바람직하게는, R3는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 수소, 할로겐, 메틸, 및 에틸;
    m은 0, 1, 2, 3, 4 및 5로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, m은 0, 1, 2, 3, 4로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  8. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기:
    L1은 -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, 또는
    -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    e, f, g, h, I, j 및 k는 각각 독립적으로 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11로 구성된 군으로부터 선택되고,
    예를 들어, e는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고,
    예를 들어, f는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11이고,
    예를 들어, g는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고,
    예를 들어, h는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고,
    예를 들어, i는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8이고,
    예를 들어, j는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 및 11이고,
    예를 들어, k는 1, 2, 3, 4 또는 5인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  9. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기:
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
    Figure pct00454
    , 및
    Figure pct00455
    ;
    R3는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시, 및 에톡시; 바람직하게는, R3는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 수소, 할로겐, 메틸, 및 에틸;
    m은 0, 1, 2, 3, 4로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  10. 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기:
    L2는
    Figure pct00456
    이고,
    여기서:
    Y는 Val-Cit 또는 Val-Ala에 의해 형성된 아미노산 잔기이고, 여기서 N-말단은 카르보닐에 연결되고 C-말단은 N원자에 연결되고;
    Z는 -CH2-이고;
    R3 및 p의 정의는 제1항 내지 6항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같은 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  11. 제1항 내지 2항 및 제7항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기:
    R2는:
    Figure pct00457
    이고;
    q는 0이고; 또는
    R2는
    Figure pct00458
    이고, 여기서 R3 및 p의 정의는 제1항 내지 4항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같고;
    q는 1인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  12. 제1항 내지 2항 및 제7항 내지 11항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은 화학식 IV로 표시되는 화합물이고,
    Figure pct00459

    <화학식 IV>
    상기,
    W는
    Figure pct00460
    이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하며;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고 R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 선택적으로 일치환 또는 다중치환되고;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00461
    ,
    Figure pct00462
    ,
    Figure pct00463
    ,
    Figure pct00464
    ,
    Figure pct00465
    ,
    Figure pct00466
    , 및
    Figure pct00467
    ;
    바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
    Figure pct00468
    ,
    Figure pct00469
    ,
    Figure pct00470
    및
    Figure pct00471
    ;
    R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
    R2는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00472
    및
    Figure pct00473
    ;
    R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시 로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸 로 구성된 군으로부터 선택되고;
    m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  13. 제3항 내지 4항 및 제7항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서,
    여기서 상기 화합물은 화학식 V 또는 V'로 표시되는 화합물이고,
    Figure pct00474

    <화학식 V>
    Figure pct00475

    <화학식 V'>
    상기:
    W는
    Figure pct00476
    이고, 여기서 2개의 카르보닐기는 시스 구조로 C=C 이중 결합의 동일한면에 위치하고;
    B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고;
    B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치 또는 **위치에 커플링되고;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 할로겐 및 C1-4 알콕시로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00477
    ,
    Figure pct00478
    ,
    Figure pct00479
    ,
    Figure pct00480
    ,
    Figure pct00481
    ,
    Figure pct00482
    , 및
    Figure pct00483
    ;
    바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
    Figure pct00484
    ,
    Figure pct00485
    ,
    Figure pct00486
    , 및
    Figure pct00487
    ;
    R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'는 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
    R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸 로 구성된 군으로부터 선택되고;
    m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    e, f, g, h, i, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10으로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  14. 제5항 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서 상기 화합물은 화학식 VI 또는 VI'로 표시되는 화합물이고,
    Figure pct00488

    <화학식 VI>
    Figure pct00489

    <화학식 VI'>
    상기,
    A는 단백질, 항체, 폴리펩티드, 효소 및 소분자로 구성된 군으로부터 선택된 표적화합물이고; A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치 또는 ##위치에 커플링되고;
    바람직하게는, A는 표적화합물 분자에서 S원자를 통해 #위치에 커플링되고;
    B는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 및 표적화담체로 구성된 군으로부터 선택된 활성화합물이고; 바람직하게는, B는 세포독소, 항종양제, 항바이러스제 또는 항감염제이고; 더욱 바람직하게는, B는 세포독소이고, 예를 들어 튜불린억제제, DNA알킬화제, DNA인터칼레이터, 효소억제제, 항대사물, 펩티드 또는 뉴클레오티드이고; B는 활성화합물 분자에서 N원자 또는 O원자를 통해 *위치 또는 **위치에 커플링되고;
    n은 0.5 및 8.5 사이의 숫자이고, 예를 들어 0.8 및 5 사이의 숫자, 1 및 4 사이의 숫자, 2 및 6 사이의 숫자, 3 및 7 사이의 숫자, 4 및 8 사이의 숫자, 3.5 및 8.5 사이의 숫자, 3.5 및 4.5 사이의 숫자, 6.5 및 8.5 사이의 숫자, 바람직하게는 n은 약 4, 5, 6, 7 또는 8이고;
    R1은 C1-6 선형 또는 분지형 알킬이고, R1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환기에 의해 임의로 일치환 또는 다중치환되고: 할로겐 및 C1-4 알콕시;
    L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-, -(CH2)tO-, -(CH2CH2O)r-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -NCH3-, -NH(CH2)2NH-, -C(O)-, -(CH2)e-C(O)NH-(CH2CH2O)f-(CH2)g-, -(CH2)h-C(O)NH-CH[(CH2)i-NHC(O)-(CH2CH2O)j-(CH2)k-CH3]-,
    Figure pct00490
    ,
    Figure pct00491
    ,
    Figure pct00492
    ,
    Figure pct00493
    ,
    Figure pct00494
    ,
    Figure pct00495
    및
    Figure pct00496
    ;
    바람직하게는, L1은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: -(CH2)m-,
    Figure pct00497
    ,
    Figure pct00498
    ,
    Figure pct00499
    및
    Figure pct00500
    ;
    R'는 아미노산 잔기의 가변기 (R)에서 치환기 사이드 체인이고; R'은 -CH3, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4-NH2, -H, -CH(CH3)-OH, -CH-(CH3)2, -CH2-CH(CH3)2, -CH(CH3)-CH2-CH3 또는 -CH2-CONH2이고, R'는 바람직하게는 -CH3 또는 -(CH2)3NHCONH2이고;
    R3는 수소, 할로겐, 메틸, 에틸, 니트로, 메톡시 및 에톡시로 구성된 군으로부터 선택되고; 바람직하게는, 각각의 R3는 수소, 할로겐, 메틸 및 에틸로 구성된 군으로부터 선택되고;
    m, r 및 t는 0, 1, 2, 3 및 4로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    e, f, g, h, I, j 및 k는 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 10로 구성된 군으로부터 각각 독립적으로 선택되고;
    각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2, 3 또는 4이고; 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1, 2 또는 3이고; 더욱 바람직하게는, 각각의 p는 독립적으로 0, 1 또는 2이고, 각각의 p는 독립적으로 0인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  15. 제1항 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서:
    R1은 C1-4 알킬이고, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸 및 tert-부틸, 바람직하게는 메틸인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  16. 제3항 내지 6항 및 제13항 내지 15항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 B는 아우리스타틴, 메틸-아우리스타틴E (MMAE), 메이탄신 및 이의 유도체 (예를 들어 메이탄시노이드, DM1, DM3, DM4), 파클리탁셀, 칼리케아미신, 듀오카르마이신, 독소루비신, 캄프토테신, PBD (피롤로벤조디아제핀) 세포독소 및 이의 유도체 로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  17. 제3항 내지 6항 및 제13항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 B는 모노메틸-아우리스타틴E (MMAE)인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  18. 제5항 내지 6항 및 제14항 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 A는 모노클로날항체 (MAB), 또는
    A는 항체단편 또는 대체제 또는 이의 변이체, 단백질 리간드 또는 단백질 스캐폴드를 포함하고;
    바람직하게는, A는 A의 S원자를 통해 #위치에 커플링되고,
    바람직하게는, A는 A의 시스테인 잔기의 S원자를 통해 #위치에에 커플링되고,
    바람직하게는, A는 커플링 위치로서 설프히드릴을 갖는 모노클로날항체, 또는 커플링 위치로서 설프히드릴을 갖는 위치지정 돌연변이 또는 변형을 갖는 모노클로날항체이고,
    바람직하게는, A는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40 (anti-HER2 humanized monoclonal antibody mil40), 트라스투주맙 (trastuzumab, HERCEPTIN), 퍼투주맙 (pertuzumab, PERJETA), 세툭시맙 (cetuximab, ERBITUX), 파니투무맙 (panitumumab, VECTIBIX), 리툭시맙 (rituximab, RITUXAN), 알렘투주맙 (alemtuzumab, CAMPATH), 이브리투주맙 (ibritumomab, ZEVALIN), 토시투모맙 (tositumomab, BEXXAR), 오파투무맙 (ofatumumab, ARZERRA), 베바시주맙 (bevacizumab, AVASTIN), 이필리무맙 (ipilimumab, YERVOY), 데노수맙 (denosumab, XGEVA), 펨브롤리주맙 (pembrolizumab, KEYTRUDA), 니볼루맙 (nivolumab, Opdivo), 아벨루맙 (Avelumab, Bavencio), 아테졸리주맙 (Atezolizumab, Tecentriq), 두르발루맙 (durvalumab, Imfinzi), 사시투주맙 (Sacituzumab), 로발피투주맙 (rovalpituzumab), 및 이들의 생물학적 유사체로 구성된 군에서 선택되고,
    더 바람직하게는, A는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  19. 제1항에 있어서,
    상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물:
    Figure pct00501
    ,
    Figure pct00502
    ,
    Figure pct00503
    ,
    Figure pct00504
    ,
    Figure pct00505
    ,
    Figure pct00506
    ,
    Figure pct00507
    ,
    Figure pct00508
    및
    Figure pct00509

  20. 제3항에 있어서, 상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물:
    Figure pct00510
    ,
    Figure pct00511
    ,
    Figure pct00512
    ,
    Figure pct00513
    ,
    Figure pct00514
    및
    Figure pct00515

  21. 제5항에 있어서, 상기 화합물은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고:
    Figure pct00516
    ,
    Figure pct00517
    ,
    Figure pct00518
    ,
    Figure pct00519
    ,
    Figure pct00520
    ,
    Figure pct00521
    및
    Figure pct00522

    여기서 MAB는 항체이고, n은 제5항에 기재된 바와 같이 정의되고; 바람직하게는, n은 약 4 또는 8이고,
    바람직하게는, MAB는 다음으로 구성된 군으로부터 선택되고: 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40, 트라스투주맙 (HERCEPTIN), 퍼투주맙 (PERJETA), 세툭시맙 (ERBITUX), 파니투무맙 (VECTIBIX), 리툭시맙 (RITUXAN), 알렘투주맙 (CAMPATH), 이브리투주맙 (CAMPATH), 토시투모맙 (BEXXAR), 오파투무맙 (ARZERRA), 베바시주맙 (AVASTIN), 이필리무맙 (YERVOY), 데노수맙 (XGEVA), 펨브롤리주맙 (KEYTRUDA), 니볼루맙 (Opdivo), 아벨루맙 (Bavencio), 아테졸리주맙 (Tecentriq), 두르발루맙 (Imfinzi), 사시투주맙, 로발피투주맙, 및 이들의 생물학적 유사체,
    더 바람직하게는, MAB는 항-HER2 인간화 모노클로날항체 밀40인 것인, 화합물, 이의 염 또는 용매화물.
  22. 제1항 내지 4항 및 제7항 내지 13항 및 제15항 내지 17항 및 제19항 내지 20항 중 어느 한 항의 화합물염 또는 이의 용매화물의 항체-약물 접합체의 제조에 있어서의 용도에 있어서,
    바람직하게는, 항체-약물 접합체는 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물인 것인, 용도.
  23. 제1항 내지 2항, 제7항 내지 12항, 제15항 및 제19항 중 어느 한 항에 따른 화학식 I의 화합물, 이의 염 또는 용매화물의 제조방법에 있어서,
    1) q가 0이고, R2가
    Figure pct00523
    인 경우, 제조방법은 다음 단계를 포함함:
    a) 말레산 무수물을 화학식 i의 화합물과 반응시켜 화학식 ii의 화합물을 생성하는 단계;
    Figure pct00524

    <말레산 무수물> <화학식 i> <화학식 ii>
    b) 화학식 ii의 화합물을 N-하이드록시숙신이미드 (SuOH)와 반응시켜 화학식 iii의 화합물을 생성하는 단계;
    Figure pct00525

    <화학식 ii> <화학식 iii>
    c) 화학식 iii의 화합물을 요오도알킬 R1-I와 반응시켜 표적화합물 I-1을 생성하는 단계;
    Figure pct00526

    <화학식 iii> <표적화합물 I-1>
    2) q가 1이고, R2가
    Figure pct00527
    인 경우, 제조방법은 다음 단계를 포함함:
    a) Fmoc-Y-OH를 화학식 iv의 화합물과 반응시켜 화학식 v의 화합물을 생성하는 단계;
    Figure pct00528

    <Fmoc-Y-OH> <화학식 iv> <화학식 v>
    b) 화학식 v의 화합물에서 Fmoc 보호기를 제거하여 화학식 vi의 화합물을 얻는 단계;
    Figure pct00529

    <화학식 v> <화학식 vi>
    c) 화합물 I-1을 화학식 vi의 화합물과 반응시켜 화학식 vii의 화합물을 생성하는 단계;
    Figure pct00530

    <화학식 vi> <화합물 I-1> <화학식 vii>
    d) 화학식 vii의 화합물을 화학식 viii의 화합물과 반응시켜 표적화합물 I-2를 생성하는 단계;
    Figure pct00531

    <화학식 vii> <화학식 viii> <표적화합물 I-2>
    상기 L1, Y, Z, R1, R3 및 p는 제1항 내지 2항, 제7항 내지 12항, 제15항 및 제19항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 정의되는 것인, 방법.
  24. 제3항 내지 4항, 제7항 내지 10항, 제13항, 제15항 내지 17항 및 제20항 중 어느 한 항에 따른 화학식 II 또는 화학식 II'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물의 제조방법에 있어서,
    상기 제조방법은 하기 단계를 포함하고:
    제1항에 따른 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 B로 표시되는 약물, 세포독소, 검출시약, 진단시약 또는 표적화담체와 반응시켜 화학식 II 또는 화학식 II '의 화합물을 수득하는 단계,
    Figure pct00532

    <화학식 I> <화학식 II>
    Figure pct00533

    <화학식 I'> <화학식 II'>
    여기서 치환기는 각각 제3항 내지 4항, 제7항 내지 10항, 제13항, 제15항 내지 17항 및 제20항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 정의되는 것인, 방법.
  25. 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 내지 21항 중 어느 한 항에 따른 화학식 III 또는 화학식 III'의 화합물, 이의 염 또는 용매화물의 제조방법에 있어서,
    상기 제조방법은 하기 단계를 포함하고:
    제2항에 따른 화합물 또는 이의 염 또는 용매화물을 A와 반응시키고, 여기서 A는 표적 화합물 분자의 S원자를 통해 #위치에 결합되어 화학식 III 또는 화학식 III'의 화합물을 수득하는 단계,
    Figure pct00534

    <화학식 II> <화학식 III>
    Figure pct00535

    <화학식 II'> <화학식 III'>
    바람직하게는, 반응은 pH = 5 내지 10 및 온도 0 내지 40 °C의 조건에서 수행되고,
    여기서 치환기는 각각 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 기재된 바와 같이 정의되는 것인, 방법.
  26. 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항, 제21항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 염 또는 용매화물을 적어도 하나 이상 포함하고, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  27. 질병 또는 질환 또는 질병 또는 질환의 중증도 감소의 진단, 예방 또는 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항, 제21항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 염 또는 용매화물의 용도에 있어서,
    여기서 상기 질병 또는 질환은 종양, 감염성질병, 혈액학적질병, 대사성질병 및 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    바람직하게는, 종양은 암, 림프종, 림프종종양, 모세포종, 육종 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되고,
    바람직하게는, 암은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 유방암 (예를 들어, HER2-양성 유방암); 편평세포 암종 (예를 들어, 상피편평세포 암종); 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐선암 및 폐편평세포 암종을 포함하는 폐암; 복막암; 간암; 위암; 위장암; 췌장암; 교모세포종; 자궁경부암; 난소암; 간암; 방광암; 요도암; 간세포종양; 유방암; 장암; 결장암; 직장암; 대장암; 자궁내막암; 자궁암; 침샘암; 콩팥암 또는 신장암; 전립선암; 외음부암; 갑상선암; 간암; 항문암; 음경암; 흑색종; 다발성골수종 및 B세포림프종; 뇌암; 담낭암; 식도암; 담관암; 두경부암 및 관련 전이성 종양인 것인, 용도.
  28. 질병 또는 질환 또는 질병 또는 질환의 중증도 감소의 진단, 예방 또는 치료 방법에 있어서,
    상기 방법은 이러한 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항, 제21항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 염 또는 용매화물 투여하는 단계을 포함하고,
    여기서 상기 질병 또는 질환은 종양, 감염성질병, 혈액학적질병, 대사성질병 및 염증으로 구성된 군으로부터 선택되고,
    바람직하게는, 종양은 암, 림프종, 림프종종양, 모세포종, 육종 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되고,
    바람직하게는, 암은 다음으로 구성된 군에서 선택된다: 유방암 (예를 들어, HER2-양성 유방암); 편평세포 암종 (예를 들어, 상피편평세포 암종); 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 폐선암 및 폐편평세포 암종을 포함하는 폐암; 복막암; 간암; 위암; 위장암; 췌장암; 교모세포종; 자궁경부암; 난소암; 간암; 방광암; 요도암; 간세포종양; 유방암; 장암; 결장암; 직장암; 대장암; 자궁내막암; 자궁암; 침샘암; 콩팥암 또는 신장암; 전립선암; 외음부암; 갑상선암; 간암; 항문암; 음경암; 흑색종; 다발성골수종 및 B세포림프종; 뇌암; 담낭암; 식도암; 담관암; 두경부암 및 관련 전이성 종양인 것인, 방법.
  29. 질병 또는 질환 또는 질병 또는 질환의 중증도 감소의 진단, 예방 또는 치료 용도를 위한 제5항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항, 제21항 내지 6항, 제7항 내지 10항, 제14항 내지 15항, 제18항 및 제21항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 이의 염 또는 용매화물에 있어서,
    상기 질병 또는 질환은 종양, 감염성질병, 혈액학적질병, 대사성질병 및 염증으로 이루어진 군으로부터 선택되고,
    바람직하게는, 종양은 암, 림프종, 림프종종양, 모세포종, 육종 및 백혈병으로 구성된 군으로부터 선택되고,
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