JP2009512727A - 免疫応答調節剤の製造におけるTGF−β1インヒビターペプチドの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、免疫応答調節剤の製造の分野に包含される。
TGF-β1(トランスフォーミング増殖因子β1)は、様々な効果を生じる免疫応答の総ての時期に存在する強力な免疫調節剤である。これは、リンパ球、マクロファージおよび樹状細胞などの強力な免疫系細胞調節薬として一般に知られている(Letterio, J.J., 1998)。
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更に、本発明は、配列番号1に対応する配列を有するペプチドp144、配列番号2に対応する配列を有するペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片から選択される、TGF-β1を阻害するペプチドをコードするDNA配列を用いる免疫応答調節剤の製造に関する。本発明は、更にペプチドp144、ペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片をコードする組換え発現系を用いる免疫応答調節剤の製造に関する。本発明の好ましい態様によれば、上記免疫応答調節剤は、免疫応答刺激剤および阻害剤から選択される効果を有する。
本発明の機能の幾つかの例を例証的に示すが、これらは決して発明の範囲を制限するものではない。
この実施例では、外来TGF-β1が脾臓細胞の個体群の樹状細胞への分化のインデューサーとして用いられる系におけるペプチドp144の効果を検討する。
8週齢の雄C57マウスを屠殺した後、その脾臓を無菌条件下で取りだし、清浄な培地を用いてプレート上でホモジナイズして細胞懸濁物を得た。細胞を1000rpmで5分間遠心分離し、得られた細胞沈殿物をACKリーシス溶液(0.15 M NH4Cl、1 mM KHCO3、0.1 M EDTAナトリウム塩溶液、pH 7.2-7.4) 1 ml/脾臓で37℃にて1分間再懸濁した。次いで、細胞を遠心分離し、冷R10培地(RPMI-1640、10% FBS、グルタミン、2x10-5 M 2-メルカプトエタノール) 10 mlで洗浄し、再度遠心分離および洗浄を繰り返した。最後に、細胞をR10培地50 mlに再懸濁した。6ウェルプレート(Costar #3471)を準備し、それらをウェル当たりR10培地1 mlで処理し、樹状細胞からの脾臓細胞を室温で15分間分化させた[R10 + マウスGM-CSF (Peprotec, EC LTD, ロンドン, 英国)10 ng/ml + TGF-β1(RD Systems, ミネアポリス, 米国)1 ng/ml]。次いで、細胞懸濁液2 mlをそれぞれのウェルに加え、それらを37℃および5% CO2でインキュベーションした。最初の週は、上清1 mlを除き、樹状細胞用の新鮮な培地(R10 + GM-CSF + TGF-β1)1 mlを加えることによって培地を2回交換した。これらの2週間後に、培地を分離した。無酵素BPS (GIBCO BRL)中解離培地(dissociation medium)1 ml/ウェルをプレートに加え、培地を37℃でインキュベーションした後、これを取りだし、微温培地(tepid medium)(R10 + GM-CSF + TGF-β1)2 mlを加えた。次に、細胞を慎重にピペット採取し、採取した細胞を1000 rpmで遠心分離し、新鮮な培地(R10 + GM-CSF + TGF-β1)に再懸濁した。このようにして得られた細胞は、プレート上に播種し、初期工程を繰り返すことによって再増幅することができる。
脾臓細胞由来の樹状細胞の18日間培養したものに、下記の処理を72時間行った。
対照群: 0.25% DMSOを含む樹状細胞用培地(R10 + GM-CSF + TGF-β1)で処理した細胞。
抗TGF-β1抗体: 0.25% DMSOを含む樹状細胞用培地(R10 + GM-CSF + TGF-β1)で処理し、抗(TGF-β1)中和抗体(Pharmingen)を20 μg/mlの濃度で加えた細胞。
ペプチドp144: 樹状細胞用培地(R10 + GM-CSF + TGF-β1)で処理した細胞であって、これにp144 をDMSOに溶解したものを加え、25%DMSOでの最終ペプチド溶液が50μg/mlとなるようにしたもの。
様々な処理により培養した脾臓細胞からの表面マーカーを、フローサイトメトリー(FACScalibur, Becton-Dickinson, サンホゼ, カリフォルニア, 米国)を用いて測定した。細胞を食塩溶液2 ml/ウェルで洗浄した後、無酵素BPS (GIBCO BRL)中解離培地(dissociation medium)1 ml/ウェルを加え、37℃で10分間インキュベーションした。次に、培地を除き、PBS 2 mlを加えた。細胞を慎重にピペット採取し、採取した細胞をPBS中2 x 106個/mlの濃度で1000 rpmで遠心分離した。得られた細胞懸濁液100μl/ウェルを、96ウェルプレート中でFITC(1 mg/ml)で標識したマウス抗CD80、抗-CD11cおよび抗-MHC Iモノクローナル抗体(Becton-Dickinson, Pharmingen)のバイアル1μlと共に、4℃暗所にて30分間インキュベーションした。次いで、プレートを1500 rpmで遠心分離することによって(Centrifuge 5810R, Eppendorf)細胞をPBSで3回洗浄し、上清を除去し、細胞をPBS 100μlに再懸濁した。ネガティブコントロールとして、非反応性モノクローナル抗体をFITC(1 mg/ml)で標識したものを用いた。
マウスIL-12に対する組換えアデノウイルスのイン・ビボ活性
この実施例では、TGF-β1がこのモデルで誘導されるサイトカインの想定上のアンタゴニストとして作用するイン・ビボ系におけるペプチドp144の効果を検討する。組換えアデノウイルスに含まれるトランスジーンの発現によるマウスIL-12の産生により、IFN-γおよび一酸化窒素などの因子のカスケードの誘発により炎症状態が誘発される。TGF-β1は、IL-12、IFN-γおよびNOの産生および生物学的作用の阻害剤として記載されている(Pardoux C. et al., 1999: Schini V.B. et al., 1992)。このモデルでは、マウスRAd IL-12 1x108 pfuを食塩血清500μlに溶解したものを4-8週齢の3匹のBALB/cマウスの群に腹腔内投与し、動物を下記の群に分類した。
- Rad IL-12: これらの動物には、0日目にマウスRAd IL-12 1x108 pfuを投与した。
- Rad IL-12 + p144: これらの動物には、上記の群と同一処理を行ったが、アデノウイルスの投与後5日間、0.66%DMSOを含むPS 100μgの1日用量でペプチドを投与した。
IFN-γの量は、市販のELISA (Mouse IFN-γ Duoset ELISA Development System, Genzyme, ケンブリッジ、およびOPTEIA Mouse IFN-γSer, Pharmingen, サンディエゴ, 米国)により製造業者の使用説明書に従って測定した。結果は、IFN-γのpg/ml数として、既知量のIFN-γの標準曲線を用いて表した。
NO生成レベルは、血清中の亜硝酸塩および硝酸塩レベルの間接的測定として採用されている。測定は、Sievers NOA 280一酸化窒素検出装置を用いる化学発光分析法により製造業者(Sievers Instruments Inc. 1996)が推奨する方法に従って行った。
I- + NO2 - + 2H+ -------→ NO+1/2 I2 + H2O
2NO3 - + 3V+3 + 2H2O -------→ 2NO + 3VO2 + 4H+
NO + O3 -------→ O2 + NO2* -------→ NO2 + h・
抗体誘導
体液性応答に対するペプチドp144の免疫調節作用を分析するため、6-8週齢の雌BALB/cマウス(Harlan, Barcelona)を用いた。特異抗体を誘導するため、100℃の槽で10分間不活性化した組換えアデノウイルス(RAd-LacZ)を接種した。
不活性化RAd-LacZアデノウイルス1 x 108 pfu、生理学的血清(PS)またはペプチドp144 50μgを表M4に示されるようにいずれも1:1の容積比でフロイントの完全アジュバント(FCA)に乳化されているものを含む混合物200μlを、群当たり3匹のマウスに、腹腔内投与によって免疫した。最初の免疫から30日後に、動物を同じ混合物でフロイントの不完全アジュバント(FIA)に乳化したもので再免疫した。血液試料を後眼窩静脈叢から15および45日目に採取して、それぞれの動物に生じた抗アデノウイルス抗体を定量した。
血清中のRAd-LacZに対する抗体の検出は、2,2'-アジノ-ビス-3-エチルベンズチアゾリン-6-スルホン酸(ABTS)を顕色剤として用いるストレプトアビジン-ビオチン系に基づくMaxisorp(登録商標)平底96穴プレート(Nunc, ロスキレ, デンマーク)を用いてELISA分析法によって行った。1010 pfu/mlのRAd-LacZ 75μlを0.1 M Na2CO3 10 mlに溶解したもの(pH = 10.5)50μl/ウェルのプレートを、4℃で一晩インキュベーションした。次に、PBST洗浄緩衝液(0.1% Tween 20を含むpH = 6のリン酸緩衝食塩液)200μl/ウェルで、洗浄を3回行った。非特異結合は、1%粉乳を含むPBST 400μl/ウェルを用いてプレートを室温にて1時間インキュベーションすることによってブロックした。プレート内容物を空けて、PBSTで3回洗浄した。血清4μlをPLT 100μlに加え、8個の二倍連続希釈溶液(double serial solutions)を作製し、プレートを37℃の温室で1時間インキュベーションした。これをPBSTで3回洗浄し、ヤギから得たビオチン化マウス抗IgG抗体(Amersham)をPBSTで1/1000倍に希釈したもの50μl/ウェルを用いて37℃で1時間インキュベーションした。これをPBSTで3回洗浄し、ストレプトアビジン-ペルオキシダーゼ(Amersham)の1/500倍希釈溶液を50μl/ウェルを加えた。1時間インキュベーションした後、PBSTで3回洗浄し、プレートを顕色させた。ABTSを顕色反応の基質として用い、過酸化水素とペルオキシダーゼ酵素の存在下で緑色を示す。0.6%酢酸(pH = 4.6) 10 ml、33% H2O2 (v/v)7.5μl、および40 mM ABTS 100μlを用いて、溶液を調製した。100μl/ウェルを加え、1時間後にプレートをMultiskan Plus MKIIリーダー(Labsystem, ヘルシンキ, フィンランド)で405 nmで測定した。
最適切断温度化合物(OCT)用の化合物に包含された肝臓試料の標品からのクリオスタット切片(6μm)を室温で乾燥した。次いで、それらを0.5%グルタルデヒドを標品当たり200μl加えて10分間固定した。次にPBSで3回洗浄した後、染料混合物(30 mM K3Fe(CN)6, 30 mM K4Fe(CN)6, 20 ng/ml X-GalおよびMgCl2/PBS) 200μlを加えた。標品を37℃で12時間インキュベーションした後、PBSで3回洗浄して、乾燥した後、標品を取り付けた。
この実施例では、免疫混合物中におけるp144がTヘルパー決定基として作用するペプチド(FIS)と共に含まれることの効果を検討する。このペプチドは、様々な抗原に対する抗体の産生を促進するサイトカインプロフィールを誘導する。
FISペプチドは、マッコウクジラミオグロビン由来のTヘルパー決定基、アミノ酸(106-118)を特徴とする。このペプチドは、ハプテンペプチドに対する抗体の誘導に広く用いられてきた。とりわけ、IFN-γおよびIL-12の増加を特徴とするサイトカインプロフィールの誘導に対するペプチドp144の効果を分析しようとした。このモデルでは、下記のものを、4-8週齢の3匹のBALB/cマウスの群に静脈内経路によって投与し、下記の処理で動物を分類した。
- FIS: FIS 50μgを含むフロイントの不完全アジュバントと食塩血清の1:1エマルションを静脈内経路で投与したマウス。
- FIS + p144: FIS 50μgとp144 50μgを含むフロイントの不完全アジュバントと食塩血清の1:1エマルションを静脈内経路で投与したマウス。
IFN-γの量を、市販のELISA (Mouse IFN-γ Duoset ELISA Development System, Genzyme, ケンブリッジ、およびOPTEIA Mouse IFN-γSer, Pharmingen, サンディエゴ, 米国)により製造業者の使用説明書に従って測定した。結果は、IFN-γのpg/ml数として、既知量のIFN-γの標準曲線を用いて表した。
A.腫瘍抗原のDTc(AH1)およびDTh(LQV)を含む免疫混合物に対するペプチドp144の効果
DTcは、提示細胞の表面のMHC-IIによって提示されるペプチドであり、かつDTcは、提示細胞の表面上および腫瘍細胞中のMHC-Iによって提示されるペプチドである。DTc(AH1ペプチド)およびDTh(LVQペプチド)であって、CT26細胞によって発現される腫瘍抗原のgp70タンパク質に由来するこれらのペプチドの合同免疫によって、500,000個のCT26腫瘍細胞の皮下増殖を防止することができることが知られている。TGF-β1は免疫応答誘導過程において重要であるので、CT26細胞の増殖の防止に関与する応答の誘導に対するペプチドp144の効果を検討することにした。表1に示されるように、BALB/cマウスの3群を下記のフロイントの不完全アジュバントと(i) AH1 LVQ、(ii) AH1 + LVQ + p144との混合物、および(iii) フロイントの不完全アジュバントのみで免疫した。AH1 + LVQによる免疫だけがマウスを保護することができ、従って、免疫混合物にp144を取り込んだものはCT26細胞の増殖の防止に負の効果を有することが観察された。
免疫応答が一旦誘導されてしまうと、TGF-β1の中和はその進化に対して有益な効果を有することが推測される。この概念を証明するため、5x105個のCT26細胞を静脈内経路によって投与することによって誘導した肺転移モデルにおけるマウスの生存に対するp144の投与の効果を、様々な時間および様々な免疫プロトコルで検討した。
次に、p144の効果を、CT26の投与より侵襲性の低い腫瘍進行モデルについて検討した。この新たなモデルでは、0日目にAH1 50μgでマウスを免疫し、10日後に5x105個のCT26細胞を皮下経路によって投与した。更に、CT26腫瘍細胞からの保護に対するブロッキングTGF-β1の効果を試験する目的で、他の2群のマウス(群2および3)にp144 50μgを10-30日の間1日置きに腹腔内経路によって投与した。
NK細胞の調節
材料および方法
NK細胞培養物
それらは、TおよびBリンパ球の非存在下でRAG1-/-マウスの脾臓細胞から実行した。幾つかの場合には、総脾臓細胞を、10% SBF、L-グルタミン、抗生物質、非必須アミノ酸、β-メルカプトエタノール、およびヒト組換えインターロイキン-2 (Chiron) 600 IU/mlを強化したRPMI培地1ml当たり4x106個で6穴プレート上で培養した。ウェルの半分には、ペプチドp17を150μg/mlの濃度で加えた。48時間後に、培地を除き、ウェルをRPMI培地で洗浄し、非付着細胞を廃棄した。次いで、新鮮な培地を、ペプチドの存在下または非存在下で加えた。+5日目に、培地を再度交換し、今回は対応する培養物における総ての細胞とペプチドp17を取り換えた。トリパンブルーによる細胞計数は、この培養の+5日および+6日目に行った。他の場合には、マウスの脾臓細胞由来のNK細胞を、MiniMACS装置、抗-DX5ビーズ、およびMSカラム(Miltenyi Biotech)を用いる免疫磁気選択によって製造業者の使用説明書に従って精製した。このようにして得られた細胞を、48穴プレート上でペプチドp17 150μg/mlの存在下または非存在下で上記培地中1.5x106個/mlで培養した。48時間後に、新たなペプチドをp17を有する細胞に加え、計数を+2および+4日目に行った。
下記のPE標識したラット抗マウスモノクローナル抗体を用いた: 抗-CD25、抗-CD69および同位体制御抗体、いずれもPharmingen (BD)製。試料の取得および分析は、FACScaliburおよびCellQuestプログラムを用いて行った。
この分析のため、DX5+細胞を培養の2および4日目に用いた。簡単に言えば、3つの10000個/ウェルをペプチドの存在下および非存在下で培養し、6000 IU/mlのIL-2を含む典型的培地におけるトリチウム標識チミジンの取込をチミジンの添加の6時間後に測定した。
NK細胞の細胞傷害性を、標準物4.5h 51Cr放出分析法によって確かめた。簡単に言えば、ターゲットを51Cr 50μCiと2時間インキュベーションし、洗浄(3回)し、次に、エフェクター細胞を様々な比率で加え、最大比は40:1 (エフェクター:ターゲット)とした。最後に、NK細胞によるリーシスによる51Crの放出を、TopCount Scintillation カウンター(Perkin Elmer)で4.5時間後に測定した。細胞傷害性は、細胞による総獲得数に対する放出されたCrの比率として測定した。
下記の腫瘍系、C57BL/6およびCT26マウス(大腸癌)由来のMC38(大腸癌)およびLLC(肺癌)、およびBALB/cマウス由来のRENCA(腎癌)を、NK細胞による細胞傷害性分析のターゲットとして用いた。LLCおよびRENCAは、ウシ胎児血清、抗生物質およびL-グルタミンを補足したRPMIで培養し、MC38およびRENCAは同様に補足したDMEMで培養した。
ペプチドp17は、直接細胞計数またはDNA合成(トリチウム標識チミジンの取込)による増殖定量分析においてRAGI-/-マウスから得てイン・ビトロで培養したNK細胞の個体群に対して明らかな抗増殖効果を発揮する(図10)。様々なマーカーの細胞表面での発現に対するp17の効果を分析したところ、p17は平均蛍光強度として測定したCD25およびCD69のレベルを減少させた(図11)。CD25およびCD69マーカーは免疫抑制を媒介し、いずれもTGF-β1によって誘導される。従って、ペプチドp17は、この免疫系の細胞個体群ではこれらのマーカー(CD25およびCD69)の誘導に対するTGF-β1の効果をブロックすることによって作用する。一方、細胞傷害性分析は様々なマウス腫瘍系に対するこの細胞個体群を阻害し(図12)、ペプチドp17が存在すると、ナチュラルキラー細胞のこの個体群の細胞傷害活性は多少向上する。総ての実験モデルにおいて、ペプチドp17はNK細胞の増殖、分化およびエフェクター期において明らかな生物活性を示すと結論される。
樹状細胞の調節
材料および方法
マウス骨髄由来の樹状細胞(DC)の入手
最初に、下肢を分離して、氷上の10%RPMI FBSを含むプレート上に置いた。骨髄を得るには、大腿骨頭部を切断し、骨の内側に培地を流して骨髄を10%RPMI FBSを含む皿に引き出す必要がある。次に、骨髄を注射器で粉砕し、内容物をFalconチューブに集めて、2000 rpmで5分間遠心分離し、遠心分離の後、上清を取りだし、赤血球をリーシスし、これはACKリーシス緩衝液で行った。細胞をリーシスした後、目的以外の細胞個体群を涸渇させ、これを行うため、市販の抗体とウサギ補体と結合した腹水から産生される抗体を用いた。涸渇は、下記の混合物を加えた2x107個の細胞濃度で行った。
- 100μg/mlの抗CD4腹水、
- 100μg/mlの抗CD8腹水、
- B220上清の1/20倍希釈液(B抗リンパ球)、
- GR1 10μg/ml(抗顆粒球)、
- 補体の1/20倍希釈液。
刺激なし p17なし
p17 (150μg/ml)
LPS (10μg/ml) p17なし
p17 (150μg/ml)
Poly (I:C) (100μg/ml) p17なし
p17 (150μg/ml)
1668 (1μM) p17なし
p17 (150μg/ml)
3TC-CG40L p17なし
p17 (150μg/ml)
LPS: リポ多糖類
Poly (I:C): 合成二本鎖RNA(ポリイノシン酸-ポリシチジル酸)
1668: オリゴデオキシヌクレオチド(ODN)
3TC-CD40L: CD40リガンドを産生する細胞系。
ペプチドp17は、細胞が抗原を提示する有効性が増加する結果として、混合リンパ球応答分析(MLR)においてリンパ球増殖を増加させることができる。ペプチドp17のこの効果は、未刺激またはLPSまたはpICで刺激した樹状細胞により生じる(図13)。しかしながら、他の刺激(1668および3T-CD40L)では、ペプチドp17が抗原提示の有効性、従って増殖性リンパ球応答における差に影響を与えることはできない。これらの結果は、抗原提示細胞(CD)の刺激におけるTGF-β1を阻害するペプチドの能力および抗原提示の有効性を示している。
調節Tリンパ球の調節
材料および方法
1. 総脾臓細胞の取得
6週齢の雌Balb-cマウスから脾臓細胞を得るため、4匹の動物を屠殺し、脾臓を摘出した後、清浄な培地に移して結晶を有する分散液を得て、ホモジェネートを濾過し(70ミクロンフィルター)、50mlチューブに移した後、洗浄し、遠心分離した。得られた細胞をリーシス緩衝液中で1分間インキュベーションして、赤血球を除去した後、清浄な培地で洗浄した。最後に、得られた細胞をAUTOMACS培地1mlに再懸濁し、計数した。
CD25+リンパ球の精製は、CD25PEを標識した磁気カラムを用いて行い、インキュベーションの後、抗-PE磁気微小球(Phycoerythrin)を加えた。インキュベーション、洗浄および濾過(30ミクロンフィルター)の後、試料を磁気カラム中を通過させ、CD25-個体群を含む溶出液を重力によって得た。カラムを磁場から外した後、加圧洗浄し、CD25+細胞を得た。
CD25+個体群の調節性を明らかにするため、200μl/ウェルの容積のU底96穴プレート上にウェル当たり総数が100,000の脾臓細胞をおよび抗-CD3抗体(0.5μl/ウェル)を単独でまたはCD25+またはCD25-に対抗して播種し、25,000個/ウェル(CD25+)または50,000個/ウェル(CD25-)を入れ、これらの細胞の濃度の二倍希釈を行った。
200μl/ウェルの容積のU底96穴プレートに、ウェル当たり100,000個の脾臓細胞、および抗-CD3抗体(0.5μl/ウェル)とウェル当たり25,000個のCD25+リンパ球を播種した。ペプチドをこれらの混合物に加えた(3本カラム/ペプチド、第1列には50 MicroM、および以下の3列には二倍希釈液)。3種類のペプチドを分析した: P17(1-11) 配列番号3、P17(1-11)am 配列番号4、およびAcP17(1-11)am 配列番号5。この分析および抑制活性の分析法では、いずれも37℃で48時間インキュベーションし、トリチウム標識チミジンを0.5μCi/ウェルで加え、8時間後に集めた後、それぞれのウェルから細胞によって放射されるCPMを計数した。
蛍光性抗CD4および抗CD25抗体を用いる標識、およびフローサイトメトリーによる分析(磁気分離した個体群の89%はDC4+CD25+)
結果
選択されたCD25+は調節活性を有するTリンパ球である:
図14は、適当な刺激(抗CD3)の存在下およびレギュレーター細胞の非存在下において脾臓細胞の個体群が増殖することを示す。CG25+リンパ球の存在は、総脾臓細胞の増殖を完全に阻害する。
図14に設定されたモデルに基づいて、ペプチドp17由来のペプチドはCD25+リンパ球個体群の抗増殖効果を用量依存的にブロックすることができる。50μMの濃度では、ペプチドAcP17(1-11)AmおよびP17(1-1)amは調節Tリンパ球の効果を完全に阻害することができる(図15)。
腫瘍増殖に対する効果
材料および方法
群: 7匹の6週齢の雌balb-cマウスの4群。
AH1 + FIA s.c.
AH1 + FIA s.c. + p144 (50μg ip/用量/マウス)
AH1 + FIA s.c. + p17(1-11)(50μg ip/用量/マウス)
デザイン: AH1 + FIA: 10日目; ペプチド: -6日目から1日置きに10日目まで。
腫瘍モデル容積: 10日目から41日目までそれぞれ3日間。0日目にCT26 (500000個/マウスs.c.、脾腹)を免疫。
ペプチド投与群による平均腫瘍容積の減少:
ペプチドp144およびp17(1-11)Amの効果を、腫瘍進行モデルで検討した。このモデルでは、マウスをAH1 50μgで免疫した10日後に5x105個のCT26細胞を投与した。CT腫瘍細胞への保護におけるTGF-β1をブロックする効果を明らかにするため、別の2群のマウスにペプチドp144およびp17(1-11)Amを6-10日の間1日置きに腹腔内経路によって投与した。これらのペプチドは、腫瘍細胞の皮下投与から42日後に腫瘍増殖からの防護を生じることができる。この防護は、p144の場合には動物の100%に達した(図16)。
Claims (19)
- 配列番号1に対応する配列を有するペプチドp144、配列番号2に対応する配列を有するペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片から選択される、TGF-β1を阻害するペプチドを含んでなる、免疫応答調節剤。
- 配列番号3の配列で定義される断片p17(1-11)、配列番号4に対応する断片p17(1-11) am、および配列番号5の配列で定義される断片Acp17(1-11)amから選択される、TGF-β1を阻害するペプチド断片を含んでなる、請求項1に記載の免疫応答調節剤。
- 体液性もしくは細胞性免疫応答または両方の調節における、請求項1または2に記載の調節剤の使用。
- ワクチン接種アジュバントとしての、請求項3に記載の調節剤の使用。
- TGF-β1によって介在される免疫抑制を誘発する微生物と関連した病変および癌から選択される病変の治療用の医薬組成物の製造における、請求項3に記載の調節剤の使用。
- 前記微生物が、Leishmania、Trypanosoma cruzi、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、および単純ヘルペスウイルスから選択される、請求項5に記載の免疫応答調節剤の使用。
- 前記組成物が、乳癌、前立腺癌、結腸癌、膵臓癌、皮膚癌、肝細胞癌、多発性骨髄腫、および胃癌から選択される癌の治療用である、請求項5に記載の調節剤の使用。
- 免疫応答調節剤の製造における、配列番号1に対応する配列を有するペプチドp144、配列番号2に対応する配列を有するペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片から選択されるTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
- 配列番号3の配列で定義される断片p17(1-11)、配列番号4に対応する断片p17(1-11)、および配列番号5の配列によって定義される断片Acp17(1-11)amから選択されるTGF-β1を阻害するペプチドの断片から選択される、請求項8に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの断片の使用。
- 前記調節剤が体液性もしくは細胞性応答または両方を調節する、請求項8または9に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
- 前記調節剤が免疫応答に対する刺激作用を有する、請求項8〜10のいずれか一項に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
- 請求項8〜11のいずれか一項に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの、ワクチン接種アジュバントとしての使用。
- 前記調節剤が免疫応答に対する阻害作用を有する、請求項8〜10のいずれか一項に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
- 免疫応答調節剤の製造における、配列番号1に対応する配列を有するペプチドp144、配列番号2に対応する配列を有するペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片から選択される、TGF-β1を阻害するペプチドをコードするDNA配列の使用。
- 免疫応答調節剤を製造するための、配列番号1に対応する配列を有するペプチドp144、配列番号2に対応する配列を有するペプチドp17、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記ペプチドの断片から選択される、TGF-β1を阻害するペプチドをコードする組換え発現系のシステムの使用。
- 前記免疫応答調節剤が、免疫応答の刺激剤および阻害剤から選択される作用を有する、請求項14に記載のDNA配列または請求項15に記載の組換え発現系の使用。
- TGF-β1によって介在される免疫抑制を誘発する微生物と関連した病変および癌から選択される病変の治療用の組成物の製造における、配列番号1、配列番号2に対応する配列を有するTGF-β1を阻害するペプチド、それらと少なくとも90%の相同性を有するペプチド、または上記の一つのペプチドの断片の使用。
- 前記微生物が、Leishmania、Trypanosoma cruzi、ヒト免疫不全ウイルス、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルスから選択される、請求項17に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
- 前記組成物が、乳癌、前立腺癌、結腸癌、膵臓癌、皮膚癌、肝細胞癌、多発性骨髄腫、および胃癌から選択される癌の治療用である、請求項17に記載のTGF-β1を阻害するペプチドの使用。
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