CN110483648A - 一种融合多肽及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了具有多功能活性的融合多肽及其应用，属于生物制药领域。具有多功能活性的融合多肽，其特征在于，多肽中含有的结构域为N‑Acetyl‑Ser‑Asp‑Lys‑Pro、Ser‑Asp‑Lys‑Pro、Thr‑Ser‑Leu‑Asp‑Ala‑Ser‑Ile‑Ile‑Trp‑Ala‑Met‑Met‑Gln‑Asn、Leu‑Ser‑Lys‑Leu，或者上述结构域中突变其中的任意氨基酸。可以治疗各种纤维化疾病包括肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化、肾纤维化和心肌纤维化以及具有抑制多种人源肿瘤细胞的活性。

Description

一种融合多肽及其应用
技术领域
本发明属于生物药物领域，具体涉及一种融合多肽及其应用。
背景技术
纤维化(fibrosis)是一种器官组织实质细胞减少，纤维结缔组织增多性疾病，持续发展可致器官结构破坏和功能减退，最终衰竭，严重威胁患者健康。在世界范围内，组织器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因。
1.肺纤维化
肺纤维化主要是肺组织受损后修复调节失控、重建异常所引起的病变，在这过程中，一系列细胞因子和生长因子等表达异常、炎症反应、血管增生和重建、纤维蛋白溶解障碍、基质金属蛋白酶以及外界环境等因素导致的氧化应激都参与肺纤维化的发病过程。由此造成上皮细胞缺损、成纤维细胞增生和ECM积聚等主要病变，最终结果是成纤维细胞替代了行使正常功能的肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cells，AECs)，导致了纤维化的发生。由于IPF发病机制的不明确给现今的治疗带来了很大的困难，但通过实验研究我们可以发现有许多潜在的靶点值得去关注，由于肺泡及AECs受到损伤，机体需进行损伤修复，炎症反应亦参与其中，一旦损伤修复过度或者异常，就会引起一些趋化、激活成纤维细胞的细胞因子的释放，成纤维细胞异常增殖并伴有大量ECM的积聚，最终导致IPF的发生。
多种细胞参与了纤维化的发生，如肺上皮细胞、内皮细胞、肺炎症细胞(主要为巨噬细胞)和肺间质细胞(成纤维细胞、肌纤维母细胞)，其中肺间质细胞为肺纤维化发生的关键效应细胞。同时，细胞分泌的细胞因子诸如转化生长因子-β(TGF-β)、血小板衍生因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、整合素、金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制剂(TIMP)等等也对肺纤维化的发生影响颇深。
细胞因子中最关键的是TGF-β，TGF-β是可以调节细胞增殖、分化的多功能细胞生长因子。可以通过直接刺激原位成纤维细胞的活化或通过内皮间质化(EnMT)、上皮间质化(EMT)过程来刺激肌成纤维细胞的大量增殖和ECM的过度积聚。当TGF-β由于损伤持续被活化时，会交叉激活MAPK、EGF、Wnt/β-catenin信号，导致纤维化的发展。PDGF、bFGF、VEGF作为生长因子均可促进肺成纤维细胞的增殖和分化，对肺纤维化的进展产生影响。MMP/TIMP为ECM的主要调节剂，两者的含量在ECM的平衡中起到关键作用。这些细胞因子都或多或少对肺成纤维细胞的增殖和活化及胶原的形成产生影响，因此合理调控细胞因子的表达将有助于肺纤维化的治疗。
本发明设计的多肽，具有多个靶点，可以抑制TGF-β1的释放，抑制成纤维细胞的增殖和活化，可以抑制整合素的表达，进一步抑制TGF-β1的活化，抑制血管生成，可以抑制VEGF的表达和释放，从多个途径治疗纤维化，减缓纤维化的进程。
2.肝纤维化
肝纤维化是由多种病因导致慢性肝病共有的病理改变，特征性地表现为肝内胶原蛋白为主的细胞外基质(ECM)过度合成、降解减少及多条细胞信号转导通路和一系列细胞信号分子网络共同控制的结果，其中以肝星状细胞(HSC)的活化、增殖是造成肝纤维化的最终共同途径，是肝纤维化的中心事件。但肝纤维化的发生和发展机制十分复杂，目前研究主要围绕肝脏星状细胞的激活和转化为肌成纤维细胞和成纤维细胞，其可能途径是激活转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路、血管衍生生长因子(PDGF)受体介导的信号转导通路、TNF-α介导的信号转导通路及前列腺素内氧化还原酶(COX-2)、弥漫性细胞外基质(ECM)及氧化应激介导的肝纤维化等。
肝纤维化是各种慢性肝炎发展为肝硬化必经的病理阶段，是肝脏自我损伤修复的表现。据卫生组织报道，我国具有乙型肝炎病毒感染人群2000万例，此类患者绝大多数存在肝纤维化的发生，因此治疗肝纤维化已经成为迫切需要解决的问题。
3.肾纤维化
绝大多数慢性肾脏疾病均可导致肾纤维化，如原发性肾小球疾病、慢性肾盂肾炎、系统性疾病导致的肾脏损害(如狼疮性肾炎和糖尿病肾病等)和遗传因素导致的肾病(如Alport综合征)等。肾纤维化是多因素驱动的病理过程，涉及炎症、氧化应激、多种细胞因子的作用及信号级联、细胞凋亡、成纤维细胞增殖和活化,以及上皮细胞向成纤维细胞转化等。
目前大多数肾纤维化治疗药物存在毒性大、安全性低、药理作用单一等问题，多肽药物的成药性高于一般化学药物，其生物活性高，特异性强，毒性反应相对较弱，在体内不易产生蓄积。多肽可以根据其发病机制进行设计，是多靶点设计，可以从多个途径抑制肾纤维化的发生。
4.皮肤纤维化
皮肤纤维化(skinfibrosis)为皮肤的过度瘢痕形成，且为病理性伤口愈合反应的结果。多年来国内外学者对瘢痕的发生、发展及消退的机理进行了多角度、多层面的深入研究，但直至目前对其机制的研究尚无明确的结论，防治方面也尚无良方，较一致的看法有：①皮肤纤维化主要的效应细胞是成纤维细胞，并以细胞过度增殖和细胞外基质过度沉积为特征；②胶原代谢紊乱是其主要的生物学层面表现；③TGF-β1/Smad信号通路与成纤维细胞的增殖、分化、迁徙、凋亡及胶原代谢等多种生理、病理过程密切相关，Smads根据不同分型对成纤维细胞胶原代谢具有双向调控作用。
用于治疗皮肤纤维化的最常用的方法是采用免疫抑制的疗法。基本原理在于，自身免疫性病因造成疾病的炎症方面以及后续组织损伤和纤维化。所常用的药物包括甲胺喋呤、环磷酰胺和环孢菌素。尽管已观察到免疫抑制疗法的一些改进，但关于药物安全性的担忧以及确定的临床数据和可证实的功效的缺乏仍然存在。因此需要开发用于治疗皮肤纤维化、纤维化皮肤疾病和皮肤的病理性瘢痕形成的有效药物制剂。
5.心肌纤维化
心肌纤维化是指在各种致病因素(炎症、缺血、缺氧等)作用下，心肌的正常组织结构中胶原纤维过量积聚，心脏组织中胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变。心肌纤维化是多种心血管疾病进展中的一个重要病理改变，最终结果是导致心肌重构，心肌发生僵硬、心室舒张功能下降、冠状动脉的储量降低，甚至有可能直接导致猝死的发生，因此防治心肌纤维化具有重要意义。
发明内容
1.要解决的问题
针对现有的治疗纤维化的药物大多都是化学药物，化学药物存在毒性大、安全性低、药理作用单一等问题。本发明提供的一种融合多肽，其在肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心肌纤维化、皮肤纤维化以及抑制各种人源肿瘤细胞的增殖均有很好的治疗效果。本发明的多肽包含多个结构域可以靶向多个靶点，可以从多个途径抑制纤维化的发生和肿瘤的增殖。
2.技术方案
为了解决上述的问题，本发明采用的技术方案如下：具有多功能活性的融合多肽，其特征在于，多肽中含有的结构域为N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro、Ser-Asp-Lys-Pro、Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn，Leu-Ser-Lys-Leu，或者上述结构域中突变其中的任意氨基酸。
所述的融合多肽用linker连接，linker为Gly-Gly-Gly-Gly、Ser-Ser-Ser或其它氨基酸组成的柔性linker。
优选的，多肽的氨基酸序列为：
多肽I：Ser-Asp-Lys-Pro-linker-Leu-Ser-Lys-Leu-linker-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn；
多肽II：Ser-Asp-Lys-Pro-linker-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-linker-Leu-Ser-Lys-Leu；
多肽III:Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-linker-Ser-Asp-Lys-Pro-linker-Leu-Ser-Lys-Leu；
多肽IV:Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-linker-Leu-Ser-Lys-Leu-linker-Ser-Asp-Lys-Pro；
多肽V：Leu-Ser-Lys-Leu-linker-Ser-Asp-Lys-Pro-linker-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn；
多肽VI：Leu-Ser-Lys-Leu-linker-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-linker-Ser-Asp-Lys-Pro；；
其中所述的linker为Gly-Gly-Gly-Gly；
上述的融合多肽在抗肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心肌纤维化、皮肤纤维化和抗肿瘤药物中的应用。
上述地所述的肿瘤为起源于人的头颈部癌、脑癌、甲状腺癌、食管癌、胰腺癌、肝脏癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、肾脏癌、结肠癌或直肠癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、黑色素瘤、血管瘤以及肉瘤。
作用机制：本发明的多肽具有多个靶点，可以抑制TGF-β1的释放，抑制整合素的表达、抑制血管生成，可以从多个途径抑制成纤维细胞的活化，减少细胞因子的释放，减少细胞外基质的沉积，可以减缓上述纤维化的进程，同时还可以抑制多种人源性肿瘤细胞的增殖。
1.有益效果
相比于现有的技术，本发明的有益效果为：
(1)本发明的融合多肽具有很好的抗纤维化活性可以用于治疗多种纤维化疾病，包括肺、肝、肾、心肌以及皮肤纤维化。其组成的成分均为天然的氨基酸，易于合成，没有明显的毒副作用，安全性高；
(2)本发明的融合多肽可以用于治疗肺纤维化，在肺纤维化模型中，多肽可以显著改善肺部的结构，降低肺纤维化的评分，提高其存活率；
(3)本发明的融合多肽可以用于治疗肝纤维化，在肝纤维化的体外模型中，多肽可以抑制肝星状细胞的增殖和活化；
(4)本发明的融合多肽可以治疗肾纤维化，在肾纤维化的模型中，多肽可以显著降低肾组织中TGF-β1的表达含量，明显改善肾纤维化的状况；
(5)本发明的融合多肽可以治疗心肌纤维化，在心肌纤维化的体外模型中，多肽可以显著降低心肌成纤维细胞的活化和增殖；
(6)本发明的融合多肽可以治疗皮肤纤维化，在皮肤纤维化的模型中，多肽可以显著降低皮肤中HYP的表达含量，明显改善皮肤瘢痕增生的情况；
(7)本发明的融合多肽可以抑制多种肿瘤细胞的生长；
(8)本发明的多肽是多靶点的药物，可以从多个途径抑制纤维化的进程。
附图说明
图1是本发明的融合多肽I、II、III、IV、V、VI对肺纤维化的HE染色的图；
图2是本发明的融合多肽I、II、III、IV、V、VI对肺纤维化的Masson染色的图；
图3是本发明的融合多肽I、II、III、IV、V、VI抑制肾纤维化模型中TGF-β1的表达含量；
图4是本发明的融合多肽I、II、III、IV、V、VI抑制皮肤纤维化模型中HYP的表达含量；
图5是本发明的融合多肽I、II、III、IV、V、VI对不同类型的肿瘤生长的抑制效果；
具体实施方式：
所述的多肽I、II、III、IV、V、VI由南京金斯瑞科技有限公司合成。
实施例1、肺纤维化动物模型
实验动物及材料：
1.实验动物：
来源、种系、品系：清洁级SD大鼠，由扬州大学比较医学中心提供(实验动物生产许可证：SCXK(苏)2012-0004)；实验动物使用许可证：SYXK(苏)2012-0035)。
体重：采购时体重180-200g，开始造模时体重190-210g。
性别：雄性。
2.实验材料：
博来霉素 厂家：海正辉瑞药业。
生理盐水 厂家：安徽双鹤药业有限公司
水合氯醛 厂家：国药集团化学试剂有限公司
BIBF1120(尼达尼布) 厂家：济南轩德化工有限公司；
组织固定液 厂家：武汉谷歌生物科技有限公司；
3.实验方法：
SD大鼠，腹腔注射1mL/100g、4％的水合氯醛进行麻醉，大鼠麻醉后，固定大鼠，用75％酒精棉消毒大鼠颈部。用剪刀纵向剪开大鼠颈部皮肤，用镊子纵向钝性撕开筋膜与肌肉，暴露气管。注射器刺入气管注入博来霉素5mg/kg，空白组注入等量生理盐水。然后迅速将鼠板直立，旋转鼠板，观察大鼠呼吸情况，旋转后消毒颈部伤口，缝合伤口，并在缝合撒上阿莫西林消炎药。将术后大鼠放回干燥洁净的鼠笼休息，等待苏醒，大约l-2h后苏醒，之后正常饲养。造模后第7天造模组动物随机分为模型组、阳性药尼达尼布组、多肽I、II、III、IV、V、VI各个剂量组、正常对照组，并分别进行给药，给药周期为14天。每天观察老鼠的生存状况，称量其体重。给药14天之后，将SD大鼠进行解剖，去肺组织，将右肺组织放在组织固定液只进行固定，进行HE染色和Masson染色切片分析。4.实验分组及剂量设置
表1 实验分组及给药方案
5.实验结果
(1)多肽对博来霉素诱导SD大鼠存活率的影响
如表2所示，较模型组SD大鼠存活率(50％)而言，各受试药的SD大鼠存活率均高于模型组，而且各受试药能够明显提高SD大鼠的存活率，多肽I、的存活率均和阳性药组相当。
表2 多肽对博来霉素诱导的SD大鼠肺纤维化的存活率(％)的影响
2.多肽对博来霉素诱导的SD大鼠肺纤维化病理分析
研究结果显示，本研究成功建立了SD大鼠肺纤维化模型，肺组织病变主要表现为肺泡壁和肺内支气管、血管分支周围间质出现成纤维细胞增生并形成胶原纤维，Masson染色时呈蓝绿色染色反应，并出现炎细胞浸润、肺泡壁充血、细胞变性排列紊乱等病变。给予药物之后，肺组织纤维化程度和其它病变较模型组减轻。HE染色和Masson染色的图见附图1、2。
实施例2、肝纤维化体外模型
1.实验方法
多肽抑制LX-2肝星状细胞的作用，用MTT方法进行检测。细胞用含10％的FBS的1640培养基进行培养，将细胞质成4×105/mL的细胞悬液，每孔100μL接种于96孔板中。待细胞贴壁后换无血清1640培养基，24小时后弃去无血清培养基，用1μmol/L不同的多肽进行培养，每个浓度设置5个复孔。分别于12、24、48h后，每孔加入MTT 10μL，4小时后将MTT吸出，每孔加入DMSO 150μL，反应5min后，酶标仪570nm测OD值。
2.实验结果
在24h和48h，多肽I、II、III、IV、V、VI在1μmol/L均可以抑制大鼠心肌成纤维细胞的增殖，结果如表3：
表3 多肽对LX-2肝星状细胞增殖的影响
***P＜0.001,**P＜0.01,*P＜0.05vs control。
实施例3、肾纤维化模型的建立
1.实验动物
清洁级雄性SD大鼠，购买自南京青龙山动物养殖场，采购时体重180-200g,开始造模时体重190-210g，开始给药时为180-200g。
2.实验材料：
生理盐水厂家：安徽双鹤药业有限公司
大鼠TGF-β1ELISA试剂盒厂家：天津安诺瑞康生物科技有限公司
3.实验方法
肾纤维化动物模型的建立，SD大鼠用4％的水合氯醛进行麻醉，腹腔注射1mL/100g，将SD大鼠固定在手术板上，手术区域消毒备用，在腹中线偏左约3-4mm剪开腹腔，手术组分理处左肾输尿管，在靠近肾下极处结扎分离输尿管，然后双结扎后，在两个结扎中间剪短输尿管，卓曾缝合肌层及腹壁，酒精消毒，待SD大鼠苏醒后，放回笼内进行饲养。空白组不结扎输尿管，其余步骤相同。随后将动物分为空白组，模型组，多肽给药组，每组10只，于手术后第二天开始给药，1天2次，给药14天，给药14天之后，取血，取上清检测血清中TGF-β1的含量。
4.实验分组及剂量设置
表4 实验分组及给药方案
5.实验结果
(1)多肽对肾纤维化SD大鼠血清中TGF-β1含量的影响
TGF-β1是最为重要的致纤维化因子，在肾纤维化中，TGF-β1的表达含量明显增高，结果如图3所示，模型组与空白组相比具有极显著性差异(***P<0.001)给药之后，各组均可以显著降低血清中TGF-β1的含量，多肽I、II、IV与模型组相比均有极其显著性的差异(***P<0.001)，多肽III、V、VI与模型组相比具有极显著性的差异(**P<0.01)。
实施例4、心肌纤维化模型的建立
1.实验方法
多肽抑制大鼠心肌成纤维细胞的作用，用MTT方法进行检测。细胞用含10％的FBS的DMEM培养基进行培养，将细胞质成1×105/mL的细胞悬液，每孔100μL接种于96孔板中。待细胞贴壁后换无血清DMEM培养基，24小时后弃去无血清培养基，用1μmol/L不同的多肽进行培养，每个浓度设置5个复孔。分别于12、24、48h后，每孔加入MTT10μL，4小时后将MTT吸出，每孔加入DMSO 150μL，反应5min后，酶标仪570nm测OD值。
2.实验结果
在24h和48h，多肽I、II、III、IV、V、VI在1μmol/L均可以抑制大鼠心肌成纤维细胞的增殖，结果如表5；
表5 多肽对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响
***P＜0.001,**P＜0.01,*P＜0.05VS control。
实施例6、皮肤纤维化模型的建立
1.实验动物
6-8周龄的C57/BL雄性小黑鼠，购买自南京青龙山养殖场。
2.实验材料
博来霉素 厂家：海正辉瑞药业。
生理盐水 厂家：安徽双鹤药业有限公司
大鼠TGF-β1ELISA试剂盒 厂家：天津安诺瑞康生物科技有限公司
碱性HYP试剂盒 厂家：南京建成
3.造模方法
每天皮下注射博来霉素(10μg/mL),连续注射28天，使其形成皮肤纤维化，给药组在造模期间每天给予多肽药物进行治疗，一天两次。造模结束之后，第二天，小鼠处死，取其小鼠背部皮肤组织，检测皮肤组织中HYP的含量。
4.实验分组及给药方案
表6 实验分组及给药方案
5.实验结果
(1)各组小鼠皮肤组织中HYP含量的表达
取小鼠背部皮肤组织检测皮肤组织中羟脯氨酸的含量，羟脯氨酸作为胶原蛋白的特征蛋白，可以侧面反映皮肤组织胶原的含量。如图4所示，多肽各组别均可以降低皮肤组织中HYP的表达；多肽II、IV、VI可以显著降低肺组织中HYP的表达，与模型组相比有极显著性差异(***P<0.001)。多肽I、III、V各组可降低SD大鼠肺组织中HYP的含量，与模型组相比有显著性差异(*P<0.05)。
实施例7、MTT法检测本发明的多肽对多种来源的肿瘤细胞生长的抑制作用
将人源的多种肿瘤细胞在37℃，5％CO2的培养箱中培养至密度90％以上时用胰蛋白酶消化，用培养液重悬细胞，计数，将细胞的浓度调整为2×104个/mL,将细胞悬液接种到96孔板中，每孔100μL，将其放在37℃，5％的CO2培养箱中培养过夜。待细胞完全贴壁后，加入本发明的多肽作为给药组，以不加任何药物的培养液作为空白对照组，用培养液稀释到1μmol/L.将各个稀释液分别加入到96孔板中，每孔100μL,在37℃，5％的CO2培养箱继续培养48h。随后加入20μl的MTT，继续培养4h。吸取培养基，每孔加入100uL的DMSO溶解。用酶标仪在检测波长为570nm，参比波长为630nm处测定吸光度之，并计算生长抑制率，公式如下：肿瘤生长抑制率(％)＝(1-给药组吸光度/空白组吸光度)*100％，实验独立重复3次，实验得到的结果以平均值±标准差表示，空白组的肿瘤生长抑制率为0；表8结果表明本发明的多肽对多种肿瘤的生长有显著的抑制作用(图5)。
表7 MTT法检测的本发明的多肽对多种肿瘤生长的抑制效果(％)
序列表
<110> 南京安吉生物科技有限公司
<120> 一种融合多肽及其应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽I(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
Ser Asp Lys Pro Gly Gly Gly Gly Leu Ser Lys Leu Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn
20 25 30
<210> 2
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽II(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
Ser Asp Lys Pro Gly Gly Gly Gly Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile
1 5 10 15
Trp Ala Met Met Gln Asn Gly Gly Gly Gly Leu Ser Lys Leu
20 25 30
<210> 3
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽III(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 3
Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ser Asp Lys Pro Gly Gly Gly Gly Leu Ser Lys Leu
20 25 30
<210> 4
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽IV(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 4
Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Leu Ser Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Pro
20 25 30
<210> 5
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽V(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 5
Leu Ser Lys Leu Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Pro Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile Trp Ala Met Met Gln Asn
20 25 30
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> 多肽VI(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 6
Leu Ser Lys Leu Gly Gly Gly Gly Thr Ser Leu Asp Ala Ser Ile Ile
1 5 10 15
Trp Ala Met Met Gln Asn Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Pro
20 25 30

Claims (9)

1.具有多功能活性的融合多肽，其特征在于，多肽中含有的结构域为
N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro、Ser-Asp-Lys-Pro、Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn，Leu-Ser-Lys-Leu，或者上述结构域中突变其中的任意氨基酸。
2.根据权利要求1所述的具有多功能活性的融合多肽，其特征在于所述的融合多肽用linker连接，linker为 Gly-Gly-Gly-Gly、Ser-Ser-Ser或其它氨基酸组成的柔性linker。
3.根据权利要求2所述的具有多功能活性的融合多肽，其特征在于，所述的融合多肽的氨基酸序列为如下序列或者与其有80%同源性的序列：
多肽I ：N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-Ser-Lys-Leu-Gly-Gly-Gly-Gly-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn;
多肽II：N-Acetyl-Ser-Asp-Lys-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-Ser-Lys-Leu;
多肽III:Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Asp-Lys-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-Ser-Lys-Leu;
多肽IV:Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn-Gly-Gly-Gly-Gly-Leu-Ser-Lys-Leu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Asp-Lys-Pro;
多肽V：Leu-Ser-Lys-Leu-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Asp-Lys-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met-Gln-Asn;
多肽VI：Leu-Ser-Lys-Leu-Gly-Gly-Gly-Gly-Thr-Ser-Leu-Asp-Ala-Ser-Ile-Ile-Trp-Ala-Met-Met
-Gln-Asn-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Asp-Lys-Pro。
4.权利要求1或2或3所述的多功能活性的融合多肽在制备抗纤维化药物中的应用。
5.权利要求1或2或3所述的多功能活性的融合多肽在制备抗肿瘤药物中的应用。
6.根据权利要求4所述的多功能活性的融合多肽在制备抗纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的纤维化包括肺纤维化、肝纤维化、肾纤维化、心肌纤维化、皮肤纤维化。
7.根据权利要求5所述的多功能活性的融合多肽在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤为起源于人的头颈部、脑部、甲状腺、食管、胰腺、肝
脏、肺癌、胃、乳腺、肾脏、结肠或直肠、卵巢、子宫颈、子宫、前列腺、黑色素、血管瘤以及肉瘤。
8.根据权利要求4所述的多功能活性的融合多肽在制备抗纤维化药物中的应用，其特征在于，所述的融合多肽为多肽或其药学上可接受的盐，其剂型为多肽或者其盐的注射剂、胶囊、片剂、药丸、鼻喷剂或气雾剂。
9.根据权利要求5所述的多功能活性的融合多肽在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的融合多肽为多肽或其药学上可接受的盐，其剂型为多肽或者其盐的注射剂、胶囊、片剂、药丸、鼻喷剂或气雾剂。
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