ES2327088B1 - Combinaciones terapeuticas para el tratamiento de las metastasis. - Google Patents
Combinaciones terapeuticas para el tratamiento de las metastasis. Download PDFInfo
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Abstract
Combinaciones terapéuticas para el tratamiento
de las metástasis.
La invención se relaciona con composiciones
terapéuticas para el tratamiento de la metástasis y, más
particularmente, la metástasis ósea originada a partir de un cáncer
de pulmón. Las composiciones objeto de la invención comprenden (i)
al menos un inhibidor de TGF\beta1 y (ii) al menos un inhibidor
de MMP. La invención también proporciona métodos y kits basados en
la composición de la invención para el tratamiento o la prevención
de las metástasis, particularmente de las metástasis óseas, para el
tratamiento o prevención de la hipercalcemia asociada a la
metástasis ósea y para el tratamiento o prevención de la resorción
ósea asociada a la metástasis ósea.
Description
Combinaciones terapéuticas para el tratamiento
de las metástasis.
La invención se relaciona con composiciones
farmacéuticas que comprenden un inhibidor de la actividad de
TGF\beta y un inhibidor de la actividad de las metaloproteasas de
matriz (MMP) y con el uso de dichas composiciones para el
tratamiento de metástasis, preferiblemente de metástasis óseas.
La metástasis tumoral es la complicación más
devastadora de muchos cánceres, entre ellos del cáncer de pulmón,
responsable de aproximadamente un 90% de las muertes. La mediana de
supervivencia en pacientes con cáncer pulmonar con metástasis óseas
es de aproximadamente 6 meses, el menor de todos los cánceres que
presentan metástasis óseas.
La metástasis ósea se asocia clínicamente con
dolor, compresión medular y fracturas, desencadenando la muerte. El
proceso de metástasis posee múltiples etapas e implica una acción
coordinada de múltiples genes que permite la invasión e
intravasación, supervivencia en los capilares, detención y en
ocasiones extravasación y finalmente crecimiento en el órgano
diana. La capacidad metastásica de las células tumorales está muy
influenciada por su interacción con el microambiente óseo. Las
interacciones heterotípicas tumor/estroma, las interacciones
célula/matriz, y la estimulación paracrina por factores solubles
pueden modular el comportamiento tumoral.
A pesar de que los mecanismos de inducción,
progresión y metástasis son poco conocidos, se acepta que el
microambiente óseo ejerce un fuerte efecto modulando la migración
celular, su crecimiento e invasión. El hueso es un importante
reservorio de TGF\beta1, un factor de crecimiento soluble que
normalmente es liberado tras la resorción ósea osteoclástica. El
TGF\beta1 está implicado en el desarrollo de metástasis a hueso
del cáncer de mama y el bloqueo de su señalización reduce las
lesiones osteolíticas de este tumor. Se ha observado que diversos
factores presentes en el microambiente óseo como son citoquinas, y
factores de crecimiento entre otros, tienen un efecto permisivo para
el desarrollo de metástasis. El modelo actual de metástasis ósea de
cáncer de mama se basa en la hipótesis de que el TGF\beta
liberado durante la lesión osteolítica estimula la producción de la
proteína relacionada con la hormona paratiroidea (PTHrP) lo que
provoca la secreción por parte de las células del estroma del
activador del receptor de ligando NFkappaB (RANKL), lo que a su vez
origina la diferenciación de los osteoclastos. El elevado número de
osteoclastos provoca un aumento en la resorción ósea resultando en
un aumento en la cantidad de TGF\beta liberado del hueso. Esta
interacción entre células tumorales y el microambiente óseo resulta
en un círculo vicioso de destrucción ósea y crecimiento
tumoral.
A la vista de este modelo, se han desarrollado
distintas terapias antimetastásicas basadas en la inhibición de la
señalización del TGF\beta. Así, Muraoka, R. et al. (J.
Clin. Invest., 2002, 109: 1551-1559) han descrito
la capacidad de un inhibidor de TGF\beta formado por un fragmento
Fc y la porción extracelular del receptor de TGF\beta1 para
inhibir la aparición de metástasis en pulmón de un carcinoma de
mama. Bandyopadhyay, A. et al. (Cancer Res., 2006,
66:6714-6721), Ehata, S. (Cancer Sci., 2007,
98:127-133) y Ge, R, et al. (Clin. Cancer
Res., 2006, 12:4315-4330) han descrito la capacidad
de un inhibidor de la quinasa de TGF\beta1 para inhibir la
metástasis pulmonar y esquelética. Por otro lado, Arteaga, C.L.
et al. (J. Clin. Invest., 1993,
92:2569-2576), Kominsky, S.L: et al. (J. Bone
Miner. Res., 2007, 22:37-44) han descrito la
capacidad de un receptor dominante negativo de TGF\beta1 de
inhibir la metástasis ósea de un carcinoma renal y Hoeer, M. y
Anderer, F.A. (Cancer Immunol. Immunother. 1995
41:302-8) han descrito la capacidad de anticuerpos
anti-TGF\beta para inhibir la metástasis de una
línea de carcinoma de mama.
En las solicitudes internacionales de patente
WO2005/019244 y WO0031135 se describen una serie de péptidos con
capacidad de unirse al TGF\beta1, entre ellos el péptido p17 (SEQ
ID NO: 1) y el péptido p144 que posee la capacidad de inhibir la
actividad biológica de TGF\beta1 in vitro (restableciendo
el crecimiento de la línea celular
Mv-1-Lu) e in vivo
(inhibiendo la inducción de ARNm de colágeno tipo 1 por TGF\beta1
en un modelo de daño hepático agudo). Sin embargo, en este
documento no se indica que p17 o p144 puedan ser de utilidad en el
tratamiento de la metástasis.
En la solicitud internacional de patente
WO2005/059133 se describe una terapia de combinación que comprende
un antagonista de TGF\beta1 (antisense, receptores solubles y
similares) y un agente antineoplásico quimioterapeútico. Sin
embargo, en este documento no se describe la posibilidad de emplear
dicha terapia de combinación para el tratamiento específico de
metástasis óseas.
La solicitud de patente europea EP1568383
menciona el uso de oligonucleótidos antisentido específicos para la
secuencia de distintos mARNs, entre ellos los mARNs que codifican
TGF\beta1, TGF\beta3 y MMPs para inhibir la formación de
metástasis. Sin embargo, en este documento no se ejemplifica la
utilidad de ninguno de estos compuestos, ni de forma aislada ni en
combinación, para el tratamiento de metástasis.
La capacidad de TGF\beta de promover
metástasis parece residir en la capacidad de esta molécula de
aumentar la expresión de las metaloproteinasas de matriz (MMPs) en
determinadas líneas celulares (Duivenvoorden, W.C. et al.,
Clin. Exp. Metastasis, 1999, 17:27-34). Así,
existen numerosas evidencias que indican que es posible prevenir la
metástasis en distintos tejidos mediante la administración de
inhibidores de las MMPs. Por ejemplo, Maekawa, R. et al.
(Clinical & Experimental Metastasis, 2000,
18:61-66) han descrito la capacidad de un inhibidor
de la metaloproteinasa de matriz (MMP) para inhibir la metástasis
en hígado y en pulmón de células derivadas de un carcinoma de
colon. Oba, K. et al. (Cancer Lett., 2002,
175:45-51) han descrito la capacidad del inhibidor
de MMP-2 y MMP-9
(MMI-166) de prevenir la metástasis hepática de un
tumor de colon. Ohta, M. et al. (Jpn. J. Cancer Res., 2001,
92:688-695) han descrito la capacidad de una
terapia combinada del inhibidor de MMP-2 y
MMP-9 MMI-166 y mitomicina C para
prevenir la metástasis hepática del cáncer de colon. Maki, H. et
al. (Clin. Exp. Metastasis, 2002, 19:519-26)
han descrito la capacidad de una terapia combinada del inhibidor de
MMP-2 y MMP-9
MMI-166 y del inhibidor de la topoisomerasa
CPT-11 para inhibir la metástasis hepática de una
línea celular de colon. Berton,A. et al. (J.Biol. Chem.,
2001, 276:20458-20465) han descrito la capacidad del
ácido elaídico (t9-18:1) para inhibir
MMP-2 y MMP-9.
Sin embargo, a pesar de la importancia clínica
de la metástasis ósea, existen pocos tratamientos disponibles para
dicha condición. Por tanto, existe una necesidad en la técnica de
agentes que sean capaces de impedir la metástasis tumoral.
En un primer aspecto, la invención se relaciona
con una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1 y
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP
en donde si el inhibidor de TGF\beta1 es un
anticuerpo anti-TGF\beta1, el inhibidor de la MMP
no es un derivado del ácido elaídico.
\vskip1.000000\baselineskip
En un segundo aspecto, la invención se relaciona
con una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
En un tercer aspecto, la invención se relaciona
con una preparación farmacéutica que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva de una composición de la invención y un
carrier farmacéuticamente aceptable.
En un cuarto aspecto, la invención se relaciona
con el uso de una composición farmacéutica que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de las metástasis.
\vskip1.000000\baselineskip
En un quinto aspecto, la invención se relaciona
con el uso de una composición farmacéutica que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de la hipercalcemia asociada a la
metástasis ósea.
\newpage
En un sexto aspecto, la invención se relaciona
con el uso de una composición farmacéutica que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1 y
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de la resorción ósea asociada a la
metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
En un séptimo aspecto, la invención se relaciona
con un kit que comprende en uno o varios contenedores
- (i)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de TGF\beta1,
- (ii)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- opcionalmente, una formulación farmacéuticamente aceptable de un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
En un octavo aspecto, la invención se relaciona
con el uso de un inhibidor de MMP para potenciar el efecto
antimetastásico de un inhibidor de TGF\beta1.
Figura 1A: Actividad proteolítica en
sobrenadantes de células de cáncer de pulmón no microcíticas,
incubadas solas con medio (vehículo) o en
co-cultivos con células estromales
ST-2, en donde las células de cáncer de pulmón no
han sido transducidas (control), o han sido transducidas con
SUSD5/TCF4/PRKD3 (Células met. 1) o con MCAM/TCF4/PRKD3 (Células
met. 2). La actividad proteolítica se expresa como incremento
relativo de la fluorescencia (%\Delta RFU). Los valores
representan la media \pm SEM (* p< 0,05; ** p<0,01; ***
p<0,001).
Figura 1B: Actividad proteolítica en
sobrenadantes de células de cáncer de pulmón no microcíticas con
tropismo óseo transducidas con SUSD5/TCF4/PRKD3 (Células met. 1) o
MCAMITCF4/PRKD3 (Células met. 2), incubadas en
co-cultivo con células ST-2. Se
valoró la actividad proteolítica en presencia de aprotinina, GM6001
300 \muM y GM6001 600 \muM. Los valores representan la media
\pm SEM (* p< 0,05; ** p<0,01; *** p<0,001).
Figura 2A: Esquema experimental del modelo de
metástasis ósea con indicación de los tiempos de administración de
los agentes a ensayar.
Figura 2B: Curvas Kaplan-Meier
de supervivencia de ratones nu/nu inoculados por vía intracardiaca
con células de cáncer de pulmón altamente metastásicas con tropismo
a hueso en animales tratados con vehículo solamente (control),
tratados con p144, tratados con GM6001 y tratados con una
combinación de p144 y GM6001.
Figura 2C: Panel superior: Perfiles de
metástasis ósea en ratones nu/nu inoculados por vía intracardiaca
con células de cáncer de pulmón altamente metastásicas con tropismo
a hueso y transfectadas con luciferasa en los días 8, 15 y 19 tras
la inoculación de las células y tratados con vehículo (control),
p144, GM6001 y una combinación de p144 y GM6001. Panel
inferior: Representación gráfica de la luminiscencia emitida por
los animales analizados en el panel izquierdo, representada como
emisión normalizada de fotones.
Figura 2D: Representación del área de metástasis
frente al total de superficie ósea (%) en ratones nu/nu inoculados
por vía intracardiaca con células de cáncer de pulmón altamente
metastásticas con tropismo a hueso tratados con vehículo (control),
p144, GM6001 y la combinación de GM6001 y p144. Los valores
representan la media \pm SEM (* p< 0,05; ** p<0,01; ***
p<0,001, calculado mediante rank sum test con ajuste de
Bonferroni).
Figura 2E: Imágenes representativas tomadas de
la extremidad inferior en ratones nu/nu inoculados por vía
intracardiaca con células de cáncer de pulmón altamente
metastásticas con tropismo a hueso sometidos a tratamientos con
vehículo (control), p144, GM6001 y la combinación de GM6001 y p144.
Panel superior: imágenes de rayos X; Panel
intermedio: reconstrucción tridimensional mediante tomografía
computerizada (\muCT scanning); Panel inferior: imágenes de
secciones teñidas con hematoxilina-eosina, donde
los asteriscos indican la presencia de tumores.
Los autores de la presente invención han puesto
de manifiesto que el uso combinado de un inhibidor de TGF\beta1 y
de un inhibidor de MMP tiene un efecto sinergístico en la reducción
de la metástasis ósea y de la carga tumoral en el hueso en relación
al resultado observado cuando los distintos agentes se usan por
separado.
Así, en un primer aspecto, la invención se
relaciona con una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1 y
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP
en donde si el inhibidor de TGF\beta1 es un
anticuerpo anti-TGF\beta1, el inhibidor de la MMP
no es un derivado del ácido elaídico.
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Por "inhibidor de TGF\beta1" se entiende
en el contexto de la presente invención, cualquier compuesto capaz
de impedir la transmisión de la señal causada por la interacción de
TGF\beta1 con su receptor. Inhibidores de TGF\beta1 que pueden
ser utilizados en el contexto de la presente invención incluyen
compuestos que impiden de forma competitiva o alostérica la unión
de TGF\beta1 a su receptor, compuestos que secuestran o unen
TGF\beta1 y compuestos capaces de inhibir la señalización
intracelular de TGF\beta1. Preferiblemente, la invención
contempla el uso de inhibidores que actúan impidiendo la unión de
TGF\beta1 a su receptor tales como proteínas solubles que se unen
y secuestran TGF\beta1 de forma natural (LAP, decorina,
biglicano, fibromodulina, lumicano, endoglina, macroglobulina
alpha2), receptores que compiten con el receptor endógeno de
TGF\beta1 por la unión al ligando, como por ejemplo, BAMBI, o
receptores que potencian la unión de TGF\beta1 a su receptor de
tipo II, como por ejemplo el betaglicano. Entre los inhibidores de
TGF\beta que impiden la unión de TGF\beta a sus receptores se
encuentra los anticuerpos policlonales y monoclonales específicos
para el TGF\beta, anticuerpos policlonales y monoclonales
específicos para el receptor de TGF\beta y formas solubles del
receptor de TGF\beta. En una forma de realización preferida, el
inhibidor de TGF\beta es un péptido sintético seleccionado por su
capacidad de unirse a TGF\beta1 y de inhibir su actividad.
Ejemplos de dichos péptidos sintéticos son los descritos en las
solicitudes internacionales de patente WO0031155, WO200519244 y
WO0393293, cuyo contenido se incorpora en su totalidad a la
presente invención. En una forma particular de realización, el
inhibidor de TGF\beta es un péptido seleccionado del grupo del
péptido p17 (SEQ ID NO:1), los péptidos
p17(1-11) (SEQ ID NO:2),
p17(1-12) (SEQ ID NO:3),
p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y
p17(1-14) (SEQ ID NO:5) que corresponden a
variantes de p17 truncadas en su extremo C-terminal
de, respectivamente, 11, 12, 13 y 14 amino ácidos, así como las
variantes de los péptidos p17(1-11),
p17(1-12), p 17(1-13)
y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o
acetilación. En otra forma preferida de realización, el inhibidor
de TGF\beta es el péptido p144 (SEQ ID NO:6). En otra forma
preferida de realización, el inhibidor de TGF\beta es una variante
funcionalmente equivalente de los péptidos definidos por las
secuencias SEQ ID NO:1 a 6. Por variante funcionalmente equivalente
de los péptidos p17 y p144 se entiende cualquier péptido cuya
secuencia se pueda obtener mediante inserción, sustitución o
eliminación de uno o más aminoácidos de las secuencias de SEQ ID
NO:1 y 2 y que conserve al menos parcialmente la capacidad de
inhibir TGF\beta1. Ensayos adecuados para determinar la capacidad
de un determinado compuesto de inhibir la actividad TGF\beta1
incluyen el ensayo de inhibición de crecimiento de la línea celular
MV-1-Lu así como el ensayo de
inhibición de la fibrosis hepática en modelos animales de cirrosis
inducida por CCl_{4} según se describen en WO0031155 y
WO200519244.
Por "inhibidor de MMP" se entiende en el
contexto de la presente invención, un compuesto capaz de bloquear
sustancialmente la actividad proteolítica de al menos una isoforma
de MMP con una concentración inhibidora 50 (IC50) de al menos 100
nM, al menos 50 nM, al menos 10 nM, al menos 9 nM, al menos 8 nM,
al menos 7 nM, al menos 6 nM, al menos 5 nM, al menos 4 nM, al menos
3 nM, al menos 2 nM, al menos 1 nM, al menos 0,9 nM, al menos 0,8
nM, al menos 0,7 nM, al menos 0,6 nM, al menos 0,5 nM, al menos 0,4
nM, al menos 0,3 nM, al menos 0,2 nM o al menos 0,1 nM de al menos
una MMP seleccionada del grupo de MMP-1,
MMP-2, MMP-3, MMP-4,
MMP-5, MMP-6,
MMP-7, MMP-8, MMP-9,
MMP-10, MMP-11,
MMP-12, MMP-13,
MMP-14, MMP-15,
MMP-16, MMP-17,
MMP-18, MMP-19,
MMP-20, MMP-21,
MMP-22, MMP-23,
MMP-24, MMP-25,
MMP-26, MMP-27,
MMP-28, MMP-29 y
MMP-30. La invención contempla el uso tanto de
inhibidores de MMPs de amplio espectro capaces de bloquear la
actividad de un número sustancial de isoformas de MMP como
inhibidores específico para un número reducido de isoformas de MMP.
En este último caso, la MMP bloqueada es preferiblemente
MMP-2 o MMP-9. Inhibidores útiles
en el contexto de la presente invención incluyen compuestos
sintéticos tales como ilomastat
(hidroxamidocarbonilmetil-4-metilpentanoil-L-triptófano
metilamida), marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat,
solimastat, tanomastat, trocade, AG3340,
BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la
metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4, los inhibidores peptídicos
descritos en WO2005103071, los derivados de la triazolona descritos
en WO2005095362, los derivados del ácido hidroxámico descritos en
WO2005077937 y WO2005042521, las baril sulfonamidas descritas en
WO2005061477, los compuestos descritos en WO2005026120 y
WO2005016868, los derivados de trioxopirimidina descritos en
US6110924, los compuestos amídicos o peptidilamídicos que contienen
grupos tiol descritos, por ejemplo, en WO95/12389. Ensayos
adecuados para determinar la capacidad de compuestos de inhibir la
actividad MMP incluyen, por ejemplo, los ensayos de procesamiento
del activador de plasminógeno tipo uroquinasa (uPAR) mediado por
MMP-9 según se describe en WO2005103071, así como
ensayos comerciales que permiten la identificación en paralelo de
inhibidores de varias MMPs, tales como el "MMP Profiling Kit"
de BIOMOL, basado en la detección de la inhibición del
procesamiento del péptido fluorogénico OmniMMP
(Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2,
en donde Mca corresponde a
7-metoxicumarin-4-il)-acetil
y Dpa corresponde a
N-3-(2,4-dinitrofenil)-L-a-\beta-diaminopropionil)
o el kit de detección de R&D systems, basado en la
fluorescencia resultante de la degradación de un péptido flurogénico
sintético
(Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nval-Trp-Arg-Lys-(Dnp)-NH2).
La invención también contempla terapias
combinadas en las que se utilizan simultaneao secuencialmente las
composiciones de la invención junto con otros agentes que son
capaces de prevenir o de inhibir la metástasis ósea o con agentes
quimioterapeúticos convencionales.
Así, en otro aspecto, la invención se relaciona
con una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
Agentes quimioterapeúticos que pueden ser usados
en el contexto de la presente invención en combinación con las
composiciones de la invención incluyen agentes alquilantes,
antraciclinas, antibióticos, antifolatos, antimetabolitos, agentes
antitubulina, sensibilizadores de quimioterapia, agentes que se
unen al surco menor del ADN, inhibidores de la replicación del ADN,
duocarmicinas, etopósidos, pirimidinas fluorinadas, lexitropsinas,
toxinas de plantas y microbios, nitrosoureas, platinoles,
antimetabolitos de purina, puromicinas, esteroides, taxanos,
inhibidores de la topoisomerasa; alcaloides de la vinca y
similares.
Ejemplos de compuestos inhibidores de la
metástasis ósea son los bifosfonatos, como por ejemplo el
alendronato, zoledronato, clodronato, palmidronato o etridronato,
tiludronato, ibandronato o risedronato, tal y como se ha descrito en
WO2002/087555, inhibidor del activador del receptor del ligando de
NF-\kappaB (RANKL), tal y como ha sido descrito
por Michigami, T. et al. (Cancer Res., 2001,
61:1637-1644), inhibidores de la óxido nítrico
sintasa inducible (iNOS), según se describe en WO1999007412, fosfato
de estramustina, tal y como se describe en WO2002007719, epotilonas
según se describe en WO2006032537, el inhibidor de la actividad
tirosínquinasa de bcr-abl dasatinib, según se
describe en WO2007047893, antagonistas de M-CSF
según se describe en WO200781879, PSP-94, según se
describe en WO0339576. En una forma de realización preferida, el
agente para el tratamiento de la metástasis ósea es un bifosfonato
o un derivado del mismo o un inhibidor de RANKL.
En una forma de realización preferida, el
inhibidor de TGF\beta se selecciona del grupo de el péptido p17
(SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID
NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3),
el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4), el
péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5) y el péptido
p144 (SEQ ID NO:6) o una variante funcionalmente equivalente de los
mismos. En otra forma de realización preferida, el inhibidor de MMP
es ilomastat. En una forma de realización aun más preferida, la
composición comprende el péptido p17 e ilomastat.
La combinación de acuerdo a la presente
invención puede incorporarse en una composición farmacéutica para
su uso en medicina. Así, en otra forma de realización, la invención
se relaciona con una preparación que comprende una cantidad
terapéuticamente efectiva de una composición de la invención y un
carrier farmaceúticamente aceptable. En otra forma de realización,
la invención se relaciona con una composición de acuerdo a la
invención para su uso en medicina.
Para uso en medicina, las combinaciones de
compuestos de la invención pueden encontrarse en forma de prodroga,
sal, solvato o clatrato, bien de forma aislada o bien en
combinación con agentes activos adicionales. Las combinaciones de
compuestos de acuerdo con la presente invención pueden ser
formuladas conjuntamente con un excipiente que sea aceptable desde
el punto de vista farmacéutico. Excipientes preferidos para su uso
en la presente invención incluyen azúcares, almidones, celulosas,
gomas y proteínas. En una realización particular, la composición
farmacéutica de la invención se formulará en una forma farmacéutica
de administración sólida (por ejemplo comprimidos, cápsulas,
grageas, gránulos, supositorios, sólidos estériles cristalinos o
amorfos que pueden reconstituirse para proporcionar formas líquidas
etc.), líquida (por ejemplo soluciones, suspensiones, emulsiones,
elixires, lociones, ungüentos etc.) o semisólida (geles, pomadas,
cremas y similares). En otra realización particular, las
composiciones farmacéuticas de la invención pueden ser administradas
por cualquier ruta, incluyendo, sin ser limitante, oral,
intravenosa, intramuscular, intrarterial, intramedular, intratecal,
intraventricular, transdérmica, subcutanea, intraperitoneal,
intranasal, entérica, tópica, sublingual o rectal. Una revisión de
las distintas formas de administración de principios activos, de
los excipientes a utilizar y de sus procedimientos de fabricación
puede encontrarse en el Tratado de Farmacia Galénica, C. Faulí i
Trillo, Luzán 5, S.A. de Ediciones, 1993 y en Remington's
Pharmaceutical Sciences (A.R. Gennaro, Ed.), 20' edición, Williams
& Wilkins PA, USA (2000). El experto en la materia advertirá que
la dosis adecuada y la cantidad terapéuticamente efectiva del
inhibidor deberá ser optimizada para cada caso particular
dependiendo de factores tales como la edad, el peso y la condición
médica del individuo, la severidad de la enfermedad, la ruta y
frecuencia de la administración, el compuesto particular empleado,
la localización de la metástasis así como las propiedades
farmacocinéticas del individuo. Las composiciones farmacéuticas
objeto de la invención pueden contener una cantidad de los
principios activos que oscila entre 0,1 y 2000 mg, preferiblemente
en el rango de 0,5 a 500 mg y aún más preferiblemente entre 1 y 200
mg. Dosis apropiadas de las composiciones pueden oscilar entre 0,01
a 100 mg/kg de peso corporal, preferiblemente entre 0,1 a 50 mg/kg
de peso corporal, con el fin de alcanzar niveles plasmáticos de los
principios activos del orden de 100 a 5000 nM, tales como 300 a
2000 nM. Las composiciones se pueden administrar un número variable
de veces al día, particularmente de 1 a 4 dosis al día.
Las composiciones de acuerdo a la invención han
demostrado ser capaces de impedir y prevenir la aparición de
metástasis óseas originadas a partir tumores pulmonares. Por
metástasis se entiende, en el contexto de la presente invención, el
proceso por el cual células cancerosas se propagan a otros órganos
distintos a donde se originó el tumor primario por medio de canales
linfáticos y vasos sanguíneos. El experto en la materia advertirá
que las composiciones de la presente invención resultan de utilidad
no sólo para el tratamiento o prevención de la metástasis ósea
originada a partir de tumores de pulmón, sino que pueden tener una
aplicabilidad más general para la inhibición de cualquier tipo de
metástasis formada a partir de prácticamente cualquier tipo de
tumor. Así, en otra forma de realización, la invención se relaciona
con el uso de una composición de la invención o de una preparación
farmacéutica de la invención para la preparación de un medicamento
para el tratamiento de la metástasis.
La invención contempla el uso de las
composiciones de la invención para el tratamiento de las metástasis
en cualquier órgano del cuerpo, tales como cabeza y cuello (cara,
ojo, boca, lengua, dientes, nariz, orejas, cuero cabelludo,
laringe, faringe, glándulas salivares, meninges, cerebro, glándula
tiroidea y paratiroidea), espalda y columna vertebral (vértebras y
médula espinal), tórax (glándulas mamarias, costillas, pulmones,
corazón, mediastino, esófago y diafragma), abdomen (peritoneo,
estómago, duodeno, intestino, colon, hígado, riñón, glándula
suprarrenal, apéndice y páncreas), pelvis (sacro, cóccix, ovarios,
trompa de Falopio, útero, vagina, vulva, clítoris, perineo, vejiga
urinaria, testículos, recto y pene) y extremidades (músculo, hueso,
nervios, mano, muñeca, codo, hombro, cadera, rodilla o
tobillo).
Por otro lado, los tumores a partir de los que
se origina la metástasis incluyen, sin ser limitante, tumores de
pulmón, de próstata, de cabeza y cuello, de testículo, de cerebro,
de piel, de colon, de recto, de esófago, de traquea, de páncreas, de
hígado, de mama, de ovario, de sistema linfático, leucemia,
cervical, melanoma, de riñón, de vejiga, de tiroides, de hueso y de
estómago. En una forma de realización preferida, el tumor que
origina la metástasis es un tumor que muestra una alta propensión a
metastatizar en tejido óseo, tales como carcinomas y, más
particularmente, tumores de pulmón, mama, próstata, tiroides y
riñón.
En una forma preferida de realización, la
metástasis que se trata usando las composiciones de la invención
son metástasis óseas. En una forma más preferida, la metástasis se
origina a partir de un cáncer de pulmón. En una forma de realización
aún más preferida, el cáncer de pulmón que origina la metástasis es
un cáncer no microcítico. En una forma de realización aún más
preferida el cáncer de pulmón no microcítico se selecciona del
grupo de carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma y carcinoma
de células grandes.
Asimismo, las combinaciones objeto de la
presente invención resultan de utilidad para el tratamiento y
prevención de otras condiciones asociadas con la metastasis ósea
tales como la hipercalcemia y la resorción ósea. Así, en otra forma
de realización, la invención se relaciona con el uso de una
composición según la invención para la preparación de un
medicamento para el tratamiento de la hipercalcemia asociada a la
metástasis ósea. En otra forma de realización, la invención se
relaciona con el uso de una composición según la invención para la
preparación de un medicamento para el tratamiento de la resorción
ósea asociada a la metástasis ósea. Las composiciones de la
invención, cuando se utilizan para el tratamiento o prevención de la
hipercalcemia o de la resorción ósea se usan preferentemente cuando
la metástasis ósea que origina dichos síntomas es una metástasis
ósea originada a partir de un cáncer de pulmón. Preferiblemente, el
cáncer de pulmón del que se originan las metástasis es un cáncer no
microcítico.
Las composiciones farmacéuticas objeto de la
presente invención pueden encontrarse en forma de kit. Así, en otro
aspecto, la invención se relaciona con un kit que comprende en uno
o varios contenedores
- (i)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de TGF\beta1
- (ii)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de MMP y
- (iii)
- opcionalmente, una formulación farmacéuticamente aceptable de un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
Por "kit" se entiende, en el contexto de la
presente invención, un producto que contiene los distintos
principios activos que forman la composición empaquetados para
permitir su transporte, almacenamiento y administración de forma
simultanea o secuencial. Así, los kits de la invención pueden
contener una o más soluciones oftálmicas, suspensiones,
comprimidos, capsulas, inhaladores, jeringuillas, parches y
similares que contienen los principios activos de acuerdo a la
invención y que se pueden encontrar preparadas en forma de una
dosis única o como múltiples dosis. Adicionalmente, el kit puede
contener el vehículo adecuado para la resuspensión de las
composiciones de la invención tales como medios acuosos tales como
solución salina, solución Ringer, solución Ringer lactato,
dextrosa, dextrosa y cloruro sódico, medios solubles en agua tales
como alcohol, polietilenglicol, polipropilenglicol y vehículos
insolubles en agua tales como aceite de maíz, aceite de semillas de
algodón, aceite de cacahuete, aceite de sésamo, oleato de etilo,
miristato de isopropilo, y benzoato bencílico. Otro componente que
puede estar presente en el kit es un empaquetamiento que permite
mantener las formulaciones de la invención dentro de unos límites
determinados. Materiales adecuados para la preparación de tales
empaquetamientos incluyen cristal, plástico (polietileno,
polipropileno, policarbonato y similares), botellas, viales, papel,
sobres y similares. Adicionalmente, los kits de la invención pueden
contener instrucciones para la administración simultánea,
secuencial o separada de los distintos componentes que se
encuentran en el kit. Dichas instrucciones pueden encontrarse en
forma de material impreso o en forma de un soporte electrónico
capaz de almacenar instrucciones de forma que puedan ser leídas por
un sujeto, tales como medios de almacenamiento electrónicos (discos
magnéticos, cintas y similares), medios ópticos
(CD-ROM, DVD) y similares. Adicional o
alternativamente, los medios pueden contener direcciones de
Internet que proporcionen dichas instrucciones.
En otro aspecto, la invención se relaciona con
el uso de un inhibidor de MMP para potenciar el efecto
antimetastásico de un inhibidor de TGF\beta-1.
En una forma de realización preferida, el
inhibidor de TGF\beta se selecciona del grupo de el péptido p17
(SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID
NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3),
el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4), el
péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5) y el péptido
p144 (SEQ ID NO:6) o una variante funcionalmente equivalente de los
mismos.
La invención se describe a continuación mediante
los siguientes ejemplos que tienen un carácter ilustrativo y en
ningún caso limitativo.
Se realizaron ensayos in vitro mediante
cocultivo de células tumorales y células estromales, con el
objetivo de mimetizar y reproducir las interacciones
estroma-tumor que tienen lugar in vivo.
Por una parte se utilizaron células
NCI-H460 (ATCC, HTB-177). Estas
células fueron aisladas originalmente a partir de una efusión
pleural de un varón diagnosticado de carcinoma de células grandes
aisladas originalmente por Banks-Schlegel, S. P.
et al. (Cancer Res., 1985, 45:1187-1197).
Estas células H460 conservan intacta la proteína p53 y presentan
una mutación homocigótica en el codon 183 de
K-Ras.
Por otra parte, se utilizaron células estromales
ST2 (Riken Cell Bank, Tsukuba, Japan) que se cultivaron en medio
DMEM con 10% de suero fetal bovino. El resto de las células se
mantuvieron en medio RPMI 1640 suplementado con 10% de suero fetal
bovino.
Para los ensayos se sembraron células H460 (1 x
10^{6}) en placas de cultivo de 10 cm, solas o en
co-cultivo con células ST2 (5 x 10^{5}), durante 6
días. En algunos ensayos, el cultivo se realizó utilizando células
H460 que habían sido transducidas usando el vector retroviral
pBabe-Neo con la combinación de los genes SUSD5,
TCF4 y PRKD3 o alternativamente con el triplete génico
MCAMITCF4/PRKD3. En investigaciones anteriores, los investigadores
han podido comprobar que la sobrexpresión concomitante de estos
genes en células H460 promueve una mayor actividad metastásica, con
un marcado tropismo a hueso. Las células se transdujeron con
vectores retrovirales tal como ha sido descrito anteriormente
(González et al. J. Mol. Med., publicado online el 24 de
abril de 2007). Después de 48 horas de incubación se recogió el
medio o sobrenadante en el que habían crecido las células y se
utilizó para diversos ensayos: tratamiento de células H460, ensayos
de actividad de metaloproteasas, etc. Al final del periodo de
incubación se realizó también extracción de RNA mediante el kit
RNeasy (Qiagen, Hilden, Germany) para análisis de expresión.
\vskip1.000000\baselineskip
Se cultivaron células altamente metastásicas con
tropismo a hueso (Número de acceso ECACC 06091547) (derivadas de
células NCI-H460 en RPMI al 10% FBS (suero bovino
fetal). Se trata de una subpoblación de células derivadas de un
carcinoma de células grandes de pulmón no microcítico humano,
originalmente aislado a partir de un ganglio linfático de un varón
de raza negra y 54 años de edad diagnosticado de un tumor en fase
3. Estas células, con marcado tropismo a hueso, se caracterizan
también porque están transfectadas de forma estable con el gen
reportero de la luciferasa (Plásmido Triple modality
SFG-NES-TGL, donado por V.
Ponomarev, MSKC, New York, USA) para poder monitorizar el tropismo
mediante la obtención de imágenes por bioluminiscencia in
vivo.
Para su inyección por vía intracardiaca, las
células fueron sembradas el día anterior a la inyección a una
confluencia del 50%. Las células fueron lavadas en PBS, y
resuspendidas a una concentración de 2 x 10^{6} células/ml en PBS
estéril. Para su inyección la viabilidad celular fue siempre
\geq95%. La inyección intracardiaca se realizó sobre ratones
nu/nu (Harlan, Barcelona, España). Los ratones fueron anestesiados
con ketamina (100 mg/kg de masa corporal) y xilazina (10 mg/kg)
antes de la inyección intracardiaca de las células. Se inyectaron
200.000 células en 100 de esta solución en el ventrículo izquierdo
del corazón de ratones hembra de 4 semanas de edad mediante una
aguja de calibre 29G. Aquellos animales que mostraban un tumor en el
compartimento torácico tras el sacrificio fueron eliminados del
experimento. Este problema técnico ocurrió en menos de un 0,5% de
los animales inyectados.
Tras la inyección de las células, se monitorizó
la bioluminiscencia in vivo de forma periódica (cada dos
semanas) mediante la inyección de D-luciferina (3
mg/100 \mul, Xenogen Inc.). Igualmente, se obtuvieron
radiografias de contacto en animales en posición decúbito
prono para monitorizar las lesiones óseas empleando un aparato
Faxitron (Modelo MS-20) con una película
MNR-2000 de alta sensibilidad (Kodak), empleando
una exposición de 20 segundos a 20 kV, y x2 aumentos. Las películas
fueron reveladas empleando un sistema de procesamiento automatizado
(Kodak).
El análisis de la región radioluminiscente fue
cuantificada mediante software AnalySIS® (Soft Imaging System GmbH,
M inster, Alemania). Se obtuvieron imágenes de x 2 aumentos a 1200
ppi mediante un escáner Epson Expression 1680 Pro (Long Beach, CA,
USA). La cuantificación del área metastásica se realizó tras la
calibración empleando el software de análisis de imágenes. Las
radiografías fueron evaluadas sin conocer el grupo de tratamiento
al que correspondían.
Para el análisis histológico se extirparon las
extremidades posteriores, se retiraron los tejidos blandos del
fémur, y se fijaron los huesos durante 24 h en formalina tamponada
neutra al 10%. A continuación se deshidrataron y descalcificaron los
huesos en una solución que contenía EDTA al 14%. Después de una
deshidratación completa, los huesos fueron incluidos en parafina,
para posteriormente obtener secciones de 5 \mum. Algunas de las
secciones se tiñeron con hematoxolina/eosina.
\vskip1.000000\baselineskip
Al efecto de evaluar el papel que la actividad
proteolítica de las metaloproteasas juega en la osteolisis
producidas por la metastásis óseas del cáncer de pulmón, se valoró
la actividad proteolítica en los sobrenadantes de los
co-cultivos de células H460 y células ST2
anteriormente descritos.
Para valorar la actividad proteolítica en los
sobrenadantes de los cultivos control y co-cultivos
se utilizó un ensayo de fluorescencia basado en la degradación de un
péptido flurogénico sintético
(Mca-Arg-Pro-Lys-Pro-Val-Glu-Nval-Trp-Arg-Lys-(Dnp)-NH2)
(R&D systems, Minneapolis, Minnesota). Este péptido es un
sustrato adecuado para MMP3, MMP 10 y otras metaloproteasas. Los
sobrenadantes de los cultivos, así como los medios de control
utilizados, se incubaron a 37ºC durante 1 h en presencia del
péptido fluorogénico a una concentración final de 20 \muM.
Opcionalmente, algunas series de experimentos se realizaron en
presencia de otras sustancias inhibidoras de la actividad proteasa
a ensayar, como por ejemplo: aprotinina (Sigma), un inhibidor de
serina-proteasas; GM6001 (Ryss Labs, CA, USA),
GM6001, un inhibidor de la actividad de metaloproteasas de amplio
espectro; o p17, un péptido inhibidor de la actividad TGF\beta1
(SEQ ID NO: 1). La aprotinina se utilizó a una concentración final
de 1 UI/\muL. El GM6001 se utilizó a una concentración de 300 y
600 \muM.
La medida de la fluorescencia se realizó en un
espectrofotómetro de fluorescencia (excitación 320 nm, emisión 405
nm, Spectra MAX GeminiXS, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA).
La actividad de las metaloproteasas se calculó determinando la
pendiente de la curva de fluorescencia en la zona lineal en varios
experimentos independientes.
Se observó que los sobrenadantes de
co-cultivos de células ST2 con células H460 que
sobrexpresan cualquiera de las combinaciones SUSD5/TCF4/PRKD3
(Células met. 1) o MCAM/TCF4/PRKD3 (Células met. 2) presentan una
mayor actividad proteolítica que los co-cultivos
control con células H460 no transducidas (Fig. 1A), con un aumento 1
aproximado de actividad del 40% (p<0,05).
Por otra parte, cuando los sobrenadantes de los
co-cultivos con células H460 transducidas se
trataron con aprotinina se observó una inhibición de aproximadamente
el 20% de la actividad proteolítica. Sin embargo, el tratamiento
con el inhibidor GM6001 inhibió casi completamente la actividad
proteolítica, de manera dependiente de dosis (Fig. 1B). Sin
embargo, el tratamiento con el péptido p17 inhibidor de la
actividad TGF\beta1 no afectó a la actividad proteolítica, que fue
semejante a la observada en los controles no tratados con el
péptido.
En conjunto, estos resultados indican que la
degradación ósea que se produce in vivo puede estar mediada
en parte por mecanismos que implican a metaloproteasas liberadas al
medio como consecuencia de las interacciones que se producen entre
las células metastásicas y las células del estroma.
\vskip1.000000\baselineskip
Se comprobó si la inhibición de la señalización
mediada por TGF\beta1 junto con la inhibición de la actividad de
las metaloproteasas podía disminuir la actividad metastásica en el
modelo de metástasis ósea en el cáncer de pulmón no microcítico
anteriormente descrito.
En este experimento, 28 ratones nu/nu fueron
inoculados por vía intracardiaca (i.c.) con células H460 (ECACC
Accesion Number 06091547) y posteriormente separados aleatoriamente
en cuatro grupos de ratones (n=7). Como péptido inhibidor de la
actividad TGF\beta1 se utilizó el p144 (SEQ. ID. NO: 6) a una
dosis de 50 \mug/Kg en 200 \muL de suero fisiológico. Como
inhibidor de la actividad MMP se empleó GM6001 (Ilomastat) a una
dosis de 200 mg/Kg en 200 \muL de suero fisiológico. Los ratones
de cada grupo recibieron uno de los siguientes tratamientos
(sustancia a ensayar): 1.- vehículo; 2.- p144; 3.- GM6001; o bien
4.- un tratamiento combinado con p144 y GM6001. El régimen
terapéutico consistió en la administración diaria por vía
intraperitoneal de la sustancia a ensayar, a partir del día 5 hasta
el sacrificio en el día 21, siendo el día 0 el día en el que se
realiza la inoculación de las células H460 por vía intracardiaca.
Antes del sacrificio el día 21 post-inoculación, se
realizaron radiografías de fémures y tibias. El esquema del
experimento viene representado en la figura 2A.
En la figura 2B se representa gráficamente el
efecto de los diferentes tratamientos sobre la supervivencia total
libre de metástasis (curvas Kaplan-Meier). Mientras
que en el tratamiento con p144 todos los animales habían muerto
antes del día 27, y en el tratamiento control con vehículo todos
habían muerto a los 19 días, todos los animales tratados con GM6001
y el grupo tratado con una combinación de p144 y GM6001 vivían más
allá de los 29 días.
En la figura 2C se recoge gráficamente el efecto
del tratamiento sobre la carga tumoral (número de células
metastásicas) en los tejidos, cuantificada mediante medida de la
luminiscencia (en los días 8, 15 y 19 desde la inoculación)
producida por la expresión de la luciferasa en dichas células. Como
puede observarse, en todos los animales se produce un aumento de la
luminiscencia hasta el día 15. Entre el día 15 y 19 la
luminiscencia se mantuvo o aumentó notablemente en los animales del
grupo control o tratados con el péptido p144, mientras que aumentó
suavemente en el grupo tratado con GM6001 y disminuyó ligeramente
en el grupo que recibió una combinación de p144 y GM6001 como
tratamiento.
Por último, se comprobó también que los diversos
tratamientos disminuyeron el tamaño del área metastásica,
porcentaje del área de metástasis frente al área total de hueso,
respecto a los valores observados en los ratones control que habían
sido tratados con el vehículo. El tratamiento con p144 no resultó
en una disminución del área metastatizada estadísticamente
significativa con respecto al vehículo. Sin embargo, el tratamiento
con GM6001 resultó en una disminución del área de metástasis
estadísticamente significativa (p<0,05) con respecto al
vehículo. Sin embargo, la combinación de p144 y GM6001 produjo una
disminución altamente significativa (p<0,001) con respecto a
cualquiera de los tratamientos por separado de p144 y GM6001,
comparados con el vehículo. (Fig. 2D). Estos resultados ponen de
manifiesto que la combinación de GM6001 con p144 produce un efecto
inhibitorio de la metástasis ósea muy superior a cualquiera de los
tratamientos por separado.
El análisis de reconstrucción tridimensional de
los huesos mediante \muCT sustanciaron los mismos resultados
(Fig. 2E).
En conclusión, el tratamiento combinado con un
péptido inhibidor de TGF\beta1 (p144) y un agente inhibidor de la
actividad de MMPs (GM6001) inhibe la formación de metástasis en
hueso en el cáncer de pulmón de manera mucho más eficiente que el
tratamiento con uno solo de dichos inhibidores, lo que se traduce en
una menor carga de metástasis (menor número de células metastásicas
y menor área de metástasis) y finalmente en una mejora de la
supervivencia libre de metástasis.
<110> Proyecto de biomedicina CIIMA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> COMBINACIONES PARA EL TRATAMIENTO DE
LAS METÁSTASIS
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> P3133ES00
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido p17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido
p17(1-11)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido
p17(1-12)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido
p17(1-13)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido
p17(1-14)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Péptido p144
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
Claims (21)
1. Una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos p17(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación; y
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4,
en donde si el inhibidor de TGF\beta1 es un
anticuerpo anti-TGF\beta1, el inhibidor de la MMP
no es un derivado del ácido elaídico.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Una composición que comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p l7(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos p17(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación;
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4; y
- (iii)
- un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Una composición según la reivindicación 2 en
el que el agente para el tratamiento de la metástasis ósea es un
bifosfonato o un derivado del mismo.
4. Una composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 3 en donde el inhibidor de TGF\beta1 se
selecciona del grupo de los polipéptidos definidos por SEQ ID NO:1
a 6 y variantes funcionalmente equivalentes de los
mismos.
mismos.
5. Una composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4 en donde el inhibidor de MMP es
ilomastat.
6. Una preparación farmacéutica que comprende
una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición según
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 y un carrier
farmacéuticamente aceptable.
7. Una composición según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 5 para su uso en medicina.
8. Uso de una composición farmacéutica que
comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos p17(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación;
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4; y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de las metástasis.
\vskip1.000000\baselineskip
9. Uso según la reivindicación 9 en la que la
metástasis es una metástasis ósea.
10. Uso según la reivindicación 9 ó 10 en el que
la metástasis se origina a partir de un cáncer de pulmón.
11. Uso según la reivindicación 11 en el que el
cáncer de pulmón es un cáncer no microcítico.
12. Uso de una composición farmacéutica que
comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos p17(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación;
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4; y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de la hipercalcemia asociada a la
metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
13. Uso de una composición farmacéutica que
comprende
- (i)
- al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos p17(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación;
- (ii)
- al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4; y
- (iii)
- opcionalmente, un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea
para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o prevención de la resorción ósea asociada a la
metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
14. Uso según las reivindicaciones 12 ó 13 en el
que la metástasis se origina a partir de un cáncer de pulmón.
15. Uso según las reivindicaciones 12 ó 13 en el
que el cáncer de pulmón es un cáncer no microcítico.
16. Uso según las reivindicaciones 8 a 15 en
donde el inhibidor de TGF\beta1 se selecciona del grupo de los
polipéptidos definidos por SEQ ID NO:1 a 6 y variantes
funcionalmente equivalentes de los mismos.
17. Un kit que comprende en uno o varios
contenedores
- (i)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de TGF\beta1, seleccionado del grupo de: el péptido p144 (SEQ ID NO:6), el péptido p17 (SEQ ID NO:1), el péptido p17(1-11) (SEQ ID NO:2), el péptido p17(1-12) (SEQ ID NO:3), el péptido p17(1-13) (SEQ ID NO:4) y el péptido p17(1-14) (SEQ ID NO:5), así como una variante de los péptidos pl7(1-11), p17(1-12), p17(1-13) y p17(1-14) resultantes de su amidación y/o acetilación;
- (ii)
- una formulación farmacéuticamente aceptable de al menos un inhibidor de MMP, seleccionado del grupo de: GM6001, ilomastat, marimastat, tetraciclinas, prinomastat, batimastat, solimastat, tanomastat, trocade, AG3340, BMS-275291, neovastat, inhibidores tisulares de la metaloproteinasa (TIMP) 1, 2, 3 y 4; y
- (iii)
- opcionalmente, una formulación farmacéuticamente aceptable de un tercer componente seleccionado del grupo de un agente quimioterapéutico o un agente para el tratamiento de la metástasis ósea.
\vskip1.000000\baselineskip
18. Un kit según la reivindicación 17 que
comprende, adicionalmente, instrucciones para la administración
simultanea, secuencia) o separada de los distintos componentes.
19. Un kit según las reivindicaciones 17 ó 18 en
donde el inhibidor de TGF\beta1 se selecciona del grupo de los
polipéptidos definidos por SEQ ID NO:1 a 6 y variantes
funcionalmente equivalentes de los mismos.
20. Uso de un inhibidor de MMP para potenciar el
efecto antimetastásico de un inhibidor de TGF\beta1.
21. Uso según la reivindicación 20 en donde el
inhibidor de TGF\beta1 se selecciona del grupo de los
polipéptidos definidos por SEQ ID NO:1 a 6 y variantes
funcionalmente equivalentes de los mismos.
Priority Applications (2)
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|---|---|---|---|
| ES200702309A ES2327088B1 (es) | 2007-08-20 | 2007-08-20 | Combinaciones terapeuticas para el tratamiento de las metastasis. |
| PCT/ES2008/000565 WO2009024631A2 (es) | 2007-08-20 | 2008-08-19 | Combinaciones terapéuticas para el tratamiento de las metástasis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200702309A ES2327088B1 (es) | 2007-08-20 | 2007-08-20 | Combinaciones terapeuticas para el tratamiento de las metastasis. |
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|---|---|
| ES2327088A1 ES2327088A1 (es) | 2009-10-23 |
| ES2327088B1 true ES2327088B1 (es) | 2010-07-26 |
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ID=40378746
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| ES200702309A Withdrawn - After Issue ES2327088B1 (es) | 2007-08-20 | 2007-08-20 | Combinaciones terapeuticas para el tratamiento de las metastasis. |
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|---|---|
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2008
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| WO2009024631A3 (es) | 2010-01-28 |
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