CN109890401A

CN109890401A - 改善bph症状或防止bph症状恶化或进展的方法

Info

Publication number: CN109890401A
Application number: CN201780063432.9A
Authority: CN
Inventors: P·艾弗白克
Original assignee: Nymox Corp
Current assignee: Nymox Corp
Priority date: 2016-09-07
Filing date: 2017-08-29
Publication date: 2019-06-14
Also published as: EP4275688A2; RU2744691C2; JP2019531278A; US20180064785A1; US10532081B2; KR102623470B1; CA3036089A1; KR20190050813A; EP4275688A3; ZA201901449B; JP2023036673A; RU2019110137A; BR112019004532A2; EP3509620A1; RU2019110137A3; AU2017325033A1; WO2018047036A1; MX2019002698A

Abstract

实施例包括使用含有基于小肽的化合物和药学上可接受的载剂的组合物改善哺乳动物BPH症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善哺乳动物BPH症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法。所述方法包括但不限于以肌内、口服、静脉内、前列腺内、鞘内、瘤内、鼻内、局部、透皮等方式向有需要的哺乳动物施用单独或与载剂结合的所述化合物。

Description

改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展的方法

序列表

本申请含有序列表，所述序列表已以ASCII格式以电子方式提交并且特此以全文引用的方式并入本文中。2016年10月25日创建的所述ASCII拷贝被命名为063307-0447520_SL.txt，并且大小为33,240字节。

交叉引用

本申请要求2016年9月7日提交的题为“改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展的方法(Method of Ameliorating or Preventing the Worsening or the Progression ofSymptoms of BPH)”的美国非临时专利申请第15/258,786号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本文中。

技术领域

实施例包括使用含有基于小肽的化合物和药学上可接受的载剂的组合物改善良性前列腺增生(BPH)症状或防止BPH症状恶化或进展的方法，和改善BPH症状或防止BPH症状恶化或缺乏改善的方法。所述方法包括但不限于以肌内、口服、静脉内、前列腺内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、肿瘤内、鼻内、局部、透皮、皮下或皮内方式向有需要的患者施用组合物，其中向那些患者施药改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展，或改善BPH症状或防止BPH症状恶化或缺乏改善。

背景技术

许多医学治疗和程序的本质涉及去除或破坏有害或不需要的组织。此类治疗的实例包括手术去除癌或癌症前期生长物，通过化学疗法破坏转移性肿瘤，以及减少腺体(例如前列腺)增生。其它实例包括去除不需要的面部毛发、去除疣和去除不需要的脂肪组织。

良性前列腺增生(BPH)在老年男性中很常见，其症状影响生活质量，包括干扰活动和幸福感。BPH可以是进行性的，伴随尿潴留、感染、膀胱结石和肾衰竭的风险。尽管许多患有轻度到中度症状的男性在没有干预的情况下表现良好，但其他人的恼人的症状和并发症可能会进展，导致进行药物疗法或手术。

需要一种有效组合物，其不仅将破坏并且因此促进去除或抑制有害或不需要的细胞和组织的进一步生长，而且以局部作用为主并且全身毒性最小或没有全身毒性，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展，和/或改善BPH症状或防止BPH症状恶化或缺乏改善。即使在用有效组合物治疗之后，也需要减少侵入性手术干预的需要。

以下专利申请中公开了一些已知能够破坏并且因此促进去除或抑制有害或不需要的细胞和组织的进一步生长的药剂：2015年7月24日提交的美国专利申请第14/808,713号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法(METHODS OF REDUCING THENEED FOR SURGERY IN PATIENTS SUFFERING FROM BENIGN PROSTATIC HYPERPLASIA)；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法(METHOD OF TREATING DISORDERS REQUIRING DESTRUCTION OR REMOVAL OFCELLS)，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的组合组合物(COMBINATION COMPOSITIONS FOR TREATINGDISORDERS REQUIRING REMOVAL OR DESTRUCTION OF UNWANTED CELLULARPROLIFERATIONS)，美国专利申请公开第2007/0237780号(现已废弃)；第2003/0054990号(现为美国专利第7,172,893号)；第2003/0096350号(现为美国专利第6,924,266号)；第2003/0096756号(现为美国专利第7,192,929号)；第2003/0109437号(现为美国专利第7,241,738号)；第2003/0166569号(现为美国专利第7,317,077号)；第2005/0032704号(现为美国专利第7,408,021号)；和第2015/0148303号(现为美国专利第9,243,035号)，其各自的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

组织良性过度生长是异常，其中需要从生物体中去除细胞。良性肿瘤是不会在整个身体中转移，但会导致疾病症状的细胞增殖。如果此类肿瘤位于如大脑等器官中不可接近的区域，则其可能是致命的。存在良性器官肿瘤，所述器官包括肺、大脑、皮肤、垂体、甲状腺、肾上腺皮质和髓质、卵巢、子宫、睾丸、结缔组织、肌肉、肠、耳、鼻、喉、扁桃体、口腔、肝脏、胆囊、胰腺、前列腺、心脏和其它器官。

手术通常是治疗癌症的第一步。手术的目标各不相同。有时将其用于尽可能多地去除明显的肿瘤，或至少将其“除块”(去除大部分的肿瘤块，使得需要通过其它手段治疗的较少)。取决于癌症类型和位置，手术还可以为患者提供一些症状缓解。举例来说，如果外科医生可以去除大部分扩散的脑肿瘤，则颅骨内的压力会降低，引起患者的症状改善。

良性肿瘤和畸形也可以通过多种方法治疗，包括手术、放射疗法、药物疗法、热或电消融、冷冻疗法等。虽然良性肿瘤不会转移，但其会长大并且会复发。手术摘除良性肿瘤一般具有手术的所有困难和副作用，并且时常必须对一些良性肿瘤重复进行，如对于垂体腺瘤、脑膜瘤、前列腺增生等。另外，一些接受非手术治疗以改善由良性肿瘤引起的症状的患者仍然需要后续的侵入性手术干预。Lepor,“Medical Treatment of Benign ProstaticHyperplasia,”Reviews in Urology，第13卷，1期，第20-33页(2011)，公开了药物疗法在治疗BPH中的功效的各种研究，以及由于BPH症状恶化或进展，对后续侵入性手术治疗的需要。

雄激素在男性良性前列腺增生的发展中的作用在文献中有充分记载(Wilson,N.Engl.J.Med.317:628-629,1987)。事实上，良性前列腺增生在不存在睾丸的情况下不会发展(参见Wendel等人，J.Urol.108:116-119,1972)。

已知通过手术或医学(LHRH激动剂)阉割阻断睾丸雄激素分泌会减小前列腺尺寸(Auclair等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.76:855-862,1977；Auclair等人，Endocrinology 101:1890-1893,1977；Labrie等人，Int.J.Andrology，增刊2(V.Hansson编),Scriptor Publisher APR，第303-318页，1978；Labrie等人，J.Andrology 1:209-228,1980；Tremblay和Belanger,Contraception 30:483-497,1984；Tremblay等人，Contraception 30:585-598,1984；Dube等人，Acta Endocrinol.(Copenh)116:413-417,1987；Lacoste等人，Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；White,Ann.Surg.22:1-80,1895；Faure等人，Fertil.Steril.37:416-424,1982；Labrie等人，Endocrine Reviews 7:67-74,1986；Huggins和Stevens,J.Urol.43:705-714,1940；Wendel等人，J.Urol.108:116-119,1972；Peters和Walsh,N.Engl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987)。

几项研究表明，用抗雄激素治疗也会减小前列腺尺寸(Neri等人，Endocrinology,82:311-317,1968；Neri等人，Investigative Urology,10:123-130,1972；Tunn等人，ActaEndocrinol.(Copenh.)91:373-384,1979；Seguin等人，Mol.Cell.Endocrinol.,21:37-41,1981；Lefebvre等人，The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie,J.SteroidBiochem,29:691-698,1988；Lacoste等人，Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；Tunn等人，Invest.Urol.18:289-292,1980；Scott和Wade,J.Urol.101:81-85,1969；Caine等人，J.Urol.114:564-568,1975；Stone等人，J.Urol.141:240A,1989；Clejan等人，J.Urol.141:534A,1989)。

美国专利第3,423,507号公开了抗雄激素乙酸环丙孕酮(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)用于治疗良性前列腺增生的用途。纯抗雄激素(美国专利第4,329,364号)引起睾酮分泌增加，这会导致更高程度的雌激素芳构化，这是根据现有知识预计会对前列腺增生有负面影响的情况(Jacobi等人，Endocrinology 102:1748-1755,1978)。几项研究表明，与单独使用的任一种治疗相比，用化学阉割(LHRH激动剂)和抗雄激素的组合治疗引起对前列腺大小的更大抑制(Seguin等人，Mol.Cell.Endocrinol.21:37-41,1981；Lefebvre等人，The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie，J.SteroidBiochem.29:691-698,1988。

在前列腺以及许多其它组织中，睾酮被5α-还原酶不可逆地转化为更有效的雄激素二氢睾酮(Bruchovsky和Wilson，J.Biol.Chem.243:2012-2021,1968；Wilson,Handbookof Physiology 5(第7节)，第491-508页，1975)。已发现5α-还原酶的抑制剂会抑制前列腺生长(Brooks等人，Endocrinology 109:830,1981；Brooks等人，Proc.Soc.Exp.Biol.Med.169:67,1982；Brooks等人，Prostate 3:35,1982；Wenderoth等人，Endocrinology 113,569-573,1983；McConnell等人，J.Urol.141:239A,1989)；Stoner,E.,Lecture on the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatichypertropy,84th AUA Annual Meeting,Dallas，1989年5月8日。

5α-还原酶抑制剂Merck L 652,931对青春期前大鼠前列腺和精囊发育的抑制作用在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.abst.#1165，第314页，1989中进行了描述。MK-906对男性二氢睾酮形成的抑制作用已在男性中由Gormley等人在Proc.71stAnnual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1225，第329页，1989中；Imperato-McGinley等人在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1639，第432页，1989中；Geller和Franson在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1640，第432页，1989中和Tenover等人在Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#583，第169页，1989中进行了描述。5α-还原酶抑制剂N,N-二乙基-4-甲基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-甲酰胺(4-MA)和6-亚甲基-4-孕烯-3,20-二酮(LY 207320)的活性已由Toomey等人，Proc.71stAnnual Meeting of Endocr.Soc.,abst.#1226，第329页，1989进行了描述。

除了众所周知的雄激素对前列腺生长的影响之外，还有许多研究表明雌激素也在前列腺增殖中起作用(Walsh和Wilson,J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Robinette等人，Invest.Urol.15:425-432,1978；Moore等人，J.Clin.Invest.63:351-257,1979)。而且，已证实雌激素会增强犬中雄激素诱导的前列腺生长(Walsh和Wilson，J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Jacobi等人，Endocrinology 102:1748-1755,1978；Tunn等人，Urol.Int.35:125-140,1980)。雌激素对雄激素诱导的前列腺生长的这种增强作用的可能解释是，观察到17β-雌二醇已显示会增加犬前列腺中的雄激素结合(Moore等人，J.Clin.Invest.63:351-357,1979)。

已证实抗雌激素他莫昔芬(Tamoxifen)会改善犬中类固醇诱导的良性前列腺增生(Funke等人，Acta Endocrinol.100:462-472,1982)。在罹患良性前列腺增生的患者中抗雌激素他莫昔芬与类固醇抗雄激素乙酸环丙孕酮联合施用，对疾病症状显示出有益作用(DiSilverio等人，在Ipertrofia Prostatica Benigna中(F.Di Silverio,F.Neumann和M.Tannenbaum编)，Excerpta Medica，第117-125页，1986)。在美国专利第4,310,523号中，提出抗雄激素和抗雌激素的组合对于良性前列腺增生的预防和/或治疗有效。然而，他莫昔芬具有限制其有效性的内在雌激素活性。

雄激素芳构化导致的雌激素形成发生在几个部位。在雄性中，已经证明了在睾丸、脂肪和肌肉组织、皮肤、肝脏、脑和前列腺中雄激素的芳构化(Schweikert等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.40:413-417,1975；Folker和James，J.Steroid Biochem.49:687-690,1983；Longcope等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.46:146-152,1978；Lacoste和Labrie，未公开数据；Stone等人，The Prostate 9:311-318,1986；Stone等人，Urol.Res.15:165-167,1987)。有证据表明良性前列腺增生患者的前列腺组织中雌激素的产生增加(Stone等人，The Prostate 9:311-318,1986)。此类数据表明，局部形成雌激素可能在刺激前列腺生长中起关键作用，超过了循环雌激素预测的作用。

美国专利第4,472,382号公开了用抗雄激素和某些充当LH-RH激动剂的肽治疗BPH。美国专利第4,596,797号公开了芳香酶抑制剂作为预防和/或治疗前列腺增生的方法。美国专利第4,760,053号描述了某些癌症的治疗，所述治疗将LHRH激动剂与抗雄激素和/或抗雌激素和/或至少一种性类固醇生物合成抑制剂组合。美国专利第4,775,660号公开了一种用组合疗法治疗乳腺癌的方法，所述组合疗法可以包括手术或化学预防卵巢分泌物并且施用抗雄激素和抗雌激素。

美国专利第4,659,695号公开了一种治疗易感雄性动物前列腺癌的方法，所述动物包括通过手术或化学方式，例如通过使用LHRH激动剂阻断睾丸激素分泌的人，所述方法包含与至少一种性类固醇生物合成抑制剂，例如氨鲁米特(aminoglutethimide)和/或酮康唑(ketoconazole)联合施用抗雄激素，例如氟他胺(flutamide)。上文所提及的每个专利(US 4,472,382、4,596,797、4,760,053、4,775,660和4,659,695)的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

BPH是由雄激素和雌激素两者的活性增加引起的。由于BPH的这种双重病因，所提出的激素疗法不太令人满意，并且一直是不可预测的，同时经常引起不可接受的副作用。而且，现有技术的治疗很少引起前列腺体积减小超过约20％到30％，对症候学的影响不一致(Scott和Wade，J.Urol.101:81-85,1969；Caine等人，J.Urol.114:564-568,1975；Peters和Walsh，New Engl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等人，J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987；Stone等人，J.Urol.141:240A,1989；Clejan等人，J.Urol.141:534A,1989；Stoner,E.,Lecture on the role of 5α-reductaseinhibitor in benign prostatic hypertrophy,84th AUA Annual Meeting,Dallas，1989年5月8日。

对以上概括的机制的阐述使得最近开发出有效的药剂来控制BPH进展，并且在许多情况下逆转BPH进展。在这些药剂最前沿的是默克公司(Merck&Co.,Inc.)的产品(非那雄胺)。这种化合物的作用是抑制将睾酮转化为5α-二氢睾酮的酶即睾酮5α还原酶，引起前列腺增大的速率降低，并且常常引起前列腺质量减少。

在所有或大多数这些情况下，需要可以去除、破坏或改善可能导致BPH症状恶化或进展和/或恶化或缺乏改善的不希望的病状，而不存在常规疗法的风险和副作用的治疗。还需要开发可以改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展，和/或所述症状恶化或缺乏改善的疗法。

在本说明书全篇，包括前面对相关技术的描述，本文所述的任何和所有可公开获得的文件，包括任何和所有美国专利公开的专利申请，明确地以全文引用的方式并入本文中。前面对相关技术的描述并非旨在以任何方式承认其中所描述的任何文件，包括未决的美国专利申请，是本公开的现有技术。而且，本文对与所描述的产品、方法和/或设备相关联的任何缺点的描述并非旨在限制实施例。实际上，实施例的各方面可以包括所描述的产品、方法和/或设备的某些特征而不会遭受其描述的缺点。

发明内容

所属领域中仍然需要用于改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的新型、毒性较小并且不太频繁(例如，避免每天或每周服药的需要)的治疗。本文所述的实施例满足这些需要。

本公开以下述发现为前提：某些NTP肽，包括由氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Val-Leu-Val-Aru-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Aru-Cyu-Leu(SEQ ID NO:66)描述的特定肽能够改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善。

本公开还部分以下述发现为前提：某些NTP肽，包括由氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu(SEQ ID NO:66)描述的特定肽，单独地或与能够治疗和/或杀灭哺乳动物中不需要的细胞增殖的另外的活性剂组合，在易于发生通常与BPH相关联的症状恶化或进展的患者中，提供对改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善通常与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善出人意料的改进。

一些实施例涉及改善通常与哺乳动物BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善通常与哺乳动物BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，其包含向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的包含单独的或与至少一种能够治疗和/或杀灭哺乳动物中不需要的细胞增殖的另外的活性剂组合的NTP肽的组合物。所述组合物可以肌内、口服、静脉内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、经气溶胶、输注、快速浓注、植入装置、持续释放系统等施用。或者，可以通过施用表达NTP肽的基因，通过施用诱导此类产生的疫苗或通过引入由于遗传修饰或其它原因在体内表达所述肽的细胞、细菌或病毒在体内表达NTP肽。

在另一实施例中，与施用不含NTP肽的对照组合物相比，施用包含单独的或与至少一种能够治疗和/或杀灭哺乳动物中不需要的细胞增殖的另外的活性剂组合的NTP肽的组合物，使呈现如通过国际前列腺症状评分(International Prostate Sysmptom Score；IPSS)度量的BPH症状恶化或进展和/或BPH症状恶化或缺乏改善的哺乳动物的百分比减少超过10％。

前述一般描述和以下详细描述都是示例性和解释性的，并且旨在提供对要求保护的实施例的进一步解释。所属领域的技术人员从以下对实施例的详细描述显而易知其它目标、优点和特征。

具体实施方式

在描述本发明的蛋白质、核苷酸序列、肽、组合物、活性剂等和方法之前，应理解本发明不限于所描述的特定方法、方案、细胞系、载体和试剂，因为这些可以改变。还应理解，本文所用的术语仅仅是为了描述特定实施例的目的，而非旨在限制本发明实施例的范围，所述范围将仅受所附权利要求书限定。

除非另外说明，否则本文使用的术语和短语定义如下。在本说明书全篇中，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一(a/an)”和“所述”包括复数指示物。因此，例如，提及“一种宿主细胞”包括多种此类宿主细胞，并且提及“一种抗体”是提及一种或多种抗体和其所属领域的技术人员已知的等同物，等等。

本文所述的氨基酸和氨基酸残基可以根据下表中提供的可接受的单字母或三字母代码来指代。

表1

除非上下文另有指示，否则表述“NTP肽”是指包含对应于神经丝蛋白的至少一部分氨基酸序列或对应于神经丝蛋白片段的氨基酸序列的肽，并且包括此类肽同源物、衍生物、变体、融合蛋白和肽模拟物。表述“NTP肽”还指在以下一个或多个美国专利申请中要求保护的肽或其它物质组合物：2015年7月24日提交的美国专利申请第14/808,713号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的组合组合物；美国专利申请公开2007/0237780号(现已废弃)；2003/0054990号(现为美国专利7,172,893号)；2003/0096350号(现为美国专利6,924,266号)；2003/0096756号(现为美国专利7,192,929号)；2003/0109437号(现为美国专利7,241,738号)；2003/0166569号(现为美国专利7,317,077号)；和2005/0032704号(现为美国专利7,408,021号)；和2015/0148303号(现为美国专利9,243,035号)。这些申请中的每一个的公开内容以全文引用的方式并入本文中。下面列出了具体的肽。

1)SEQ ID NO.1:MEFSLLLPRLECNGA或

Met-Glu-Phe-Ser-Leu-Leu-Leu-Pro-Arg-Leu-Glu-Cys-Asn-Gly-Ala

2)SEQ ID NO.2:GAISAHRNLRLPGSS或

Gly-Ala-Ile-Ser-Ala-His-Arg-Asn-Leu-Arg-Leu-Pro-Gly-Ser-Ser

3)SEQ ID NO.3:DSPASASPVAGITGMCT或

Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met-Cys-Thr

4)SEQ ID NO.4:MCTHARLILYFFLVEM或

Met-Cys-Thr-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met

5)SEQ ID NO.5:YFFLVEMEFLH或

Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Glu-Phe-Leu-His

6)SEQ ID NO.6:VGQAGLELPTS或

Val-Gly-Gln-Ala-Gly-Leu-Glu-Leu-Pro-Thr-Ser

7)SEQ ID NO.7:DDPSVSASQSARYRTGH或

Asp-Asp-Pro-Ser-Val-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Arg-Tyr-Arg-Thr-Gly-His

8)SEQ ID NO.8:TGHHARLCLANFCG或

Thr-Gly-His-His-Ala-Arg-Leu-Cys-Leu-Ala-Asn-Phe-Cys-Gly

9)SEQ ID NO.9:ANFCGRNRVSLMCPSWS或

Ala-Asn-Phe-Cys-Gly-Arg-Asn-Arg-Val-Ser-Leu-Met-Cys-Pro-Ser-Trp-Ser

10)SEQ ID NO.10:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或

Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

11)SEQ ID NO.11:LKQSTCLSLPKCWDYRR或

Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

12)SEQ ID NO.12:STCLSLPKCWDYRR或

Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

13)SEQ ID NO.13:LSLPKCWDYRR或

Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

14)SEQ ID NO.14:KCWDYRRAAVPGL或

Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu

15)SEQ ID NO.15:KCWDYRRAAVPGLFILFFL或

Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu

16)SEQ ID NO.16:KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP或

Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro

17)SEQ ID NO.17:

KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser

18)SEQ ID NO.18:WDYRR或Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

19)SEQ ID NO.19:FILFFLRHRCPTL或

Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu

20)SEQ ID NO.20:FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或

Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser

21)SEQ ID NO.21:HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP或

His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Ser-Thr-Pro-Glu-Ile-Lys-His-Pro

22)SEQ ID NO.22:PASASQVAGTKDMH或

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met-His

23)SEQ ID NO.23:DMHHYTWLIFIFIFNFLR或

Asp-Met-His-His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg

24)SEQ ID NO.24:HYTWLIFIFIFNFLRQSLN或

His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg-Gln-Ser-Leu-Asn

25)SEQ ID NO.25:

SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或

Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Arg-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe

26)SEQ ID NO.26:PGFKLFSCPSLLSSWDYRR或

Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

27)SEQ ID NO.27:FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或

Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe

28)SEQ ID NO.28:FSCPSLLSSWDYRR或

Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

29)SEQ ID NO.29:SLLSSWDYRR或

Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

30)SEQ ID NO.30:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

31)SEQ ID NO.31:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

32)SEQ ID NO.32:SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM或

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met

33)SEQ ID NO.33:FVFLVEMGFTM或

Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met

34)SEQ ID NO.34:MGFTMFARLILISGPCDLPASAS或

Met-Gly-Phe-Thr-Met-Phe-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Ile-Ser-Gly-Pro-Cys-Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser

35)SEQ ID NO.35:ISGPC或Ile-Ser-Gly-Pro-Cys

36)SEQ ID NO.36:DLPASASQSAGITGVSH或

Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val-Ser-His

37)SEQ ID NO.37:GVSHHARLIFNFCLFEM或

Gly-Val-Ser-His-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met

38)SEQ ID NO.38:NFCLFEMESH或

Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met-Glu-Ser-His

39)SEQ ID NO.39:

SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLPPHPANF或

Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Pro-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe

40)SEQ ID NO.40:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或

Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

41)SEQ ID NO.41:FSCLSLPSSWDYGH或

Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His

42)SEQ ID NO.42:LSLPSSWDY或

Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

43)SEQ ID NO.43:

SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR或

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe-Cys-Ile-Phe-Ile-Arg-Gly-Gly-Val-Ser-Pro-Tyr-Leu-Ser-Gly-Trp-Ser-Gln-Thr-Pro-Asp-Leu-Arg

44)SEQ ID NO.44:PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR或

Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

45)SEQ ID NO.45:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或

Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

46)SEQ ID NO.46:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或

Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

47)SEQ ID NO.47:FSCLSLPSSWDYGH或

Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His

48)SEQ ID NO.48:STCLSLPKCWDYRR或

Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

49)SEQ ID NO.49:FSCPSLLSSWDYRR或

Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

50)SEQ ID NO.50:LSLPSSWDY或

Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

51)SEQ ID NO.51:LSLPKCWDYRR或

Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

52)SEQ ID NO.52:SLLSSWDYRR或

Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

53)SEQ ID NO.53:LPSSWDYRR或

Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

54)SEQ ID NO.54:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

55)SEQ ID NO.55:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

56)SEQ ID NO.56:SSWDYRRFILFFL或

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu

57)SEQ ID NO.57:WDYRRFIFNFL或

Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu

58)SEQ ID NO.58:FNFCLF或Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe

59)SEQ ID NO.59:FIFNFL或Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu

60)SEQ ID NO.60:PASASPVAGITGM或

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met

61)SEQ ID NO.61:PASASQVAGTKDM或

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met

62)SEQ ID NO.62:PASASQSAGITGV或

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val

63)SEQ ID NO.63:PASASPVAG或

Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly

64)SEQ ID NO.64:FFLVEM或Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met

65)SEQ ID NO.65:SVTQAGVQW或

Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp

66)SEQ ID NO.66:IDQQVLSRIKLEIKRCL或

Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

67)SEQ ID NO.67:LSRIKLEIK或

Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys

68)SEQ ID NO.68:GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM或

Gly-Asp-His-Gly-Arg-Pro-Asn-Leu-Ser-Arg-Leu-Lys-Leu-Ala-Ile-Lys-Tyr-Glu-Val-Lys-Lys-Met

69)SEQ ID NO.69:QQSIAVKFLAVFGVSI或

Gln-Gln-Ser-Ile-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Ala-Val-

Phe-Gly-Val-Ser-Ile

70)SEQ ID NO.70:GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL或

Gly-Leu-Leu-Phe-Pro-Val-Phe-Ser-Val-Cys-Tyr-Leu-Ile-Ala-Pro-Lys-Ser-Pro-Leu-Gly-Leu

71)SEQ ID NO.71:MMVCWNRFGKWVYFI或

Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile

72)SEQ ID NO.72:SAIFNFGPRYLYHGV或

Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu-Tyr-His-Gly-Val

73)SEQ ID NO.73:PFYFLILVRIISFLI或

Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-Ile-Ser-Phe-Leu-Ile

74)SEQ ID NO.74:GDMEDVLLNCTLLKR或

Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg

75)SEQ ID NO.75:SSRFRFWGALVCSMD或

Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp

76)SEQ ID NO.76:SCRFSRVAVTYRFIT或

Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr-Arg-Phe-Ile-Thr

77)SEQ ID NO.77:LLNIPSPAVWMARNT或

Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr

78)SEQ ID NO.78:MAQSRLTATSASRVQ或

Met-Ala-Gln-Ser-Arg-Leu-Thr-Ala-Thr-Ser-Ala-Ser-Arg-Val-Gln

79)SEQ ID NO.79:AILLSQPPKQLGLRA或

Ala-Ile-Leu-Leu-Ser-Gln-Pro-Pro-Lys-Gln-Leu-Gly-Leu-Arg-Ala

80)SEQ ID NO.80:PANTPLIFVFSLEAG或

Pro-Ala-Asn-Thr-Pro-Leu-Ile-Phe-Val-Phe-Ser-Leu-Glu-Ala-Gly

81)SEQ ID NO.81:FHHICQAGLKLLTSG或

Phe-His-His-Ile-Cys-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Thr-Ser-Gly

82)SEQ ID NO.82:DPPASAFQSAGITGV或

Asp-Pro-Pro-Ala-Ser-Ala-Phe-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val

83)SEQ ID NO.83:SHLTQPANLDKKICS或

Ser-His-Leu-Thr-Gln-Pro-Ala-Asn-Leu-Asp-Lys-Lys-Ile-Cys-Ser

84)SEQ ID NO.84:NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK或

Asn-Gly-Gly-Ser-Cys-Tyr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Ala-Ser-Cys-Asn-Pro-Ser-Lys

85)SEQ ID NO.85:MWTLKSSLVLLLCLT或

Met-Trp-Thr-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Leu-Cys-Leu-Thr

86)SEQ ID NO.86:CSYAFMFSSLRQKTS或

Cys-Ser-Tyr-Ala-Phe-Met-Phe-Ser-Ser-Leu-Arg-Gln-Lys-Thr-Ser

87)SEQ ID NO.87:EPQGKVPCGEHFRIR或

Glu-Pro-Gln-Gly-Lys-Val-Pro-Cys-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Ile-Arg

88)SEQ ID NO.88:QNLPEHTQGWLGSKW或

Gln-Asn-Leu-Pro-Glu-His-Thr-Gln-Gly-Trp-Leu-Gly-Ser-Lys-Trp

89)SEQ ID NO.89:LWLLFAVVPFVILKC或

Leu-Trp-Leu-Leu-Phe-Ala-Val-Val-Pro-Phe-Val-Ile-Leu-Lys-Cys

90)SEQ ID NO.90:QRDSEKNKVRMAPFF或

Gln-Arg-Asp-Ser-Glu-Lys-Asn-Lys-Val-Arg-Met-Ala-Pro-Phe-Phe

91)SEQ ID NO.91:LHHIDSISGVSGKRMF或

Leu-His-His-Ile-Asp-Ser-Ile-Ser-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Arg-Met-Phe

92)SEQ ID NO.92:EAYYTMLHLPTTNRP或

Glu-Ala-Tyr-Tyr-Thr-Met-Leu-His-Leu-Pro-Thr-Thr-Asn-Arg-Pro

93)SEQ ID NO.93:KIAHCILFNQPHSPR或

Lys-Ile-Ala-His-Cys-Ile-Leu-Phe-Asn-Gln-Pro-His-Ser-Pro-Arg

94)SEQ ID NO.94:SNSHSHPNPLKLHRR或

Ser-Asn-Ser-His-Ser-His-Pro-Asn-Pro-Leu-Lys-Leu-His-Arg-Arg

95)SEQ ID NO.95:SHSHNRPRAYILITI或

Ser-His-Ser-His-Asn-Arg-Pro-Arg-Ala-Tyr-Ile-Leu-Ile-Thr-Ile

96)SEQ ID NO.96:LPSKLKLRTHSQSHH或

Leu-Pro-Ser-Lys-Leu-Lys-Leu-Arg-Thr-His-Ser-Gln-Ser-His-His

97)SEQ ID NO.97:NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR或

Asn-Pro-Leu-Ser-Arg-Thr-Ser-Asn-Ser-Thr-Pro-Thr-Asn-Ser-Phe-Leu-Met-Thr-Ser-Ser-Lys-Pro-Arg

98)SEQ ID NO.98:SSSLGLPKCWDYRHE或

Ser-Ser-Ser-Leu-Gly-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-His-Glu

99)SEQ ID NO.99:LLSLALMINFRVMAC或

Leu-Leu-Ser-Leu-Ala-Leu-Met-Ile-Asn-Phe-Arg-Val-Met-Ala-Cys

100)SEQ ID NO.100:TFKQHIELRQKISIV或

Thr-Phe-Lys-Gln-His-Ile-Glu-Leu-Arg-Gln-Lys-Ile-Ser-Ile-Val

101)SEQ ID NO.101:PRKLCCMGPVCPVKI或

Pro-Arg-Lys-Leu-Cys-Cys-Met-Gly-Pro-Val-Cys-Pro-Val-Lys-Ile

102)SEQ ID NO.102:ALLTINGHCTWLPAS或

Ala-Leu-Leu-Thr-Ile-Asn-Gly-His-Cys-Thr-Trp-Leu-Pro-Ala-Ser

103)SEQ ID NO.103:MFVFCLILNREKIKG或

Met-Phe-Val-Phe-Cys-Leu-Ile-Leu-Asn-Arg-Glu-Lys-Ile-Lys-Gly

104)SEQ ID NO.104:GNSSFFLLSFFFSFQ或

Gly-Asn-Ser-Ser-Phe-Phe-Leu-Leu-Ser-Phe-Phe-Phe-Ser-Phe-Gln

105)SEQ ID NO.105:NCCQCFQCRTTEGYA或

Asn-Cys-Cys-Gln-Cys-Phe-Gln-Cys-Arg-Thr-Thr-Glu-Gly-Tyr-Ala

106)SEQ ID NO.106:VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT或

Val-Glu-Cys-Phe-Tyr-Cys-Leu-Val-Asp-Lys-Ala-Ala-Phe-Glu-Cys-Trp-Trp-Phe-Tyr-Ser-Phe-Asp-Thr

107)SEQ ID NO.107:MEPHTVAQAGVPQHD或

Met-Glu-Pro-His-Thr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Val-Pro-Gln-His-Asp

108)SEQ ID NO.108:LGSLQSLLPRFKRFS或

Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Ser-Leu-Leu-Pro-Arg-Phe-Lys-Arg-Phe-Ser

109)SEQ ID NO.109:CLILPKIWDYRNMNT或

Cys-Leu-Ile-Leu-Pro-Lys-Ile-Trp-Asp-Tyr-Arg-Asn-Met-Asn-Thr

110)SEQ ID NO.110:ALIKRNRYTPETGRKS或

Ala-Leu-Ile-Lys-Arg-Asn-Arg-Tyr-Thr-Pro-Glu-Thr-Gly-Arg-Lys-Ser

111)SEQ ID NO.111:IDQQVLSRI或

Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile

112)SEQ ID NO.112:KLEIKRCL或

Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

113)SEQ ID NO.113:VLSRIK或Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys

114)SEQ ID NO.114:RIKLEIK或Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys

115)SEQ ID NO.115:VLSRIKLEIKRCL或

Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu；和

116)SEQ ID NO.116:IDQQVLSRIKLEI或

Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile。

表述“NTP肽”还优选包括(但不限于)SEQ ID NO:1到116的氨基酸序列。

术语“片段”是指蛋白质或由蛋白质或肽的氨基酸序列的连续子序列组成的多肽，并且包括天然存在的片段，如剪接变体和由天然存在的体内蛋白酶活性产生的片段。此类片段可以在氨基端、羧基端和/或内部(如通过天然剪接)截短。可以在有或没有氨基端甲硫氨酸的情况下制备此类片段。术语“片段”包括来自相同蛋白质或肽的相同或不同的片段，具有共同或非共同的连续氨基酸序列，直接或通过接头连接在一起。所属领域的普通技术人员将能够使用本文概述的指导和程序来选择用于实施例的适合片段而无需过度实验。

术语“变体”是指其中与蛋白质或肽的氨基酸序列相比存在一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入的蛋白质或多肽，并且包括蛋白质或肽天然存在的等位基因变体或替代剪接变体。术语“变体”包括用相似或同源的氨基酸或不相似的氨基酸置换肽序列中的一个或多个氨基酸。有许多标度可以将氨基酸分为相似或同源的。(Gunnar von Heijne,Sequence Analysis in Molecular Biology，第123-39页(Academic Press,New York,N.Y.1987.)。优选的变体包括在一个或多个氨基酸位置的丙氨酸取代。其它优选的取代包括对蛋白质的总净电荷、极性或疏水性具有很小影响或没有影响的保守性取代。下表2中列出了保守性取代。

表2

保守性氨基酸取代

表3列出了另一种氨基酸取代方案：

表3

原始残基	取代
		Ala	gly；ser
Arg	lys
		Asn	gln；his
Asp	glu
		Cys	ser
Gln	asn
		Glu	asp
Gly	ala；pro
		His	asn；gln
Ile	eu；val
		Leu	ile；val
Lys	arg；gln；glu
		Met	leu；tyr；ile
Phe	met；leu；tyr
		Ser	thr
Thr	ser
		Trp	tyr
Tyr	trp；phe
		Val	ile；leu

其它变体可以由较不保守的氨基酸取代组成，如选择在维持以下方面的作用上更显著不同的残基：(a)取代区域中多肽主链的结构(例如，折叠或螺旋构象)，(b)分子在靶位点的电荷或疏水性，或(c)侧链体积。一般预期对功能具有更显著影响的取代是下面那些取代：其中(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一种氨基酸取代或缺失或插入；(b)亲水性残基，例如丝氨酰基或苏氨酰基，取代疏水性残基(或被疏水性残基取代)，例如亮氨酰基、异亮氨酰基、苯丙氨酰基、缬氨酰基或丙氨酰基；(c)半胱氨酸残基取代任何其它残基(或被任何其它残基取代)；(d)具有电正性侧链的残基，例如赖氨酰基、精氨酰基或组氨酰基，取代具有电负性电荷的残基(或被具有电负性电荷的残基取代)，例如谷氨酰基或天冬氨酰基；或(e)具有庞大侧链的残基，例如苯丙氨酸，取代不具有此类侧链的残基(或被具有此类侧链的残基取代)，例如甘氨酸。其它变体包括设计用于产生新颖糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计用于去除现有糖基化和/或磷酸化位点的那些变体。变体包括在糖基化位点、蛋白水解裂解位点和/或半胱氨酸残基处的至少一个氨基酸取代。变体还包括在接头肽上的蛋白质或肽氨基酸序列之前或之后具有额外氨基酸残基的蛋白质和肽。举例来说，可以在NTP肽的氨基端和羧基端添加半胱氨酸残基，以便通过形成二硫键使肽环化。术语“变体”还涵盖具有NTP肽氨基酸序列，在肽的3'或5'端侧翼具有至少一个并且至多25个或更多个额外氨基酸的多肽。

术语“衍生物”是指经化学修饰的蛋白质或已经通过自然过程(如加工和其它翻译后修饰)，但还通过化学修饰技术进行了化学修饰的多肽，化学修饰技术例如，通过添加一个或多个聚乙二醇分子、糖、磷酸盐和/或其它此类分子，其中所述一个或多个分子不天然连接到野生型蛋白质或NTP肽。衍生物包括盐。此类化学修饰在基础教科书和更详细的专著以及大量研究文献中有很好的描述，并且它们是所属领域的技术人员熟知的。应了解，相同类型的修饰可以在给定蛋白质或多肽中的几个位点以相同或不同程度存在。而且，给定蛋白质或多肽可以含有许多类型的修饰。修饰可以发生在蛋白质或多肽的任何地方，包括肽主链、氨基酸侧链和氨基或羧基端。修饰包括，例如乙酰化、酰化、ADP-核糖基化、酰胺化、黄素的共价连接、血红素部分的共价连接、核苷酸或核苷酸衍生物的共价连接、脂质或脂质衍生物的共价连接、磷脂酰肌醇的共价连接、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、共价交联的形成、半胱氨酸的形成、焦谷氨酸的形成、甲酰化、γ-羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、豆蔻酰化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊烯化、外消旋化、糖基化、脂质连接、硫酸化、谷氨酸残基γ-羧化、羟基化和ADP-核糖基化、硒化、硫酸化、转运RNA介导的向蛋白质添加氨基酸(如精氨酸化)和泛素化。参见，例如Proteins--Structure AndMolecular Properties,第2版,T.E.Creighton,W.H.Freeman and Company,New York(1993)和Wold,F.,"Posttranslational Protein Modifications:Perspectives andProspects,"第1-12页，B.C.Johnson编，Academic Press,New York(1983)；Seifter等人，Meth.Enzymol.182:626-646(1990)和Rattan等人，"Protein Synthesis:Posttranslational Modifications and Aging,"Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62(1992)。术语“衍生物”包括导致蛋白质或多肽变成支链或环状的化学修饰，有或没有支化。环状、支链和支链环状蛋白质或多肽可以由翻译后的自然过程产生，并且也可以通过完全合成的方法制得。

术语“同源物”是指通过标准方法测定的NTP肽氨基酸序列至少60％相同的蛋白质，所述标准方法通常用于比较两个多肽的氨基酸位置的相似性。两种蛋白质之间的相似度或一致性程度可以通过已知方法容易地计算，包括但不限于Computational MolecularBiology,Lesk,A.M.编，Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.编，Academic Press,New York,1993；Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编，HumanaPress,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.编，MStockton Press,New York,1991；及Carillo H.和Lipman,D.,SIAM,J.Applied Math.,48:1073(1988)中描述的那些。设计用于测定一致性的优选方法以给出测试序列之间的最大匹配。在公开可用的计算机程序中编码用于测定一致性和相似性的方法。

用于测定两个序列之间的一致性和相似性的优选计算机程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux,J.等人，Nucleic Acids Research,12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA,Atschul,S.F.等人，J.Molec.Biol.,215:403-410(1990)。BLAST X程序从NCBI和其它来源公开可用(BLAST Manual,Altschul,S.等人，NCBI NLM NIH Bethesda,Md.20894；Altschul,S.等人，J.Mol.Biol.,215:403-410(1990)。举例来说，使用计算机算法如GAP(Genetic Computer Group,University of Wisconsin,Madison,Wis.)，将要测定其序列一致性百分比的两种蛋白质或多肽进行比对，以使其各自的氨基酸最佳匹配(通过所述算法确定的“匹配范围”)。

空位开放罚分(按平均对角线的3倍计算；“平均对角线”是所用比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是通过特定比较矩阵分配给每个完全氨基酸匹配的分数或数字)和空位扩展罚分(通常是{分数(1/10)}乘以空位开放罚分)，以及如PAM 250或BLOSUM 62的比较矩阵与所述算法结合使用。标准比较矩阵(参见Dayhoff等人，在：Atlas of ProteinSequence and Structure，第5卷，增刊3中的PAM250比较矩阵；参见Henikoff等人，Proc.Natl.Acad.Sci USA,89:10915-10919中的BLOSUM 62比较矩阵)也可以由所述算法使用。然后通过所述算法计算一致性百分比。与比较蛋白质或肽相比，同源物通常将会具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，视情况而定。

术语“融合蛋白”是指这样的蛋白质，其中一个或多个肽与蛋白质重组融合或化学结合(包括共价和非共价)，蛋白质如(但不限于)抗体或抗体片段，如Fab片段或短链Fv。术语“融合蛋白”还指肽的多聚体(即二聚体、三聚体、四聚体和高级多聚体)。此类多聚体包含含有一种肽的同聚多聚体、含有多于一种肽的异聚多聚体，和含有至少一种肽和至少一种其它蛋白质的异聚多聚体。此类多聚体可以是疏水性、亲水性、离子和/或共价缔合、键或键联的结果，可以使用接头分子通过交联形成，或者可以通过例如脂质体形成间接键联而成。

术语“肽模拟物”或“模拟物”是指模拟肽或蛋白质的生物活性但在化学性质上不再是肽类的生物活性化合物，即它们不再含有任何肽键(即氨基酸之间的酰胺键)。这里，术语肽模拟物以更广泛的意义使用以包括在性质上不再完全是肽的分子，如伪肽、半肽和类肽。下面描述了这种更广泛意义上的肽模拟物的实例(其中肽的一部分被不具有肽键的结构置换)。无论是完全还是部分非肽，根据实施例的肽模拟物提供了反应性化学部分的空间排列，其与肽模拟物所基于的肽中的活性基团的三维排列非常相似。由于这种相似的活性位点几何结构，肽模拟物对生物系统具有类似于肽生物活性的作用。

实施例的肽模拟物优选在三维形状和生物活性方面与本文所述的肽基本相似。对所属领域中已知的肽进行结构修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的反向，产生D-氨基酸残基结构，特别是在N端，可以使得蛋白水解降解的稳定性增强，而对活性没有不利影响。在论文"Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding",Smith C.S.等人，Drug Development Res.,15，第371-379页(1988)中给出了一个实例。第二种方法是改变环状结构以获得稳定性，如N到C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等人，在Smith和Rivier(编)"Peptides:Chemistry and Biology",Escom,Leiden(1991)，第268-270页中)。在受构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了这样的一个实例，如在Goldstein,G.等人的美国专利第4,457,489号(1985)中公开的那些，所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。第三种方法是用赋予蛋白水解抗性的伪肽键取代肽中的肽键。

已经描述了许多伪肽键，其一般不影响肽结构和生物活性。这种方法的一个实例是取代逆反向伪肽键(retro-inverso pseudopeptide bond)("Biologically activeretroinverso analogues of thymopentin",Sisto A.等人在Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)"Peptides,Chemistry,Structure and Biology",Escom,Leiden(1990)，第722-773页中)和Dalpozzo等人(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:561-566，其以引用的方式并入本文中)。根据这种修饰，肽的氨基酸序列可以与上文所述的肽的序列相同，除了一个或多个肽键被逆反向伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对由作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。还可以通过用类似结构的其它化学基团置换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。已知会增强酶促裂解稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的另一种适合的伪肽键是还原的电子等排体伪肽键(Couder等人(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:181-184，其以全文引用的方式并入本文中)。

因此，这些肽的氨基酸序列可以与肽序列相同，除了一个或多个肽键被电子等排体伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体伪肽键的肽的合成是所属领域中已知的(Couder等人(1993)，以上引用)。其它实例包括引入酮亚甲基或甲基硫醚键以置换肽键。

肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，其保留生物活性的重要结构决定因素，但消除肽键，从而赋予蛋白水解抗性(Simon等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，其以全文引用的方式并入本文中)。类肽是N-取代的甘氨酸寡聚物。已经描述了许多N-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(Simon等人(1992)，以上引用)。肽的一些或所有氨基酸都可以被对应于被置换的氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。

术语“肽模拟物”或“模拟物”还包括如下定义的反-D肽和对映异构体。

术语“反-D肽”是指由与肽的L-氨基酸序列相比以相反顺序排列的D-氨基酸组成的生物活性蛋白质或肽。因此，L-氨基酸肽的羧基端残基变成D-氨基酸肽的氨基端等。举例来说，肽ETESH(SEQ ID NO:117)变成H_dS_dE_dT_dE_d，其中E_d、H_d、S_d和T_d是分别对应于L-氨基酸E、H、S和T的D-氨基酸。

术语“对映异构体”是指其中肽的氨基酸序列中的一个或多个L-氨基酸残基被相对应的D-氨基酸残基置换的生物活性蛋白质或肽。

如本文所用的“组合物”泛指含有所述肽或氨基酸序列，和任选另外的活性剂的任何组合物。组合物可以包含无水制剂、水溶液或无菌组合物。包含肽的组合物可以用作杂交探针。探针可以以冷冻干燥的形式储存，并且可以与如碳水化合物的稳定剂缔合。在杂交中，探针可以在水溶液中使用，水溶液含有盐例如NaCl，洗涤剂例如十二烷基硫酸钠(SDS)和其它组分例如Denhardt溶液、乳粉、鲑鱼精子DNA等。

在另外的活性剂与NTP肽一起使用的替代实施例中，表述“活性剂”用于表示能够去除不需要的细胞增殖和/或组织生长的任何药剂。适合的活性剂可以包括但不限于：(i)抗癌活性剂(如烷化剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、RNA/DNA抗代谢物和抗有丝分裂剂)；(ii)用于治疗良性生长的活性剂，如抗痤疮和抗疣活性剂；(iii)抗雄激素化合物，(乙酸环丙孕酮(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)他莫昔芬、芳香酶抑制剂)；(iv)α1-肾上腺素能受体阻滞剂(坦索罗辛(tamsulosin)、特拉唑嗪(terazosin)、多沙唑嗪(doxazosin)、哌唑嗪(prazosin)、布那唑嗪(bunazosin)、吲哚拉明(indoramin)、阿呋唑嗪(alfulzosin)、西罗多辛(silodosin)；(v)5α-还原酶抑制剂(非那雄胺、度他雄胺(dutasteride))；(vi)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂(他达拉非(tadalafil))和其组合。

实施例涉及改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，所述方法包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的包含单独的或与至少一种另外的活性剂组合的NTP肽的组合物。所属领域的普通技术人员将理解，BPH症状恶化或进展或BPH症状恶化或缺乏改善的哺乳动物是IPSS评分随时间推移增加，或不展示IPSS随时间推移的改善(即，减少)的哺乳动物。所属领域的普通技术人员知道并且了解如何使用众所周知和行业公认的标准确定IPSS评分。

国际前列腺症状评分(I-PSS)是基于七个关于泌尿症状的问题和一个关于生活质量的问题的答案。每个关于泌尿症状的问题允许患者从指示特定症状的严重程度增加的六个答案中选择一个。答案为0到5的分配点。总评分因此可以在0到35的范围内(无症状到症状极明显)。所述问题是指以下泌尿症状：

问题症状

1 排空不完全

2 尿频

3 尿间断

4 尿急

5 尿流细

6 费力

7 夜尿症

问题八是指患者感知到的生活质量。

IPSS的前七个问题与美国泌尿学会(American Urological Association；AUA)症状指数上出现的问题一致，其目前对症状进行如下分类：

轻度(症状评分小于等于7)

中度(症状评分范围8-19)

严重(症状评分范围20-35)

国际科学委员会(International Scientific Committee；SCI)以世界卫生组织(World Health Organization；WHO)和国际抗癌联盟(International Union AgainstCancer；UICC)的名义推荐仅使用单一问题来评估生活质量。这一问题的答案从“欣喜的”到“糟糕的”或从0到6变动。虽然这个单一问题可能会或可能不会捕获良性前列腺增生(BPH)症状或生活质量的整体影响，但其可以充当用于医生患者对话的有价值的起点。

并非所有罹患BPH的哺乳动物都展现出与BPH相关联的症状恶化或进展，或与BPH相关联的症状恶化或缺乏改善。换句话说，一些罹患BPH的哺乳动物可能不会看到其IPSS评分随时间推移增加，尽管其继续罹患病症。类似地，一些罹患BPH的哺乳动物可能看到IPSS评分随时间推移显著增加。本文所述的实施例可以包括治疗罹患BPH的哺乳动物，其易于发生BPH症状恶化或进展，或易于发生BPH症状恶化或缺乏改善，如随时间推移IPSS增加或随时间推移缺乏IPSS的任何明显降低证明。在另一实施例中，所治疗的哺乳动物是那些患有或易于患有BPH的哺乳动物。在其它实施例中，所治疗的哺乳动物是那些已经被诊断患有BPH并且目前正在用α阻滞剂(如坦索罗辛、特拉唑嗪、多沙唑嗪)或5-α还原酶抑制剂(如非那雄胺、度他雄胺)或5型磷酸二酯酶抑制剂(PDE5抑制剂)(如他达拉非)治疗的哺乳动物。在另一实施例中，所述组合物施用多于一次。

衍生自发现是引起细胞死亡的有效药剂的NTP肽的其它肽序列，也可以与本文所述的NTP肽组合用作另外的活性剂。所属领域的普通技术人员可以使用本文提供的指导，无需过度实验就合成跨越所述蛋白质整个氨基酸序列的有效肽的片段，以便鉴定其它有效的肽序列。

发明人意外地发现，当进行治疗BPH的临床试验时，单独或与另一活性剂组合施用NTP肽显著降低BPH症状的进展或恶化，并且出乎意料地降低BPH症状的恶化或缺乏改善，如IPSS增加所测量。发明人发现，与施用对照的那些哺乳动物相比，当NTP肽单独或与另一活性剂组合施用时，展现IPSS增加的哺乳动物的百分比显著降低。在临床试验期间，发明人发现，与施用对照的展现IPSS增加的哺乳动物的百分比相比，展现IPSS增加并且单独或与另一活性剂组合施用NTP肽的哺乳动物的百分比减少了超过约10％。举例来说，如果施用对照的展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比为约50％，则展现BPH症状恶化或进展并且单独或与另一活性剂组合施用NTP肽的哺乳动物的百分比将小于45％，因此得到至少约10％的BPH症状改善或对其恶化或进展的防止。在一些实施例中，单独或与另一活性剂组合施用NTP肽提供BPH症状至少约15％的改善或对其恶化或进展的防止，或至少约18％、或至少约23％、或至少约27％、或至少约35％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约65％、或直到约100％，或在约10％到约70％、或约20％到约65％、或约30％到约60％、或约35％到约60％范围内。在其它实施例中，单独或与另一活性剂组合施用NTP肽提供BPH症状至少约15％的改善或对其恶化或缺乏进展的防止，或至少约23％、或至少约27％、或至少约35％、或至少约45％、或至少约50％、或至少约60％、或至少约65％、或直到约100％，或在约10％到约80％、或约20％到约75％、或约25％到约70％范围内。

经本发明的组合物治疗的患者展现在IPSS中表现出恶化或缺乏改善的患者百分比显著降低。当施用对照时，约20-50％或约21％的量的患者在IPSS中展现恶化，或约40％到约75％或约50％的量的患者在IPSS中展现恶化或缺乏改善。实施例的方法可以使得在IPSS中展现恶化或无改善的患者百分比降低。在一个实施例中，施用本文所述的组合物，使得在IPSS中展现恶化的患者的百分比在约0％(完全防止)到约25％、或约2.5％到20％、或约5％到15％范围内，或约0％与约25％之间的任何值或范围。在另一实施例中，施用本文所述的组合物，使得在IPSS中展现恶化或缺乏改善的患者百分比在约0％(完全防止)到约40％、或约10％到40％、或约15％到36％范围内，或约0％与约40％之间的任何值或范围。

实施例包括治疗罹患可能导致BPH的病状的哺乳动物，和/或可能易于发生BPH症状恶化或进展的哺乳动物或可能易于发生BPH症状恶化或缺乏改善的哺乳动物的方法，其包含单独或与施用另外的活性剂组合向哺乳动物施用一次或多于一次的NTP肽。所述方法包括但不限于肌内、口服、静脉内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、瘤内、鼻内、局部、透皮、皮下或皮内施用单独的或与载剂结合的NTP-肽。优选的NTP肽包括以下中的一种或多种：

SEQ ID No.66IDQQVLSRIKLEIKRCL Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

SEQ ID NO.111IDQQVLSRI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile

SEQ ID NO.115VLSRIKLEIKRCL Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

SEQ ID NO.116IDQQVLSRIKLEI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile

任何哺乳动物均可以受益于本发明的使用，包括人、小鼠、兔、犬、绵羊和其它家畜，兽医、动物园管理员或野生动物保护员工治疗或可治疗的任何哺乳动物。优选的哺乳动物是人、绵羊和犬。在本说明书全篇，哺乳动物和患者可互换使用。

对于所属领域的技术人员显而易见的是，可以选择上述NTP肽的其它较小片段，使得这些肽具有相同或相似的生物活性。所属领域的技术人员可以选择其它片段，使得这些肽具有相同或相似的生物活性。实施例的肽涵盖这些其它片段。一般来说，实施例的肽具有至少4个氨基酸，优选至少5个氨基酸，并且更优选至少6个氨基酸。

实施例还涵盖预防或减少急性尿潴留发生的方法，其包含施用包含NTP肽以及另外的活性剂的组合物，所述NTP肽包含连接在一起的两种或更多种NTP肽。就NTP肽具有所需生物活性来说，两种此类肽也具有所需的生物活性。

本实施例所涵盖的NTP肽和其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物可以使用所属领域的技术人员已知的方法制备，如重组DNA技术、蛋白质合成和分离天然存在的肽、蛋白质、AD7c-蛋白质和其片段、变体、衍生物和同源物。

NTP肽和其片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物可以使用所属领域的技术人员已知的方法由其它肽、蛋白质和其片段、变体、衍生物和同源物制备。此类方法包括(但不限于)使用蛋白酶将肽或蛋白质裂解成所需的NTP肽。

NTP肽可以使用众所周知的重组DNA技术方法制备，如Sambrook等人MolecularCloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold SpringHarbor,N.Y.和/或Ausubel等人编，Current Protocols in Molecular Biology,GreenPublishers Inc.和Wiley and Sons,N.Y.中所阐述的那些方法。

编码NTP肽的基因或cDNA可以例如通过筛选基因组或cDNA文库，或通过PCR扩增获得。可以基于来自相同或相关基因家族的其它已知基因或基因片段，例如在其它肽或蛋白质中发现的保守基序的序列信息产生适用于筛选文库的探针或引物。另外，在已经鉴定出编码NTP肽的基因的情况下，所述基因的全部或一部分可以作为探针用于鉴定同源基因。探针或引物可以用于筛选来自被认为表达NTP肽基因的各种组织来源的cDNA文库。通常，对于筛选将使用高度严格性条件，以使从筛选中获得的假阳性的数量减到最少。

制备编码NTP肽的基因的另一种方法是使用所属领域的技术人员熟知的方法进行化学合成，如Engels等人，Angew.Chem.Intl.Ed.,28:716-734描述的那些方法。这些方法尤其包括用于核酸合成的磷酸三酯、亚磷酰胺和H-膦酸酯方法。此类化学合成的优选方法是使用标准亚磷酰胺化学法进行聚合物负载的合成。通常，编码肽或蛋白质的DNA长度将为几百个核苷酸。使用这些方法可以将大于约100个核苷酸的核酸合成为几个片段。然后可以将片段连接在一起以形成全长肽或蛋白质。通常，编码蛋白质氨基端的DNA片段将具有ATG，其编码甲硫氨酸残基。这个甲硫氨酸可以存在或可以不存在于成熟形式的蛋白质或肽上，这取决于宿主细胞中产生的蛋白质是否被设计成从所述细胞分泌。

可以使用标准连接技术将编码NTP肽的基因、cDNA或其片段插入到适当的表达或扩增载体中。通常选择载体在所用的特定宿主细胞中具功能性(即，载体与宿主细胞机构相容，使得可以发生基因的扩增和/或基因的表达)。编码NTP肽的基因、cDNA或其片段可以在原核、酵母、昆虫(杆状病毒系统)和/或真核宿主细胞中扩增/表达。宿主细胞的选择将部分取决于NTP肽是否会被糖基化和/或磷酸化。如果是这样，酵母、昆虫或哺乳动物宿主细胞是优选的。

通常，用于任何宿主细胞中的载体将含有至少5'侧翼序列(也称为启动子)和其它调控元件，如增强子、复制起点元件、转录终止元件、含供体和受体剪接位点的完整内含子序列、信号肽序列、核糖体结合位点元件、多聚腺苷酸化序列、用于插入编码待表达多肽的核酸的多接头区，以及选择标记元件。下文论述这些元件中的每一个。任选地，载体可以含有标签序列，即位于蛋白质或肽编码序列的5'或3'端的寡核苷酸分子；所述寡核苷酸分子编码聚His(如六His(SEQ ID NO:118))，或其它标签，如FLAG、HA(血球凝集素流感病毒)或myc，对其而言存在市售抗体。所述标签通常在多肽表达后与多肽融合，并且可以充当从宿主细胞中亲和纯化蛋白质或肽的手段。可以例如使用针对所述标签的抗体作为亲和基质，通过柱色谱法实现亲和纯化。任选地，随后可以通过各种手段，如使用某些肽酶从纯化的蛋白质或肽中去除标签。

所属领域的技术人员可以在NTP肽的N端或C端融合人免疫球蛋白铰链和Fc区。后续Fc融合蛋白可以通过使用蛋白A亲和柱进行纯化。已知Fc在体内表现出长的药代动力学半衰期，并且已发现与Fc融合的蛋白质在体内表现出比未融合的对应物明显更长的半衰期。而且，与Fc区的融合允许分子二聚化/多聚化，其可能对一些分子的生物活性适用。

5'侧翼序列可以是同源的(即，来自与宿主细胞相同的物种和/或品系)、异源的(即，来自宿主细胞物种或品系以外的物种)、杂合的(即，来自一个以上来源的5'侧翼序列的组合)、合成的，或其可以是天然蛋白质或肽基因5'侧翼序列。因而，5'侧翼序列的来源可以是任何单细胞原核或真核生物、任何脊椎或无脊椎生物或任何植物，条件是5'侧翼序列在宿主细胞机构中具功能性并且可以被宿主细胞机构激活。

适用于本实施例的载体中的5'侧翼序列可以通过所属领域中众所周知的几种方法中的任一种获得。通常，除了蛋白质或肽基因侧翼序列之外，本文中适用的5'侧翼序列先前已通过作图和/或通过限制性内切核酸酶消化鉴定，并且因此可以使用适当的限制性内切核酸酶从适当组织来源中分离。在一些情况下，5'侧翼序列的完整核苷酸序列可能是已知的。此处，可以使用上述用于核酸合成或克隆的方法合成5'侧翼序列。在已知全部或仅一部分5'侧翼序列的情况下，可以使用PCR和/或通过筛选具有来自相同或另一物种的适合寡核苷酸和/或5'侧翼序列片段的基因组文库来获得。

在5'侧翼序列未知的情况下，含有5'侧翼序列的DNA片段可以从可以含有例如编码序列或甚至另一个或多个基因的DNA的较大片断中分离。可以通过使用一种或多种精心选择的酶进行限制性内切核酸酶消化来实现分离以分离适当的DNA片段。消化后，可以通过琼脂糖凝胶纯化、柱或所属领域的技术人员已知的其它方法分离所需片段。选择适于实现这一目的的酶对于所属领域的普通技术人员来说是显而易见的。

复制起点元件通常是商购的原核表达载体的一部分，并且有助于载体在宿主细胞中扩增。在一些情况下，将载体扩增到某一拷贝数对于蛋白质或肽的最佳表达很重要。如果选择的载体不含复制起点位点，则可以基于已知序列化学合成，并且连接到载体中。转录终止元件通常位于蛋白质或肽编码序列3'端，并且用于终止蛋白质或肽的转录。通常，原核细胞中的转录终止元件是富含G-C的片段，其后是聚T序列。虽然所述元件可以从文库克隆或作为载体的一部分商购，但也可以使用如上文所述的那些的核酸合成方法容易地合成。

可选标记基因元件编码在选择性培养基中生长的宿主细胞存活和生长所必需的蛋白质。典型的选择标记基因编码的蛋白质(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其它毒素，例如氨苄青霉素(ampicillin)、四环素(tetracycline)或卡那霉素(kanamycin)的抗性，(b)补充细胞的营养缺陷；或(c)供给无法从复合培养基获得的关键营养素。优选的选择标记是卡那霉素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。

核糖体结合元件，通常被称作Shine-Dalgarno序列(原核生物)或Kozak序列(真核生物)，通常是mRNA翻译起始所必需的。所述元件通常位于启动子的3'和待合成的蛋白质或肽的编码序列的5'。Shine-Dalgarno序列是变化的，但通常是多嘌呤(即，具有高A-G含量)。已经鉴定了许多Shine-Dalgarno序列，其中每一种都可以使用上述方法容易地合成并且用于原核载体中。

在需要从宿主细胞分泌NTP肽的那些情况下，信号序列可以用于将肽引导出合成它的宿主细胞，并且可以缺失蛋白质的羧基端部分以防止膜锚定。通常，信号序列位于NTP肽基因或cDNA的编码区中，或直接位于肽基因编码区的5'端。已经鉴定了许多信号序列，并且在所选宿主细胞中具功能性的任何信号序列均可以与肽基因或cDNA结合使用。因此，信号序列可以与肽基因或cDNA同源或异源，并且可以与肽基因或cDNA同源或异源。另外，可以使用上述方法化学合成信号序列。在大多数情况下，多肽通过信号肽的存在从宿主细胞中分泌将导致从多肽中去除氨基端甲硫氨酸。

在许多情况下，NTP肽基因或cDNA的转录因载体中存在一个或多个内含子而增加；在真核宿主细胞，尤其哺乳动物宿主细胞中产生所述肽时，尤其如此。所用内含子可以天然存在于肽基因内，尤其在所用基因是全长基因组序列或其片段的情况下。在内含子不是天然存在于基因内的情况下(对于大多数cDNA而言)，内含子可以从另一来源获得。内含子相对于侧翼序列和肽基因的位置通常很重要，因为内含子必须转录为有效的。因而，在插入到表达载体中的肽基因是cDNA分子的情况下，内含子的优选位置是转录起始位点的3'，和聚A转录终止序列的5'。对于肽cDNA而言优选地，一个或多个内含子将位于cDNA的一侧或另一侧(即，5'或3')，使其不会中断这一编码序列。来自任何来源，包括任何病毒、原核和真核(植物或动物)生物的任何内含子，均可以用于实践此实施例，条件是它与插入其中的宿主细胞相容。本文还包括合成内含子。任选地，可以在载体中使用一个以上的内含子。

在上述一种或多种元件尚未存在于待使用的载体中的情况下，它们可以分别获得并且连接到载体中。用于获得每种元件的方法是所属领域的技术人员熟知的，并且与上述方法(即，DNA合成、文库筛选等)相当。

用于实践此实施例的最终载体可以由起始载体，如市售载体构建。此类载体可以含有或可以不含有待包括在完成的载体中的一些元件。如果起始载体中不存在所需元件，则可以通过用适当的限制性内切核酸酶切割载体，使得待连接在载体中的元件末端和载体末端对于连接可相容来使每个元件分别连接到载体中。在一些情况下，为了获得令人满意的连接，可能必须使待连接在一起的末端成为平端。通过首先在所有四种核苷酸的存在下使用Klenow DNA聚合酶或T4DNA聚合酶填充“粘性末端”来实现平端化。这一程序是所属领域中众所周知的，并且例如在上文Sambrook等人进行了描述。或者，可以先将要插入到载体中的两种或更多种元件连接在一起(如果它们将彼此相邻定位)，并且随后将其连接到载体中。

构建载体的另一种方法是在一种反应混合物中同时进行各种元件的所有连接。此处，由于元件的不当连接或插入，将产生许多无义或无功能的载体，然而可以通过限制性内切核酸酶消化来鉴定和选择功能性载体。

用于实践此实施例的优选载体是与细菌、昆虫和哺乳动物宿主细胞相容的载体。此类载体尤其包括pCRII、pCR3和pcDNA3.1(Invitrogen Company,San Diego,Calif.)、pBSII(Stratagene Company,La Jolla,Calif.)、pET15b(Novagen,Madison,Wis.)、PGEX(Pharmacia Biotech,Piscataway,N.J.)、pEGFP-N2(Clontech,Palo Alto,Calif.)、pETL(BlueBachl；Invitrogen)和pFastBacDual(Gibco/BRL,Grand Island,N.Y.)。

在构建载体并且将编码全长或截短蛋白质或肽的核酸分子插入到载体的适当位点中后，可以将完成的载体插入适合的宿主细胞中用于扩增和/或多肽表达。宿主细胞可以是原核宿主细胞(如大肠杆菌)或真核宿主细胞(如酵母细胞、昆虫细胞或脊椎动物细胞)。在适当条件下培养时，宿主细胞可以合成蛋白质或肽，随后所述蛋白质或肽可以从培养基中收集(如果宿主细胞将其分泌到培养基中)或直接从产生其的宿主细胞中收集(如果其未被分泌)。

收集后，可以使用如分子筛色谱法、亲和色谱法等方法纯化NTP肽。用于蛋白质或肽生产的宿主细胞的选择将部分取决于肽是否会被糖基化或磷酸化(在这种情况下优选真核宿主细胞)，以及宿主细胞能够将肽折叠成其天然三级结构的方式(例如，二硫桥的正确取向等)，使得生物活性蛋白质由具有生物活性的肽制备，所述肽可以在使用如下所述的适当化学条件合成后折叠。适合的细胞或细胞系可以是哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell；CHO)、人胚肾(HEK)293、293T细胞或3T3细胞。适合的哺乳动物宿主细胞和用于转化、培养、扩增、筛选和产物生产及纯化的方法的选择是所属领域中已知的。其它适合的哺乳动物细胞系是猴COS-1和COS-7细胞系，以及CV-1细胞系。其它示例性哺乳动物宿主细胞包括灵长类动物细胞系和啮齿动物细胞系，包括转化的细胞系。正常的二倍体细胞，源自原代组织体外培养的细胞株以及原代外植体也是适合的。候选细胞可能在基因型上缺乏选择基因，或者可能含有显性作用的选择基因。其它适合的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠神经母细胞瘤N2A细胞、HeLa、小鼠L-929细胞，源自Swiss、Balb-c或NIH小鼠的3T3系、BHK或HaK仓鼠细胞系。

同样可用作适于本发明实施例的宿主细胞的是细菌细胞。举例来说，各种大肠杆菌菌株(例如HB101、DH5α、DH10和MC1061)在生物技术领域中作为宿主细胞是众所周知的。在这一方法中也可以使用枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、其它芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、链霉菌属(Streptomyces spp.)等的多种菌株。所属领域的技术人员已知的许多酵母细胞菌株也可作为用于表达本发明实施例的多肽的宿主细胞。

另外，如果需要，昆虫细胞系统可以用于本发明实施例的方法中。例如在Kitts等人(Biotechniques,14:810-817)、Lucklow(Curr.Opin.Biotechnol.,4:564-572)和Lucklow等人(J.Virol.,67:4566-4579)中描述了此类系统。优选的昆虫细胞是Sf-9和Hi5(Invitrogen,Carlsbad,Calif.)。

可以使用如氯化钙、电穿孔、显微注射、脂转染或DEAE-葡聚糖法等方法将载体插入(也称为转化或转染)到所选宿主细胞中。所选方法将部分地随待使用的宿主细胞的类型而变。这些方法和其它适合的方法是所属领域的技术人员熟知的，并且例如在上文Sambrook等人中阐述。

含有载体(即，转化或转染的)的宿主细胞可以使用所属领域的技术人员熟知的标准培养基培养。培养基通常将含有细胞生长和存活所比需的所有营养素。用于培养大肠杆菌细胞的适合培养基例如Luria培养液(LB)和/或Terrific培养液(TB)。适用于培养真核细胞的培养基是RPMI 1640、MEM、DMEM，所有这些培养基都可以补充有所培养的特定细胞系所需的血清和/或生长因子。用于昆虫培养的适合培养基是Grace培养基，其根据需要补充有酵母提取物、乳清蛋白水解物和/或胎牛血清。通常，仅添加抗生素或对转化细胞的选择性生长有用的其它化合物作为培养基的补充物。待使用的化合物由存在于转化宿主细胞的质粒上的可选标记元件决定。举例来说，在可选标记元件是卡那霉素抗性的情况下，添加到培养基中的化合物将是卡那霉素。

可以使用所属领域中已知的标准方法评估宿主细胞中产生的NTP肽的量。此类方法包括但不限于蛋白质印迹分析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、非变性凝胶电泳、HPLC分离、质谱法、免疫沉淀和/或活性测定，如DNA结合凝胶迁移测定。

如果蛋白质或肽设计成从宿主细胞中分泌，则可以在细胞培养基中发现大部分蛋白质或肽。以这种方式制备的蛋白质通常不具有氨基端甲硫氨酸，因为它在从细胞分泌期间被去除。然而，如果蛋白质或肽不从宿主细胞中分泌，则其将存在于细胞质和/或细胞核(对于真核宿主细胞)或细胞溶质(对于革兰氏阴性细菌宿主细胞)中并且可能具有氨基端甲硫氨酸。

对于位于宿主细胞细胞质和/或细胞核中的NTP肽，通常先机械破坏或用洗涤剂破坏宿主细胞以将细胞内内容物释放到缓冲溶液中。然后可以从所述溶液中分离肽。

可以使用多种技术实现从溶液中纯化NTP肽。如果已经合成NTP肽使其在羧基端或氨基端含有标签，如六聚组氨酸(SEQ ID NO:118)(例如肽/六His(SEQ ID NO:118))，或其它小肽，如FLAG(Sigma-Aldritch,St.Louis,Mo.)，或钙调蛋白结合肽(Stratagene,LaJolla,Calif.)，则可以通过以一步法使溶液通过亲和柱将其基本上纯化，其中柱基质对标签或直接对蛋白质(即，一种特异性识别肽的单克隆抗体)具有高亲和力。举例来说，多聚组氨酸以高亲和力和特异性结合镍、锌和钴；因此，采用基于镍的亲和树脂(如Qiagen的QlAexpress系统或Invitrogen的Xpress System中所用的)或基于钴的亲和树脂(如BDBiosciences-CLONTECH的Talon系统中所用的)的固定化金属离子亲和色谱法可以用于纯化肽/聚His。(参见，例如，Ausubel等人编，Current Protocols in Molecular Biology,10.11.8节,John Wiley&Sons,New York)。

在没有连接标签的情况下制备NTP肽，并且没有可用的抗体时，可以使用其它众所周知的纯化程序。此类程序包括但不限于离子交换色谱法、羟基磷灰石色谱法、疏水相互作用色谱法、分子筛色谱法、HPLC、与凝胶洗脱组合的天然凝胶电泳和制备式等电聚焦(Isoprime机器/技术，Hoefer Scientific)。在一些情况下，可以组合这些技术中的两种或更多种以实现提高的纯度。

如果预期主要在细胞内发现NTP肽，则可以使用所属领域的技术人员已知的任何标准技术从宿主细胞中提取细胞内物质(包括革兰氏阴性细菌的包涵体)。举例来说，可以通过弗氏压碎器(French press)、均质化和/或超声处理然后离心来裂解宿主细胞以释放周质/细胞质的内容物。如果肽已经在细胞溶质中形成包涵体，则包涵体通常可以与内部细胞膜和/或外部细胞膜结合，并且因此在离心后主要发现于团块物质中。然后可以在极端pH条件下或用离液剂，如洗涤剂、胍、胍衍生物、脲或脲衍生物，在还原剂，如二硫苏糖醇的存在下在碱性pH下或在三羧乙基膦的存在下在酸性pH下，处理团块物质以释放、分裂和溶解包涵体。然后可以使用凝胶电泳、免疫沉淀等分析其现在可溶形式的肽。如果需要分离肽，则可以使用标准方法实现分离，例如下面和Marston等人Meth.Enz.,182:264-275中所阐述的那些方法。

在一些情况下，NTP肽在分离时可能不具有生物活性。用于将多肽再折叠或转化为其三级结构并且产生二硫键的各种方法可以用于恢复生物活性。此类方法包括将溶解的多肽暴露于通常高于7的pH并且存在特定浓度的离液剂。离液剂的选择与用于包涵体溶解的选择非常相似，但通常浓度较低，并且不一定与用于溶解的离液剂相同。在大多数情况下，重折叠/氧化溶液还含有还原剂或特定比例的还原剂加上其氧化形式，以产生特定的氧化还原电位，从而允许在蛋白质半胱氨酸桥的形成中发生二硫化物改组。一些常用的氧化还原电对包括半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽(GSH)/二硫代GSH、氯化铜、二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT、2-巯基乙醇(bME)/二硫-b(ME)。在许多情况下，共溶剂对于提高再折叠效率是必需的，并且用于这一目的的更常用的试剂包括甘油、不同分子量的聚乙二醇和精氨酸。

如果在宿主细胞中没有形成显著程度的NTP肽包涵体，则在细胞匀浆离心后，将主要在上清液中发现NTP肽，并且可以使用如下面所阐述的那些方法从上清液中分离NTP肽。

在优选部分或完全分离NTP肽的那些情形下，可以使用所属领域的技术人员熟知的标准方法实现纯化。此类方法包括但不限于通过电泳，然后电洗脱，各种类型的色谱法(免疫亲和、分子筛和/或离子交换)和/或高压液相色谱法来分离。在一些情况下，可能优选使用这些方法中的一种以上进行完全纯化。

除了使用重组DNA技术制备和纯化NTP肽之外，NTP肽和其片段、变体、同源物、融合蛋白、肽模拟物和衍生物可以使用所属领域中已知的技术，通过化学合成方法(如固相肽合成)制备，所述技术如Merrifield等人，J.Am.Chem.Soc.,85:2149，Houghten等人Proc NatlAcad.Sci.USA,82:5132，和Stewart和Young,Solid Phase Peptide Synthesis,PierceChemical Co.,Rockford,Ill.阐述的那些。可以合成在氨基端有或没有甲硫氨酸的此类肽。化学合成的NTP肽可以使用这些参考文献中所阐述的方法氧化以形成二硫桥。预期NTP肽具有与重组产生的或从天然来源纯化的肽相当的生物活性，因此可与重组或天然肽互换使用。

其中肽与聚合物键联的经化学修饰的NTP肽组合物包括在本发明实施例的范围内。所选聚合物通常是水溶性的，使得其连接的蛋白质不会在水性环境(如生理环境)中沉淀。所选聚合物通常被修饰为具有单一反应性基团，如用于酰化的活性酯或用于烷基化的醛，使得可以如本发明方法中所提供的那样控制聚合度。聚合物可以具有任何分子量，并且可以是支链或非支链的。聚合物的混合物包括在肽聚合物范围内。

在一些情况下，可能需要制备天然存在的NTP肽的核酸和/或氨基酸变体。可以使用定点诱变、PCR扩增或其它适当方法产生核酸变体，其中引物具有所需的点突变(对于诱变技术的描述，参见Sambrook等人，同上，和Ausubel等，同上)。使用Engels等人(同上)描述的方法的化学合成也可以用于制备此类变体。也可以使用所属领域的技术人员已知的其它方法。

优选的核酸变体是那些含有核苷酸取代的核酸变体，核苷酸取代在要用于产生NTP肽的宿主细胞中造成密码子偏好。此类密码子优化可以通过计算机算法确定，所述计算机算法并入了密码子频率表，如University of Wisconsin Package Version 9.0,Genetics Computer Group,Madison,Wis.所提供的用于高度表达的细菌基因的密码子偏好的Ecohigh.Cod。其它有用的密码子频率表包括Celegans_high.cod、Celegans_low.cod、Drosophila_high.cod、Human_high.cod、Maize_high.cod和Yeast_high.cod。其它优选变体是与野生型相比，编码如上所述的保守性氨基酸变化的那些变体(例如，其中天然存在的氨基酸侧链的电荷或极性基本上不因被不同的氨基酸取代而改变)，和/或设计成产生新颖糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计成消除现有糖基化和/或磷酸化位点的那些变体。

NTP肽和其片段、同源物、变体、融合蛋白、肽模拟物、衍生物和盐也可以使用所属领域的技术人员已知的常规肽合成技术制备。这些技术包括化学偶联法(参见Wunsch,E:"Methoden der organischen Chemie"，第15卷，Band 1+2,Synthese von Peptiden,thimeVerlag,Stuttgart(1974)，和Barrany,G.；Marrifield,R.B.:"The Peptides,"E.Gross,J.Meienhofer编，第2卷，第1章，第1-284页，Academic Press(1980))，酶促偶联法(参见Widmer,F.Johansen,J.T.,Carlsberg Res.Commun.，第44卷，第37-46页(1979)；Kullmann,W.:"Enzymatic Peptide Synthesis",CRC Press Inc.Boca Raton,Fla.(1987)；和Widmer,F.,Johansen,J.T.in"Synthetic Peptides in Biology and Medicines,"Alitalo,K.,Partanen,P.,Vatieri,A.编，第79-86页，Elsevier,Amsterdam(1985))，或如果对于工艺设计和经济有利，化学法和酶促法的组合。使用本文提供的指导，所属领域的技术人员能够改变NTP肽的肽序列以产生具有与原始或天然NTP肽相同或相似的生物学活性(生物活性)的同源物。

使用给定NTP肽的模拟物而不是肽本身存在优势。一般来说，肽模拟物更具生物可利用性，具有更长的作用持续时间并且比产生天然蛋白质和肽更便宜。

可以使用组合化学技术和所属领域中已知的其它技术开发NTP肽的肽模拟物(参见例如Proceedings of the 20th European Peptide Symposium，G.Jung,E.Bayer编，第289-336页，以及其中的参考文献)。所属领域中已知的用于对肽进行结构修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括主链手性中心的反向，产生D-氨基酸残基结构，特别是在N端，可以使得蛋白水解降解的稳定性增强，而对活性没有不利影响。在论文"Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding",Smith C.S.等人，Drug Development Res.15，第371-379页(1988)中提供了一个实例。

第二种方法是改变环状结构的稳定性，如N到C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等人，在Smith和Rivier(编)"Peptides:Chemistry and Biology",Escom,Leiden(1991)，第268-270页中)。在受构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了这样的一个实例，如在Goldstein,G.等人的美国专利第4,457,489号(1985)中公开的那些，所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

第三种方法是用赋予蛋白水解抗性的伪肽键取代NTP肽中的肽键。已经描述了许多伪肽键，其一般不影响肽结构和生物活性。这种方法的一个实例是取代逆反向伪肽键("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin",Sisto A.等人在Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)"Peptides,Chemistry,Structure and Biology",Escom,Leiden(1990)，第722-773页中)和Dalpozzo等人(1993),Int.J.Peptide ProteinRes.,41:561-566，其以引用的方式并入本文中)。根据这种修饰，肽的氨基酸序列可以与上述肽的序列相同，除了一个或多个肽键被逆反向伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对由作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。

具有一个或多个还原的逆反向伪肽键的肽的合成是所属领域中已知的(Sisto(1990)和Dalpozzo等人(1993)，以上引用)。因此，肽键可以被非肽键取代，所述非肽键允许肽模拟物采用原始肽类似结构，因此具有生物活性。还可以通过用类似结构的其它化学基团置换氨基酸的化学基团来进行进一步修饰。已知会增强酶促裂解稳定性而没有或几乎没有生物活性损失的另一种适合的伪肽键是还原的电子等排体伪肽键，是(Couder等人(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:181-184，其以全文引用的方式并入本文中)。因此，这些肽的氨基酸序列可以与肽序列相同，除了一个或多个肽键被电子等排体伪肽键置换以外。优选地，大多数N端肽键被取代，因为此类取代将赋予对作用于N端的肽链端解酶引起的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体伪肽键的肽的合成是所属领域中已知的(Couder等人(1993)，以上引用)。其它实例包括引入酮亚甲基或甲基硫醚键以置换肽键。

NTP肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，其保留生物活性的重要结构决定因素，但消除肽键，从而赋予蛋白水解抗性(Simon等人，1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，其以全文引用的方式并入本文中)。类肽是N-取代的甘氨酸寡聚物。已经描述了许多N-烷基，其各自对应于天然氨基酸的侧链(Simon等人(1992)，以上引用并且以全文引用的方式并入本文中)。肽的一些或所有氨基酸都被对应于被置换的氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。

可以通过NMR波谱法、晶体学和/或计算机辅助分子建模确定原始肽的三级结构来辅助肽模拟物的开发。这些技术有助于开发比原始肽具有更高效力和/或更高生物利用率和/或更高稳定性的新型组合物(Dean(1994),BioEssays,16:683-687；Cohen和Shatzmiller(1993),J.Mol.Graph.,11:166-173；Wiley和Rich(1993),Med.Res.Rev.,13:327-384；Moore(1994),Trends Pharmacol.Sci.,15:124-129；Hruby(1993),Biopolymers,33:1073-1082；Bugg等人(1993),Sci.Am.,269:92-98，全部以全文引用的方式并入本文中)。

一旦鉴定出潜在的肽模拟化合物，就可以使用以下实例中概述的方法合成和测定以评估其活性。通过上述方法获得的具有肽的生物活性和类似三维结构的肽模拟化合物涵盖在此实施例中。对于所属领域的技术人员来说显而易见的是，肽模拟物可以由带有上述一种或多种修饰的任何肽产生。此外显而易见的是，除了它们作为治疗性化合物的实用性之外，此实施例的肽模拟物还可以用于开发甚至更有效的非肽化合物。

目前存在许多能够合成本文所述的肽的机构。举例来说，给定NTP肽的序列，所述机构可以合成肽并且转寄合成的肽，以及随附文件和肽一致性的证明。

本发明的实施例涉及治疗患有可能导致IPSS评分的恶化或进展(例如，评分保持相对相同或增加)的BPH的哺乳动物的方法。与施用对照的展现IPSS恶化或进展的哺乳动物的百分比相比，治疗方法降低展现IPSS恶化或进展的哺乳动物的百分比超过10％。此类方法包括向有需要的哺乳动物施用治疗有效量的单独的或与另外的活性剂组合的NTP肽。有需要的哺乳动物可以是罹患良性前列腺增生，可能具有或可能不具有增加的患前列腺癌风险的哺乳动物，或具有患前列腺癌风险的哺乳动物。有需要的哺乳动物还可以是将受益于改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展的任何哺乳动物。

如果使用，则另外的活性剂可以是一种或多种选自以下的活性剂：(i)抗癌活性剂(如烷化剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、RNA/DNA抗代谢物和抗有丝分裂剂)；(ii)用于治疗良性生长的活性剂，如抗痤疮和抗疣活性剂(水杨酸)；(iii)抗雄激素化合物，(乙酸环丙孕酮(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)他莫昔芬、芳香酶抑制剂)；(iv)α1-肾上腺素能受体阻滞剂(坦索罗辛、特拉唑嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、布那唑嗪、吲哚拉明、阿呋唑嗪、西罗多辛)；(v)5α-还原酶抑制剂(非那雄胺、度他雄胺)；(vi)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂(他达拉非)和其组合。优选地，另外的活性剂选自由以下组成的组：坦索罗辛、非那雄胺、特拉唑嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、他达拉非、阿呋唑嗪、西洛多辛、度他雄胺、度他雄胺和坦索罗辛的组合，以及其混合物和组合。

所述病状可以是，任选地除BPH以外，例如肺、乳腺、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、血液、脑和其覆盖物、脊髓和其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝脏、胆囊、眼、耳、鼻、喉、扁桃体、口腔、淋巴结和淋巴系统和其它器官的肿瘤。其它病状包括中风或充血性心力衰竭；医学病状，如前列腺炎或尿路感染；或摄取已知会促成潴留的药剂或药物，例如盐酸伪麻黄碱、感冒药、止痛药(如麻醉剂或镇静剂)或苯海拉明。

如本文所用，术语“恶性肿瘤”旨在涵盖以低分化、中度分化和良好分化形式存在的所有形式的人类癌瘤、肉瘤和黑素瘤。

NTP肽的治疗性组合物可以包含治疗有效量的NTP肽与药学上可接受的载剂的掺合物。在一些替代实施例中，另外的活性剂可以与NTP肽在相同的组合物中施用，并且在其它实施例中，包含NTP肽的组合物作为注射剂施用，而另外的活性剂配制成口服药剂(凝胶、胶囊、片剂、液体等)。载剂物质可以是注射用水，优选补充有用于向哺乳动物施用的溶液中常见的其它物质。通常，供治疗使用的NTP肽将以包含纯化肽以及一种或多种生理学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂的组合物的形式施用。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是示例性的适当载剂。优选地，使用适当赋形剂(例如蔗糖)将产物配制成冻干物。根据需要可以包括其它标准载剂、稀释剂和赋形剂。实施例的组合物还可以包含所属领域的普通技术人员已知的具有适当pH值范围的缓冲液，包括约pH 7.0-8.5的Tris缓冲液，或约pH4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可以包括山梨糖醇或其适合的替代品。

使用与抗体、抗体片段、抗体样分子或对特定肿瘤标记物(如细胞受体、信号肽或过表达的酶)具有高亲和力的分子结合或键联或结合的NTP肽，靶向未实验哺乳动物中的不需要的细胞成分也涵盖在实施例的范围内。使用抗体、抗体片段、抗体样分子或对特定肿瘤标记物具有高亲和力的分子将肽结合物靶向特定的细胞或组织靶标。举例来说，具有独特表面抗原或表达抗原的肿瘤可以被抗体、抗体片段或抗体样结合分子靶向，并且肿瘤细胞可以被肽杀死。此类使用抗体靶向的方法具有预期优点，即降低剂量，增加靶细胞结合和摄取的可能性，以及增加靶向和治疗转移性肿瘤和微型肿瘤的有效性。

实施例还涵盖使用与蛋白质或其它分子结合或键联或结合形成组合物的NTP肽，所述组合物在肿瘤或其它不需要的细胞位点处或其附近被肿瘤或位点特异性酶或蛋白酶或通过靶向肿瘤或其它不需要的细胞的抗体结合物裂解时，在肿瘤或其它不需要的细胞位点处或其附近释放所述肽。

实施例还涵盖使用与蛋白质或其它分子结合或键联或结合形成组合物的NTP肽，所述组合物在待处理组织暴露于光(如在激光疗法或其它光动力或光活化疗法中)、其它形式的电磁辐射，如红外辐射、紫外辐射、x射线或γ射线辐射、局部热量、α或β辐射、超声波发射或其它来源的局部能量时释放肽或肽的一些生物活性片段。

实施例还涵盖采用树枝状大分子、富勒烯和其它合成分子、聚合物和大分子的NTP肽的治疗性组合物，其中所述肽和/或其相对应的DNA分子本身或连同其它种类的分子如肿瘤特异性标志物一起与所述分子、聚合物或大分子结合、连接或包封在其中。例如，美国专利第5,714,166号，生物活性和/或靶树枝状大分子结合物(Bioactive and/or TargetedDendimer Conjugates)，提供了一种制备和使用树枝状聚合物偶联物的方法，所述树枝状聚合物偶联物由至少一种具有靶标导向因子的树枝状大分子和至少一种与之结合的生物活性剂组成。美国专利第5,714,166号的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

实施例还涵盖用NTP肽和/或基因的治疗性组合物和药物递送媒介物(如脂质乳剂、胶束聚合物、聚合物微球、电活性聚合物、水凝胶和脂质体)与另外的活性剂组合治疗哺乳动物的方法。

转移到哺乳动物不需要的细胞中的NTP肽或相关基因或基因等同物的使用也涵盖在实施例中。肿瘤内NTP肽的过表达可以用于诱导肿瘤中的细胞死亡，并且因此减少肿瘤细胞群。预期NTP肽的基因或基因等同物转移以治疗不需要的细胞成分具有需要较少剂量并且传递到靶细胞成分的细胞后代的优点，因此使治疗频率更低并且总治疗更少。此实施例还涵盖将编码含有NTP肽的融合蛋白的基因转移到不需要的细胞或邻近细胞，其中在基因表达和融合蛋白产生和/或分泌之后，融合蛋白受天然酶或蛋白酶或受前药裂解以在不需要的细胞中、在不需要的细胞处或其附近释放NTP肽。

使用克隆重组肽-抗体结合物；克隆重组肽-抗体片段结合物；和用于施用的克隆重组肽-抗体样蛋白结合物以治疗未实验哺乳动物也涵盖在实施例的范围内。克隆的NTP肽与靶向结合物(如抗体、抗体片段、抗体样分子或对癌症特异性受体或其它肿瘤标记物具有高亲和力的分子)组合的优点是除克隆结合分子的制造和标准化生产的优点之外，此类分子还结合了上述靶向优点。

实施例还包括与另外的活性剂组合使用NTP肽或基因或基因等同物的治疗性组合物作为医疗装置(如血管(内)支架支架)的涂层的组分，以去除、抑制或防止不需要的细胞增殖或积聚。

用于口服施用的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和粒剂。在此类固体剂型中，可以将另外的活性剂和/或NTP肽与下列中的至少一种掺合：(a)一种或多种惰性赋形剂(或载剂)，如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或增量剂，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(d)保湿剂，如甘油；(e)崩解剂，如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液缓凝剂，如石蜡；(g)吸收促进剂，如季铵化合物；(h)润湿剂，如乙酰醇和单硬脂酸甘油酯；(i)吸附剂，如高岭土和膨润土；和(j)润滑剂，如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。对于胶囊、片剂和丸剂而言，剂型还可以包含缓冲剂。

用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可以包含所属领域中常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂。示例性乳化剂是乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇、脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。

除此类惰性稀释剂外，组合物还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。

可以改变实施例的组合物中活性成分的实际剂量水平以获得有效获得对特定组合物和施用方法的所需治疗反应的NTP肽和另外的活性剂的量。因此，所选剂量水平取决于所需疗效、施用途径、所需治疗持续时间和其它因素。

对于包括人在内的哺乳动物，可以基于体表面积施用有效量。对于不同大小、物种的动物和人的剂量相互关系(以mg/M²体表面积计)由E.J.Freireich等人，CancerChemother.Rep.,50(4):219(1966)描述。体表面积可以根据个体的身高和体重大致确定(参见例如Scientific Tables,Geigy Pharmaceuticals,Ardsley,N.Y.第537-538页(1970))。

施用给宿主的NTP肽和另外的活性剂的总日剂量可以是单次剂量或分次剂量。剂量单位组合物可以含有可以用于构成日剂量的此类约数的此类量。然而，应当理解，任何特定患者的具体剂量水平将取决于多种因素，包括体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间和途径、施用药物的效力、吸收和排泄率，与其它药物的组合以及所治疗的特定疾病的严重程度。优选组合物仅作为注射剂或输注剂施用一次，或者在另一个优选的实施例中，组合物施用两次。在此实施例中，组合物施用的间隔时间段可以在2个月到10年，或8个月到4年，或大于约一年(例如，1到2年)之间变化。

根据实施例施用NTP肽组合物的方法包括但不限于，肌内、口服、静脉内、腹膜内、颅内(实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮、经气溶胶、输注、快速浓注、植入装置、持续释放系统等施用所述化合物。

施用实施例的NTP肽的另一种方法是透皮或经皮途径。另外的活性剂可以与NTP肽一起使用，或者可以如上所述分别施用，或可以根本不施用。此类实施例的一个实例是使用贴剂。具体地说，可以用肽于例如二甲基亚砜(DMSO)，或DMSO与棉籽油的混合物中的微细悬浮液制备贴剂，并且使其与携带肿瘤的哺乳动物远离皮肤袋内肿瘤定位部位的皮肤接触。其它介质或其与其它溶剂和固体支撑物的混合物也同样有效。贴剂可以含有溶液或悬浮液形式的肽化合物。然后可以例如通过将其插入到患者的皮肤袋中将贴剂施加到患者的皮肤上，皮肤袋通过借助于缝线、夹子或其它保持装置将皮肤折叠并保持在一起而形成。所述袋应以这样的方式使用，以确保在不受哺乳动物干扰的情况下与皮肤持续接触。除了使用皮肤袋之外，还可以使用确保贴剂与皮肤接触牢固放置的任何装置。举例来说，可以使用胶粘绷带将贴剂保持在皮肤上的适当位置。

NTP肽，任选与另外的活性剂组合，可以以持续释放调配物或制剂形式施用。持续释放制剂的适合实例包括呈成型制品(例如膜或微胶囊)形式的半透性聚合物基质。持续释放基质包括聚酯、水凝胶、聚丙交酯(美国专利第3,773,919号、EP 58,481)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等人，Biopolymers,22:547-556)、聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等人，J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277和Langer,Chem.Tech.,12:98-105)、乙烯-乙酸乙烯酯(Langer等人，同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。持续释放组合物还可以包括脂质体，脂质体可以通过所属领域中已知的几种方法中的任一种制备(例如，Eppstein等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-3692；EP 36,676；EP 88,046；和EP 143,949)。

施用实施例的NTP肽的另一种方法是通过将NTP肽直接或间接输注到待治疗的组织中。此类实施例的一个实例是将NTP肽直接注射到待治疗的组织中。治疗可以由单次注射、在一个时刻的多次注射或在几小时、几天或几个月的时段内的一系列注射组成，其中通过活检、成像、IPSS(特别优选的实施例)或通过监测病症恶化或进展的其它方法对症状的恶化(消退)或进展进行监测。向待治疗组织的注射可以通过插入如鼻、口腔、耳、阴道、直肠或尿道等腔道中的装置或通过切口进行以便到达体内组织并且可以连同成像或光学系统(如超声波或光纤镜)一起进行，以便识别适当的注射部位。此类实施例的另一实例是使用可以随时间推移向组织提供恒定的NTP肽输注的装置。

另一种施用NTP肽的方法是与用于物理切除、消融或以其它方式杀死或破坏需要或期望去除或破坏的肿瘤或其它组织或细胞成分的外科手术或类似程序相结合，其中实施例的NTP肽是施用于移除肿瘤或其它组织的区域周围的直接区域，以便破坏或阻止未被所述程序去除或破坏的任何肿瘤细胞或其它细胞成分的生长。

施用实施例的NTP肽的另一种方法是通过将装置植入到待治疗的肿瘤或其它组织中。在此实施例中，另外的活性剂通常通过与NTP肽不同的施用途径施用。此类实施例的一个实例是在待治疗的肿瘤或其它组织中植入含肽晶片，并且通过口服施用来施用另外的活性剂。随时间推移，晶片将治疗剂量的NTP肽释放到组织中。或者或另外，可以通过向受影响区植入其上已经吸收了NTP肽的膜、海绵或其它适当材料来局部施用所述组合物。在使用植入装置的情况下，可以将装置植入任何适合的组织或器官中，并且可以通过快速浓注，或通过连续施用，或通过导管使用连续输注，直接通过装置递送所述肽。

替代施用方法是将编码NTP肽的基因的一个或多个拷贝引入被靶向的细胞中，并且如果需要，诱导所述基因拷贝开始在细胞内产生肽。在此实施例中，另外的活性剂通常通过与NTP肽不同的施用途径施用。一种可以应用基因疗法的方式是使用编码NTP肽的基因(基因组DNA、cDNA和/或编码肽(或其片段、变体、同源物或衍生物)的合成DNA)，所述基因可以与组成型或诱导型启动子可操作地连接形成基因疗法DNA构建体。启动子可以与编码内源性肽的基因同源或异源，条件是它在将插入构建体的细胞或组织类型中具有活性。基因疗法DNA构建体的其它组分可以根据需要任选地包括设计用于位点特异性整合的DNA分子(例如，适用于同源重组的内源侧翼序列)、组织特异性启动子、增强子或沉默子，能够提供优于亲本细胞的选择性优势的DNA分子，适用作鉴定转化细胞的标记的DNA分子，阴性选择系统，细胞特异性结合剂(例如，用于细胞靶向)细胞特异性内化因子，和增强载体表达的转录因子以及使载体制造成为可能的因子。

对体内或离体细胞或组织的基因递送方式包括(但不限于)直接注射裸DNA、弹道方法、脂质体介导的转移、受体介导的转移(配体-DNA复合物)、电穿孔和磷酸钙沉淀。参见美国专利第4,970,154号、WO 96/40958、美国专利第5,679,559号、美国专利第5,676,954号和美国专利第5,593,875号，这些专利中的每一个的公开内容以全文引用的方式并入本文中。其还包括使用病毒载体，如逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘病毒、慢病毒、乳头瘤病毒或单纯疱疹病毒，使用DNA-蛋白质结合物和使用脂质体。基因疗法载体的用途在例如美国专利第5,672,344号、美国专利第5,399,346号、美国专利第5,631,236号和美国专利第5,635,399号中有描述，这些专利中的每一个的公开内容以全文引用的方式并入本文中。

编码NTP肽的基因可以通过使用如本文所述的方法将已经离体基因工程化的某些细胞植入患者体内来递送，以表达和分泌NTP肽或其片段、变体、同源物或衍生物。此类细胞可以是动物或人类细胞，并且可以源自患者自身组织或源自人或非人的另一来源。任选地，细胞可以是永生化的或是干细胞。然而，为了降低免疫应答的机会，优选包封细胞以避免周围组织浸润。包封材料通常是生物相容的、半透性聚合物外壳或膜，其允许蛋白质产物释放，但防止患者免疫系统或来自周围组织的其它有害因子对细胞的破坏。用于膜包封细胞的方法是所属领域的技术人员熟悉的，并且包封细胞的制备和其在患者中的植入可以在无需过度实验的情况下完成。参见例如美国专利第4,892,538号、第5,011,472号和第5,106,627号，这些专利中的每一个的公开内容以全文引用的方式并入本文中。用于包封活细胞的系统在PCT WO 91/10425中有描述。用于配制各种其它持续或受控递送方式的技术，如脂质体载剂、生物可侵蚀粒子或珠粒，也是所属领域的技术人员已知的，并且例如在美国专利第5,653,975号中有描述，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。可以将有或没有包封的细胞植入患者的适合身体组织或器官中。

一实施例包括改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，所述方法包含向哺乳动物(包括易于发生此类症状恶化或进展的哺乳动物)施用至少一次治疗有效量的NTP肽，具体地说包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列的分离的肽。另一实施例包括改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，所述方法包含向哺乳动物(包括易于发生此类症状恶化或进展的哺乳动物)施用治疗有效量的NTP肽，具体地说包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中的氨基酸序列的分离肽，随后施用一种或多种活性成分。另一实施例包括通过治疗未罹患BPH但易患BPH的哺乳动物，改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或进展和/或改善与BPH相关联的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，并且在其它实施例中，所述哺乳动物罹患选自由以下组成的组的一种或多种病状：尿道口狭窄、轻度包茎、阴茎收缩带、包茎、前列腺癌、器官脱垂(选自膀胱膨出、直肠膨出和子宫脱垂)、盆腔肿块(选自妇科恶性肿瘤、子宫肌瘤和卵巢囊肿)、后倾受影响的妊娠子宫、动脉瘤扩张、膀胱结石、膀胱肿瘤、粪便嵌塞、胃肠道或腹膜后恶性肿块、尿道狭窄、结石、水肿、龟头炎、前列腺脓肿、前列腺炎、急性外阴阴道炎、阴道扁平苔藓、阴道苔藓硬化、阴道天疱疮、血吸虫病、膀胱炎、包虫病、吉兰-巴雷综合征(gullain-Barre syndrome)、单纯疱疹病毒、莱姆病、尿道周围脓肿、横贯性脊髓炎、结核性膀胱炎、尿道炎、水痘-带状疱疹病毒、阴茎创伤、阴茎断裂、阴茎裂伤和福勒综合征(Fowler's syndrome)。

在某些实施例中，包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列的分离的肽与至少一种选自由以下组成的组的活性剂组合施用：(1)5α-还原酶抑制剂和/或抗雌激素，(2)5α-还原酶抑制剂和/或芳香酶抑制剂，(3)5α-还原酶抑制剂和/或17β-HSD抑制剂，(4)5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(5)5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(6)5α-还原酶抑制剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(7)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(8)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(9)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和17β-HSD抑制剂，(10)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(11)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(12)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(13)17β-HSD抑制剂和抗雌激素，(14)17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(15)17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素，(16)17β-HSD抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(17)17β-HSD抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(18)17β-HSD抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(19)抗雌激素和芳香酶抑制剂和(20)抗雌激素、芳香酶抑制剂和抗雄激素，(21)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂和抗雌激素，(22)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂和芳香酶抑制剂，(23)LHRH激动剂或拮抗剂、5α还原酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(24)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(25)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(26)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(27)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(28)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(29)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和17β-HSD抑制剂，(30)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(31)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(32)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、芳香酶抑制剂、抗雌激素和17β-HSD抑制剂，(33)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和抗雌激素，(34)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(35)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素，(36)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素和抗雌激素，(37)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素和芳香酶抑制剂，(38)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素、抗雌激素和芳香酶抑制剂，(39)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素和芳香酶抑制剂和(40)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素、芳香酶抑制剂和抗雄激素。

在其它实施例中，包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列的分离的肽与至少一种选自由以下组成的组的活性剂组合施用：α-肾上腺素能阻滞剂(如阿呋唑嗪或坦索罗辛)、度他雄胺、他达拉非、特拉唑嗪、非那雄胺、多沙唑嗪、非那雄胺与多沙唑嗪的组合和其混合物。

提供以下实例以说明本发明的实施例。然而，应理解，实施例不限于这些实例中所描述的特定情况或细节。在说明书全篇，对包括美国专利在内的公开可获得文献的任何和所有引用都具体地以引用的方式并入。具体地说，实施例明确地以引用的方式并入以下申请中所含的实施例：2015年7月24日提交的待决美国专利申请14/808,713号，题为：降低罹患良性前列腺增生的患者的手术需要的方法；2015年1月27日提交的美国专利申请第14/606,683号，题为：治疗需要破坏或去除细胞的病症的方法，2015年6月12日提交的美国申请第14/738,551号，题为：用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的组合组合物，美国专利申请公开第2007/0237780号(现已废弃)；第2003/0054990号(现为美国专利第7,172,893号)；第2003/0096350号(现为美国专利第6,924,266号)；第2003/0096756号(现为美国专利第7,192,929号)；第2003/0109437号(现为美国专利第7,241,738号)；第2003/0166569号(现为美国专利第7,317,077号)；第2005/0032704号(现为美国专利第7,408,021号)；和第2015/0148303号(现为美国专利第9,243,035号)，其中的每一个都揭示其中说明的某些肽是在正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其它组织中引起体内细胞死亡的有效药剂。

实例1

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)或b)单独的PBS。患者随访1到6年，定期进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量，其为用于衡量前列腺症状改善或恶化的定量量表。IPSS对以下进行量化：1)排尿后膀胱排空不完全；2)尿频；3)排尿期间起停；4)尿急；5)尿流弱；6)在排尿期间需要使力或费力；7)夜晚睡眠后需要排尿(夜尿症)。将所有给予前列腺内注射SEQ ID NO.66的患者中与基线IPSS的差异与在接受单独的PBS的患者中与基线IPSS的差异进行比较。令人惊讶的是，除了SEQ IDNO.66治疗的患者具有更多改善之外，在用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化和进展的发生率的未预期的降低。结果可以见于下表1中。

表1

治疗	患者数目	IPSS恶化百分比
			SEQ ID NO:66<sup>1</sup>	290	13.1％*
对照<sup>2</sup>	214	21％

1.接受SEQ ID NO:66的患者。

2.未施用单独的PBS的患者。

*p<.02

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或进展降低约37.6％。

实例2

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。随后，326名安慰剂和SEQ ID NO.66治疗的受试者施用前列腺内注射SEQ ID NO.66(2.5mg)。患者随访1到6年，进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量，其为用于衡量前列腺症状改善或恶化的定量量表。IPSS对以下进行量化：1)排尿后膀胱排空不完全；2)尿频；3)排尿期间起停；4)尿急；5)尿流弱；6)在排尿期间需要使力或费力；7)夜晚睡眠后需要排尿(夜尿症)。将随后接受SEQ ID NO.66的患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了SEQ ID NO.66治疗的患者具有更多改善之外，在用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化或缺乏改善的发生率的未预期的降低。结果可以见于下表2中。

表2

*p<0.0001

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或缺乏改善降低约65.4％的量。

实例3

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。随后，给予326名受试者前列腺内注射SEQ ID NO：66(2.5mg)。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量，其为用于衡量前列腺症状改善或恶化的定量量表。IPSS对以下进行量化：1)排尿后膀胱排空不完全；2)尿频；3)排尿期间起停；4)尿急；5)尿流弱；6)在排尿期间需要使力或费力；7)夜晚睡眠后需要排尿(夜尿症)。将接受两次SEQ ID NO.66的SEQ ID NO.66患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了SEQ IDNO.66治疗的患者具有更多改善之外，在用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化或缺乏改善的发生率的未预期的降低。结果见于下表3中。

表3

*p<0.0001

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或缺乏改善降低约64.8％的量。

实例4

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。随后给予患者(n＝326)前列腺内注射SEQ ID NO.66(2.5mg)。患者随访1到6年，进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量，其为用于衡量前列腺症状改善或恶化的定量量表。将接受SEQ ID NO:66的所有安慰剂和SEQ ID NO.66治疗的患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了SEQ IDNO.66治疗的患者具有更多改善之外，在用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化或缺乏改善的发生率的未预期的降低。结果可以见于下表4中。

表4

*p<.0001

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或缺乏改善降低约65％的量。

实例5

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。随后给予326名患者前列腺内注射SEQ ID NO.66(2.5mg)。患者随访1到6年，进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量，其为用于衡量前列腺症状改善或恶化的定量量表。将接受SEQ ID NO.66的安慰剂患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了随后用SEQ ID NO.66治疗的安慰剂患者具有更多改善之外，在随后用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化和进展的发生率的未预期的降低。结果可以见于下表5中。

表5

治疗	患者数目	IPSS恶化百分比
			安慰剂加SEQ ID NO:66	133	9.0％*
对照	214	21％

*p<0.0001

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或进展降低约57％。

实例6

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。随后给予326名患者前列腺内注射SEQ ID NO.66(2.5mg)。患者随访1到6年，进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量。将接受SEQ ID NO.66并且随后接收SEQ ID NO.66的患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了随后用SEQ ID NO.66治疗的SEQ ID NO.66患者具有更多改善之外，在随后用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化和进展的发生率的未预期的降低。结果见于下表6中。

表6

*p<0.05

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或进展降低约35.7％。

实例7

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)或b)单独的PBS。随后，给予一些患者(安慰剂(单独的PBS)和用SEQ ID NO.66治疗的那些患者)前列腺内注射SEQ ID NO.662.5mg.。患者随访1到6年，定期进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量。将随后接受SEQ ID NO.66的所有安慰剂和SEQ ID NO.66治疗的患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中与基线IPSS的差异进行比较。令人惊讶的是，除了随后用SEQ ID NO.66治疗的所有安慰剂和SEQ ID NO 66治疗的患者具有更多改善之外，在随后用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化和进展的发生率的未预期的降低。结果示于下表7中。

表7

*p<.0001

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或进展降低约44.3％。

实例8

在双盲条件下由泌尿科医生在办公室环境中在超声引导下给予BPH患者前列腺内注射a)于磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的SEQ ID NO.66或b)单独的PBS。患者随访1到6年，进行体检、实验室检验和症状评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)度量。将接受SEQ ID NO.66的患者中与基线IPSS的差异与接受单独的PBS的患者中的结果进行比较。令人惊讶的是，除了SEQ ID NO.66治疗的患者具有更多改善之外，在用SEQ ID NO.66治疗的患者中还存在症状恶化和无改善的发生率的未预期的降低。结果可以见于下表8中。

表8

*p<.003

基于这些研究的结果，施用本发明的NTP肽适用于治疗患者群体，包括不同于仅罹患BPH的患者群体，并且适用于改善BPH症状或防止BPH症状恶化或进展。当与对照相比时，所述组合物和方法能够将BPH症状的恶化或缺乏改善降低约27％的量。

Claims

1.一种改善哺乳动物良性前列腺增生的症状或防止所述症状恶化或进展的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用治疗有效量的肽，所述肽包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu，其中与施用对照物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低超过10％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包含施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽和载剂。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述肽施用多于一次。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包含施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽，所述肽具有至少一个并且至多25个侧接SEQ ID NO.66的N端或C端的额外氨基酸。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述肽通过选自由以下组成的组的方法施用：口服、皮下、皮内、鼻内、静脉内、前列腺内、肌内、鞘内、鼻内、瘤内、局部和透皮。

6.根据权利要求1所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低约20％到约65％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

7.根据权利要求6所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低约30％到约60％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

8.根据权利要求6所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低约35％到约60％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

9.根据权利要求1所述的方法，其进一步包含向所述哺乳动物施用选自由以下组成的组的另外的治疗剂：阿呋唑嗪(alfuzosin)、坦索罗辛(tamsulosin)、度他雄胺(dutasteride、、他达拉非(tadalafil)、特拉唑嗪(terazosin)、非那雄胺(finasteride)、多沙唑嗪(doxazosin)、非那雄胺与多沙唑嗪的组合，以及其混合物。

10.一种改善哺乳动物良性前列腺增生的症状或防止所述症状恶化或缺乏改善的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用治疗有效量的肽，所述肽包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu，其中与施用对照物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或缺乏改善的哺乳动物的百分比降低超过10％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述方法包含施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽和载剂。

12.根据权利要求10所述的方法，其中所述肽施用多于一次。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述方法包含施用治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽，所述肽具有至少一个并且至多25个侧接SEQ ID NO.66的N端或C端的额外氨基酸。

14.根据权利要求10所述的方法，其中所述肽通过选自由以下组成的组的方法施用：口服、皮下、皮内、鼻内、静脉内、前列腺内、肌内、鞘内、鼻内、瘤内、局部和透皮。

15.根据权利要求10所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或缺乏改善的哺乳动物的百分比降低约10％到约80％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

16.根据权利要求15所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低约20％到约75％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

17.根据权利要求15所述的方法，其中与接受对照物的哺乳动物相比，所述方法使展现BPH症状恶化或进展的哺乳动物的百分比降低约25％到约70％，如根据国际前列腺症状评分(IPSS)所度量。

18.根据权利要求10所述的方法，其进一步包含向所述哺乳动物施用选自由以下组成的组的另外的治疗剂：阿呋唑嗪、坦索罗辛、度他雄胺、他达拉非、特拉唑嗪、非那雄胺、多沙唑嗪、非那雄胺与多沙唑嗪的组合，以及其混合物。