KR20190050813A - Bph 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법 - Google Patents

Bph 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법 Download PDF

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Abstract

구현예는, 작은 펩티드 및 약제학적으로 허용 가능한 담체에 기반하는 화합물을 함유하는 조성물을 사용해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하고/하거나, 상기 증상의 악화 또는 호전 부족을 개선하거나 예방하는 방법을 포함한다. 상기 방법은, 화합물을 단독으로 또는 담체와 결합된 상태로 이를 필요로 하는 포유류에게 근육내, 경구, 정맥내, 전립선내, 경막내, 종양내, 비강내, 국소, 경피적 등으로 투여하는 단계를 포함하되 이에 한정되지 않는다.

Description

BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법
서열 목록
[0001]본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전체가 참조로써 통합된다. 2016년 10월 25일에 생성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 063307-0447520_SL.txt이며, 33,240바이트 크기를 갖는다.
교차 참조
[0002] 본 출원은, "BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법(Method of Ameliorating or Preventing the Worsening or the Progression of Symptoms of BPH)"이라는 제목으로 2016년 9월 7일자로 출원된 미국 정규 출원 제15/258,786호의 우선권을 주장하며, 그 전체 내용은 참조로서 본원에 통합된다.
1. 기술분야
[0003]구현예는, 작은 펩티드 및 약제학적으로 허용 가능한 담체에 기반하는 화합물을 함유하는 조성물을 사용해, 양성 전립선 비대증(BPH) 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법, 및 BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법을 포함한다. 상기 방법은, 조성물을 필요로 하는 환자에게 상기 조성물을 근육내 투여, 경구 투여, 정맥내 투여, 전립선내 투여, 뇌내 (유조직내) 투여, 뇌실내 투여, 병변내 투여, 안구내 투여, 동맥내 투여, 경막내 투여, 종양내 투여, 국소 투여, 경피 투여, 피하 투여, 또는 피내 투여하는 단계를 포함하되 이에 한정되지 않으며, 이들 환자에 대한 투여는 BPH의 증상의 악화 또는 진행을 개선 또는 예방하거나, BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방한다.
2. 관련 기술의 설명
[0004]많은 의학적 치료 및 방법의 본질은 유해하거나 원하지 않는 조직의 제거 또는 파괴를 수반한다. 이러한 치료의 예에는 암 또는 전암종(pre-cancerous growths)의 외과적 제거, 화학 요법을 통한 전이성 종양의 파괴, 및 선상(예: 전립선) 과 형성(glandular hyperplasia)의 감소가 포함된다. 다른 예에는 원하지 않는 안면모(facial hair)의 제거, 사마귀(warts)의 제거, 및 원하지 않는 지방 조직의 제거가 포함된다.
[0005]전립선 비대증(benign prostatic hyperplasia; BPH)은 나이든 남성에게 흔하며, 웰빙 활동과 인식에 대한 방해를 포함하여 삶의 질에 영향을 미치는 증상을 갖는다. BPH는 진행성일 수 있으며, 요정체, 감염, 방광 결석(bladder calculi) 및 신부전증의 위험을 동반한다. 경미한 증상 내지 중간 정도의 증상을 갖는 많은 남성은 개입 없이도 잘 생활하지만, 다른 남성에서는 괴로운 증상과 합병증이 진행될 수 있고, 이는 의료적 치료 또는 수술로 이어질 수 있다.
[0006]유효 조성물로서, 유해하거나 원하지 않는 세포 및 조직을 파괴함으로써 이들의 제거를 용이하게 하거나 추가 성장을 억제하지만, 주로 국부적인 효과가 있고 전신 독성이 최소화되거나 없으며, BPH 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 데 유용한 유효 조성물이 필요하다. 또한, 유효 조성물로 치료한 후에도 침습적 외과적 개입에 대한 필요성을 감소시킬 필요가 있다.
[0007]유해하거나 원하지 않는 세포 및 조직을 파괴함으로써 이들의 제거를 용이하게 하거나 추가 성장을 억제하는 능력을 갖는 것으로 알려진 일부 제제는: 2015년 7월 24일에 출원된 미국 특허 출원 제14/808,713호 - 제목 "METHODS OF REDUCING THE NEED FOR SURGERY IN PATIENTS SUFFERING FROM BENIGN PROSTATIC HYPERPLASIA"; 2015년 1월 27일에 출원된 미국 특허 출원 제14/606,683호 - 제목 "METHOD OF TREATING DISORDERS REQUIRING DESTRUCTION OR REMOVAL OF CELLS"; 2015년 6월 12일에 출원된 미국 특허 출원 제14/738,551호 - 제목 "COMBINATION COMPOSITIONS FOR TREATING DISORDERS REQUIRING REMOVAL OR DESTRUCTION OF UNWANTED CELLULAR PROLIFERATIONS"; 미국 특허 출원 공개번호 제2007/0237780호 (현재 포기됨); 제2003/0054990호 (현 미국 특허 제7,172,893호); 제2003/0096350호 (현 미국 특허 제6,924,266호); 제2003/0096756호 (현 미국 특허 제7,192,929호); 제2003/0109437호 (현 미국 특허 제7,241,738호); 제2003/0166569호 (현 미국 특허 제7,317,077호); 제2005/0032704호 (현 미국 특허7,408,021호); 및 제2015/0148303호 (현 미국 특허 제9,243,035호)에 개시되어 있으며, 이들 각각의 개시는 그 전체가 본원에 참조로서 통합된다.
[0008]조직의 양성 과성장은 유기체로부터 세포를 제거하는 것이 바람직한 이상(abnormalities)이다. 양성 종양은 전신으로 전이하지는 않지만 질환 증상을 유발하는 세포 증식이다. 이러한 종양이 뇌와 같이 장기 내 접근할 수 없는 영역에 위치하는 경우 치명적일 수 있다. 폐, 뇌, 피부, 뇌하수체, 갑상선, 부신 피질 및 수질, 난소, 자궁, 고환, 연결 조직, 근육, 창자, 귀, 코, 인후, 편도선, 입, 간, 쓸개, 췌장, 전립선, 심장, 및 다른 장기를 포함하는 장기의 양성 종양이 있다.
[0009]암 치료에서의 첫 단계는 종종 외과적 수술이다. 수술의 목적은 여러 가지이다. 수술은 가끔, 눈에 띄는 종양을 가능한 한 많이 제거하기 위해 사용되거나, 적어도 이를 감량(debulk)하기 위해 (다른 수단으로 치료해야 할 것이 적어지도록 종양의 주된 벌크(들)를 제거하기 위해) 사용된다. 암의 종류와 부위에 따라, 수술은 약간의 증상 완화를 환자에게 제공할 수 있다. 예를 들어, 외과의가 팽창하는 뇌종양의 대부분을 제거할 수 있다면, 두개골 내부의 압력이 감소할 것이고, 이는 환자의 증상 개선으로 이어질 것이다.
[0010]양성 종양 및 기형은 수술, 방사선 요법, 약물 요법, 열적 또는 전기적 절제, 한랭 요법, 및 기타 다른 요법을 포함하는 다양한 방법에 의해 치료될 수 있다. 양성 종양은 전이하지 않더라도 크게 자랄 수 있고 재발할 수 있다. 양성 종양의 수술적 적출은 일반적으로 수술의 모든 어려움과 부작용을 가지며, 뇌하수체 샘종, 뇌 수막종, 전립선 비대증 등과 같은 일부 양성 종양에 대해서는 종종 반복해서 수행되어야 한다. 또한, 양성 종양에 의해 야기된 증상을 완화시키기 위해 비-수술적 치료를 받는 일부 환자는 후속적인 침습적인 수술 개입을 여전히 필요로 한다. Lepor의 "Medical Treatment of Benign Prostatic Hyperplasia," Reviews in Urology, Vol. 13, No. 1, pp. 20-33 (2011)에는 BPH를 치료함에 있어서 약물의 효능에 대한 다양한 연구가 개시되어 있고, BPH의 증상의 악화 또는 진행으로 인한 후속적인 침습적인 수술 개입에 대한 필요성이 개시되어 있다.
[0011]남성의 양성 전립선 비대증의 진행에 있어서 안드로겐(androgens)의 역할은 잘 문서화되어 있다(Wilson, N. Engl. J. Med. 317: 628-629, 1987). 사실, 양성 전립선 비대증은 고환이 없는 경우 진행되지 않는다(Wendel 등의 J. Urol. 108: 116-119, 1972를 참조함).
[0012] 수술적 또는 내과적(LHRH 작용제) 거세에 의한 고환의 안드로겐 분비를 차단하는 것은 전립선의 크기를 감소시키는 것으로 알려져 있다(Auclair 등의 Biochem. Biophys. Res. Commun. 76: 855-862, 1977; Auclair 등의 Endocrinology 101: 1890-1893, 1977; Labrie 등의 Int. J. Andrology, suppl. 2 (V. Hansson, ed.), Scriptor Publisher APR, pp. 303-318, 1978; Labrie 등의 J. Andrology 1: 209-228, 1980; Tremblay 및 Belanger, Contraception 30: 483-497, 1984; Tremblay 등의 Contraception 30: 585-598, 1984; Dube 등의 Acta Endocrinol. (Copenh) 116: 413-417, 1987; Lacoste 등의 Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141-147, 1988; White, Ann. Surg. 22: 1-80, 1895; Faure 등의 Fertil. Steril. 37: 416-424, 1982; Labrie 등의 Endocrine Reviews 7: 67-74, 1986; Huggins 및 Stevens, J. Urol. 43: 705-714, 1940; Wendel 등의 J. Urol. 108: 116-119, 1972; Peters 및 Walsh, N. Engl. J. Med. 317: 599-604, 1987; Gabrilove 등의 J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331-1333, 1987).
[0013] 여러 연구에 따르면 항안드로겐을 사용하는 치료도 전립선의 크기를 감소시키는 것으로 나타났다(Neri 등의 Endocrinology, 82: 311-317, 1968; Neri 등의 Investigative Urology, 10: 123-130, 1972; Tunn 등의 Acta Endocrinol. (Copenh.) 91: 373-384, 1979; Seguin 등의 Mol. Cell. Endocrinol., 21: 37-41, 1981; Lefebvre 등의 The Prostate 3: 569-578, 1982; Marchetti 및 Labrie, J. Steroid Biochem, 29: 691-698, 1988; Lacoste 등의 Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141-147, 1988; Tunn 등의 Invest. Urol. 18: 289-292, 1980; Scott 및 Wade, J. Urol. 101: 81-85, 1969; Caine 등의 J. Urol. 114: 564-568, 1975; Stone 등의 J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan 등의 J. Urol. 141: 534A, 1989).
[0014]미국 특허 제3,423,507호는 양성 전립선 비대증의 치료를 위한 항안드로겐 시프로테온 아세트산(1α,2β-메틸렌-6-클로로-17α-아세톡시-6-디하이드로프로게스테론; 1α,2β-methylene-6-chloro-17α-acetoxy-6-dehydroprogesterone)의 용도를 개시한다. 순수 항안드로겐(미국 특허 제4,329,364호)은 테스토스테론의 분비를 증가시켜 고도의 방향족화를 통해 에스트로겐을 생성할 수 있는데, 이는 현재 알려진 바로는, 전립선 비대증에 부정적인 영향을 미칠 것이 예상되는 상황이다(Jacobi 등의 Endocrinology 102: 1748-1755, 1978). 몇몇 연구는, 화학적 거세(LHRD 작용제)와 항안드로겐의 조합을 사용하는 치료가 이들 각각을 단독으로 사용하는 치료보다 전립선 크기를 더 많이 억제한다는 것을 보여주었다(Seguin 등의 Mol. Cell. Endocrinol. 21: 37-41, 1981; Lefebvre 등의 The Prostate 3: 569-578, 1982; Marchetti 및 Labrie, J. Steroid Biochem. 29: 691-698, 1988).
[0015]전립선에서 뿐만 아니라 많은 다른 조직에서, 테스토스테론은 5α-환원 효소에 의해 더 강력한 안드로겐 디하이드로테스토스테론으로 비가역적으로 전환된다(Bruchovsky 및 Wilson, J. Biol. Chem. 243: 2012-2021, 1968; Wilson, Handbook of Physiology 5 (section 7), pp. 491-508, 1975). 5α-환원 효소의 억제제는 전립선의 성장을 억제하는 것으로 밝혀졌다(Brooks 등의 Endocrinology 109: 830, 1981; Brooks 등의 Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 169: 67, 1982; Brooks 등의 Prostate 3: 35, 1982; Wenderoth 등의 Endocrinology 113,569-573, 1983; McConnell 등의 J. Urol. 141: 239A, 1989); the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatic hypertropy에 대한 Stoner, E.의 논문, 84th AUA Annual Meeting, Dallas, May 8, 1989).
[0016]미성숙 랫트에서의 전립선 및 정낭 발달에 5α-환원 효소 억제제 Merck L 652,931이 미치는 억제 효과는 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc. abst. #1165, p. 314, 1989에 기술되었다. 남성에서의 디하이드로테스토스테론 형성에 MK-906이 미치는 억제 효과는 Gormley 등의 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1225, p. 329, 1989; Imperato-McGinley 등의 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1639, p. 432, 1989; Geller 및 Franson의 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1640, p. 432, 1989 및 Tenover 등의 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #583, p. 169, 1989에 의해 남성 내에서 기술되었다. 5α-환원 효소 억제제 N,N-디에틸-4-메틸-3-옥소-4-아자-5.알파.-안드로스탄-17.베타.-카르복사미드 (4-MA) 및 6-메틸렌-4-프레그넨-3,20-디온 (LY 207320)의 활성은 Toomey 등의 Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. #1226, p. 329, 1989에 의해 기술되었다.
[0017]전립선 성장에 안드로겐이 미치는 잘 알려진 효과에 추가하여, 에스트로겐도 전립선의 증식에 역할을 한다는 것을 보여주는 많은 연구가 있다(Walsh 및 Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093-1097, 1976; Robinette 등의 Invest. Urol. 15: 425-432, 1978; Moore 등의 J. Clin. Invest. 63: 351-257, 1979). 또한, 에스트로겐은 개에서 안드로겐-유도 전립선 성장을 강화하는 것으로 나타났다(Walsh 및 Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093-1097, 1976; Jacobi 등의 Endocrinology 102: 1748-1755, 1978; Tunn 등의 Urol. Int. 35: 125-140, 1980). 17β-에스트라디올(estradiol)이 개의 전립선에서 안드로겐 결합을 증가시키는 것으로 나타났다는 관찰을 통해, 안드로겐-유도 전립선 성장에 에스트로겐이 미치는 강화 효과에 대한 설명이 가능하다(Moore 등의 J. Clin. Invest. 63: 351-357, 1979).
[0018]항에스트로겐인 타마톡시펜(Tamoxifen)은 개에서 스테로이드-유도 양성 전립선 비대증을 개선하는 것으로 나타났다(Funke 등의 Acta Endocrinol. 100: 462-472, 1982). 양성 전립선 비대증을 앓고 있는 환자에게 항에스트로겐 타마톡시펜을 스테로이드성 항안드로겐 시프로테온 아세트산과 함께 투여함으로써 질환의 증상에 대한 유익한 효과가 나타났다(Ipertrofia Prostatica Benigna (F. Di Silverio, F. Neumann 및 M. Tannenbaum, eds)에서 Di Silverio 등의 Excerpta Medica, pp. 117-125, 1986). 미국 특허 제4,310,523호에서는, 항안드로겐과 항에스트로겐의 조합이 양성 전립선 비대증의 예방 및/또는 치료에 효과적인 것으로 제안된다. 그러나, 타목시펜은 그의 유효성을 제한하는 고유한 에스트로겐 활성을 가지고 있다.
[0019]안드로겐의 방향족화로 인한 에스트로겐 형성은 여러 부위에서 발생한다. 수컷에서는, 고환, 지방 및 근육 조직, 피부, 간, 뇌 및 전립선에서 안드로겐의 방향족화가 입증되었다(Schweikert 등의 J. Clin. Endocrinol. Metab. 40: 413-417, 1975; Folker 및 James, J. Steroid Biochem. 49: 687-690, 1983; Longcope 등의 J. Clin. Endocrinol. Metab. 46: 146-152, 1978; Lacoste 및 Labrie의 미공개 데이터; Stone 등의 The Prostate 9: 311-318, 1986; Stone 등의 Urol. Res. 15: 165-167, 1987). 양성 전립선 비대증 환자의 전립선 조직에 에스트로겐의 생성 증가에 대한 증거가 있다(Stone 등의 The Prostate 9: 311-318, 1986). 이러한 데이터는 에스트로겐의 국지적 형성이 순환하는 에스트로겐에 의해 예측된 작용을 초과하여 전립선 성장을 자극하는 결정적인 역할을 할 수 있다는 것을 나타낸다.
[0020]미국 특허 제4,472,382호는 항안드로겐 및 LH-RH 작용제로서 작용하는 특정 펩티드를 사용한 BPH의 치료를 개시한다. 미국 특허 제4,596,797호는 전립선 비대증의 예방 및/또는 치료법으로서의 방향화 효소 억제제를 개시한다. 미국 특허 제4,760,053호는 LHRH 작용제를 항안드로겐 및/또는 항에스트로겐 및/또는 적어도 하나의 성 스테로이드 생합성 억제제와 병용하는, 특정 암의 치료를 기술한다. 미국 특허 제4,775,660호는 난소 분비의 외과적 및 화학적 예방 및 항안드로겐과 항에스트로겐의 투여를 포함할 수 있는 병용 요법으로 유방암을 치료하는 방법을 기술한다.
[0021]미국 특허 제4,659,695호는 고환에서의 호르몬 분비가 외과적 또는 화학적 수단에 의해 (예: LHRH 작용제의 사용에 의해) 차단된, 인간을 비롯하여 암에 걸리기 쉬운 수컷 동물에서 전립선암을 치료하는 방법으로서, 항안드로겐(예: 플루타미드)을 적어도 하나의 성 스테로이드 생합성 억제제(예: 아미노글루테티미드(aminoglutethimide) 및/또는 케토코나졸(ketoconazole))와 함께 투여하는 단계를 포함하는 방법을 개시한다. 전술한 미국 특허(제4,472,382호, 제4,596,797호, 제4,760,053호, 제4,775,660호, 및 제4,659,695호) 각각의 개시 내용은 그 전체가 본원에 참조로서 통합된다.
[0022]BPH는 안드로겐과 에스트로겐 둘 모두의 활성 증가에 의해 발생한다. BPH의 이러한 두 가지 병인 때문에, 제안된 호르몬 요법들은 만족스럽지 못했고, 참을 수 없는 부작용을 빈번하게 야기하면서도 모두가 하나같이 예측할 수 없는 것들이었다. 또한, 선행 기술의 치료는 전립선 체적을 약 20 내지 30%보다 더 많이 감소시킨 경우는 거의 없었으며, 종합적 증상에 대한 효과도 일관되지 않았다(Scott 및 Wade, J. Urol. 101: 81-85, 1969; Caine 등의 J. Urol. 114: 564-568, 1975; Peters 및 Walsh, New Engl. J. Med. 317: 599-604, 1987; Gabrilove 등의 J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331-1333, 1987; Stone 등의 J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan 등의 J. Urol. 141: 534A, 1989; Stoner, E.의 the role of 5α-reductase inhibitor in benign prostatic hypertrophy에 대한 논문, 84th AUA Annual Meeting, Dallas, May 8, 1989).
[0023]위에 요약된 메커니즘 설명을 통해, BPH의 진행을 조절하고, 많은 경우에 이를 역전시키는 효과적인 제제가 최근에 개발되었다. 이들 제제 중 가장 먼저 나온 것은 Merck & Co., Inc의 제품 PROSCAR®(피나스테라이드(finasteride))이다. 본 화합물의 효과는 테스토스테론을 5α-디하이드로테스테론으로 전환시키는 효소 테스토스테론인 5α환원 효소를 억제하여, 전립선 확장률을 감소시키고, 종종 전립선 덩어리를 감소시키는 것이다.
[0024]이들 사례의 전부 또는 대부분에서, BPH 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 야기할 수 있는 원하지 않는 조건을, 종래 요법의 위험 및 부작용 없이 제거, 파괴 또는 개선시킬 수 있는 치료가 필요하다. 또한, BPH와 일반적으로 연관된 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방할 수 있는 요법을 개발할 필요가 있다.
[0025]본 명세서 전체에 걸쳐, 관련 기술에 대한 앞에서의 설명을 비롯하여 임의의 및 모든 미국 특허의 공개 특허 출원을 포함하는, 본원에 기술된 임의의 및 모든 공개적으로 이용할 수 있는 문서는 그 전체가 참조로서 본원에 구체적으로 통합된다. 관련 기술에 대한 앞에서의 설명은, 계류 중인 미국 특허 출원을 포함하여 본원에 기술된 문서 중 임의의 것들이 본 개시에 대한 선행 기술임을 인정하는 것으로서 어떤 방식으로도 의도되지 않는다. 또한, 기술된 제품, 방법, 및/또는 장치와 관련된 임의의 단점에 대한 본원에서의 기술은 구현예를 제한하도록 의도되지 않는다. 실제로, 구현예의 양태는 기술된 제품, 방법, 및/또는 장치의 특정 특징을, 기술된 단점을 겪는 것 없이 포함할 수 있다.
[0026]BPH와 일반적으로 연관된 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하기 위한 새롭고, 독성이 덜하며, 덜 빈번한 (예를 들어, 매일 또는 매주 투약할 필요가 없는) 치료에 대한 요구가 당업계에 남아있다. 본원에 기술된 구현예는 이러한 요구를 충족시킨다.
[0027] 본 개시는, 아미노산 서열 Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Ile-Lys-Glu-Ile-Lys-Glu-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Leu-Cys-Leu (서열번호 66)로 기술된 특정 펩티드를 포함하는 특정 NTP 펩티드가, 일반적으로 BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방할 수 있다는 발견을 부분적으로 전제로 한다.
[0028] 본 개시는 또한, 아미노산 서열 Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu (서열번호 66)로 기술된 특정 펩티드를 포함하는 특정 NTP 펩티드가, 이러한 BPH 증상의 악화 또는 진행에 취약한 환자에게서 일반적으로 BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 개선의 악화 또는 부족을 개선하거나 예방하는 데 있어서, 단독으로 또는 포유류에서 원치 않는 세포 증식을 치료하고/하거나 이를 사멸시킬 수 있는 추가 활성제와 조합으로 사용될 때, 예상 밖의 개선을 제공한다는 발견을 부분적으로 전제로 한다.
[0029]일부 구현예는, 포유류에서 BPH와 일반적으로 연관된 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 NTP 펩티드를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에게 단독으로 투여하거나, 포유류에서 원치 않는 세포 증식을 치료하고/하거나 사멸시킬 수 있는 적어도 하나의 추가 활성제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다. 조성물은 근육내, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(뇌 유조직내), 뇌실내, 종양내, 병변내, 피내, 경막내, 비강내, 안구내, 동맥내, 국소, 경피 투여될 수 있고, 에어로졸, 수액, 볼루스 주사, 이식 장치, 서방성 시스템을 통해 투여될 수 있다. 대안적으로, NTP 펩티드는 NTP 펩티드를 발현하는 유전자를 투여하거나, 이러한 생성을 유도하는 백신을 투여하거나, 유전자 변형 등의 이유로 체내에서 펩티드를 발현하는 세포, 박테리아 또는 바이러스를 도입함으로써 체내에서 발현될 수 있다.
[0030] 또 다른 구현예에서, NTP 펩티드를 포함하는 조성물을 단독으로 투여하거나, 포유류 내에서 원치 않는 세포 증식을 치료하고/하거나 사멸시킬 수 있는 적어도 하나의 추가 활성제와 조합하여 투여하는 것은, 국제 전립선 증상 점수(International Prostate Symptom Score; IPSS)에 의해 측정했을 때, NTP 펩티드를 함유하지 않는 대조 조성물을 투여하는 것과 비교해 BPH 증상의 악화 또는 진행 및/또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 나타내는 포유류의 백분율을 10%보다 더 많이 감소시킨다.
[0031]앞에서의 일반적인 설명과 다음의 구체적인 내용 모두는 예시적이고 설명을 위한 것이며, 청구된 구현예에 대한 추가적인 설명을 제공하도록 의도된다. 다른 목적, 장점, 및 특징들은 다음의 발명을 실시하기 위한 구체적인 내용으로부터 당업자에게 쉽게 자명해질 것이다.
[0032]본 단백질, 뉴클레오티드 서열, 펩티드, 조성물, 활성제 등과 방법을 기술하기에 앞서, 본 발명은 기술된 특정 방법론, 프로토콜, 세포주, 벡터, 및 시약이 달라질 수 있으므로 이에 한정되지 않음을 이해해야 한다. 또한, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 구현예를 기술하기 위한 것이며, 첨부된 청구범위에 의해서만 한정될 본 구현예의 범주를 한정하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다.
[0033]본원에 사용된 용어 및 문구는 달리 명시되지 않는 한 아래에 제시된 바와 같이 정의된다. 본 명세서 전체에 걸쳐, 단수 형태("a," "an," 및 "the")는 문맥상 명백히 달리 지시되지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "숙주 세포(a host cell)"를 지칭하는 것은 복수의 이러한 숙주 세포들을 포함하는 것이고, "항체(an antibody)"를 지칭하는 것은 하나 이상의 항체 및 당업자에게 알려진 등가물들 등을 지칭하는 것이다.
[0034] 본원에 기술된 아미노산 및 아미노산 잔기는 아래 표에 제공된 널리 인정된 1 글자 또는 3 글자 코드에 따라 지칭될 수 있다.
<표 1>
Figure pct00001
[0035]"NTP 펩티드"라는 표현은 신경 사상 단백질(Neural Thread Proteins)의 아미노산의 적어도 일부 또는 신경 사상 단백질의 단편에 상응하는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 지칭하며, 문맥상 명백하게 달리 표시되지 않는 한 이러한 펩티드의 동족체, 유도체, 융합 단백질, 및 펩티드 모방체를 포함한다. "NTP 펩티드"라는 표현은 이하 2015년 7월 24일에 출원된 미국 특허 출원 제14/808,713호 - 제목 "METHODS OF REDUCING THE NEED FOR SURGERY IN PATIENTS SUFFERING FROM BENIGN PROSTATIC HYPERPLASIA"; 2015년 1월 27일에 출원된 미국 특허 출원 제14/606,683호 - 제목 "METHOD OF TREATING DISORDERS REQUIRING DESTRUCTION OR REMOVAL OF CELLS"; 2015년 6월 12일에 출원된 미국 특허 출원 제14/738,551호 - 제목 "COMBINATION COMPOSITIONS FOR TREATING DISORDERS REQUIRING REMOVAL OR DESTRUCTION OF UNWANTED CELLULAR PROLIFERATIONS"; 미국 특허 출원 공개번호 제2007/0237780호 (현재 포기됨); 제2003/0054990호 (현 미국 특허 제7,172,893호); 제2003/0096350호 (현 미국 특허 제6,924,266호); 제2003/0096756호 (현 미국 특허 제7,192,929호); 제2003/0109437호 (현 미국 특허 제7,241,738호); 제2003/0166569호 (현 미국 특허 제7,317,077호); 제2005/0032704호 (현 미국 특허7,408,021호); 및 제2015/0148303호 (현 미국 특허 제9,243,035호) 중 하나 이상에서 청구된 것의 펩티드 또는 다른 조성물을 지칭한다. 이들 출원 각각의 개시는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 특이적 펩티드는 아래에 나열된다.
1) 서열 번호 1: MEFSLLLPRLECNGA 또는 Met-Glu-Phe-Ser-Leu-Leu-Leu-Pro-Arg-Leu-Glu-Cys-Asn-Gly-Ala
2) 서열 번호 2: GAISAHRNLRLPGSS 또는 Gly-Ala-Ile-Ser-Ala-His-Arg-Asn-Leu-Arg-Leu-Pro- Gly-Ser-Ser
3) 서열 번호 3: DSPASASPVAGITGMCT 또는 Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met-Cys-Thr
4) 서열 번호 4: MCTHARLILYFFLVEM 또는 Met-Cys-Thr-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
5) 서열 번호 5: YFFLVEMEFLH 또는 Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Glu-Phe-Leu-His
6) 서열 번호 6: VGQAGLELPTS 또는 Val-Gly-Gln-Ala-Gly-Leu-Glu-Leu-Pro-Thr-Ser
7) 서열 번호 7: DDPSVSASQSARYRTGH 또는 Asp-Asp-Pro-Ser-Val-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Arg-Tyr-Arg-Thr-Gly-His
8) 서열 번호 8: TGHHARLCLANFCG 또는 Thr-Gly-His-His-Ala-Arg-Leu-Cys-Leu-Ala-Asn-Phe-Cys-Gly
9) 서열 번호 9: ANFCGRNRVSLMCPSWS 또는 Ala-Asn-Phe-Cys-Gly-Arg-Asn-Arg-Val-Ser-Leu-Met-Cys-Pro-Ser-Trp-Ser
10) 서열 번호 10: PELKQSTCLSLPKCWDYRR 또는 Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
11) 서열 번호 11: LKQSTCLSLPKCWDYRR 또는 Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
12) 서열 번호 12: STCLSLPKCWDYRR 또는 Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
13) 서열 번호 13: LSLPKCWDYRR 또는 Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
14) 서열 번호 14: KCWDYRRAAVPGL 또는 Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu
15) 서열 번호 15: KCWDYRRAAVPGLFILFFL 또는 Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
16) 서열 번호 16: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP 또는 Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro
17) 서열 번호 17: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS 또는 Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
18) 서열 번호 18: WDYRR 또는 Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
19) 서열 번호 19: FILFFLRHRCPTL 또는 Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu
20) 서열 번호 20: FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS 또는 Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
21) 서열 번호 21: HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP 또는 His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Ser-Thr-Pro-Glu-Ile-Lys-His-Pro
22) 서열 번호 22: PASASQVAGTKDMH 또는 Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met-His
23) 서열 번호 23: DMHHYTWLIFIFIFNFLR 또는 Asp-Met-His-His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg
24) 서열 번호 24: HYTWLIFIFIFNFLRQSLN 또는 His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg-Gln-Ser-Leu-Asn
25) 서열 번호 25: SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF 또는 Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Arg-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
26) 서열 번호 26: PGFKLFSCPSLLSSWDYRR 또는 Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
27) 서열 번호 27: FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF 또는 Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
28) 서열 번호 28: FSCPSLLSSWDYRR 또는 Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
29) 서열 번호 29: SLLSSWDYRR 또는 Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
30) 서열 번호 30: SSWDY 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
31) 서열 번호 31: SSWDYRR 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
32) 서열 번호 32: SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
33) 서열 번호 33: FVFLVEMGFTM 또는 Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
34) 서열 번호 34: MGFTMFARLILISGPCDLPASAS 또는 Met-Gly-Phe-Thr-Met-Phe-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Ile-Ser-Gly-Pro-Cys-Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser
35) 서열 번호 35: ISGPC 또는 Ile-Ser-Gly-Pro-Cys
36) 서열 번호 36: DLPASASQSAGITGVSH 또는 Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val-Ser-His
37) 서열 번호 37: GVSHHARLIFNFCLFEM 또는 Gly-Val-Ser-His-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met
38) 서열 번호 38: NFCLFEMESH 또는 Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met-Glu-Ser-His
39) 서열 번호 39: SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLPPHPANF 또는 Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Pro-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe
40) 서열 번호 40: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG 또는 Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly
41) 서열 번호 41: FSCLSLPSSWDYGH 또는 Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
42) 서열 번호 42: LSLPSSWDY 또는 Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
43) 서열 번호 43: SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe-Cys-Ile-Phe-Ile-Arg-Gly-Gly-Val-Ser-Pro-Tyr-Leu-Ser-Gly-Trp-Ser-Gln-Thr-Pro-Asp-Leu-Arg
44) 서열 번호 44: PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR 또는 Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
45) 서열 번호 45: PELKQSTCLSLPKCWDYRR 또는 Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
46) 서열 번호 46: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG 또는 Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly
47) 서열 번호 47: FSCLSLPSSWDYGH 또는 Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
48) 서열 번호 48: STCLSLPKCWDYRR 또는 Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
49) 서열 번호 49: FSCPSLLSSWDYRR 또는 Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
50) 서열 번호 50: LSLPSSWDY 또는 Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
51) 서열 번호 51: LSLPKCWDYRR 또는 Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
52) 서열 번호 52: SLLSSWDYRR 또는 Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
53) 서열 번호 53: LPSSWDYRR 또는 Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
54) 서열 번호 54: SSWDYRR 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
55) 서열 번호 55: SSWDY 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
56) 서열 번호 56: SSWDYRRFILFFL 또는 Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
57) 서열 번호 57: WDYRRFIFNFL 또는 Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
58) 서열 번호 58: FNFCLF 또는 Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe
59) 서열 번호 59: FIFNFL 또는 Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
60) 서열 번호 60: PASASPVAGITGM 또는 Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met
61) 서열 번호 61: PASASQVAGTKDM 또는 Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met
62) 서열 번호 62: PASASQSAGITGV 또는 Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val
63) 서열 번호 63: PASASPVAG 또는 Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly
64) 서열 번호 64: FFLVEM 또는 Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
65) 서열 번호 65: SVTQAGVQW 또는 Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp
66) 서열 번호 66: IDQQVLSRIKLEIKRCL 또는 Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu- Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
67) 서열 번호 67: LSRIKLEIK 또는 Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
68) 서열 번호 68: GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM 또는 Gly-Asp-His-Gly-Arg-Pro-Asn-Leu-Ser-Arg-Leu-Lys-Leu-Ala-Ile-Lys-Tyr-Glu-Val-Lys-Lys-Met
69) 서열 번호 69: QQSIAVKFLAVFGVSI 또는 Gln-Gln-Ser-Ile-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Ala-Val- Phe-Gly-Val-Ser-Ile
70) 서열 번호 70: GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL 또는 Gly-Leu-Leu-Phe-Pro-Val-Phe-Ser-Val-Cys-Tyr-Leu-Ile-Ala-Pro-Lys-Ser-Pro-Leu-Gly-Leu
71) 서열 번호 71: MMVCWNRFGKWVYFI 또는 Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile
72) 서열 번호 72: SAIFNFGPRYLYHGV 또는 Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu- Tyr-His-Gly-Val
73) 서열 번호 73: PFYFLILVRIISFLI 또는 Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-Ile-Ser-Phe-Leu-Ile
74) 서열 번호 74: GDMEDVLLNCTLLKR 또는 Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg
75) 서열 번호 75: SSRFRFWGALVCSMD 또는 Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp
76) 서열 번호 76: SCRFSRVAVTYRFIT 또는 Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr- Arg-Phe-Ile-Thr
77) 서열 번호 77: LLNIPSPAVWMARNT 또는 Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr
78) 서열 번호 78: MAQSRLTATSASRVQ 또는 Met-Ala-Gln-Ser-Arg-Leu-Thr-Ala-Thr-Ser-Ala-Ser-Arg-Val-Gln
79) 서열 번호 79: AILLSQPPKQLGLRA 또는 Ala-Ile-Leu-Leu-Ser-Gln-Pro-Pro-Lys-Gln-Leu-Gly-Leu-Arg-Ala
80) 서열 번호 80: PANTPLIFVFSLEAG 또는 Pro-Ala-Asn-Thr-Pro-Leu-Ile-Phe-Val-Phe-Ser-Leu- Glu-Ala-Gly
81) 서열 번호 81: FHHICQAGLKLLTSG 또는 Phe-His-His-Ile-Cys-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Thr-Ser-Gly
82) 서열 번호 82: DPPASAFQSAGITGV 또는 Asp-Pro-Pro-Ala-Ser-Ala-Phe-Gln-Ser-Ala-Gly- Ile-Thr-Gly-Val
83) 서열 번호 83: SHLTQPANLDKKICS 또는 Ser-His-Leu-Thr-Gln-Pro-Ala-Asn-Leu-Asp-Lys-Lys-Ile-Cys-Ser
84) 서열 번호 84: NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK 또는 Asn-Gly-Gly-Ser-Cys-Tyr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Ala-Ser-Cys-Asn-Pro-Ser-Lys
85) 서열 번호 85: MWTLKSSLVLLLCLT 또는 Met-Trp-Thr-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Leu-Cys-Leu-Thr
86) 서열 번호 86: CSYAFMFSSLRQKTS 또는 Cys-Ser-Tyr-Ala-Phe-Met-Phe-Ser-Ser-Leu-Arg-Gln-Lys-Thr-Ser
87) 서열 번호 87: EPQGKVPCGEHFRIR 또는 Glu-Pro-Gln-Gly-Lys-Val-Pro-Cys-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Ile-Arg
88) 서열 번호 88: QNLPEHTQGWLGSKW 또는 Gln-Asn-Leu-Pro-Glu-His-Thr-Gln-Gly-Trp-Leu-Gly-Ser-Lys-Trp
89) 서열 번호 89: LWLLFAVVPFVILKC 또는 Leu-Trp-Leu-Leu-Phe-Ala-Val-Val-Pro-Phe-Val-Ile-Leu-Lys-Cys
90) 서열 번호 90: QRDSEKNKVRMAPFF 또는 Gln-Arg-Asp-Ser-Glu-Lys-Asn-Lys-Val-Arg-Met-Ala-Pro-Phe-Phe
91) 서열 번호 91: LHHIDSISGVSGKRMF 또는 Leu-His-His-Ile-Asp-Ser-Ile-Ser-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Arg-Met-Phe
92) 서열 번호 92: EAYYTMLHLPTTNRP 또는 Glu-Ala-Tyr-Tyr-Thr-Met-Leu-His-Leu-Pro-Thr-Thr-Asn-Arg-Pro
93) 서열 번호 93: KIAHCILFNQPHSPR 또는 Lys-Ile-Ala-His-Cys-Ile-Leu-Phe-Asn-Gln-Pro-His- Ser-Pro-Arg
94) 서열 번호 94: SNSHSHPNPLKLHRR 또는 Ser-Asn-Ser-His-Ser-His-Pro-Asn-Pro-Leu-Lys-Leu-His-Arg-Arg
95) 서열 번호 95: SHSHNRPRAYILITI 또는 Ser-His-Ser-His-Asn-Arg-Pro-Arg-Ala-Tyr-Ile-Leu-Ile-Thr-Ile
96) 서열 번호 96: LPSKLKLRTHSQSHH 또는 Leu-Pro-Ser-Lys-Leu-Lys-Leu-Arg-Thr-His-Ser-Gln-Ser-His-His
97) 서열 번호 97: NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR 또는 Asn-Pro-Leu-Ser-Arg-Thr-Ser-Asn-Ser-Thr-Pro-Thr-Asn-Ser-Phe-Leu-Met-Thr-Ser-Ser-Lys-Pro-Arg
98) 서열 번호 98: SSSLGLPKCWDYRHE 또는 Ser-Ser-Ser-Leu-Gly-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-His-Glu
99) 서열 번호 99: LLSLALMINFRVMAC 또는 Leu-Leu-Ser-Leu-Ala-Leu-Met-Ile-Asn-Phe-Arg-Val-Met-Ala-Cys
100) 서열 번호 100: TFKQHIELRQKISIV 또는 Thr-Phe-Lys-Gln-His-Ile-Glu-Leu-Arg-Gln-Lys-Ile-Ser-Ile-Val
101) 서열 번호 101: PRKLCCMGPVCPVKI 또는 Pro-Arg-Lys-Leu-Cys-Cys-Met-Gly-Pro-Val-Cys-Pro-Val-Lys-Ile
102) 서열 번호 102: ALLTINGHCTWLPAS 또는 Ala-Leu-Leu-Thr-Ile-Asn-Gly-His-Cys-Thr-Trp-Leu-Pro-Ala-Ser
103) 서열 번호 103: MFVFCLILNREKIKG 또는 Met-Phe-Val-Phe-Cys-Leu-Ile-Leu-Asn-Arg-Glu-Lys-Ile-Lys-Gly
104) 서열 번호 104: GNSSFFLLSFFFSFQ 또는 Gly-Asn-Ser-Ser-Phe-Phe-Leu-Leu-Ser-Phe-Phe-Phe-Ser-Phe-Gln
105) 서열 번호 105: NCCQCFQCRTTEGYA 또는 Asn-Cys-Cys-Gln-Cys-Phe-Gln-Cys-Arg-Thr-Thr-Glu-Gly-Tyr-Ala
106) 서열 번호 106: VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT 또는 Val-Glu-Cys-Phe-Tyr-Cys-Leu-Val-Asp-Lys-Ala-Ala-Phe-Glu-Cys-Trp-Trp-Phe-Tyr-Ser-Phe-Asp-Thr
107) 서열 번호 107: MEPHTVAQAGVPQHD 또는 Met-Glu-Pro-His-Thr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Val-Pro-Gln-His-Asp
108) 서열 번호 108: LGSLQSLLPRFKRFS 또는 Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Ser-Leu-Leu-Pro-Arg-Phe-Lys-Arg-Phe-Ser
109) 서열 번호 109: CLILPKIWDYRNMNT 또는 Cys-Leu-Ile-Leu-Pro-Lys-Ile-Trp-Asp-Tyr-Arg-Asn-Met-Asn-Thr
110) 서열 번호 110: ALIKRNRYTPETGRKS 또는 Ala-Leu-Ile-Lys-Arg-Asn-Arg-Tyr-Thr-Pro-Glu-Thr-Gly-Arg-Lys-Ser
111) 서열 번호 111: IDQQVLSRI 또는 Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile
112) 서열 번호 112: KLEIKRCL 또는 Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
113) 서열 번호 113: VLSRIK 또는 Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys
114) 서열 번호 114: RIKLEIK 또는 Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
115) 서열 번호 115: VLSRIKLEIKRCL 또는 Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu; 및
116) 서열 번호 116: IDQQVLSRIKLEI 또는 Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile.
"NTP 펩티드"라는 표현은 바람직하게는 서열 번호 1 내지 116의 아미노산 서열도 포함한다(이에 한정되지는 않음). 　
[0036]용어 "단편(fragment)"은, 단백질이나 펩티드의 아미노산 서열의 연속적인 하위서열로 이루어지고, 자연 발생적인 생체내 프로테아제 활성 유래의 접합 변이체 및 단편과 같은 자연 발생 단편을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 이러한 단편은 아미노 말단, 카르복시 말단, 및/또는 내부에서(예컨대, 자연 접합에 의해) 절단될 수 있다. 이러한 단편은 아미노 말단 메티오닌을 갖거나 갖지 않도록 제조될 수 있다. 용어 "단편(fragment)"은, 동일하거나 상이한 것과 무관하게, 동일한 단백질 또는 펩티드 유래의 단편으로서, 직접 연결되거나 링커를 통해 함께 결합된 공통 또는 비 공통의 인접 아미노산 서열을 갖는 단편을 포함한다. 당업자는 본원에 기재된 지침과 절차를 사용하여, 과도한 실험 없이도 구현예에 사용하기에 적합한 단편을 선택할 수 있을 것이다.
[0037]용어 "변이체(variant)"는 단백질 또는 펩티드의 아미노산 서열에 비해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실, 및/또는 삽입이 존재하는 단백질 또는 폴리펩티드로서, 단백질 또는 펩티드의 자연 발생적 대립 유전자 변이체 또는 대안적인 접합 변이체를 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 용어 "변이체"는 유사하거나 상동성인 아미노산(들) 또는 유사하지 않은 아미노산(들)으로 펩티드 서열에서의 하나 이상의 아미노산을 대체하는 것을 포함한다. 아미노산이 유사하거나 상동성으로 랭크될 수 있는 등급이 있다. (Gunnar von Heijne, Sequence Analysis in Molecular Biology, p. 123-39 (Academic Press, New York, N.Y. 1987.) 바람직한 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 알라닌 치환을 포함한다. 다른 바람직한 치환은 단백질의 전반적인 순 전하, 극성, 또는 소수성에 영향을 미치지 않거나 거의 미치지 않는 보존적 치환을 포함한다. 보존적 치환은 아래의 표 2에 제시되어 있다.
<표 2>
보존적 아미노산 치환
Figure pct00002
표 3은 아미노산 치환의 또 다른 구성을 나열한다.
<표 3>
Figure pct00003
[0038]다른 변이체는, (a) 치환 영역에서 폴리펩티드 백본의 구조를, 예를 들어, 시트형 또는 나선형 입체구조로 유지하거나, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지하거나, (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 데 미치는 이들의 효과가 더 유의하게 상이한 잔기를 선택하는 것과 같이, 덜 보존적인 아미노산 치환으로 이루어질 수 있다. 일반적으로 기능에 더 유의한 영향을 미칠 것으로 예상되는 치환은 (a) 글리신 및/또는 프롤린이 또 다른 아미노산으로 치환되거나 결실 또는 삽입되거나; (b) 친수성 잔기(예: 세릴 또는 쓰레오닐)가 소수성 잔기(예: 류실, 이소류실, 페닐알라닐, 발릴, 또는 알라닐)에 대해 (또는 이에 의해) 치환되거나; (c) 시스테인 잔기가 임의의 다른 잔기에 대해 (또는 이에 의해) 치환되거나; (d) 양전성 측쇄(electropositive side chain)를 갖는 잔기(예: 리실, 아르기닐, 또는 히스티딜)가 음전성 측쇄(electronegative side chain)를 갖는 잔기(예: 글루타밀 또는 아스파르틸)에 대해 (또는 이에 의해) 치환되거나; (e) 벌키 측쇄(bulky side chain)을 갖는 잔기가 이러한 측쇄를 갖지 않는 것(예: 글리신)에 대해 (또는 이에 의해) 치환되는 것들이다. 다른 변이체는 신규 글리코실화 및/또는 인산화 부위(들)를 생성하도록 설계된 것들, 또는 기존의 글리코실화 및/또는 인산화 부위(들)를 결실하도록 설계된 것들을 포함한다. 변이체는 글리코실화 부위, 단백질 분해 분절 부위(proteolytic cleavage site) 및/또는 시스테인 잔기에서 적어도 하나의 아미노산 치환을 포함한다. 변이체는 또한 링커 펩티드 상의 단백질 또는 펩티드 아미노산 서열의 전 또는 후에 추가 아미노산 잔기를 갖는 단백질 및 펩티드를 포함한다. 예를 들어, 시스테인 잔기는, 이황화 결합을 형성함으로써 펩티드의 고리화를 허용하기 위해 NTP 펩티드의 아미노 및 카르복시 말단 모두에 추가될 수 있다. 용어 "변이체"는 또한 펩티드의 3' 또는 5' 단부의 측면에 위치하는 적어도 하나 내지 25 개 이상의 추가 아미노산을 갖는 NTP 펩티드의 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
[0039]용어 "유도체(derivative)"는 화학적으로 변형된 단백질 또는 폴리펩티드로서, 가공 및 기타 번역 후 변형과 같은 자연적 과정에 의해서 뿐만 아니라, 예를 들어, 하나 이상의 폴리에틸렌 글리콜 분자, 설탕, 인산, 및/또는 기타 이러한 분자(분자 또는 분자들은 야생형 단백질 또는 NTP 폴리펩티드에 자연적으로 부착되지 않음)의 추가와 같은 화학적 변형 기술에 의해서도 화학적으로 변형된 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다. 유도체는 염(salts)을 포함한다. 이러한 화학적 변형은 기본 교재 및 보다 상세한 전공 논문뿐만 아니라 방대한 연구 문헌에 잘 기술되어 있으며, 당업자들에게 잘 알려져 있다. 동일한 유형의 변형이, 주어진 단백질 또는 폴리펩티드에서의 여러 부위에서 동일한 정도 또는 다양한 정도로 존재할 수 있음을 알 수 있을 것이다. 또한, 주어진 단백질 또는 폴리펩티드는 많은 유형의 변형을 함유할 수 있다. 변형은 펩티드 백본, 아미노산 측쇄, 및 아미노 말단이나 카르복시 말단을 포함하여 단백질 또는 폴리펩티드의 어느 곳에서나 발생할 수 있다. 변형은, 예를 들어, 아세틸화, 아실화, ADP-리보실화, 아미드화, 플라빈의 공유 부착, 헴 모이어티(heme moiety)의 공유 부착, 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유도체의 공유 부착, 지질 또는 지질 유도체의 공유 부착, 포스파티딜이노시톨(phosphotidylinositol)의 공유 부착, 교차 결합, 고리화(cyclization), 이황화 결합 형성, 탈메틸화, 공유 교차-링크의 형성, 시스테인의 형성, 피로글루탐산(pyroglutamate)의 형성, 감마-카르복시화, 글리코실화, GPI 앵커 형성, 히드록실화, 요오드화, 메틸화, 미리스토일화(myristoylation), 산화, 단백질 가수분해 처리(proteolytic processing), 인산화, 프레닐화, 라세미화, 글리코실화, 지질 부착, 황산화, 글루탐산 잔기의 감마-카르복시화, 히드록실화 및 ADP-리보실화, 셀레닐화, 전사-RNA의 매개에 의한 단백질에 대한 아미노산의 첨가(예: 아르기닐화), 및 유비퀴틴화를 포함한다. 예를 들어, Proteins--Structure And Molecular Properties, 2nd Ed., T. E. Creighton, W. H. Freeman and Company, New York (1993) and Wold, F., "Posttranslational Protein Modifications: Perspectives and Prospects," pgs. 1-12 in Posttranslational Covalent Modification Of Proteins, B. C. Johnson, Ed., Academic Press, New York (1983); Seifter 등의 Meth. Enzymol. 182:626-646 (1990) 및 Rattan 등의 "Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging," Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1992) 참조. 용어 "유도체(derivatives)"는 단백질 또는 폴리펩티드가 분지형이 되게 하거나, 분지 유무와 상관없이 고리화되게 하는 화학적 변형을 포함한다. 고리형, 분지형 및 분지된 원형 단백질 또는 폴리펩티드는 번역 후 자연 공정으로부터 생성될 수 있고, 전적으로 합성 방법에 의해 만들어질 수도 있다.
[0040]용어 "동족체(homologue)"는, 2 개의 폴리펩티드의 아미노산의 위치 유사성을 비교하는 데 공통적으로 사용되는 표준 방법에 의해 결정했을 때, NTP 펩티드의 아미노산 서열이 적어도 60% 동일한 단백질을 지칭한다. 2 개의 단백질 간의 유사성 또는 동일성의 정도는 알려진 방법에 의해 쉽게 계산할 수 있는데, 이에는 Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A. M., 및 Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. 및 Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; 및 Carillo H. and Lipman, D., SIAM, J. Applied Math., 48:1073 (1988)에 기술된 것이 포함되지만, 이들로 한정되지 않는다. 동일성을 결정하는 바람직한 방법은 시험된 서열 간에 최상의 정합을 부여하도록 설계된다. 동일성 및 유사성을 결정하는 방법은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 프로그램으로 코드화(codified)되어 있다.
[0041]2 개의 서열 간의 동일성 및 유사성을 결정하는 데 유용한 바람직한 컴퓨터 프로그램 방법은 GCG 프로그램 패키지(Devereux, J., 등의 Nucleic Acids Research, 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, 및 FASTA, Atschul, S. F. 등의 J. Molec. Biol., 215: 403-410 (1990)). BLAST X 프로그램은 NCBI 및 기타 공급원으로부터 이용할 수 있다(BLAST Manual, Altschul, S., 등의 NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul, S., 등의 J. Mol. Biol., 215: 403-410 (1990)). 예시로서, GAP(Genetic Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis.)와 같은 컴퓨터 알고리즘을 사용하면, 백분율 서열 동일성 결정의 대상이 되는 2 개의 단백질 또는 폴리펩티드가 이들 각각의 아미노산의 최적 정합을 위해 정렬된다(알고리즘에 의해 결정된 "정합 범위(matched span)").
[0042]갭 개방 페널티(평균 대각선의 3 배로 계산되고; "평균 대각선(average diagonal)"은 사용되는 비교 매트릭스의 대각선의 평균이며; "대각선(diagonal)"은 특정 비교 매트릭스에 의해 각각의 완전한 아미노산 정합에 할당된 점수 또는 숫자임) 및 갭 연장 페널티(일반적으로 갭 개방 페널티의 1/10 배)뿐만 아니라 PAM 250 또는 BLOSUM 62와 같은 비교 매트릭스가 알고리즘과 함께 사용된다. 표준 비교 매트릭스(PAM250 비교 매트릭스(comparison matrix)의 경우 Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, supp.3에서의 Dayhoff 등 참조; BLOSUM 62 비교 매트릭스의 경우 Henikoff 등의 Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89:10915-10919 참조) 또한 알고리즘에 의해 사용될 수 있다. 그런 다음, 백분율 동일성이 알고리즘에 의해 계산된다. 경우에 따라, 동족체는 일반적으로 비교 단백질 또는 펩티드와 비교해 하나 이상의 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입을 갖는다.
[0043]용어 "융합 단백질(fusion protein)"은 하나 이상의 펩티드가 항체 또는 항체 단편(예: F.sub.ab 또는 단쇄 Fv)과 같은(그러나 이에 한정되지 않음) 단백질에 재조합적으로 융합되거나 화학적으로 결합된(공유 및 비공유 결합을 포함함) 단백질을 지칭한다. 용어 "융합 단백질"은 또한 펩티드의 다량체(2량체, 3량체, 4량체 및 더 높은 다량체)를 지칭한다. 이러한 다량체는 하나의 펩티드를 포함하는 호모머 다량체, 둘 이상의 펩티드를 포함하는 헤테로머 다량체, 및 적어도 하나의 펩티드와 적어도 하나의 다른 단백질을 포함하는 헤테로머 다량체를 포함한다. 이러한 다량체는 소수성, 친수성, 이온성 및/또는 공유 연결, 결합 또는 링크의 결과일 수 있고, 링커 분자를 사용하는 교차 링크에 의해 형성되거나, 예를 들어 리포솜 형성에 의해 간접적으로 링크될 수 있다.
[0044]용어 "펩티드 모방체(peptide mimetic)" 또는 "모방체(mimetic)"는 펩티드 또는 단백질의 생물학적 활성을 모방하지만, 화학적 속성에 있어서 더 이상 펩티드가 아닌, 즉 임의의 펩티드 결합(아미노산 사이의 아미드 결합)을 더 이상 함유하지 않는 생물학적 활성 화합물을 지칭한다. 여기서, 용어 펩티드 모방체는 유사-펩티드, 세미-펩티드 및 펩토이드와 같이 속성에 있어서 더 이상 전혀 펩티드가 아닌 분자를 포함하도록 광의로 사용된다. (펩티드의 일부가 펩티드 결합이 없는 구조로 대체되는) 이러한 광의의 펩티드 모방체의 예는 아래에 기술된다. 완전히 또는 부분적으로 비-펩티드인지와 무관하게, 구현예에 따른 펩티드 모방체는 펩티드 모방체가 기초하는 펩티드에서의 활성기(active group)의 3 차원 배열과 매우 유사한 반응성 화학적 모이어티의 공간적 배열을 제공한다. 이러한 유사한 활성 부위 형상의 결과로서, 펩티드 모방체는 펩티드의 생물학적 활성과 유사한 생물학적 시스템에 영향을 미친다.
[0045]구현예의 펩티드 모방체는 바람직하게는 3 차원 형상 및 생물학적 활성에 있어서 본원에 기술된 펩티드와 실질적으로 유사하다. 당업계에 알려진 펩티드의 구조를 변형시켜 펩티드 모방체를 생성하는 방법의 예는 D-아미노산 잔기 구조를 유도하는 백본 비대칭 중심(backbone chiral centers)을 역전시키는 것을 포함하는데, 이는 특히 N-말단에서, 활성에 악영향을 미치지 않으면서 단백질 가수분해에 대한 안정성을 강화시킬 수 있다. 일 예는 문헌 "Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding", Smith C. S. 등의 Drug Development Res., 15, pp. 371-379 (1988)에 제공되어 있다. 두 번째 방법은, 안정성을 위해 고리 구조(예: N에서 C로의 사슬간 이미드 및 락탐)를 변경하는 것이다(Smith and Rivier (Eds.)의 Ede 등 "Peptides: Chemistry and Biology", Escom, Leiden (1991), pp. 268-270). 이에 대한 예는, 그 개시 전체가 본원에 참조로서 통합된 Goldstein, G. 등의 미국 특허 제4,457,489호 (1985)에 기술된 것들과 같은, 구조적으로 제한된 티모펜틴-유사 화합물에서 제공된다. 세 번째 방법은 단백질 분해에 내성을 부여하는 슈도펩티드 결합(pseudopeptide bonds)으로 펩티드 내의 펩티드 결합을 치환하는 것이다.
[0046]일반적으로 펩티드 구조 및 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 다수의 슈도펩티드 결합이 기술되었다. 이러한 접근법의 일 예는 레트로-인버소(retro-inverso) 슈도펩티드 결합이다("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin", Rivier의 Sisto A. 등, J. E. 및 Marshall, G. R. (eds) "Peptides, Chemistry, Structure and Biology", Escom, Leiden (1990), pp. 722-773) 및 Dalpozzo, 등의 (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:561-566; 본원에 참조로서 통합됨). 본 변형에 따르면, 펩티드의 아미노산 서열은, 레트로-인버소 슈도펩티드 결합에 의해 하나 이상의 펩티드 결합이 대체된 것을 제외하고는, 전술한 펩티드의 서열과 동일할 수 있다. 바람직하게는, 가장 N-말단의 펩티드 결합이 치환되는데, 이는 이러한 치환이 N-말단에 작용하는 엑소펩티다아제에 의해 단백질 분해에 대한 내성을 부여할 것이기 때문이다. 아미노산의 화학기를 유사한 구조의 다른 화학기로 대체함으로써 추가 변형을 만들 수도 있다. 생물학적 활성의 손실 없거나 거의 없이 효소 절단에 대한 안정성을 강화하는 것으로 알려진 또 다른 적합한 슈도펩티드 결합은 감소된 등배체(isostere) 슈도펩티드 결합이다(Couder, 등의 (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181-184; 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨).
[0047]따라서, 이들 펩티드의 아미노산 서열은, 등배체 슈도펩티드 결합에 의해 하나 이상의 펩티드 결합이 대체된 것을 제외하고는, 펩티드의 서열과 동일할 수 있다. 바람직하게는, 가장 N-말단의 펩티드 결합이 치환되는데, 이는 이러한 치환이 N-말단에 작용하는 엑소펩티다아제에 의해 단백질 분해에 대한 내성을 부여할 것이기 때문이다. 하나 이상의 감소된 등배체 슈도펩티드 결합을 갖는 펩티드의 합성은 당업계에 알려져 있다(Couder, 등 (1993), 위에 인용됨). 다른 예에는 케토메틸렌 또는 메틸설파이드 결합을 도입하여 펩티드 결합을 대체하는 것이 포함된다.
[0048]펩티드의 펩토이드 유도체는, 생물학적 활성에 대한 중요한 구조 결정기(determinants)를 유지하면서 펩티드 결합을 제거하여 단백질 분해에 대한 내성을 부여하는 펩티드 모방체의 또 다른 분류를 나타낸다(Simon, 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:9367-9371; 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 펩토이드는 N-치환된 글리신의 올리고머이다. 각각이 천연 아미노산의 측쇄에 상응하는 다수의 N-알킬기가 기술되었다(Simon, 등 (1992), 위에 인용됨). 펩티드의 아미노산 중 일부 또는 전부는 대체된 아미노산에 상응하는 N-치환된 글리신으로 대체될 수 있다.
[0049] 용어 "펩티드 모방체(peptide mimetic)" 또는 "모방체(mimetic)"는 또한 아래에 기술된 바와 같은 역-D 펩티드 및 거울상 이성질체(enantiomers)를 포함한다.
[0050]용어 "역-D 펩티드(reverse-D peptide)"는, 펩티드의 L-아미노산 서열과 비교해 역순으로 배열된 D-아미노산으로 이루어지는 생물학적 활성 단백질 또는 펩티드를 지칭한다. 따라서, L-아미노산 펩티드의 카르복시 말단 잔기는 D-아미노산 펩티드 등에 대한 아미노 말단이 된다. 예를 들어, ETESH(서열번호 117)인 펩티드는 HdSdEdTdEd가 되며, 여기서 Ed, Hd, Sd, 및 Td는 L-아미노산, E, H, S, 및 T에 각각 상응하는 D-아미노산이다.
[0051] 용어 "거울상 이성질체(enantiomer)"는 펩티드의 아미노산 서열에서의 하나 이상의 L-아미노산 잔기가 상응하는 D-아미노산 잔기(들)와 대체된 생물학적 활성 단백질 또는 펩티드를 지칭한다.
[0052]본원에서 사용된 바와 같이, "조성물(composition)"은 열거된 펩티드 또는 아미노산 서열을 함유하고, 선택적으로는 추가 활성제를 함유하는 임의의 조성물을 광범위하게 지칭한다. 조성물은 건조 제형, 수용액, 또는 멸균 조성물을 포함할 수 있다. 펩티드를 포함하는 조성물은 하이브리드화 프로브로서 사용될 수 있다. 프로브는 동결건조 형태로 저장될 수 있고, 탄수화물과 같은 안정화제와 결합될 수 있다. 하이브리드화 중에, 프로브는 염(예: NaCl), 세척제(예: 도데실 황산나트륨(SDS)), 및 다른 성분(예: 덴하르트 용액, 분유, 연어 정자 DNA 등)을 함유하는 수용액 중에 전개될 수 있다.
[0053]추가적인 활성제가 NTP 펩티드와 함께 사용되는 대안적인 구현예에서, "활성제(active agent)"라는 표현은 원치 않는 세포 증식 및/또는 조직 성장을 제거할 수 있는 임의의 제제를 지칭하도록 사용된다. 적절한 활성제는 다음을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다: (i) 항암 활성제(예: 알킬화 제제, 국소 이성화 효소 I 억제제, 국소 이성화 효소 II 억제제, RNA/DNA 항대사성 물질, 및 유사분열 저해제); (ii) 항여드름 및 항사마귀 활성제와 같은, 양성 성장 치료용 활성제; (iii) 항안드로겐 화합물, (시프로테온 아세테이트 (1α,2β-메틸렌-6-클로로-17α-아세톡시-6-디하이드로프로게스테론) 타목시펜(Tamoxifen), 방향화 효소 억제제); (iv) 알파1-아드레날린 수용체 차단제 (탐스로신(tamsulosin), 테라조신(terazosin), 독사조신(doxazosin), 프라조신(prazosin), 부나조신(bunazosin), 인도라민(indoramin), 알풀조신(alfulzosin), 실로도신(silodosin)); (v) 5α-환원 효소 억제제 (피나스테라이드(finasteride), 두타스테라이드(dutasteride)); (vi) 포스포다이에스터레이스 5 (phosphodiesterase type 5; PDE5) 억제제 (타달라필(tadalafil)) 및 이들의 조합.
[0054]일부 구현예는, BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하고/하거나 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 NTP 펩티드를 포함하는 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 포유류에게 단독으로 투여하거나, 적어도 하나의 추가 활성제와 조합하여 투여하는 단계를 포함한다. 당업자라면, BPH의 증상이 악화 또는 진행되거나, 상기 증상이 악화되거나 증상 호전이 부족한 포유류는 시간의 경과에 따라 IPSS 점수가 증가하거나, 시간이 경과하더라도 IPSS의 호전(감소)을 나타내지 않는 포유류라는 것을 이해할 것이다. 당업자는, 잘 알려진 산업 표준을 사용해 IPSS 점수를 결정하는 방법을 알고 이해한다.
[0055] 국제 전립선 증상 점수(I-PSS)는 배뇨 증상에 관한 7개의 질문과 삶의 질에 관한 하나의 질문에 대한 답변에 기초한다. 배뇨 증상에 관한 각각의 질문은 특정 증상의 증가하는 중증도를 나타내는 6개의 답변 중 하나를 환자가 선택할 수 있게하는 것이다. 답변은 0점에서 5점까지 할당된다. 따라서 총 점수는 (무증상에서 매우 심한 증상까지) 0 내지 35의 범위일 수 있다. 질문은 다음의 배뇨 증상을 나타내는 것이다:
증상과 관련된 질문
1 잔뇨감
2 빈뇨
3 간헐뇨
4 요절박
5 약뇨
6 요주저
7 야간뇨
8번 째 질문은 환자가 인지하는 삶의 질을 나타낸다.
[0056] IPSS의 처음 7가지 질문은 상기 증상을 현재 다음과 같이 분류하는 미국 비뇨기학회(AUA)의 증상 지수에서 나타나는 질문과 동일하다:
경미 (증상 점수 7 이하)
중간 (증상 점수 범위 8~19)
중증 (증상 점수 범위 20~35)
세계 보건 기구(WHO) 및 국제 암 예방 연합(UICC) 산하의 국제 과학 위원회(SCI)는 삶의 질을 평가하는 데는 단 하나의 질문만 사용할 것을 권장한다. 본 질문에 대한 답변은 "기쁨"에서 "끔찍함"까지, 또는 0에서 6까지의 범위이다. 이러한 단일 질문이 양성 전립선 비대증(BPH) 증상이나 삶의 질에 대한 글로벌한 영향을 포착하거나 그렇지 않을 수 있겠지만, 이는 의사-환자 대화를 위한 귀중한 출발점으로서의 역할을 할 수 있다.
[0057]BPH를 앓고 있는 포유류 모두가 BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행, 또는 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 나타내는 것은 아니다. 다시 말하자면, BPH를 앓고 있는 일부 포유류는 장애로 지속적인 고통을 받고 있음에도 불구하고, 시간이 지나도 IPSS 점수는 증가를 보이지 않을 수 있다. 유사하게, BPH를 앓고 있는 일부 포유류는 시간이 지남에 따라 IPSS 점수의 극적인 증가를 보일 수 있다. 본원에 기술된 구현예는, 시간의 경과에 따라 증가하는 IPSS 또는 시간의 경과에 따라 IPSS의 임의의 상당한 감소의 부족에 의해 입증되듯이, BPH를 앓고 있는 포유류로서, BPH 증상이 악화 또는 진행되거나, 상기 증상이 악화되거나 증상 호전이 부족하기 쉬운 포유류를 치료하는 것을 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 치료받는 포유류는 BPH가 있거나 이에 감염되기 쉬운 대상들이다. 다른 구현예에서, 치료받는 포유류는 BPH로 진단되었고, 알파 차단제(탐스로신, 테라조신, 독사조신), 또는 5-알파 환원 효소 억제제(예: 피타스테라이드, 두타스테라이드), 또는 포스포다이세스터레이스 5 (PDE5) 억제제(예: 타달라필))로 현재 치료를 받고 있는 대상이다. 또 다른 구현예에서, 조성물은 2 회 이상 투여된다.
[0058]세포 사멸을 유도하는 데 효과적인 제제로 밝혀진 NTP 펩티드로부터 유래된 다른 펩티드 서열이 본원에 기술된 NTP 펩티드와 조합하여 추가 활성제로서 사용될 수도 있다. 당업자는, 다른 효과적인 펩티드 서열을 동정하기 위해, 본원에서 제공된 가이드라인을 사용하여 해당 단백질의 전체 아미노산 서열에 걸친 효과적인 펩티드의 단편을 과도한 실험 없이 합성할 수 있다.
[0059] 발명자는, NTP 펩티드를 단독 투여하거나 또 다른 활성제와 조합하여 투여하는 것이, IPSS의 증가로 측정된 바와 같이, BPH의 증상의 진행 또는 악화를 극적으로 감소시켰고, 상기 증상을 악화시키거나 증상 호전의 부족을 예상 외로 감소시켰음을 BPH 치료를 위한 임상 실험을 수행하는 중에 예기치 않게 발견하였다. 발명자는, 대조군이 투여된 포유류와 비교해, NTP 펩티드가 단독으로 투여되었거나 또 다른 활성제와 조합되어 투여된 경우에, IPSS의 증가를 나타내는 포유류의 백분율이 극적으로 감소되었음을 발견하였다. 발명자는, 대조군을 투여한 포유류로서 IPSS의 증가를 나타낸 포유류의 백분율과 비교했을 때, NTP 펩티드(들)를 단독으로 투여하였거나 또 다른 활성제와 조합하여 투여한 포유류로서 IPSS의 증가를 나타낸 포유류의 백분율이 약 10%보다 더 많은 양만큼 감소하였음을 임상 시험 도중에 발견하였다. 예를 들어, 대조군을 투여한 포유류로서 BPH의 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율이 약 50%인 경우, NTP 펩티드(들)를 단독으로 투여하였거나 또 다른 활성제와 조합하여 투여한 포유류로서 BPT의 증상의 악화 또는 진행을 나타낸 포유류의 백분율이 45% 미만이 되고, 따라서 BPH의 증상의 악화 또는 진행을 적어도 약 10% 개선하거나 예방하는 결과를 생긴 것이다. 일부 구현예에서, NTP 펩티드(들)를 단독으로 투여하거나 또 다른 활성제와 조합하여 투여하는 것은, BPH 증상의 악화 또는 진행을 적어도 약 15%, 또는 적어도 18%, 또는 적어도 약 23%, 또는 적어도 약 27%, 또는 적어도 약 35%, 또는 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 65%, 또는 약 100%까지, 또는 약 10% 내지 약 70%, 또는 약 20% 내지 약 65%, 또는 약 30% 내지 약 60%, 또는 약 35% 내지 약 60%의 범위 이내에서 개선하거나 예방한다. 다른 구현예에서, NTP 펩티드(들)를 단독으로 투여하거나 또 다른 활성제와 조합하여 투여하는 것은, BPH 증상 개선의 악화 또는 부족을 적어도 약 15%, 또는 적어도 23%, 또는 적어도 약 27%, 또는 적어도 약 35%, 또는 적어도 약 45%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 65%, 또는 약 100%까지, 또는 약 10% 내지 약 80%, 또는 약 20% 내지 약 75%, 또는 약 25% 내지 약 70%의 범위 이내에서 개선하거나 예방한다.
[0060]본 발명의 조성물로 치료된 환자들은 IPSS의 악화 또는 호전의 부족을 나타내는 환자 백분율에서 극적인 감소를 나타냈다. 대조군 투여 시, 약 20~50%, 또는 약 21%의 환자가 IPSS의 악화를 나타냈고, 약 40% 내지 약 75%, 또는 약 50%의 환자는 IPSS의 악화 또는 호전의 부족을 나타냈다. 구현예의 방법은 IPSS의 악화 또는 무개선을 나타내는 환자의 비율을 낮출 수 있다. 일 구현예에서, 본원에 기술된 조성물의 투여는, IPSS의 악화를 나타내는 환자의 백분율을 약 0%(완전한 예방) 내지 약 25% 범위, 또는 약 2.5% 내지 20% 범위, 또는 약 5% 내지 15% 범위, 또는 0% 내지 25% 범위 또는 그 범위 사이의 임의의 값이 되게 한다. 또 다른 구현예에서, 본원에 기술된 조성물의 투여는, IPSS의 악화 또는 호전의 부족을 나타내는 환자의 백분율을 약 0%(완전한 예방) 내지 약 40% 범위, 또는 약 10% 내지 40% 범위, 또는 약 15% 내지 36% 범위, 또는 0% 내지 40% 범위 또는 그 범위 사이의 임의의 값이 되게 한다.
[0061]구현예는 BPH로 이어질 수 있는 병태를 앓는 포유류 및/또는 BPH 증상이 악화되거나 진행되기 쉬운 포유류 또는 BPH 증상이 악화되거나 증상 호전이 부족하기 쉬운 포유류를 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 포유류에게 NTP 펩티드를 단독으로 투여하거나 추가 활성제와 조합하여 1 회 또는 2 회 이상 투여하는 단계를 포함한다. 상기 방법은 NTP-펩티드를 단독으로 또는 담체에 접합된 상태로 근육내, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내 (유조직내), 뇌실내, 병변내, 안구내, 동맥내, 척수강내, 종양내, 비강내, 국소, 경피, 피하, 또는 피내 투여하는 단계를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다. 바람직한 NTP 펩티드는 다음 중 하나 이상을 포함한다:
서열 번호 66 IDQQVLSRIKLEIKRCL Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu- Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
서열 번호 111 IDQQVLSRI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile
서열 번호 115 VLSRIKLEIKRCL Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
서열 번호 116 IDQQVLSRIKLEI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile
[0062]인간, 마우스, 토끼, 개, 양 및 다른 가축, 및 수의사, 동물원 사육사, 또는 야생동물 보호업 종사자가 치료했거나 치료할 수 있는 임의의 포유류를 포함하여 임의의 포유류는 본 발명을 사용함으로써 혜택을 받을 수 있다. 바람직한 포유류는 인간, 양, 및 개이다. 본 명세서 전반에 걸쳐 포유류 및 환자는 교환 가능하게 사용된다.
[0063] 상기 NTP 펩티드의 다른 더 작은 단편이 이들 펩티드가 동일하거나 유사한 생물학적 활성을 보유하도록 선택될 수 있음은 당업자에게 자명할 것이다. 다른 단편은 이들 펩티드가 동일하거나 유사한 생물학적 활성을 보유하도록 당업자에 의해 선택될 수 있다. 구현예의 펩티드는 이들 다른 단편을 포함한다. 일반적으로, 구현예의 펩티드는 적어도 4 개의 아미노산, 바람직하게는 적어도 5 개의 아미노산, 및 더 바람직하게는 적어도 6 개의 아미노산을 갖는다.
[0064]구현예는 또한, 급성 요정체의 발병을 예방하거나 감소시키는 방법을 포함하되, 상기 방법은 추가 활성제와 함께 서로 결합된 2 개 이상의 NTP 펩티드를 포함하는 NTP 펩티드를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. NTP 펩티드가 원하는 생물학적 활성을 가지는 정도까지, 2 개의 이러한 펩티드도 원하는 생물학적 활성을 보유하게 될 것이다.
[0065] 본 구현예에 포함된 NTP 펩티드 및 이의 단편, 변이체, 유도체, 동족체, 융합 단백질 및 모방체는 당업자에게 알려진 방법, 예컨대 재조합 DNA 기술, 단백질 합성, 및 자연 발생 펩티드, 단백질, AD7c-단백질 및 이의 단편, 변이체, 유도체 및 동족체의 단리 등을 사용해 제조될 수 있다.
[0066]NTP 펩티드 및 이의 단편, 변이체, 유도체, 동족체, 융합 단백질 및 모방체는 당업자에게 알려진 방법을 사용해 다른 펩티드, 단백질, 및 이의 단편, 변이체, 유도체 및 동족체로부터 제조될 수 있다. 이러한 방법은 프로테아제를 사용해 펩티드 또는 단백질을 원하는 NTP 펩티드로 절단하는 것을 포함한다(이에 한정되지 않음).
[0067]NTP 펩티드는 Sambrook 등의 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. 및/또는 Ausubel 등의 편집판인, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc. 및 Wiley and Sons, N.Y.에 제시된 것들과 같은 잘 알려진 재조합 DNA 기술 방법을 사용해 제조할 수 있다.
[0068]NTP 펩티드를 암호화하는 유전자 또는 cDNA는 예를 들어 게놈 라이브러리 또는 cDNA 라이브러리의 스크리닝에 의해, 또는 PCR 증폭에 의해 수득될 수 있다. 라이브러리 스크리닝에 유용한 프로브 또는 프라이머는 다른 알려진 유전자, 또는 동일한 유전자군 또는 관련 유전자군 유래의 유전자 단편(예: 다른 펩티드 또는 단백질에서 발견된 보존된 모티프(motifs))에 대한 서열 정보에 기초하여 생성할 수 있다. 또한, NTP 펩티드를 암호화하는 유전자가 동정된 경우, 해당 유전자의 전부 또는 일부가 상동성 유전자를 동정하기 위한 프로브로서 사용될 수 있다. 프로브 또는 프라이머는 NTP 펩티드 유전자를 발현하는 것으로 여겨지는 다양한 조직 공급원으로부터 cDNA 라이브러리를 스크리닝하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 스크리닝에는 매우 엄격성 조건이 채택되어 스크리닝으로부터 수득되는 위양성(false positives)의 수를 최소화할 것이다.
[0069]NTP 펩티드를 암호화하는 유전자를 제조하기 위한 또 다른 수단은 Engels 등의 Angew. Chem. Intl. Ed., 28:716-734에 기술된 것들과 같은, 당업자에게 잘 알려진 방법을 사용하는 화학 합성을 이용하는 것이다. 이들 방법은, 무엇보다도, 핵산 합성을 위한 포스포트리에스테르(phosphotriester)법, 포스포라미디트(phosphoramidite)법, 및 H-포스포네이트(H-phosphonate)법을 포함한다. 이러한 화학 합성을 위한 바람직한 방법은 표준 포스포라미디트 화학을 사용하는 중합체-지지(polymer-supported) 합성이다. 일반적으로, 펩티드나 단백질을 합성하는 DNA는 수 백 뉴클레오티드의 길이를 가질 것이다. 약 100 뉴클레오티드보다 더 큰 핵산은 이들 방법을 사용해 여러 개의 단편으로 합성될 수 있다. 그런 다음, 단편들을 함께 결합시켜 전장 펩티드 또는 단백질을 형성할 수 있다. 보통, 단백질의 아미노 말단을 암호화하는 DNA 단편은 메티오닌 잔기를 암호화하는 ATG를 가지게 된다. 이러한 메티오닌은, 숙주 세포에서 생성된 단백질이 해당 세포로부터 분비되도록 설계되었는지 여부에 따라, 성숙한 형태의 단백질이나 펩티드 상에 있거나 없을 수 있다.
[0070]NTP 펩티드를 암호화하는 유전자, cDNA 또는 이의 단편은 표준 결합 기술(standard ligation techniques)을 사용해 적절한 발현 벡터 또는 증폭 벡터 내에 삽입될 수 있다. 벡터는 사용되는 특정 숙주 세포 내에서 작용하도록 일반적으로 선택된다 (즉, 벡터는 유전자의 증폭 및/또는 유전자의 발현이 발생할 수 있도록 숙주 세포 기계와 호환된다). NTP 펩티드를 암호화하는 유전자, cDNA 또는 이의 단편은 원핵 숙주 세포, 효모 숙주 세포, 곤충(배큘로바이러스 시스템) 숙주 세포 및/또는 진핵 숙주 세포에서 증폭/발현될 수 있다. 숙주 세포의 선별은 NTP 펩티드가 글리코실화 및/또는 인산화되는지 여부에 부분적으로 의존한다. 그렇다면, 효모, 곤충, 또는 포유류 숙주 세포가 바람직하다.
[0071]일반적으로, 임의의 숙주 세포에서 사용되는 벡터는 적어도 5' 측면 서열(프로모터로도 지칭됨) 및 다른 조절 요소(예: 증강자(들), 복제 요소의 기점, 전사 종료 요소, 공여자 및 수혜자 접합 부위를 함유하는 완전한 인트론 서열, 신호 펩티드 서열, 리보솜 결합 부위 요소, 폴리아데닐화 서열, 발현될 폴리펩티드를 암호화하는 핵산의 삽입을 위한 폴리 링커 영역, 및 선택 가능한 마커 요소)도 함유할 것이다. 이들 요소의 각각은 아래에서 논의된다. 선택적으로, 벡터는 태그 서열, 즉 단백질이나 펩티드 코딩 서열의 5' 또는 3' 말단에 위치한 올리고뉴클레오티드 분자를 함유할 수 있고; 올리고뉴클레오티드 분자는 polyHis(예: hexaHis (서열번호 118)), 또는 상업적으로 이용할 수 있는 항체가 존재하는 FLAG, HA(헤마글루티닌 인플루엔자 바이러스) 또는 myc와 같은 다른 태그를 암호화한다. 이러한 태그는 폴리펩티드가 발현될 때 일반적으로 폴리펩티드에 융합되며, 숙주 세포로부터 단백질 또는 펩티드의 친화성 정제를 위한 수단으로서 작용할 수 있다. 친화성 정제(affinity purification)는, 예를 들어, 친화성 매트릭스(affinity matrix)로서 태그에 대항하는 항체를 사용하는 컬럼 크로마토그래피에 의해 달성될 수 있다. 선택적으로, 태그는 정제된 단백질 또는 펩티드로부터 다양한 수단에 의해, 예컨대 특정 펩티다아제를 사용해 후속적으로 제거될 수 있다.
[0072]인간 면역글로불린 힌지와 Fc 영역은 NTP 펩티드의 N-말단 또는 C-말단에서 당업자에 의해 용합될 수 있다. 후속 Fc-융합 단백질은 단백질 A 친화성 컬럼을 사용하여 정제될 수 있다. Fc는 생체내에서 긴 약동학적 반감기를 나타내는 것으로 알려져 있고, Fc에 융합된 단백질은 융합되지 않은 상대보다 실질적으로 더 긴 반감기를 생체내에서 나타내는 것으로 밝혀졌다. 또한, Fc 영역에 대한 융합은 분자의 2량체화/다량체화를 가능하게 하는데, 이는 일부 분자의 생체 활성에 유용할 수 있다.
[0073]5' 측면 서열은 상동성(숙주 세포와 동일한 종 및/또는 균주 유래임)이거나, 이종성(숙주 세포 종 또는 균주와 다른 종 유래임)이거나, 하이브리드(둘 이상의 공급원 유래의 5' 측면 서열의 조합임)이거나, 합성일 수 있거나, 이는 생단백질 또는 펩티드 유전자 5' 측면 서열일 수 있다. 이와 같이, 5' 측면 서열이 숙주 세포 기계에서 기능적이고 숙주 세포 기계에 의해 활성화될 수 있는 경우, 5' 측면 서열의 공급원은 임의의 단세포 원핵 또는 진핵 생물, 임의의 척추 동물 또는 무척추 생물, 또는 임의의 식물일 수 있다.
[0074]본 구현예의 벡터에 유용한 5' 측면 서열은 당업계에 잘 알려진 여러 가지 방법 중 임의의 하나에 의해 수득될 수 있다. 일반적으로, 단백질 또는 펩티드 유전자 측면 서열 이외의 본원에서 유용한 5' 측면 서열은 맵핑에 의해서 및/또는 제한 엔도뉴클레아제 분해에 의해 이전에 동정되었을 것이므로, 적절한 제한 엔도뉴클레아제를 사용해 적합한 조직 공급원으로부터 단리될 수 있다. 일부 경우에, 5' 측면 서열의 전체 뉴클레오티드 서열은 알려진 것일 수 있다. 여기서, 5' 측면 서열은 핵산 합성 또는 클로닝에 대해 전술한 방법을 사용해 합성될 수 있다. 5' 측면 서열의 전부 또는 일부가 알려진 경우, 이는 PCR를 사용하고/하거나 적합한 올리고뉴클레오티드를 갖는 게놈 라이브러리 및/또는 동일한 종이나 또 다른 종 유래의 5' 측면 서열 단편을 스크리닝하여 수득될 수 있다.
[0075]5' 측면 서열이 알려지지 않은 경우, 5' 측면 서열을 함유하는 DNA의 단편은, 예를 들어, 코딩 서열 또는 심지어 또 다른 유전자 또는 유전자들을 함유할 수 있는 DNA의 더 큰 조각으로부터 단리될 수 있다. 단리(isolation)는 제한 엔도뉴클레아제 분해에 의해, 적합한 DNA 단편을 단리하기 위해 신중하게 선택된 하나 이상의 효소를 사용해 달성될 수 있다. 분해가 된 후, 원하는 단편은 아가로오스 겔 정제(agarose gel purification), Qiagen®컬럼, 또는 당업자에게 알려진 다른 방법에 의해 단리될 수 있다. 이러한 목적을 달성하기 위한 적절한 효소의 선별은 당업자에게는 쉽게 자명할 것이다.
[0076]복제 요소의 기점은 일반적으로 상업적으로 구입한 원핵 생물 발현 벡터의 일부이며, 숙주 세포에서 벡터의 증폭을 돕는다. 특정 카피 수까지 벡터를 증폭시키는 것은, 일부 경우에, 단백질 또는 펩티드의 적정 발현을 위해 중요할 수 있다. 선택된 벡터가 복제 부위 기점을 함유하지 않는 경우, 알려진 서열에 기초하여 복제 부위 기점을 화학적으로 합성하여 벡터 내에 결합시킬 수 있다. 전사 종결 요소는 일반적으로 단백질 또는 펩티드 코딩 서열의 말단의 3'에 위치하고, 단백질 또는 펩티드의 전사를 종결시키는 역할을 한다. 보통, 원핵 생물 세포에서의 전사 종결 요소는 G-C가 풍부한 단편이며, 폴리 T 서열이 이어진다. 상기 요소는 라이브러리로부터 클로닝하거나, 벡터의 일부로서 상업적으로 구입할 수 있지만, 전술한 것들과 같은 핵산 합성 방법을 사용해 쉽게 합성할 수도 있다.
[0077]선택 가능한 마커 유전자 요소는 선택적 배지에서 성장한 숙주 세포의 생존과 성장에 필수적인 단백질을 암호화한다. 일반적인 선별 마커 유전자는 (a) 암피실린, 테트라시클린, 또는 카마마이신과 같은 항생제나 기타 독성에 대한 내성을 원핵 숙주 세포에 부여하거나, (b) 세포의 영양 요구성 결핍을 상보하거나, (c) 복합 배지로부터 얻을 수 없는 중요 영양분을 공급하는 단백질을 암호화한다. 바람직한 선별 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 및 테트라시클린 내성 유전자이다.
[0078]통상 샤인-달가르노 서열(Shine-Dalgarno sequence; 원핵 생물) 또는 코작 서열(Kozak sequence; 진행 생물)로 불리는 리보솜 결합 요소는 일반적으로 mRNA의 전사 개시에 필요하다. 상기 요소는 일반적으로 프로모터에 대해 3' 및 합성될 단백질 또는 펩티드의 코딩 서열에 대해 5'에 위치한다. 샤인-달가르노 서열은 다양하지만 전형적으로는 폴리푸린(polypurine)이다 (즉, 높은 A-G 농도를 가짐). 많은 샤인-달가르노 서열이 동정되었는데, 이들 각각은 위에 제시되고 원핵 생물 벡터에 사용되는 방법을 사용해 쉽게 합성될 수 있다.
[0079]숙주 세포로부터 NTP 펩티드가 분비되는 것이 바람직한 경우에, 신호 서열이 사용되어 펩티드가 합성된 숙주 세포로부터 펩티드를 유도할 수 있고, 막 고정(membrane anchoring)을 방지하기 위해 단백질의 카르복시-말단부가 결실될 수 있다. 일반적으로, 신호 서열은 NTP 펩티드 유전자 또는 cDNA의 코딩 영역 내에 위치하거나, 펩티드 유전자 코딩 영역의 5' 말단에 직접 위치한다. 많은 신호 서열이 동정되었고, 이들 중 선별된 숙주 세포에서 기능성인 임의의 신호 서열이 펩티드 유전자 또는 cDNA와 함께 사용될 수 있다. 따라서, 신호 서열은 펩티드 유전자 또는 cDNA에 대해 상동성이거나 이종성일 수 있고, 펩티드 유전자 또는 cDNA에 대해 상동성이거나 이종성일 수 있다. 추가로, 신호 서열은 위에 제시된 방법을 사용해 화학적으로 합성될 수 있다. 대부분의 경우에, 신호 서열의 존재를 통해 숙주 세포로부터 폴리펩티드가 분비되면 폴리펩티드로부터 아미노 말단 메티오닌이 제거될 것이다.
[0080]많은 경우에, NPT 펩티드 유전자 또는 cDNA의 전사는 벡터 내에 하나 이상의 인트론이 존재함으로 인해 증가하는데; 이는 펩티드가 진핵 생물 숙주 세포, 구체적으로는 포유류 숙주 세포에서 생성되는 경우에 특히 해당된다. 사용된 인트론은 펩티드 유전자 내에서 자연 발생할 수 있는데, 사용된 유전자가 전장 게놈 서열이거나 이의 단편인 경우에 특히 그러하다. (대부분의 cDNA에서 그러하듯이) 인트론이 유전자 내에서 자연 발생하지 않는 경우, 인트론(들)은 또 다른 공급원으로부터 수득될 수 있다. 인트론이 유효하게 전사되어야 하므로, 측면 서열 및 펩티드 유전자에 대한 인트론의 위치가 일반적으로 중요하다. 이와 같이, 발현 벡터 내에 삽입된 펩티드 유전자가 cDNA 분자인 경우, 인트론의 바람직한 위치는 전사 시작 부위에 대해 3'이고, polyA 전사 종결 서열에 대해 5'이다. 바람직하게는, 펩티드 cDNA의 경우, 인트론 또는 인트론들은 이러한 코딩 서열을 방해하지 않도록 cDNA의 일측 또는 타측(5' 또는 3')에 위치하게 된다. 임의의 바이러스성, 원핵 및 진핵 생물(식물 또는 동물)을 포함하여 임의 공급원 유래의 임의의 인트론이, 이들이 삽입되는 숙주 세포(들)과 양립할 수 있다는 전제 하에 본 구현예를 실시하는 데 사용될 수 있다. 합성 인트론도 본원에 포함된다. 선택적으로, 둘 이상의 인트론이 벡터에 사용될 수 있다.
[0081]위에 제시된 하나 이상의 요소가 사용될 벡터 내에 아직 존재하지 않는 경우, 이들을 개별적으로 수득하여 벡터로 결합시킬 수 있다. 요소 각각을 수득하는 데 사용된 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 위에 제시된 방법(DNA의 합성, 라이브러리 스크리닝 등)과 비견할 만하다.
[0082]본 구현예를 실시하기 위해 사용된 최종 벡터는 상업적으로 구입할 수 있는 벡터와 같은 시작 벡터로부터 작제될 수 있다. 이러한 벡터는 완성된 벡터에 포함될 요소 중 일부를 함유하거나 함유하지 않을 수 있다. 시작 벡터에 원하는 요소가 존재하지 않는 경우, 각각의 요소는, 결합될 요소의 말단과 벡터의 말단이 결합에 맞도록 적절한 제한 엔도뉴클레아제(들)를 사용해 벡터를 절단함으로써, 개별적으로 벡터로 결합될 수 있다. 일부 경우에, 만족스러운 결합을 얻기 위해, 서로 결합될 말단들을 둔화시키는 것이 필요할 수 있다. 둔화(blunting)는 먼저, 모든 4 가지 뉴클레오티드의 존재 하에 클레노브(Klenow) DNA 중합 효소 또는 T4 DNA 중합 효소를 사용해 "점착성 말단(sticky ends)"을 채우는 것에 의해 달성된다. 이러한 과정은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 앞서 인용한 문헌(Sambrook 등)에 기술되어 있다. 대안적으로, 먼저 요소 중 둘 이상을 함께 결합시키고 (이들이 서로 인접하게 위치하게 될 경우), 그런 다음 벡터로 결합시킬 수 있다.
[0083]벡터를 제작하는 추가적인 방법은 하나의 반응 혼합물에서 다양한 요소의 결합을 동시에 수행하는 것이다. 여기서, 요소의 부적절한 결합이나 삽입으로 인해 난센스 벡터 또는 무기능성 벡터가 많이 생겨나게 되지만, 제한 엔도뉴클레아제 분해에 의해 기능성 벡터가 동정되고 선별될 수 있다.
[0084]본 구현예를 실시하기 위한 바람직한 벡터는 박테리아성, 곤충, 및 포유류 숙주 세포와 양립할 수 있는 것들이다. 이러한 벡터는, 무엇보다도, pCRII, pCR3, 및 pcDNA3.1 (Invitrogen 사, 샌디에고, 캘리포니아), pBSII (Stratagene 사, 라졸라, 캘리포니아), pET15b (Novagen, 매디슨, 위스콘신), PGEX (Pharmacia Biotech, 피스카타웨이, 뉴저지), pEGFP-N2 (Clontech, 팔로알토, 캘리포니아), pETL (BlueBachl; Invitrogen), 및 pFastBacDual (Gibco/BRL, 그랜드 아일랜드, 뉴욕)을 포함한다.
[0085]벡터가 제작되고 전장 (또는 절단된) 단백질이나 펩티드를 암호화하는 핵산 분자가 벡터의 적절한 부위에 삽입된 후, 완성된 벡터는 증폭 및/또는 폴리펩티드 발현을 위해 적절한 숙주 세포 내에 삽입될 수 있다. 숙주 세포는 원핵 숙주 세포(예: 대장균) 또는 진핵 숙주 세포(예: 효모 세포, 곤충 세포, 또는 척추 동물 세포)이다. 숙주 세포는, 적절한 조건에서 배양될 때 단백질 또는 펩티드를 합성할 수 있으며, 이는 후속적으로 (숙주 세포가 배지에 분비하는 경우) 배지로부터 수집되거나, (분비되지 않는 경우) 이를 생성하는 숙주 세포로부터 직접 수집될 수 있다.
[0086]수집한 후, 분자체 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등과 같은 방법을 사용해 NTP 펩티드를 정제할 수 있다. 단백질이나 펩티드의 생산을 위한 숙주 세포의 선별은 펩티드를 글리코실화하거나 인산화할 것인지 여부(진핵 숙주 세포가 바람직한 경우), 및 생물학적 활성을 갖는 펩티드에 의해 생물학적 활성 단백질이 제조되도록 숙주 세포가 펩티드를 천연 3차 구조로 접을 수 있고(예: 이황화 브리지의 적절한 배향 등), 아래에 논의된 바와 같이 펩티드가 적절한 화학 조건을 사용해 합성 후에 접힐 수 있는 방식에 부분적으로 의존할 것이다. 적절한 세포 또는 세포주는 포유류 세포, 예컨대 차이니즈 햄스터 난소 세포(CHO), 인간 배아 신장(HEK) 293, 293T 세포, 또는 3T3 세포 등일 수 있다. 변형, 배양, 증폭, 스크리닝 및 제품 생산, 및 정제를 위한 방법 및 적절한 포유류 숙주 세포의 선별은 당업계에 알려져 있다. 다른 적절한 포유류 세포주는 원숭이 COS-1 및 COS-7 세포주, 및 CV-1 세포주이다. 추가 예시적인 포유류 숙주 세포는 형질변환된 세포주를 포함하는 영장류 세포주 및 설치류 세포주를 포함한다. 원발성 외식편(primary explants)뿐만 아니라 원발성 조직(primary tissue)의 시험관 배양으로 유도된 세포 균주 및 정상 이배체 세포도 적합하다. 후보 세포는 선별 유전자가 표현형적으로 결핍되어 있거나, 우세하게 작용하는 선별 유전자를 함유할 수 있다. 다른 적절한 포유류 세포주는 마우스 신경아 세포종(neuroblastoma) N2A 세포, HeLa, 마우스 L-929 세포, Swiss, Balb-c 또는 NIH 마우스 유래의 3T3 세포주, BHK 또는 HaK 햄스터 세포주를 포함하되 이들로 한정되지 않는다.
[0087]본 구현예에 적합한 숙주 세포로서 유사하게 유용한 것은 박테리아 세포이다. 예를 들어, 대장균의 다양한 균주(예: HB101, DH5.알파., DH10, 및 MC1061)는 생명공학 분야에 잘 알려진 숙주 세포이다. 고초균(B. subtilis), 슈도모나스 종(Pseudomonas spp.), 다른 바실러스 종(Bacillus spp.), 스트렙토미세스 종(Streptomyces spp.) 등의 다양한 균주가 본 방법에 사용될 수도 있다. 당업자에게 알려진 많은 효모 세포의 균주 또한 본 구현예의 폴리펩티드의 발현을 위한 숙주 세포로서 이용 가능하다.
[0088]추가적으로, 필요한 경우, 곤충 세포 시스템이 본 구현예의 방법에 이용될 수 있다. 이러한 시스템은, 예를 들어, Kitts 등의 (Biotechniques, 14:810-817 ), Lucklow (Curr. Opin. Biotechnol., 4:564-572) 및 Lucklow 등의 (J. Virol., 67:4566-4579)에 기술되어 있다. 바람직한 곤충 세포는 Sf-9 및 Hi5 (Invitrogen, 칼즈배드, 캘리포니아)이다.
[0089]선별된 숙주 세포 내 벡터의 삽입(형질변환 또는 형질감염으로도 지칭됨)은 염화칼슘, 전기 천공법, 미세 주입법, 리포펙션, 또는 DEAE-덱스트란법과 같은 방법을 사용해 달성될 수 있다. 선택된 방법은 부분적으로는 사용될 숙주 세포 유형의 함수일 것이다. 이들 방법 및 다른 적합한 방법은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 앞서 인용한 문헌(Sambrook 등)에 제시되어 있다.
[0090](형질변환되었거나 형질감염된) 벡터를 함유하는 숙주 세포는 당업자에게 잘 알려진 표준 배지를 사용해 배양할 수 있다. 배지는 대개 세포의 성장과 생존에 필수적인 모든 영양분을 함유할 것이다. 대장균(E. coli) 세포의 배양에 적합한 배지는, 예를 들어, Luria Broth (LB) 및/또는 Terrific Broth (TB)이다. 진핵 세포의 배양에 적합한 배지는 RPMI 1640, MEM, DMEM이며, 배양되는 특정 세포주에서 요구되는 바에 따라 이들 모두에 혈청 및/또는 성장 인자를 보충할 수 있다. 곤충 배양에 적합한 배지는 이스톨레이트(yeastolate), 락트알부민(lacualbumin), 가수분해물 및/또는 우태혈청(fetal calf serum)이 필요에 따라 보충된 그레이스의 배지(Grace's medium)이다. 일반적으로, 형질변환된 세포의 선별 성장에만 유용한 항체 또는 다른 화합물이 보충제로서 배지에 첨가된다. 사용될 화합물은 숙주 세포가 형질변환된 플라스미드 상에 존재하는 선별 가능한 마커 요소에 의해 좌우될 것이다. 예를 들어, 선별 가능한 마커 요소가 카나마이신 내성인 경우, 배양 배지에 첨가된 화합물은 카나마이신일 것이다.
[0091]숙주 세포에서 생산된 NTP 펩티드의 양은 당업계에 알려진 표준 방법을 사용해 평가될 수 있다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯 분석(Western blot analysis), SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동법(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis), 비변성 겔 전기영동법(non-denaturing gel electrophoresis), HPLC 분리, 질량 분광학(mass spectroscopy), 면역침강법(immunoprecipitation), 및/또는 DNA 결합 겔 이동 분석(DNA binding gel shift assays)과 같은 활성 분석을 포함하되 이들로 한정되지 않는다.
[0092]단백질 또는 펩티드가 숙주 세포에서 분비되도록 설계된 경우, 단백질 또는 펩티드의 대부분은 세포 배양 배지에서 발견될 수 있다. 이러한 방식으로 제조된 단백질은 일반적으로 아미노 말단 메티오닌을 포함하지 않게 되는데, 이는 아미노 말단 메티오닌이 세포로부터 분비되는 도중에 제거되기 때문이다. 그러나, 단백질 또는 펩티드가 숙주 세포에서 분비되지 않는 경우, 이는 세포질 및/또는 세포핵(진핵 숙주 세포의 경우) 내에 존재하거나 시토졸(그램 음성 박테리아 숙주 세포의 경우) 내에 존재할 것이며, 아미노산 말단 메티오닌을 가질 수 있다.
[0093]숙주 세포 세포질 및/또는 세포핵 내에 존재하는 NTP 펩티드의 경우, 일반적으로 숙주 세포를 기계적으로 또는 세제를 사용해 먼저 파괴하여 세포내 함유물을 완충액 내에 방출시킨다. 그런 다음, 이러한 용액으로부터 펩티드를 단리할 수 있다.
[0094]NTP 펩티드를 용액으로부터 정제하는 것은 다양한 기술을 사용해 이뤄질 수 있다. NTP 펩티드가, 헥사히스티딘(서열번호 118)(예: 펩티드/hexaHis (서열번호 118))과 같은 태그 또는 FLAG (Sigma-Aldritch, 세인트루이스, 미조리) 또는 칼모둘린-결합 펩티드(Stratagene, 라졸라, 캘리포니아)와 같은 다른 작은 펩티드를 카르복실 말단 또는 아미노 말단에 함유하도록 합성된 경우, 이는 컬럼 매트릭스가 태그 또는 단백질에 대해 직접적으로 높은 친화성을 갖는 친화성 컬럼(즉, 펩티드를 특이적으로 인식하는 단클론 항체)에 용액을 통과시키는 것에 의한 한 단계 과정(one-step process)에서 본질적으로, 정제될 수 있다. 예를 들어, 폴리히스티딘은 높은 친화성 및 특이성으로 니켈, 아연 및 코발트에 결합하므로; 니켈계 친화성 레진(Qiagen's QlAexpress system 또는 Invitrogen's Xpress System에서 사용됨) 또는 코발트계 친화성 레진(BD Biosciences-CLONTECH's Talon system에서 사용됨)을 사용하는 고정된 금속 이온 친화성 크로마토그래피(immobilized metal ion affinity chromatography)가 펩티드/폴리His의 정제에 사용될 수 있다. (예: Ausubel 등, eds., Current Protocols in Molecular Biology, Section 10.11.8, John Wiley & Sons, New York 참조).
[0095]NTP 펩티드가 부착된 태그 없이 생산되고, 이용 가능한 항체가 없는 경우, 잘 알려진 다른 정제 절차를 사용할 수 있다. 이러한 절차는 이온 교환 크로마토그래피(ion exchange chromatography), 수산화인회석 크로마토그래피(hydroxyapatite chromatography), 소수성 상호작용 크로마토그래피(hydrophobic interaction chromatography), 분자체 크로마토그래피(molecular sieve chromatography), HPLC, 겔 용리와 조합된 네이티브 겔 전기영동(native gel electrophoresis), 및 예비 등전 집속(preparative isoelectric focusing; Isoprime machine/technique, Hoefer Scientific)을 포함하되, 이들로 한정되지 않는다. 일부 경우에, 이러한 기술 중 둘 이상은 순도를 증가시키기 위해 조합될 수 있다.
[0096]NTP 펩티드가 일차적으로 세포내에서 발견될 것으로 예상되는 경우, 당업자에게 알려진 임의의 표준 기술을 사용해 숙주 세포로부터 세포내 물질(그램 음성 박테리아의 경우 봉입체를 포함함)을 추출할 수 있다. 예를 들어, 프렌치 프레스, 균질화, 및/또는 초음파 처리 후 원심 분리에 의해 숙주 세포를 용해시켜 주변 세포질/세포질의 함유물을 방출시킬 수 있다. 펩티드가 세포질 내에 봉입체를 형성한 경우, 봉입체는 종종 내부 및/또는 외부 세포막에 결합될 수 있고, 따라서 원심 분리 후에 펠릿 물질 내에서 주로 발견될 것이다. 그러면, 펠릿 물질을 극단적인 pH에서 처리하거나, 알칼리성 pH의 디티오트레이톨(dithiothreitol) 또는 산성 pH의 트리스 카르복시에틸 포스핀과 같은 환원제의 존재 하에 세제, 구아니딘(guanidine), 구아니딘 유도체, 요소(urea), 또는 요소 유도체와 같은 카오트로픽 제제(chaotropic agent)로 처리하여 봉입체를 방출시키고, 분리시키고, 용해 가능하게 만들 수 있다. 그런 다음, 이제 용해 가능한 형태가 된 펩티드를 겔 전기영동, 또는 면역침강 등을 사용해 분석할 수 있다. 펩티드를 단리하고자 하는 경우, 단리는 아래 및 Marston 등의 Meth. Enz., 182:264-275에 제시된 것들과 같은 표준 방법을 사용해 이뤄질 수 있다.
[0097]일부 경우에, NTP 펩티드는 단리 시에 생물학적으로 활성이 아닐 수 있다. 폴리펩티드를 리폴딩(refolding)하거나 이의 3 차 구조로 전환시키고 이황화 결합을 생성시키는 다양한 방법이 생물학적 활성을 복구시키는 데 사용될 수 있다. 이러한 방법은 가용화된 폴리펩티드를 특정 농도의 카오트로프(chaotrope)의 존재 하에 일반적으로 7보다 높은 pH에 노출시키는 것을 포함한다. 카오트로프의 선택은 봉입체의 가용화(solubilization)에 사용된 선택과 매우 유사하지만 일반적으로 더 낮은 농도에서 이뤄지며, 가용화에 사용된 것과 동일한 카오트로프일 필요는 없다. 대부분의 경우에, 리폴딩/산화 용액은, 단백질의 시스테인 브리지(들)의 형성 중에 이황화 셔플링을 일으키는 특정 산화 환원 전이가 발생하도록 환원 제제를 함유하거나 환원 제제 + 이의 산화된 형태를 특정 비율로 함유할 것이다. 일반적으로 사용되는 일부 산화 환원쌍에는 시스테인/시스타민, 글루타티온(GSH)/디티오비스 GSH, 염화 제이구리(cupric chloride), 디티오트레이톨(DTT)/디티안 DTT, 2-메르캅토에탄올(bME)/디티오-b(ME)가 포함된다. 많은 경우에, 리폴딩의 효능을 증가시키기 위해서는 공용매(cosolvent)가 반드시 필요하며, 이러한 목적을 위해 사용되는 보다 일반적인 시약에는 글리세롤, 다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜, 및 아르기닌이 포함된다.
[0098] 숙주 세포 내에서 NTP 펩티드 봉입체가 유의한 정도로 형성되지 않는 경우, NTP 펩티드는 세포 균질액의 원심 분리 후 상층액에서 주로 발견될 것이고, NTP 펩티드는 아래에 제시된 것들과 같은 방법을 사용해 상층액으로부터 단리될 수 있다.
[0099]NTP 펩티드를 부분적으로 또는 완전히 단리하는 것이 바람직한 이러한 상황에서, 정제는 당업자에게 잘 알려진 표준 방법을 사용해 이뤄질 수 있다. 이러한 방법은, 전기영동 후 전기 용출에 의한 분리, 다양한 유형의 크로마토그래피(면역친화성, 분자체, 및/또는 이온 교환), 및/또는 고압 액체 크로마토그래피를 포함하되, 이들로 한정되지 않는다. 일부 경우에는, 완전한 정제를 위해 이들 방법 중 둘 이상을 사용하는 것이 바람직할 수 있다.
[0100]재조합 DNA 기술을 사용해 NTP 펩티드를 제조하고 정제하는 것 외에도, NTP 펩티드 및 이의 단편, 변이체, 동족체, 융합 단백질, 펩티드 모방체, 및 유도체는 당업계에 알려진 기술, 예컨대 Merrifield 등의 J. Am. Chem. Soc., 85:2149 , Houghten 등의 Proc Natl Acad. Sci. USA, 82:5132, 및 Stewart와 Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, Ill에 의해 제시된 것들을 사용하는 화학 합성 방법(예: 고상 펩티드 합성)에 의해 제조될 수 있다. 이러한 펩티드는 아미노 말단 상의 메티오닌의 유무와 상관없이 합성될 수 있다. 화학 합성된 NTP 펩티드는 이러한 참조 문헌에 제시된 방법을 사용해 산화되어 이황화 브리지를 형성할 수 있다. NTP 펩티드는 재조합으로 생산되거나 천연 공급원으로부터 정제된 펩티드에 비견할만한 생물학적 활성을 가질 것으로 예상되므로, 재조합 펩티드 또는 천연 펩티드와 교환 가능하게 사용될 수 있다.
[0101]펩티드가 중합체에 결합된, 화학적으로 개질된 NTP 펩티드 조성물은 본 구현예의 범주 내에 포함된다. 선별된 중합체는, 중합체가 부착된 단백질이 생리학적 환경과 같은 수성 환경에서 침전되지 않도록 일반적으로 수용성이다. 선별된 중합체는 일반적으로 중합화의 정도가 본 방법에서 제공된 바와 같이 제어될 수 있도록, 단일 반응기(예: 아실화를 위한 활성 에스테르 또는 알킬화를 위한 알데히드)를 갖도록 개질된다. 중합체는 임의의 분자량을 가질 수 있고, 분지되거나 분지되지 않을 수 있다. 펩티드 중합체의 범주에는 중합체 혼합물이 포함된다.
[0102]일부 경우에, 자연 발생 NTP 펩티드의 핵산 및/또는 아미노산 변이체를 제조하는 것이 바람직할 수 있다. 핵산 변이체는, 프라이머(들)가 원하는 점 돌연변이를 갖는 부위 지향성 돌연변이 유발, PCR 증폭, 또는 기타 적절한 방법을 사용해 생성될 수 있다(참조: 돌연변이 유발 기술에 대해 앞서 인용한 Sambrook 등의 문헌, 및 Ausubel 등의 문헌). 앞서 인용한 Engels 등의 문헌에 기술된 방법을 사용하는 화학 합성은 이러한 변이체를 생산하는 데에도 사용될 수 있다. 당업자에게 알려진 다른 방법들도 사용될 수 있다.
[0103]바람직한 핵산 변이체는 NTP 펩티드를 생산하는 데 사용될 숙주 세포에서 코돈 우선성(preference)을 설명하는 뉴클레오티드 치환을 함유하는 것들이다. 이러한 코돈 최적화는, 유니버시티 오브 위스콘신 패키지(University of Wisconsin Package) 버전 9.0 (Genetics Computer Group, Madison, Wis.)에 의해 제공된 바와 같은, 고 발현성 박테리아 유전자의 코돈 우선성에 대한 Ecohigh. Cod와 같은 코돈 빈도표(codon frequency tables)가 포함된 컴퓨터 알고리더(algorither)를 통해 결정될 수 있다. 　 다른 유용한 코돈 빈도표로는 Celegans_high.cod, Celegans_low.cod, Drosophila_high.cod, Human_high.cod, Maize_high.cod, 및 Yeast_high.cod가 포함된다. 다른 바람직한 변이체는 야생형과 비교해 보존적 아미노산 변화를 암호화하는 전술한 바와 같은 것들(예를 들어, 자연 발생 아미노산 측쇄의 전하 또는 극성이 상이한 아미노산과의 치환에 의해 실질적으로 변경되지 않음), 및/또는 신규한 글리코실화 부위 및/또는 인산화 부위(들)를 생성하도록 설계된 것들, 또는 기존의 글리코실화 부위 및/또는 인산화 부위(들)를 결실하도록 설계된 것들이다.
[0104]NTP 펩티드 및 이의 단편, 동족체, 변이체, 융합 단백질, 펩티드 모방체, 유도체 및 염은 당업자에게 알려진 통상의 펩티드 합성 기술을 사용해 만들 수도 있다. 이들 기술에는 화학 커플링 방법(참조: Wunsch, E: "Methoden der organischen Chemie", Volume 15, Band 1+2, Synthese von Peptiden, thime Verlag, Stuttgart (1974), 및 Barrany, G.; Marrifield, R. B.: "The Peptides," eds. E. Gross, J. Meienhofer, Volume 2, Chapter 1, pp. 1-284, Academic Press (1980)), 효소 커플링 방법(참조: Widmer, F. Johansen, J. T., Carlsberg Res. Commun., Vol. 44, pp. 37-46 (1979); Kullmann, W.: "Enzymatic Peptide Synthesis", CRC Press Inc. Boca Raton, Fla. (1987); 및 Widmer, F., Johansen, J. T. in "Synthetic Peptides in Biology and Medicines," eds. Alitalo, K., Partanen, P., Vatieri, A., pp.79-86, Elsevier, Amsterdam (1985)), 또는 공정 설계 및 경제성에 있어서 유리한 경우, 화학 및 효소 커플링 방법의 조합이 포함된다. 본원에서 제공되는 가이드라인을 사용함으로서, 당업자는 NTP 펩티드의 펩티드 서열을 변화시켜 원 NTP 펩티드 또는 천연 NTP 펩티드와 동일하거나 유사한 생물학적 활성(생활성)을 갖는 동족체를 만들 수 있다.
[0105]펩티드 자체보다는 주어진 NTP 펩티드의 모방체를 사용하는 것에 대한 이점이 존재한다. 일반적으로, 펩티드 모방체는 생체이용률이 더 양호하고, 작용 기간이 더 길며, 천연 단백질 및 펩티드보다 생산 비용이 더 저렴할 수 있다.
[0106]NTP 펩티드의 펩티드 모방체는 조합 화학 기술 및 당업계에 알려진 다른 기술을 사용해 개발될 수 있다(참조: Proceedings of the 20th European Peptide Symposium, ed. G. Jung, E. Bayer, pp. 289-336, 및 동 문헌에 인용된 참조 문헌). 펩티드를 구조적으로 변형시켜 펩티드 모방체를 생성하는, 당업계에 알려진 방법의 예는, 활성에 악영향을 미치지 않으면서, 특히 N-말단에서, 단백질 가수분해에 대한 안정성을 강화시킬 수 있는 D-아미노산 잔기 구조를 유도하는, 백본 비대칭 중심(backbone chiral centers)의 역전을 포함한다. 일 예는 문헌 "Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding", Smith C. S. 등의 Drug Development Res. 15, pp. 371-379 (1988)에 제공되어 있다.
[0107]두 번째 방법은, 안정성을 위해 고리 구조(예: N에서 C로의 사슬간 이미드 및 락탐)를 변경하는 것이다(참조: Smith and Rivier (Eds.)의 Ede 등의 "Peptides: Chemistry and Biology", Escom, Leiden (1991), pp. 268-270). 이에 대한 예는, 그 개시 전체가 본원에 참조로서 통합된 Goldstein, G. 등의 미국 특허 제4,457,489호 (1985)에 기술된 것들과 같은, 구조적으로 제한된 티모펜틴-유사 화합물에서 제공된다.
[0108]세 번째 방법은 단백질 분해에 내성을 부여하는 슈도펩티드 결합(pseudopeptide bonds)으로 NTP 펩티드 내의 펩티드 결합을 치환하는 것이다. 일반적으로 펩티드 구조 및 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 다수의 슈도펩티드 결합이 기술되었다. 이러한 접근법의 일 예는 레트로-인버소(retro-inverso) 슈도펩티드 결합이다("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin", Rivier의 Sisto A. 등, J. E. 및 Marshall, G. R. (eds) "Peptides, Chemistry, Structure and Biology", Escom, Leiden (1990), pp. 722-773) 및 Dalpozzo, 등의 (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:561-566; 본원에 참조로서 통합됨). 본 변형에 따르면, 펩티드의 아미노산 서열은, 레트로-인버소 슈도펩티드 결합에 의해 하나 이상의 펩티드 결합이 대체된 것을 제외하고는, 전술한 펩티드의 서열과 동일할 수 있다. 바람직하게는, 가장 N-말단의 펩티드 결합이 치환되는데, 이는 이러한 치환이 N-말단에 작용하는 엑소펩티다아제에 의해 단백질 분해에 대한 내성을 부여할 것이기 때문이다.
[0109]하나 이상의 레트로-인버소 슈도펩티드 결합이 감소된 펩티드의 합성은 당업계에 알려져 있다(참조: 위에 인용된 Sisto (1990) 및 Dalpozzo, 등. (1993)). 따라서, 펩티드 결합은, 펩티드 모방체가 원 펩티드에 대해 유사한 구조 및 이에 따른 생물학적 활성을 채택할 수 있게 하는 비-펩티드 결합에 의해 대체될 수 있다. 아미노산의 화학기를 유사한 구조의 다른 화학기로 대체함으로써 추가 변형을 만들 수도 있다. 생물학적 활성의 손실 없거나 거의 없이 효소 절단에 대한 안정성을 강화하는 것으로 알려진 또 다른 적합한 슈도펩티드 결합은 감소된 등배체(isostere) 슈도펩티드 결합이다(Couder, 등의 (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181-184; 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 따라서, 이들 펩티드의 아미노산 서열은, 등배체 슈도펩티드 결합에 의해 하나 이상의 펩티드 결합이 대체된 것을 제외하고는, 펩티드의 서열과 동일할 수 있다. 바람직하게는, 가장 N-말단의 펩티드 결합이 치환되는데, 이는 이러한 치환이 N-말단에 작용하는 엑소펩티다아제에 의해 단백질 분해에 대한 내성을 부여할 것이기 때문이다. 하나 이상의 감소된 등배체 슈도펩티드 결합을 갖는 펩티드의 합성은 당업계에 알려져 있다(Couder, 등 (1993), 위에 인용됨). 다른 예에는 케토메틸렌 또는 메틸설파이드 결합을 도입하여 펩티드 결합을 대체하는 것이 포함된다.
[0110]NTP 펩티드의 펩토이드 유도체는, 생물학적 활성에 대한 중요한 구조 결정기(determinants)를 유지하면서 펩티드 결합을 제거하여 단백질 분해에 대한 내성을 부여하는 펩티드 모방체의 또 다른 분류를 나타낸다(참조: Simon, 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:9367-9371; 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 펩토이드는 N-치환된 글리신의 올리고머이다. 다수의 N-알킬기가 기술되었는데, 이들 각각은 천연 아미노산의 측쇄에 상응한다(Simon, 등 (1992), 위에 인용되었으며, 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 펩티드의 아미노산 중 일부 또는 전부는 대체된 아미노산에 상응하는 N-치환된 글리신으로 대체된다.
[0111]펩티드 모방체의 개발은, NMR 분광분석, 결정분석 및/또는 컴퓨터에 의한 분자 모델링에 의해 원 펩티드의 삼차 구조를 결정하는 것에 의해 지원을 받을 수 있다. 이러한 기술은 펩티드보다 높은 효능 및/또는 높은 생체이용률 및/또는 큰 안정성을 갖는 신규한 조성물의 개발을 지원한다(Dean (1994), BioEssays, 16: 683-687; Cohen 및 Shatzmiller (1993), J. Mol. Graph., 11: 166-173; Wiley 및 Rich (1993), Med. Res. Rev., 13: 327-384; Moore (1994), Trends Pharmacol. Sci., 15: 124-129; Hruby (1993), Biopolymers, 33: 1073-1082; Bugg 등 (1993), Sci. Am., 269: 92-98, 그 전체는 본원에 참조로서 통합됨).
[0112]잠재적인 펩티드 모방체 화합물이 동정되면, 아래의 실시예에 나열된 방법을 사용해 이를 합성하고 분석하여 이의 활성을 평가할 수 있다. 펩티드의 생물학적 활성 및 유사한 3차원 구조를 가지며, 상기 방법에 의해 수득된 펩티드 모방체 화합물은 본 구현예에 포함된다. 전술한 변형 중 하나 이상을 갖는 임의의 펩티드로부터 펩티드 모방체를 생성할 수 있다는 것은 당업자에게 쉽게 자명해질 것이다. 본 구현예의 펩티드 모방체가, 치료 화합물로서의 유용성에 추가하여, 훨씬 더 효능있는 비-펩티드 화합물의 개발에 추가로 사용될 수 있다는 것이 더 자명해질 것이다.
[0113]현재, 본원에 기술된 펩티드를 합성할 수 있는 다수의 조직이 존재한다. 예를 들어, NTP 펩티드의 서열이 주어진 경우, 상기 기관은 펩티드를 합성하고, 합성된 펩티드를 펩티드에 대한 동일성 문서 및 증빙이 첨부된 상태로 전달할 수 있다.
[0114] 본 구현예는, IPSS 점수의 악화 또는 진행을 야기할 수 있는 (예를 들어, 점수가 비교적 동일하게 유지되거나 증가하는) BPH를 가진 포유류를 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 치료 방법은, IPSS의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을, IPSS의 악화 또는 진행을 나타내는 대조군 투여 포유류의 백분율의 10%보다 더 많이 감소시킨다. 이러한 방법은 NTP 펩티드의 치료 유효량을 단독으로 또는 추가 활성제와 조합하여 이를 필요로 하는 포유류에게 투여하는 단계를 포함한다. 투여가 필요한 포유류는 양성 전립선 비대증을 앓고 있는 포유류로서, 전립선 암의 발병 위험이 증가하거나 증가하지 않을 수 있는 포유류이거나, 전립선 암의 발병 위험이 있는 포유류일 수 있다. 투여가 필요한 포유류는 BPH와 관련된 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 것으로부터 혜택을 받을 수 있는 임의의 포유류일 수도 있다.
[0115]추가 활성제는 (사용되는 경우) (i) 항암 활성제(예: 알킬화 제제, 국소 이성화 효소 I 억제제, 국소 이성화 효소 II 억제제, RNA/DNA 항대사성 물질, 및 유사분열 저해제); (ii) 항여드름 및 항사마귀 활성제와 같은, 양성 성장 치료용 활성제; (iii) 항안드로겐 화합물, (시프로테온 아세테이트 (1α,2β-메틸렌-6-클로로-17α-아세톡시-6-디하이드로프로게스테론) 타목시펜(Tamoxifen), 방향화 효소 억제제); (iv) 알파1-아드레날린 수용체 차단제 (탐스로신(tamsulosin), 테라조신(terazosin), 독사조신(doxazosin), 프라조신(prazosin), 부나조신(bunazosin), 인도라민(indoramin), 알풀조신(alfulzosin), 실로도신(silodosin)); (v) 5α-환원 효소 억제제 (피나스테라이드(finasteride), 두타스테라이드(dutasteride)); (vi) 포스포다이에스터레이스 5 (phosphodiesterase type 5; PDE5) 억제제 (타달라필(tadalafil)) 및 이들의 조합으로부터 선택된 하나 이상의 활성제일 수 있다. 바람직하게는, 추가 활성제는 탐스로신, 피나스테라이드, 테라조신, 독사조신, 프라조신, 타달라필, 알풀조신, 실로도신, 두타스테라이드, 두타스테라이드와 탐스로신의 조합, 및 이들의 혼합물 및 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
[0116]병태는, 선택적으로는 BPH에 추가하여, 폐, 유방, 위, 췌장, 전립선, 방광, 뼈, 난소, 피수, 신장, 부비강, 결장, 장, 위, 직장, 식도, 혈액, 뇌 및 뇌막, 척수 및 척수막, 근육, 연결 조직, 부신, 부갑상선, 갑상선, 자궁, 고환, 뇌하수체, 생식 기관, 간, 쓸개, 눈, 귀, 코, 인후, 편도선, 입, 림프절 및 림프 계통, 및 다른 기관의 종양일 수 있다. 다른 병태에는 뇌졸중이나 울혈성 심부전, 전립선염이나 요로 감염증과 같은 질병, 요정체를 유발하는 것으로 알려진 약 또는 약물, 예를 들어, 염산 슈도에페드린, 감기약, 마취제나 진정제와 같은 진통제, 또는 베나드릴(benadryl)의 섭취가 포함된다.
[0117] 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "악성 종양(malignant tumor)"은 구분이 어려운 형태, 중간 정도로 구분되는 형태, 및 잘 구분되는 형태로 발생하는 인간 암종, 육종, 및 흑색종의 모든 형태를 포함하도록 의도된다.
[0118]NTP 펩티드의 치료 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체와 혼합된 NTP 펩티드의 치료 유효량을 포함할 수 있다. 일부 대안적인 구현예에서, 추가 활성제는 NTP 펩티드와 동일한 조성물로 투여될 수 있으며, 다른 구현예에서는, NTP 펩티드를 포함하는 조성물이 주사로서 투여되는 반면 추가 활성제는 경구용 약(겔, 캡슐, 정제, 액 등)으로 제형된다. 담체 재료는 주사용 물로서, 바람직하게는 포유류에게 투여하기 위한 용액에 다른 공통 재료가 보충된 것일 수 있다. 일반적으로, 치료용 NTP 펩티드는 하나 이상의 생물학적으로 허용 가능한 담체, 첨가제, 또는 희석제와 함께 정제된 펩티드를 포함하는 조성물의 형태로 투여될 것이다. 중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 예시적인 적절한 담체이다. 바람직하게는, 생성물은 적절한 첨가제(예: 수크로오스)를 사용하여 동결건조물로서 제형된다. 다른 표준 담체, 희석제, 및 첨가제가 필요에 따라 포함될 수 있다. 구현예의 조성물은 또한, 약 pH 7.0~8.5의 트리스 완충액(Tris buffer) 또는 약 pH 4.0~5.5의 아세테이트 완충액을 포함하여 적절한 범위의 pH 값을 갖는 당업자에게 알려진 완충액을 포함할 수도 있으며, 소르비톨(sorbitol) 또는 이에 대한 적절한 치환물을 추가로 포함할 수 있다.
[0119]미처리(
Figure pct00004
) 포유류 내의 원치 않는 세포 요소를 포적화하기 위해 항체, 항체 단편, 항체-유사 분자, 또는 특이적 종양 마커(예: 세포 수용체, 신호 펩티드, 또는 과-발현 효소)에 대해 높은 친화성을 갖는 분자에 접합되거나, 연결되거나, 결합된 NTP 펩티드를 사용하는 것 또한 구현예의 범주에 포함된다. 항체, 항체 단편, 항체-유사 분자, 또는 특이적 종양 마커에 대해 높은 친화성을 갖는 분자는 특이적 세포 또는 조직 표적에 접합된 펩티드를 표적화하는 데 사용된다. 예를 들어, 구별되는 표면 항원 또는 발현된 항원을 갖는 종양은 항체, 항체 단편, 또는 항체-유사 결합 분자에 의해 표적화될 수 있고, 종양 세포는 펩티드에 의해 사멸될 수 있다. 항체 표적화를 사용하는 이러한 접근법은 투여량 감소, 표적 세포에 결합하여 이를 흡수할 가능성의 증가, 및 전이성 종양 및 현미경 크기의 종양의 표적화 및 치료에 대한 유용성의 증가 등의 예상 이점을 갖는다.
[0120] 구현예는 또한, 종양-특이적 또는 부위-특이적 효소 또는 프로테아제에 의하거나 종양 또는 다른 원치 않는 세포를 표적화하는 항체 접합체에 의해 종양 또는 다른 원치 않는 세포의 부위(들) 또는 그 근방이 절단될 때, 종양 또는 기타 원치 않는 세포의 부위(들) 또는 그 근방에서 펩티드를 방출하는 조성물을 형성하기 위해 단백질 또는 다른 분자에 접합되거나 연결되거나 결합된 NTP 펩티드를 사용하는 것을 포함한다.
[0121] 구현예는 또한, 치료 대상 조직이 광(레이저 치료 또는 기타 광-역학 치료 또는 광-활성화 치료에서와 같이), 다른 형태의 전자기 방사(적외선 방사, 자외선 방사, X-선 또는 감마선 방사, 국소 가열, 알파 또는 베타 방사, 초음파 방출), 또는 국소 에너지의 다른 공급원에 노출될 때, 펩티드 또는 펩티드의 일부 생물학적 활성 단편을 방출하는 조성물을 형성하기 위해 단백질 또는 다른 분자에 접합되거나 연결되거나 결합된 NTP 펩티드를 사용하는 것을 포함한다.
[0122]본 구현예는 또한, 펩티드 및/또는 이의 상응하는 DNA 분자가 스스로 또는 다른 종의 분자(예: 종양-특이적 마커)와 함께 분자, 중합체 또는 거대 분자에 접합되거나, 부착되거나, 둘러싸인 덴드리머(dendrimers), 풀러린(fullerenes), 및 기타 합성 분자, 중합체 및 거대 분자를 사용하는 NTP 펩티드의 치료 조성물을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 제5,714,166호인 "Bioactive and/or Targeted Dendimer Conjugates"는, 무엇보다도, 표적 지시제(들)를 갖는 적어도 하나의 덴드리머 및 이에 접합된 적어도 하나의 생활성제(bioactive agent)로 이루어진 수지상 중합체 접합물(dendritic polymer conjugates)의 제조 및 사용 방법을 제공한다. 미국 특허 제5,714,166호는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
[0123] 구현예는 또한, NTP 펩티드 및/또는 유전자의 치료 조성물 및 지질 유화제, 교질 입자 중합체(micelle polymers), 중합체 미소 구체(polymer microspheres), 전기 활성 중합체, 히드로겔(hydrogels) 및 리포솜과 같은 약물 전달 비히클을 추가 활성제와 조합으로 사용하여 포유류를 치료하는 방법을 포함한다.
[0124]포유류에서 원치 않는 세포에 전달된 NTP 펩티드 또는 관련 유전자 또는 유전자 등가물을 사용하는 것 또한 구현예에 포함된다. 종양 내에서 NTP 펩티드의 과발현은 종양 내 세포의 사멸을 유도하는 데 사용되어 종양 세포 개체군을 감소시킬 수 있다. 원치 않는 세포 요소를 치료하기 위한 NTP 펩티드의 유전자 또는 유전자 등가물을 전달하는 경우, 적은 투여량이 요구되고, 이들이 표적화된 세포 요소의 세포 자손에게 전달되기 때문에, 치료 빈도 및 전체적인 치료가 감소하는 이점을 가질 것으로 예상된다. 본 구현예는 또한, NTP 펩티드를 함유하는 융합 단백질의 코딩을 담당하는 유전자를 원치 않는 세포 또는 이웃 세포에 전달하는 것을 포함하는데, 유전자의 발현 및 융합 단백질의 생성 및/또는 분비 후에, 융합 단백질은 천연 효소 또는 프로테아제에 의해 절단되거나 프로드러그(prodrug)에 의해 절단되어 원치 않는 세포에서, 원치 않는 세포 내에서, 또는 그 근방에서 NTP 펩티드를 방출한다.
[0125]미처리 포유류의 치료를 위해, 클로닝된 재조합 펩티드-항체 접합물; 클로닝된 재조합 펩티드-항체 단편 접합물; 및 클로닝된 재조합 펩티드-항체-유사 단백질 접합물을 투여하는 것 또한 본 구현예의 범주에 포함된다. 표적화 접합물(예: 항체, 항체 단편, 항체-유사 분자, 또는 암-특이적 수용체나 다른 종양 마커에 대해 높은 친화성을 갖는 분자)과 조합된 클로닝된 NTP 펩티드의 이점은 클로닝된 접합 분자의 제조 및 표준화 생산에 대해 가지는 이점에 추가하여 전술한 표적화의 이점을 이러한 분자가 결합시킨다는 것이다.
[0126] 구현예는, 원치 않는 세포의 증식이나 축적을 제거하거나, 억제하거나, 방지하기 위해 스텐트(stent)와 같은 의료 장치의 코팅 성분으로서 NTP 펩티드 또는 유전자 또는 유전자 등가물의 치료 조성물을 추가 활성제와 조합하여 사용하는 것을 추가로 포함한다.
[0127]경구 투여용 고형 제형(solid dosage forms)은 캡슐, 정제, 알약, 분말, 및 과립을 포함하되, 이에 한정되지 않는다. 이러한 고형 제형, 추가 활성제, 및/또는 NTP 펩티드는 다음 중 적어도 하나와 혼합될 수 있다: (a) 시트르산 나트륨(sodium citrate) 또는 인산 이칼슘(dicalcium phosphate)과 같은 하나 이상의 불활성 첨가제 (또는 담체); (b) 전분, 락토오스(lactose), 수크로오스(sucrose), 포도당(glucose), 마니톨(mannitol), 및 규산(silicic acid)과 같은 충전제 또는 증량제; (c) 카르복시메틸셀룰로오스(carboxymethylcellulose), 알긴산 염(alginates), 젤라틴(gelatin), 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrrolidone), 수크로오스 및 아카시아와 같은 결합제(binders); (d) 글리세롤과 같은 습윤제(humectants); (e) 한천, 탄산 칼슘, 감자 또는 타피오카 전분, 알긴산, 특정 복합 실리케이트, 및 탄산나트륨과 같은 붕해제(disintegrating agents); (f) 파라핀과 같은 용해 지연제(solution retarders); (g) 4급 암모늄 화합물(quaternary ammonium compounds)과 같은 흡수 촉진제(absorption accelerators); (h) 아세틸 알코올 및 글리세롤 모노스테아레이트(glycerol monostearate)와 같은 침윤제(wetting agent); (i) 고령토(kaolin) 및 벤토나이트(bentonite)와 같은 흡착제(adsorbents); 및 (j) 탈크(talc), 스테아르산 칼슘(calcium stearate), 스테아르산 마그네슘(magnesium stearate), 고체 폴리에틸렌 글리콜(solid polyethylene glycols), 라우릴 황산나트륨(sodium lauryl sulfate), 또는 이들의 혼합물과 같은 윤활제(lubricants). 캡슐, 정제, 및 알약의 경우, 제형에는 완충제(buffering agents)가 포함될 수도 있다.
[0128]경구 투여용 액체 제형(liquid dosage forms)에는 약제학적으로 허용 가능한 유화제, 용액, 현탁액, 시럽, 및 엘릭서제(elixirs)가 포함된다. 활성 화합물 외에도, 액체 제형에는 물이나 다른 용매, 가용화제, 및 유화제와 같이 당업계에서 공통으로 사용되는 불활성 희석제(inert diluents)가 포함될 수 있다. 예시적인 유화제(emulsifiers)는 에틸 알코올, 이소프로필 알코올, 탄산 에틸, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디메틸포름아미드, 기름(예: 면실유, 땅콩유, 옥수수 배아유, 올리브유, 피마자유, 및 참기름), 글리세롤, 테트라하이드로푸릴 알코올, 폴리에틸렌글리콜, 소르비탄 지방산 에스테르, 또는 이러한 물질의 혼합물 등이다.
[0129] 이러한 불활성 희석제에 추가하여, 상기 조성물은 침윤제, 유화제 및 현탁제, 감미제, 향미제, 및 가향제와 같은 보조제(adjuvants)를 포함할 수도 있다.
[0130]본 구현예의 조성물 중 활성 성분의 실제 투여 수준은 특정 조성물 및 투여 방법에 대해 원하는 치료 반응을 획득하는 데 효과적인 양의 NTP 펩티드 및 추가 활성제를 수득하기 위해 달라질 수 있다. 따라서, 선택된 투여 수준은 원하는 치료 효과, 투여 경로, 원하는 치료 기간, 및 기타 요인에 따라 달라진다.
[0131]인간을 포함하는 포유류의 경우, 유효량은 신체 표면적에 기초하여 투여될 수 있다. 다양한 크기의 동물, 종 및 인간에 대한 투여량(신체 표면적 대 투여량 - mg/M2에 기초함)의 상호 관계는 E. J. Freireich 등의 Cancer Chemother. Rep., 50 (4):219 (1966)에 기술되어 있다. 신체 표면적은 개체의 신장과 체중으로부터 대략적으로 결정될 수 있다(예를 들어, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, N.Y. pp. 537-538 (1970) 참조).
[0132]숙주에게 투여되는 NTP 펩티드 및 선택적 추가 활성제의 총 일일 투여량은 한 번에 투여되거나 나누어 투여될 수 있다. 투여 단위 조성물은 일일 투여량을 구성하는 데 사용될 수 있도록 이렇게 나누어진 조성물의 약수로 이루어진 양을 포함할 수 있다. 그러나, 특정 환자에 대한 특정 투여 수준은 체중, 전반적인 건강 상태, 성별, 식습관, 투여 경로, 투여된 약의 효능, 흡수와 배출의 비율, 타 약물과의 조합, 및 치료 중인 특정 질병의 중증도를 포함하는 다양한 인자에 따라 달라질 것임을 이해할 것이다. 조성물은 주사 또는 수액으로서 한 번만 투여되는 것이 바람직하거나, 또 다른 바람직한 구현예에서는, 조성물이 두 번 투여된다. 본 구현예에서, 조성물의 투여 간의 기간은 2 개월 내지 10 년, 또는 8 개월 내지 4 년, 또는 약 1 년 초과(예: 1 년과 2 년 사이) 중 임의의 기간으로 변할 수 있다.
[0133] 본 구현예에 따른 NTP 펩티드 조성물의 투여 방법은 상기 조성물을 근육내, 경구, 정맥내, 복강내, 뇌내(뇌 유조직내), 뇌실내, 종양내, 병변내, 피내, 경막내, 비강내, 안구내, 동맥내, 국소, 경피 투여하는 것, 및 에어로졸, 수액, 볼루스 주사, 이식 장치, 서방성 시스템을 통해 투여하는 것을 포함하되, 이에 한정되지 않는다.
[0134]본 구현예의 NTP 펩티드를 투여하는 또 다른 방법은 경피(transdermal 또는 transcutaneous) 경로에 의한 것이다. 추가 활성제는 NTP 펩티드와 함께 사용되거나, 위에서 논의한 바와 같이 별도로 투여되거나, 전혀 투여되지 않을 수 있다. 이러한 구현예의 일 예는 패치(patch)를 사용하는 것이다. 특히, 패치는, 예를 들어, 디메틸술폭시드(dimethylsulfoxide; DMSO), 또는 면실유와 DMSO의 혼합물 중 펩티드의 미세 현탁액을 사용해 제조될 수 있고, 종양이 있는 포유류의 피부에 (피부낭 내에 있는 종양 위치 부위로부터 떨어져) 접착될 수 있다. 다른 매질, 또는 다른 용매 및 고형 지지물과 혼합된 이의 혼합물도 동일하게 작용할 것이다. 패치는 용액 또는 현탁액의 형태로 펩티드 조성물을 함유할 수 있다. 그런 다음 패치는, 예를 들어, 봉합, 클립 또는 다른 고정 장치를 사용해 피부를 함께 접어 고정시킴으로써 형성된 환자의 피부낭(skin pouch) 내에 이를 삽입함으로써 환자의 피부에 적용될 수 있다. 이러한 낭(pouch)은 포유류의 간섭 없이 피부와의 지속적인 접촉이 보장될 수 있는 방식으로 사용되어야 한다. 피부낭을 사용하는 것에 추가하여, 패치를 피부와 접촉된 상태로 확실히 배치시키는 임의의 장치가 사용될 수 있다. 예를 들어, 접착 붕대가 사용되어 패치를 피부 상의 제자리에 고정시킬 수 있다.
[0135]선택적으로 추가 활성제와 조합된 NTP 펩티드는 서방성 제형 또는 제제로 투여될 수 있다. 서방성 제제의 적절한 예에는 성형된 물품 형태(예: 필름 또는 마이크로캡슐)의 반투과성 중합체 매트릭스가 포함된다. 서방성 매트릭스에는 폴리에스테르, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호, EP 58,481호), L-글루타민산 및 감마 에틸-L-글루탐산염(Sidman 등, Biopolymers, 22: 547-556 ), 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴산염)(Langer 등, J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 및 Langer, Chem. Tech., 12: 98-105 ), 에틸렌 비닐 아세테이트(전술한 Langer 등의 인용 문헌), 또는 폴리-D(-)-3-히드록시부티르산(EP 133,988호)이 포함된다. 또한, 서방성 조성물은 당업계에 알려진 여러 방법 중 임의의 방법으로 제조될 수 있는 리포솜을 포함할 수 있다 (예: Eppstein 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82: 3688-3692; EP 36,676; EP 88,046; 및 EP 143,949).
[0136]본 구현예의 NTP 펩티드를 투여하는 또 다른 방법은 치료 대상 다른 조직 내로 NTP 펩티드를 직접 또는 간접 주입하는 것에 의한 것이다. 이러한 구현예의 일 예는 치료 대상 조직 내로 NTP 펩티드를 직접 주입하는 것이다. 치료는 한 번 주입하는 것; 한꺼번에 여러 번 주입하는 것; 몇 시간, 몇 일, 몇 개월의 기간에 걸쳐 생검, 영상 분석, IPSS(특히 바람직한 구현예)에 증상의 악화(퇴행) 또는 진행을 모니터링하거나, 장애의 악화 또는 진행을 모니터링하는 다른 방법에 의해 모니터링하면서 연속하여 주입하는 것으로 이루어질 수 있다. 치료 대상 다른 조직 내로의 주입은 생체 내 조직에 도달하도록 코, 입, 귀, 질, 직장 또는 요도와 같은 구멍(orifice) 내에 삽입되거나 절개를 통해 삽입되는 장치에 의한 것일 수 있고, 주입(들)에 적합한 부위를 식별하기 위해 초음파 또는 광섬유 스코프와 같은 영상 또는 광학 시스템과 함께 수행될 수 있다. 이러한 구현예의 또 다른 예는 시간의 경과에 따라 조직에 NTP 펩티드를 일정하게 주입할 수 있는 장치를 사용하는 것이다.
[0137] NTP 펩티드를 투여하는 또 다른 방법은 제거 또는 파괴할 필요가 있거나, 그렇게 하는 것이 바람직한 종양 또는 다른 조직 또는 세포 요소를 물리적으로 자르거나, 제거하거나, 달리 사멸시키거나 파괴하기 위해 사용되는 외과적 수술 또는 유사한 수술을 함께 사용하는 것인데, 본 구현예의 NTP 펩티드는 수술에 의해 제거되거나 파괴되지 않은 임의의 종양 세포 또는 다른 조직을 파괴하거나 이의 성장을 지연시키기 위해, 종양 또는 조직이 제거된 영역(들)을 둘러싸는 인접 영역에 투여된다.
[0138]본 구현예의 NTP 펩티드를 투여하는 또 다른 방법은 치료 대상 종양 또는 다른 조직 내에 장치를 이식하는 것에 의한 것이다. 본 구현예에서, 추가 활성제는 일반적으로 NTP 펩티드의 투여 경로와는 다른 경로를 통해 투여될 것이다. 이러한 구현예의 일 예는 펩티드를 함유하는 웨이퍼를 치료 대상 종양 또는 다른 조직에 이식하고, 경구 투여를 통해 추가 활성제를 투여하는 것이다. 시간이 경과함에 따라, 웨이퍼는 NTP 펩티드의 치료 투여량을 조직 내에 방출한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 조성물은 NTP 펩티드가 흡수된 막, 스폰지, 또는 다른 적절한 재료를 해당 영역 내에 이식함으로써 국소 투여될 수 있다. 이식 장치가 사용되는 경우, 이 장치는 적절한 조직 또는 기간 내에 이식될 수 있고, 펩티드의 전달은 볼루스를 통하거나, 연속 투여를 통하거나, 연속 주입을 사용하는 카테터(catheter)를 통해 장치를 통해 직접 이뤄질 수 있다.
[0139]대안적인 투여 방법은 NTP 펩티드를 암호화하는 유전자의 하나 이상의 카피를 표적 세포 내에 도입하고, 필요한 경우, 세포 내에서 펩티드 생성이 개시되도록 유전자의 카피(들)를 유도하는 것이다. 본 구현예에서, 추가 활성제는 일반적으로 NTP 펩티드의 투여 경로와는 다른 경로를 통해 투여될 것이다. 유전자 요법이 적용될 수 있는 한 가지 방식은 구성적 프로모터 또는 유도성 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있는 NTP 펩티드 암호화 유전자(펩티드(또는 이의 단편, 변이체, 동족체, 또는 유도체)를 암호화하는 게놈 DNA, cDNA, 및/또는 합성 DNA 중 하나)를 사용해 유전자 요법 DNA 작제물을 형성하는 것이다. 작제물이 삽입될 세포 또는 조직 유형 내에서 프로모터가 활성인 경우, 프로모터는 내인성 펩티드 암호화 유전자에 대해 상동성이거나 이종성일 수 있다. 유전자 요법 DNA 작제물의 다른 성분은 필요에 따라, 선택적으로, 부위 특이적 통합을 위해 설계된 DNA 분자(예: 상동성 재조합에 유용한 내인성 측면 서열), 조직 특이적 프로모터, 인핸서(enhancer(s)) 또는 사일렌서(silencer(s)), 모세포에 대해 선택적 혜택을 제공할 수 있는 DNA 분자, 형질변환된 세포를 동정하기 위한 표지(labels)로서 유용한 DNA 분자, 음성 선택 시스템(negative selection systems), (예를 들어, 세포 표적화용으로서) 세포 특이적 결합제, 세포 특이적 내재화 인자(internalization factors), 및 벡터에 의한 발현을 강화시키는 전사 인자뿐만 아니라 벡터 제조를 가능하게 하는 인자를 포함할 수 있다.
[0140]생체내 세포 또는 조직에 대한 유전자의 전달 수단에는 미처리(bare) DNA의 직접 주입, 탄도법(ballistic methods), 리포솜-매개 전달, 수용체-매개 전달(리간드-DNA 복합체), 전기 천공법, 및 인산 칼슘 침전이 포함된다(이들로 한정되지 않음). 참조: 미국 특허 제4,970,154호, WO 96/40958, 미국 특허 제5,679,559호, 미국 특허 제5,676,954호, 및 미국 특허 제5,593,875호 (이들 각각의 개시는 그 전체가 본원에 참조로서 통합됨). 상기 수단에는 레트로 바이러스(retrovirus), 아데노 바이러스(adenovirus), 아데노-관련 바이러스(adeno-associated virus), 폭스 바이러스(pox virus), 렌티바이러스(lentivirus), 유두종 바이러스(papilloma virus) 또는 단순 헤르페스 바이러스(herpes simplex virus)와 같은 바이러스 벡터를 사용하는 것, DNA-단백질 접합물을 사용하는 것, 및 리포솜을 사용하는 것이 또한 포함된다. 유전자 요법 벡터를 사용하는 것은, 예를 들어, 미국 특허 제5,672,344호, 미국 특허 제5,399,346호, 미국 특허 제5,631,236호, 및 미국 특허 제5,635,399호에 기술되어 있으며, 이들 각각의 개시는 그 전체가 본원에 참조로서 통합된다.
[0141]NTP 펩티드 암호화 유전자는, 본원에 기술된 것들과 같은 방법을 사용해 체외에서 유전적으로 조작된 환자의 특정 세포 내로 이식을 통해 전달되어, NTP 펩티드 또는 이의 단편, 변이체, 동족체, 또는 유도체를 발현시키고 분비시킬 수 있다. 이러한 세포는 동물 또는 인간 세포일 수 있으며, 환자 자신의 조직으로부터 유도되거나, 인간 또는 비-인간인 또 다른 공급원으로부터 유도될 수 있다. 선택적으로, 세포는 불멸화되거나 줄기 세포일 수 있다. 그러나, 면역학적 반응의 가능성을 감소시키기 위해서는, 주변 조직의 침윤을 피하도록 세포를 캡슐화하는 것이 바람직하다. 일반적으로, 캡슐화 재료는 단백질 생성물(들)의 방출을 허용하되 환자의 면역계에 의해서, 또는 주변 조직 유래의 다른 유해 인자에 의해서 세포가 파괴되는 것을 방지하는 생체 적합성, 반-투과성(semi-permeable) 중합체 엔클로저 또는 막이다. 세포의 막 캡슐화에 사용되는 방법은 당업자에게 익숙하며, 캡술화된 세포를 제조하고 이를 환자에게 이식하는 것은 과도한 실험 없이 달성될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 제4,892,538호; 제5,011,472호; 및 제5,106,627호를 참조하되, 이들 각각의 개시는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다. 활 세포(living cells)를 캡슐화하기 위한 시스템은 PCT WO 91/10425에 기술되어 있다. 리포솜 담체, 생체-침식성 입자 또는 비드와 같은 다양한 다른 지속성 또는 조절성 전달 수단을 제형화하기 위한 기술 또한 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 제5,653,975호에 기술되어 있으며, 이의 개시는 그 전체가 본원에 참조로서 통합된다. 세포는, 캡슐화와 상관없이 환자의 적합한 신체 조직 또는 기관 내에 이식될 수 있다.
[0142]일 구현예는, BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하고/하거나 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 포유류에게 (증상이 이렇게 악화되거나 진행되기 쉬운 포유류를 포함함) NTP 펩티드의 치료 유효량, 구체적으로는 서열번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드의 치료 유효량을 적어도 한 번 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예는, BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하고/하거나 상기 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 포유류에게 (증상이 이렇게 악화되거나 진행되기 쉬운 포유류를 포함함) NTP 펩티드의 치료 유효량, 구체적으로는 서열번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드의 치료 유효량을 투여한 뒤, 이상의 활성제를 후속 투여하는 단계를 포함한다. 또 다른 구현예는, BPH를 앓고 있지는 않지만 BPH에 걸리기 쉬운 포유류를 치료하여 BPH와 연관된 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하고/하거나 상기 증상 완화의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법을 포함하며, 다른 구현예에서, 포유류는 외요도구 협착, 감돈 포경, 음경 협착대, 포경, 전립선암, (방광, 직장 및 자궁 탈출로부터 선택된) 장기 탈출, (부인성 악성 종양, 자궁 근종, 및 난소 낭종으로부터 선택된) 골반 종양, 후경된 조밀한 임신 자궁, 동맥류 확장, 방광 결석, 방광 신생물, 분변 매복, 위장 또는 후복막의 악성 종양, 요도 협착, 결석, 부종, 귀두염, 전립선 종기, 전립선염, 급성 외질염, 질 편평태선, 질 경화태선, 질 수포창, 주혈 흡충증, 방광염, 포충증, 귈랑-바레 증후군, 단순 헤르페스 바이러스, 라임병, 요도 주위 종기, 횡단성 척수염, 결핵성 방광염, 요도염, 수두-대상포진 바이러스, 음경 외상, 음경 골절, 음경 열상, 및 파울러의 증후군으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 병태를 앓고 있는 포유류이다.
[0143]특정 구현예에서, 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드는 (1) 5α-환원 효소 억제제 및/또는 항에스트로겐, (2) 5α-환원 효소 억제제 및/또는 방향화 효소 억제제, (3) 5α-환원 효소 억제제 및/또는 17β-HSD 억제제, (4) 5α-환원 효소 억제제, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (5) 5α-환원 효소 억제제, 항에스트로겐 및 17β-HSD 억제제, (6) 5α-환원 효소 억제제, 방향화 효소 억제제, 항에스트로겐 및 17β-HSD 억제제, (7) 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 항에스트로겐, (8), 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 방향화 효소 억제제, (9) 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 17β-HSD 억제제, (10) 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (11) 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 방향화 효소 억제제 및 17β-HSD 억제제, (12) 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 방향화 효소 억제제, 항에스트로겐 및 17β-HSD 억제제, (13) 17β-HSD 억제제 및 항에스트로겐, (14) 17β-HSD 억제제 및 방향화 효소 억제제, (15) 17β-HSD 억제제, 방향화 효소 억제제 및 항에스트로겐, (16) 17β-HSD 억제제, 항안드로겐 및 항에스트로겐, (17) 17β-HSD 억제제, 항안드로겐 및 방향화 효소 억제제, (18) 17β-HSD 억제제, 항안드로겐, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (19) 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (20) 항에스트로겐, 방향화 효소 억제제, 및 항안드로겐, (21) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소의 억제제 및 항에스트로겐, (22) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소의 억제제 및 방향화 효소 억제제, (23) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제 및 17β-HSD 억제제, (24) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (25) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항에스트로겐 및 17β-HSD 억제제, (26) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 방향화 효소 억제제, 항에스트로겐 및 17β-HSD 억제제, (27) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 항에스트로겐, (28) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 방향화 효소 억제제, (29) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐 및 17β-HSD 억제제, (30) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (31) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 방향화 효소 억제제 및 17β-HSD 억제제, (32) LHRH 작용제 또는 길항제, 5α-환원 효소 억제제, 항안드로겐, 방향화 효소 억제제, 항안드로겐 및 17β-HSD 억제제, (33) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제 및 항에스트로겐, (34) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제 및 방향화 효소 억제제, (35) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제, 방향화 효소 억제제 및 항에스트로겐, (36) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제, 항안드로겐 및 항에스트로겐, (37) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제, 항안드로겐 및 방향화 효소 억제제, (38) LHRH 작용제 또는 길항제, 17β-HSD 억제제, 항안드로겐, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, (39) LHRH 작용제 또는 길항제, 항에스트로겐 및 방향화 효소 억제제, 및 (40) LHRH 작용제 또는 길항제, 항에스트로겐, 방향화 효소 억제제, 및 항안드로겐으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 활성제와 조합으로 투여된다.
[0144]다른 구현예에서, 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 단리된 펩티드는 알푸조신이나 탐스로신과 같은 알파-아드레날린성 차단제, 두타스테라이드, 타달라필, 테라조신, 피나스테라이드, 독사조신, 피나스테라이드와 독사조신의 조합, 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 활성제와 조합으로 투여된다.
[0145]다음의 실시예는 본 구현예를 예시하기 위해 제공된다. 그러나, 구현예는 이들 실시예에 기술된 특정 조건 또는 세부 내역으로 한정되지 않음을 이해해야 한다. 명세서 전반에 걸쳐, 미국 특허를 포함해, 공개적으로 이용 가능한 문서에 대한 임의의 및 모든 참조는 구체적으로 참조로서 통합된다. 특히, 구현예는 2015년 7월 24일에 출원된 계류 중인 미국 특허 출원 제14/808,713호 - 제목 "METHODS OF REDUCING THE NEED FOR SURGERY IN PATIENTS SUFFERING FROM BENIGN PROSTATIC HYPERPLASIA"; 2015년 1월 27일에 출원된 미국 특허 출원 제14/606,683호 - 제목 "METHOD OF TREATING DISORDERS REQUIRING DESTRUCTION OR REMOVAL OF CELLS"; 2015년 6월 12일에 출원된 미국 특허 출원 제14/738,551호 - 제목 COMBINATION COMPOSITIONS FOR TREATING DISORDERS REQUIRING REMOVAL OR DESTRUCTION OF UNWANTED CELLULAR PROLIFERATIONS, 미국 특허 출원 공개 제2007/0237780호 (현재 거절됨); 제2003/0054990호 (현재 미국 특허 제7,172,893호); 제2003/0096350호 (현 미국 특허 제6,924,266호); 제2003/0096756호 (현 미국 특허 제7,192,929호); 제2003/0109437호 (현 미국 특허 제7,241,738호); 제2003/0166569호 (현 미국 특허 제7,317,077호); 제2005/0032704호 (현 미국 특허 제7,408,021호); 및 제2015/0148303호 (현 미국 특허 제9,243,035호)에 포함된 실시예를 명시적으로 참조로서 통합하며, 이들 각각은 명시된 특정 펩티드가 정상 설치류의 근육 조직, 피하 연결 조직, 진피 및 기타 조직에서 생체내 세포 사멸을 일으키는 효과적인 제제임을 나타낸다.
실시예 1
[0146]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) 인산 완충 식염수 pH 7.2 ("PBS") 중의 서열 번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu) 또는 b) PBS를 단독으로 전립선 내 주입하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 정기적인 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 검증은 전립선 증상의 호전 또는 악화를 측정하는 데 사용된 정량적 척도인 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. IPSS는 다음을 정량화한 것이다: 1) 배뇨 후 잔뇨감; 2) 잦은 배뇨; 3) 간헐성 배뇨; 4) 급작스런 배뇨 욕구; 5) 약뇨; 6) 누르거나 안간힘을 써야 하는 배뇨; 7) 수면 중 배뇨 욕구(야간뇨). 서열번호 66을 전립선 내 투여한 모든 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독으로 투여한 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 치료한 환자가 더 호전된 것 외에도, 서열번호 66으로 치료한 환자에서는 증상의 악화 및 진행 사례도 예상 밖으로 감소했다. 그 결과는 아래의 표 1에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS 악화의 백분율
서열번호 661 290 13.1%*
대조군2 214 21 %
1. 서열번호 66을 투여한 환자. 　
2. PBS를 단독 투여하지 않은 환자.
* p < .02
[0147]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교할 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 진행을 약 37.6%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 2
[0148]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수(PBS) 중의 서열번호 66을 투여하거나, b) PBS를 단독으로 투여하였다. 이어서, 위약 및 서열번호 66을 투여한 326명의 대상물에게 서열번호 66(2.5 mg)을 전립선 내 투여하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 검증은 전립선 증상의 호전 또는 악화를 측정하기 위해 사용된 정량적 척도인 국제 전립선 증상 점수(International Prostate Symptom Score, IPSS)에 의해 측정하였다. IPSS는 다음을 정량화한 것이다: 1) 배뇨 후 잔뇨감; 2) 잦은 배뇨; 3) 간헐성 배뇨; 4) 급작스런 배뇨 욕구; 5) 약뇨; 6) 누르거나 안간힘을 써야 하는 배뇨; 7) 수면 중 배뇨 욕구(야간뇨). 서열번호 66을 후속 투여한 위약 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 서열번호 66 투여 환자가 더 호전된 것 외에도, 서열번호 66으로 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 증상 호전의 부족 사례가 예상 밖으로 감소했다. 　 그 결과는 아래의 표 2에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS의 악화 또는 IPSS의 무호전의 백분율
위약 + 서열번호 66 133 17.3%*
대조군 214 50%
* p< 0.0001
[0149]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 약 65.4%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 3
[0150]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수(PBS) 중의 서열번호 66을 투여하거나, b) PBS를 단독으로 투여하였다. 이어서, 326명의 대상물에게 서열번호 66(2.5 mg)을 전립선 내 주입하였다. 66(2.5 mg)을 전립선 내 투여하였다. 증상 검증은 전립선 증상의 호전 또는 악화를 측정하는 데 사용된 정량적 척도인 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. IPSS는 다음을 정량화한 것이다: 1) 배뇨 후 잔뇨감; 2) 잦은 배뇨; 3) 간헐성 배뇨; 4) 급작스런 배뇨 욕구; 5) 약뇨; 6) 누르거나 안간힘을 써야 하는 배뇨; 7) 수면 중 배뇨 욕구(야간뇨). 서열번호 66을 두 번 주입한 서열번호 66 투여 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 치료한 환자가 더 호전된 것 외에도, 서열번호 66으로 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 증상 호전의 부족 사례가 예상 밖으로 감소했다. 　 그 결과는 아래의 표 3에서 알 수 있다. 　
치료 환자의 수 IPSS의 악화 또는 IPSS의 무호전의 백분율
서열번호 + 서열번호 66 193 17.6 %*
대조군 214 50%
* p< 0.0001
[0151]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 호전의 부족을 약 64.8%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 4
[0152]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수("PBS") 중의 서열번호 66을 투여하거나, b) PBS를 단독으로 투여하였다. 이어서, 환자(n=326)에게 서열번호 66(2.5 mg)을 전립선 내 투여하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 검증은 전립선 증상의 호전 또는 악화를 측정하는 데 사용된 정량적 척도인 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. 서열번호 66을 투여한 모든 위약 및 서열번호 66 투여 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 서열번호 66 투여 환자가 더 호전된 것 외에도, 서열번호 66으로 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 증상 호전의 부족 사례가 예상 밖으로 감소했다. 그 결과는 아래의 표 4에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS의 악화 또는 IPSS의 무호전의 백분율
PBS 및 서열번호 66을 투여하고, 서열번호 66으로 후속 치료 326 17.5%*
대조군 214 50%
* p < .0001
[0153]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 약 65%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 5
[0154]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수("PBS") 중의 서열번호 66을 투여하거나, b) PBS를 단독으로 투여하였다. 이어서, 326명의 환자에게 서열번호 66(2.5 mg)을 전립선 내 투여하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 검증은 전립선 증상의 호전 또는 악화를 측정하기 위해 사용된 정량적 척도인 국제 전립선 증상 점수(International Prostate Symptom Score, IPSS)에 의해 측정하였다. 서열번호 66을 투여한 위약 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 위약 환자가 더 호전된 것 외에도 서열번호 66으로 후속 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 진행 사례가 예상 밖으로 감소했다. 그 결과는 아래의 표 5에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS 악화의 백분율
위약 + 서열번호 66 133 9.0%*
대조군 214 21%
* p< 0.0001
[0155]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 진행을 약 57%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 6
[0156]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수("PBS") 중의 서열번호 66을 투여하거나, b) PBS를 단독으로 투여하였다. 이어서, 326명의 환자에게 서열번호 66(2.5 mg)을 전립선 내 투여하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 검증은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. 서열번호 66을 투여한 환자 및 서열번호 66을 후속 투여한 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 서열번호 66 투여 환자가 더 호전된 것 외에도, 　 서열번호 66으로 후속 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 진행 사례가 예상 밖으로 감소했다. 　 그 결과는 아래의 표 6에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS 악화의 백분율
서열 번호 66 + 서열번호 66 193 13.5%*
대조군 214 21%
* p<0.05
[0157]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 진행을 약 35.7%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 7
[0158]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) 인산 완충 식염수 pH 7.2 ("PBS") 중의 서열 번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu) 또는 b) PBS를 단독으로 전립선 내 주입하였다. 후속하여, 일부 환자(위약 환자(PBS 단독 투여) 및 서열번호 66으로 치료한 환자 모두)에게 서열번호 66 2.5 mg을 전립선 내 주입하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 정기적인 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 평가는 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. 서열번호 66을 투여한 모든 위약 및 서열번호 66 투여 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독으로 투여한 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 모든 위약 및 서열번호 66 치료 환자가 더 호전된 것 외에도, 　 서열번호 66으로 후속 치료한 모든 환자에서도 증상의 악화 및 진행 사례가 예상 밖으로 감소했다. 　 그 결과는 아래의 표 7에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS 악화의 백분율
PBS 및 서열번호 66을 투여하고, 서열번호 66 326 11.7%*
대조군 214 21%
* p < .0001
[0159]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 진행을 약 44,3%만큼 감소시킬 수 있다.
실시예 8
[0160]BPH 환자에게, 비뇨기과 의사가 초음파 유도 하의 사무실 환경에서 이중 맹검(double-blind) 조건 하에 a) pH 7.2의 인산 완충 식염수("PBS") 중의 서열번호 66, 또는 b) PBS를 단독으로 전립선 내 주입하였다. 1 내지 6년 동안 증상에 대한 신체 검사, 실험실 검사 및 검증을 통해 환자들을 추적 관찰하였다. 증상 평가는 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정하였다. 서열번호 66을 투여한 환자에서의 베이스라인 IPSS와의 차이를 PBS를 단독 투여한 환자에서의 결과와 비교하였다. 놀랍게도, 서열번호 66으로 후속 치료한 서열번호 66 투여 환자가 더 호전된 것 외에도, 서열번호 66으로 치료한 환자에서도 증상의 악화 및 증상 호전의 부족 사례가 예상 밖으로 감소했다. 　 그 결과는 아래의 표 8에서 알 수 있다.
치료 환자의 수 IPSS의 악화 또는 IPSS의 무호전의 백분율
서열번호 66 290 36.4%*
대조군 214 50%
* p < .003
[0161]이들 연구 결과에 의하면, 본 발명의 NTP 펩티드를 투여하는 것은, BPH만을 앓고 있는 환자와는 다른 환자 집단을 포함하는 환자 집단을 치료하는 데 유용하며, BPH 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는데 유용하다. 대조군과 비교했을 때, 상기 조성물 및 방법은 BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 약 27%만큼 감소시킬 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> NYMOX CORPORATION <120> METHOD OF AMELIORATING OR PREVENTING THE WORSENING OR THE PROGRESSION OF SYMPTOMS OF BPH <130> 063307-0447520 <140> 15/258,786 <141> 2016-09-07 <160> 118 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Met Glu Phe Ser Leu Leu Leu Pro Arg Leu Glu Cys Asn Gly Ala 1 5 10 15 <210> 2 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Gly Ala Ile Ser Ala His Arg Asn Leu Arg Leu Pro Gly Ser Ser 1 5 10 15 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Asp Ser Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met Cys 1 5 10 15 Thr <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Met Cys Thr His Ala Arg Leu Ile Leu Tyr Phe 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19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp 1 5 10 15 Tyr Arg Arg <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg 1 5 10 15 Arg <210> 12 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 13 Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 14 Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu 1 5 10 <210> 15 <211> 19 <212> PRT <213> 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 33 Phe Val Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met 1 5 10 <210> 34 <211> 23 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 34 Met Gly Phe Thr Met Phe Ala Arg Leu Ile Leu Ile Ser Gly Pro Cys 1 5 10 15 Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser 20 <210> 35 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 35 Ile Ser Gly Pro Cys 1 5 <210> 36 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 36 Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val Ser 1 5 10 15 His <210> 37 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 37 Gly Val Ser His His Ala Arg Leu Ile Phe Asn Phe Cys Leu Phe Glu 1 5 10 15 Met <210> 38 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: 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Sequence: Synthetic peptide <400> 58 Phe Asn Phe Cys Leu Phe 1 5 <210> 59 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 59 Phe Ile Phe Asn Phe Leu 1 5 <210> 60 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 60 Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met 1 5 10 <210> 61 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 61 Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met 1 5 10 <210> 62 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 62 Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val 1 5 10 <210> 63 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 63 Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly 1 5 <210> 64 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 74 Gly Asp Met Glu Asp Val Leu Leu Asn Cys Thr Leu Leu Lys Arg 1 5 10 15 <210> 75 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 75 Ser Ser Arg Phe Arg Phe Trp Gly Ala Leu Val Cys Ser Met Asp 1 5 10 15 <210> 76 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 76 Ser Cys Arg Phe Ser Arg Val Ala Val Thr Tyr Arg Phe Ile Thr 1 5 10 15 <210> 77 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 77 Leu Leu Asn Ile Pro Ser Pro Ala Val Trp Met Ala Arg Asn Thr 1 5 10 15 <210> 78 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 78 Met Ala Gln Ser Arg Leu Thr Ala Thr Ser Ala Ser Arg Val Gln 1 5 10 15 <210> 79 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of 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Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 84 Asn Gly Gly Ser Cys Tyr Val Ala Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ser Cys Asn Pro Ser Lys 20 <210> 85 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 85 Met Trp Thr Leu Lys Ser Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Thr 1 5 10 15 <210> 86 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 86 Cys Ser Tyr Ala Phe Met Phe Ser Ser Leu Arg Gln Lys Thr Ser 1 5 10 15 <210> 87 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 87 Glu Pro Gln Gly Lys Val Pro Cys Gly Glu His Phe Arg Ile Arg 1 5 10 15 <210> 88 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 88 Gln Asn Leu Pro Glu His Thr Gln Gly Trp Leu Gly Ser Lys Trp 1 5 10 15 <210> 89 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence 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of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 114 Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys 1 5 <210> 115 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 115 Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu 1 5 10 <210> 116 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 116 Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile 1 5 10 <210> 117 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 117 Glu Thr Glu Ser His 1 5 <210> 118 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 6xHis tag <400> 118 His His His His His His 1 5

Claims (18)

  1. 포유류에서 양성 전립선 비대증 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 서열번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Glu-Ile-Lys-Leg-Glu-Ile-Lys-Arg-Leu-Leu)에서의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료 유효량을 상기 포유류에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군을 투여하는 것과 비교해 BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 10%보다 더 많이 감소시키는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방법은 제1항에서 청구된 상기 펩티드 중 적어도 하나의 치료적 유효량 및 담체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 펩티드는 2 회 이상 투여되는, 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 방법은 서열번호 66의 N-말단 또는 C-말단이 측면에 위치하는 적어도 하나 내지 최대 25개의 추가 아미노산을 가지는, 제1항에서 청구된 펩티드 중 적어도 하나의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 펩티드는 경구 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비강내 투여, 정맥내 투여, 전립선내 투여, 근육내 투여, 경막내 투여, 종양내 투여, 국소 투여, 및 경피 투여로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 투여되는, 방법.
  6. 제1항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 약 20% 내지 약 65%만큼 감소시키는, 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 약 30% 내지 약 60%만큼 감소시키는, 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 약 35% 내지 약 60%만큼 감소시키는, 방법.
  9. 제1항에 있어서, 알푸조신(alfuzosin), 탐스로신(tamsulosin), 두타스테라이드(dutasteride), 타달라필(tadalafil), 테라조신(terazosin), 피나스테라이드(finasteride), 독사조신(doxazosin), 피나스테라이드와 독사조신의 조합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 치료제를 상기 포유류에 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
  10. 포유류에서 양성 전립선 비대증 증상의 악화 또는 호전의 부족을 개선하거나 예방하는 방법으로서, 상기 방법은 서열번호 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Glu-Ile-Lys-Leg-Glu-Ile-Lys-Arg-Leu-Leu)에서의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드의 치료 유효량을 상기 포유류에게 투여하는 단계를 포함하되, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군을 투여하는 것과 비교해 BPH 증상의 악화 또는 호전 부족을 나타내는 포유류의 백분율을 10%보다 더 많이 감소시키는, 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 방법은 제1항에서 청구된 상기 펩티드 중 적어도 하나의 치료적 유효량 및 담체를 투여하는 것을 포함하는, 방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 펩티드는 2 회 이상 투여되는, 방법.
  13. 제10항에 있어서, 상기 방법은 서열번호 66의 N-말단 또는 C-말단이 측면에 위치하는 적어도 하나 내지 최대 25개의 추가 아미노산을 가지는, 제1항에서 청구된 펩티드 중 적어도 하나의 치료 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 방법. 　
  14. 제10항에 있어서, 상기 펩티드는 경구 투여, 피하 투여, 피내 투여, 비강내 투여, 정맥내 투여, 전립선내 투여, 근육내 투여, 경막내 투여, 종양내 투여, 국소 투여, 및 경피 투여로 이루어진 군으로부터 선택된 방법에 의해 투여되는, 방법.
  15. 제10항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 증상 호전의 부족을 나타내는 포유류의 백분율을 약 10% 내지 약 80%만큼 감소시키는, 방법.
  16. 제15항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 약 20% 내지 약 75%만큼 감소시키는, 방법.
  17. 제15항에 있어서, 상기 방법은 국제 전립선 증상 점수(IPSS)에 의해 측정했을 때, 대조군이 투여되는 포유류와 비교해, BPH 증상의 악화 또는 진행을 나타내는 포유류의 백분율을 약 25% 내지 약 70%만큼 감소시키는, 방법.
  18. 제10항에 있어서, 알푸조신(alfuzosin), 탐스로신(tamsulosin), 두타스테라이드(dutasteride), 타달라필(tadalafil), 테라조신(terazosin), 피나스테라이드(finasteride), 독사조신(doxazosin), 피나스테라이드와 독사조신의 조합, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 추가 치료제를 상기 포유류에 투여하는 단계를 더 포함하는, 방법.
KR1020197009879A 2016-09-07 2017-08-29 Bph 증상의 악화 또는 진행을 개선하거나 예방하는 방법 KR102623470B1 (ko)

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