ES2876358T3 - Composiciones combinadas para el tratamiento de trastornos que requieren eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas - Google Patents

Abstract

Un péptido aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEQ ID NO. 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val- Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu) para el uso en un método de tratamiento de un mamífero para la eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas, donde las proliferaciones celulares no deseadas son hiperplasia prostática benigna (BPH), que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva del péptido aislado, en combinación con al menos un agente activo seleccionado del grupo que consiste en tamsulosina, finasterida, terazosina, doxazosina, prazosina, tadalafil, alfuzosina, silodosina, dutasterida, combinaciones de dutasterida y tamsulosina, y mezclas y combinaciones de los mismos, en donde el método elimina o destruye las proliferaciones celulares no deseadas.

Description

DESCRIPCIÓN

Composiciones combinadas para el tratamiento de trastornos que requieren eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas

Antecedentes

1. Campo de la invención

La invención se define en las reivindicaciones. La descripción incluye composiciones y métodos para tratar afecciones que requieren la eliminación o destrucción de elementos celulares, tales como tumores benignos o malignos en humanos, mediante el uso de composiciones que contienen compuestos basados en péptidos pequeños, en combinación con al menos un agente activo adicional y un portador farmacéuticamente aceptable. Los métodos incluyen, pero no se limitan a, administrar las composiciones por vía intramuscular, oral, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intralesional, intraocular, intraarterial, intratecal, intratumoral, intranasal, tópica, transdérmica, subcutánea o intradérmica.

2. Descripción de la técnica relacionada

La esencia de muchos tratamientos y procedimientos médicos implica la eliminación o destrucción de tejido dañino o no deseado. Los ejemplos de tales tratamientos incluyen la eliminación quirúrgica de crecimientos cancerosos o precancerosos, la destrucción de tumores metastásicos mediante quimioterapia y la reducción de la hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata). Otros ejemplos incluyen la eliminación del vello facial no deseado, la eliminación de verrugas y la eliminación de tejido graso no deseado.

Existe la necesidad de una composición efectiva que destruya y, por tanto, facilite la eliminación o inhiba el crecimiento adicional de células y tejidos dañinos o no deseados, pero que tenga principalmente efectos locales y una toxicidad sistémica mínima o nula.

Algunos agentes que se sabe que tienen este efecto se describen en las publicaciones de solicitud de patente de EE. UU. núms. 2007/0237780 (ahora abandonada); 2003/0054990 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,172,893); 2003/0096350 (ahora patente de EE. UU. núm. 6,924,266); 2003/0096756 (ahora patente de EE. UU. núm.

7,192,929); 2003/0109437 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,241,738); 2003/0166569 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,317,077); y 2005/0032704 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,408,021).

El cáncer es una anomalía en los mecanismos reguladores internos de una célula que da como resultado un crecimiento y reproducción incontrolados de la célula. Las células normales forman los tejidos, y cuando estas células pierden su capacidad para comportarse como una unidad específica, controlada y coordinada (desdiferenciación), el defecto conduce a un desorden entre la población celular. Cuando esto ocurre, se forma un tumor.

Los sobrecrecimientos benignos de tejido son anomalías en las que es conveniente eliminar células de un organismo. Los tumores benignos son proliferaciones celulares que no hacen metástasis en todo el cuerpo pero que, sin embargo, causan síntomas de enfermedad. Estos tumores pueden ser letales si están ubicados en áreas inaccesibles de órganos tal como el cerebro. Hay tumores benignos de órganos que incluyen pulmón, cerebro, piel, pituitaria, tiroides, corteza suprarrenal y médula, ovario, útero, testículo, tejido conectivo, músculo, intestinos, oído, nariz, garganta, amígdalas, boca, hígado, vesícula biliar, páncreas, próstata, corazón y otros órganos.

La cirugía suele ser la primera etapa en el tratamiento del cáncer. El objetivo de la cirugía varía. A veces se usa para extirpar tanto tumor evidente como sea posible, o al menos para "reducirlo" (eliminar la mayor parte del tumor para que haya menos que deba tratarse por otros medios). Según el tipo de cáncer y la ubicación, la cirugía también puede proporcionar cierto alivio sintomático al paciente. Por ejemplo, si un cirujano puede extirpar una gran parte de un tumor cerebral en expansión, la presión dentro del cráneo disminuirá, lo que mejorará los síntomas del paciente. No todos los tumores son susceptibles de cirugía. Algunos pueden estar ubicados en partes del cuerpo que hacen que sea imposible eliminarlos por completo. Los ejemplos de estos serían tumores en el tronco del encéfalo (una parte del cerebro que controla la respiración) o un tumor que ha crecido dentro y alrededor de un vaso sanguíneo principal. En estos casos, el papel de la cirugía es limitado debido al alto riesgo asociado con la extirpación del tumor.

En algunos casos, la cirugía no se usa para reducir el volumen del tejido tumoral porque simplemente no es necesaria. Un ejemplo es el linfoma de Hodgkin, un cáncer de los ganglios linfáticos que responde muy bien a las combinaciones de quimioterapia y radioterapia. En el linfoma de Hodgkin, la cirugía rara vez es necesaria para lograr la cura, pero casi siempre se usa para establecer un diagnóstico.

La quimioterapia es otra forma común de tratamiento del cáncer. Esencialmente, implica el uso de medicamentos (generalmente administrados por la boca o inyección) que atacan específicamente a las células que se dividen rápidamente (tal como las que se encuentran en un tumor) en todo el cuerpo. Esto hace que la quimioterapia sea útil para tratar cánceres que ya han hecho metástasis, así como tumores que tienen una alta probabilidad de diseminarse a través de los sistemas sanguíneo y linfático pero que no son evidentes más allá del tumor primario. La quimioterapia también se puede usar para mejorar la respuesta de los tumores localizados a la cirugía y la radioterapia. Este es el caso, por ejemplo, de algunos cánceres de cabeza y cuello.

Desafortunadamente, otras células del cuerpo humano que normalmente también se dividen rápidamente (como el revestimiento del estómago y el cabello) también se ven afectadas por la quimioterapia. Por esta razón, muchos agentes de quimioterapia inducen efectos secundarios indeseables como náuseas, vómitos, anemia, caída del cabello u otros síntomas. Estos efectos secundarios son temporales y existen medicamentos que pueden ayudar a aliviar muchos de estos efectos secundarios. A medida que nuestro conocimiento ha ido creciendo, los investigadores han ideado agentes quimioterapéuticos más nuevos que no solo son mejores para destruir las células cancerosas, sino que también tienen menos efectos secundarios para el paciente.

La quimioterapia se administra a los pacientes de diversas formas. Algunos incluyen píldoras y otros se administran por vía intravenosa u otra inyección. Para la quimioterapia inyectable, el paciente va al consultorio del médico o al hospital para recibir tratamiento. Otros agentes quimioterapéuticos requieren una infusión continua en el torrente sanguíneo, las 24 horas del día. Para estos tipos de quimioterapia, se realiza un procedimiento quirúrgico menor para implantar una pequeña bomba que usa el paciente. Luego, la bomba administra lentamente el medicamento. En muchos casos, se coloca un puerto permanente en la vena del paciente para eliminar la necesidad de pinchazos repetidos con la aguja.

Los tumores benignos y las malformaciones también se pueden tratar mediante una variedad de métodos que incluyen cirugía, radioterapia, terapia con fármacos, ablación térmica o eléctrica, crioterapia y otros. Aunque los tumores benignos no hacen metástasis, pueden crecer y pueden reaparecer. La extirpación quirúrgica de tumores benignos tiene todas las dificultades y efectos secundarios de la cirugía en general y, a menudo, debe realizarse repetidamente para algunos tumores benignos, como adenomas hipofisarios, meningiomas del cerebro, hiperplasia prostática y otros.

El papel de los andrógenos en el desarrollo de hiperplasia prostática benigna en hombres está bien documentado (Wilson, N. Engl. J. Med. 317: 628-629, 1987). De hecho, la hiperplasia prostática benigna no se desarrolla en ausencia de los testículos (mencionado en Wendel y otros, J. Urol. 108: 116-119, 1972).

Se sabe que el bloqueo de la secreción de andrógenos testiculares por castración quirúrgica o médica (agonista de LHRH) disminuye el tamaño prostático (Auclair y otros, Biochem. Biophys. Res. Comun. 76: 855-862, 1977; Auclair y otros, Endocrinology 101: 1890-1893, 1977; Labrie y otros, Int. J. Andrología, supl. 2 (V. Hansson, ed.), Scriptor Publisher APR, págs. 303-318, 1978; Labrie y otros, J. Andrology 1: 209-228, 1980; Tremblay y Belanger, Contraception 30: 483-497, 1984; Tremblay y otros, Contraception 30: 585-598, 1984; Dube y otros, Acta Endocrinol. (Copenh) 116: 413- 417, 1987; Lacoste y otros, Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141-147, 1988; White, Ann. Surg. 22: 1-80, 1895; Faure y otros, Fertil. Steril. 37: 416-424, 1982; Labrie y otros, Endocrine Reviews 7: 67-74, 1986; Huggins y Stevens, J. Urol. 43: 705-714, 1940; Wendel y otros, J. Urol. 108: 116-119, 1972; Peters y Walsh, N. Engl. J. Med.

317: 599-604, 1987; Gabrilove y otros, J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331-1333, 1987).

Varios estudios han demostrado que el tratamiento con un antiandrógeno también disminuye el tamaño prostático (Neri y otros, Endocrinology, 82: 311-317, 1968; Neri y otros, Investigative Urology, 10: 123-130, 1972; Tunn y otros, Acta Endocrinol. (Copenh.) 91: 373-384, 1979; Seguin y otros, Mol. Cell. Endocrinol., 21: 37-41, 1981; Lefebvre y otros, The Prostate 3: 569-578, 1982; Marchetti y Labrie, J. Steroid Biochem, 29: 691-698, 1988; Lacoste y otros, Mol. Cell. Endocrinol. 56: 141-147, 1988; Tunn y otros, Invest. Urol. 18: 289-292, 1980; Scott y Wade, J. Urol. 101: 81-85, 1969; Caine y otros, J. Urol. 114: 564 - 568, 1975; Stone y otros, J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan y otros, J. Urol. 141: 534A, 1989).

La patente de EE. UU. 3,423,507 describe el uso del antiandrógeno acetato de ciproterona (1a, 2l3-metilen-6-cloro-17 a-acetoxi-6-dehidroprogesterona) para el tratamiento de la hiperplasia prostática benigna. Los antiandrógenos puros (patente de EE. UU. núm. 4,329,364) provocan un aumento en la secreción de testosterona, lo que puede resultar en un mayor grado de aromatización en estrógenos, una situación que, según los conocimientos actuales, se espera que tenga efectos negativos sobre la hiperplasia prostática (Jacobi y otros, Endocrinology 102: 1748-1755, 1978).

Varios estudios han demostrado que el tratamiento con la combinación de castración química (agonista de LHRH) y un antiandrógeno produce una mayor inhibición del tamaño prostático que cualquiera de los tratamientos usados solos (Seguin y otros, Mol. Cell. Endocrinol. 21: 37-41, 1981; Lefebvre y otros, The Prostate 3: 569-578, 1982; Marchetti y Labrie, J. Steroid Biochem. 29: 691-698, 1988.

En la próstata, así como en muchos otros tejidos, la 5a-reductasa convierte irreversiblemente la testosterona en el andrógeno más potente dihidrotestosterona (Bruchovsky y Wilson, J. Biol. Chem. 243: 2012-2021, 1968; Wilson, Handbook of Physiology 5). (sección 7), págs. 491-508, 1975). Se ha descubierto que los inhibidores de la 5 areductasa inhiben el crecimiento prostático (Brooks y otros, Endocrinology 109: 830, 1981; Brooks y otros, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 169: 67, 1982; Brooks y otros, Prostate 3:35, 1982; Wenderoth y otros, Endocrinology 113, 569-573, 1983; McConnell y otros, J. Urol. 141: 239A, 1989; Stoner, E., Lecture on the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatic hypertropy, 84a Reunión Anual de la AUA, Dallas, 8 de mayo de 1989.)

El efecto inhibidor del inhibidor de la 5 a-reductasa Merck L 652,931 sobre el desarrollo de vesículas seminales y prostáticas en ratas prepuberales se describió en Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc. abst. # 1165, pág. (314) 1989. El efecto inhibidor de MK-906 sobre la formación de dihidrotestosterona en hombres ha sido descrito en hombres por Gormley y otros, en Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. # 1225, pág. 329, 1989; Imperato-McGinley y otros, en Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. # 1639, pág. 432, 1989; Geller y Franson, en Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. # 1640, pág. 432, 1989 y Tenover y otros, en Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. # 583, pág. 169, 1989. La actividad de los inhibidores de la 5 a-reductasa N,N-dietil-4-metil-3-oxo-4-aza-5.alfa.-androstano-17.beta.-carboxamida (4-MA) y 6-metileno-4-pregneno-3,20-diona (LY 207320) ha sido descrita por Toomey y otros, Proc. 71st Annual Meeting of Endocr. Soc., abst. # 1226, pág. 329, 1989.

Además del conocido efecto de los andrógenos sobre el crecimiento prostático, hay muchos estudios que muestran que los estrógenos también juegan un papel en la proliferación de la próstata (Walsh y Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093-1097, 1976; Robinette y otros, Invest. Urol. 15: 425-432, 1978; Moore y otros, J. Clin. Invest. 63: 351-257, 1979). Además, se ha demostrado que los estrógenos potencian el crecimiento prostático inducido por andrógenos en el perro (Walsh y Wilson, J. Clin. Invest. 57: 1093-1097, 1976; Jacobi y otros, Endocrinology 102: 1748-1755, 1978; Tunn y otros, Urol. Int. 35: 125-140, 1980). Una posible explicación de este efecto potenciador de los estrógenos sobre el crecimiento prostático inducido por andrógenos es la observación de que se ha demostrado que el 1713-estradiol aumenta la unión de andrógenos en la próstata de perros (Moore y otros, J. Clin. Invest. 63: 351 -357, 1979).

Se ha demostrado que el antiestrógeno Tamoxifeno mejora la hiperplasia prostática benigna inducida por esteroides en el perro (Funke y otros, Acta Endocrinol. 100: 462-472, 1982). La administración del antiestrógeno Tamoxifeno en asociación con el antiandrógeno acetato de ciproterona esteroide en pacientes que padecían hiperplasia prostática benigna mostró efectos beneficiosos sobre los síntomas de la enfermedad (Di Silverio y otros, en Ipertrofia Prostatica Benigna (F. Di Silverio, F. Neumann y M. Tannenbaum, eds), Excerpta Medica, págs. 117-125, 1986). En la patente de EE. UU. 4,310,523, se propone que una combinación de un antiandrógeno y un antiestrógeno es efectiva para la profilaxis y/o terapia de la hiperplasia prostática benigna. El tamoxifeno, sin embargo, tiene una actividad estrogénica intrínseca que limita su efectividad.

La formación de estrógenos como resultado de la aromatización de andrógenos ocurre en varios sitios. En el hombre, se ha demostrado la aromatización de andrógenos en los testículos, tejido adiposo y muscular, piel, hígado, cerebro y próstata (Schweikert y otros, J. Clin. Endocrinol. Metab. 40: 413-417, 1975; Folker y James, J. Steroid Biochem. 49: 687 - 690, 1983; Longcope y otros, J. Clin. Endocrinol. Metab. 46: 146-152, 1978; Lacoste y Labrie, datos no publicados; Stone y otros, The Prostate 9: 311-318, 1986; Stone y otros, Urol. Res. 15: 165-167, 1987). Existe evidencia de una producción aumentada de estrógenos en el tejido prostático de pacientes con hiperplasia prostática benigna (Stone y otros, The Prostate 9: 311-318, 1986). Tales datos indican que la formación local de estrógenos puede desempeñar un papel crucial en la estimulación del crecimiento prostático en exceso de la acción predicha por los estrógenos circulantes.

La patente de EE. UU. Núm. 4,472,382 describe el tratamiento de BPH con un antiandrógeno y ciertos péptidos que actúan como agonistas de LH-RH. La patente de EE. UU. Núm. 4,596,797 describe inhibidores de aromatasa como un método de profilaxis y/o tratamiento de la hiperplasia prostática. La patente de EE. UU. Núm. 4,760,053 describe un tratamiento de ciertos cánceres que combina un agonista de LHRH con un antiandrógeno y/o un antiestrógeno y/o al menos un inhibidor de la biosíntesis de esteroides sexuales. La patente de EE. UU. 4,775,660 describe un método para tratar el cáncer de mama con una terapia de combinación que puede incluir la prevención quirúrgica o química de las secreciones ováricas y la administración de un antiandrógeno y un antiestrógeno.

La patente de EE. UU. 4,659,695 describe un método de tratamiento del cáncer de próstata en animales machos susceptibles, incluidos humanos cuyas secreciones hormonales testiculares se bloquean por medios quirúrgicos o químicos, por ejemplo, mediante el uso de un agonista de LHRH, que comprende la administración de un antiandrógeno, por ejemplo, flutamida, en asociación con al menos un inhibidor de la biosíntesis de esteroides sexuales, por ejemplo, aminoglutetimida y/o ketoconazol. Las descripciones de cada una de las patentes mencionadas anteriormente (US 4,472,382, 4,596,797, 4,760,053, 4,775,660, y 4,659,695).

La BPH es causada por una mayor actividad de los andrógenos y los estrógenos. Debido a tal etiología dual de la BPH, las terapias hormonales propuestas han sido menos que satisfactorias y todas han sido impredecibles mientras que, con frecuencia, han causado efectos secundarios inaceptables. Además, el tratamiento de la técnica anterior rara vez da como resultado una disminución del volumen prostático por encima de aproximadamente el 20 al 30 % con efectos inconsistentes sobre la sintomatología (Scott y Wade, J. Urol. 101: 81-85, 1969; Caine y otros, J. Urol.

114: 564 - 568, 1975; Peters y Walsh, New Engl. J. Med. 317: 599-604, 1987; Gabrilove y otros, J. Clin. Endocrinol. Metab. 64: 1331-1333, 1987; Stone y otros, J. Urol. 141: 240A, 1989; Clejan y otros, J. Urol. 141: 534A, 1989; Stoner, E., Lecture on the role of 5 a-reductase inhibitor in benign prostatic hypertrophy, 84a Reunión Anual de la AUA, Dallas, 8 de mayo de 1989.

La elucidación del mecanismo resumido anteriormente ha resultado en el desarrollo reciente de agentes efectivos para controlar, y en muchos casos revertir, el avance de la BPH. A la vanguardia de estos agentes se encuentra el producto PROSCAR® (finasterida) de Merck & Co., Inc. El efecto de este compuesto es inhibir la enzima testosterona 5a reductasa, que convierte la testosterona en 5a-dihidrotesterona, lo que da como resultado una tasa reducida de agrandamiento prostático y, a menudo, una reducción de la masa prostática.

El desarrollo de tales agentes como PROSCAR® es un buen augurio para el control a largo plazo de la BPH. Sin embargo, como se puede apreciar por el largo desarrollo del síndrome, su reversión tampoco es inmediata. Mientras tanto, los hombres que padecen BPH continúan sufriendo y, de hecho, pueden perder la esperanza de que los agentes estén actuando con la suficiente rapidez.

En respuesta a este problema, una solución es identificar compuestos farmacéuticamente activos que complementen las terapias de acción más lenta proporcionando un alivio agudo. Los agentes que inducen la relajación del tejido del tracto urinario inferior, al unirse a los receptores adrenérgicos alfa 1, reduciendo así el tono adrenérgico aumentado debido a la enfermedad, serían buenos candidatos para esta actividad. Por tanto, uno de tales agentes es la alfuzosina, que se informa en el documento EP 0204597 para inducir la micción en casos de hiperplasia prostática. Asimismo, en el documento WO 92/00073, se informó sobre la capacidad selectiva del enantiómero R(+) de la terazosina para unirse a receptores adrenérgicos del subtipo alfa1. Además, en el documento WO 92/16213, se describieron combinaciones de compuestos inhibidores de la S a -reductasa y bloqueadores del receptor adrenérgico alfa 1 (terazosina, doxazosina, prazosina, bunazosina, indoramina, alfulzosina). Sin embargo, no se proporcionó información sobre la especificidad por el subtipo alfa 1d, alfa 1b o alfa 1a de estos compuestos, ya que se desconocen estos datos y su relevancia para el tratamiento de la BPH. La terapia actual para la BPH usa antagonistas alfa 1 no selectivos existentes, tal como prazosina (Minipress, Pfizer), terazosina (Hytrin, Abbott) o mesilato de doxazosina (Cardura, Pfizer). Estos antagonistas no selectivos padecen efectos secundarios relacionados con el antagonismo de los receptores alfa 1d y alfa 1b en la vasculatura periférica, por ejemplo, hipotensión y síncope.

La clonación del receptor adrenérgico alfa 1a humano (ATCC CRL 11140) y el uso de un ensayo de cribado que utiliza el receptor alfa 1a humano clonado permite la identificación de compuestos que interactúan específicamente con el receptor adrenérgico alfa 1a humano. [Publicaciones de Solicitud Internacional PCT Núms. WO94/08040, publicada el 14 de abril de 1994 y WO94/10989, publicada el 26 de mayo de 1994]

El documento WO 96/14846, publicado el 23 de mayo de 1996, describe un amplio género de compuestos de dihidropirimidina y propone su uso como antagonistas selectivos para los receptores alfa 1a humanos. Los compuestos se ensayaron mediante el uso de receptores alfa adrenérgicos humanos clonados, y se describió que algunos de los compuestos así ensayados eran antagonistas de alfa 1a selectivos.

Existen otras afecciones que involucran elementos celulares no deseados donde es deseable la eliminación celular selectiva. Por ejemplo, las enfermedades cardíacas y los accidentes cerebrovasculares comúnmente son causados por la aterosclerosis, que es una lesión proliferativa de elementos fibrograsos y del músculo liso modificado que distorsionan la pared de los vasos sanguíneos, estrechan la luz, restringen el flujo sanguíneo, predisponen a la formación de coágulos sanguíneos focales y, en última instancia, conducen a bloqueo e infarto. Existen varios tratamientos para la aterosclerosis, como los injertos de derivación; injertos artificiales; angioplastia con recanalización, curetaje, radiación, láser u otra eliminación; farmacoterapia para inhibir la aterosclerosis mediante la reducción de lípidos; terapias anticoagulantes; y medidas generales de dieta, ejercicio y estilo de vida. Se necesita un método para eliminar las lesiones ateroscleróticas sin el riesgo y los efectos secundarios de los procedimientos quirúrgicos.

Otros ejemplos de elementos celulares no deseados donde es deseable la eliminación celular selectiva incluyen crecimientos inducidos por virus, tales como verrugas. Otro ejemplo son las masas inflamatorias hipertróficas que se encuentran en afecciones inflamatorias y las cicatrices hipertróficas o queloides. Otros ejemplos más se encuentran en contextos cosméticos tales como la eliminación de vello no deseado, por ejemplo, vello facial, o para el encogimiento de áreas de tejido no deseado con fines cosméticos, como en la dermis facial y los tejidos conectivos o en las dermas y el tejido conectivo de las extremidades.

Otros ejemplos de elementos celulares no deseados en los que es deseable la eliminación celular selectiva o la inhibición de la proliferación celular incluyen estenosis y reestenosis de cualquier arteria, válvula o canal en el sistema circulatorio, incluidas, entre otras, válvulas (por ejemplo, estenosis aórtica que implica el estrechamiento del orificio de la válvula aórtica), arterias coronarias (por ejemplo, esclerosis ostial coronaria que implica el estrechamiento de la boca de las arterias coronarias), arterias carótidas y arterias renales. Otros ejemplos incluyen la inhibición o eliminación del crecimiento o acumulación celular no deseado que causa la ocultación parcial o completa de dispositivos médicos tales como stents colocados o implantados dentro de un vaso sanguíneo para tratar estenosis, constricción o aneurismas en el mismo o dentro del tracto urinario y en los conductos biliares.

Otros ejemplos más serán obvios para los expertos en la técnica. En todos o la mayoría de estos ejemplos, existe la necesidad de tratamientos que puedan eliminar o destruir los elementos celulares no deseados sin los riesgos y efectos secundarios de las terapias convencionales o eliminar los elementos celulares no deseados con más precisión.

A lo largo de esta descripción, incluida la descripción anterior de la técnica relacionada, todos y cada uno de los documentos disponibles públicamente descritos en este documento, incluidas todas y cada una de las solicitudes de patente publicadas de patente de EE. UU. La descripción anterior de la técnica relacionada no pretende en modo alguno admitir que cualquiera de los documentos descritos en la misma, incluidas las solicitudes de patente estadounidenses pendientes, sean una técnica anterior a la presente descripción. Además, la descripción en el presente documento de cualquier desventaja asociada con los productos, métodos y/o aparatos descritos no pretende limitar las modalidades. De hecho, los aspectos de las modalidades pueden incluir ciertas características de los productos, métodos y/o aparatos

Resumen de la descripción

Sigue existiendo una necesidad en la técnica de nuevos tratamientos menos tóxicos para tratar elementos celulares no deseados. Las modalidades de la invención definidas en las reivindicaciones satisfacen estas necesidades. La invención se define en las reivindicaciones. Esta descripción se basa en parte en el descubrimiento de que ciertos péptidos NTP, incluido un péptido específico descrito por la secuencia de aminoácidos Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu, son capaces de tratar y/o destruir proliferaciones celulares no deseadas en mamíferos cuando se combinan con al menos un agente activo adicional capaz de tratar síntomas de, reducir, bloquear, inhibir, tratar y/o destruir proliferaciones celulares no deseadas en mamíferos. Estas proliferaciones celulares no deseadas incluyen, entre otros, tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata), vello facial no deseado, verrugas y tejido graso no deseado.

Esta descripción también se basa en parte en el descubrimiento de que ciertos péptidos NTP, incluido un péptido específico descrito por la secuencia de aminoácidos Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ne-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu, ya sea solo o en combinación con un agente activo adicional capaz de tratar síntomas de, reducir, bloquear, inhibir, tratar y/o destruir proliferaciones celulares no deseadas en mamíferos, proporciona una mejora inesperada en pacientes que posteriormente se someten a tratamiento quirúrgico

Algunas descripciones están dirigidas a composiciones y métodos de tratamiento de proliferaciones celulares no deseadas (tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata), vello facial no deseado, verrugas y tejido graso no deseado) que comprenden la administración a un mamífero que lo necesite de una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un péptido NTP, en combinación con al menos un agente activo adicional capaz de tratar y/o destruir proliferaciones celulares no deseadas en mamíferos. Las composiciones se pueden administrar por vía intramuscular, oral, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intratumoral, intralesional, intradérmica, intratecal, intranasal, intraocular, intraarterial, tópica, transdérmica, mediante un aerosol, infusión, inyección en bolo, dispositivo de implante, sistema de liberación sostenida etc. Alternativamente, los péptidos NTP pueden expresarse in vivo mediante la administración de un gen que expresa los péptidos NTP, mediante la administración de una vacuna que induce tal producción o mediante la introducción de células, bacterias o virus que expresan el péptido in vivo, debido a una modificación genética o de otra manera. En esta descripción alternativa, y en las descripciones discutidas anteriormente, el agente activo adicional puede administrarse junto o separadamente del péptido NTP o del agente que expresa el péptido NTP in vivo.

Algunas descripciones incluyen métodos para tratar proliferaciones celulares no deseadas (tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata), vello facial no deseado, verrugas y tejido graso no deseado) que comprenden administrar a un mamífero que lo necesite una cantidad terapéuticamente efectiva de una composición que comprende un péptido NTP, en combinación con al menos un agente activo adicional capaz de tratar y/o destruir proliferaciones celulares no deseadas en mamíferos, seguido de tratamiento quirúrgico de las proliferaciones celulares no deseadas.

Tanto la descripción general anterior como la siguiente descripción detallada son ilustrativas y explicativas y están destinadas a proporcionar una explicación adicional de las descripciones según se reivindica. Otros objetos, ventajas y características serán evidentes para los expertos en la técnica a partir de la siguiente descripción detallada de las descripciones.

Descripción detallada

Antes de que se describan las presentes proteínas, secuencias de nucleótidos, péptidos, composiciones, agentes activos, etc., y métodos, se entiende que esta invención no se limita a la metodología, protocolos, líneas celulares, vectores y reactivos particulares descritos, ya que estos pueden variar. También debe entenderse que la terminología usada en la presente descripción tiene el propósito de describir únicamente modalidades particulares, y no pretende limitar el alcance de las presentes modalidades que estarán limitadas únicamente por las reivindicaciones adjuntas.

Los términos y frases usados en la presente descripción se definen como se establece a continuación, a menos que se especifique lo contrario. A través de esta descripción, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes plurales, a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Así, por ejemplo, una referencia a "una célula huésped" incluye una pluralidad de tales células huésped, y una referencia a "un anticuerpo" es una referencia a uno o más anticuerpos y equivalentes de los mismos conocidos por los expertos en la técnica, y así sucesivamente.

Se puede hacer referencia a los aminoácidos y residuos de aminoácidos descritos en la presente descripción de acuerdo con el código aceptado de una o tres letras proporcionado en la tabla siguiente.

Tabla 1

La expresión "péptido NTP" se refiere a péptidos que comprenden secuencias de aminoácidos correspondientes a al menos una parte de la secuencia de aminoácidos de las proteínas de la cadena neural o fragmentos de proteínas de la cadena neural e incluye homólogos, derivados, variantes, proteínas de fusión y miméticos de péptidos de tales péptidos a menos que el contexto indique lo contrario. La expresión "péptido NTP" también se refiere a un péptido u otra composición de materia reivindicada en una o más de las siguientes publicaciones de solicitud de patente de EE. UU. Núms. 2007/0237780 (ahora abandonada); 2003/0054990 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,172,893); 2003/0096350 (ahora patente de EE. UU. núm. 6,924,266); 2003/0096756 (ahora patente de EE. UU. núm.

7,192,929); 2003/0109437 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,241,738); 2003/0166569 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,317,077); y 2005/0032704 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,408,021). Los péptidos específicos se enumeran a continuación.

1)

SEQ ID NO. 1: MEFSLLLPRLECNGA o Met-Glu-Phe-Ser

Leu-Leu-Leu-Pro-Arg-Leu-Glu-Cys-Asn-Gly-Ala

2)

SEQ ID NO. 2: GAISAHRNLRLPGSS o Gly-Ala-Ile-Ser-Ala-His-Arg-Asn-Leu-Arg-Leu-Pro- Gly-Ser-Ser

3)

SEQ ID NO. 3: DSPASASPVAGITGMCT o Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met-Cys-Thr

4)

SEQ ID NO.4: MCTHARLILYFFLVEM o Met-Cys-Thr-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met

5)

SEQ ID NO.5: YFFLVEMEFLH o Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Glu-Phe-Leu-His

6)

SEQ ID NO.6: VGQAGLELPTS o Val-Gly-Gln-Ala-Gly-Leu-Glu-Leu-Pro-Thr-Ser

7)

SEQ ID NO.7: DDPSVSASQSARYRTGH o Asp-Asp-Pro-Ser-Val-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Arg-Tyr-Arg-Thr-Gly-His

8)

SEQ ID NO.8: TGHHARLCLANFCG o Thr-Gly-His-His-Ala-Arg-Leu-Cys-Leu-Ala-Asn-Phe-Cys-Gly

9)

SEQ ID NO.9: ANFCGRNRVSLMCPSWS o Ala-Asn-Phe-Cys-Gly-Arg-Asn-Arg-Val-Ser-Leu-Met-Cys-Pro-Ser-Trp-Ser

10)

SEQ ID NO.10: PELKQSTCLSLPKCWDYRR o Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

11)

SEQ ID NO.11: LKQSTCLSLPKCWDYRR o Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

12)

SEQ ID NO.12: STCLSLPKCWDYRR o Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

13)

SEQ ID NO.13: LSLPKCWDYRR o Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

SEQ ID NO.14: KCWDYRRAAVPGL o Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu

15)

SEQ ID NO. 15: KCWDYRRAAVPGLFILFFL o Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu

16)

SEQ ID NO.16: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP o Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro

17)

SEQ ID NO.17: KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS o Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser

18) SEQ ID NO.18: WDYRR o Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

19)

SEQ ID NO.19: FILFFLRHRCPTL o Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu

20)

SEQ ID NO.20: FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS o Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser

21)

SEQ ID NO.21: HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP

o His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Ser-Thr-Pro-Glu-Ile-Lys-His-Pro

22)

SEQ ID NO.22: PASASQVAGTKDMH o Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met-His

23)

SEQ ID NO.23: DMHHYTWLIFIFIFNFLR o Asp-Met-His-His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg

24)

SEQ ID NO.24: HYTWLIFIFIFNFLRQSLN o His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg-Gln-Ser-Leu-Asn

25)

SEQ ID NO.25: SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPP RLANF o Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Arg-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe

26)

SEQ ID NO.26: PGFKLFSCPSLLSSWDYRR o Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

27)

SEQ ID NO.27: FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF o Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe

28)

SEQ ID NO.28: FSCPSLLSSWDYRR o Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

29)

SEQ ID NO.29: SLLSSWDYRR o Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

30) SEQ ID NO.30: SSWDY o Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

31) SEQ ID NO.31: SSWDYRR o Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

32)

SEQ ID NO.32: SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM o

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met

33)

SEQ ID NO.33: FVFLVEMGFTM o Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met

34)

SEQ ID NO.34: MGFTMFARLILISGPCDLPASAS o Met-Gly-Phe-Thr-Met-Phe-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Ile-Ser-Gly-Pro-Cys-Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser

35) SEQ ID NO.35: ISGPC o Ile-Ser-Gly-Pro-Cys

36)

SEQ ID NO.36: DLPASASQSAGITGVSH o Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val-Ser-His

37)

SEQ ID NO.37: GVSHHARLIFNFCLFEM o Gly-Val-Ser-His-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met

38)

SEQ ID NO.38: NFCLFEMESH o Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met-Glu-Ser-His

39)

SEQ ID NO.39: SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLP PHPANF o Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Pro-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe

40)

SEQ ID NO.40: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG o Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

41)

SEQ ID NO.41: FSCLSLPSSWDYGH o Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His

42)

SEQ ID NO.42: LSLPSSWDY o Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

43)

SEQ ID NO.43:

SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR o

Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe-Cys-Ile-Phe-Ile-Arg-Gly-Gly-Val-Ser-Pro-Tyr-Leu-Ser-Gly-Trp-Ser-Gln-Thr-Pro-Asp-Leu-Arg

44)

SEQ ID NO.44: PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR o Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

45)

SEQ ID NO.45: PELKQSTCLSLPKCWDYRR o Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

46)

SEQ ID NO.46: PPGLKRFSCLSLPSSWDYG o Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly

47)

SEQ ID NO.47: FSCLSLPSSWDYGH o Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His

48)

SEQ ID NO.48: STCLSLPKCWDYRR o Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

49)

SEQ ID NO.49: FSCPSLLSSWDYRR o Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

50)

SEQ ID NO.50: LSLPSSWDY o Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

51)

SEQ ID NO.51: LSLPKCWDYRR o Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-T rp-Asp-Tyr-Arg-Arg

52)

SEQ ID NO.52: SLLSSWDYRR o Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

53)

SEQ ID NO.53: LPSSWDYRR o Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg

54) SEQ ID NO.54: SSWDYRR o Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg 55) SEQ ID NO.55: SSWDY o Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr

56)

SEQ ID NO.56: SSWDYRRFILFFL o Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu

57)

SEQ ID NO.57: WDYRRFIFNFL o Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu

58) SEQ ID NO.58: FNFCLF o Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe 59) SEQ ID NO.59: FIFNFL o Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu 60)

SEQ ID NO.60: PASASPVAGITGM o Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met

61)

SEQ ID NO.61: PASASQVAGTKDM o Pro-Ala-Ser-Ala-Ser -Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met

62)

SEQ ID NO.62: PASASQSAGITGV o Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val

63)

SEQ ID NO.63: PASASPVAG o Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly

64) SEQ ID NO.64: FFLVEM o Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met 65)

SEQ ID NO.65: SVTQAGVQW o Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp

66)

SEQ ID NO.66: IDQQVLSRIKLEIKRCL o Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu- Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

67)

SEQ ID NO.67: LSRIKLEIK o Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys

68)

SEQ ID NO.68: GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM o Gly-Asp-His-Gly-Arg-Pro-Asn-Leu-Ser-Arg-Leu-Lys-Leu-Ala-Ile-Lys-Tyr-Glu-Val-Lys-Lys-Met

69)

SEQ ID NO.69: QQSIAVKFLAVFGVSI o Gln-Gln-Ser-Ile-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Ala-Val- Phe-Gly-Val-Ser-Ile

70)

SEQ ID NO.70: GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL o Gly-Leu-Leu-Phe-Pro-Val-Phe-Ser-Val-Cys-Tyr-Leu-Ile-Ala-Pro-Lys-Ser-Pro-Leu-Gly-Leu

71) SEQ ID NO. 71: MMVCWNRFGKWVYFI o Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile 72)

SEQ ID NO. 72: SAIFNFGPRYLYHGV o Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu- Tyr-His-Gly-Val

73)

SEQ ID NO. 73: PFYFLILVRIISFLI o Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-Ile-Ser-Phe-Leu-Ile

74)

SEQ ID NO. 74: GDMEDVLLNCTLLKR o Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg

75)

SEQ ID NO. 75: SSRFRFWGALVCSMD o Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp

76)

SEQ ID NO. 76: SCRFSRVAVTYRFIT o Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr- Arg-Phe-Ile-Thr

77)

SEQ ID NO. 77: LLNIPSPAVWMARNT o Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr

78)

SEQ ID NO. 78: MAQSRLTATSASRVQ o Met-Ala-Gln-Ser-Arg-Leu-Thr-Ala-Thr-Ser-Ala-Ser-Arg-Val-Gln

79)

SEQ ID NO. 79: AILLSQPPKQLGLRA o Ala-Ile-Leu-Leu-Ser-Gln-Pro-Pro-Lys-Gln-Leu-Gly-Leu-Arg-Ala

80)

SEQ ID NO. 80: PANTPLIFVFSLEAG o Pro-Ala-Asn-Thr-Pro-Leu-Ile-Phe-Val-Phe-Ser-Leu- Glu-Ala-Gly

81)

SEQ ID NO. 81: FHHICQAGLKLLTSG o Phe-His-His-Ile-Cys-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Thr-Ser-Gly

82)

SEQ ID NO. 82: DPPASAFQSAGITGV o Asp-Pro-Pro-Ala-Ser-Ala-Phe-Gln-Ser-Ala-Gly- Ile-Thr-Gly-Val

83)

SEQ ID NO. 83: SHLTQPANLDKKICS o Ser-His-Leu-Thr-Gln-Pro-Ala-Asn-Leu-Asp-Lys-Lys-Ile-Cys-Ser

84)

SEQ ID NO. 84: NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK o Asn-Gly-Gly-Ser-Cys-Tyr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Ala-Ser-Cys-Asn-Pro-Ser-Lys

85)

SEQ ID NO. 85: MWTLKSSLVLLLCLT o Met-Trp-Thr-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Leu-Cys-Leu-Thr

86)

SEQ ID NO. 86: CSYAFMFSSLRQKTS o Cys-Ser-Tyr-Ala-Phe-Met-Phe-Ser-Ser-Leu-Arg-Gln-Lys-Thr-Ser

87)

SEQ ID NO. 87: EPQGKVPCGEHFRIR o Glu-Pro-Gln-Gly-Lys-Val-Pro-Cys-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Ile-Arg

88)

SEQ ID NO. 88: QNLPEHTQGWLGSKW o Gln-Asn-Leu-Pro-Glu-His-Thr-Gln-Gly-Trp-Leu-Gly-Ser-Lys-Trp

89)

SEQ ID NO. 89: LWLLFAVVPFVILKC o Leu-Trp-Leu-Leu-Phe-Ala-Val-Val-Pro-Phe-Val-Ile-Leu-Lys-Cys

90)

SEQ ID NO. 90: QRDSEKNKVRMAPFF o Gln-Arg-Asp-Ser-Glu-Lys-Asn-Lys-Val-Arg-Met-Ala-Pro-Phe-Phe

91)

SEQ ID NO. 91: LHHIDSISGVSGKRMF o Leu-His-His-Ile-Asp-Ser-Ile-Ser-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Arg-Met-Phe

92)

SEQ ID NO. 92: EAYYTMLHLPTTNRP o Glu-Ala-Tyr-Tyr-Thr-Met-Leu-His-Leu-Pro-Thr-Thr-Asn-Arg-Pro

93)

SEQ ID NO. 93: KIAHCILFNQPHSPR o Lys-Ile-Ala-His-Cys-Ile-Leu-Phe-Asn-Gln-Pro-His- Ser-Pro-Arg

94)

SEQ ID NO. 94: SNSHSHPNPLKLHRR o Ser-Asn-Ser-His-Ser-His-Pro-Asn-Pro-Leu-Lys-Leu-His-Arg-Arg

95)

SEQ ID NO. 95: SHSHNRPRAYILITI o Ser-His-Ser-His-Asn-Arg-Pro-Arg-Ala-Tyr-Ile-Leu-Ile-Thr-Ne

96)

SEQ ID NO. 96: LPSKLKLRTHSQSHH o Leu-Pro-Ser-Lys-Leu-Lys-Leu-Arg-Thr-His-Ser-Gln-Ser-His-His

97)

SEQ ID NO. 97: NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR o Asn-Pro-Leu-Ser-Arg-Thr-Ser-Asn-Ser-Thr-Pro-Thr-Asn-Ser-Phe-Leu-Met-Thr-Ser-Ser-Lys-Pro-Arg

98)

SEQ ID NO. 98: SSSLGLPKCWDYRHE o Ser-Ser-Ser-Leu-Gly-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-His-Glu

99)

SEQ ID NO. 99: LLSLALMINFRVMAC o Leu-Leu-Ser-Leu-Ala-Leu-Met-Ile-Asn-Phe-Arg-Val-Met-Ala-Cys

100)

SEQ ID NO. 100: TFKQHIELRQKISIV o Thr-Phe-Lys-Gln-His-Ne-Glu-Leu-Arg-Gln-Lys-Ile-Ser-Ile-Val

101)

SEQ ID NO. 101: PRKLCCMGPVCPVKI o Pro-Arg-Lys-Leu-Cys-Cys-Met-Gly-Pro-Val-Cys-Pro-Val-Lys-Ile

102)

SEQ ID NO. 102: ALLTINGHCTWLPAS o Ala-Leu-Leu-Thr-Ile-Asn-Gly-His-Cys-Thr-Trp-Leu-Pro-Ala-Ser

103)

SEQ ID NO. 103: MFVFCLILNREKIKG o Met-Phe-Val-Phe-Cys-Leu-Ile-Leu-Asn-Arg-Glu-Lys-Ile-Lys-Gly

104)

SEQ ID NO. 104: GNSSFFLLSFFFSFQ o Gly-Asn-Ser-Ser-Phe-Phe-Leu-Leu-Ser-Phe-Phe-Phe-Ser-Phe-Gln

105)

SEQ ID NO. 105: NCCQCFQCRTTEGYA o Asn-Cys-Cys-Gln-Cys-Phe-Gln-Cys-Arg-Thr-Thr-Glu-Gly-Tyr-Ala

106)

SEQ ID NO. 106: VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT o Val-Glu-Cys-Phe-Tyr-Cys-Leu-Val-Asp-Lys-Ala-Ala-Phe-Glu-Cys Trp-Trp-Phe-Tyr-Ser-Phe-Asp-Thr

107)

SEQ ID NO. 107: MEPHTVAQAGVPQHD o Met-Glu-Pro-His-Thr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Val-Pro-Gln-His-Asp

108)

SEQ ID NO. 108: LGSLQSLLPRFKRFS o Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Ser-Leu-Leu-Pro-Arg-Phe-Lys-Arg-Phe-Ser

109)

SEQ ID NO. 109: CLILPKIWDYRNMNT o Cys-Leu-Ile-Leu-Pro-Lys-Ile-Trp-Asp-Tyr-Arg-Asn-Met-Asn-Thr

110)

SEQ ID NO. 110: ALIKRNRYTPETGRKS o Ala-Leu-Ile-Lys-Arg-Asn-Arg-Tyr-Thr-Pro-Glu-Thr-Gly-Arg-Lys-Ser

111)

SEQ ID NO. 111: IDQQVLSRI o Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile

112)

SEQ ID NO. 112: KLEIKRCL o Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

113) SEQ ID NO. 113: VLSRIK o Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys

114) SEQ ID NO. 114: RIKLEIK o Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys

115)

SEQ ID NO. 115: VLSRIKLEIKRCL o Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu; y

116)

SEQ ID NO. 116: IDQQVLSRIKLEI o Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile.

La expresión "péptido NTP" también incluye preferentemente (pero no se limita a) las secuencias de aminoácidos de las SEQ ID NO: 1 a 116.

El término "fragmento" se refiere a una proteína o polipéptido que consiste en una subsecuencia continua de la secuencia de aminoácidos de una proteína o péptido e incluye fragmentos de origen natural tales como variantes de corte y empalme y fragmentos resultantes de la actividad de proteasa in vivo de origen natural. Un fragmento de este tipo se puede truncar en el extremo amino, el extremo carboxi y/o internamente (por ejemplo, mediante corte y empalme natural). Tales fragmentos pueden prepararse con o sin una metionina amino terminal. El término "fragmento" incluye fragmentos, idénticos o diferentes, de la misma proteína o péptido, con una secuencia de aminoácidos contigua en común o no, unidos entre sí, ya sea directamente o mediante un enlazador. Una persona que tenga una experiencia normal en la técnica será capaz de seleccionar un fragmento adecuado para usar en las descripciones sin experimentación indebida mediante el uso de las pautas y procedimientos descritos en la presente descripción.

El término "variante" se refiere a una proteína o polipéptido en el que están presentes una o más sustituciones, deleciones y/o inserciones de aminoácidos en comparación con la secuencia de aminoácidos de una proteína o péptido e incluye variantes alélicas naturales o variantes de corte y empalme alternativo de una proteína o péptido. El término "variante" incluye la sustitución de uno o más aminoácidos en una secuencia de péptidos con uno o más aminoácidos similares u homólogos o con uno o varios aminoácidos diferentes. Hay muchas escalas en las que los aminoácidos pueden clasificarse como similares u homólogos. (Gunnar von Heijne, Sequence Analysis in Molecular Biology, pág. 123-39 (Academic Press, Nueva York, N.Y. 1987). Las variantes preferidas incluyen sustituciones de alanina en una o más de las posiciones de aminoácidos. Otras sustituciones preferidas incluyen sustituciones conservadoras que tienen poco o ningún efecto sobre la carga neta global, la polaridad o la hidrofobicidad de la proteína. Las sustituciones conservadoras se establecen en la Tabla 2 a continuación.

Tabla 2

La Tabla 3 establece otro esquema de sustitución de aminoácidos:

Tabla 3

Otras variantes pueden consistir en sustituciones de aminoácidos menos conservadoras, como la selección de residuos que difieren más significativamente en su efecto sobre el mantenimiento de (a) la estructura del esqueleto polipeptídico en el área de la sustitución, por ejemplo, como una conformación de hoja o helicoidal, (b) la carga o hidrofobicidad de la molécula en el sitio objetivo, o (c) el volumen de la cadena lateral. Las sustituciones que en general se espera que tengan un efecto más significativo sobre la función son aquellas en las que (a) glicina y/o prolina se sustituyen por otro aminoácido o se eliminan o insertan; (b) un residuo hidrófilo, por ejemplo, serilo o treonilo, se sustituye por (o por) un residuo hidrófobo, por ejemplo, leucilo, isoleucilo, fenilalanilo, valilo o alanilo; (c) un residuo de cisteína se sustituye por (o por) cualquier otro residuo; (d) un residuo que tiene una cadena lateral electropositiva, por ejemplo, lisilo, arginilo o histidilo, se sustituye por (o por) un residuo que tiene una carga electronegativa, por ejemplo, glutamilo o aspartilo; o (e) un residuo que tiene una cadena lateral voluminosa, por ejemplo, fenilalanina, se sustituye por (o por) uno que no tiene tal una cadena lateral, por ejemplo, glicina. Otras variantes incluyen aquellas diseñadas para generar un nuevo sitio(s) de glicosilación y/o fosforilación, o aquellas diseñadas para eliminar un sitio(s) de glicosilación y/o fosforilación existente. Las variantes incluyen al menos una sustitución de aminoácido en un sitio de glicosilación, un sitio de escisión proteolítica y/o un residuo de cisteína. Las variantes también incluyen proteínas y péptidos con residuos de aminoácidos adicionales antes o después de la secuencia de aminoácidos de la proteína o del péptido en los péptidos enlazadores. Por ejemplo, puede añadirse un residuo de cisteína en los terminales amino y carboxi de un péptido NTP para permitir la ciclación del péptido mediante la formación de un enlace disulfuro. El término "variante" también abarca polipéptidos que tienen la secuencia de aminoácidos de un péptido NTP con al menos uno y hasta 25 o más aminoácidos adicionales flanqueando el extremo 3” o 5' del péptido.

El término "derivado" se refiere a una proteína o polipéptido químicamente modificado que ha sido químicamente modificado ya sea por procesos naturales, tales como procesamiento y otras modificaciones postraduccionales, pero también por técnicas de modificación química, como por ejemplo, mediante la adición de uno o más moléculas de polietilenglicol, azúcares, fosfatos y/u otras moléculas de este tipo, donde la molécula o moléculas no están unidas naturalmente a proteínas de tipo salvaje o péptidos NTP. Los derivados incluyen sales. Tales modificaciones químicas están bien descritas en textos básicos y en monografías más detalladas, así como en una voluminosa literatura de investigación, y son bien conocidas por los expertos en la técnica. Se apreciará que el mismo tipo de modificación puede estar presente en el mismo grado o en un grado variable en varios sitios de una proteína o polipéptido dado. Además, una proteína o polipéptido dado puede contener muchos tipos de modificaciones. Las modificaciones pueden ocurrir en cualquier lugar de una proteína o polipéptido, incluyendo el esqueleto peptídico, las cadenas laterales de aminoácidos y los extremos amino o carboxilo. Las modificaciones incluyen, por ejemplo, acetilación, acilación, ADP-ribosilación, amidación, unión covalente de flavina, unión covalente de un resto hemo, unión covalente de un nucleótido o derivado de nucleótido, unión covalente de un lípido o derivado de lípido, unión covalente de fosfotidilinositol, reticulación, ciclación, formación de enlaces disulfuro, desmetilación, formación de reticulaciones covalentes, formación de cisteína, formación de piroglutamato, formilación, gamma-carboxilación, glicosilación, formación de anclajes GPI, hidroxilación, yodación, metilación, miristoilación, oxidación, procesamiento proteolítico, fosforilación, prenilación, racemización, glicosilación, unión de lípidos, sulfatación, gamma-carboxilación de residuos de ácido glutámico, hidroxilación y ADP-ribosilación, selenoilación, sulfatación, adición mediada por ARN de transferencia de aminoácidos a proteínas, como arginilación y ubiquitinación. Véase, por ejemplo, Proteins--Structure And Molecular Properties, 2da Ed., TE Creighton, WH Freeman and Company, Nueva York (1993) y Wold, F., "Posttranslational Protein Modifications: Perspectives and Prospects", págs. 1-12 en Posttranslational Covalent Modification Of Proteins, B. C. Johnson, Ed., Academic Press, Nueva York (1983); Seifter y otros, Meth. Enzymol.

182: 626-646 (1990) y Rattan y otros, "Protein Synthesis: Posttranslational Modifications and Aging", Ann. N.Y. Acad. Sci. 663: 48-62 (1992). El término "derivados" incluye modificaciones químicas que dan como resultado que la proteína o polipéptido se vuelva ramificado o cíclico, con o sin ramificación. Las proteínas o polipéptidos cíclicos, ramificados y circulares ramificados pueden resultar de procesos naturales postraduccionales y también pueden ser elaborados por métodos completamente sintéticos.

El término "homólogo" se refiere a una proteína que es al menos 60 por ciento idéntica en su secuencia de aminoácidos de un péptido NTP según lo determinado por métodos estándar que se usan comúnmente para comparar la similitud en la posición de los aminoácidos de dos polipéptidos. El grado de similitud o identidad entre dos proteínas se puede calcular fácilmente mediante métodos conocidos, incluidos, entre otros, los descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, AM, ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, DW, ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Parte I, Griffin, AM y Griffin, HG, eds., Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991; y Carillo H. y Lipman, D., SI^a M, J. Applied Math., 48: 1073 (1988). Los métodos preferidos para determinar la identidad están diseñados para proporcionar la mayor coincidencia entre las secuencias probadas. Los métodos para determinar la identidad y la similitud se codifican en programas informáticos disponibles públicamente.

Los métodos de programas informáticos preferidos útiles para determinar la identidad y similitud entre dos secuencias incluyen, pero no se limitan a, el paquete de programa GCG (Devereux, J., y otros, Nucleic Acids Research, 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN y FASTA, Atschul, SF y otros, J. Molec. Biol., 215: 403-410 (1990). El programa BLAST X está disponible públicamente de NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S., y otros, NCBI NLM NIH Bethesda, Md. 20894; Altschul, S. y otros, J. Mol. Biol. 215: 403 - 410 (1990). A modo de ejemplo, mediante el uso de un algoritmo informático como GAP (Genetic Computer Group, Universidad de Wisconsin, Madison, Wis.), las dos proteínas o polipéptidos para los que se va a determinar el por ciento de identidad de secuencia se alinean para una coincidencia óptima de sus respectivos aminoácidos (el "intervalo coincidente", según lo determinado por el algoritmo).

Una penalización de apertura del hueco (que se calcula como 3 veces la diagonal promedio; la "diagonal promedio" es el promedio de la diagonal de la matriz de comparación que se está usando; la "diagonal" es la puntuación o número asignado a cada coincidencia perfecta de aminoácidos por la matriz de comparación particular) y una penalización por extensión del hueco (que normalmente es {fracción (1/10)} veces la penalización por apertura del hueco), así como una matriz de comparación como PAM 250 o BLOSUM 62 se usan junto con el algoritmo. Una matriz de comparación estándar (ver Dayhoff y otros en: Atlas of Protein Sequence and Structure, vol. 5, sup. 3 para la matriz de comparación PAM250; ver Henikoff y otros, Proc. Natl. Acad. Sci USA, 89: 10915 -10919 para la matriz de comparación BLOSUM 62) también puede ser usada por el algoritmo. A continuación, el algoritmo calcula el por ciento de identidad. Los homólogos tendrán típicamente una o más sustituciones, deleciones y/o inserciones de aminoácidos en comparación con la proteína o péptido de comparación, según sea el caso.

El término "proteína de fusión" se refiere a una proteína en la que uno o más péptidos se fusionan de manera recombinante o se conjugan químicamente (incluyendo covalente y no covalentemente) a una proteína tal como (pero no se limita a) un anticuerpo o fragmento de anticuerpo como un fragmento F.sub.ab o Fv de cadena corta. El término "proteína de fusión" también se refiere a multímeros (es decir, dímeros, trímeros, tetrámeros y multímeros superiores) de péptidos. Tales multímeros comprenden multímeros homoméricos que comprenden un péptido, multímeros heteroméricos que comprenden más de un péptido y multímeros heteroméricos que comprenden al menos un péptido y al menos otra proteína. Tales multímeros pueden ser el resultado de asociaciones, enlaces o uniones hidrófobos, hidrófilos, iónicos y/o covalentes, pueden formarse mediante reticulaciones mediante el uso de moléculas unidoras o pueden unirse indirectamente mediante, por ejemplo, formación de liposomas

El término "mimético de péptido" o "mimético" se refiere a compuestos biológicamente activos que mimetizan la actividad biológica de un péptido o una proteína, pero que ya no son de naturaleza química peptídica, es decir, ya no contienen ningún enlace peptídico (es decir, enlaces amida entre aminoácidos). Aquí, el término mimético de péptidos se usa en un sentido más amplio para incluir moléculas que ya no son completamente de naturaleza peptídica, tales como pseudopéptidos, semipéptidos y peptoides. A continuación se describen ejemplos de miméticos de péptidos en este sentido más amplio (donde parte de un péptido se reemplaza por una estructura que carece de enlaces peptídicos). Ya sean total o parcialmente no peptídicos, los miméticos de péptidos de acuerdo con las descripciones proporcionan una disposición espacial de restos químicos reactivos que se asemejan mucho a la disposición tridimensional de los grupos activos en el péptido en el que se basa el mimético de péptido. Como resultado de esta geometría similar del sitio activo, el mimético de péptido tiene efectos sobre los sistemas biológicos que son similares a la actividad biológica del péptido.

Los miméticos de péptidos de las descripciones son preferentemente sustancialmente similares tanto en forma tridimensional como en actividad biológica a los péptidos descritos en la presente descripción. Los ejemplos de métodos de modificación estructural de un péptido conocido en la técnica para crear un mimético de péptido incluyen la inversión de los centros quirales de la cadena principal que conducen a estructuras de residuos de D-aminoácidos que pueden, particularmente en el extremo N, conducir a una mayor estabilidad para la degradación proteolítica sin afectar negativamente la actividad. Se da un ejemplo en el artículo "Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding", Smith CS y otros, Drug Development Res., 15, págs. 371-379 (1988). Un segundo método consiste en alterar la estructura cíclica para la estabilidad, como las imidas y lactamas entre cadenas de N a C (Ede y otros En Smith y Rivier (Eds.) "Peptides: Chemistry and Biology", Escom, Leiden (1991), págs. 268 -270). Un ejemplo de esto se da en compuestos similares a timopentina conformacionalmente restringidos, tales como los descritos en la patente de EE. UU. Núm. 4,457,489 (1985), Goldstein, G. y otros. Un tercer método consiste en sustituir enlaces peptídicos en el péptido por enlaces pseudopeptídicos que confieren resistencia a la proteólisis.

Se han descrito varios enlaces pseudopeptídicos que, en general, no afectan a la estructura peptídica ni a la actividad biológica. Un ejemplo de este enfoque es la sustitución de enlaces pseudopéptidos retro-inversos ("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin", Sisto A. y otros en Rivier, JE y Marshall, G.R. (eds) "Peptides, Chemistry, Structure and Biology", Escom, Leiden (1990), págs. 722-773) y Dalpozzo, y otros (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41: 561-566). Según esta modificación, las secuencias de aminoácidos de los péptidos pueden ser idénticas a las secuencias de un péptido NTP descritas anteriormente, excepto que uno o más de los enlaces peptídicos se reemplazan por un enlace pseudopéptido retroinverso. Preferentemente, el enlace peptídico más N-terminal está sustituido, ya que tal sustitución conferirá resistencia a la proteólisis por exopeptidasas que actúan sobre el N-terminal. También se pueden realizar modificaciones adicionales reemplazando grupos químicos de los aminoácidos con otros grupos químicos de estructura similar. Otro enlace pseudopeptídico adecuado que se sabe que mejora la estabilidad de la escisión enzimática con poca o ninguna pérdida de actividad biológica es el enlace pseudopeptídico isóstero reducido (Couder, y otros (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41: 181- 184).

Por tanto, las secuencias de aminoácidos de estos péptidos pueden ser idénticas a las secuencias de un péptido NTP, excepto que uno o más de los enlaces peptídicos se reemplazan por un enlace pseudopeptídico isóstero. Preferentemente, el enlace peptídico más N-terminal está sustituido, ya que tal sustitución conferirá resistencia a la proteólisis por exopeptidasas que actúan sobre el N-terminal. La síntesis de péptidos con uno o más enlaces pseudopeptídicos isóstero reducidos es conocida en la técnica (Couder, y otros (1993), citado anteriormente). Otros ejemplos incluyen la introducción de enlaces cetometileno o metilsulfuro para reemplazar enlaces peptídicos.

Los derivados peptoides de péptidos representan otra clase de miméticos de péptidos que retienen los determinantes estructurales importantes para la actividad biológica, pero eliminan los enlaces peptídicos, lo que confiere resistencia a la proteólisis (Simon, y otros, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 9367-9371). Los peptoides son oligómeros de glicinas N-sustituidas. Se han descrito varios grupos N-alquilo, cada uno correspondiente a la cadena lateral de un aminoácido natural (Simon, y otros (1992), citado anteriormente). Algunos o todos los aminoácidos de los péptidos pueden reemplazarse con la glicina N-sustituida correspondiente al aminoácido reemplazado.

El término "mimético de péptido" o "mimético" también incluye péptidos y enantiómeros D inverso como se define a continuación.

El término "péptido D inverso" se refiere a una proteína o péptido biológicamente activo que consta de D-aminoácidos dispuestos en orden inverso en comparación con la secuencia de L-aminoácidos de un péptido. Por tanto, el residuo carboxi terminal de un péptido de L-aminoácido se convierte en el amino terminal para el péptido de D-aminoácido y así sucesivamente. Por ejemplo, el péptido ETESH se convierte en HdSdEdTdEd, donde Ed, Hd, Sd y Td son los D-aminoácidos correspondientes a los L-aminoácidos, E, H, S y T respectivamente.

El término "enantiómero" se refiere a una proteína o péptido biológicamente activo en el que uno o más residuos de L-aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de un péptido se reemplazan con los correspondientes residuos de D-aminoácidos.

Una "composición", como se usa en la presente descripción, se refiere en términos generales a cualquier composición que contenga un péptido o secuencia de aminoácidos enumerados y, opcionalmente, un agente activo adicional. La composición puede comprender una formulación seca, una solución acuosa o una composición estéril. Las composiciones que comprenden péptidos pueden emplearse como sondas de hibridación. Las sondas se pueden almacenar en forma liofilizada y se pueden asociar con un agente estabilizador como un carbohidrato. En las hibridaciones, la sonda puede desplegarse en una solución acuosa que contiene sales, por ejemplo, NaCl, detergentes, por ejemplo, dodecilsulfato de sodio (SDS) y otros componentes, por ejemplo, solución de Denhardt, leche en polvo, ADN de esperma de salmón, etc.

La expresión "agente activo" se usa en la presente descripción para indicar cualquier agente capaz de disminuir el tamaño y/o eliminar las proliferaciones celulares y/o el crecimiento de tejidos no deseados. Los agentes activos adecuados pueden incluir, pero no se limitan a: (i) antagonistas/agonistas del músculo liso (bloqueadores alfa) que ayudan a las contracciones de la vejiga y la motilidad uretral, pero no necesariamente destruyen o eliminan células; (ii) inhibidores de la 5 a-reductasa (por ejemplo, finasterida y/o dutasterida) que conducen al encogimiento de la próstata por encogimiento celular; (iii) agentes activos contra el cáncer (tales como agentes alquilantes, inhibidores de topoisomerasa I, inhibidores de topoisomerasa II, antimetabolitos de ARN/ADN y agentes antimitóticos); (iv) agentes activos para tratar crecimientos benignos tales como agentes activos contra el acné y contra las verrugas; (v) compuestos anti-andrógenos, (acetato de ciproterona (1a, 2l3-metilen-6-cloro-17 a-acetoxi-6-deshidroprogesterona) Tamoxifeno, inhibidores de aromatasa); (vi) bloqueadores del receptor alfa1-adrenérgico (tamsulosina, terazosina, doxazosina, prazosina, bunazosina, indoramina, alfulzosina, silodosina); (vii) inhibidores de la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) (tadalafil) y combinaciones de los mismos.

Las descripciones están dirigidas a métodos para tratar a un mamífero que necesita la eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas que comprenden administrar una composición que comprende los péptidos NTP como se definió anteriormente, junto con un agente activo adicional. El agente activo adicional puede administrarse junto con (o en la misma formulación que) la composición que contiene el péptido NTP, o el agente activo adicional puede administrarse por separado. Por ejemplo, la composición que comprende el péptido NTP puede administrarse mediante inyección, mientras que el agente activo adicional se puede tomar en diferentes momentos como medicación oral (en forma de tableta, gel, cápsula etc.).

Otras secuencias peptídicas derivadas de un péptido NTP que se ha encontrado que son un agente efectivo para provocar la muerte celular también pueden ser agentes efectivos para provocar la muerte celular. Una persona habitualmente experta en la técnica puede, mediante el uso de las pautas proporcionadas en la presente descripción, sintetizar sin experimentación indebida fragmentos de un péptido efectivo que abarque la secuencia completa de aminoácidos de esa proteína para identificar otras secuencias de péptidos efectivas.

El inventor descubrió que el uso de péptidos NTP en el tratamiento de mamíferos que necesitaban eliminar o destruir elementos celulares no deseados proporcionaba un beneficio clínico inesperadamente superior si se combinaba con agentes activos adicionales, en comparación con mamíferos que habían sido tratados solo con los agentes activos adicionales. La eficacia del tratamiento de la hiperplasia prostática benigna, por ejemplo, puede evaluarse sintomáticamente. La evaluación sintomática se puede medir mediante la Puntuación Internacional de Síntomas Prostáticos (IPSS), que es una escala cuantitativa usada para medir la mejoría o el empeoramiento de los síntomas prostáticos. La IPSS cuantifica lo siguiente: 1) vaciado incompleto de la vejiga después de orinar; 2) micción frecuente; 3) detención y comienzo durante la micción; 4) necesidad urgente de orinar; 5) debilidad del flujo urinario; 6) necesidad de empujar o esforzarse al orinar; 7) necesidad de orinar después de irse a dormir por la noche (nicturia). El inventor descubrió que la administración del péptido NTP en combinación con el agente activo adicional dio como resultado una mejora de IPSS de aproximadamente 15-150 % mayor que la mejora de IPSS en pacientes que solo recibieron el agente activo adicional. En algunas descripciones, la mejora está dentro del intervalo de aproximadamente 25 a aproximadamente 125 %, o de aproximadamente 30 % a aproximadamente 115 %, o de aproximadamente 40 % a aproximadamente 110 %.

Los inventores descubrieron que la mejora es incluso más pronunciada en pacientes que no habían tomado previamente un agente activo adicional, (o que no habían recibido previamente tratamiento para tal afección) fueron tratados con el péptido NTP, y luego posteriormente se les administró el agente activo adicional. La mejora de IPSS para los pacientes que recibieron el péptido NTP y posteriormente se les administró el agente activo adicional fue de 50 % a 400 % mayor que la mejora de IPSS en pacientes que recibieron un placebo, y posteriormente se les administró el agente activo adicional. En algunas descripciones, la mejora está dentro del intervalo de aproximadamente 75 a aproximadamente 300 %, o de aproximadamente 150 % a aproximadamente 250 %, o de aproximadamente 200 % a aproximadamente 225 %.

Las descripciones incluyen un método para tratar a un mamífero que padece una afección que requiere la eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas, en donde el mamífero había recibido o no previamente tratamiento para tal afección, que comprende administrar un péptido NTP al mamífero, en combinación con la administración de un agente activo adicional. El método incluye, pero no se limita a, administrar los péptidos NTP por vía intramuscular, oral, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intralesional, intraocular, intraarterial, intratecal, intratumoral, intranasal, tópica, transdérmica, subcutánea o intradérmica, ya sea solo o conjugado a un portador. Las proliferaciones celulares no deseadas incluyen, entre otras, tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata), vello facial no deseado, verrugas y tejido graso no deseado. Los péptidos NTP preferidos incluyen uno o más de los siguientes:

SEQ ID No. 66 IDQQVLSRIKLEIKRCL Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu- Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

SEQ ID NO. 111 IDQQVLSRI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile

SEQ ID NO. 115 VLSRIKLEIKRCL Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu

SEQ ID NO. 116 IDQQVLSRIKLEI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile

Cualquier mamífero puede beneficiarse del uso de la invención, incluidos humanos, ratones, conejos, perros, ovejas y otro ganado, cualquier mamífero tratado o tratable por un veterinario, cuidador del zoológico o empleado de la reserva de vida silvestre. Los mamíferos preferidos son humanos, ovejas y perros.

Será evidente para un experto en la técnica que pueden seleccionarse otros fragmentos más pequeños de los péptidos NTP anteriores de manera que estos péptidos posean la misma o similar actividad biológica. Un experto en la técnica puede seleccionar otros fragmentos de tal forma que estos péptidos posean la misma o similar actividad biológica. Los péptidos de las descripciones abarcan estos otros fragmentos. En general, los péptidos de las descripciones tienen al menos 4 aminoácidos, preferentemente al menos 5 aminoácidos y con mayor preferencia al menos 6 aminoácidos.

Las descripciones también abarcan métodos para tratar mamíferos (o pacientes) que necesitan la eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas que comprenden administrar una composición que comprende péptidos NTP que comprenden dos o más péptidos nTp unidos entre sí, junto con un agente activo adicional. En la medida en que un péptido NTP tenga la actividad biológica deseada, se deduce que dos de tales péptidos también poseerán la actividad biológica deseada.

Los péptidos y fragmentos NTP, variantes, derivados, homólogos, proteínas de fusión y miméticos de los mismos abarcados por esta descripción se pueden preparar mediante el uso de métodos conocidos por los expertos en la técnica, tales como tecnología de ADN recombinante, síntesis de proteínas y aislamiento de péptidos, proteínas, proteína NTP y fragmentos, variantes, derivados y homólogos de los mismos naturales.

Los péptidos y fragmentos de NTP, variantes, derivados, homólogos, proteínas de fusión y miméticos de los mismos pueden prepararse a partir de otros péptidos, proteínas y fragmentos, variantes, derivados y homólogos de los mismos mediante el uso de métodos conocidos por los expertos en la técnica. Tales métodos incluyen (pero no se limitan a) el uso de proteasas para escindir el péptido o la proteína en los péptidos NTP deseados.

Puede prepararse un péptido NTP mediante el uso de métodos de tecnología de ADN recombinante bien conocidos, tales como los expuestos en Sambrook y otros Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY y/o Ausubel y otros, Eds., Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishers Inc. y Wiley and Sons, NY.

Puede obtenerse un gen o ADNc que codifica un péptido NTP, por ejemplo, mediante el cribado de una biblioteca genómica o de ADNc, o mediante amplificación por PCR. Se pueden generar sondas o cebadores útiles para cribar la biblioteca basándose en información de secuencia para otros genes conocidos o fragmentos de genes del mismo o una familia de genes relacionada, tales como, por ejemplo, motivos conservados que se encuentran en otros péptidos o proteínas. Además, cuando se ha identificado un gen que codifica un péptido NTP, se puede usar todo o una porción de ese gen como una sonda para identificar genes homólogos. Las sondas o cebadores se pueden usar para cribar bibliotecas de ADNc de diversas fuentes de tejido que se cree que expresan un gen del péptido NTP. Típicamente, se emplearán condiciones de alta rigurosidad para el cribado para minimizar el número de falsos positivos obtenidos del cribado.

Otro medio para preparar un gen que codifica un péptido NTP es emplear síntesis química mediante el uso de métodos bien conocidos por el experto en la técnica, tales como los descritos por Engels y otros, Angew. Chem. Intl. Ed., 28:716-734. Estos métodos incluyen, entre otros, los métodos de fosfotriéster, fosforamidita y H-fosfonato para la síntesis de ácidos nucleicos. Un método preferido para tal síntesis química es la síntesis soportada por polímeros mediante el uso de la química de fosforamidita estándar. Normalmente, el ADN que codifica un péptido o proteína tendrá una longitud de varios cientos de nucleótidos. Los ácidos nucleicos mayores de aproximadamente 100 nucleótidos se pueden sintetizar como varios fragmentos mediante el uso de estos métodos. A continuación, los fragmentos se pueden ligar juntos para formar el péptido o proteína de longitud completa. Usualmente, el fragmento de ADN que codifica el extremo amino de la proteína tendrá un ATG, que codifica un residuo de metionina. Esta metionina puede estar presente o no en la forma madura de la proteína o péptido, en dependencia de si la proteína producida en la célula huésped está diseñada para ser secretada por esa célula.

El gen, ADNc o fragmento del mismo que codifica el péptido NTP puede insertarse en un vector de expresión o amplificación apropiado mediante el uso de técnicas de ligación estándar. El vector se selecciona típicamente para que sea funcional en la célula huésped particular empleada (es decir, el vector es compatible con la maquinaria de la célula huésped de manera que pueda producirse la amplificación del gen y/o la expresión del gen). El gen, ADNc o fragmento del mismo que codifica el péptido NTP puede amplificarse/expresarse en células huésped procariotas, de levadura, de insectos (sistemas de baculovirus) y/o eucariotas. La selección de la célula huésped dependerá en parte de si el péptido NTP se va a glicosilar y/o fosforilar. Si es así, son preferibles las células huésped de levadura, insectos o mamíferos.

Típicamente, los vectores usados en cualquiera de las células huésped contendrán al menos una secuencia flanqueante 5' (también denominada promotor) y también otros elementos reguladores, como un potenciador(es), un elemento de origen de replicación, un elemento de terminación de la transcripción, una secuencia de intrón completa que contiene un sitio de empalme donante y aceptor, una secuencia de péptido señal, un elemento de sitio de unión a ribosoma, una secuencia de poliadenilación, una región de polienlazador para insertar el ácido nucleico que codifica el polipéptido que se va a expresar y un elemento marcador de selección. Cada uno de estos elementos se analiza a continuación. Opcionalmente, el vector puede contener una secuencia de etiqueta, es decir, una molécula de oligonucleótido ubicada en el extremo 5' o 3' de la secuencia codificante de proteína o péptido; la molécula de oligonucleótido codifica poliHis (tal como hexaHis), u otra etiqueta como FLAG, HA (hemaglutinina de virus de la influenza) o myc para los que existen anticuerpos disponibles comercialmente. Esta etiqueta se fusiona típicamente con el polipéptido tras la expresión del polipéptido y puede servir como medio para la purificación por afinidad de la proteína o péptido de la célula huésped. La purificación por afinidad se puede lograr, por ejemplo, mediante cromatografía en columna mediante el uso de anticuerpos contra la etiqueta como una matriz de afinidad. Opcionalmente, la etiqueta se puede eliminar posteriormente de la proteína o péptido purificado por diversos medios, como el uso de ciertas peptidasas.

Un experto en la técnica podría fusionar la bisagra de inmunoglobulina humana y la región Fc en el extremo N o en el extremo C del péptido NTP. La subsecuente proteína de fusión a Fc podría purificarse mediante el uso de una columna de afinidad de Proteína A. Se sabe que Fc exhibe una vida media farmacocinética larga in vivo y se ha encontrado que las proteínas fusionadas a Fc exhiben una vida media in vivo sustancialmente mayor que la contraparte no fusionada. Además, la fusión a la región Fc permite la dimerización/multimerización de la molécula que puede ser útil para la bioactividad de algunas moléculas.

La secuencia flanqueante 5' puede ser homóloga (es decir, de la misma especie y/o cepa que la célula huésped), heteróloga (es decir, de una especie distinta de la especie o cepa de la célula huésped), híbrida (es decir, una combinación de secuencias flanqueantes 5' de más de una fuente), sintética, o puede ser la secuencia flanqueante 5' del gen del péptido o proteína nativa. Como tal, la fuente de la secuencia flanqueante 5' puede ser cualquier organismo unicelular procariota o eucariota, cualquier organismo vertebrado o invertebrado, o cualquier planta, siempre que la secuencia flanqueante 5' sea funcional y pueda ser activada por la maquinaria de la célula huésped.

Las secuencias flanqueantes 5' útiles en los vectores de esta descripción pueden obtenerse mediante cualquiera de varios métodos bien conocidos en la técnica. Normalmente, las secuencias flanqueantes 5' útiles en la presente descripción distintas de la secuencia flanqueante del gen de la proteína o del péptido se habrán identificado previamente mediante mapeo y/o mediante digestión con endonucleasas de restricción y, por lo tanto, pueden aislarse de la fuente de tejido adecuada mediante el uso de las endonucleasas de restricción apropiadas. En algunos casos, se puede conocer la secuencia de nucleótidos completa de la secuencia flanqueante 5'. En este caso, la secuencia flanqueante 5' puede sintetizarse mediante el uso de los métodos descritos anteriormente para la síntesis o clonación de ácidos nucleicos.

Cuando se conoce toda o solo una porción de la secuencia flanqueante 5', puede obtenerse mediante el uso de PCR y/o mediante cribado de una biblioteca genómica con oligonucleótidos adecuados y/o fragmentos de secuencia flanqueante 5' de la misma u otra especie.

Cuando no se conoce la secuencia flanqueante 5', un fragmento de ADN que contiene una secuencia flanqueante 5' puede aislarse de un fragmento más grande de ADN que puede contener, por ejemplo, una secuencia codificante o incluso otro gen o genes. El aislamiento se puede lograr mediante digestión con endonucleasas de restricción mediante el uso de una o más enzimas cuidadosamente seleccionadas para aislar el fragmento de ADN adecuado. Después de la digestión, el fragmento deseado puede aislarse mediante purificación en gel de agarosa, columna Qiagen® u otros métodos conocidos por el experto en la técnica. La selección de enzimas adecuadas para lograr este propósito será fácilmente evidente para un experto en la técnica.

El origen del elemento de replicación es típicamente una parte de los vectores de expresión procarióticos adquiridos comercialmente y ayuda en la amplificación del vector en una célula huésped. La amplificación del vector hasta un cierto número de copias puede, en algunos casos, ser importante para la expresión óptima de la proteína o péptido. Si el vector de elección no contiene un origen de sitio de replicación, uno puede sintetizarse químicamente basándose en una secuencia conocida y ligarse en el vector. El elemento de terminación de la transcripción se ubica típicamente en 3' del extremo de la secuencia codificante de la proteína o péptido y sirve para terminar la transcripción de la proteína o péptido. Normalmente, el elemento de terminación de la transcripción en las células procariotas es un fragmento rico en G-C seguido de una secuencia de poli T. Si bien el elemento puede clonarse de una biblioteca o adquirirse comercialmente como parte de un vector, también puede sintetizarse fácilmente mediante el uso de métodos para la síntesis de ácidos nucleicos como los descritos anteriormente.

Un elemento génico marcador de selección codifica una proteína necesaria para la supervivencia y el crecimiento de una célula huésped cultivada en un medio de cultivo selectivo. Los genes marcadores de selección típicos codifican proteínas que (a) confieren resistencia a antibióticos u otras toxinas, por ejemplo, ampicilina, tetraciclina o kanamicina para células huésped procariotas, (b) complementan las deficiencias auxotróficas de la célula; o (c) suministran nutrientes críticos no disponibles en medios complejos. Los marcadores de selección preferidos son el gen de resistencia a la kanamicina, el gen de resistencia a la ampicilina y el gen de resistencia a la tetraciclina.

El elemento de unión al ribosoma, comúnmente llamado secuencia de Shine-Dalgarno (procariotas) o secuencia de Kozak (eucariotas), suele ser necesario para el inicio de la traducción del ARNm. El elemento se localiza típicamente en 3' con respecto al promotor y en 5' con respecto a la secuencia codificante de la proteína o péptido que se va a sintetizar. La secuencia de Shine-Dalgarno es variada pero típicamente es una polipurina (es decir, que tiene un alto contenido de A-G). Se han identificado muchas secuencias de Shine-Dalgarno, cada una de las cuales puede sintetizarse fácilmente mediante el uso de los métodos expuestos anteriormente y usarse en un vector procariota.

En aquellos casos en los que es conveniente que un péptido NTP sea secretado de la célula huésped, se puede usar una secuencia señal para dirigir el péptido fuera de la célula huésped donde se sintetiza, y la parte carboxiterminal de la proteína puede ser eliminada para evitar el anclaje a la membrana. Típicamente, la secuencia señal se coloca en la región codificante del gen del péptido NTP o ADNc, o directamente en el extremo 5' de la región codificante del gen del péptido. Se han identificado muchas secuencias señal y cualquiera de ellas que sea funcional en la célula huésped seleccionada puede usarse junto con el gen del péptido o el ADNc. Por tanto, la secuencia señal puede ser homóloga o heteróloga al gen del péptido o al ADNc, y puede ser homóloga o heteróloga al gen del péptido o al ADNc. Además, la secuencia señal puede sintetizarse químicamente mediante el uso de los métodos expuestos anteriormente. En la mayoría de los casos, la secreción del polipéptido de la célula huésped mediante la presencia de un péptido señal dará como resultado la eliminación de la metionina amino terminal del polipéptido.

En muchos casos, la transcripción del gen del péptido NTP o del ADNc aumenta por la presencia de uno o más intrones en el vector; esto es particularmente cierto cuando el péptido se produce en células huésped eucariotas, especialmente células huésped de mamíferos. Los intrones usados pueden ser de origen natural dentro del gen del péptido, especialmente cuando el gen usado es una secuencia genómica de longitud completa o un fragmento de la misma. Cuando el intrón no se encuentra naturalmente dentro del gen (como para la mayoría de los ADNc), el(los) intrón(ones) pueden obtenerse de otra fuente. La posición del intrón con respecto a la secuencia flanqueante y el gen del péptido generalmente es importante, ya que el intrón debe transcribirse para que sea efectivo. Como tal, cuando el gen del péptido insertado en el vector de expresión es una molécula de ADNc, la posición preferida para el intrón es 3' con respecto al sitio de inicio de la transcripción y 5' con respecto a la secuencia de terminación de la transcripción poliA. Preferentemente, para el ADNc del péptido, el intrón o intrones estarán ubicados en un lado o en el otro (es decir, 5'o 3') del ADNc de manera que no interrumpa esta secuencia codificante. Cualquier intrón de cualquier fuente, incluidos los organismos virales, procarióticos y eucarióticos (vegetales o animales), puede usarse para practicar esta descripción, siempre que sea compatible con la(s) célula(s) huésped en las que se inserta. También se incluyen aquí los intrones sintéticos. Opcionalmente, se puede usar más de un intrón en el vector.

Cuando uno o más de los elementos expuestos anteriormente no estén ya presentes en el vector que se va a usar, pueden obtenerse individualmente y ligarse en el vector. Los métodos usados para obtener cada uno de los elementos son bien conocidos por el experto en la técnica y son comparables a los métodos expuestos anteriormente (es decir, síntesis del ADN, cribado de bibliotecas y similares).

Los vectores finales usados para practicar esta descripción pueden construirse a partir de vectores de partida tales como un vector disponible comercialmente. Tales vectores pueden contener o no algunos de los elementos que se incluirán en el vector completo. Si ninguno de los elementos deseados está presente en el vector de partida, cada elemento puede ligarse individualmente en el vector cortando el vector con la(s) endonucleasa(s) de restricción apropiada(s) de tal manera que los extremos del elemento a ligar y los extremos de los vectores sean compatibles para la ligadura. En algunos casos, puede ser necesario hacer los extremos que se van a ligar romos para obtener una ligadura satisfactoria. Hacer los extremos romos se logra rellenando primero los "extremos cohesivos" mediante el uso del ADN polimerasa de Klenow o el ADN polimerasa de T4 en presencia de los cuatro nucleótidos. Este procedimiento es bien conocido en la técnica y se describe, por ejemplo, en Sambrook y otros, supra. Alternativamente, dos o más de los elementos que se van a insertar en el vector pueden primero ligarse entre sí (si se van a colocar adyacentes entre sí) y luego ligarse al vector.

Un método adicional para construir el vector es realizar todas las ligaciones de los diversos elementos simultáneamente en una mezcla de reacción. Aquí, se generarán muchos vectores sin sentido o no funcionales debido a la ligadura o inserción inadecuadas de los elementos, sin embargo, el vector funcional puede identificarse y seleccionarse mediante digestión con endonucleasas de restricción.

Los vectores preferidos para poner en práctica esta descripción son aquellos que son compatibles con células huésped de bacterias, insectos y mamíferos. Tales vectores incluyen, entre otros, pCRII, pCR3 y pcDNA3.1 (Invitrogen Company, San Diego, CA), pBSII (Stratagene Company, La Jolla, CA), pET15b (Novagen, Madison, Wis.), PGEX (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ), pEGFP-N2 (Clontech, Palo Alto, California), pETL (BlueBachl; Invitrogen) y pFastBacDual (Gibco/BRL, Grand Island, NY)

Una vez que se ha construido el vector y se ha insertado una molécula de ácido nucleico que codifica una proteína o péptido de longitud completa o truncada en el sitio apropiado del vector, el vector completo se puede insertar en una célula huésped adecuada para la amplificación y/o expresión de polipéptidos. Las células huésped pueden ser células huésped procariotas (tal como E. coli) o células huésped eucariotas (tal como una célula de levadura, una célula de insecto o una célula de vertebrado). La célula huésped, cuando se cultiva en condiciones apropiadas, puede sintetizar proteína o péptido que subsecuentemente se puede recolectar del medio de cultivo (si la célula huésped lo secreta al medio) o directamente de la célula huésped que lo produce (si no se secreta).

Después de la recolección, el péptido NTP se puede purificar mediante el uso de métodos tales como cromatografía de exclusión por tamaños, cromatografía de afinidad y similares. La selección de la célula huésped para la producción de proteínas o péptidos dependerá en parte de si el péptido debe ser glicosilado o fosforilado (en cuyo caso se prefieren las células huésped eucariotas) y la manera en que la célula huésped puede plegar el péptido en su estructura terciaria nativa (por ejemplo, la orientación adecuada de los puentes disulfuro, etc.) de manera que el péptido que tiene actividad biológica prepare la proteína biológicamente activa, el péptido puede plegarse después de la síntesis mediante el uso de las condiciones químicas apropiadas como se describe a continuación. Las células o líneas celulares adecuadas pueden ser células de mamífero, tales como células de ovario de hámster chino (CHO), células de riñón embrionario humano (HEK) 293, células 293T o células 3T3. La selección de células huésped de mamífero adecuadas y los métodos para la transformación, cultivo, amplificación, cribado y producción y purificación de productos son conocidos en la técnica. Otras líneas celulares de mamíferos adecuadas son las líneas celulares COS-1 y COS-7 de mono, y la línea celular CV-1. Otras células huésped de mamíferos ilustrativas incluyen líneas celulares de primates y líneas celulares de roedores, incluidas líneas celulares transformadas. También son adecuadas las células diploides normales, las cepas celulares derivadas del cultivo in vitro de tejido primario, así como los explantes primarios. Las células candidatas pueden ser genotípicamente deficientes en el gen de selección, o pueden contener un gen de selección de acción dominante. Otras líneas celulares de mamíferos adecuadas incluyen, pero no se limitan a, células N2A de neuroblastoma de ratón, HeLa, células L-929 de ratón, líneas 3T3 derivadas de ratones Swiss, Balb-c o NIH, líneas celulares de hámster BHK o HaK.

De manera similar, útiles como células huésped adecuadas para las presentes descripciones son las células bacterianas. Por ejemplo, las diversas cepas de E. coli (por ejemplo, HB101, DH5.alpha., DH10 y MC1061) son bien conocidas como células huésped en el campo de la biotecnología. También pueden emplearse en este método diversas cepas de B. subtilis, Pseudomonas spp., otras Bacillus spp., Streptomyces spp. y similares. Muchas cepas de células de levadura conocidas por los expertos en la técnica también están disponibles como células huésped para la expresión de los polipéptidos de las presentes descripciones.

Además, cuando se desee, se pueden utilizar sistemas de células de insectos en los métodos de las presentes descripciones. Tales sistemas se describen, por ejemplo, en Kitts y otros (Biotechniques, 14:810-817), Lucklow (Curr. Opin. Biotechnol., 4:564-572) y Lucklow y otros (J. Virol., 67:4566-4579). Las células de insecto preferidas son Sf-9 y Hi5 (Invitrogen, Carlsbad, Calif.).

La inserción (también denominada transformación o transfección) del vector en la célula huésped seleccionada puede lograrse mediante el uso de métodos tales como cloruro de calcio, electroporación, microinyección, lipofección o el método DEAE-dextrano. El método seleccionado dependerá en parte del tipo de célula huésped que se use. Estos métodos y otros métodos adecuados son bien conocidos por el experto en la técnica y se exponen, por ejemplo, en Sambrook y otros, Supra.

Las células huésped que contienen el vector (es decir, transformadas o transfectadas) pueden cultivarse mediante el uso de medios estándar bien conocidos por el experto en la técnica. El medio generalmente contendrá todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y supervivencia de las células. Los medios adecuados para cultivar células de E. coli son, por ejemplo, medio Luria (LB) y/o medio Terrific (TB). Los medios adecuados para cultivar células eucariotas son RPMI 1640, MEM, DMEM, todos los cuales pueden complementarse con suero y/o factores de crecimiento según lo requiera la línea celular particular que se está cultivando. Un medio adecuado para cultivos de insectos es el medio de Grace suplementado con extracto de levadura, hidrolizado de lactoalbúmina y/o suero de ternero fetal según sea necesario. Típicamente, se añade un antibiótico u otro compuesto útil para el crecimiento selectivo de las células transformadas únicamente como suplemento del medio. El compuesto a usar vendrá dictado por el elemento marcador de selección presente en el plásmido con el que se transformó la célula huésped. Por ejemplo, cuando el elemento marcador de selección es la resistencia a la kanamicina, el compuesto añadido al medio de cultivo será la kanamicina.

La cantidad de péptido NTP producido en la célula huésped puede evaluarse mediante el uso de métodos estándar conocidos en la técnica. Tales métodos incluyen, sin limitación, análisis de transferencia Western, electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS, electroforesis en gel no desnaturalizante, separación por HPLC, espectroscopía de masas, inmunoprecipitación y/o ensayos de actividad tales como ensayos de desplazamiento en gel por unión de ADN.

Si la proteína o péptido ha sido diseñado para ser secretado por las células huésped, la mayoría de la proteína o péptido puede encontrarse en el medio de cultivo celular. Las proteínas preparadas de esta manera típicamente no poseerán una metionina amino terminal, ya que se elimina durante la secreción de la célula. Sin embargo, si la proteína o el péptido no es secretado por las células huésped, estará presente en el citoplasma y/o el núcleo (para las células huésped eucariotas) o en el citosol (para las células huésped de bacterias gram negativas) y puede tener una metionina amino terminal.

Para un péptido NTP situado en el citoplasma y/o núcleo de la célula huésped, las células huésped típicamente se rompen primero mecánicamente o con detergente para liberar el contenido intracelular en una solución tamponada. Luego, el péptido se puede aislar a partir de esta solución.

La purificación de péptidos NTP a partir de la solución se puede lograr mediante el uso de una variedad de técnicas. Si el péptido NTP se ha sintetizado de manera que contiene una etiqueta como hexaHistidina (por ejemplo, péptido/hexaHis) u otro péptido pequeño como ^f L^a G (Sigma-Aldritch, St. Louis, Mo.) o péptido de unión a calmodulina (Stratagene, La Jolla, California) en su extremo carboxilo o amino, se puede purificar esencialmente en un proceso de una sola etapa pasando la solución a través de una columna de afinidad donde la matriz de la columna tiene una alta afinidad por la etiqueta o directamente por la proteína (es decir, un anticuerpo monoclonal que reconoce específicamente el péptido). Por ejemplo, la polihistidina se une con gran afinidad y especificidad al níquel, zinc y cobalto; por tanto, la cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados que emplea una resina de afinidad a base de níquel (como se usa en el sistema QlAexpress de Qiagen o en el sistema Xpress de Invitrogen) o una resina de afinidad a base de cobalto (como se usa en el sistema Talon de BD Biosciences-CLONTECH) se puede usar para la purificación del péptido/poliHis. (Véase, por ejemplo, Ausubel y otros, Eds., Current Protocols in Molecular Biology, Sección 10.11.8, John Wiley y Sons, Nueva York).

Cuando el péptido NTP se prepara sin una etiqueta unida y no hay anticuerpos disponibles, se pueden usar otros procedimientos bien conocidos para la purificación. Tales procedimientos incluyen, sin limitación, cromatografía de intercambio iónico, cromatografía de hidroxiapatita, cromatografía de interacción hidrófoba, cromatografía de exclusión por tamaños, HPLC, electroforesis en gel nativo en combinación con elución en gel y enfoque isoeléctrico preparativo (máquina/técnica Isoprime, Hoefer Scientific). En algunos casos, se pueden combinar dos o más de estas técnicas para lograr una mayor pureza.

Si se prevé que el péptido NTP se encontrará principalmente de manera intracelular, el material intracelular (incluidos los cuerpos de inclusión para bacterias gram negativas) se puede extraer de la célula huésped mediante el uso de cualquier técnica estándar conocida por el experto en la técnica. Por ejemplo, las células huésped se pueden lisar para liberar el contenido del periplasma/citoplasma mediante prensa francesa, homogeneización y/o tratamiento con ultrasonidos seguido de centrifugación. Si el péptido ha formado cuerpos de inclusión en el citosol, los cuerpos de inclusión a menudo pueden unirse a las membranas celulares internas y/o externas y, por lo tanto, se encontrarán principalmente en el material de sedimento después de la centrifugación. A continuación, el material del sedimento se puede tratar a pH extremos o con un agente caotrópico como un detergente, guanidina, derivados de guanidina, urea o derivados de urea en presencia de un agente reductor como ditiotreitol a pH alcalino o tris carboxietilfosfina a pH ácido hasta liberar, separar y solubilizar los cuerpos de inclusión. El péptido en su forma ahora soluble se puede analizar mediante el uso de electroforesis en gel, inmunoprecipitación o similares. Si se desea aislar el péptido, el aislamiento se puede lograr mediante el uso de métodos estándar como los que se exponen a continuación y en Marston y otros Meth. Enz., 182:264-275.

En algunos casos, el péptido NTP puede no ser biológicamente activo tras el aislamiento. Se pueden usar varios métodos para replegar o convertir el polipéptido en su estructura terciaria y generar enlaces disulfuro para restaurar la actividad biológica. Tales métodos incluyen exponer el polipéptido solubilizado a un pH usualmente superior a 7 y en presencia de una concentración particular de un caótropo. La selección del caótropo es muy similar a las opciones utilizadas para la solubilización de cuerpos de inclusión, pero normalmente a una concentración más baja y no es necesariamente el mismo caótropo que se utiliza para la solubilización. En la mayoría de los casos, la solución de replegado/oxidación también contendrá un agente reductor o el agente reductor más su forma oxidada en una relación específica para generar un potencial redox particular que permita que se produzca un intercambio de disulfuro en la formación del(de los) puente(s) de cisteína de la proteína. Algunas de las parejas redox comúnmente utilizadas incluyen cisteína/cistamina, glutatión (GSH)/ditiobis GSH, cloruro cúprico, ditiotreitol(DTT)/ditiano DTT, 2-mercaptoetanol(bME)/ditio-b(ME). En muchos casos, es necesario un cosolvente para aumentar la eficiencia del replegado y los reactivos más comunes usados para este propósito incluyen glicerol, polietilenglicol de diversos pesos moleculares y arginina.

Si los cuerpos de inclusión de péptidos NTP no se forman en un grado significativo en la célula huésped, el péptido NTP se encontrará principalmente en el sobrenadante después de la centrifugación del homogeneizado celular, y el péptido NTP puede aislarse del sobrenadante mediante el uso de métodos como los establecidos adelante a continuación.

En aquellas situaciones en las que es preferible aislar parcial o completamente el péptido NTP, la purificación se puede lograr mediante el uso de métodos estándar bien conocidos por el experto en la técnica. Tales métodos incluyen, sin limitación, separación por electroforesis seguida de electroelución, varios tipos de cromatografía (inmunoafinidad, exclusión por tamaños y/o intercambio iónico) y/o cromatografía líquida de alta presión. En algunos casos, puede ser preferible usar más de uno de estos métodos para una purificación completa.

Además de preparar y purificar péptidos NTP mediante el uso de técnicas de ADN recombinante, los péptidos NTP y sus fragmentos, variantes, homólogos, proteínas de fusión, miméticos de péptidos y derivados pueden prepararse mediante métodos de síntesis química (como la síntesis de péptidos en fase sólida) mediante el uso de técnicas conocidas en la técnica tales como los expuestas por Merrifield y otros, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149, Houghten y otros Proc Natl Acad. Sci. EE. UU., 82:5132, y Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, Ill. Tales péptidos se pueden sintetizar con o sin una metionina en el extremo amino. Los péptidos NTP sintetizados químicamente se pueden oxidar mediante el uso de los métodos expuestos en estas referencias para formar puentes disulfuro. Se espera que los péptidos NTP tengan una actividad biológica comparable a la de los péptidos producidos de forma recombinante o purificados a partir de fuentes naturales y, por lo tanto, se pueden usar indistintamente con péptidos recombinantes o naturales.

Las composiciones de péptidos NTP químicamente modificados en las que el péptido está unido a un polímero se incluyen dentro del alcance de las presentes descripciones. El polímero seleccionado es típicamente soluble en agua de manera que la proteína a la que está unido no precipite en un entorno acuoso, tal como un entorno fisiológico. El polímero seleccionado usualmente se modifica para que tenga un solo grupo reactivo, tal como un éster activo para acilación o un aldehído para alquilación, de manera que el grado de polimerización pueda controlarse como se prevé en los presentes métodos. El polímero puede ser de cualquier peso molecular y puede ser ramificado o no ramificado. Dentro del alcance de los polímeros peptídicos se incluye una mezcla de polímeros.

En algunos casos, puede ser deseable preparar variantes de ácidos nucleicos y/o aminoácidos de los péptidos NTP de origen natural. Las variantes de ácido nucleico se pueden producir mediante el uso de mutagénesis dirigida al sitio, amplificación por PCR u otros métodos apropiados, donde el(los) cebador(es) tiene(n) las mutaciones puntuales deseadas (ver Sambrook y otros, supra, y Ausubel y otros, supra, para descripciones de técnicas de mutagénesis). La síntesis química mediante el uso de métodos descritos por Engels y otros, supra, también puede usarse para preparar tales variantes. También se pueden usar otros métodos conocidos por los expertos en la técnica.

Las variantes de ácido nucleico preferidas son aquellas que contienen sustituciones de nucleótidos que representan la preferencia de codón en la célula huésped que se va a usar para producir los péptidos NTP. Tal optimización de codones se puede determinar mediante algoritmos informáticos que incorporan tablas de frecuencia de codones como Ecohigh. Cod para la preferencia de codones de genes bacterianos altamente expresados como lo proporciona el paquete de la Universidad de Wisconsin Versión 9.0, Genetics Computer Group, Madison, Wis. Otras tablas de frecuencia de codones útiles incluyen Celegans_high.cod, Celegans_low.cod, Drosophila_high.cod, Human_high.cod, Maize_high.cod y Yeast_high.cod. Otras variantes preferidas son aquellas que codifican cambios conservadores de aminoácidos como se describió anteriormente (por ejemplo, en las que la carga o polaridad de la cadena lateral de aminoácidos de origen natural no se altera sustancialmente por sustitución con un aminoácido diferente) en comparación con el tipo salvaje, y/o aquellos diseñados para generar un nuevo sitio(s) de glicosilación y/o fosforilación, o aquellos diseñados para eliminar un sitio(s) de glicosilación y/o fosforilación existente.

Los péptidos y fragmentos de NTP, homólogos, variantes, proteínas de fusión, miméticos de péptidos, derivados y sales de los mismos también se pueden preparar mediante el uso de técnicas de síntesis de péptidos convencionales conocidas por el experto en la técnica. Estas técnicas incluyen métodos de acoplamiento químico (cf. Wunsch, E: "Methoden der organischen Chemie", Volumen 15, Banda 1 2, Synthese von Peptiden, thime Verlag, Stuttgart (1974), y Barrany, G.; Marrifield, RB: "The Peptides", eds. E. Gross, J. Meienhofer, Volumen 2, Capítulo 1, págs. 1-284, Academic Press (1980)), métodos de acoplamiento enzimático (cf. Widmer, F. Johansen, JT, Carlsberg Res. Commun., Vol. 44, págs. 37-46 (1979); Kullmann, W.: "Enzymatic Peptide Synthesis", CRC Press Inc. Boca Raton, Fla. (1987); y Widmer, F., Johansen, JT en "Synthetic Peptides in Biology and Medicines", eds. Alitalo, K., Partanen, P., Vatieri, A., págs. 79-86, Elsevier, Amsterdam (1985)), o una combinación de métodos químicos y enzimáticos si esto es ventajoso para el diseño y la economía del proceso. Mediante el uso de las pautas proporcionadas en la presente descripción, los expertos en la técnica son capaces de variar la secuencia peptídica del péptido NTP para producir un homólogo que tenga la misma o similar actividad biológica (bioactividad) que el péptido NTP original o nativo.

Existen ventajas para usar un mimético de un péptido NTP dado en lugar del péptido en sí. En general, los miméticos de péptidos son más biodisponibles, tienen una duración de acción más prolongada y pueden ser más baratos de producir que las proteínas y péptidos nativos.

Los miméticos de péptidos de péptidos NTP se pueden desarrollar mediante el uso de técnicas de química combinatoria y otras técnicas conocidas en la técnica (ver, por ejemplo, Proceedings of the 20th European Peptide Symposium, ed. G. Jung, E. Bayer, págs. 289-336, y referencias allí). Los ejemplos de métodos conocidos en la técnica para modificar estructuralmente un péptido para crear un péptido mimético incluyen la inversión de los centros quirales de la cadena principal que conducen a estructuras de residuos de D-aminoácidos que pueden, particularmente en el extremo N, conducir a una mayor estabilidad para la degradación proteolítica sin afectar negativamente la actividad. Se proporciona un ejemplo en el documento "Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding", Smith CS y otros, Drug Development Res. 15, págs. 371-379 (1988).

Un segundo método consiste en alterar la estructura cíclica para la estabilidad, tal como las imidas y lactamas entre cadenas de N a C (Ede y otros En Smith y Rivier (Eds.) "Peptides: Chemistry and Biology", Escom, Leiden (1991), págs. 268 -270). Un ejemplo de esto se da en compuestos similares a timopentina conformacionalmente restringidos, tales como los descritos en la patente de EE. UU. Núm. 4,457,489 (1985), Goldstein, G. y otros.

Un tercer método consiste en sustituir enlaces peptídicos en el péptido NTP por enlaces pseudopeptídicos que confieren resistencia a la proteólisis. Se han descrito varios enlaces pseudopeptídicos que, en general, no afectan a la estructura peptídica ni a la actividad biológica. Un ejemplo de este enfoque es la sustitución de enlaces pseudopéptidos retro-inversos ("Biologically active retroinverso analogues of thymopentin", Sisto A. y otros en Rivier, JE y Marshall, G.R. (eds) "Peptides, Chemistry, Structure and Biology", Escom, Leiden (1990), págs. 722-773) y Dalpozzo, y otros (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41: 561-566). De acuerdo con esta modificación, las secuencias de aminoácidos de los péptidos pueden ser idénticas a las secuencias de los péptidos descritas anteriormente, excepto que el uno o más de los enlaces peptídicos se reemplazan por un enlace pseudopéptido retroinverso. Preferentemente, el enlace peptídico más N-terminal está sustituido, ya que tal sustitución conferirá resistencia a la proteólisis por exopeptidasas que actúan sobre el N-terminal.

La síntesis de péptidos con uno o más enlaces pseudopéptidos retroinversos reducidos es conocida en la técnica (Sisto (1990) y Dalpozzo, y otros (1993), citado anteriormente). Por tanto, los enlaces peptídicos pueden sustituirse por enlaces no peptídicos que permiten que el mimético de péptido adopte una estructura similar y, por tanto, una actividad biológica, al péptido original. También se pueden realizar modificaciones adicionales reemplazando grupos químicos de los aminoácidos con otros grupos químicos de estructura similar. Otro enlace pseudopeptídico adecuado que se sabe que mejora la estabilidad de la escisión enzimática con poca o ninguna pérdida de actividad biológica es el enlace pseudopeptídico isóstero reducido (Couder, y otros (1993), Int. J. Peptide Protein Res., 41:181-184). Por tanto, las secuencias de aminoácidos de estos péptidos pueden ser idénticas a las secuencias de un péptido, excepto que uno o más de los enlaces peptídicos se reemplazan por un enlace pseudopeptídico isóstero. Preferentemente, el enlace peptídico más N-terminal está sustituido, ya que tal sustitución conferirá resistencia a la proteólisis por exopeptidasas que actúan sobre el N-terminal. La síntesis de péptidos con uno o más enlaces pseudopeptídicos isóstero reducidos es conocida en la técnica (Couder, y otros (1993), citado anteriormente). Otros ejemplos incluyen la introducción de enlaces cetometileno o metilsulfuro para reemplazar enlaces peptídicos.

Los derivados peptoides de péptidos NTP representan otra clase de miméticos de péptidos que retienen los determinantes estructurales importantes para la actividad biológica, pero eliminan los enlaces peptídicos, lo que confiere resistencia a la proteólisis (Simon, y otros, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU., 89: 9367-9371). Los peptoides son oligómeros de glicinas N-sustituidas. Se han descrito varios grupos N-alquilo, cada uno correspondiente a la cadena lateral de un aminoácido natural (Simon, y otros (1992), citado anteriormente). Algunos o todos los aminoácidos del péptido se reemplazan con la glicina N-sustituida correspondiente al aminoácido reemplazado.

El desarrollo de miméticos de péptidos se puede ayudar determinando la estructura terciaria del péptido original mediante espectroscopia de RMN, cristalografía y/o modelado molecular asistido por ordenador. Estas técnicas ayudan en el desarrollo de nuevas composiciones de mayor potencia y/o mayor biodisponibilidad y/o mayor estabilidad que el péptido original (Dean (1994), BioEssays, 16: 683-687; Cohen y Shatzmiller (1993), J. Mol Graph., 11: 166-173; Wiley y Rich (1993), Med. Res. Rev., 13: 327-384; Moore (1994), Trends Pharmacol. Sci. 15: 124-129; Hruby (1993), Biopolymers, 33: 1073-1082; Bugg y otros (1993), Sci. Am., 269: 92-98).

Una vez que se identifica un compuesto mimético de péptido potencial, se puede sintetizar y evaluar mediante el uso de los métodos descritos en los ejemplos siguientes para evaluar su actividad. Los compuestos miméticos de péptidos obtenidos mediante los métodos anteriores, que tienen la actividad biológica de los péptidos y una estructura tridimensional similar, están incluidos en esta descripción. Será fácilmente evidente para un experto en la técnica que se puede generar un mimético de péptido a partir de cualquiera de los péptidos que portan una o más de las modificaciones descritas anteriormente. Además, será evidente que los miméticos de péptidos de esta descripción se pueden usar adicionalmente para el desarrollo de compuestos no peptídicos aún más potentes, además de su utilidad como compuestos terapéuticos.

En la actualidad, existen varias organizaciones que son capaces de sintetizar los péptidos descritos en la presente descripción. Por ejemplo, dada la secuencia de un péptido NTP, la organización puede sintetizar el péptido y enviar el péptido sintetizado con la documentación adjunta y la prueba de la identidad del péptido.

Las presentes modalidades están dirigidas a métodos para tratar mamíferos con afecciones que requieren la eliminación de células, tales como tumores benignos y malignos, hiperplasia glandular (por ejemplo, de próstata), vello facial no deseado, verrugas y tejido graso no deseado, o la inhibición o prevención de proliferación celular no deseada, como la estenosis de un stent. Tal un método comprende administrar a un mamífero que lo necesite, o recubrir un dispositivo tal como un stent con una cantidad terapéuticamente efectiva de péptido NTP, en combinación con un agente activo adicional.

El agente activo adicional puede ser uno o más agentes activos seleccionados de (i) agentes activos contra el cáncer (tales como agentes alquilantes, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II, antimetabolitos de ARN/ADN y agentes antimitóticos); (ii) agentes activos para tratar crecimientos benignos tales como agentes activos anti-acné y anti-verrugas (ácido salicílico); (iii) compuestos antiandrógenos (acetato de ciproterona (1a, 2l3-metilen-6-cloro-17 a -acetoxi-6-deshidroprogesterona)) tamoxifeno, inhibidores de aromatasa); (iv) bloqueadores de los receptores alfa1-adrenérgicos (tamsulosina, terazosina, doxazosina, prazosina, bunazosina, indoramina, alfulzosina, silodosina); (v) inhibidores de la 5 a-reductasa (finasterida, dutasterida); (vi) inhibidores de la fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) (tadalafil) y combinaciones de los mismos. Preferentemente, el agente activo adicional se selecciona del grupo que consiste en tamsulosina, finasterida, terazosina, doxazosina, prazosina, tadalafilo, alfuzosina, silodosina, dutasterida, combinaciones de dutasterida y tamsulosina y mezclas y combinaciones de los mismos.

La afección puede ser, por ejemplo, tumores de pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vejiga, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estómago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus revestimientos, médula espinal y sus revestimientos, músculo, tejido conectivo, suprarrenales, paratiroides, tiroides, útero, testículos, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojos, oídos, nariz, garganta, amígdalas, boca, ganglios linfáticos y sistema linfoide, y otros órganos.

Como se usa en la presente descripción, el término "tumor maligno" pretende abarcar todas las formas de carcinomas, sarcomas y melanomas humanos que se presentan en las formas poco diferenciadas, moderadamente diferenciadas y bien diferenciadas.

Esta descripción satisface una necesidad en la técnica de tratamientos que puedan eliminar tumores benignos con menos riesgo y pocos de los efectos secundarios indeseables de la cirugía. Es particularmente necesario un método para eliminar tumores benignos en áreas quirúrgicamente peligrosas, como en lugares profundos del cuerpo (por ejemplo, cerebro, corazón, pulmones y otros).

El método de tratamiento de afecciones donde deben eliminarse células se puede usar junto con métodos convencionales para tratar tales afecciones, tales como escisión quirúrgica, quimioterapia y radiación. En una descripción, se proporciona un método para administrar una composición que comprende un péptido NTP (solo o en combinación con un agente activo adicional), seguido de tratamiento quirúrgico. Los inventores descubrieron sorprendentemente que los pacientes que recibieron el péptido NTP y subsecuentemente se sometieron a tratamiento quirúrgico tuvieron una mejora de IPSS de aproximadamente 15-150 % mayor que la mejora de IPSS en pacientes que recibieron un placebo y subsecuentemente se sometieron a tratamiento quirúrgico. En algunas descripciones, la mejora está dentro del intervalo de aproximadamente 25 a aproximadamente 100 %, o de aproximadamente 30 % a aproximadamente 75 %, o de aproximadamente 40 % a aproximadamente 65 %.

La afección a tratar también puede ser una hiperplasia, hipertrofia o crecimiento excesivo de un tejido seleccionado del grupo que consiste en pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vejiga, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estómago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus revestimientos, médula espinal y sus revestimientos, músculo, tejido conectivo, suprarrenales, paratiroides, tiroides, útero, testículos, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojos, oídos, nariz, garganta, amígdalas, boca y ganglios linfáticos y sistema linfoide.

Otras afecciones que pueden tratarse mediante el uso del método de las descripciones son tejido alterado viral, bacterial o parasitariamente seleccionado del grupo que consiste en pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vejiga, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estómago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus revestimientos, médula espinal y sus revestimientos, músculo, tejido conectivo, suprarrenales, paratiroides, tiroides, útero, testículos, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojos, oídos, nariz, garganta, amígdalas, boca y ganglios linfáticos y sistema linfoide.

La afección a tratar también puede ser una malformación o trastorno de un tejido seleccionado del grupo que consiste en pulmón, mama, estómago, páncreas, próstata, vejiga, hueso, ovario, piel, riñón, seno, colon, intestino, estómago, recto, esófago, sangre, cerebro y sus revestimientos, médula espinal y sus revestimientos, músculo, tejido conectivo, suprarrenales, paratiroides, tiroides, útero, testículos, pituitaria, órganos reproductivos, hígado, vesícula biliar, ojos, oídos, nariz, garganta, amígdalas, boca y ganglios linfáticos y sistema linfoide.

En particular, la afección a tratar puede ser hipertrofia amigdalar, hiperplasia prostática, psoriasis, eccema, dermatosis o hemorroides. La afección a tratar puede ser una enfermedad vascular, tal como aterosclerosis o arteriosclerosis, o un trastorno vascular, tal como venas varicosas, estenosis o reestenosis de una arteria o un stent. La afección a tratar también puede ser una modificación cosmética de un tejido, tal como piel, ojos, oídos, nariz, garganta, boca, músculo, tejido conectivo, cabello o tejido mamario.

Las composiciones terapéuticas de péptidos NTP pueden comprender una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido NTP mezclado con un portador farmacéuticamente aceptable. En algunas descripciones, el agente activo adicional se puede administrar en la misma composición con el péptido NTP, y en otra descripción, la composición que comprende el péptido NTP se administra como una inyección, mientras que el agente activo adicional se formula en un medicamento oral (gel, cápsula, comprimido, líquido, etc.). El material portador puede ser agua para inyección, preferentemente suplementado con otros materiales comunes en soluciones para administración a mamíferos. Típicamente, un péptido NTP para uso terapéutico se administrará en forma de una composición que comprende péptido purificado junto con uno o más portadores, excipientes o diluyentes fisiológicamente aceptables. La solución salina tamponada neutra o la solución salina mezclada con albúmina de suero son portadores apropiados ilustrativos. Preferentemente, el producto se formula como un liofilizado mediante el uso de excipientes apropiados (por ejemplo, sacarosa). Se pueden incluir otros portadores, diluyentes y excipientes estándar según se desee. Las composiciones de las descripciones también pueden comprender tampones conocidos por los expertos en la técnica con un intervalo apropiado de valores de pH, incluyendo tampón Tris de aproximadamente pH 7,0-8,5, o tampón acetato de aproximadamente pH 4,0-5,5, que puede incluir además sorbitol o un sustituto adecuado del mismo.

El uso de péptidos NTP conjugados o enlazados o unidos a un anticuerpo, fragmento de anticuerpo, molécula similar a un anticuerpo o una molécula con una alta afinidad por un marcador tumoral específico, tal como un receptor celular, péptido señal o enzima sobreexpresada, para dirigirlo a los elementos celulares no deseados en un mamífero son tratamiento previo también se incluye en el alcance de las descripciones. El anticuerpo, fragmento de anticuerpo, molécula de tipo anticuerpo o molécula con una alta afinidad por un marcador tumoral específico se usa para dirigir el péptido conjugado a una diana celular o tisular específica. Por ejemplo, un tumor con un antígeno de superficie distintivo o un antígeno expresado puede ser la diana para el anticuerpo, fragmento de anticuerpo o molécula de unión similar a un anticuerpo y las células tumorales pueden ser destruidas por el péptido. Un enfoque de este tipo que usa el direccionamiento de anticuerpos tiene las ventajas anticipadas de disminuir la dosis, aumentar la probabilidad de unión y captación por las células diana y mayor utilidad para direccionar y tratar tumores metastásicos y tumores de tamaño microscópico.

Esta descripción también abarca el uso de péptidos NTP conjugados o enlazados o unidos a una proteína u otra molécula para formar una composición que, tras la escisión en o cerca del(de los) sitio(s) del tumor u otras células no deseadas por una enzima o proteasa específica del tumor o sitio o por un anticuerpo conjugado que se dirige al tumor u otras células no deseadas, libera el péptido en o cerca del(de los) sitio(s) del tumor u otras células no deseadas

Esta descripción también abarca el uso de péptidos NTP conjugados o enlazados o unidos a una proteína u otra molécula para formar una composición que libere el péptido o algún fragmento biológicamente activo del péptido tras la exposición del tejido a tratar a la luz (como en terapias con láser u otra terapia fotodinámica o fotoactivada), otras formas de radiación electromagnética tal como radiación infrarroja, radiación ultravioleta, radiación de rayos X o rayos gamma, calor localizado, radiación alfa o beta, emisiones ultrasónicas u otras fuentes de energía localizada.

Las descripciones también abarcan composiciones terapéuticas de péptidos NTP que emplean dendrímeros, fullerenos y otras moléculas sintéticas, polímeros y macromoléculas donde el péptido y/o su correspondiente molécula de ADN está conjugado, unido o encerrado en la molécula, polímero o macromolécula, ya sea por sí mismo o junto con otras especies de moléculas, tal como un marcador específico de tumor. Por ejemplo, la patente de EE. UU. núm. 5,714,166, Bioactive and/or Targeted Dendimer Conjugates, proporciona un método para preparar y usar, entre otros, conjugados de polímeros dendríticos compuestos de al menos un dendrímero con un director(es) diana y al menos un agente bioactivo conjugado a él.

Esta descripción también abarca métodos para tratar mamíferos con composiciones terapéuticas de péptidos NTP y/o genes y vehículos de suministro de fármacos tales como emulsiones lipídicas, polímeros micelares, microesferas poliméricas, polímeros electroactivos, hidrogeles y liposomas, en combinación con un agente activo adicional.

El uso de péptidos NTP o genes relacionados o equivalentes de genes transferidos a las células no deseadas en un mamífero también está incluido en las descripciones. La sobreexpresión del péptido NTP dentro del tumor se puede usar para inducir la muerte de las células del tumor y reducir así la población de células tumorales. Se prevé que la transferencia de genes o equivalentes de genes del péptido NTP para tratar los elementos celulares no deseados tendrá la ventaja de requerir menos dosificación y de transmitirse a la progenie celular de los elementos celulares diana, lo que requiere una terapia menos frecuente y menos terapia total. Esta descripción también abarca la transferencia de genes que codifican una proteína de fusión que contiene un péptido NTP a las células no deseadas o células vecinas donde, tras la expresión del gen y la producción y/o secreción de la proteína de fusión, se escinde la proteína de fusión ya sea por enzimas o proteasas nativas o por un profármaco para liberar el péptido NTP en, a o cerca de las células no deseadas.

El uso de conjugados de péptido-anticuerpo recombinantes clonados; conjugados de fragmento de péptidoanticuerpo recombinante clonados; y conjugados de proteína de tipo péptido-anticuerpo recombinante clonados para la administración a mamíferos sin tratamiento previo también está abarcado en el alcance de las descripciones. Las ventajas de un péptido NTP clonado combinado con un conjugado dirigido (tal como un anticuerpo, un fragmento de anticuerpo, una molécula similar a un anticuerpo o una molécula con una alta afinidad por un receptor específico del cáncer u otro marcador tumoral) son que tal una molécula combina las ventajas del direccionamiento descritas anteriormente además de las ventajas para la fabricación y producción estandarizada de la molécula conjugada clonada.

Esta descripción también abarca el uso de composiciones terapéuticas de péptidos NTP o genes o equivalentes de genes como un componente del recubrimiento de un dispositivo médico tal como un stent para eliminar, inhibir o prevenir la proliferación o acumulación celular no deseada, en combinación con un agente activo adicional.

Las formas de dosificación sólidas para administración oral incluyen, pero no se limitan a, cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos y gránulos. En tales formas de dosificación sólidas, el agente activo adicional y/o el péptido NTP se pueden mezclar con al menos uno de los siguientes: (a) uno o más excipientes inertes (o portadores), tales como citrato de sodio o fosfato dicálcico; (b) rellenos o diluyentes, tales como almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico; (c) aglutinantes, tales como carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga; (d) humectantes, tales como glicerol; (e) agentes desintegrantes, tales como agar-agar, carbonato de calcio, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos y carbonato de sodio; (f) retardadores de solución, tal como parafina; (g) aceleradores de la absorción, tales como compuestos de amonio cuaternario; (h) agentes humectantes, tales como alcohol acetílico y monoestearato de glicerol; (i) adsorbentes, tales como caolín y bentonita; y (j) lubricantes, tales como talco, estearato de calcio, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato de sodio o mezclas de los mismos. Para cápsulas, comprimidos y píldoras, las formas de dosificación también pueden comprender agentes tamponantes.

Las formas de dosificación líquidas para administración oral incluyen emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden comprender diluyentes inertes comúnmente usados en la técnica, tales como agua u otros solventes, agentes solubilizantes y emulsionantes. Los ejemplos de emulsionantes son alcohol etílico, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, dimetilformamida, aceites, tales como aceite de semilla de algodón, aceite de cacahuete, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino y aceite de sésamo, glicerol, alcohol tetrahidrofurfurílico, polietilenglicoles, ésteres de ácidos grasos de sorbitán o mezclas de estas sustancias y similares.

Además de tales diluyentes inertes, la composición también puede incluir adyuvantes, tales como agentes humectantes, agentes emulsionantes y de suspensión, agentes edulcorantes, saborizantes y perfumantes.

Los niveles de dosificación reales de los ingredientes activos en las composiciones de las descripciones se pueden variar para obtener una cantidad de péptido NTP y agente activo adicional que sea efectiva para obtener una respuesta terapéutica deseada para una composición y método de administración particulares. Por tanto, el nivel de dosificación seleccionado depende del efecto terapéutico deseado, la vía de administración, la duración deseada del tratamiento y otros factores.

Con los mamíferos, incluidos los humanos, las cantidades efectivas se pueden administrar sobre la base del área de superficie corporal. La interrelación de las dosificaciones para animales de varios tamaños, especies y humanos (basada en mg/M2 de superficie corporal) está descrita por EJ Freireich y otros, Cancer Chemother. Rep., 50 (4):219 (1966). El área de superficie corporal se puede determinar aproximadamente a partir de la altura y el peso de un individuo (véase, por ejemplo, Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, NY págs. 537-538 (1970)).

La dosis diaria total del péptido NTP y el agente activo adicional administrada a un huésped puede ser en dosis únicas o divididas. Las composiciones de unidades de dosificación pueden contener cantidades de submúltiplos de las mismas que se puedan usar para completar la dosis diaria. Sin embargo, se entenderá que el nivel de dosis específico para cualquier paciente en particular dependerá de una variedad de factores que incluyen el peso corporal, salud general, sexo, dieta, tiempo y vía de administración, potencia del fármaco administrado, tasas de absorción y excreción, combinación con otros fármacos y la gravedad de la enfermedad particular que se está tratando.

Un método de administración de una composición de péptido NTP de acuerdo con las descripciones incluye, pero no se limita a, administrar los compuestos por vía intramuscular, oral, intravenosa, intraperitoneal, intracerebral (intraparenquimatosa), intracerebroventricular, intratumoral, intralesional, intradérmica, intratecal, intranasal, intraocular, intraarterial, tópica, transdérmica, mediante un aerosol, infusión, inyección en bolo, dispositivo de implantación, sistema de liberación sostenida, etc. Un método de administración del agente activo adicional incluye administrar el agente activo adicional junto con el péptido NTP o por separado, preferentemente como medicación oral.

Otro método de administrar un péptido NTP de las descripciones es por vía transdérmica o transcutánea. El agente activo adicional puede emplearse junto con el péptido NTP, o puede administrarse por separado como se discutió anteriormente. Un ejemplo de tal una descripción es el uso de un parche. En particular, se puede preparar un parche con una suspensión fina de péptido en, por ejemplo, dimetilsulfóxido (DMSO), o una mezcla de DMSO con aceite de semilla de algodón y ponerse en contacto con la piel del mamífero que porta el tumor lejos del sitio de ubicación del tumor dentro de una bolsa de piel. Otros medios o mezclas de los mismos con otros solventes y soportes sólidos también funcionarían. El parche puede contener el compuesto peptídico en forma de solución o suspensión. A continuación, el parche se puede aplicar a la piel del paciente, por ejemplo, insertándolo en una bolsa de piel del paciente, formada doblando y manteniendo la piel junta por medio de puntadas, clips u otros dispositivos de sujeción. Esta bolsa debe emplearse de tal manera que se asegure el contacto continuo con la piel sin la interferencia del mamífero. Además de usar una bolsa de piel, se puede usar cualquier dispositivo que asegure la colocación firme del parche en contacto con la piel. Por ejemplo, se podría usar un vendaje adhesivo para mantener el parche en su lugar sobre la piel.

Los péptidos NTP, en combinación con un agente activo adicional, pueden administrarse en una formulación o preparación de liberación sostenida. Los ejemplos adecuados de preparaciones de liberación sostenida incluyen matrices poliméricas semipermeables en forma de artículos moldeados, por ejemplo, películas o microcápsulas. Las matrices de liberación sostenida incluyen poliésteres, hidrogeles, polilactidas (patente de EE. UU. núm. 3,773,919, EP 58,481), copolímeros de ácido L-glutámico y gamma etil-L-glutamato (Sidman y otros, Biopolymers, 22: 547-556), poli(2-hidroxietil-metacrilato) (Langer y otros, J. Biomed. Mater. Res., 15: 167-277 y Langer, Chem. Tech., 12: 98­ 105), etileno acetato de vinilo (Langer y otros, supra) o ácido poli-D(-)-3-hidroxibutírico (EP 133,988). Las composiciones de liberación sostenida también pueden incluir liposomas, que se pueden preparar mediante cualquiera de varios métodos conocidos en la técnica (por ejemplo, Eppstein y otros, Proc. Natl. Acad. Sci. EE. UU., 82: 3688-3692; EP 36,676; EP 88,046 y EP 143,949).

Otro método de administrar un péptido NTP de las descripciones es mediante infusión directa o indirecta del péptido NTP en el tumor u otro tejido a tratar. En esta descripción, el agente activo adicional se administrará típicamente mediante una vía de administración diferente a la del péptido NTP. Un ejemplo de tal descripción es la inyección directa del péptido NTP en el tumor u otro tejido a tratar. El tratamiento puede consistir en una única inyección, múltiples inyecciones en una sola ocasión o una serie de inyecciones durante un período de horas, días o meses con seguimiento de la regresión o destrucción del tumor u otro tejido a tratar mediante biopsia, imagenología u otros métodos de seguimiento del crecimiento de tejidos. La inyección en el tumor u otro tejido a tratar puede ser mediante un dispositivo insertado en un orificio como la nariz, boca, oído, vagina, recto o uretra o mediante una incisión para llegar al tumor o tejido in vivo y se puede realizar junto con un sistema óptico o de formación de imágenes, tal como un ultrasonido o un endoscopio de fibra óptica, para identificar el lugar apropiado para la inyección. Otro ejemplo de tal descripción es el uso de un dispositivo que puede proporcionar una infusión constante del péptido NTP al tejido a lo largo del tiempo.

Otro método para administrar un péptido NTP y un agente activo adicional de las descripciones es junto con un procedimiento quirúrgico o similar empleado para extirpar físicamente, seccionar o eliminar o destruir el tumor u otros tejidos o elementos celulares necesarios o deseados para ser eliminados o destruidos en donde se administra un péptido NTP de las descripciones en el área o áreas inmediatas que rodean el área o áreas donde se eliminó el tumor u otro tejido para destruir o impedir el crecimiento de cualquier célula tumoral u otros elementos celulares no eliminados o destruidos por el procedimiento

Otro método para administrar un péptido NTP de las descripciones es mediante la implantación de un dispositivo dentro del tumor u otro tejido a tratar. En esta descripción, el agente activo adicional se administrará típicamente mediante una vía de administración diferente a la del péptido NTP. Un ejemplo de tal descripción es la implantación de un disco que contiene el péptido en el tumor u otro tejido a tratar, y la administración del agente activo adicional mediante administración oral. El disco libera una dosis terapéutica del péptido NTP en el tejido con el tiempo. Alternativa o adicionalmente, la composición puede administrarse localmente mediante implantación en el área afectada de una membrana, esponja u otro material apropiado sobre el que se ha absorbido el péptido NTP. Cuando se usa un dispositivo de implantación, el dispositivo puede implantarse en cualquier tejido u órgano adecuado, y el suministro del péptido puede ser directamente a través del dispositivo mediante bolo, o mediante administración continua, o mediante catéter mediante el uso de infusión continua.

Un método alternativo de administración es introducir una o más copias de un gen que codifica el péptido NTP en la célula que se está dirigiendo y, si es necesario, inducir la(s) copia(s) del gen para que comience a producir el péptido intracelularmente. En esta descripción, el agente activo adicional se administrará típicamente mediante una vía de administración diferente a la del péptido NTP. Una forma en la que se puede aplicar la terapia génica es usar el gen que codifica el péptido NTP (ya sea ADN genómico, ADNc y/o ADN sintético que codifica el péptido (o un fragmento, variante, homólogo o derivado del mismo)) que puede ser operativamente unido a un promotor constitutivo o inducible para formar un constructo de ADN de terapia génica. El promotor puede ser homólogo o heterólogo a un gen que codifica un péptido endógeno, siempre que sea activo en el tipo de célula o tejido en el que se insertará el constructo. Otros componentes del constructo de ADN de terapia génica pueden incluir opcionalmente, según sea necesario, moléculas de ADN diseñadas para la integración específica de sitio (por ejemplo, secuencias flanqueantes endógenas útiles para la recombinación homóloga), promotor, potenciador(es) o silenciador(es) específico de tejido, moléculas de ADN capaces de proporcionar una ventaja selectiva sobre la célula parental, moléculas de ADN útiles como etiquetas para identificar células transformadas, sistemas de selección negativa, agentes de unión específicos de células (como, por ejemplo, para el direccionamiento celular), factores de internalización específicos de células y factores de transcripción para potenciar la expresión de un vector, así como factores que permitan la fabricación del vector.

Los medios de administración de genes a una célula o tejido in vivo o ex vivo incluyen (pero no se limitan a) inyección directa de ADN desnudo, métodos balísticos, transferencia mediada por liposomas, transferencia mediada por receptor (complejo ligando-ADN), electroporación y precipitación con fosfato de calcio. Ver la patente de EE. UU. núm. 4,970,154, el documento w O 96/40958, patente de EE. UU. núm. 5,679,559, patente de EE. UU. núm.

5,676,954 y la patente de EE. UU. núm. 5,593,875. También incluyen el uso de un vector viral tal como un retrovirus, adenovirus, virus adenoasociado, poxvirus, lentivirus, virus del papiloma o virus del herpes simple, uso de un conjugado de ADN-proteína y uso de un liposoma. El uso de vectores de terapia génica se describe, por ejemplo, en la patente de EE. UU. núm. 5,672,344, patente de EE. UU. núm. 5,399,346, patente de EE. UU. núm. 5,631,236 y la patente de EE. UU. núm. 5,635,399.

El gen que codifica el péptido NTP puede administrarse mediante la implantación en ciertas células de pacientes que han sido modificadas genéticamente ex vivo, mediante el uso de métodos como los descritos en la presente descripción, para expresar y secretar el péptido NTP o fragmentos, variantes, homólogos o derivados del mismo. Tales células pueden ser células animales o humanas, y pueden derivarse del propio tejido del paciente o de otra fuente, humana o no humana. Opcionalmente, las células pueden inmortalizarse o ser células madre. Sin embargo, para disminuir la posibilidad de una respuesta inmunológica, se prefiere que las células estén encapsuladas para evitar la infiltración de los tejidos circundantes. Los materiales de encapsulación son típicamente membranas o recintos poliméricos semipermeables biocompatibles que permiten la liberación del producto o productos proteicos pero evitan la destrucción de las células por el sistema inmunológico del paciente o por otros factores perjudiciales de los tejidos circundantes. Los métodos usados para la encapsulación de células en membranas son familiares para el experto en la técnica, y la preparación de células encapsuladas y su implantación en pacientes se puede lograr sin una experimentación indebida. Ver, por ejemplo, las patentes de EE. UU. núm. 4,892,538; 5,011,472; y 5,106,627. Un sistema para encapsular células vivas se describe en el documento PCT WO 91/10425. Las técnicas para formular una variedad de otros medios de suministro sostenido o controlado, tales como portadores de liposomas, partículas o perlas bioerosionables, también son conocidas por los expertos en la técnica y se describen, por ejemplo, en la patente de EE. UU. núm. 5,653,975. Las células, con o sin encapsulación, pueden implantarse en tejidos corporales u órganos adecuados del paciente.

Las descripciones particularmente preferidas de métodos para tratar un trastorno que requiere la eliminación o destrucción de células mediante la administración de uno o más péptidos NTP y agentes activos adicionales de las descripciones, y las células que se van a eliminar o destruir son tejido linfoide. Otras descripciones preferidas incluyen el tratamiento de afecciones que requieren la eliminación o destrucción de células tales como cualquiera seleccionada de hipertrofia amigdalina individual o en combinación, hiperplasia prostática, enfermedad vascular (aterosclerosis o arteriesclerosis), hemorroides, venas varicosas, psoriasis, eccema, dermatosis y una modificación cosmética de un tejido. Otras afecciones tratables incluyen estenosis, reestenosis, ocultación o bloqueo de una arteria o de un stent colocado o implantado en una arteria. Los tejidos adecuados que pueden tratarse en las descripciones preferidas incluyen piel, ojos, oídos, nariz, garganta, boca, músculo, conectivo, cabello y mama.

Otras afecciones preferidas tratadas de acuerdo con las descripciones incluyen aquellas seleccionadas de una enfermedad inflamatoria, enfermedad autoinmune, enfermedad metabólica, enfermedad hereditaria/genética, enfermedad traumática o lesión física, enfermedad por deficiencia nutricional, enfermedad infecciosa, enfermedad amiloide, enfermedad de fibrosis, enfermedad de almacenamiento, malformación congénita, enfermedad por deficiencia enzimática, envenenamiento, intoxicación, enfermedad ambiental, enfermedad por radiación, enfermedad endocrina, enfermedad degenerativa y enfermedad mecánica. En otra descripción preferida, el péptido se conjuga, se enlaza o se une a una molécula seleccionada de un anticuerpo, fragmento de anticuerpo y molécula de unión similar a un anticuerpo, en donde dicha molécula tiene una mayor afinidad para unirse a un tumor u otra diana que por unirse a otras células. En otra descripción, el péptido es parte de una única molécula recombinante clonada nueva que consiste en el péptido y una molécula seleccionada del grupo que consiste en un anticuerpo, fragmento de anticuerpo y molécula de unión similar a un anticuerpo, en donde la molécula tiene una mayor afinidad por la unión a un tumor u otra diana que la unión a otras células.

En determinadas descripciones, la invención proporciona un método para tratar la BPH que comprende administrar una cantidad terapéuticamente efectiva de un péptido NTP, específicamente un péptido aislado que comprende la secuencia de aminoácidos en la SEQ ID NO. 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ne-Lys-Arg-Cys-Leu), en combinación con al menos un agente activo seleccionado del grupo que consiste en (1) un inhibidor de 5areductasa y/o un antiestrógeno, (2) un inhibidor de 5a-reductasa y/o un inhibidor de aromatasa, (3) un inhibidor de 5a-reductasa y/o un inhibidor de 17p-HSD, (4) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (5) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (6) un inhibidor de 5areductasa, un inhibidor de aromatasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (7) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno y un antiestrógeno, (8), un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno y un inhibidor de aromatasa, (9) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (10) un inhibidor de 5areductasa, un antiandrógeno, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (11) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno, un inhibidor de aromatasa y un inhibidor de 17p-HSD, (12) un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno, un inhibidor de aromatasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (13) un inhibidor de 17p-HSD y un antiestrógeno, (14) un inhibidor de 17p-HSD y un inhibidor de aromatasa, (15) un inhibidor de 17p-HSD, un inhibidor de aromatasa y un antiestrógeno, (16) un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno y un antiestrógeno, (17) un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno y un inhibidor de aromatasa, (18) un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (19) un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa y (20) un antiestrógeno, un inhibidor de aromatasa y un antiandrógeno, (21) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa y un antiestrógeno, (22) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa y un inhibidor de aromatasa, (23) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a reductasa y un inhibidor de 17p-HSD, (24) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (25) un agonista o antagonista LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (26) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un inhibidor de aromatasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (27) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno y un antiestrógeno, (28), un agonista o antagonista de la LHRH, un inhibidor de la 5a-reductasa, un antiandrógeno y un inhibidor de la aromatasa, (29) un agonista o antagonista de la LHRH, un inhibidor de la 5areductasa, un antiandrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (30) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (31) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno, un inhibidor de aromatasa y un inhibidor de 17p-HSD, (32) un agonista o antagonista de la LHRH, un inhibidor de 5a-reductasa, un antiandrógeno, un inhibidor de aromatasa, un antiestrógeno y un inhibidor de 17p-HSD, (33) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD y un antiestrógeno, (34) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD y un inhibidor de aromatasa, (35) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD, un inhibidor de aromatasa y un antiestrógeno, (36) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno y un antiestrógeno, (37) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno y un inhibidor de aromatasa, (38) un agonista o antagonista de LHRH, un inhibidor de 17p-HSD, un antiandrógeno, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa, (39) un agonista o antagonista de LHRH, un antiestrógeno y un inhibidor de aromatasa y (40) un agonista o antagonista de LHRH, un antiestrógeno, un inhibidor de aromatasa y un antiandrógeno.

Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar las presentes descripciones. Debe entenderse, sin embargo, que las descripciones no deben limitarse a las condiciones o detalles específicos descritos en estos ejemplos. A lo largo de la descripción, todas y cada una de las referencias a un documento disponible públicamente, incluida una patente estadounidense. En particular, las descripciones incorporan expresamente por referencia los ejemplos contenidos en las Publicaciones de solicitud de patente de EE. UU. pendientes núms. 2003/0054990 (ahora abandonada); 2007/0237780 (ahora abandonada); 2003/0054990 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,172,893);

2003/0096350 (ahora patente de EE. UU. núm. 6,924,266); 2003/0096756 (ahora patente de EE. UU. núm.

7,192,929); 2003/0109437 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,241,738); 2003/0166569 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,317,077); y 2005/0032704 (ahora patente de EE. UU. núm. 7,408,021), cada uno de los cuales revela que ciertos péptidos especificados en ellas son agentes efectivos para provocar la muerte celular in vivo en tejido muscular normal de roedor, tejido conectivo subcutáneo, dermis y otros tejidos.

Ejemplo Uno

En un estudio de 97 pacientes que habían tomado o no habían tomado previamente medicamentos orales convencionales aprobados para su hiperplasia prostática benigna (BPH), los pacientes recibieron una única inyección doble ciego de un péptido específico descrito por la secuencia de aminoácidos Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu (en adelante “FÁRMACO”) (n = 61) o vehículo solo (placebo) (n=36) y fueron seguidos clínicamente durante 2-5 años. A los pacientes con BPH se les administró una inyección intraprostática de a) FÁRMACO en solución salina tamponada con fosfato de pH 7,2 ("PBS") o b) PBS solo, en condiciones de doble ciego por un urólogo en un consultorio bajo guía ecográfica. Los pacientes se siguieron durante 2 a 5 años con exámenes físicos regulares, pruebas de laboratorio y evaluaciones de los síntomas. Los pacientes que a) recibieron FÁRMACO y subsecuentemente recibieron además medicamentos orales convencionales usados para tratar la BPH, incluidos alfabloqueadores como tamsulosina, terazosina, doxazosina, silodosina, etc. o inhibidores de 5-alfa reductasa como finasterida, dutasterida o fosfodiesterasa tipo 5 (PDE5) inhibidores como tadalafil, o combinaciones de los mismos, se compararon con pacientes que b) recibieron inyecciones de vehículo solo (PBS) y subsecuentemente recibieron medicamentos orales convencionales como los descritos en a) anteriormente.

La evaluación sintomática se midió mediante la Puntuación Internacional de Síntomas Prostáticos (IPSS), que es una escala cuantitativa que se usa para medir la mejoría o el empeoramiento de los síntomas prostáticos. La IPSS cuantifica lo siguiente: 1) vaciado incompleto de la vejiga después de orinar; 2) micción frecuente; 3) detención y comienzo durante la micción; 4) necesidad urgente de orinar; 5) debilidad del flujo urinario; 6) necesidad de empujar o esforzarse al orinar; 7) necesidad de orinar después de irse a dormir por la noche (nicturia). Se comparó la diferencia con respecto a la IPSS inicial en pacientes que recibieron FÁRMACO más medicamentos orales convencionales versus pacientes que recibieron PBS solo más medicamentos convencionales orales para la BPH. Sorprendentemente, los resultados de la medicación oral en sujetos que recibieron una única inyección previa de FÁRMACO fueron superiores a los resultados de la medicación oral en sujetos que recibieron una inyección previa de vehículo solo. Los resultados se resumen en la Tabla 4.

Tabla 4

De acuerdo con este ejemplo, el uso del péptido NTP en combinación con medicación oral adicional en el tratamiento de la BPH proporcionó una mejora media de IPSS, en comparación con el control, de aproximadamente 40 %.

Ejemplo Dos

En un estudio de 30 pacientes que nunca antes habían tomado medicamentos orales convencionales aprobados para su BPH, los pacientes recibieron una sola inyección doble ciego de FÁRMACO (n=21) o vehículo solo (placebo) (n=9) y fueron seguidos clínicamente durante 2-5 años. Se evaluó la respuesta de los pacientes de los grupos con el fármaco y de placebo con el vehículo anteriores que no habían recibido previamente medicamentos orales convencionales y subsecuentemente recibieron medicamentos orales convencionales para determinar sus respuestas a los medicamentos de BPH orales convencionales. Sorprendentemente, los pacientes que habían recibido tratamiento con FÁRMACO tuvieron una respuesta sintomática de BPH significativamente mejor de lo esperado después de la medicación oral convencional para la BPH (mejora media de 7,48 puntos en la Puntuación de Síntomas en comparación con la mejora esperada de 3-5 puntos del tratamiento farmacológico convencional solo, p <,02), mientras que los pacientes tratados solo con placebo no lo hicieron (mejora media de 2,33 puntos en comparación con la mejora esperada de 3-5 puntos).

De acuerdo con este ejemplo, el uso del péptido NTP en combinación con medicación oral adicional en el tratamiento de la BPH proporcionó una mejora media de IPSS, en comparación con el control, de aproximadamente 221 %.

Claims (10)

REIVINDICACIONES

1. Un péptido aislado que consiste en la secuencia de aminoácidos en la SEQ ID NO. 66 (Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu) para el uso en un método de tratamiento de un mamífero para la eliminación o destrucción de proliferaciones celulares no deseadas, donde las proliferaciones celulares no deseadas son hiperplasia prostática benigna (BPH), que comprende administrar al mamífero una cantidad terapéuticamente efectiva del péptido aislado, en combinación con al menos un agente activo seleccionado del grupo que consiste en tamsulosina, finasterida, terazosina, doxazosina, prazosina, tadalafil, alfuzosina, silodosina, dutasterida, combinaciones de dutasterida y tamsulosina, y mezclas y combinaciones de los mismos, en donde el método elimina o destruye las proliferaciones celulares no deseadas.

2. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los péptidos como se reivindica en la reivindicación 1 y un portador.

3. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el al menos un agente activo es uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste en tamsulosina, finasterida, terazosina, doxazosina, tadalafil, dutasterida, combinaciones de dutasterida y tamsulosina, y mezclas y combinaciones de los mismos.

4. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el método comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de al menos uno de los péptidos como se reivindica en la reivindicación 1 y al menos uno y hasta 25 aminoácidos adicionales que flanquean el N-terminal o C-terminal del péptido aislado de la reivindicación 1.

5. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el péptido se administra mediante un método seleccionado del grupo que consiste en vía oral, subcutánea, intradérmica, intranasal, intravenosa, intramuscular, intratecal, intranasal, intratumoral, tópica y transdérmica.

6. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el método se lleva a cabo en el mamífero antes, durante o después del tratamiento del mamífero con un tratamiento seleccionado del grupo que consiste en escisión quirúrgica, trasplante, injerto, quimioterapia, inmunoterapia, vacunación, ablación térmica o eléctrica, crioterapia, terapia con láser, fototerapia, terapia génica y radiación.

7. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el método proporciona una mejora de la IPSS (Puntuación Internacional de Síntomas Prostáticos) media, en comparación con la mejora encontrada al tratar a un mamífero con un placebo en combinación con un agente activo adicional seleccionado del grupo que consiste en tamsulosina, finasterida, terazosina, doxazosina, prazosina, tadalafil, alfuzosina, silodosina, dutasterida, combinaciones de dutasterida y tamsulosina, y mezclas y combinaciones de los mismos, de aproximadamente 30 % a aproximadamente 150 %.

8. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 7, en donde la mejora es de aproximadamente 40 %.

9. El péptido aislado para el uso de la reivindicación 1, en donde el al menos un agente activo se administra por separado o en momentos diferentes del al menos un péptido aislado.

10. El péptido aislado para el uso de la reivindicación, en donde el al menos un péptido aislado se administra mediante un método seleccionado del grupo que consiste en vía intravenosa, intramuscular, intratecal, intranasal, intratumoral, tópica y transdérmica, y el al menos un agente activo se administra por vía oral.