CN108135974A - 用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的联合组合物 - Google Patents

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Abstract

实施方式包括使用基于小肽的化合物与其他活性剂联合治疗需要去除或破坏细胞元件的病症(例如良性或恶性肿瘤)的方法。所述方法包括但不限于以肌内、口服、静脉内、鞘内、前列腺内、瘤内、鼻内、局部、透皮等方式将单独的或结合到运载体的该化合物给予有需要的哺乳动物。

Description

用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的联合组 合物
本申请要求2015年6月12日提交的美国非临时专利申请号14/738,551的优先权，其全文通过引用纳入本文。
背景技术
1.实施方式的领域
所述实施方式包括使用含有基于小肽的化合物与至少一种其他活性剂和药学上可接受的运载体联用的组合物治疗需要去除或破坏细胞成分(例如人类良性或恶性肿瘤)的病症的组合物和方法。所述方法包括但不限于以肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、病灶内、眼内、动脉内、鞘内、瘤内、鼻内、局部、透皮、皮下或皮内的方式给予组合物。
2.相关技术的描述
许多医学治疗和程序的本质涉及去除或破坏有害或不需要的组织。这样的治疗的例子包括手术切除癌性或癌前生长，通过化学疗法破坏转移瘤，以及减少腺体(例如前列腺)增生。其他的例子包括去除不需要的面部毛发、去除疣、去除不需要的脂肪组织。
需要有效的组合物，其将破坏并因此促进去除有害或不需要的细胞和组织或抑制其进一步生长，但将主要具有局部作用并且具有最小或无全身毒性。
已知有这种效果的一些试剂在下述中公开：美国专利申请公开第2007/0237780号(现已放弃)、2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)，其每一个的公开内容通过引用整体并入本文。
癌症是细胞内部调节机制的异常，导致细胞不受控制的生长和繁殖。正常细胞构成组织，当这些细胞丧失其作为特定的、受控的和协调的单元(去分化)的能力时，缺陷导致细胞群体之间的混乱。发生这种情况时，会形成肿瘤。
组织的良性过度生长是异常状况，其中希望从生物体中除去细胞。良性肿瘤不会转移到整个身体但确实会导致疾病症状的细胞增殖。如果这些肿瘤位于大脑等器官中难以到达的区域，则可能是致命的。有良性肿瘤的器官包括肺，脑，皮肤，垂体，甲状腺，肾上腺皮质和髓质，卵巢，子宫，睾丸，结缔组织，肌肉，肠，耳，鼻，喉，扁桃腺，口，肝，胆囊，胰腺，前列腺，心脏和其他器官。
手术往往是癌症治疗的第一步。手术的目的各不相同。有时用它去除尽可能多的明显的肿瘤，或者至少“广泛切除”(去除肿瘤的主要肿块，以便减少需要用其它方法治疗的肿瘤)。根据癌症类型和位置的不同，手术也可以为患者提供一些症状缓解。例如，如果外科医生能够移除大部分扩张的脑肿瘤，那么头骨内的压力就会降低，导致患者症状的改善。
并非所有的肿瘤都适合手术。有些可能位于身体的某些部位，使其无法完全去除。这些例子包括脑干(控制呼吸的大脑部分)或在主要血管中或周围生长的肿瘤。在这些情况下，由于与肿瘤切除相关的高风险，手术的作用是有限的。
在某些情况下，手术不是用来广泛切除肿瘤组织的，因为它根本就不是必需的。霍奇金淋巴瘤就是一个例子，它是一种淋巴结肿瘤，对化疗和放射治疗的组合响应非常好。在霍奇金淋巴瘤中，达到治愈很少需要手术，但几乎总是用来确诊。
化疗是癌症治疗的另一种常见形式。基本上，它涉及使用药物(通常由口或注射给药)，其特异性地攻击整个身体内的(例如肿瘤中发现的)快速分裂细胞。这使得化疗可用于治疗已经转移的癌症，以及具有通过血液和淋巴系统扩散的高度机会但在原发性肿瘤之外不明显的肿瘤。化疗也可用于增强局部肿瘤对手术和放疗的反应。例如，对于一些头颈部癌症就是这种情况。
不幸的是，人体内其他正常快速分裂的细胞(如胃和头发的内壁)也受到化学疗法的影响。由于这个原因，许多化疗药物引起不良的副作用，如恶心，呕吐，贫血，脱发或其他症状。这些副作用是暂时的，有药物可以帮助缓解这些副作用。随着我们的知识持续增长，研究人员设计出了更新的化疗药物，不仅更好地杀死癌细胞，而且对患者的副作用也更少。
化疗以各种方式给予患者。有些包括药片和其他药物通过静脉注射或其他注射。对于注射化疗，病人去医生办公室或医院接受治疗。其他化疗药物需要每天24小时连续输注到血流中。对于这些类型的化疗，执行较小的外科手术以植入由患者佩戴的小型泵。随后泵缓慢地给予药物。在许多情况下，将永久性端口置于患者的静脉中以消除反复针刺的需要。
良性肿瘤和畸形也可以通过多种方法治疗，包括手术，放疗，药物治疗，热或电消融，冷冻疗法等。尽管良性肿瘤不会转移，但它们可以长大并且可以复发。良性肿瘤的手术摘除具有一般手术的所有困难和副作用，并且通常对于一些良性肿瘤(例如垂体腺瘤，脑膜瘤，前列腺增生等)必须重复进行。
雄激素在男性良性前列腺增生发展中的作用已有文献报道(Wilson,N.Engl.J.Med.317:628-629,1987)。事实上，良性前列腺增生在没有睾丸的情况下不会发展(参见Wendel等，J.Urol.108:116-119,1972)。
已知通过手术或医药(LHRH激动剂)去势来阻断睾丸雄激素分泌减少了前列腺大小(Auclair等,Biochem.Biophys.Res.Commun.76:855-862,1977；Auclair等,Endocrinology 101:1890-1893,1977；Labrie等,Int.J.Andrology,suppl.2(V.Hansson,编),Scriptor Publisher APR,第303-318页,1978；Labrie等,J.Andrology 1:209-228,1980；Tremblay和Belanger,Contraception 30:483-497,1984；Tremblay等,Contraception 30:585-598,1984；Dube等,Acta Endocrinol.(Copenh)116:413-417,1987；Lacoste等,Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；White,Ann.Surg.22:1-80,1895；Faure等,Fertil.Steril.37:416-424,1982；Labrie等,Endocrine Reviews 7:67-74,1986；Huggins和Stevens,J.Urol.43:705-714,1940；Wendel等,J.Urol.108:116-119,1972；Peters和Walsh,N.Engl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等,J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987)。
几项研究表明用抗雄激素剂治疗也降低前列腺大小(Neri等,Endocrinology,82:311-317,1968；Neri等,Investigative Urology,10:123-130,1972；Tunn等,ActaEndocrinol.(Copenh.)91:373-384,1979；Seguin等,Mol.Cell.Endocrinol.,21:37-41,1981；Lefebvre等,The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie,J.SteroidBiochem,29:691-698,1988；Lacoste等,Mol.Cell.Endocrinol.56:141-147,1988；Tunn等,Invest.Urol.18:289-292,1980；Scott和Wade,J.Urol.101:81-85,1969；Caine等,J.Urol.114:564-568,1975；Stone等,J.Urol.141:240A,1989；Clejan等,J.Urol.141:534A,1989)。
美国专利号3,423,507公开了抗雄激素剂环丙孕酮乙酸酯(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)用于治疗良性前列腺增生的用途。纯的抗雄激素剂(美国专利号4,329,364)引起睾酮分泌增加，其可以导致更高程度的芳香化成雌激素，根据目前的知识预期对前列腺增生具有负面影响(Jacobi等，Endocrinology 102：1748-1755,1978)。
几项研究已经表明，与各种单独使用的治疗相比，化学去势(LHRH激动剂)和抗雄激素剂的组合治疗引起更大的前列腺大小抑制(Seguin等,Mol.Cell.Endocrinol.21:37-41,1981；Lefebvre等,The Prostate 3:569-578,1982；Marchetti和Labrie,J.SteroidBiochem.29:691-698,1988)。
在前列腺以及许多其他组织中，睾酮被5α-还原酶不可逆地转化为更有效的雄激素二氢睾酮(Bruchovsky和Wilson,J.Biol.Chem.243:2012-2021,1968；Wilson,《生理学手册5》(Handbook of Physiology 5)(第7节),491-508页,1975)已经发现5α-还原酶抑制剂抑制前列腺生长(Brooks等,Endocrinology 109:830,1981；Brooks等,Proc.Soc.Exp.Biol.Med.169:67,1982；Brooks等,Prostate 3:35,1982；Wenderoth等,Endocrinology 113,569-573,1983；McConnell等,J.Urol.141:239A,1989；Stoner,E.,5α-还原酶抑制剂在良性前列腺肥大中的作用的讲座(Lecture on the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatic hypertropy),第84届AUA年会达拉斯,1989年5月8日)。
5α-还原酶抑制剂Merck L 652,931对青春期前大鼠前列腺和精囊发育的抑制作用描述于内分泌学会第71届年会会刊(Proc.71st Annual Meeting of Endocr.Soc.)摘要#1165,314页,1989。MK-906对男性二氢睾酮形成的抑制作用已由下述公开：Gormley等，内分泌学会第71届年会会刊摘要#1225,329页,1989；Imperato-McGinley等,内分泌学会第71届年会会刊摘要#1639,432页,1989；Geller和Franson,内分泌学会第71届年会会刊摘要#1640,432页,1989和Tenover等,内分泌学会第71届年会会刊摘要#583,169页,1989。5α-还原酶抑制剂N,N-二乙基-4-甲基-3-氧代-4-氮杂-5α-雄甾烷-17β-羧酰胺(4-MA)和6-亚甲基-4-孕甾-3,20-二酮(LY 207320)的活性已由Toomey等在内分泌学会第71届年会会刊摘要#1226,329页,1989中公开。
除了众所周知的雄激素对前列腺生长的作用之外，还有许多研究显示雌激素在前列腺的增殖中也起作用(Walsh和Wilson,J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Robinette等,Invest.Urol.15:425-432,1978；Moore等,J.Clin.Invest.63:351-257,1979)。此外，已经表明雌激素增强雄激素诱导的狗的前列腺生长(Walsh和Wilson,J.Clin.Invest.57:1093-1097,1976；Jacobi等,Endocrinology 102:1748-1755,1978；Tunn等,Urol.Int.35:125-140,1980)。雌激素对雄激素诱导的前列腺生长的这种增强作用的可能解释是观察到17β-雌二醇增加狗前列腺中的雄激素结合(Moore等,J.Clin.Invest.63:351-357,1979)。
已显示抗雌激素剂他莫昔芬可改善狗的类固醇诱导的良性前列腺增生(Funke等,Acta Endocrinol.100:462-472,1982)。在患有良性前列腺增生的患者中一起施用抗雌激素剂他莫昔芬与甾族抗雄激素剂环丙孕酮乙酸酯显示出对疾病症状的有益作用(DiSilverio等，Ipertrofia Prostatica Benigna(F.Di Silverio,F.Neumann和M.Tannenbaum,编)，Excerpta Medica，117-125页,1986)。在美国专利号4,310,523中，提出抗雄激素剂和抗雌激素剂的组合对于预防和/或治疗良性前列腺增生是有效的。然而他莫昔芬具有固有的雌激素活性，这限制了它的有效性。
由雄激素的芳香化得到的雌激素形成发生在几个位置。在男性中，雄性激素的芳香化已经在睾丸、脂肪和肌肉组织、皮肤、肝脏、大脑和前列腺中被证实(Schweikert等，J.Clin.Endocrinol.Metab.40:413-417,1975；Folker和James,J.Steroid Biochem.49:687-690,1983；Longcope等,J.Clin.Endocrinol.Metab.46:146-152,1978；Lacoste和Labrie,未公开的数据；Stone等,The Prostate 9:311-318,1986；Stone等,Urol.Res.15:165-167,1987)。有证据表明良性前列腺增生症患者的前列腺组织中雌激素的产生增加(Stone等，The Prostate 9:311-318,1986)。这些数据表明雌激素的局部形成可能在刺激前列腺生长中起关键作用，该作用超过了由循环雌激素预测的作用。
美国专利号4,472,382公开了用抗雄激素剂和用作LH-RH激动剂的某些肽治疗BPH。美国专利号4,596,797公开了芳香酶抑制剂作为预防和/或治疗前列腺增生的方法。美国专利号4,760,053描述了某些癌症的治疗，其组合LHRH激动剂与抗雄激素剂和/或抗雌激素剂和/或至少一种性类固醇生物合成抑制剂。美国专利号4,775,660公开了一种用组合疗法治疗乳腺癌的方法，所述组合疗法可包括手术或化学预防卵巢分泌物和施用抗雄激素剂和抗雌激素剂。
美国专利号4,659,695公开了治疗易感雄性动物中的前列腺癌的方法，所述动物包括睾丸激素分泌物通过手术或化学手段(例如通过使用LHRH激动剂)而被封闭的人，所述方法其包括施用抗雄激素剂，例如氟他胺，与至少一种性类固醇生物合成抑制剂，例如氨鲁米特和/或酮康唑。每个上述专利(US 4,472,382、4,596,797、4,760,053、4,775,660和4,659,695)的公开内容通过引用整体并入本文。
BPH是由雄激素和雌激素的活性增加引起的。由于BPH的这种双重病因学，所提出的激素疗法并不令人满意，并且都是不可预测的，经常导致不可接受的副作用。此外，现有技术治疗很少导致前列腺体积减少超过约20％至30％，对症状学的影响不一致(Scott和Wade,J.Urol.101:81-85,1969；Caine等,J.Urol.114:564-568,1975；Peters和Walsh,NewEngl.J.Med.317:599-604,1987；Gabrilove等,J.Clin.Endocrinol.Metab.64:1331-1333,1987；Stone等,J.Urol.141:240A,1989；Clejan等,J.Urol.141:534A,1989；Stoner,E.,5α-还原酶抑制剂在良性前列腺肥大中的作用的讲座(Lecture on the role of 5.alpha.-reductase inhibitor in benign prostatic hypertropy),第84届AUA年会达拉斯,1989年5月8日).
上面概述的机制已经导致近期有效药物的开发，以控制BPH的进展，并在许多情况下逆转BPH的进展。这些试剂的前沿是默克公司的产品(非那雄胺(finasteride))。该化合物的作用是抑制将睾酮转化成5α-二氢睾酮的睾酮5a还原酶，导致前列腺增大速率降低，并且前列腺质量通常减小。
等试剂的开发预示BPH的长期控制。但是，从综合征的漫长发展可以看出，其逆转也不是直接的。在此期间，那些患有BPH的男性继续遭受痛苦，实际上可能对这些药物充分快速起效失去希望。
针对这个问题，一个解决方案就是识别药物活性化合物，通过提供急性缓解来补充慢效的治疗剂。通过与α1肾上腺素能受体结合而诱导下尿路组织松弛从而减少由疾病引起的肾上腺素能量增加的试剂，将是该活性的良好候选者。因此，一种这样的药物是阿夫唑嗪，在EP 0204597中报道了其在前列腺增生的情况下诱导排尿。同样，WO92/00073报道了特拉唑嗪的R(+)对映体与α1亚型的肾上腺素能受体结合的选择性能力。此外，在WO 92/16213中，公开了Sα-还原酶抑制化合物和α1-肾上腺素能受体阻断剂(特拉唑嗪，多沙唑嗪，哌唑嗪，布那唑嗪，吲哚拉明，阿洛唑嗪)的组合。然而，没有提供关于这些化合物的α1d，α1b或α1a亚型特异性的信息，因为这些数据及其与治疗BPH的相关性未知。BPH的当前治疗使用现有的非选择性α1拮抗剂，例如哌唑嗪(Minipress，辉瑞(Pfizer))，特拉唑嗪(Hytrin，雅培(Abbott))或甲磺酸多沙唑嗪(Cardura，辉瑞(Pfizer))。这些非选择性拮抗剂具有与外周脉管系统中的α1d和α1b受体拮抗有关的副作用，例如低血压和晕厥。
人α1a肾上腺素能受体(ATCC CRL 11140)的克隆和使用克隆的人α1a受体的筛选测定的应用使得能够鉴定与人α1a肾上腺素能受体特异性相互作用的化合物。[PCT国际申请公开号WO94/08040，1994年4月14日公开，和WO94/10989，1994年5月26日公开]
1996年5月23日公开的WO96/14846公开了广泛种类的二氢嘧啶类化合物，并提出了它们作为人类α1a受体的选择性拮抗剂的用途。使用克隆的人类α肾上腺素能受体测定化合物，并且公开所测定的某些化合物是选择性α1a拮抗剂。
存在涉及不需要的细胞成分的其他病症，其中需要选择性细胞去除。例如，心脏病和中风通常由动脉粥样硬化(纤维脂肪增生性病变)和改变的平滑肌因素引起，所述改变的平滑肌因素扭曲血管壁，缩小管腔，收缩血流，易于发生局部血块，最终导致堵塞和梗塞。动脉粥样硬化有多种治疗方法，如旁路移植；人造移植物；用再通、刮宫、放射、激光或其他清除的血管成形术；通过脂质减少来抑制动脉粥样硬化的药物治疗；抗凝血疗法；以及饮食、运动和生活方式的一般性措施。需要一种去除动脉粥样硬化病变而没有手术操作的风险和副作用的方法。
需要选择性细胞去除的不需要的细胞成分的其它例子包括病毒诱导的生长，如疣。另一个例子是炎性病症中发现的肥厚炎性肿块，肥厚性瘢痕或瘢痕疙瘩。在化妆品背景中还发现了其他示例，例如去除不想要的头发(例如面部毛发)或为了美容目的而收缩不想要的组织区域(例如在面部真皮和结缔组织中或在四肢的真皮和结缔组织中)。
需要选择性除去细胞或抑制细胞增殖的不需要细胞成分的其它例子包括循环系统中的任何动脉，瓣膜或管道的狭窄和再狭窄，包括但不限于瓣膜(例如涉及收窄主动脉瓣口的主动脉瓣狭窄)、冠状动脉(例如涉及收窄冠状动脉口的冠状动脉开口硬化症)、颈动脉和肾动脉。其他例子包括抑制或去除不需要的细胞生长或积累，这些会导致医疗装置(例如置于或植入血管内用于治疗其中狭窄、束紧或动脉瘤的支架或置于或植入尿道内和胆管内的支架)部分或完全闭塞，
还有其他例子对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。在所有或大多数这些示例中，需要能够去除或破坏不需要的细胞元件而没有常规治疗的风险和副作用的治疗，或者更精确地去除不需要的细胞成分。
贯穿本说明书(包括相关领域的前述描述)，本文中所描述的任何和所有公开可用的文件(包括任何和所有美国专利公开的专利申请)均通过引用整体明确地并入本文。相关技术的前述描述并非意图以任何方式承认其中所描述的任何文件(包括未决的美国专利申请)是本公开的现有技术。此外，这里关于所描述的产品、方法和/或设备的任何缺点的描述并不意图限制本发明实施方式。事实上，实施方式的各个方面可以包括所描述的产品、方法和/或设备的某些特征，而不具有它们所描述的缺点。
发明概述
本领域仍然需要用于治疗不需要的细胞成分的新型毒性较低的治疗。实施方式满足这些需求。
本公开的部分前提是发现某些NTP肽，包括由氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu所示的特定肽，当其与至少一种其他活性剂组合时能够治疗和/或杀死哺乳动物中不需要的细胞增殖，所述至少一种其他活性剂能够治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状，降低、阻断、抑制治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖。这些不需要的细胞增殖尤其包括但不限于，良性和恶性肿瘤，腺体(例如前列腺)增生，不需要的面部毛发，疣和不需要的脂肪组织。
本发明还部分基于以下发现：某些NTP肽，包括氨基酸序列Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu所示的特定肽，在单独时或与其他活性剂联用时提供了随后经历手术治疗的患者中的预料不到的改善，所述其他活性剂能够治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状，降低、阻断、抑制治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖。
一些实施方式涉及治疗不需要的细胞增殖(良性和恶性肿瘤，腺体(例如前列腺)增生，不需要的面部毛发，疣和不需要的脂肪组织)的组合物和方法，包括向有此需要的哺乳动物给予治疗有效量的包含NTP肽的组合物，与能够治疗和/或杀死哺乳动物中的不需要的细胞增殖的至少一种其他活性剂联合。
可以通过肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(脑实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮的方式，通过气雾剂、输注、推注、植入装置、缓释系统等给予该组合物。或者，可以通过给予表达NTP肽的基因，通过给予诱导这种产生的疫苗或通过由于基因修饰或其他方式而体内表达该肽的细胞、细菌或病毒来体内表达NTP肽。在该替代实施方式中，并且在之前讨论的实施方式中，其他活性剂可以与NTP肽或体内表达NTP肽的药剂一起或分开给予。
一些实施方式涉及治疗不需要的细胞增殖(良性和恶性肿瘤，腺体(例如前列腺)增生，不需要的面部毛发，疣和不需要的脂肪组织)的方法，包括向有此需要的哺乳动物给予治疗有效量的包含NTP肽的组合物，与能够治疗和/或杀死哺乳动物中的不需要的细胞增殖的至少一种其他活性剂联用，之后通过手术治疗该不需要的细胞增殖。
前面的一般描述和下面的详细描述都是示例性的和解释性的，并且旨在提供对所要求保护的实施方式的进一步解释。从以下对实施方式的详细描述中，其他目的、优点和特征对于本领域技术人员将是显而易见的。
优选实施方式详述
在描述本蛋白质、核苷酸序列、肽、组合物、活性剂等和方法之前，应理解的是，本发明不限于所描述的特定方法学、方案、细胞系、载体和试剂，因为这些可能会有所不同。还应理解，本文所用术语的目的仅是描述具体实施方式，不应用来限制本发明实施方式的范围，本发明实施方式的范围仅受所附权利要求书的限制。
除非另外指明，否则本文使用的术语和短语定义如下。在本文中,除非上下文有明确的不同的描述，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式。因此，例如，涉及“宿主细胞”时，包括多个这样的宿主细胞，并且涉及“抗体”时，指对于本领域技术人员已知的一种或多种抗体及其等同物，等等。
本文所述的氨基酸和氨基酸残基可以根据下表提供的接受的一个或三个字母的代码来表示。
表1
表述“NTP肽”是指包含对应于神经线蛋白的氨基酸序列的至少一部分或神经线蛋白的片段的氨基酸序列的肽，并包括该肽的同源物，衍生物，变体，融合蛋白和肽模拟物，除非上下文另外指出。表述“NTP肽”还指下述中一个或多个中要求保护的肽或其他组合物：美国专利申请公开第2007/0237780号(现已放弃)、2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)。这些申请的每一个的公开内容通过引用整体并入本文。以下列出具体的肽。
1)SEQ ID NO.1:MEFSLLLPRLECNGA或Met-Glu-Phe-Ser-Leu-Leu-Leu-Pro-Arg-Leu-Glu-Cys-Asn-Gly-Ala
2)SEQ ID NO.2:GAISAHRNLRLPGSS或Gly-Ala-Ile-Ser-Ala-His-Arg-Asn-Leu-Arg-Leu-Pro-Gly-Ser-Ser
3)SEQ ID NO.3:DSPASASPVAGITGMCT或Asp-Ser-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met-Cys-Thr
4)SEQ ID NO.4:MCTHARLILYFFLVEM或Met-Cys-Thr-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
5)SEQ ID NO.5:YFFLVEMEFLH或Tyr-Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Glu-Phe-Leu-His
6)SEQ ID NO.6:VGQAGLELPTS或Val-Gly-Gln-Ala-Gly-Leu-Glu-Leu-Pro-Thr-Ser
7)SEQ ID NO.7:DDPSVSASQSARYRTGH或Asp-Asp-Pro-Ser-Val-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Arg-Tyr-Arg-Thr-Gly-His
8)SEQ ID NO.8:TGHHARLCLANFCG或Thr-Gly-His-His-Ala-Arg-Leu-Cys-Leu-Ala-Asn-Phe-Cys-Gly
9)SEQ ID NO.9:ANFCGRNRVSLMCPSWS或Ala-Asn-Phe-Cys-Gly-Arg-Asn-Arg-Val-Ser-Leu-Met-Cys-Pro-Ser-Trp-Ser
10)SEQ ID NO.10:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
11)SEQ ID NO.11:LKQSTCLSLPKCWDYRR或Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
12)SEQ ID NO.12:STCLSLPKCWDYRR或Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
13)SEQ ID NO.13:LSLPKCWDYRR或Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
14)SEQ ID NO.14:KCWDYRRAAVPGL或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu
15)SEQ ID NO.15:KCWDYRRAAVPGLFILFFL或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
16)SEQ ID NO.16:KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCP或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro
17)SEQ ID NO.17:KCWDYRRAAVPGLFILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Ala-Ala-Val-Pro-Gly-Leu-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
18)SEQ ID NO.18:WDYRR或Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
19)SEQ ID NO.19:FILFFLRHRCPTL或Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu
20)SEQ ID NO.20:FILFFLRHRCPTLTQDEVQWCDHSS或Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu-Arg-His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser
21)SEQ ID NO.21:HRCPTLTQDEVQWCDHSSLQPSTPEIKHP或His-Arg-Cys-Pro-Thr-Leu-Thr-Gln-Asp-Glu-Val-Gln-Trp-Cys-Asp-His-Ser-Ser-Leu-Gln-Pro-Ser-Thr-Pro-Glu-Ile-Lys-His-Pro
22)SEQ ID NO.22:PASASQVAGTKDMH或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met-His
23)SEQ ID NO.23:DMHHYTWLIFIFIFNFLR或Asp-Met-His-His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg
24)SEQ ID NO.24:HYTWLIFIFIFNFLRQSLN或His-Tyr-Thr-Trp-Leu-Ile-Phe-Ile-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu-Arg-Gln-Ser-Leu-Asn
25)SEQ ID NO.25:SVTQAGVQWRNLGSLQPLPPGFKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Arg-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
26)SEQ ID NO.26:PGFKLFSCPSLLSSWDYRR或Pro-Gly-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
27)SEQ ID NO.27:FKLFSCPSLLSSWDYRRPPRLANF或Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe
28)SEQ ID NO.28:FSCPSLLSSWDYRR或Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
29)SEQ ID NO.29:SLLSSWDYRR或Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
30)SEQ ID NO.30:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
31)SEQ ID NO.31:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
32)SEQ ID NO.32:SSWDYRRPPRLANFFVFLVEMGFTM或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Pro-Pro-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
33)SEQ ID NO.33:FVFLVEMGFTM或Phe-Val-Phe-Leu-Val-Glu-Met-Gly-Phe-Thr-Met
34)SEQ ID NO.34:MGFTMFARLILISGPCDLPASAS或Met-Gly-Phe-Thr-Met-Phe-Ala-Arg-Leu-Ile-Leu-Ile-Ser-Gly-Pro-Cys-Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser
35)SEQ ID NO.35:ISGPC或Ile-Ser-Gly-Pro-Cys
36)SEQ ID NO.36:DLPASASQSAGITGVSH或Asp-Leu-Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val-Ser-His
37)SEQ ID NO.37:GVSHHARLIFNFCLFEM或Gly-Val-Ser-His-His-Ala-Arg-Leu-Ile-Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met
38)SEQ ID NO.38:NFCLFEMESH或Asn-Phe-Cys-Leu-Phe-Glu-Met-Glu-Ser-His
39)SEQ ID NO.39:SVTQAGVQWPNLGSLQPLPPGLKRFSCLSLPSSWDYGHLPPHPANF或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp-Pro-Asn-Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Pro-Leu-Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe
40)SEQ ID NO.40:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly
41)SEQ ID NO.41:FSCLSLPSSWDYGH或Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
42)SEQ ID NO.42:LSLPSSWDY或Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
43)SEQ ID NO.43:SSWDYGHLPPHPANFCIFIRGGVSPYLSGWSQTPDLR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His-Leu-Pro-Pro-His-Pro-Ala-Asn-Phe-Cys-Ile-Phe-Ile-Arg-Gly-Gly-Val-Ser-Pro-Tyr-Leu-Ser-Gly-Trp-Ser-Gln-Thr-Pro-Asp-Leu-Arg
44)SEQ ID NO.44:PGFFKLFSCPSLLSSWDYRR或Pro-Gly-Phe-Phe-Lys-Leu-Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
45)SEQ ID NO.45:PELKQSTCLSLPKCWDYRR或Pro-Glu-Leu-Lys-Gln-Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
46)SEQ ID NO.46:PPGLKRFSCLSLPSSWDYG或Pro-Pro-Gly-Leu-Lys-Arg-Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly
47)SEQ ID NO.47:FSCLSLPSSWDYGH或Phe-Ser-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Gly-His
48)SEQ ID NO.48:STCLSLPKCWDYRR或Ser-Thr-Cys-Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
49)SEQ ID NO.49:FSCPSLLSSWDYRR或Phe-Ser-Cys-Pro-Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
50)SEQ ID NO.50:LSLPSSWDY或Leu-Ser-Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
51)SEQ ID NO.51:LSLPKCWDYRR或Leu-Ser-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
52)SEQ ID NO.52:SLLSSWDYRR或Ser-Leu-Leu-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
53)SEQ ID NO.53:LPSSWDYRR或Leu-Pro-Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
54)SEQ ID NO.54:SSWDYRR或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg
55)SEQ ID NO.55:SSWDY或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr
56)SEQ ID NO.56:SSWDYRRFILFFL或Ser-Ser-Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Leu-Phe-Phe-Leu
57)SEQ ID NO.57:WDYRRFIFNFL或Trp-Asp-Tyr-Arg-Arg-Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
58)SEQ ID NO.58:FNFCLF或Phe-Asn-Phe-Cys-Leu-Phe
59)SEQ ID NO.59:FIFNFL或Phe-Ile-Phe-Asn-Phe-Leu
60)SEQ ID NO.60:PASASPVAGITGM或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Met
61)SEQ ID NO.61:PASASQVAGTKDM或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Val-Ala-Gly-Thr-Lys-Asp-Met
62)SEQ ID NO.62:PASASQSAGITGV或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val
63)SEQ ID NO.63:PASASPVAG或Pro-Ala-Ser-Ala-Ser-Pro-Val-Ala-Gly
64)SEQ ID NO.64:FFLVEM或Phe-Phe-Leu-Val-Glu-Met
65)SEQ ID NO.65:SVTQAGVQW或Ser-Val-Thr-Gln-Ala-Gly-Val-Gln-Trp
66)SEQ ID NO.66:IDQQVLSRIKLEIKRCL或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
67)SEQ ID NO.67:LSRIKLEIK或Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
68)SEQ ID NO.68:GDHGRPNLSRLKLAIKYEVKKM或Gly-Asp-His-Gly-Arg-Pro-Asn-Leu-Ser-Arg-Leu-Lys-Leu-Ala-Ile-Lys-Tyr-Glu-Val-Lys-Lys-Met
69)SEQ ID NO.69:QQSIAVKFLAVFGVSI或Gln-Gln-Ser-Ile-Ala-Val-Lys-Phe-Leu-Ala-Val-Phe-Gly-Val-Ser-Ile
70)SEQ ID NO.70:GLLFPVFSVCYLIAPKSPLGL或Gly-Leu-Leu-Phe-Pro-Val-Phe-Ser-Val-Cys-Tyr-Leu-Ile-Ala-Pro-Lys-Ser-Pro-Leu-Gly-Leu
71)SEQ ID NO.71:MMVCWNRFGKWVYFI或Met-Met-Val-Cys-Trp-Asn-Arg-Phe-Gly-Lys-Trp-Val-Tyr-Phe-Ile
72)SEQ ID NO.72:SAIFNFGPRYLYHGV或Ser-Ala-Ile-Phe-Asn-Phe-Gly-Pro-Arg-Tyr-Leu-Tyr-His-Gly-Val
73)SEQ ID NO.73:PFYFLILVRIISFLI或Pro-Phe-Tyr-Phe-Leu-Ile-Leu-Val-Arg-Ile-Ile-Ser-Phe-Leu-Ile
74)SEQ ID NO.74:GDMEDVLLNCTLLKR或Gly-Asp-Met-Glu-Asp-Val-Leu-Leu-Asn-Cys-Thr-Leu-Leu-Lys-Arg
75)SEQ ID NO.75:SSRFRFWGALVCSMD或Ser-Ser-Arg-Phe-Arg-Phe-Trp-Gly-Ala-Leu-Val-Cys-Ser-Met-Asp
76)SEQ ID NO.76:SCRFSRVAVTYRFIT或Ser-Cys-Arg-Phe-Ser-Arg-Val-Ala-Val-Thr-Tyr-Arg-Phe-Ile-Thr
77)SEQ ID NO.77:LLNIPSPAVWMARNT或Leu-Leu-Asn-Ile-Pro-Ser-Pro-Ala-Val-Trp-Met-Ala-Arg-Asn-Thr
78)SEQ ID NO.78:MAQSRLTATSASRVQ或Met-Ala-Gln-Ser-Arg-Leu-Thr-Ala-Thr-Ser-Ala-Ser-Arg-Val-Gln
79)SEQ ID NO.79:AILLSQPPKQLGLRA或Ala-Ile-Leu-Leu-Ser-Gln-Pro-Pro-Lys-Gln-Leu-Gly-Leu-Arg-Ala
80)SEQ ID NO.80:PANTPLIFVFSLEAG或Pro-Ala-Asn-Thr-Pro-Leu-Ile-Phe-Val-Phe-Ser-Leu-Glu-Ala-Gly
81)SEQ ID NO.81:FHHICQAGLKLLTSG或Phe-His-His-Ile-Cys-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Thr-Ser-Gly
82)SEQ ID NO.82:DPPASAFQSAGITGV或Asp-Pro-Pro-Ala-Ser-Ala-Phe-Gln-Ser-Ala-Gly-Ile-Thr-Gly-Val
83)SEQ ID NO.83:SHLTQPANLDKKICS或Ser-His-Leu-Thr-Gln-Pro-Ala-Asn-Leu-Asp-Lys-Lys-Ile-Cys-Ser
84)SEQ ID NO.84:NGGSCYVAQAGLKLLASCNPSK或Asn-Gly-Gly-Ser-Cys-Tyr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Leu-Lys-Leu-Leu-Ala-Ser-Cys-Asn-Pro-Ser-Lys
85)SEQ ID NO.85:MWTLKSSLVLLLCLT或Met-Trp-Thr-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-Val-Leu-Leu-Leu-Cys-Leu-Thr
86)SEQ ID NO.86:CSYAFMFSSLRQKTS或Cys-Ser-Tyr-Ala-Phe-Met-Phe-Ser-Ser-Leu-Arg-Gln-Lys-Thr-Ser
87)SEQ ID NO.87:EPQGKVPCGEHFRIR或Glu-Pro-Gln-Gly-Lys-Val-Pro-Cys-Gly-Glu-His-Phe-Arg-Ile-Arg
88)SEQ ID NO.88:QNLPEHTQGWLGSKW或Gln-Asn-Leu-Pro-Glu-His-Thr-Gln-Gly-Trp-Leu-Gly-Ser-Lys-Trp
89)SEQ ID NO.89:LWLLFAVVPFVILKC或Leu-Trp-Leu-Leu-Phe-Ala-Val-Val-Pro-Phe-Val-Ile-Leu-Lys-Cys
90)SEQ ID NO.90:QRDSEKNKVRMAPFF或Gln-Arg-Asp-Ser-Glu-Lys-Asn-Lys-Val-Arg-Met-Ala-Pro-Phe-Phe
91)SEQ ID NO.91:LHHIDSISGVSGKRMF或Leu-His-His-Ile-Asp-Ser-Ile-Ser-Gly-Val-Ser-Gly-Lys-Arg-Met-Phe
92)SEQ ID NO.92:EAYYTMLHLPTTNRP或Glu-Ala-Tyr-Tyr-Thr-Met-Leu-His-Leu-Pro-Thr-Thr-Asn-Arg-Pro
93)SEQ ID NO.93:KIAHCILFNQPHSPR或Lys-Ile-Ala-His-Cys-Ile-Leu-Phe-Asn-Gln-Pro-His-Ser-Pro-Arg
94)SEQ ID NO.94:SNSHSHPNPLKLHRR或Ser-Asn-Ser-His-Ser-His-Pro-Asn-Pro-Leu-Lys-Leu-His-Arg-Arg
95)SEQ ID NO.95:SHSHNRPRAYILITI或Ser-His-Ser-His-Asn-Arg-Pro-Arg-Ala-Tyr-Ile-Leu-Ile-Thr-Ile
96)SEQ ID NO.96:LPSKLKLRTHSQSHH或Leu-Pro-Ser-Lys-Leu-Lys-Leu-Arg-Thr-His-Ser-Gln-Ser-His-His
97)SEQ ID NO.97:NPLSRTSNSTPTNSFLMTSSKPR或Asn-Pro-Leu-Ser-Arg-Thr-Ser-Asn-Ser-Thr-Pro-Thr-Asn-Ser-Phe-Leu-Met-Thr-Ser-Ser-Lys-Pro-Arg
98)SEQ ID NO.98:SSSLGLPKCWDYRHE或Ser-Ser-Ser-Leu-Gly-Leu-Pro-Lys-Cys-Trp-Asp-Tyr-Arg-His-Glu
99)SEQ ID NO.99:LLSLALMINFRVMAC或Leu-Leu-Ser-Leu-Ala-Leu-Met-Ile-Asn-Phe-Arg-Val-Met-Ala-Cys
100)SEQ ID NO.100:TFKQHIELRQKISIV或Thr-Phe-Lys-Gln-His-Ile-Glu-Leu-Arg-Gln-Lys-Ile-Ser-Ile-Val
101)SEQ ID NO.101:PRKLCCMGPVCPVKI或Pro-Arg-Lys-Leu-Cys-Cys-Met-Gly-Pro-Val-Cys-Pro-Val-Lys-Ile
102)SEQ ID NO.102:ALLTINGHCTWLPAS或Ala-Leu-Leu-Thr-Ile-Asn-Gly-His-Cys-Thr-Trp-Leu-Pro-Ala-Ser
103)SEQ ID NO.103:MFVFCLILNREKIKG或Met-Phe-Val-Phe-Cys-Leu-Ile-Leu-Asn-Arg-Glu-Lys-Ile-Lys-Gly
104)SEQ ID NO.104:GNSSFFLLSFFFSFQ或Gly-Asn-Ser-Ser-Phe-Phe-Leu-Leu-Ser-Phe-Phe-Phe-Ser-Phe-Gln
105)SEQ ID NO.105:NCCQCFQCRTTEGYA或Asn-Cys-Cys-Gln-Cys-Phe-Gln-Cys-Arg-Thr-Thr-Glu-Gly-Tyr-Ala
106)SEQ ID NO.106:VECFYCLVDKAAFECWWFYSFDT或
Val-Glu-Cys-Phe-Tyr-Cys-Leu-Val-Asp-Lys-Ala-Ala-Phe-Glu-Cys-Trp-Trp-Phe-Tyr-Ser-Phe-Asp-Thr
107)SEQ ID NO.107:MEPHTVAQAGVPQHD或Met-Glu-Pro-His-Thr-Val-Ala-Gln-Ala-Gly-Val-Pro-Gln-His-Asp
108)SEQ ID NO.108:LGSLQSLLPRFKRFS或Leu-Gly-Ser-Leu-Gln-Ser-Leu-Leu-Pro-Arg-Phe-Lys-Arg-Phe-Ser
109)SEQ ID NO.109:CLILPKIWDYRNMNT或Cys-Leu-Ile-Leu-Pro-Lys-Ile-Trp-Asp-Tyr-Arg-Asn-Met-Asn-Thr
110)SEQ ID NO.110:ALIKRNRYTPETGRKS或Ala-Leu-Ile-Lys-Arg-Asn-Arg-Tyr-Thr-Pro-Glu-Thr-Gly-Arg-Lys-Ser
111)SEQ ID NO.111:IDQQVLSRI或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile
112)SEQ ID NO.112:KLEIKRCL或Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
113)SEQ ID NO.113:VLSRIK或Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys
114)SEQ ID NO.114:RIKLEIK或Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys
115)SEQ ID NO.115:VLSRIKLEIKRCL或Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu；and
116)SEQ ID NO.116:IDQQVLSRIKLEI或Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile.
表达“NTP肽”还优选包括(但不限于)SEQ ID NO：1至116的氨基酸序列。
术语“片段”是指由蛋白质或肽的氨基酸序列的连续子序列组成的蛋白质或多肽，并且包括天然存在的片段，如剪接变体和由天然存在的体内蛋白酶活性产生的片段。这样的片段可以在氨基末端、羧基末端和/或内部(例如通过天然剪接)被截短。这样的片段可以用或不用氨基末端甲硫氨酸制备。术语“片段”包括来自相同蛋白质或肽的相同或不同的片段，具有共同或不共有的连续氨基酸序列，直接或通过接头连接在一起。本领域普通技术人员将能够使用本文中概述的指导和程序来选择用于实施方式中的合适片段，而无需过度实验。
术语“变体”是指其中与蛋白质或肽的氨基酸序列相比存在一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入的蛋白质或多肽，并且包括天然存在的等位基因变体或蛋白质或肽的可变剪接变体。术语“变体”包括用相似或同源氨基酸或不相似氨基酸取代肽序列中的一个或多个氨基酸。氨基酸可基于许多评分而被成评为相似或同源。(Gunnar von Heijne,《分子生物学中的序列分析(Sequence Analysis in Molecular Biology)》,123-39页(纽约学院出版社1987)优选的变体包括在一个或多个氨基酸位置上的丙氨酸取代。其他优选的取代包括对蛋白质的整体净电荷、极性或疏水性影响很小或没有影响的保守取代。下表2列出了保守取代。
表2
保守的氨基酸取代
表3列出了氨基酸取代的其他方案：
表3
原始残基 取代
Ala gly；ser
Arg lys
Asn gln；his
Asp glu
Cys ser
Gln asn
Glu asp
Gly ala；pro
His asn；gln
Ile eu；val
Leu ile；val
Lys arg；gln；glu
Met leu；tyr；ile
Phe met；leu；tyr
Ser thr
Thr ser
Trp tyr
Tyr trp；phe
Val ile；leu
其他变体可以由较不保守的氨基酸取代组成，例如选择在维持以下方面的效果上差异更显著的残基：(a)取代区域中多肽骨架的结构，例如片层或螺旋构型，(b)靶位点处分子的电荷或疏水性，或者(c)侧链体积。通常预期对功能具有更显著作用的取代是其中(a)甘氨酸和/或脯氨酸被另一个氨基酸取代或缺失或插入；(b)亲水残基如丝氨酰或苏氨酰用于取代疏水残基(例如亮氨酰、异亮氨酰、苯丙氨酰、缬氨酰或丙氨酰)(或被其取代)；(c)半胱氨酸残基用于取代任何其他残基(或被其取代)；(d)具有正电性侧链的残基，例如赖氨酰，精氨酰或组氨酰，用于取代具有电负电荷的残基(例如谷氨酰或天冬氨酰)(或被其取代)；或(e)具有大体积侧链的残基，例如苯丙氨酸被不具有这种侧链的残基，例如甘氨酸取代(或被其取代)。其他变体包括设计为产生新的糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计为删除现有的糖基化和/或磷酸化位点的变体。变体包括在糖基化位点，蛋白水解切割位点和/或半胱氨酸残基上的至少一个氨基酸取代。变体还包括在接头肽上的蛋白质或肽氨基酸序列之前或之后具有附加氨基酸残基的蛋白质和肽。例如，可以在NTP肽的氨基和羧基末端都添加半胱氨酸残基，以便通过形成二硫键来环化肽。术语“变体”还涵盖具有NTP肽的氨基酸序列的多肽，所述肽NTP的3'或5'末端侧接至少一个并多达25个或更多个额外的氨基酸。
术语“衍生物”是指化学修饰的蛋白质或多肽，其已经通过天然过程(例如加工和其他翻译后修饰)进行了化学修饰，但也通过化学修饰技术进行了化学修饰，例如通过添加一个或多个聚乙二醇分子、糖、磷酸盐和/或其他这样的分子，其中一个或多个分子不是天然地连接到野生型蛋白质或NTP肽上。衍生物包括盐。这样的化学修饰在基础教科书和更详细的专论中以及大量的研究文献中都有很好的描述，并且它们是本领域技术人员所熟知的。应当了解相同类型的修饰可以在给定蛋白质或多肽的多个位置以相同或不同程度出现。而且，给定的蛋白质或多肽可以含有许多类型的修饰。修饰可以发生在蛋白质或多肽的任何地方，包括肽主链，氨基酸侧链和氨基或羧基末端。修饰包括例如乙酰化、酰基化、ADP-核糖基化、酰胺化、共价结合黄素、共价结合血红素部分、共价结合核苷酸或核苷酸衍生物、共价结合脂质或脂质衍生物、共价结合磷脂酰肌醇、交联、环化、二硫键形成、去甲基化、形成共价交联、形成半胱氨酸、形成焦谷氨酸、甲酰化、γ羧化、糖基化、GPI锚形成、羟基化、碘化、甲基化、十四烷基化、氧化、蛋白水解加工、磷酸化、异戊二烯化、外消旋化、糖基化、脂质连接、硫化、谷氨酸残基的γ-羧化、羟化和ADP-核糖基化、硒化，硫化、转移RNA介导的氨基酸加入蛋白质如精氨酰化、以及泛素化。参见例如，《蛋白质—结构和分子特性第2版(Proteins--Structure and Molecular Properties)》，T.E.Creighton，W.H.弗里曼公司(W.H.Freeman and Company)，纽约(1993)和Wold,F.,“翻译后蛋白质修饰：前景和展望(Posttranslational Protein Modifications:Perspectives and Prospects)”，《蛋白质的翻译后共价修饰(Posttranslational Covalent Modification of Proteins)》第1-12页(B.C.Johnson编，学术出版社(Academic Press)，纽约(1983)；Seifter等，Meth.Enzymol.182:626-646(1990)；Rattan等，“蛋白质合成：翻译后修饰和老化(ProteinSynthesis:Posttranslational Modifications and Aging)”，Ann.NY Acad.Sci.663:48-62(1992))。术语“衍生物”包括导致蛋白质或多肽变成分支或环状的化学修饰，具有或不具有分支。环状的、分支的和分支环状的蛋白质或多肽可以由翻译后天然过程产生，也可以通过完全合成的方法制备。
术语“同源物”是指通过常用于比较两种多肽的氨基酸的位置相似性的标准方法确定的NTP肽的氨基酸序列中至少60％相同的蛋白质。两种蛋白之间的相似性或同一性程度可以通过已知方法计算，包括但不限于Computational Molecular Biology(计算机分子生物学),Lesk,A.M.编，纽约牛津大学出版社(Oxford University Press)，1988；Biocomputing:Informatics and Genome Projects(生物运算：信息学和基因组工程)，Smith,D.W.编，纽约学术出版社(Academic Press)，1993；Computer Analysis ofSequence Data(序列数据的计算机分析)，第I部分,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.编，新泽西州胡马纳出版公司(Humana Press)，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology(分子生物学的序列分析)，von Heinje,G.，学术出版社，1987；和Sequence AnalysisPrimer(序列分析引物)，Gribskov,M.和Devereux,J.编，纽约M斯托克顿出版社(MStockton Press)，1991；和Carillo,H.和Lipman,D.，SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)所述的方法。设计测定相同性的优选方法以给出测试序列之间的最大匹配。确定相同性和相似性的方法被编入公众可用的计算机程序中。
用于确定两个序列之间的相同性和相似性的优选计算机程序方法包括但不限于GCG程序包(Devereux,J.,等,Nucleic Acids Research,12(1):387(1984))、BLASTP、BLASTN和FASTA,Atschul,S.F.等,J.Molec.Biol.,215:403-410(1990)。BLAST X程序在NCBI和其他来源(BLAST Manual,Altschul,S.等，马里兰州贝塞斯达的NCBI NLM NIH，20894；Altschul,S.等，J.Mol.Biol.215:403-410(1990))中公开可用。举例来说，使用例如GAP(遗传计算机组(Genetic Computer Group),华盛顿大学,威斯康星州麦迪逊)的计算机算法，对要确定百分比序列相同性的两种蛋白质或多肽进行比对，以使它们各自氨基酸最佳匹配(由算法确定的“匹配的跨度”)。
空位开放罚分(其被计算为平均对角线的3倍；“平均对角线”是所使用的比较矩阵的对角线的平均值；“对角线”是分配给被特定比较矩阵匹配的每个完美氨基酸的分数或数字)和空位延伸罚分(其通常是空位开放罚分的1/10)，以及诸如PAM250或BLOSUM62的比较矩阵，与该算法结合使用。标准比较矩阵(对于PAM250比较矩阵，参见Dayhoff等：《蛋白质序列和结构的图谱(Atlas of Protein Sequence and Structure)》，第5卷，增刊3；对于BLOSUM 62比较矩阵，参见Henikoff等，Proc.Natl.Acad.Sci USA,89:10915-10919)也可以被该算法使用。然后通过算法计算相同性百分比。视情况而定，同源物通常将具有与比较蛋白或肽相比较的一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。
术语“融合蛋白”是指这样的蛋白质，其中一种或多种肽被重组融合或化学偶联(包括共价和非共价)至蛋白质，例如(但不限于)抗体或抗体片段如F.sub.ab片段或短链Fv。术语“融合蛋白”还指肽的多聚体(即二聚体，三聚体，四聚体和更高的多聚体)。此类多聚体包含含有一个肽的同聚多聚体，含有多于一个肽的异源多聚体和含有至少一个肽和至少一个其他蛋白质的异源多聚体。这样的多聚体可以是疏水性、亲水性、离子和/或共价关联、键或连接的结果，可以通过使用接头分子的交联形成，或者可以通过例如脂质体形成间接连接。
术语“肽模拟物”或“模拟物”是指模拟肽或蛋白质的生物学活性但在化学性质上不再是肽类的生物活性化合物，即它们不再含有任何肽键(即氨基酸之间的酰胺键)。这里，术语肽模拟物在更广泛的意义上用于包括天然上不再完全是肽类的分子，例如假肽，半肽和类肽(peptoid)。下面描述了在这个广义上的肽模拟物的实例(其中部分肽被缺少肽键的结构取代)。无论完全地或部分地非肽，根据实施方式的肽模拟物提供了与肽模拟物所基于的肽中活性基团的三维排列非常相似的活性化学部分的空间排列。由于这种类似的活性位点几何结构，肽模拟物对与生物活性相似的生物系统具有作用。
实施方式的肽模拟物优选在本文所述的肽的三维形状和生物学活性方面基本相似。本领域已知的对肽进行结构性修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括骨架手性中心的转化，产生这样的D-氨基酸残基结构(尤其是在N-末端)，该结构可导致蛋白质分解降解的稳定性提高而不对活性产生不利影响。"氚化的D-α补体1-肽T结合(Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding)",Smith C.S.等,Drug Development Res.,15,371-379页(1988)中给出了示例。第二种方法是改变环状结构的稳定性，例如N至C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等，Smith和Rivier(编)“肽：化学和生物学(Peptides:Chemistry and Biology)”，Escom,Leiden(1991)，268-270页)。在构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了示例，例如Goldstein,G.等的美国专利号4,457,489(1985)中所述，其公开内容通过引用整体并入本文。第三种方法是用假肽键取代肽中的肽键，赋予对蛋白水解的抗性。
已经描述了许多假肽键，通常不影响肽结构和生物活性。这种方法的一个实例是取代逆反假肽键("生物活性逆反胸腺五肽类似物(Biologically active retroinversoanalogues of thymopentin)",Sisto A.等，于Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)"《肽、化学、结构和生物学(Peptides,Chemistry,Structure and Biology)》",Escom,Leiden(1990),722-773页，和Dalpozzo,等.(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:561-566,在此纳入作为参考)。根据该修饰，除了一个或多个肽键被逆反假肽键取代之外，肽的氨基酸序列可以与上述NTP肽的序列相同。优选最N端肽键被取代，因为这种取代将赋予对作用于N端的外切肽酶的蛋白水解的抗性。还可以通过用类似结构的其他化学基团取代氨基酸的化学基团来进行进一步的修饰。已知增强对酶裂解的稳定性而又没有或几乎没有生物活性损失的另一种合适的假肽键是还原的电子等排体假肽键(Couder,等(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:181-184,其全部内容通过引用并入本文)。
因此，这些肽的氨基酸序列可以与NTP肽的序列相同，只是一个或多个肽键被电子等排体假肽键取代。优选最N端肽键被取代，因为这种取代将赋予对作用于N端的外切肽酶的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体假肽键的肽的合成在本领域中是已知的(Couder，等(1993)，如上所引)。其他例子包括引入酮亚甲基或甲基硫键以取代肽键。
肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，其保留用于生物学活性的重要结构决定子，但消除了肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，通过引用整体并入本文)。类肽是N-取代甘氨酸的低聚物。已经描述了许多N-烷基基团，每个对应于一种天然氨基酸的侧链(Simon，等(1992)，如上所引)。肽的一些或全部氨基酸可以被对应于被取代氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。
术语“肽模拟物”或“模拟物”还包括如下定义的反向D肽和对映异构体。
术语“反向D肽”是指与肽的L-氨基酸序列相比，由相反顺序排列的D-氨基酸组成的生物活性蛋白质或肽。因此，L-氨基酸肽的羧基末端残基成为D-氨基酸肽的氨基末端，等等。例如，肽ETESH变为HdSdEdTdEd，其中Ed,Hd,Sd,和Td分别是对应于L-氨基酸E，H，S和T的D-氨基酸。
术语“对映异构体”是指其中肽的氨基酸序列中的一个或多个L-氨基酸残基被相应的D-氨基酸残基置换的生物活性蛋白质或肽。
如本文所使用的“组合物”广泛地指含有所述肽或氨基酸序列和任选其他活性剂的任何组合物。该组合物可以包含干制剂，水溶液或无菌组合物。包含肽的组合物可以用作杂交探针。探针可以以冻干形式储存并且可以与稳定剂例如碳水化合物关联。在杂交中，可以将探针置于含有盐例如NaCl、去污剂例如十二烷基硫酸钠(SDS)和其它成分例如登哈特(Denhardt's)溶液、干奶粉、鲑鱼精子DNA等的水溶液中。
表述“活性剂”在本文中用于表示能够减少和/或去除不需要的细胞增殖和/或组织生长的规模的任何试剂。合适的活性剂可以包括但不限于：(i)有助于膀胱收缩和尿道运动但不一定杀死或除去细胞的平滑肌拮抗剂/激动剂(α阻断剂)；(ii)通过细胞收缩导致前列腺收缩的5α-还原酶抑制剂(例如非那雄胺和/或度他雄胺)；(iii)抗癌活性剂(如烷化剂，拓扑异构酶I抑制剂，拓扑异构酶II抑制剂，RNA/DNA抗代谢物和抗有丝分裂剂)；(iv)治疗良性生长的活性剂，例如抗痤疮和抗疣活性剂；(v)抗雄激素化合物，(醋酸环丙孕酮(1α,2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮)，他莫昔芬，芳香酶抑制剂)；(vi)α1-肾上腺素受体阻断剂(坦索罗辛，特拉唑嗪，多沙唑嗪，哌唑嗪，布那唑嗪，吲哚米尔，阿洛唑嗪，西洛多辛)；(vii)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂(他达拉非)，以及它们的组合。
实施方式涉及治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的哺乳动物的方法，包括给予包含如上定义的NTP肽的组合物以及其他活性剂。可以将其他活性剂与含NTP肽的组合物一起(或以与其相同的制剂形式)给予，或者可以将其他活性剂分开给予。例如，包含NTP肽的组合物可以通过注射给药，而其他活性剂可以作为口服药物(以片剂、凝胶胶囊等形式)在不同的时间点服用。
被发现是导致细胞死亡的有效试剂的NTP肽衍生的其他肽序列也可能是导致细胞死亡的有效试剂。本领域普通技术人员可以使用本文提供的指南合成跨越该蛋白质的整个氨基酸序列的有效肽的片段，而无需过度实验，以鉴定其他有效的肽序列。
发明人发现，与仅用其它活性剂治疗的哺乳动物相比，使用NTP肽在治疗需要除去或破坏不想要的细胞元件的哺乳动物时，如果与其他活性剂组合，则提供了意想不到的更好的临床益处。例如，可以对症评估治疗良性前列腺增生的功效。症状评估可以通过国际前列腺症状评分(IPSS)来测量，IPSS是用于评估前列腺症状改善或恶化的量化评分。IPSS量化如下：1)排尿后不完全的膀胱排空；2)尿频；3)排尿时停止和开始；4)急需小便；5)尿流无力；6)排尿时需要推挤或拉紧；7)晚上睡觉后需要小便(夜尿)。发明人发现，与其他活性剂联合给予NTP肽导致IPSS改善比仅接受其他活性剂的患者中的IPSS改善大约15-150％。在一些实施方式中，所述改善在约25至约125％，或约30％至约115％，或约40％至约110％的范围内。
发明人发现，先前没有服用额外的活性剂的患者(或者先前没有接受过针对这种病症的治疗的患者)在用NTP肽治疗然后随后给予其他活性剂时，这种改善更加显著。接受NTP肽并随后给予其他活性剂的患者的IPSS改善比接受安慰剂并随后给予其他活性剂的患者的IPSS改善大50％至400％。在一些实施方式中，所述改善在约75至约300％，或约150％至约250％，或约200％至约225％的范围内。
所述实施方式包括治疗患有需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的哺乳动物的方法，其中所述哺乳动物先前接受过或未曾接受过这种病症的治疗，所述方法包括向所述哺乳动物给予NTP肽，与给予其他活性剂联合。所述方法包括但不限于：肌内，口服，静脉内，腹膜内，脑内(实质内)，脑室内，病灶内，眼内，动脉内，鞘内，瘤内，鼻内，局部，透皮，皮下或皮内给予NTP-肽，其单独或偶联至运载体。这些不需要的细胞增殖尤其包括但不限于良性和恶性肿瘤，腺体(例如前列腺)增生，不需要的面部毛发，疣和不需要的脂肪组织。优选的NTP肽包括以下一种或多种：
SEQ ID No.66 IDQQVLSRIKLEIKRCL
Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
SEQ ID NO.111 IDQQVLSRI Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile
SEQ ID NO.115 VLSRIKLEIKRCL
Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu
SEQ ID NO.116 IDQQVLSRIKLEI
Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile
任何哺乳动物都可以受益于使用本发明，包括人类，小鼠，兔，狗，绵羊和其他牲畜，由兽医、动物园管理员或野生动物保护员治疗或治疗的任何哺乳动物。优选的哺乳动物是人类，绵羊和狗。
对于本领域技术人员来说显而易见的是，可以选择上述NTP肽的其他较小片段，使得这些肽将具有相同或相似的生物学活性。本领域技术人员可以选择其它片段，使得这些肽将具有相同或相似的生物学活性。实施方式的肽涵盖这些其他片段。通常，实施方式的肽具有至少4个氨基酸，优选至少5个氨基酸，更优选至少6个氨基酸。
实施方式还涵盖治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的哺乳动物(或患者)的方法，包括将包含NTP肽的组合物与其他活性剂一起给予，所述NTP肽包含连接在一起的两个或更多个NTP肽。就NTP肽具有所需的生物学活性而言，两个这样的肽也将具有所需的生物学活性。
本实施方式涵盖的NTP肽和片段，其变体，衍生物，同源物，融合蛋白和模拟物可以使用本领域技术人员已知的方法制备，如重组DNA技术，天然存在的肽、蛋白质、NTP-蛋白质及其片段、变体、衍生物和同源物的蛋白质合成和分离。
使用本领域技术人员已知的方法，可以从其他肽、蛋白质及其片段，变体，衍生物和同源物制备NTP肽和片段、变体、衍生物、同源物、融合蛋白和模拟物。这样的方法包括(但不限于)使用蛋白酶将肽或蛋白质裂解成期望的NTP肽。
NTP肽可以使用众所周知的重组DNA技术方法制备，例如下述中所述的那些：Sambrook等《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)》，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)，纽约冷泉港和/或Ausubel等编，《新编分子生物学实验指南(Current Protocols in Molecular Biology)》，格林出版社有限公司(Green Publishers Inc.)和威立出版有限公司(Wiley and Sons,Inc.)。.
编码NTP肽的基因或cDNA可以通过例如筛选基因组或cDNA文库或通过PCR扩增获得。可用于筛选文库的探针或引物可基于来自相同或相关基因家族的其他已知基因或基因片段的序列信息产生，例如在其他肽或蛋白质中发现的保守基序。另外，在已经鉴定出编码NTP肽的基因的情况下，该基因的全部或一部分可以用作探针来鉴定同源基因。探针或引物可用于筛选来自被认为表达NTP肽基因的各种组织来源的cDNA文库。通常情况下，高度严格条件将用于筛选，以最大限度地减少从筛选获得的假阳性的数量。
制备编码NTP肽的基因的另一种手段是使用本领域技术人员熟知的方法的化学合成法，例如Engels等，Angew.Chem.Intl.Ed.,28:716-734所述的那些。
这些方法包括但不限于用于核酸合成的磷酸三酯、亚磷酰胺和H-膦酸酯的方法。这种化学合成的优选方法是使用标准亚磷酰胺化学的聚合物支持的合成。通常，编码肽或蛋白质的DNA的长度将是几百个核苷酸。可以使用这些方法将大于约100个核苷酸的核酸作为几个片段进行合成。然后片段可以连接在一起形成全长肽或蛋白质。通常，编码蛋白质氨基末端的DNA片段将具有编码甲硫氨酸残基的ATG。该甲硫氨酸可以存在或可以不存在于蛋白质或肽的成熟形式上，这取决于宿主细胞中产生的蛋白质是否被设计为从该细胞分泌。
可使用标准连接技术将编码NTP肽的基因，cDNA或其片段插入合适的表达或扩增载体中。通常选择载体以在所用的特定宿主细胞中起作用(即载体与宿主细胞机制相容，使得可以发生基因的扩增和/或基因的表达)。编码NTP肽的基因、cDNA或其片段可以在原核生物、酵母、昆虫(杆状病毒系统)和/或真核生物宿主细胞中扩增/表达。宿主细胞的选择部分取决于NTP肽是否被糖基化和/或磷酸化。如果是，则优选酵母、昆虫或哺乳动物宿主细胞。
通常，在任何宿主细胞中使用的载体将包含至少5'侧翼序列(也称为启动子)以及其他调控元件，例如增强子，复制起点元件，转录终止元件，包含供体和受体剪接位点的完整内含子序列，信号肽序列，核糖体结合位点元件，聚腺苷酸化序列，用于插入编码待表达多肽的核酸的多接头区域，和选择标记元件。下面讨论这些元素中的每一个。任选地，载体可以包含标签序列，即位于蛋白质或肽编码序列的5'或3'末端的寡核苷酸分子；寡核苷酸分子编码聚His(例如六聚His)或其他标签例如FLAG、HA(血凝素流感病毒)或myc，它们存在市售抗体。该标签通常在多肽表达后与多肽融合，并且可以充当从宿主细胞中亲和纯化蛋白质或肽的手段。亲和纯化可以通过例如使用针对标签的抗体作为亲和基质的柱层析完成。任选地，标签随后可以通过各种方式例如使用某些肽酶从纯化的蛋白质或肽中去除。
本领域技术人员可以将人免疫球蛋白铰链和Fc区在NTP肽的N-末端或C-末端融合。随后的Fc-融合蛋白可以通过使用蛋白A亲和柱来纯化。已知Fc在体内表现出长的药代动力学半衰期，并且发现与Fc融合的蛋白质显示出比未融合的对应物显著更长的体内半衰期。而且，与Fc区的融合允许分子的二聚化/多聚化，这对于一些分子的生物活性可能是有用的。
5'侧翼序列可以是同源的(即来自与宿主细胞相同的物种和/或菌株)，异源的(即来自除宿主细胞物种或菌株以外的物种)，杂交的(即，来自多于一个来源的5'侧翼序列的组合)，合成的，或者可以是天然蛋白或肽基因5'侧翼序列。如此，5'侧翼序列的来源可以是任何单细胞原核生物或真核生物，任何脊椎动物或无脊椎动物生物，或任何植物，条件是5'侧翼序列在宿主细胞中起作用并且可以被宿主细胞机器活化。
可用于本实施方式的载体中的5'侧翼序列可以通过本领域公知的几种方法中的任一种来获得。典型地，除了蛋白质或肽基因侧翼序列之外，本文中有用的5'侧翼序列先前已通过作图和/或通过限制性内切核酸酶消化鉴定，因此可使用适当的限制性内切核酸酶从适当的组织来源分离。在一些情况下，5'侧翼序列的全部核苷酸序列可能是已知的。这里，可以使用上述用于核酸合成或克隆的方法来合成5'侧翼序列。
当5'侧翼序列的全部或仅一部分已知时，可以使用PCR和/或通过用来自相同或另一物种的合适的寡核苷酸和/或5'侧翼序列片段筛选基因组文库来获得。
当5'侧翼序列未知时，含有5'侧翼序列的DNA片段可以从可能含有例如编码序列或甚至另一个或多个基因的较大的DNA片段中分离。分离可以通过使用一种或多种精心挑选的酶的限制性核酸内切酶消化来分离适当的DNA片段来完成。消化后，可通过琼脂糖凝胶纯化、柱或本领域技术人员已知的其它方法分离所需片段。对于本领域的普通技术人员来说，选择合适的酶来完成这一目的将是显而易见的。
复制元件的来源通常是商购的原核表达载体的一部分，并有助于在宿主细胞中扩增载体。在某些情况下，将载体扩增至某一拷贝数对于蛋白质或肽的最佳表达是重要的。如果选择的载体不含复制位置的起点，则可以基于已知序列化学合成载体，并将其连接到载体中。转录终止元件通常位于蛋白质或肽编码序列末端的3'处，并用于终止蛋白质或肽的转录。通常，原核细胞中的转录终止元件是富含G-C片段，然后是聚T序列。尽管该元件可以从文库中克隆或者作为载体的一部分商购，但是也可以使用如上所述的核酸合成方法容易地合成。
选择性标记基因元件编码对在选择性培养基中生长的宿主细胞的存活和生长所必需的蛋白质。典型的选择标记基因编码(a)赋予原核宿主细胞对抗生素或其它毒素(例如氨苄青霉素，四环素或卡那霉素)的抗性，(b)补充细胞营养缺陷；或(c)提供复杂培养基所不能提供的关键营养素。优选的选择性标记是卡那霉素抗性基因，氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因。
通常被称为Shine-Dalgarno序列(原核生物)或Kozak序列(真核生物)的核糖体结合元件通常是mRNA翻译起始所必需的。元件通常位于启动子的3'以及要合成的蛋白质或肽的编码序列的5'。Shine-Dalgarno序列是不同的，但通常是聚嘌呤(即具有高的A-G含量)。已经鉴定了许多Shine-Dalgarno序列，其中的每一个都可以使用上述方法容易地合成并用于原核载体中。
在需要从宿主细胞中分泌NTP肽的情况下，可以使用信号序列将肽从其合成的宿主细胞中导出，并且蛋白质的羧基端部分可以被删除以防止膜锚定。通常，信号序列位于NTP肽基因或cDNA的编码区中，或直接位于肽基因编码区的5'端。已经鉴定了许多信号序列，并且它们中任何在选择的宿主细胞中有功能的序列都可以与肽基因或cDNA结合使用。因此，信号序列可以与肽基因或cDNA同源或异源，并且可以与肽基因或cDNA同源或异源。另外，可以使用上述方法化学合成信号序列。在大多数情况下，通过信号肽的存在从宿主细胞中分泌多肽将导致从多肽中除去氨基末端甲硫氨酸。
在许多情况下，随着载体中存在一个或多个内含子，NTP肽基因或cDNA的转录增加；在真核宿主细胞尤其是哺乳动物宿主细胞中产生肽的情况下尤其如此。使用的内含子可以天然存在于肽基因内，尤其是当使用的基因是全长基因组序列或其片段时。当内含子不是天然存在于基因内时(如对于大多数cDNA)，内含子可以从另一来源获得。内含子相对于侧翼序列和肽基因的位置通常是重要的，因为内含子必须被转录才能有效。如此，当插入到表达载体中的肽基因是cDNA分子时，内含子的优选位置是转录起始位点的3'，和polyA转录终止序列的5'。优选地，对肽cDNA，一个或多个内含子将位于cDNA的一侧或另一侧(即5'或3')，使得它不中断该编码序列。来自任何来源，包括任何病毒，原核生物和真核生物(植物或动物)生物，的任何内含子都可用于实施本实施方式，只要它与其所插入的宿主细胞相容即可。本文还包括合成的内含子。任选地，可以在载体中使用多于一个的内含子。
当上述一种或多种元件尚未存在于待使用的载体中时，可以将它们单独获得并连接到载体中。用于获得每种元件的方法是本领域技术人员熟知的并且与上述方法(即DNA的合成，文库筛选等)相当。
用于实践本实施方式的最终载体可以从起始载体如市售载体构建。这样的载体可能包含或可能不包含要包含在完整载体中的一些元件。如果在起始载体中不存在所需的元件，则可以通过用适当的限制性内切核酸酶切割载体，使得待连接入的元件的末端和载体的末端适合于连接，从而将每个元件单独连接到载体中。在某些情况下，为了获得满意的连接，可能需要钝化末端以连接在一起。钝化是通过首先使用Klenow DNA聚合酶或T4DNA聚合酶在全部四个核苷酸的存在下填充“粘性末端”来完成的。该方法在本领域中是众所周知的，并在例如上述的Sambrook等中有描述。或者，可以首先将要插入载体的两个或多个元件连接在一起(如果它们彼此位置相邻)，然后连接到载体中。
构建载体的另一种方法是在一个反应混合物中同时进行各种元件的所有连接。在这里，由于不适当的连接或插入元件会产生许多无义或无功能的载体，但是可以通过限制性内切酶消化来鉴定和选择功能载体。
实施本实施方式的优选载体是与细菌、昆虫和哺乳动物宿主细胞相容的载体。这些载体包括但不限于pCRII,pCR3,和pcDNA3.1(加利福尼亚州圣迭戈的英杰(Invitrogen)公司),pBSII加利福尼亚州拉霍亚的司查塔基(Stratagene)公司,pET15b(威斯康星州麦迪逊的诺瓦基(Novagen)公司),PGEX(新泽西州皮斯卡塔韦的药物生物技术(PharmaciaBiotech)公司,pEGFP-N2(加州帕洛阿尔托的克隆泰克(Clontech)公司,pETL(BlueBachl；英杰公司),和pFastBacDual(纽约州格兰德岛的Gibco/BRL公司)。
载体已经构建并且编码全长或截短的蛋白质或肽的核酸分子已被插入载体的适当位点后，可以将完成的载体插入合适的宿主细胞中用于扩增和/或多肽表达。宿主细胞可以是原核宿主细胞(如大肠杆菌)或真核宿主细胞(如酵母细胞，昆虫细胞或脊椎动物细胞)。在适当条件下培养时，宿主细胞可合成可随后从培养基中收集的(如果宿主细胞将其分泌到培养基中)或直接从产生它的宿主细胞(如果它不分泌的话)收集的蛋白质或肽。
收集后，NTP肽可以使用诸如分子筛层析，亲和层析等的方法进行纯化。用于蛋白质或肽生产的宿主细胞的选择将部分取决于肽是否被糖基化或磷酸化(在这种情况下优选真核宿主细胞)，以及宿主细胞能够将肽折叠成其天然三级结构(例如二硫桥等的适当取向)的方法，使得生物活性蛋白由具有生物活性的肽制备，该肽可以在合成之后使用如下所述的适当化学条件折叠。合适的细胞或细胞系可以是哺乳动物细胞，如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)、人胚肾(HEK)293、293T细胞或3T3细胞。合适的哺乳动物宿主细胞的选择和用于转化、培养、扩增、筛选和产物生产和纯化的方法是本领域已知的。其他合适的哺乳动物细胞系是猴COS-1和COS-7细胞系，以及CV-1细胞系。其他示例性的哺乳动物宿主细胞包括灵长类细胞系和啮齿动物细胞系，包括转化的细胞系。正常的二倍体细胞、源自原代组织的体外培养的细胞株以及初级外植体也是合适的。候选细胞可能在选择基因中是基因型缺陷的，或者可能含有显性作用的选择基因。其他合适的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠神经母细胞瘤N2A细胞，HeLa，小鼠L-929细胞，来源于Swiss、Balb-c或NIH小鼠的3T3系，BHK或HaK仓鼠细胞系。
与适用于本发明实施方式的宿主细胞类似地有用的是细菌细胞。例如，各种大肠杆菌菌株(例如HB101，DH5α，DH10和MC1061)作为生物技术领域的宿主细胞是众所周知的。枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、其他芽孢杆菌属(Bacillusspp.)、链霉菌属(Streptomyces spp.)等的各种菌株也可以用于该方法中。本领域技术人员已知的许多酵母细胞菌株也可用作用于本发明实施方式的多肽表达的宿主细胞。
此外，在需要时，昆虫细胞系统可用于本实施方式的方法中。此类系统如以下中所述：例如Kitts等(Biotechniques,14:810-817),Lucklow(Curr.Opin.Biotechnol.,4:564-572)和Lucklow等(J.Virol.,67:4566-4579)。优选的昆虫细胞是Sf-9和Hi5(加利福尼亚州圣迭戈的英杰公司)。
可以使用诸如氯化钙，电穿孔，显微注射，脂质转染或DEAE-葡聚糖方法的方法将载体插入(也称为转化或转染)到所选宿主细胞中。选择的方法将部分是所用宿主细胞类型的函数。这些方法和其他合适的方法是本领域技术人员所熟知的，并且在例如Sambrook等(同上)中所示。
含有载体的宿主细胞(即转化的或转染的)可以使用本领域技术人员熟知的标准培养基来培养。培养基通常会包含细胞生长和存活所必需的所有营养素。用于培养大肠杆菌细胞的合适培养基是例如Luria肉汤(LB)和/或Terrific肉汤(TB)。用于培养真核细胞的合适培养基是RPMI 1640，MEM，DMEM，所有这些都可以补充培养的特定细胞系所需的血清和/或生长因子。用于昆虫培养的合适培养基是根据需要补充有酵母菌，乳清蛋白水解产物和/或胎牛血清的Grace培养基。典型地，仅将用于选择性生长转化细胞的抗生素或其它化合物作为培养基的补充物加入。待使用的化合物将由存在于宿主细胞转化的质粒上的选择性标记元件决定。例如，在选择性标记元件是卡那霉素抗性的情况下，添加到培养基中的化合物将是卡那霉素。
可以使用本领域已知的标准方法评估宿主细胞中产生的NTP肽的量。这些方法包括但不限于Western印迹分析，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，非变性凝胶电泳，HPLC分离，质谱分析，免疫沉淀，和/或活性分析如DNA结合凝胶移位分析。
如果蛋白质或肽被设计为从宿主细胞分泌，则大部分蛋白质或肽可以在细胞培养基中发现。以这种方式制备的蛋白质通常不具有氨基末端甲硫氨酸，因为它在从细胞分泌的过程中被除去。然而，如果蛋白质或肽不是从宿主细胞分泌的，则其将存在于细胞质和/或细胞核(对于真核宿主细胞)或胞质溶胶(对于革兰氏阴性细菌宿主细胞)中，并且可以具有氨基末端甲硫氨酸。
对于位于宿主细胞细胞质和/或细胞核中的NTP肽，通常首先机械破坏宿主细胞或用洗涤剂破坏宿主细胞，以将细胞内容物释放到缓冲溶液中。然后可以从该溶液中分离肽。
从溶液中纯化NTP肽可以使用各种技术来完成。如果已经合成NTP肽使得在其羧基或氨基末端包含标签如六聚组氨酸(例如肽/六聚His)或其他小肽如FLAG(密苏里州圣路易斯市的西格玛奥德里奇(Sigma-Aldrich)公司)或钙调蛋白结合肽(加利福尼亚州拉霍亚的司查塔基公司)，其基本可以通过使溶液通过亲和柱而以一步法得到纯化，其中柱基质对标签或直接对蛋白质(例如特异性识别肽的单克隆抗体)具有高亲和力。例如，聚组氨酸以极大的亲和力和特异性结合镍、锌和钴；因此使用镍基亲和树脂(如凯杰公司的QIAexpress系统或英杰公司的Xpress System中所用)或钴基亲和树脂(如BD公司的Biosciences-CLONTECH's Talon系统中所用)的固定化金属离子亲和色谱可用于纯化肽/聚His。(参见例如Ausubel等编，《新编分子生物学实验指南(Current Protocols in MolecularBiology)》，第10.11.8章，纽约约翰威力公司(John Wiley&Sons))。
如果制备的NTP肽没有附着标签，并且没有抗体可用，则可以使用其他公知的纯化方法。这样的方法包括但不限于离子交换色谱法，羟基磷灰石色谱法，疏水相互作用色谱法，分子筛色谱法，HPLC，联合凝胶洗脱的天然凝胶电泳，和制备性等电点聚焦(异构酶机器/技术，胡夫(Hoefer)科学公司)。在一些情况下，这些技术中的两种或更多种可以被组合以实现更高的纯度。
如果预期NTP肽将主要在细胞内发现，则可以使用本领域技术人员已知的任何标准技术从宿主细胞中提取细胞内物质(包括革兰氏阴性细菌的包涵体)。例如，宿主细胞可以通过法式压榨，均质化和/或超声处理然后离心来溶解以释放周质/细胞质的内容物。如果肽在胞质溶胶中已经形成包涵体，则包涵体通常可以结合到内部和/或外部的细胞膜上，并因此在离心之后主要在颗粒材料中发现。然后可以在极端pH值下或用离液剂(例如去垢剂、胍、胍衍生物、尿素或尿素衍生物)在还原剂如碱性pH下的二硫苏糖醇或酸性pH下的三羧乙基膦的存在下处理颗粒材料以释放、分解和溶解包涵体。然后可以使用凝胶电泳、免疫沉淀等分析现在为可溶形式的肽。如果希望分离肽，则可以使用标准方法例如下述以及Marston等Meth.Enz.,182:264-275所述来实现分离。
在一些情况下，NTP肽在分离时可能不具有生物活性。用于重折叠或将多肽转化成其三级结构并产生二硫键的各种方法可用于恢复生物学活性。这样的方法包括将溶解的多肽在特定浓度的离液剂存在下暴露于通常高于7的pH。离液剂的选择与用于包涵体溶解的选择非常相似，但通常浓度较低，并且不一定与用于溶解的离液剂相同。在大多数情况下，再折叠/氧化溶液还将含有还原剂或还原剂加上其特定比例的氧化形式以产生特定的氧化还原电位，从而允许在形成蛋白质的半胱氨酸桥时发生二硫键改组(disulfideshuffling)。一些常用的氧化还原对包括半胱氨酸/胱胺，谷胱甘肽(GSH)/二硫代双糖GSH，氯化铜，二硫苏糖醇(DTT)/二噻烷DTT，2-巯基乙醇(bME)/二硫-b(ME)。在许多情况下，共溶剂对于提高重折叠的效率是必要的，用于此目的的更常见的试剂包括甘油，各种分子量的聚乙二醇，和精氨酸。
如果NTP肽包含体在宿主细胞中没有形成显著的程度，那么在细胞匀浆离心之后主要在上清液中发现NTP肽，并且可以使用例如下述的方法从上清液中分离NTP肽。
在优选部分或完全分离NTP肽的情况下，可以使用本领域技术人员熟知的标准方法进行纯化。这些方法包括但不限于通过电泳然后电洗脱、各种类型的层析(免疫亲和，分子筛和/或离子交换)和/或高压液相色谱进行分离。在一些情况下，可能优选使用这些方法中的多于一种来完成纯化。
除了使用重组DNA技术制备和纯化NTP肽之外，还可以使用已知技术通过化学合成方法(例如固相肽合成)制备NTP肽及其片段、变体、同源物、融合蛋白、肽模拟物和衍生物，例如如下中所述：Merrifield等，J.Am.Chem.Soc.,85:2149,Houghten等Proc NatlAcad.Sci.USA,82:5132,和Stewart和Young,“固相肽合成(Solid Phase PeptideSynthesis)”(皮尔斯(Pierce)化学公司，Rockford,Ill.1984)。这样的肽可以在氨基末端有或没有甲硫氨酸的情况下合成。化学合成的NTP肽可以使用这些参考文献中提出的方法氧化以形成二硫键。预期NTP肽具有与从天然来源重组产生或纯化的肽相当的生物学活性，因此可以与重组或天然肽互换使用。
其中肽与聚合物连接的化学修饰的NTP肽组合物包括在本发明的范围内。所选择的聚合物通常是水溶性的，使得其所附着的蛋白质不会在水性环境如生理环境中沉淀。通常将所选择的聚合物改性成具有单一的反应性基团，例如用于酰化的活性酯或用于烷基化的醛，从而可以如本发明方法中所提供的那样控制聚合度。所述聚合物可具有任何分子量，并且可以是支化或非支化的。聚合物的混合物包括在肽聚合物范围内。
在一些情况下，可能需要制备天然存在的NTP肽的核酸和/或氨基酸变体。可以使用定点诱变，PCR扩增或其它合适的方法(其中引物具有所需的点突变)来产生核酸变体(参见Sambrook等(同上)、Ausubel等(同上)关于诱变技术的描述)。使用Engels等(同上)描述的方法的化学合成也可以用于制备这样的变体。也可以使用本领域技术人员已知的其他方法。
优选的核酸变体是那些含有核苷酸取代的核酸变体，这些核苷酸取代解释了被用于产生NTP肽的宿主细胞中的密码子偏好。这种密码子优化可以通过包含密码子频率表的计算机算法(如Ecohigh)来确定。高表达的细菌基因的密码子偏好的cod文件如威斯康星大学软件包版本9.0(遗传计算机组，威斯康星州麦迪逊)所提供。其他有用的密码子频率表包括Celegans_high.cod,Celegans_low.cod,Drosophila_high.cod,Human_high.cod,Maize_high.cod,和Yeast_high.cod。其他优选的变体是，与野生型相比编码上述保守性氨基酸变化的那些变体(例如，其中天然存在的氨基酸侧链的电荷或极性基本上不会被不同的氨基酸取代所改变)，和/或设计用于产生新的糖基化和/或磷酸化位点的那些变体，或设计为删除现有的糖基化和/或磷酸化位点的那些。
还可以使用本领域技术人员已知的常规肽合成技术制备NTP肽和片段、同源物、变体、融合蛋白、肽模拟物、其衍生物和盐。这些技术包括化学偶联方法(参见Wunsch,E:"有机化学方法(Methoden der organischen Chemie)",第15卷,1+2,Synthese von Peptiden,thime出版社,斯图加特(1974),和Barrany,G.；Marrifield,R.B.:"《肽(The Peptides)》"E.Gross,J.Meienhofer编辑,第2卷,第1章,1-284页,学院出版社(1980))、酶促偶联方法(参见Widmer,F.Johansen,J.T.,Carlsberg Res.Commun.,第44卷,37-46页(1979)；Kullmann,W.:"《酶促肽合成(Enzymatic Peptide Synthesis)》",CRC出版公司，佛罗里达州博卡拉顿(1987)；和Widmer,F.,Johansen,J.T."《生物和药学中的合成肽(SyntheticPeptides in Biology and Medicines)》"Alitalo,K.,Partanen,P.,Vatieri,A.编辑,79-86页,埃尔斯威尔(Elsevier)出版社,阿姆斯特丹(1985))、或化学和酶促方法的组合，如果这对工艺设计和经济有利的话。使用本文提供的指导，本领域技术人员能够改变NTP肽的肽序列以制备与原始或天然NTP肽具有相同或相似生物学活性(生物活性)的同源物。
使用给定的NTP肽而不是肽本身的模拟物存在优点。一般而言，肽模拟物更具有生物可利用性，具有更长的作用持续时间，并且可以比天然蛋白质和肽更便宜地生产。
NTP肽的肽模拟物可以使用组合化学技术和本领域已知的其它技术来开发(参见例如，“第20届欧洲肽研讨会会刊(Proceedings of the 20th European PeptideSymposium)”,G.Jung,E.Bayer编辑,289-336页，及其中的参考文献)。本领域已知的对肽进行结构修饰以产生肽模拟物的方法的实例包括骨架手性中心的转化，产生这样的D-氨基酸残基结构(尤其是在N-末端)，该结构可导致蛋白质分解降解的稳定性提高而不对活性产生不利影响。"氚化的D-α补体1-肽T结合(Tritriated D-ala.sup.1-Peptide T Binding)",Smith C.S.等,Drug Development Res.,15,371-379页(1988)中给出了示例。
第二种方法是改变环状结构的稳定性，例如N至C链间酰亚胺和内酰胺(Ede等，Smith和Rivier(编)“肽：化学和生物学(Peptides:Chemistry and Biology)”，Escom,Leiden(1991)，268-270页)。在构象限制的胸腺五肽样化合物中给出了示例，例如Goldstein,G.等的美国专利号4,457,489(1985)中所述，其公开内容通过引用整体并入本文。
第三种方法是用假肽键取代NTP肽中的肽键，赋予对蛋白水解的抗性。已经描述了许多假肽键，通常不影响肽结构和生物活性。这种方法的一个实例是取代逆转录假肽键("生物活性逆转录胸腺五肽类似物(Biologically active retroinverso analogues ofthymopentin)",Sisto A.等，于Rivier,J.E.和Marshall,G.R.(编)"《肽、化学、结构和生物学(Peptides,Chemistry,Structure and Biology)》",Escom,Leiden(1990),722-773页，和Dalpozzo,等.(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:561-566,在此纳入作为参考)。根据该修饰，除了一个或多个肽键被逆反假肽键取代之外，肽的氨基酸序列可以与上述肽的序列相同。优选最N端肽键被取代，因为这种取代将赋予对作用于N端的外切肽酶的蛋白水解的抗性。
具有一个或多个还原的逆反假肽键的肽的合成在本领域中是已知的(Sisto(1990)和Dalpozzo，等(1993)，上文引用)。因此，肽键可以被允许肽模拟物对采取原始肽的类似结构并因此具有生物活性的非肽键代替。还可以通过用类似结构的其他化学基团取代氨基酸的化学基团来进行进一步的修饰。已知增强对酶裂解的稳定性而又没有或几乎没有生物活性损失的另一种合适的假肽键是还原的电子等排物假肽键(Couder,等(1993),Int.J.Peptide Protein Res.,41:181-184,其全部内容通过引用并入本文)。因此，这些肽的氨基酸序列可以与肽的序列相同，只是一个或多个肽键被电子等排体假肽键取代。优选最N端肽键被取代，因为这种取代将赋予对作用于N端的外切肽酶的蛋白水解的抗性。具有一个或多个还原的电子等排体假肽键的肽的合成在本领域中是已知的(Couder，等(1993)，上文引用)。其他例子包括引入酮亚甲基或甲基硫键以取代肽键。
NTP肽的类肽衍生物代表另一类肽模拟物，其保留用于生物学活性的重要结构决定子，但消除了肽键，从而赋予对蛋白水解的抗性(Simon等，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:9367-9371，通过引用整体并入本文)。类肽是N-取代甘氨酸的低聚物。已经描述了许多N-烷基基团，每个对应于一种天然氨基酸的侧链(Simon，等(1992)，上文引用，并通过引用全文纳入本文)。肽的一些或全部氨基酸被对应于被取代氨基酸的N-取代的甘氨酸置换。
肽模拟物的开发可以通过由NMR光谱、结晶学和/或计算机辅助分子模型确定的原始肽的三级结构来辅助。这些技术有助于开发比原始肽具有更高效力和/或更高生物利用度和/或更高稳定性的新组合物(Dean(1994),BioEssays,16:683-687；Cohen和Shatzmiller(1993),J.Mol.Graph.,11:166-173；Wiley和Rich(1993),Med.Res.Rev.,13:327-384；Moore(1994),Trends Pharmacol.Sci.,15:124-129；Hruby(1993),Biopolymers,33:1073-1082；Bugg等(1993),Sci.Am.,269:92-98,全部通过引用整体并入本文)。
一旦鉴定了潜在的肽模拟化合物，可以使用下面实施方式中概述的方法合成和分析其以评估其活性。通过上述方法获得的具有肽的生物学活性和类似的三维结构的肽模拟化合物包括在本实施方式中。对于本领域技术人员而言显而易见的是，肽模拟物可以由带有一个或多个上述修饰的任何肽产生。此外显而易见的是，本实施方式的肽模拟物，除了它们作为治疗化合物的用途之外，可以进一步用于开发更有效的非肽化合物。
目前存在能够合成本文所述的肽的许多组织。例如，给定NTP肽的序列，该组织可以合成肽并将所合成的肽与附随的文件和肽的鉴定证明一起转发。
本发明的实施方式涉及治疗患有需要去除细胞(例如良性和恶性肿瘤，腺性(例如前列腺)增生，不需要的面部毛发，疣和不需要的脂肪组织)或者抑制或预防不需要的细胞增殖的病症(如支架的狭窄)的哺乳动物的方法。这种方法包括向有需要的哺乳动物给予治疗有效量的NTP肽并与其他活性剂联用，或用其涂覆诸如支架的装置。
其他活性剂可以是选自下述的一种或多种活性剂：(i)抗癌活性剂(例如烷化剂，拓扑异构酶I抑制剂，拓扑异构酶II抑制剂，RNA/DNA抗代谢剂和抗有丝分裂剂)；(ii)治疗良性生长的活性剂，如抗痤疮和抗疣活性剂(水杨酸)；(iii)抗雄激素化合物(醋酸环丙孕酮(1α，2β-亚甲基-6-氯-17α-乙酰氧基-6-脱氢孕酮))他莫昔芬，芳香酶抑制剂)；(iv)α-肾上腺素受体阻滞剂(坦索罗辛，特拉唑嗪，多沙唑嗪，哌唑嗪，布那唑嗪，吲哚米尔，阿洛唑嗪，西洛多辛)；(v)5α-还原酶抑制剂(非那雄胺，度他雄胺)；(vi)5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂(他达拉非)，及它们的组合。优选地，其他活性剂选自坦索罗辛，非那雄胺，特拉唑嗪，多沙唑嗪，哌唑嗪，他达拉非，阿夫唑嗪，西洛多辛，度他雄胺，度他雄胺和坦索罗辛的组合以及它们的混合物和组合。
病症可为下述器官的肿瘤，例如肺，乳腺，胃，胰腺，前列腺，膀胱，骨，卵巢，皮肤，肾，鼻窦，结肠，肠，胃，直肠，食道，血液，脑及其覆盖物，脊髓及其覆盖物，肌肉，结缔组织，肾上腺，甲状旁腺，甲状腺，子宫，睾丸，垂体，生殖器官，肝脏，胆囊，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，扁桃腺，口腔，淋巴结和淋巴系统等器官。
如本文所用，术语“恶性肿瘤”旨在涵盖以低分化，中分化和高分化形式发生的所有形式的人类癌，肉瘤和黑素瘤。
本实施方式满足了本领域对治疗的需要，该治疗可以以较少的风险和较少的不良手术副作用来去除良性肿瘤。特别需要一种在手术危险区域，例如在身体深处(例如，大脑，心脏，肺等)去除良性肿瘤的方法。
治疗必须除去细胞的症状的方法可以与治疗这种病症的常规方法联合使用，例如手术切除，化疗和放疗。在一个实施方式中，提供了给予包含NTP肽的组合物(单独或与其他活性剂联合)，随后进行手术治疗的方法。本发明人令人惊讶地发现，接受NTP肽并随后接受手术治疗的患者的IPSS改善比接受安慰剂并且随后进行手术治疗的患者的IPSS改善高约15-150％。在一些实施方式中，所述改善在约25至约100％，或约30％至约75％，或约40％至约65％的范围内。
待治疗的病症还可以是选自下述的组织的增生、肥大和过度生长：肺，乳腺，胃，胰腺，前列腺，膀胱，骨，卵巢，皮肤，肾，鼻窦，结肠，肠，胃，直肠，食道，血液，脑及其覆盖物，脊髓及其覆盖物，肌肉，结缔组织，肾上腺，甲状旁腺，甲状腺，子宫，睾丸，垂体，生殖器官，肝脏，胆囊，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，扁桃腺，口腔，和淋巴结及淋巴系统。
可用本实施方式方法治疗的其他病症是选自下述的病毒性、细菌性或寄生虫改变的组织：肺，乳腺，胃，胰腺，前列腺，膀胱，骨，卵巢，皮肤，肾，鼻窦，结肠，肠，胃，直肠，食道，血液，脑及其覆盖物，脊髓及其覆盖物，肌肉，结缔组织，肾上腺，甲状旁腺，甲状腺，子宫，睾丸，垂体，生殖器官，肝脏，胆囊，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，扁桃腺，口腔，和淋巴结及淋巴系统。
待治疗的病症还可以是选自下述的组织的畸形或紊乱：肺，乳腺，胃，胰腺，前列腺，膀胱，骨，卵巢，皮肤，肾，鼻窦，结肠，肠，胃，直肠，食道，血液，脑及其覆盖物，脊髓及其覆盖物，肌肉，结缔组织，肾上腺，甲状旁腺，甲状腺，子宫，睾丸，垂体，生殖器官，肝脏，胆囊，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，扁桃腺，口腔，和淋巴结及淋巴系统。
具体地，待治疗的病症可以是扁桃体肥大，前列腺增生，牛皮癣，湿疹，皮肤病或痔疮。待治疗的病症可以是血管疾病，如动脉粥样硬化或动脉硬化，或血管疾病，如静脉曲张，动脉或支架的狭窄或再狭窄。待治疗的病症也可以是对例如皮肤，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，口腔，肌肉，结缔组织，头发或乳房组织的组织进行美容修饰。
NTP肽的治疗组合物可以包含与药学上可接受的运载体混合的治疗有效量的NTP肽。在一些实施方式中，其他活性剂可以与NTP肽在相同的组合物中给予，并且在其他实施方式中，包含NTP肽的组合物作为注射剂给予，而其他活性剂配制成口服药物(凝胶，胶囊，片剂，液体等)。运载体材料可以是注射用水，优选补充有用于哺乳动物给药的溶液中常见的其它物质。典型地，用于治疗用途的NTP肽将以包含与一种或多种生理上可接受的运载体，赋形剂或稀释剂结合的纯化肽的组合物形式给予。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是示例性适当的运载体。优选地，使用合适的赋形剂(例如蔗糖)将产品配制成冻干物。其他标准运载体，稀释剂和赋形剂可根据需要包含在内。实施方式的组合物还可以包含本领域普通技术人员已知的具有适当范围的pH值的缓冲液，包括约pH 7.0-8.5的Tris缓冲液或约pH 4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其可以进一步包括山梨糖醇或其合适的替代品。
与抗体、抗体片段、抗体样分子或对特定肿瘤标志物(如细胞受体，信号肽或过度表达的酶)具有高亲和力的分子偶联或连接或结合的NTP肽用于靶向原初哺乳动物中的不需要的细胞元件的用途也包括在本实施方式的范围内。使用抗体，抗体片段，抗体样分子或对特定肿瘤标志物具有高亲和力的分子将肽偶联物靶向特定的细胞或组织靶标。例如，具有独特表面抗原或表达抗原的肿瘤可以被抗体，抗体片段或抗体样结合分子靶向，并且肿瘤细胞可以被肽杀死。这种使用抗体靶向的方法具有减少剂量、增加靶细胞结合和摄取的可能性以及增加靶向和治疗转移性肿瘤和显微尺寸肿瘤的有用性的预期优点。
本实施方式还包括使用与蛋白质或其他分子偶联或连接或结合的NTP肽形成组合物，所述组合物在肿瘤或其它不需要的细胞位点处或附近，通过肿瘤-或位点-特异的酶或蛋白酶，或通过靶向肿瘤或其它不需要的细胞的抗体偶联物，在肿瘤部位或其它不需要的细胞处或附近释放肽。
本实施方式还包括使用与蛋白质或其他分子偶联或连接或结合的NTP肽形成组合物，所述组合物在待治疗的组织暴露于光(如激光治疗或其他光动态或光活化治疗)、其它形式的电磁辐射如红外辐射、紫外辐射、X射线或伽马射线辐射、局部热、α或β辐射、超声波辐射或其它来源的局部能量时释放所述肽或肽的一些生物活性片段。
所述实施方式还涵盖采用树枝状聚合物、富勒烯和其他合成分子、聚合物和大分子的NTP肽的治疗组合物，其中肽和/或其相应的DNA分子自身或与其他种类的分子如肿瘤特异性标记共同与所述分子、聚合物或大分子偶联、关联或被包含在其内。例如，美国专利号5,714,166“生物活性和/或被靶向的树枝状聚合物偶联物(Bioactive and/or TargetedDendimer Conjugates)”提供了制备和使用(但不限于)树枝状聚合物偶联物的方法，该偶联物由至少一种树枝状聚合物与一种或多种靶引导物和至少一种与其偶联的生物活性剂组成。美国专利号5,714,166通过引用整体并入本文。
本实施方式还涵盖用治疗性组合物与其他活性剂联合治疗哺乳动物的方法，该组合物为NTP肽和/或基因和药物递送载剂(例如脂质乳剂，胶束聚合物，聚合物微球体，电活性聚合物，水凝胶和脂质体)。
实施方式还涵盖将NTP肽或相关基因或基因等同物转移至哺乳动物中的不需要的细胞。肿瘤内NTP肽的过度表达可用于诱导肿瘤中的细胞死亡，从而减少肿瘤细胞群。预期NTP肽的基因或基因等同物的转移以治疗不需要的细胞元件具有需要较少剂量的优点，并且被传递到被靶向的细胞元件的细胞后代，因此需要低频率的治疗，并且总计治疗较少。本实施方式还涵盖将编码含有NTP肽的融合蛋白的基因转移至不需要的细胞或相邻细胞，其中，在基因表达和融合蛋白的产生和/或分泌后，通过天然酶或蛋白酶或通过前药切割融合蛋白以在不需要的细胞处或附近释放NTP肽。
实施方式的范围还涵盖，克隆的重组肽-抗体偶联物、克隆的重组肽-抗体片段偶联物、和克隆的重组肽-抗体样蛋白质偶联物用于给予以治疗原初哺乳动物的用途。与靶向偶联物(例如抗体，抗体片段，抗体样分子或对癌症特异性受体或其他肿瘤标志物具有高亲和力的分子)组合的克隆的NTP肽的优点是这样的分子，其组合上述靶向优点以及克隆的偶联分子的制造和标准化生产的优点。
本实施方式还包括使用NTP肽或基因或基因等同物的治疗组合物与其他活性剂联合作为医疗装置例如支架的涂层的成分，以便除去、抑制或防止不需要的细胞增殖或积聚。
用于口服给予的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，所述其他活性剂和/或NTP肽可以与以下物质中的至少一种混合：(a)一种或多种惰性赋形剂(或运载体)，例如柠檬酸钠或磷酸二钙；(b)填充剂或增量剂，如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露醇和硅酸；(c)粘合剂，如羧甲基纤维素，藻酸盐，明胶，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和阿拉伯胶；(d)保湿剂，如甘油；(e)崩解剂如琼脂，碳酸钙，马铃薯或木薯淀粉，海藻酸，某些复合硅酸盐和碳酸钠；(f)溶液缓凝剂，如石蜡；(g)吸收促进剂，如季铵化合物；(h)润湿剂，例如乙酰醇和甘油单硬脂酸酯；(i)吸附剂，如高岭土和膨润土；和(j)润滑剂，如滑石，硬脂酸钙，硬脂酸镁，固体聚乙二醇，月桂基硫酸钠，或它们的混合物。对于胶囊剂、片剂和丸剂，剂型还可以包含缓冲剂。
口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、溶液剂、悬浮液、糖浆剂和酏剂。除了活性化合物之外，液体剂型还可以包含本领域常用的惰性稀释剂，例如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂。示例性的乳化剂是乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油如棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油、和芝麻油，甘油，四氢糠醇，聚乙二醇，脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂，该组合物还可包含佐剂、湿润剂、乳化剂和助悬剂，甜味剂、调味剂和香料。
实施方式的组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化以获得一定量的NTP肽和额外的活性剂，该量能有效获得针对特定组合物和给药方法的所需治疗响应。所选择的剂量水平因此取决于期望的治疗效果、给药途径、所需的治疗持续时间和其它因素。
对于包括人在内的哺乳动物，可以根据体表面积来给予有效量。E.J.Freireich等，Cancer Chemother.Rep.,50(4):219(1966)中描述了各种大小、种类和人类的动物的剂量的相互关系(基于体表面的mg/M2)。体表面积可大致由个体的身高和体重来确定(参见例如《科学表格(Scientific Tables)》，Geigy药物公司，阿兹利，537-538页(1970))。
给予于宿主的NTP肽和额外活性剂的总日剂量可以是单剂量或分开的剂量。剂量单位组合物可以含有可用于构成日剂量的量的约数(such amounts of suchsubmultiples)。然而，应当理解，对于任何特定患者的特定剂量水平将取决于各种因素，包括体重，一般健康状况，性别，饮食，给予的时间和途径，所给予的药物的效力，吸收和排泄速率，与其他药物的组合以及所治疗的特定疾病的严重程度。
根据所述实施方式的给予NTP肽组合物的方法包括但不限于通过肌内、口服、静脉内、腹膜内、脑内(实质内)、脑室内、瘤内、病灶内、皮内、鞘内、鼻内、眼内、动脉内、局部、透皮的方式，通过气雾剂、输注、推注、植入装置、缓释系统等给予。给予其他活性剂的方法包括将其他活性剂与NTP肽一起或单独给予，优选作为口服药物。
另一种给予实施方式的NTP肽的方法是通过透皮或经皮途径。其他活性剂可以与NTP肽一起使用，或者可以如上所述分开给予。这种实施方式的一个例子是使用贴片。具体地，可以用例如二甲基亚砜(DMSO)或DMSO与棉籽油的混合物中的肽的微悬浮液来制备贴剂，并使其与携带肿瘤的哺乳动物的远离肿瘤定位部位的皮肤袋内侧的皮肤接触。其他介质或其与其他溶剂和固体支持物的混合物也可以同样地工作。贴剂可以含有溶液或悬浮液形式的肽化合物。然后可以将贴片应用于患者的皮肤，例如通过将贴片插入患者的皮肤袋中，所述皮肤袋通过缝合、夹子或其他保持装置将皮肤折叠并保持在一起而形成。应该以保证与皮肤的连续接触而不受哺乳动物干扰的方式使用这种袋子。除了使用皮肤袋之外，还可以使用任何可以确保贴片与皮肤接触牢固的装置。例如，可以使用胶粘绷带将贴片固定在皮肤上。
NTP肽与其他活性剂联用可以以缓释剂型或制剂来给药。缓释制剂的合适例子包括成型制品形式的半透性聚合物基质，例如膜或者微胶囊。缓释基质包括聚酯，水凝胶，聚交酯(美国专利3,773,919，EP 58,481)，L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物(Sidman等，Biopolymers，22：547-556)，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)(Langer等，J.Biomed.Mater.Res.,15:167-277和Langer，Chem.Tech.,12:98-105)，乙烯乙酸乙烯酯(Langer等，同上)或聚-D(-)-3-羟基丁酸(EP 133,988)。缓释组合物还可以包括脂质体，其可以通过本领域已知的几种方法中的任一种来制备(例如，Eppstein等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,82:3688-3692；EP 36,676；EP 88,046；和EP 143,949)。
实施方式的另一种给予NTP肽的方法是通过将NTP肽直接或间接输注到待治疗的肿瘤或其他组织中。在本实施方式中，其他活性剂通常将通过与给予NTP肽不同的途径给予。这种实施方式的一个例子是将NTP肽直接注射到待治疗的肿瘤或其他组织中。治疗可以包括单次注射、一次多重注射或几小时、几天或几个月内的一系列注射，同时通过活检、成像或监测组织生长的其他方法监控待治疗的肿瘤或其他组织的退化或破坏。向待治疗的肿瘤或其他组织中的注射可以通过插入例如鼻子、嘴巴、耳朵、阴道、直肠或尿道的孔口中的装置或通过切口的装置以到达体内的肿瘤或组织，并且可与成像或光学系统(例如超声波或光纤镜)结合进行，以便识别注射的合适部位。这种实施方式的另一个示例是使用可随时间向组织持续输注NTP肽的装置。
给予所述实施方式的NTP肽和其他活性剂的另一种方法与用于物理切除、消融或杀死或破坏需要或期望被去除或破坏的肿瘤或其他组织或细胞元件的手术或类似程序共同进行，其中将实施方式的NTP肽给予至其中肿瘤或其它组织被去除的区域周围的直接区域，以破坏或阻止未被程序移除或破坏的任何肿瘤细胞或其他细胞元件的生长。
本实施方式的另一种给药NTP肽的方法通过将装置植入待治疗的肿瘤或其他组织内。在本实施方式中，其他活性剂通常将通过与给予NTP肽不同的途径给予。这种实施方式的一个示例是将含有肽的晶片植入待治疗的肿瘤或其他组织中，并通过口服给予其他活性剂。晶片随时间释放治疗剂量的NTP肽到组织中。或者或此外，组合物可以通过植入已吸附了NTP肽的膜、海绵或其它合适材料到受影响区域而局部给予。在使用植入装置的情况下，可将装置植入任何合适的组织或器官中，并且肽的递送可由装置直接进行，通过推注、或通过连续给予、或通过使用连续输注的导管。
另一种给药方法是将NTP肽编码基因的一个或多个拷贝引入被靶向的细胞中，并且如果必要的话，诱导基因的拷贝开始在细胞内产生肽。在本实施方式中，其他活性剂通常将通过与给予NTP肽不同的途径给予。可以应用基因治疗的一种方式是使用编码NTP肽的基因(编码肽(或其片段，变体，同源物或衍生物)的基因组DNA，cDNA和/或合成DNA)，其可以可操作地连接到组成型或诱导型启动子以形成基因治疗DNA构建体。启动子可以与内源性肽编码基因同源或异源，只要其在将插入构建体的细胞或组织类型中有活性即可。基因治疗DNA构建体的其他组分可以根据需要任选地包括：设计用于位点特异性整合的DNA分子(例如用于同源重组的内源侧翼序列)，组织特异性启动子，增强子或沉默子，能够相对于亲本细胞提供选择性优势的DNA分子，用作标记以鉴定转化细胞的DNA分子，负选择系统，细胞特异性结合剂(例如用于细胞靶向)细胞特异性内化因子，和转录因子以通过载体增强表达，以及能够实现载体制造的因子。
体内或离体递送基因至细胞或组织的方法包括(但不限于)直接注射裸DNA，弹道法，脂质体介导的转移，受体介导的转移(配体-DNA复合物)，电穿孔和磷酸钙沉淀。参见美国专利号4,970,154、WO 96/40958、美国专利号5,679,559、美国专利号5,676,954和美国专利号5,593,875,，其每个的公开内容通过引用整体并入本文。它们还包括使用病毒载体如逆转录病毒，腺病毒，腺伴随病毒，痘病毒，慢病毒，乳头瘤病毒或单纯疱疹病毒，使用DNA-蛋白偶联物和使用脂质体。基因治疗载体的使用描述于例如美国专利号5,672,344、美国专利号5,399,346、美国专利号5,631,236、和美国专利号5,635,399，其每个的公开内容通过引用整体并入本文。
编码NTP肽的基因可以使用例如本文描述的那些方法通过向患者植入已离体基因工程化的某些细胞来递送，以表达和分泌NTP肽或其片段、变体、同源物或衍生物。这样的细胞可以是动物或人类细胞，并且可以来源于患者自身的组织或来源于人或非人的其他来源。任选地，细胞可以是永生的或是干细胞。然而，为了减少免疫响应的机会，优选将细胞包封以避免周围组织的浸润。封装材料通常是生物相容性的半渗透性聚合物外壳或膜，其允许释放蛋白质产物但防止细胞被患者的免疫系统或来自周围组织的其他有害因素所破坏。用于细胞膜包封的方法是本领域技术人员熟悉的，并且可以在不需要过度实验的情况下完成包封细胞的制备以及它们向患者体内的植入。参见，例如，美国专利号4,892,538、5,011,472和5,106,627，其每个的公开内容通过引用整体并入本文。在PCT WO 91/10425中描述了用于包封活细胞的系统。用于配制各种其它持续或控制递送手段(例如脂质体运载体，生物可溶蚀颗粒或珠)的技术本领域技术人员已知并描述于例如美国专利号5,653,975，其公开内容通过引用整体并入本文。有或没有包封的细胞可以被植入到患者的合适的身体组织或器官中。
特别优选对需要通过给予实施方式的一个或多个NTP肽和其他活性剂以去除或破坏细胞的病症进行治疗的方法的实施方式，并且待去除或破坏的细胞的是淋巴组织。其他优选的实施方式包括治疗需要去除或破坏细胞的病症，例如选自下述的任一种：单独或组合的扁桃体肥大，前列腺增生，血管疾病(动脉粥样硬化或动脉硬化)，痔疮，静脉曲张，牛皮癣，湿疹，皮肤病和组织的美容修饰。其他可治疗的病症包括动脉或置入或植入动脉中的支架的狭窄、再狭窄、闭塞或阻塞。在优选实施方式中，可以治疗的合适的组织包括皮肤，眼睛，耳朵，鼻子，喉咙，口腔，肌肉，结缔组织，头发和乳房。
根据实施方式治疗的其他优选的病症包括选自下述的那些：炎症性疾病，自身免疫性疾病，代谢性疾病，遗传/遗传性疾病，创伤性疾病或身体损伤，营养缺乏性疾病，感染性疾病，淀粉样蛋白病，纤维化疾病，贮积病，先天性畸形，酶缺乏症，中毒，遗毒，环境疾病，放射性疾病，内分泌疾病，退行性疾病和机械性疾病。在另一个优选的实施方式中，所述肽与选自抗体、抗体片段和抗体样结合分子的分子偶联、连接或结合，其中所述分子对结合肿瘤或其他靶标具有比结合其他细胞更高的亲和力。在另一个实施方式中，所述肽是由肽和选自抗体、抗体片段和抗体样结合分子的分子组成的单个新克隆重组分子的一部分，其中所述分子对结合肿瘤或其他目标相比结合其他细胞具有更高的亲和力。
在某些实施方式中，本发明提供治疗BPH的方法，其包括给予治疗有效量的NTP肽，特别是包含SEQ ID NO.66(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)中氨基酸序列的分离肽，并与选自下述的至少一种活性剂组合：(1)5α-还原酶抑制剂和/或抗雌激素剂，(2)5α-还原酶抑制剂和/或芳香酶抑制剂，(3)5α-还原酶抑制剂和/或17β-HSD抑制剂，(4)5α-还原酶抑制剂、抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，(5)5α-还原酶抑制剂，抗雌激素剂和17β-HSD抑制剂，(6)5α-还原酶抑制剂，芳香酶抑制剂、抗雌激素剂和17β-HSD抑制剂，(7)5α-还原酶抑制剂，抗雄激素剂和抗雌激素剂，(8)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂和芳香酶抑制剂，(9)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂和17β-HSD抑制剂，(10)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂、抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，(11)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(12)5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素剂和17β-HSD抑制剂，(13)17β-HSD抑制剂和抗雌激素剂，(14)17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(15)17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素剂，(16)17β-HSD抑制剂，抗雄激素剂和抗雌激素剂，(17)17β-HSD抑制剂、抗雄激素剂和芳香酶抑制剂，(18)17β-HSD抑制剂、抗雄激素剂、抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，(19)抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，以及(20)抗雌激素剂、芳香酶抑制剂和抗雄激素剂，(21)LHRH激动剂或拮抗剂、5α还原酶抑制剂和抗雌激素剂，(22)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂和芳香酶抑制剂，(23)LHRH激动剂或拮抗剂、5α还原酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(24)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素药和芳香酶抑制剂，(25)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雌激素药和17β-HSD抑制剂，(26)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、芳香酶抑制剂、抗雌激素药和17β-HSD抑制剂，(27)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂和抗雌激素剂，(28)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂和芳香酶抑制剂，(29)LHRH激动剂或拮抗剂，5α-还原酶抑制剂、抗雄激素和17β-HSD抑制剂，(30)LHRH激动剂或拮抗剂，5α-还原酶抑制剂、抗雄激素、抗雌激素药和芳香酶抑制剂，(31)LHRH激动剂或拮抗剂，5a-还原酶抑制剂、抗雄激素剂、芳香酶抑制剂和17β-HSD抑制剂，(32)LHRH激动剂或拮抗剂、5α-还原酶抑制剂、抗雄激素剂，芳香酶抑制剂，抗雌激素剂和17β-HSD抑制剂，(33)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和抗雌激素剂，(34)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂和芳香酶抑制剂，(35)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、芳香酶抑制剂和抗雌激素剂，(36)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素剂和抗雌激素剂，(37)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素剂和芳香酶抑制剂，(38)LHRH激动剂或拮抗剂、17β-HSD抑制剂、抗雄激素剂、抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，(39)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素剂和芳香酶抑制剂，和(40)LHRH激动剂或拮抗剂、抗雌激素剂、芳香酶抑制剂和抗雄激素剂。
提供以下实施例来说明本发明的实施方式。然而，应该理解的是，实施方式不限于这些实施例中描述的具体病症或细节。在整个说明书中，对包括美国专利在内的公开可用文件的任何和全部引用都被具体纳入作为参考。特别地，这些实施方式通过引用明确地纳入下述未决的美国专利申请公开中所含的实施例：2003/0054990(现已放弃)；2007/0237780(现已放弃)；2003/0054990(现在的美国专利号7,172,893)；2003/0096350(现在的美国专利号6,924,266)；2003/0096756(现在的美国专利号7,192,929)；2003/0109437(现在的美国专利号7,241,738)；2003/0166569(现在的美国专利号7,317,077)；和2005/0032704(现在的美国专利号7,408,021)，其各揭示了其中指定的某些肽是在正常啮齿动物肌肉组织、皮下结缔组织、真皮和其他组织中引起体内细胞死亡的有效试剂。
实施例1
在一项研究中，97名患者之前有或者没有接受常规的良性前列腺增生(BPH)口服药物治疗，患者接受氨基酸序列为Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu的特定肽(下文所述“药物(DRUG)”)(n＝61)或仅载剂(安慰剂)(n＝36)的双盲单次注射，并临床随访2-5年。患有BPH的患者在超声引导下由泌尿科医师在办公室环境下在双盲条件下给予下述的前列腺内静脉注射：a)在pH 7.2的磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)中的DRUG，或b)仅PBS。患者随访2～5年，定期进行体格检查、实验室检查和症状评估。接受a)DRUG并随后还接受用于治疗BPH的常规口服药物(包括例如坦索罗辛，特拉唑嗪，多沙唑嗪，西洛多辛等的α阻滞剂或5-α还原酶抑制剂如非那雄胺，度他雄胺或5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂如他达拉非，或它们的组合)和患者与b)仅接受载剂(PBS)注射并随后接受如上a)中所述的常规口服药物的患者进行比较。
症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)来测量，IPSS是用于评估前列腺症状改善或恶化的量化评分。IPSS量化如下：1)排尿后不完全的膀胱排空；2)尿频；3)排尿时停止和开始；4)急需小便；5)尿流无力；6)排尿时需要推挤或拉紧；7)晚上睡觉后需要小便(夜尿)。与基线IPSS的差异在使用DRUG加常规口服药物的患者与单独使用PBS加常规口服BPH药物的患者中进行比较。出乎意料的是，先前单次注射DRUG的对象的口服药物结果优于先前仅注射载剂的对象的口服药物结果。结果总结在表4中。
表4
*p<.01与仅口服药物的4分期望平均改善相比。
根据本实施例，与对照相比，使用NTP肽与其他口服药物在治疗BPH中的组合用途提供了约40％的平均IPSS改善。
实施例2
在一项研究中，30名以前没有服用过常规批准的BPH口服药物的患者接受了双盲单次注射DRUG治疗(n＝21)或仅载剂(安慰剂)(n＝9)，随后临床随访2-5年。来自以上药物和仅载剂安慰剂组的患者先前没有接受过常规口服药物并且随后继续使用常规口服药物，对他们对常规口服BPH药物的响应进行评估。令人惊讶的是，常规口服BPH药物后，接受DRUG治疗的患者的BPH症状响应的改善明显优于预期(症状评分平均改善7.48分，相比仅常规口服药物治疗改善的3-5分，p<.02)，而仅载剂安慰剂的患者没有上述情况(平均改善2.33分，相比预期改善的3-5分)。
根据本实施例，与对照相比，使用NTP肽与其他口服药物联合在治疗BPH中的用途提供了约221％的平均IPSS改善。
实施例3
在另一项研究中，BPH患者在超声引导下由泌尿科医师在双盲条件下单独给予仅PBS pH 7.2载剂静脉内注射。患者随访1～3年，定期进行体格检查、实验室检查和症状评估。接受仅PBS载剂的患者和随后还接受用于治疗BPH的常规口服药物(例如α阻断剂)的患者在接受磷酸盐缓冲盐水pH 7.2(“PBS”)中的药物的额外注射之前和之后进行评估。症状评估通过国际前列腺症状评分(IPSS)来测量，IPSS是用于评估前列腺症状改善或恶化的量化评分。对于使用盲法仅PBS加常规口服药物的患者和口服药物的相同患者在与DRUG交叉后的结果，比较与基线IPSS的差异。令人惊讶的是，口服BPH药物的对象在注射DRUG后的症状结果比仅盲法接受载剂的相同对象的先前结果好得多。结果总结在表5中。
表5
*p<.05与仅口服药物的4点期望平均相比。
根据本实施例，与对照相比，使用NTP肽与其他口服药物联合在治疗BPH中的用途提供了约110％的平均IPSS改善。
实施例4
973名以前从未接受BPH手术的患者(包括所有类型的手术治疗，如经尿道前列腺切除术，激光消融术，微波，针头消融术和其他微创手术治疗)接受DRUG或仅载剂(安慰剂)的双盲单次注射，并临床随访2-5年。然后，对来自上述药物和仅载体安慰剂组的先前未经历BPH手术治疗并随后接受BPH手术治疗(N＝58)的所有患者(N＝58)，评估其对手术的响应。令人惊讶的是，接受DRUG治疗的患者(n＝31)的手术后BPH症状响应的改善明显好于预期(症状评分平均改善15.3分，相比预期改善的10分，p＝0.001)，而仅载剂(安慰剂)的患者(n＝27)没有上述情况(平均改善10.8分，相比预期改善10分)。
根据本实施例，在手术治疗之前使用NTP肽与对照相比提供了约142％的平均IPSS改善。
前述实施例的结果说明NTP肽与一种或多种其他活性剂联合用于治疗具有需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的哺乳动物的意想不到的优越效果。对本领域的技术人员而言显而易见的是，可以对本实施方式的方法和组合物进行各种修改和变动而不偏离本实施方式的精神和范围。
序列表
<110> P·艾弗白克（AVERBACK, PAUL）
<120> 用于治疗需要去除或破坏不需要的细胞增殖的病症的联合组合物
<130> 063307-0438116
<140> 14/738,551
<141> 2015-06-12
<160> 118
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 1
Met Glu Phe Ser Leu Leu Leu Pro Arg Leu Glu Cys Asn Gly Ala
1 5 10 15
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<211> 15
<212> PRT
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 5
Tyr Phe Phe Leu Val Glu Met Glu Phe Leu His
1 5 10
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 6
Val Gly Gln Ala Gly Leu Glu Leu Pro Thr Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 7
Asp Asp Pro Ser Val Ser Ala Ser Gln Ser Ala Arg Tyr Arg Thr Gly
1 5 10 15
His
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 8
Thr Gly His His Ala Arg Leu Cys Leu Ala Asn Phe Cys Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 9
Ala Asn Phe Cys Gly Arg Asn Arg Val Ser Leu Met Cys Pro Ser Trp
1 5 10 15
Ser
<210> 10
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 10
Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 11
Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg
1 5 10 15
Arg
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 12
Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 13
Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 14
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 14
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu
1 5 10
<210> 15
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 15
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu
<210> 16
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 16
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro
20
<210> 17
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的多肽
<400> 17
Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg Ala Ala Val Pro Gly Leu Phe Ile Leu
1 5 10 15
Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val Gln
20 25 30
Trp Cys Asp His Ser Ser
35
<210> 18
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 18
Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 19
Phe Ile Leu Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu
1 5 10
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 20
Phe Ile Leu Phe Phe Leu Arg His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp
1 5 10 15
Glu Val Gln Trp Cys Asp His Ser Ser
20 25
<210> 21
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 21
His Arg Cys Pro Thr Leu Thr Gln Asp Glu Val Gln Trp Cys Asp His
1 5 10 15
Ser Ser Leu Gln Pro Ser Thr Pro Glu Ile Lys His Pro
20 25
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 22
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met His
1 5 10
<210> 23
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 23
Asp Met His His Tyr Thr Trp Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe
1 5 10 15
Leu Arg
<210> 24
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 24
His Tyr Thr Trp Leu Ile Phe Ile Phe Ile Phe Asn Phe Leu Arg Gln
1 5 10 15
Ser Leu Asn
<210> 25
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的多肽
<400> 25
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Arg Asn Leu Gly Ser Leu Gln
1 5 10 15
Pro Leu Pro Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser
20 25 30
Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe
35 40 45
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 26
Pro Gly Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
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<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 27
Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg
1 5 10 15
Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe
20
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 28
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 29
Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 30
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 31
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 32
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Pro Pro Arg Leu Ala Asn Phe Phe Val
1 5 10 15
Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met
20 25
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 33
Phe Val Phe Leu Val Glu Met Gly Phe Thr Met
1 5 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 34
Met Gly Phe Thr Met Phe Ala Arg Leu Ile Leu Ile Ser Gly Pro Cys
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Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser
20
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 35
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1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 36
Asp Leu Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val Ser
1 5 10 15
His
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<211> 17
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 37
Gly Val Ser His His Ala Arg Leu Ile Phe Asn Phe Cys Leu Phe Glu
1 5 10 15
Met
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<211> 10
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 38
Asn Phe Cys Leu Phe Glu Met Glu Ser His
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<210> 39
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的多肽
<400> 39
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp Pro Asn Leu Gly Ser Leu Gln
1 5 10 15
Pro Leu Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser
20 25 30
Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro His Pro Ala Asn Phe
35 40 45
<210> 40
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 40
Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Gly
<210> 41
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 41
Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His
1 5 10
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 42
Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 43
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的多肽
<400> 43
Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His Leu Pro Pro His Pro Ala Asn Phe Cys
1 5 10 15
Ile Phe Ile Arg Gly Gly Val Ser Pro Tyr Leu Ser Gly Trp Ser Gln
20 25 30
Thr Pro Asp Leu Arg
35
<210> 44
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 44
Pro Gly Phe Phe Lys Leu Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Arg Arg
20
<210> 45
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 45
Pro Glu Leu Lys Gln Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp
1 5 10 15
Tyr Arg Arg
<210> 46
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 46
Pro Pro Gly Leu Lys Arg Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp
1 5 10 15
Asp Tyr Gly
<210> 47
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 47
Phe Ser Cys Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Gly His
1 5 10
<210> 48
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 48
Ser Thr Cys Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 49
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 49
Phe Ser Cys Pro Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 50
Leu Ser Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 51
Leu Ser Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 52
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 52
Ser Leu Leu Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5 10
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 53
Leu Pro Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 54
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 55
Ser Ser Trp Asp Tyr
1 5
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 56
Ser Ser Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Leu Phe Phe Leu
1 5 10
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 57
Trp Asp Tyr Arg Arg Phe Ile Phe Asn Phe Leu
1 5 10
<210> 58
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 58
Phe Asn Phe Cys Leu Phe
1 5
<210> 59
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 59
Phe Ile Phe Asn Phe Leu
1 5
<210> 60
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 60
Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly Ile Thr Gly Met
1 5 10
<210> 61
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 61
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Val Ala Gly Thr Lys Asp Met
1 5 10
<210> 62
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 62
Pro Ala Ser Ala Ser Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val
1 5 10
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 63
Pro Ala Ser Ala Ser Pro Val Ala Gly
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 64
Phe Phe Leu Val Glu Met
1 5
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 65
Ser Val Thr Gln Ala Gly Val Gln Trp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 66
Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys
1 5 10 15
Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 67
Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 68
Gly Asp His Gly Arg Pro Asn Leu Ser Arg Leu Lys Leu Ala Ile Lys
1 5 10 15
Tyr Glu Val Lys Lys Met
20
<210> 69
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 69
Gln Gln Ser Ile Ala Val Lys Phe Leu Ala Val Phe Gly Val Ser Ile
1 5 10 15
<210> 70
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 70
Gly Leu Leu Phe Pro Val Phe Ser Val Cys Tyr Leu Ile Ala Pro Lys
1 5 10 15
Ser Pro Leu Gly Leu
20
<210> 71
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 71
Met Met Val Cys Trp Asn Arg Phe Gly Lys Trp Val Tyr Phe Ile
1 5 10 15
<210> 72
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 72
Ser Ala Ile Phe Asn Phe Gly Pro Arg Tyr Leu Tyr His Gly Val
1 5 10 15
<210> 73
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 73
Pro Phe Tyr Phe Leu Ile Leu Val Arg Ile Ile Ser Phe Leu Ile
1 5 10 15
<210> 74
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 74
Gly Asp Met Glu Asp Val Leu Leu Asn Cys Thr Leu Leu Lys Arg
1 5 10 15
<210> 75
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 75
Ser Ser Arg Phe Arg Phe Trp Gly Ala Leu Val Cys Ser Met Asp
1 5 10 15
<210> 76
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 76
Ser Cys Arg Phe Ser Arg Val Ala Val Thr Tyr Arg Phe Ile Thr
1 5 10 15
<210> 77
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 77
Leu Leu Asn Ile Pro Ser Pro Ala Val Trp Met Ala Arg Asn Thr
1 5 10 15
<210> 78
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 78
Met Ala Gln Ser Arg Leu Thr Ala Thr Ser Ala Ser Arg Val Gln
1 5 10 15
<210> 79
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 79
Ala Ile Leu Leu Ser Gln Pro Pro Lys Gln Leu Gly Leu Arg Ala
1 5 10 15
<210> 80
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 80
Pro Ala Asn Thr Pro Leu Ile Phe Val Phe Ser Leu Glu Ala Gly
1 5 10 15
<210> 81
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 81
Phe His His Ile Cys Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Thr Ser Gly
1 5 10 15
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 82
Asp Pro Pro Ala Ser Ala Phe Gln Ser Ala Gly Ile Thr Gly Val
1 5 10 15
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<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 83
Ser His Leu Thr Gln Pro Ala Asn Leu Asp Lys Lys Ile Cys Ser
1 5 10 15
<210> 84
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 84
Asn Gly Gly Ser Cys Tyr Val Ala Gln Ala Gly Leu Lys Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ser Cys Asn Pro Ser Lys
20
<210> 85
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 85
Met Trp Thr Leu Lys Ser Ser Leu Val Leu Leu Leu Cys Leu Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 86
Cys Ser Tyr Ala Phe Met Phe Ser Ser Leu Arg Gln Lys Thr Ser
1 5 10 15
<210> 87
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 87
Glu Pro Gln Gly Lys Val Pro Cys Gly Glu His Phe Arg Ile Arg
1 5 10 15
<210> 88
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列描述：合成的肽
<400> 88
Gln Asn Leu Pro Glu His Thr Gln Gly Trp Leu Gly Ser Lys Trp
1 5 10 15
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<220>
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Leu Trp Leu Leu Phe Ala Val Val Pro Phe Val Ile Leu Lys Cys
1 5 10 15
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<220>
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Leu His His Ile Asp Ser Ile Ser Gly Val Ser Gly Lys Arg Met Phe
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Lys Ile Ala His Cys Ile Leu Phe Asn Gln Pro His Ser Pro Arg
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Ser Asn Ser His Ser His Pro Asn Pro Leu Lys Leu His Arg Arg
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Ser His Ser His Asn Arg Pro Arg Ala Tyr Ile Leu Ile Thr Ile
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Leu Pro Ser Lys Leu Lys Leu Arg Thr His Ser Gln Ser His His
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Ser Ser Ser Leu Gly Leu Pro Lys Cys Trp Asp Tyr Arg His Glu
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Thr Phe Lys Gln His Ile Glu Leu Arg Gln Lys Ile Ser Ile Val
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Pro Arg Lys Leu Cys Cys Met Gly Pro Val Cys Pro Val Lys Ile
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Ala Leu Leu Thr Ile Asn Gly His Cys Thr Trp Leu Pro Ala Ser
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Met Phe Val Phe Cys Leu Ile Leu Asn Arg Glu Lys Ile Lys Gly
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Gly Asn Ser Ser Phe Phe Leu Leu Ser Phe Phe Phe Ser Phe Gln
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Asn Cys Cys Gln Cys Phe Gln Cys Arg Thr Thr Glu Gly Tyr Ala
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Trp Phe Tyr Ser Phe Asp Thr
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Met Glu Pro His Thr Val Ala Gln Ala Gly Val Pro Gln His Asp
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Leu Gly Ser Leu Gln Ser Leu Leu Pro Arg Phe Lys Arg Phe Ser
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Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile
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Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu
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Val Leu Ser Arg Ile Lys
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Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile Lys Arg Cys Leu
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Ile Asp Gln Gln Val Leu Ser Arg Ile Lys Leu Glu Ile
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<223> 人工序列描述：合成的6xHis标签
<400> 118
His His His His His His
1 5

Claims (18)

1.一种用于除去或破坏不需要的细胞增殖的治疗哺乳动物的方法，包括向所述哺乳动物给予治疗有效量的分离肽并与至少一种活性剂联合，所述分离肽包含SEQ ID NO.66中的氨基酸序列(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)，所述至少一种活性剂能够治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状，减少、阻断、抑制治疗和/或杀死哺乳动物中不需要的细胞增殖，其中所述方法去除或破坏不需要的细胞增殖。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括给予治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽以及运载体。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种活性剂能够治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状，减少、阻断、抑制治疗和/或杀死哺乳动物中不需要的细胞增殖，所述活性剂是选自下述的一种或多种的试剂：坦索罗辛、非那雄胺、特拉唑嗪、多沙唑嗪、哌唑嗪、他达拉非、阿夫唑嗪、西洛多辛、度他雄胺、度他雄胺和坦索罗辛的组合，以及它们的混合物和组合。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述至少一种活性剂能够治疗哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状，减少、阻断、抑制治疗和/或杀死哺乳动物中不需要的细胞增殖，所述活性剂是选自下述的一种或多种的试剂：坦索罗辛、非那雄胺、特拉唑嗪、多沙唑嗪、他达拉非、度他雄胺、度他雄胺和坦索罗辛的组合，以及它们的混合物和组合。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述方法包括给予治疗有效量的至少一种如权利要求1所述的肽以及侧接权利要求1的分离肽的N-末端或C-末端的至少一个和多达25个其他氨基酸。
6.权利要求1的方法，其中所述肽通过选自下述的方法给予：口服、皮下、皮内、鼻内、静脉内、肌内、鞘内、鼻内、瘤内、局部和透皮。
7.如权利要求1所述的方法，其中，在用选自下述的治疗对哺乳动物进行治疗之前、期间或之后于该哺乳动物上进行所述方法：手术切除、移植、移接、化学疗法、免疫疗法、疫苗接种、热疗或电疗消融、冷冻疗法、激光疗法、光疗法、基因疗法和辐射。
8.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是选自下述的组织的良性或恶性肿瘤：肺、乳腺、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、鼻窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心脏、脾、唾液腺、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝脏、胆囊、眼睛、耳朵、鼻子、喉咙、扁桃腺、口腔、和淋巴结及淋巴系统。
9.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是选自下述的组织的增生、肥大或过度生长：肺、乳腺、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、鼻窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心脏、脾、唾液腺、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝脏、胆囊、眼睛、耳朵、鼻子、喉咙、扁桃腺、口腔、和淋巴结及淋巴系统。
10.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是选自下述的病毒性、细菌性或寄生虫改变的组织：肺、乳腺、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、鼻窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心脏、脾、唾液腺、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝脏、胆囊、眼睛、耳朵、鼻子、喉咙、扁桃腺、口腔、和淋巴结及淋巴系统。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是选自下述的组织的畸形：肺、乳腺、胃、胰腺、前列腺、膀胱、骨、卵巢、皮肤、肾、鼻窦、结肠、肠、胃、直肠、食道、心脏、脾、唾液腺、血液、脑及其覆盖物、脊髓及其覆盖物、肌肉、结缔组织、肾上腺、甲状旁腺、甲状腺、子宫、睾丸、垂体、生殖器官、肝脏、胆囊、眼睛、耳朵、鼻子、喉咙、扁桃腺、口腔、和淋巴结及淋巴系统。
12.如权利要求1所述的方法，其中所述病症是良性前列腺增生(BPH)。
13.如权利要求1所述的方法，其中，与通过用安慰剂联合其他活性剂治疗哺乳动物所发现的改善相比，所述方法提供约15％至约150％的平均IPSS(国际前列腺症状评分)改善，所述其他活性剂能够治疗减少、阻断、抑制治疗和/或杀死哺乳动物中不需要的细胞增殖的症状。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述改善为约40％。
15.如权利要求1所述的方法，其中所述至少一种活性剂与所述至少一种分离肽分开给予或在不同的时间给予。
16.如权利要求15的方法，其中所述至少一种分离肽通过选自下述的方法给予：静脉内、肌内、鞘内、鼻内、瘤内、局部和透皮，并且所述至少一种活性剂经口服给予。
17.一种用于去除或破坏不需要的细胞增殖的治疗哺乳动物的方法，该方法包括向哺乳动物给予治疗有效量的分离肽，所述分离肽包含SEQ ID NO:66中的氨基酸序列(Ile-Asp-Gln-Gln-Val-Leu-Ser-Arg-Ile-Lys-Leu-Glu-Ile-Lys-Arg-Cys-Leu)，然后手术处理所述不需要的细胞增殖。
18.如权利要求17所述的方法，其中，与用安慰剂联合手术处理治疗哺乳动物所发现的改善相比，所述方法提供约15％至约150％的平均IPSS(国际前列腺症状评分)改善。
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