JP2009502169A - 精子細胞エキステンダー中のタンパク質含量を低下させるための方法および装置 - Google Patents
精子細胞エキステンダー中のタンパク質含量を低下させるための方法および装置 Download PDFInfo
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Abstract
Description
精子細胞エキステンダーは、精子細胞の研究を必要とする様々な生物学分野で、一般に用いることができる。例えば、精子細胞エキステンダーを広範に使用できる一学問分野は、人工授精の分野である。自然授精は雄から雌への直接授精を含むであろうが、人工授精は一般的に、雄から精子細胞を収集すること、それらの本来の環境から取り出されたそのような精子細胞の人為操作をある程度実施すること、次に、操作した精子細胞を雌に挿入することを含むことができる。人為操作の正確な程度は、特定の用途の正確な性質に従って異なることができる。例えば、一部の人為操作は、単に、おそらく複数の雌の動物との複数の授精事象のために、収集した精子試料を複数の分量に分割することを含むことができる。しかし、他の用途は、程度のより強い人為操作を必要とするであろう。
卵黄を含むエキステンダーのB分画を含む選別精子を収集および処理するための1つの可能な手法は、以下の通りでよい。Tris−Aキャッチ媒体(2ml)を、50mlファルコンチューブに置くことができる。選別精子を、合計12.5mlの選別量について約1時間かけて、50mlファルコンチューブに収集することができる。この分量は、グリセロール非含有であることができ、A分画と呼ぶことができる。この実施例のA分画内の卵黄の割合は、3.2%[(2ml「キャッチ」)/(12.5ml総容積)×(20%卵黄「キャッチ」)=3.2%)]である。3.2%卵黄混合物は、およそ90分にわたって5℃に冷やすことができる。冷却期間の後、等量のグリセロール含有20%卵黄エキステンダー(B分画;12%グリセロール)を、およそ15分間隔で2つの等分割として段階的に加えることができる。この実施例で次に11.6%卵黄ABエキステンダー[((12.5ml A分画)×(3.2%卵黄)+(12.5ml B分画)×(20%卵黄))/25ml総容積=11.6%卵黄]に含まれる冷却選別精子は、濃縮のために遠心分離することができる。グリセロール含有エキステンダーを冷却精子に加えるこの方法は、精子を含まない液滴がおそらく選別過程で収集され、精子ペレットがあまりに多量の状態で残された場合に起こるであろう精子ペレットの過維持促進を回避することができ、最終グリセロール分が常に6%であることを確実にすることができる。上清の除去の後、200μlの精子ペレットが残るであろう。同じ雄からの精子ペレットをプールし、総容積を重量で決定することができる。選別精子総数は、おそらく複数の血球計数器カウントにより決定することができ、ペレットの精子濃度は、所望の冷凍濃度に、おそらく20%卵黄ABエキステンダーで調節することができる。
さらなる実施例を、以下の通り報告することができる。6頭の雄牛から得られた初回射精からの精子を供試し、試験は3回反復した。この試験のための精子は選別されなかったが、Hoechst33342で染色し、選別時に起こるような極端な希釈を行った。目的は、卵黄を加えるかまたは加えずにグリセロール含有エキステンダー(B分画)を投与された精子の、解凍後運動性を比較することであった。さらなる目的は、選別精子に必要とされる最適グリセロール含量を特定することであった。したがって、3、4、5および6%の最終グリセロール含量を、0および20%の卵黄を含むB分画エキステンダーで試験した。0.25mlストロー内で冷凍された精子を37℃水浴上で30秒間解凍し、37℃でインキュベートした。総運動性の視覚的推定値は、インキュベーションから30分および120分後に、処理に盲目の2人の観察者が判定した。
他の実施例を、以下の通り報告することができる。目的は、0%卵黄グリセロール(12%)含有エキステンダーで処理したX染色体を含む精子で授精させたホルスタイン雌牛における30日妊娠率を、20%卵黄を含むそれと比較することであった。
Claims (235)
- 選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法であって、
複数の精子細胞を得る工程と、
該複数の精子細胞を選別ストレスにさらす工程と、
所望の特性について該複数の精子細胞を選択する工程と、
タンパク質含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程と、
該第1の維持促進された精子細胞混合物を冷却して、第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物を生成する工程と、
タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程と、
該第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を冷凍する工程と、
を含む、方法。 - 前記複数の精子細胞を得る工程が複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記複数の哺乳動物精子細胞を得る工程が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞、およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項2に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が、該複数の精子細胞を選別する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記複数の精子細胞を選別する前記工程が、該複数の精子細胞をフローサイトメトリーによって選別する工程を含む、請求項4に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が、該複数の精子細胞を性特性について選択する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記複数の精子細胞を性特性について選択する前記工程が、該複数の精子細胞をX染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択する工程を含む、請求項6に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、リポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項8に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- リポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、卵黄含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項9に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄、および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項10に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、約20%の卵黄を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項11に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、卵黄含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄、約3.2%を超える卵黄、および約6.4%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項12に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、卵黄含有精子細胞エキステンダーを該複数の選択された精子細胞に加えて、約3.2%の卵黄を有する第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項10に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記複数の選択された精子細胞に加えて第1の維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択されるタンパク質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第1の維持促進された精子細胞混合物を冷却して第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物を生成する前記工程が、該第1の維持促進された精子細胞混合物を約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度へ冷却する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第1の維持促進された精子細胞混合物を冷却して第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物を生成する前記工程が、該第1の維持促進された精子細胞混合物を約5℃の温度に冷却する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、グリセロール含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- グリセロール含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を有するグリセロール含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項18に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- グリセロール含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、約6%のグリセロールを有するグリセロール含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項18に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物の量と等しい量を有するタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物の量と等しい量を有する前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを2段階で加える工程をさらに含む、請求項21に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、滅菌凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項24に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項24に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項24に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、実質的に精子細胞圧縮粒子を含まない凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項24に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、低粘度凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項24に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて、約0.4%を超える卵黄、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄および約3.2%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する前記工程が、タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該第1の冷却され維持促進された精子細胞混合物に加えて、約1.6%の卵黄を有する第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を形成する工程を含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を未浄化状態で維持する工程をさらに含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記未浄化の第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物を遠心分離にかける工程をさらに含む、請求項32に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記遠心分離した未浄化の第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の一部をデカントする工程をさらに含む、請求項33に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する工程をさらに含む、請求項1に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、タンパク質含有精子細胞エキステンダーを該第2の維持促進された精子細胞混合物に加える工程を含む、請求項35に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを該第2の維持促進された精子細胞混合物に加える工程を含む、請求項36に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、リポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを該第2の維持促進された精子細胞混合物に加える工程を含む、請求項37に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- リポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、卵黄含有精子細胞エキステンダーを該第2の維持促進された精子細胞混合物に加える工程を含む、請求項38に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄、および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項39に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、約20%の卵黄を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項39に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を有するタンパク質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項36に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記第2の維持促進された精子細胞混合物に加える前記工程が、タンパク質含有精子細胞エキステンダーを、約6%のグリセロールを有する該第2の維持促進された精子細胞混合物に加える工程を含む、請求項36に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、該第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する工程を含む、請求項35に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、該第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を、ウシの冷凍前精子濃度、ウマの冷凍前精子濃度、ブタの冷凍前精子濃度、ヒツジの冷凍前精子濃度、シカの冷凍前精子濃度、イヌの冷凍前精子濃度およびイルカ科の精子濃度からなる群から選択される冷凍前精子濃度に調節する工程を含む、請求項44に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、該第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を、1ミリリットルにつき約100,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約50,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約40,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約30,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約20,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約15,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約10,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約5,000,000未満の数の精子細胞および1ミリリットルにつき約2,000,000未満の数の精子細胞からなる群から選択される精子濃度に調節する工程を含む、請求項44に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、該第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を1ミリリットルにつき約10,000,000の数の精子細胞に調節する工程を含む、請求項44に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約50%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約25%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約20%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約15%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約10%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約5%以内、および一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約1%以内からなる群から選択される該第2の維持促進された精子細胞混合物の冷凍前卵黄含量を確立する工程を含む、請求項35に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、および約10%未満の卵黄からなる群から選択される前記第2の維持促進された精子細胞混合物の冷凍前卵黄含量を確立する工程を含む、請求項35に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 前記第2の冷却され維持促進された精子細胞混合物の精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、該第2の維持促進された精子細胞混合物の、約16.5%の冷凍前卵黄含量を確立する工程を含む、請求項5に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を冷凍するための方法。
- 初期の混合物関係にある、所望の特性について選択される発生期の複数の精子細胞と、
初期の混合物関係にある発生期のタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分と、
初期の混合物関係にある発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分と、
初期の混合物関係にある発生期のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分と
を含む、初期の損傷した選別精子細胞の混合物。 - 所望の特性について選択される前記発生期の複数の精子細胞が、実質的に未結合の状態で前記初期混合物の少なくとも1つの成分の最も近くに位置する、所望の特性について選択される複数の精子細胞を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分の間に障壁のないゾーンをさらに含む、請求項52に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分が応答する誘導結合力をさらに含む、請求項53に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の複数の精子細胞が発生期の複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の複数の哺乳動物精子細胞が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞、およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される発生期の複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項55に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 所望の特性について選択される前記発生期の複数の精子細胞が発生期の複数の選別精子細胞を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の複数の選別精子細胞が、フローサイトメトリーによって選別される発生期の複数の選別精子細胞を含む、請求項57に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 所望の特性について選択される前記発生期の複数の精子細胞が、性特性について選択される発生期の複数の精子細胞を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 性特性について選択される前記発生期の複数の精子細胞が、X染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択される発生期の複数の精子細胞を含む、請求項59に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分が、実質的に未結合の状態で前記初期混合物の少なくとも1つの成分の最も近くに位置するタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分の間に障壁のないゾーンをさらに含む、請求項61に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分が応答する誘導結合力をさらに含む、請求項62に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分が無菌の発生期のタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が、実質的に未結合の状態で前記初期混合物の少なくとも1つの成分の最も近くに位置するタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分の間に障壁のないゾーンをさらに含む、請求項65に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分が応答する誘導結合力をさらに含む、請求項66に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分がグリセロール成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記グリセロール成分が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を含む、請求項68に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記グリセロール成分が約6%のグリセロールを含む、請求項68に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が無菌の発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が発生期の実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項72に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が発生期の遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項72に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が発生期の実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項72に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が、精子細胞圧縮粒子を実質的に有さない発生期の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項72に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期の低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が発生期の低粘度凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項72に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が、実質的に未結合の状態で前記初期混合物の少なくとも1つの成分の最も近くに位置するタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分の間に障壁のないゾーンをさらに含む、請求項78に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分および前記初期混合物の前記少なくとも1つの成分が応答する誘導結合力をさらに含む、請求項79に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分がリポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項81に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記リポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が卵黄含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項82に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記卵黄含有精子細胞エキステンダー成分が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を含む、請求項83に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記卵黄含有精子細胞エキステンダー成分が約20%の卵黄を含む、請求項83に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 約0.4%を超える卵黄、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄および約3.2%を超える卵黄からなる群から選択される前記初期混合物の卵黄含量をさらに含む、請求項83に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 約1.6%の前記初期混合物の卵黄含量をさらに含む、請求項83に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記初期混合物が未浄化初期混合物をさらに含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記初期混合物が冷温初期混合物をさらに含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記冷温初期混合物が、約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度の初期混合物を含む、請求項89に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記冷温初期混合物が約5℃の温度の初期混合物を含む、請求項89に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 前記発生期のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択されるタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項51に記載の初期の損傷した選別精子細胞の混合物。
- 複数の精子細胞を得る工程と、
該複数の精子細胞を選別ストレスにさらす工程と、
所望の特性について該複数の精子細胞を選択する工程と、
タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを提供する工程と、
タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程と、
該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する工程と、
該凍結保護物質含有遠心分離媒体を未浄化状態で維持する工程と、
選別ストレスを受けて所望の特性について選択された該複数の精子細胞を該未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて、未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する工程と、
該未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける工程と、
該遠心分離された未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体の一部をデカントする工程と
を含む、選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。 - 複数の精子細胞を得る前記工程が複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 複数の哺乳動物精子細胞を得る前記工程が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項94に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が、該複数の精子細胞を選別する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記複数の精子細胞を選別する前記工程が前記複数の精子細胞をフローサイトメトリーによって選別する工程を含む、請求項96に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が前記複数の精子細胞を性特性について選択する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記複数の精子細胞を性特性について選択する前記工程が、前記複数の精子細胞をX染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択する工程を含む、請求項98に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が無菌の精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が無菌の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程がタンパク質非含有グリセロール含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有グリセロール含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を有するタンパク質非含有グリセロール含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項101に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有グリセロール含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が約6%のグリセロールを有するタンパク質非含有グリセロール含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項101に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が精子細胞圧縮粒子を実質的に含まない凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が低粘度凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する前記工程が、該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量で加える工程を含む、請求項104に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量で加える前記工程が、該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量で2段階で加える工程を含む、請求項111に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する前記工程が、冷温で該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 冷温で前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する前記工程が、約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度で該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する工程を含む、請求項113に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 冷温で前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する前記工程が、約5℃の温度で該タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを該タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーと組み合わせて凍結保護物質含有遠心分離媒体を形成する工程を含む、請求項113に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程をさらに含み、該タンパク質含有精子細胞エキステンダーを前記凍結保護物質含有遠心分離媒体と組み合わせてタンパク質含有凍結保護物質含有遠心分離媒体を生成する工程をさらに含み、前記凍結保護物質含有遠心分離媒体を未浄化状態で維持する前記工程は、該タンパク質含有凍結保護物質含有遠心分離媒体を未浄化状態で維持する工程を含み、選別ストレスを受けて所望の特性について選択された前記複数の精子細胞を前記未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する前記工程が、選別ストレスを受けて所望の特性について選択された該複数の精子細胞を該未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する工程を含み、前記未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける前記工程が、該未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける工程を含み、前記遠心分離された未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体の一部をデカントする前記工程が、該遠心分離された未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体の一部をデカントする工程を含む、請求項93に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項116に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程がリポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項117に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- リポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が卵黄含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項118に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が約20%の卵黄を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 選別ストレスを受けて所望の特性について選択された前記複数の精子細胞を前記未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する前記工程が、選別ストレスを受けて所望の特性について選択された該複数の精子細胞を該未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて、約0.4%を超える卵黄、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄および約3.2%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 選別ストレスを受けて所望の特性について選択された前記複数の精子細胞を前記未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する前記工程が、選別ストレスを受けて所望の特性について選択された該複数の精子細胞を該未浄化凍結保護物質含有遠心分離媒体に加えて、約1.6%の卵黄を有する未浄化凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を形成する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける前記工程が、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較してわずかな卵黄の割合を有する未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較してわずかな卵黄の割合を有する前記未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離する前記工程が、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約50%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約25%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約10%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約5%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約4%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約3%未満、選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約2%未満および選別精子細胞を遠心分離する一般的な方法で利用される遠心分離媒体と比較して約1%未満からなる群から選択される卵黄の割合を有する該未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離する工程を含む、請求項124に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける前記工程が、約3%未満の卵黄を有する未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 前記未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離にかける前記工程が、グリセロールを含み、約11%未満の卵黄を有する未浄化タンパク質含有凍結保護物質含有精子細胞遠心分離媒体を遠心分離する工程を含む、請求項119に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- タンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する前記工程が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択されるタンパク質含有精子細胞エキステンダーを提供する工程を含む、請求項116に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を処理するための方法。
- 所望の特性について選択される複数の精子細胞と、
未浄化タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分と、
未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分と、
所望の特性について選択される該複数の精子細胞、該未浄化タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分および該未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が懸濁される未浄化遠心分離媒体と
を含む、損傷した選別精子細胞の処理媒体。 - 前記複数の精子細胞が複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記複数の哺乳動物精子細胞が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項130に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞が複数の選別精子細胞を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記複数の選別精子細胞がフローサイトメトリーによって選別される複数の選別精子細胞を含む、請求項132に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞が性特性について選択される複数の精子細胞を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 性特性について選択される前記複数の精子細胞が、X染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択される複数の精子細胞を含む、請求項134に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分が無菌の未浄化タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が無菌の未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分がグリセロール成分を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記グリセロール成分が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を含む、請求項139に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記グリセロール成分が約6%のグリセロールを含む、請求項139に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項141に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項141に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項141に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が、精子細胞圧縮粒子を実質的に有さない未浄化の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項141に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の低粘度凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項141に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化遠心分離媒体に懸濁される未浄化タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分をさらに含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項147に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化の動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化のリポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項148に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化のリポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が未浄化の卵黄含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項149に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化の卵黄含有精子細胞エキステンダー成分が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する未浄化の卵黄含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項150に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化の卵黄含有精子細胞エキステンダー成分が約20%の卵黄を有する未浄化の卵黄含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項150に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化遠心分離媒体が、約0.4%を超える卵黄、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄および約3.2%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する未浄化遠心分離媒体を含む、請求項150に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化遠心分離媒体が、約1.6%の卵黄を有する未浄化遠心分離媒体を含む、請求項150に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化遠心分離媒体が、グリセロールを含み、約11%未満の卵黄を有する未浄化遠心分離媒体を含む、請求項150に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択される未浄化のタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項147に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記未浄化遠心分離媒体が、冷温の未浄化遠心分離媒体を含む、請求項129に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記冷温未浄化遠心分離媒体が、約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度の未浄化遠心分離媒体を含む、請求項157に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 前記冷温の未浄化遠心分離媒体が、約5℃の温度の未浄化遠心分離媒体を含む、請求項157に記載の損傷した選別精子細胞の処理媒体。
- 複数の精子細胞を得る工程と、
該複数の精子細胞を選別ストレスにさらす工程と、
所望の特性について該複数の精子細胞を選択する工程と、
第1のタンパク質含量価を有するタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する工程と、
選別ストレスを受けて所望の特性について選択された該複数の精子細胞を、第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程と、
タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを、第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程と、
該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの総タンパク質含量を、該第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価に低下させる工程と
を含む、選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。 - 複数の精子細胞を得る前記工程が複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 複数の哺乳動物精子細胞を得る前記工程が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される複数の哺乳動物精子細胞を得る工程を含む、請求項161に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が、該複数の精子細胞を選別する工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記複数の精子細胞を選別する前記工程が、該複数の精子細胞をフローサイトメトリーによって選別する工程を含む、請求項163に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 所望の特性について前記複数の精子細胞を選択する前記工程が、該複数の精子細胞を性特性について選択する工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記複数の精子細胞を性特性について選択する前記工程が、該複数の精子細胞をX染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択する工程を含む、請求項165に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有するタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が第1のタンパク質含量価を有する動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有する動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が第1のタンパク質含量価を有するリポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項167に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有するリポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が第1のタンパク質含量価を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項168に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄、約3.2%を超える卵黄および約6.4%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項169に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が、約3.2%の卵黄を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項169に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有するタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する前記工程が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択されるタンパク質含有精子細胞エキステンダーを確立する工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、グリセロール含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- グリセロール含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を有するグリセロール含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項174に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- グリセロール含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約6%のグリセロールを有するグリセロール含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項174に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量を有するタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量を有するタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える前記工程が、第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの量と等しい量を有するタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを2段階で加える工程を含む、請求項177に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを、約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度で第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに約5℃の温度で加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、無菌の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項173に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項182に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項182に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項182に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、精子細胞圧縮粒子を実質的に含まない凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項182に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、低粘度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダーを第1のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項182に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの総タンパク質含量を前記第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価に低下させる前記工程が、該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの総タンパク質含量を、約0.4%を超える卵黄、約0.8%を超える卵黄、約1.6%を超える卵黄および約3.2%を超える卵黄からなる群から選択される卵黄の割合に低下させる工程を含む、請求項169に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの総タンパク質含量を前記第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価に低下させる前記工程が、該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの総タンパク質含量を約1.6%の卵黄に低下させる工程を含む、請求項169に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーを未浄化状態で維持する工程をさらに含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価を有する前記未浄化のタンパク質含有精子細胞エキステンダーを遠心分離にかける工程をさらに含む、請求項190に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記第1のタンパク質含量価よりも低い第2のタンパク質含量価を有する前記遠心分離された未浄化のタンパク質含有精子細胞エキステンダーの一部をデカントする工程をさらに含む、請求項191に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 補助的なタンパク質含有精子細胞エキステンダーを、第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程と、
第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの前記総タンパク質含量を、前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価に増加させる工程と
をさらに含む、請求項160に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。 - 補助的なタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、補助的な動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項193に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 補助的な動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、補助的なリポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項194に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 補助的なリポタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、補助的な卵黄含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える工程を含む、請求項195に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄、約10%未満の卵黄および約5%未満の卵黄からなる群から選択される卵黄の割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項196に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約20%の卵黄を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項196に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項196に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 卵黄含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程が、約6%のグリセロールを有する卵黄含有精子細胞エキステンダーを加える工程を含む、請求項196に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 補助的なタンパク質含有精子細胞エキステンダーを第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーに加える前記工程、および、該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの前記総タンパク質含量を前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価に増加させる前記工程が、第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する工程を含む、請求項193に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する工程を含む、請求項201に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を、ウシの冷凍前精子濃度、ウマの冷凍前精子濃度、ブタの冷凍前精子濃度、ヒツジの冷凍前精子濃度、シカの冷凍前精子濃度、イヌの冷凍前精子濃度およびイルカ科の冷凍前精子濃度からなる群から選択される冷凍前精子濃度に調節する工程を含む、請求項202に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を、1ミリリットルにつき約100,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約50,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約40,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約30,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約20,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約15,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約10,000,000未満の数の精子細胞、1ミリリットルにつき約5,000,000未満の数の精子細胞および1ミリリットルにつき約2,000,000未満の数の精子細胞からなる群から選択される精子濃度に調節する工程を含む、請求項202に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を種に適当な冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、第2のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を1ミリリットルにつき約10,000,000の数の精子細胞に調節する工程を含む、請求項202に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約50%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約25%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約20%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約15%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約10%以内、一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約5%以内、および一般的な選別精子細胞冷凍方法の冷凍前卵黄含量の約1%以内からなる群から選択される、前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの冷凍前卵黄含量を確立する工程を含む、請求項201に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 第2のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの精子濃度を冷凍前精子濃度に調節する前記工程が、約50%未満の卵黄、約45%未満の卵黄、約40%未満の卵黄、約35%未満の卵黄、約30%未満の卵黄、約25%未満の卵黄、約20%未満の卵黄、約15%未満の卵黄および約10%未満の卵黄からなる群から選択される、前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの卵黄含量を確立する工程を含む、請求項201に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーの前記総タンパク質含量を前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価に増加させる前記工程が、該第1のタンパク質含量価よりも高い約16.5%の第3のタンパク質含量価を有する該タンパク質含有精子細胞エキステンダーの卵黄含量を確立する工程を含む、請求項201に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 前記第1のタンパク質含量価よりも高い第3のタンパク質含量価を有する前記タンパク質含有精子細胞エキステンダーを冷凍する工程をさらに含む、請求項193に記載の選別事象によって損傷した選別精子細胞を維持促進するための方法。
- 所望の特性について選択される複数の精子細胞と、
タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分と、
タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分と、
タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分と、
約1.6%を超えない総タンパク質含量と
を含む、中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。 - 前記複数の精子細胞が複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記複数の哺乳動物精子細胞が、ウシの精子細胞、ウマの精子細胞、ブタの精子細胞、ヒツジの精子細胞、シカの精子細胞、イヌの精子細胞およびイルカ科の精子細胞からなる群から選択される複数の哺乳動物精子細胞を含む、請求項211に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞が複数の選別精子細胞を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記複数の選別精子細胞がフローサイトメトリーによって選別される複数の選別精子細胞を含む、請求項213に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 所望の特性について選択される前記複数の精子細胞が性特性について選択される複数の精子細胞を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 性特性について選択される前記複数の精子細胞が、X染色体含有特性およびY染色体含有特性からなる群から選択される性特性について選択される複数の精子細胞を含む、請求項215に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分が無菌のタンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が無菌のタンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分がグリセロール成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記グリセロール成分が、約3%を超えるグリセロール、約6%を超えるグリセロール、約12%を超えるグリセロールおよび約24%を超えるグリセロールからなる群から選択されるグリセロールの割合を含む、請求項219に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記グリセロール成分が約6%のグリセロールを含む、請求項219に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が実質的に液状の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項222に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が遠心分離に有効な凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項222に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が実質的に均一な密度の凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項222に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が、精子細胞圧縮粒子を実質的に有さない凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項222に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記低密度勾配凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分が低粘度凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項222に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記動物ベースのタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分がリポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項228に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記リポタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が卵黄含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項229に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 約1.6%を超えない前記総タンパク質含量が約1.6%を超えない卵黄含量を含む、請求項230に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が、卵黄ベースのエキステンダー、ミルクベースのエキステンダー、クエン酸エキステンダー、TrisエキステンダーおよびTESTエキステンダーからなる群から選択されるタンパク質含有精子細胞エキステンダー成分を含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記複数の精子細胞、前記タンパク質非含有精子細胞エキステンダー成分、前記タンパク質非含有凍結保護物質含有精子細胞エキステンダー成分および前記タンパク質含有精子細胞エキステンダー成分が懸濁される冷却中間維持促進媒体をさらに含む、請求項210に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記冷却中間維持促進媒体が、約10℃未満、約9℃未満、約8℃未満、約7℃未満、約6℃未満、約5℃未満、約4℃未満、約3℃未満、約2℃未満および約1℃未満からなる群から選択される温度の冷却中間維持促進媒体を含む、請求項233に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
- 前記冷却中間維持促進媒体が約5℃の温度の冷却中間維持促進媒体を含む、請求項233に記載の中間の損傷した選別精子細胞の維持促進媒体。
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