JP2009500027A5 - - Google Patents
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Claims (15)
- ＤＮＡライブラリーによりコードされた関心のあるポリペプチドをファージ粒子上にディスプレイする繊維状ファージディスプレイ方法であって、ここで該ＤＮＡライブラリーが、ｃＤＮＡライブラリーまたはペプチドライブラリー、抗体ライブラリーもしくはオルタナティブスカホールドに基づいたライブラリーをコードするコンビナトリアルＤＮＡライブラリーであり、そして該関心のあるポリペプチドをグラム陰性菌の細胞膜を横切って翻訳と同時にトランスロケーションさせる、方法。
- 翻訳と同時のトランスロケーションが、シグナル認識粒子経路に基づいて達成される、請求項１に記載の方法。
- ファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチドのトランスロケーションのために使用されるシグナル配列が、ＴｒｘＡの翻訳と同時のトランスロケーションを促進するシグナル配列である、請求項１または２に記載の方法。
- ファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチドのトランスロケーションのために使用されるシグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＦｏｃＣ、ＣｃｍＨ、ＹｒａＩ、ＴｏｌＢ、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩおよびＤｓｂＡのシグナル配列および該シグナル配列のいずれかとの７０％同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選ばれ、そして該アミノ酸配列が、それぞれ、該シグナル配列のｎ領域、ｈ領域およびｃ領域の全体の電荷、疎水性および開裂特性を保存している、請求項１、２または３に記載の方法。
- ファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチドのトランスロケーションのために使用されるシグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＴｏｌＢおよびＤｓｂＡのシグナル配列からなる群より選ばれる、請求項４に記載の方法。
- ファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチドが、リピートタンパク質である、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
- （ａ）グラム陰性菌の細胞膜を横切る融合ポリペプチドの翻訳と同時のトランスロケーションを促進するＮ末端シグナル配列を有する融合ポリペプチドのための発現カセットを含有する繊維状ファージもしくはファージミドベクターを構築する工程；
（ｂ）関心のあるポリペプチドをコードするＤＮＡライブラリーを工程（ａ）のベクターの発現カセットにクローニングすることによりファージまたはファージミドベクターのコンビナトリアルライブラリーを構築する工程；
（ｃ）工程（ｂ）のベクターのライブラリーにより適当なグラム陰性菌をトランスフォーメーションする工程；および
（ｄ）ファージディスプレイ選択サイクルを行って、ディスプレイされた関心のあるポリペプチドの性質に基づいてファージ粒子を分離する工程、
を含む、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。 - ファージ粒子上にディスプレイされた関心のあるポリペプチドを、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＦｏｃＣ、ＣｃｍＨ、ＹｒａＩ、ＴｏｌＢ、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩおよびＤｓｂＡのシグナル配列および該シグナル配列のいずれかとの７０％同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選ばれるシグナル配列を使用して、グラム陰性菌の細胞膜を横切って翻訳と同時にトランスロケーションさせ、ここで該アミノ酸配列が、それぞれ、該シグナル配列のｎ領域、ｈ領域およびｃ領域の全体の電荷、疎水性および開裂特性を保存している、繊維状ファージディスプレイ方法。
- シグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＴｏｌＢおよびＤｓｂＡのシグナル配列からなる群より選ばれる、請求項８に記載の方法。
- ファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチド、およびＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＦｏｃＣ、ＣｃｍＨ、ＹｒａＩ、ＴｏｌＢ、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩおよびＤｓｂＡのシグナル配列および該シグナル配列のいずれかとの７０％同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選ばれるシグナル配列を含む融合タンパク質をコードする遺伝子構築物を含み、ここで該アミノ酸配列が、それぞれ、該シグナル配列のｎ領域、ｈ領域およびｃ領域の全体の電荷、疎水性および開裂特性を保存しているファージまたはファージミドベクター。
- シグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＴｏｌＢおよびＤｓｂＡのシグナル配列からなる群より選ばれる、請求項１０に記載のベクター。
- 融合タンパク質をコードする遺伝子構築物を含むファージまたはファージミドベクターのライブラリーであって、融合タンパク質の各々が、ＴｒｘＡの翻訳と同時のトランスロケーションを促進するシグナル配列およびファージ粒子上にディスプレイされるべき関心のあるポリペプチドを含み、関心のあるポリペプチドの各々が、ＤＮＡライブラリーのメンバーによりコードされており、該ＤＮＡライブラリーが、ｃＤＮＡライブラリーまたはペプチドライブラリー、抗体ライブラリーもしくはオルタナティブスカホールドに基づいたライブラリーをコードするコンビナトリアルＤＮＡライブラリーである、ライブラリー。
- シグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＦｏｃＣ、ＣｃｍＨ、ＹｒａＩ、ＴｏｌＢ、ＮｉｋＡ、ＦｌｇＩおよびＤｓｂＡのシグナル配列および該シグナル配列のいずれかとの７０％同一性を有するアミノ酸配列からなる群より選ばれ、そして該アミノ酸配列が、それぞれ、該シグナル配列のｎ領域、ｈ領域およびｃ領域の全体の電荷、疎水性および開裂特性を保存している、請求項１２に記載のベクターのライブラリー。
- シグナル配列が、ＴｏｒＴ、ＳｆｍＣ、ＴｏｌＢおよびＤｓｂＡのシグナル配列からなる群より選ばれる、請求項１２に記載のベクターのライブラリー。
- 関心のあるポリペプチドをコードするＤＮＡライブラリーが、リピートタンパク質をコードするＤＮＡライブラリーである、請求項１２〜１４のいずれかに記載のベクターのライブラリー。
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