JP2009221116A - 天然素材の抗酸化作用および/またはリパーゼ阻害活性を増強させる方法、ならびに当該活性が増強された天然素材 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】オキシダーゼを用いる酵素反応により、食品、医薬品、化粧品または飼料用の天然素材を処理することを特徴とする、前記天然素材の抗酸化作用および/またはリパーゼ阻害活性を増強させる方法
【選択図】なし
Description
メタボリックシンドロームの増悪化は、食後の血糖値や中性脂肪の上昇にともなう酸化的ストレスの亢進によって促進されることが知られている。
従って、食後の酸化的ストレスの抑制(以下、「食後抗酸化」という)作用を有する食品・医薬品・化粧品・飼料用天然素材を開発・実用化することは、メタボリックシンドロームの増悪化を予防する手段として優れており、これまでに多数研究されている。
また、特許文献3には、茶に含まれるエピガロカテインガレート(EGCG)の2量体がリパーゼ阻害活性を有すると記載されている。
また、本発明におけるオキシダーゼ処理天然素材は、従来報告されたオキシダーゼ等を用いて重合化されたポリフェノール類のように、高度に精製された化合物または合成された化合物ではなく、食品等として使用経験が豊富な天然物を原料とするため安全性が高いという効果がある。また、入手が容易で安価に調達できる利点も挙げられる。
(1)オリーブ
学名:Olea europaea L.
(2)ジャスミン
学名:Jasminum officinale
(3)ハッカ
学名:Menta spp.(M. arvensis、M. piperita、M. spicata等)
(4)ホップ
学名:Humulus lupulus
(5)ユーカリ
学名:Eucalyptus spp.(E. globulus, E. robusta, E. citriodra等)
(6)リンゴ
学名:Malus pumila
(7)カカオ
学名:Theobroma cacao
(8)ブドウ
学名:Vitis spp.(V. labrusca、V. vinifera等)
なお、オキシダーゼに代えてペルオキシダーゼを使用することも考えられるが、ペルオキシダーゼでは、必ずしもオキシダーゼのような生理活性の増強は認められない。
上記重合反応によって得られる酸化重合体の数平均分子量は通常500〜50,000の範囲である。
1.数平均分子量(Mn)の測定
東ソー社製のゲルろ過クロマトグラフィを用いて重合体の数平均分子量(Mn)を測定した。測定条件は以下の通りである。
溶離液:0.1mol/LのLiClを含むDMF(ジメチルホルムアミド)溶液
流速:1.0ml/min
カラム温度:60℃
基準物質:ポリエチレンスタンダード
供試試料は全てアセチル化物をDMFに溶解し、メンブレンフィルターにてろ過したのち測定に供した。
パネラー3名がそれぞれ試料3mgを口に入れて風味を評価した。甘味、塩味、苦味、酸味、辛味、旨味の各要素に対して官能強度を点数化した。また、風味上の特徴を記述してもらい、原料と重合化物とで比較した。
キサンチン/キサンチンオキシダーゼ系を用いてスーパーオキシドアニオンを発生させ、化学発光法で検出することによりSOD様活性を評価した。0.05mM EDTAを含む100mMリン酸緩衝液(pH7)を用いて0.15U/ml キサンチンオキシダーゼ(from Butter milk,0.23 U/mg)溶液を調製した。またキサンチン 7.5mgを1N NaOH 600μlに溶解させた後、蒸留水7.5mlを加え、さらにリン酸緩衝液16.9mlを加えて希釈し、2mMとした。試料のポリフェノールは30%のDMSOを含む蒸留水で各濃度に調製した。MPEC(2-methyl-p-methoxyphenylethynylimidazopyrazinon) 2.8mgはメタノール10 mlに溶解させ、使用時に蒸留水で3倍に希釈した。
発光測定装置(コロナ電気株式会社製)にキサンチン溶液を導入した。96wellプレートに試料溶液10μlとリン酸緩衝液170μl、キサンチンオキシダーゼ溶液60μl、MPEC溶液10μlを混合し、キサンチン溶液50μl分注後の発光量を30秒間測定した。SOD様活性はEC50(対照〔30%DMSO〕に対して活性酸素を50%消去するのに必要な試料量)として測定した。
リパーゼ活性の測定は、基質に蛍光性の4−メチルウンベリフェロンのオレイン酸エステル(4−UMO)を使用し、反応によって生成した4−メチルウンベリフェロンの蛍光を測定することにより実施した。測定にあたり、緩衝液は、150mM NaCl、1.36mM CaCl2を含む 13mM Tris−HCl (pH8.0) を用いた。基質である4−UMO(Sigma社製)は0.1MのDMSO溶液として調製したものを上記緩衝液で1000倍希釈したものを、また、リパーゼはブタ膵リパーゼ(Sigma社製)を、同様に上記緩衝液を用い400U/ml溶液として調製したものを酵素測定に供した。
酵素反応は、25 ℃条件下において、96wellマイクロプレートに50μlの4−UMO緩衝液溶液、25μl の30%DMSO(あるいは試料溶液)を添加し混合した後に、25μlのリパーゼ緩衝液溶液を添加することにより開始させた。30分間反応を行った後に、100μlの0.1Mクエン酸緩衝液(pH4.2)を添加して反応を停止させ、反応によって生成した4−メチルウンベリフェロンの蛍光(励起波長360nm、蛍光波長460nm)を96wellマイクロプレートリーダー(BIO−TEK社製 Synergy HT)を用い測定した。
被験試料の阻害活性は、ICIC50(対照〔30% DMSO〕の活性に対して50%阻害を与える試料量)として求めた。
オリーブ(使用部位:葉)、ジャスミン(使用部位:花)、ハッカ(使用部位:地上部)は、原料500gを4.5kgの50%EtOHで2時間還流を行い、室温まで冷却後ろ過した。ホップ(使用部位:穂)、ユーカリ(使用部位:葉)は、原料500gを4.5kgの30%EtOHで2時間還流を行い、室温まで冷却後、ろ過した。
それぞれ得られたろ液を一晩冷蔵放置した。ついで、ろ液をさらにろ過し、得られたろ液を減圧濃縮し、さらに凍結乾燥して各抽出物を得た。
なお、以下の試料は、市販の原料を使用した。
リンゴ…商品名:アップルフェノン(ニッカウヰスキー製)(使用部位:果実)
カカオ…商品名:カカオ・ポリフェノール(台糖製)(使用部位:果実)
ブドウ…商品名:グラヴィノール(キッコーマン製)(使用部位:種子)
(オキシダーゼ処理天然素材の製造方法)
このことから本発明で見出された方法を用いて製造されたオキシダーゼ処理天然素材は、日常的に食品等に使われる使用経験が豊富な天然素材を原料にするため安全性が高く、安価かつ簡便に抗酸化作用、リパーゼ阻害活性が実用に堪えるレベルまで増強されるので、メタボリックシンドローム予防食品・医薬品または化粧用素材として、幅広く利用することが期待される。
Claims (9)
- 食品、医薬品、化粧品または飼料用の天然素材にオキシダーゼを作用させて酵素反応処理を行い、当該天然素材の抗酸化作用を増強させる方法。
- 食品、医薬品、化粧品または飼料用の天然素材にオキシダーゼを作用させて酵素反応処理を行い、当該天然素材のリパーゼ阻害活性を増強させる方法。
- 前記オキシダーゼが、ラッカーゼである請求項1または2に記載の方法。
- 前記天然素材が、オリーブ、ジャスミン、ハッカ、ホップ、ユーカリ、リンゴ、カカオおよびブドウから選ばれる少なくとも1種である請求項1〜3のいずれかに記載の方法。
- オキシダーゼを用いて酵素反応処理したことを特徴とする、抗酸化作用が増強した食品、医薬品、化粧品または飼料用の天然素材。
- オキシダーゼを用いて酵素反応処理した天然素材を含有する抗酸化剤。
- オキシダーゼを用いて酵素反応処理したことを特徴とする、リパーゼ阻害活性が増強した食品、医薬品、化粧品または飼料用の天然素材。
- オキシダーゼを用いて酵素反応処理した天然素材を含有するリパーゼ阻害剤。
- 請求項5または6に記載の抗酸化作用および/またはリパーゼ阻害活性が増強した天然素材の食品、医薬品、化粧品または動物用飼料への使用。
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