JP2009062306A - 免疫賦活剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 本発明の免疫賦活剤は、桑の樹皮の水溶性抽出物を有効成分とすることを特徴とする。
【選択図】 図2
Description
そこで本発明は、桑の新規な薬理用途を提供することを目的とする。
(桑の樹皮の水溶性抽出物の調製)
日本産のカラヤマグワの樹皮(幹部と枝部のもの)100gを乾燥させた後、粉砕機で粉砕し、篩にかけて粉末化した。得られた粉末を超純水(MQ水)3500mLに投入し、4℃で48時間震盪させて成分抽出してからろ紙を用いてろ過することでろ液を得た。得られたろ液を凍結乾燥することで、褐色粉末からなるカラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物を12g得た(収率12%)。
次に、上記の方法で得たカラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物1gをセファデックスG−25Mにアプライし、溶出液として水を用いてゲルろ過を行い、30mLずつ分画して合計12の画分を得、それぞれの画分を凍結乾燥した(F1〜F12:溶出順)。表1にそれぞれの画分の凍結乾燥後の収量と収率を示す(水溶性抽出物1gに対する値)。
4週齢〜10週齢の正常なICR系マウス(雌)の脾臓を、PBS中、滅菌ワイヤーメッシュ上で緩やかに摩砕することで、脾臓細胞を無菌的に組織から分離した。分離した脾臓細胞に、赤血球除去のためのTris ammonium chloride - lysis buffer(17mM Tris HCl, 0.83% NH4Cl, pH7.2)を加えて室温で5分間インキュベートした。遠心分離によって上清を取り除いた後(1100rpm,11g,10分間の条件で2回)、PBSを加え、得られた細胞懸濁液を再度遠心分離して細胞の洗浄を行った(1100rpm,11g,5分間の条件で2回)。その後、細胞を、100U/mLのペニシリン、100μg/mLのストレプトマイシン、2mMのL−グルタミン、50μMの2−メルカプトエタノール、10%ウシ胎児血清を含むRPMI1640培地に懸濁し、5%CO2存在下、37℃湿潤条件でインキュベートすることで、マウス脾臓リンパ球細胞浮遊液を得た。
次に、リンパ球細胞数が5×106cells/mLになるように培地で調整し、その100μLを96穴マイクロプレートの各ウェルに加えた。続いて、各ウェルに所定濃度の被検サンプルを11μL加え、5%CO2存在下、37℃湿潤条件で48時間インキュベートした後、Ishiyamaらの方法に従い(Chem.Pharm.Bull.41,1118−1122,1993)、WST−1溶液を10μL加え、前述の条件でさらに4時間インキュベートしてから、マイクロプレートリーダーで450nmにおける吸光度を測定し、被検サンプルを加えずにインキュベートした際の吸光度を100とした場合の相対値でもって、被検サンプルのリンパ球細胞の増殖に対する作用(免疫賦活作用)を評価した。なお、この試験においては、ポジティブコントロールとしてLPS(リポ多糖)を用いた。
(1) カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物(Direct)、カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物に対してゲルろ過を行うことで得た合計12の画分の凍結乾燥物(F1〜F12)を被検サンプルとした場合の試験結果を図1に示す(サンプル濃度:20μg/mL)。図1から明らかなように、いずれの被検サンプルも免疫賦活作用を示したが、中でも、F1画分とF2画分の免疫賦活作用は、LPSの免疫賦活作用よりも優れていた。
(2) カラヤマグワの樹皮の水溶性抽出物(Direct)、F2画分、F2画分に対して20%,40%,60%,80%,100%の5種類の硫安分画を行うことで得た画分の凍結乾燥物(F2(20%)画分,F2(40%)画分,F2(60%)画分,F2(80%)画分,F2(100%)画分)を被検サンプルとした場合の試験結果を図2(サンプル濃度:50μg/mL)と図3に示す(サンプル濃度:100μg/mL)。図2と図3から明らかなように、いずれの被検サンプルも免疫賦活作用を示したが、中でも、F2(40%)画分とF2(60%)画分の免疫賦活作用は、LPSの免疫賦活作用よりも優れていた。
以下の成分組成からなる免疫賦活のための錠剤を自体公知の方法で製造した。
桑の樹皮の水溶性抽出物 1
乳糖 80
ステアリン酸マグネシウム 19 (単位:重量%)
以下の成分組成からなる免疫賦活のためのビスケットを自体公知の方法で製造した。
桑の樹皮の水溶性抽出物 1
薄力粉 32
全卵 16
バター 16
砂糖 24
水 10
ベーキングパウダー 1 (単位:重量%)
Claims (1)
- 桑の樹皮の水溶性抽出物を有効成分とすることを特徴とする免疫賦活剤。
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