JP2009060914A - P−セレクチンリガンド蛋白 - Google Patents
P−セレクチンリガンド蛋白 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2009060914A JP2009060914A JP2008266326A JP2008266326A JP2009060914A JP 2009060914 A JP2009060914 A JP 2009060914A JP 2008266326 A JP2008266326 A JP 2008266326A JP 2008266326 A JP2008266326 A JP 2008266326A JP 2009060914 A JP2009060914 A JP 2009060914A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- selectin
- amino acid
- seq
- protein
- selectin ligand
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 108010054395 P-selectin ligand protein Proteins 0.000 title abstract description 302
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 291
- 108010035766 P-Selectin Proteins 0.000 claims abstract description 238
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 153
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 134
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims abstract description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 57
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims abstract description 52
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims abstract description 52
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 38
- 102000008212 P-Selectin Human genes 0.000 claims abstract 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 221
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims description 131
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 127
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 28
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 28
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 8
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 4
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 abstract description 201
- 238000009739 binding Methods 0.000 abstract description 194
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract description 23
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract description 23
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 251
- 102100023472 P-selectin Human genes 0.000 description 227
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 195
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 112
- 108010024212 E-Selectin Proteins 0.000 description 95
- 102100023471 E-selectin Human genes 0.000 description 95
- 102000003800 Selectins Human genes 0.000 description 65
- 108090000184 Selectins Proteins 0.000 description 65
- 102100034925 P-selectin glycoprotein ligand 1 Human genes 0.000 description 53
- 101710137390 P-selectin glycoprotein ligand 1 Proteins 0.000 description 53
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 53
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 48
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 48
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 48
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 43
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 36
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 33
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 29
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 27
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 26
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 25
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 24
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 24
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 24
- AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N prometryn Chemical compound CSC1=NC(NC(C)C)=NC(NC(C)C)=N1 AAEVYOVXGOFMJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 21
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 21
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 20
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 20
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 19
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 19
- 108010083651 3-galactosyl-N-acetylglucosaminide 4-alpha-L-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 18
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 18
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 18
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 18
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 18
- 101000608935 Homo sapiens Leukosialin Proteins 0.000 description 17
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 16
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 16
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 16
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 16
- 241000894007 species Species 0.000 description 16
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 15
- 108010019236 Fucosyltransferases Proteins 0.000 description 15
- 102000006471 Fucosyltransferases Human genes 0.000 description 15
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 15
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 15
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 15
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 108010092694 L-Selectin Proteins 0.000 description 14
- 102000016551 L-selectin Human genes 0.000 description 14
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 14
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 14
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 14
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 14
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 14
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 13
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 13
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 13
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 13
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 12
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 12
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 12
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 12
- DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 3-(N-morpholino)propanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCCN1CCOCC1 DVLFYONBTKHTER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 11
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 11
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 10
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 10
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 10
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 9
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 9
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 9
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 101710188694 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 7 Proteins 0.000 description 8
- 102100021333 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 7 Human genes 0.000 description 8
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 8
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- -1 SEQ ID NO: 2 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 7
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 7
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 7
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical compound N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 7
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 7
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 7
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 7
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 7
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 7
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 7
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 7
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 6
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 6
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 6
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 6
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 6
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 6
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 6
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N phenylalanine group Chemical group N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 6
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 5
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 5
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 5
- 101100342814 Medicago truncatula LEC11 gene Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 5
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 5
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 5
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 108010085617 glycopeptide alpha-N-acetylgalactosaminidase Proteins 0.000 description 5
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 150000002482 oligosaccharides Polymers 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 5
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 4
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N benzamidine Chemical compound NC(=N)C1=CC=CC=C1 PXXJHWLDUBFPOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 108010001671 galactoside 3-fucosyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- 238000000464 low-speed centrifugation Methods 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 108010091212 pepstatin Proteins 0.000 description 4
- 229950000964 pepstatin Drugs 0.000 description 4
- FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N pepstatin A Chemical compound OC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C[C@H](O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CC(C)C FAXGPCHRFPCXOO-LXTPJMTPSA-N 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 4
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 4
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 4
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 3
- FADQCEBBTITJBI-UHFFFAOYSA-N 2-[(2-methoxyphenyl)methoxymethyl]oxirane Chemical compound COC1=CC=CC=C1COCC1OC1 FADQCEBBTITJBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 3
- 102100039888 Beta-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoprotein beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 3
- NIGUVXFURDGQKZ-UQTBNESHSA-N alpha-Neup5Ac-(2->3)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-beta-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@]3(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O NIGUVXFURDGQKZ-UQTBNESHSA-N 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 3
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 3
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 3
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 3
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 3
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 238000005567 liquid scintillation counting Methods 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 238000000409 membrane extraction Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- HEGSGKPQLMEBJL-UHFFFAOYSA-N n-octyl beta-D-glucopyranoside Natural products CCCCCCCCOC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HEGSGKPQLMEBJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012130 whole-cell lysate Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 101710167543 Beta-1,3-galactosyl-O-glycosyl-glycoprotein beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 101100408682 Caenorhabditis elegans pmt-2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 2
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 2
- 101710175625 Maltose/maltodextrin-binding periplasmic protein Proteins 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108010090473 UDP-N-acetylglucosamine-peptide beta-N-acetylglucosaminyltransferase Proteins 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000000787 affinity precipitation Methods 0.000 description 2
- CMQZRJBJDCVIEY-JEOLMMCMSA-N alpha-L-Fucp-(1->3)-[beta-D-Galp-(1->4)]-beta-D-GlcpNAc-(1->3)-beta-D-Galp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H]([C@H](O[C@@H]3[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)O[C@H](CO)[C@@H]2O)O)[C@@H]1NC(C)=O CMQZRJBJDCVIEY-JEOLMMCMSA-N 0.000 description 2
- XBSNXOHQOTUENA-KRAHZTDDSA-N alpha-Neu5Ac-(2->3)-beta-D-Gal-(1->3)-[alpha-L-Fuc-(1->4)]-D-GlcNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@]3(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](NC(C)=O)C(O)O[C@@H]1CO XBSNXOHQOTUENA-KRAHZTDDSA-N 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 2
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001400 expression cloning Methods 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 101150054603 ft gene Proteins 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000005732 intercellular adhesion Effects 0.000 description 2
- 108010084553 jacalin Proteins 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- QKPLRMLTKYXDST-OCOFDJSDSA-N (2r,3r,4r,5s,6r)-3-amino-6-(hydroxymethyl)oxane-2,4,5-triol;hydrochloride Chemical compound Cl.N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O QKPLRMLTKYXDST-OCOFDJSDSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 206010000748 Acute febrile neutrophilic dermatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010001052 Acute respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N BUQICHWNXBIBOG-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 208000032116 Autoimmune Experimental Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101000688206 Bos taurus Intestinal-type alkaline phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101000740587 Botryotinia fuckeliana Presilphiperfolan-8-beta-ol synthase Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000701867 Enterobacteria phage T7 Species 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000001034 Frostbite Diseases 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 208000003807 Graves Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000015023 Graves' disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 101000762366 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000622123 Homo sapiens E-selectin Proteins 0.000 description 1
- 101001010568 Homo sapiens Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 101000581802 Homo sapiens Lithostathine-1-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 101800001509 Large capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 235000014647 Lens culinaris subsp culinaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000043158 Lens esculenta Species 0.000 description 1
- HSQGMTRYSIHDAC-BQBZGAKWSA-N Leu-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HSQGMTRYSIHDAC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- 108010005832 Leukosialin Proteins 0.000 description 1
- 102100027361 Lithostathine-1-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 210000002361 Megakaryocyte Progenitor Cell Anatomy 0.000 description 1
- 108700005084 Multigene Family Proteins 0.000 description 1
- 101100012019 Mus musculus Etv4 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N N-acetyl-D-galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-KEWYIRBNSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010051606 Necrotising colitis Diseases 0.000 description 1
- 108091006033 O-glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 102100034574 P protein Human genes 0.000 description 1
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000609499 Palicourea Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001014 Plasminogen Activators Proteins 0.000 description 1
- 102000001938 Plasminogen Activators Human genes 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 108010015724 Prephenate Dehydratase Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 208000013616 Respiratory Distress Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 1
- 241000235347 Schizosaccharomyces pombe Species 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 108010032838 Sialoglycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007365 Sialoglycoproteins Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 208000010265 Sweet syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 101710201961 Virion infectivity factor Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 201000000028 adult respiratory distress syndrome Diseases 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- NIGUVXFURDGQKZ-KRAHZTDDSA-N alpha-Neup5Ac-(2->3)-beta-D-Galp-(1->4)-[alpha-L-Fucp-(1->3)]-D-GlcpNAc Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@]3(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C3)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)OC(O)[C@@H]1NC(C)=O NIGUVXFURDGQKZ-KRAHZTDDSA-N 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000002257 antimetastatic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N aspartic acid group Chemical group N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N batilol Chemical class CCCCCCCCCCCCCCCCCCOCC(O)CO OGBUMNBNEWYMNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L calcium acetate Chemical compound [Ca+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O VSGNNIFQASZAOI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001639 calcium acetate Substances 0.000 description 1
- 229960005147 calcium acetate Drugs 0.000 description 1
- 235000011092 calcium acetate Nutrition 0.000 description 1
- BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I calcium;potassium;disodium;(2s)-2-hydroxypropanoate;dichloride;dihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[Na+].[Na+].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].C[C@H](O)C([O-])=O BPKIGYQJPYCAOW-FFJTTWKXSA-I 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960000359 chromic chloride Drugs 0.000 description 1
- LJAOOBNHPFKCDR-UHFFFAOYSA-K chromium(3+) trichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cr+3] LJAOOBNHPFKCDR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000011636 chromium(III) chloride Substances 0.000 description 1
- 235000007831 chromium(III) chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 108091009760 complement binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000033815 complement binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 239000012538 diafiltration buffer Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N diethanolamine Chemical compound OCCNCCO ZBCBWPMODOFKDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000002635 electroconvulsive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003241 endoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002254 galactosylceramides Chemical class 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000010005 growth-factor like effect Effects 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 208000006359 hepatoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 102000045896 human BMP2 Human genes 0.000 description 1
- 102000049885 human IL11 Human genes 0.000 description 1
- 102000051210 human SELE Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000054999 human core Human genes 0.000 description 1
- 108700026469 human core Proteins 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000014726 immortalization of host cell Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013546 insoluble monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000000503 lectinlike effect Effects 0.000 description 1
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 108010071185 leucyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 230000023404 leukocyte cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000004973 liquid crystal related substance Substances 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-PZRMXXKTSA-N methyl alpha-D-galactoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-PZRMXXKTSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 208000037890 multiple organ injury Diseases 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 208000004995 necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 239000000162 organ preservation solution Substances 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 201000006195 perinatal necrotizing enterocolitis Diseases 0.000 description 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000002205 phenol-chloroform extraction Methods 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940127126 plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 208000008423 pleurisy Diseases 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091011138 protein binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M sodium butyrate Chemical compound [Na+].CCCC([O-])=O MFBOGIVSZKQAPD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IHQKEDIOMGYHEB-UHFFFAOYSA-M sodium dimethylarsinate Chemical compound [Na+].C[As](C)([O-])=O IHQKEDIOMGYHEB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000011537 solubilization buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000001732 thrombotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006107 tyrosine sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/08—Vasodilators for multiple indications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
- C07K14/51—Bone morphogenetic factor; Osteogenins; Osteogenic factor; Bone-inducing factor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/54—Interleukins [IL]
- C07K14/5431—IL-11
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
- C07K16/2854—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72 against selectins, e.g. CD62
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6454—Dibasic site splicing serine proteases, e.g. kexin (3.4.21.61); furin (3.4.21.75) and other proprotein convertases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
- C07K2319/24—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a MBP (maltose binding protein)-tag
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/36011—Togaviridae
- C12N2770/36211—Rubivirus, e.g. rubella virus
- C12N2770/36222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Virology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Cell Biology (AREA)
Abstract
【解決手段】P−セレクチンに結合できる特定の配列のアミノ酸42からアミノ酸88までを含む第1のアミノ酸配列、および(b)抗体に由来する第2のアミノ酸配列を含む融合蛋白、該蛋白をコードするDNA配列、宿主細胞、およびP−セレクチンリガンド蛋白の製造方法。
【選択図】なし
Description
Moore et al., J. Cell Biol. 118, 445-456 (1992)
(a)本発明DNAのいずれか1つを含む発現ベクターで形質転換された宿主細胞を適当な倍地中で培養し、ついで、
(b)P−セレクチンリガンド蛋白を培地から精製する
ことを含む。
(a)配列番号:2のアミノ酸1からアミノ酸402までのアミノ酸配列、配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸402までのアミノ酸配列、配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸310までのアミノ酸配列、および配列番号:4に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むP−セレクチンリガンド蛋白にP−セレクチンを結合させ(該結合は第1の結合混合物を生じる);
(b)第1の結合混合物中のP−セレクチン蛋白とP−セレクチンリガンド蛋白との間の結合量を測定し;
(c)P−セレクチン蛋白およびP−セレクチンリガンド蛋白に化合物を結合させて第2の結合混合物を得て;
(d)第2の結合混合物中の結合量を測定し;ついで
(e)第1の結合混合物中の結合量を第2の結合混合物中の結合量と比較する
ことを含み、第2の結合混合物の結合量の減少か起こった場合、化合物がP−セレクチンにより媒介される細胞間付着を阻害しうるものである、P−セレクチンにより媒介される細胞間付着の阻害剤の同定方法を提供する。
(a)配列番号:2のアミノ酸1からアミノ酸402までのアミノ酸配列、配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸402までのアミノ酸配列、配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸310までのアミノ酸配列、および配列番号:4に示すアミノ酸配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むE−セレクチンリガンド蛋白にE−セレクチンを結合させ(該結合は第1の結合混合物を生じる);
(b)第1の結合混合物中のE−セレクチン蛋白とE−セレクチンリガンド蛋白との間の結合量を測定し;
(c)E−セレクチン蛋白およびE−セレクチンリガンド蛋白に化合物を結合させて第2の結合混合物を得て;
(d)第2の結合混合物中の結合量を測定し;ついで
(e)第1の結合混合物中の結合量を第2の結合混合物中の結合量と比較する
を含み、第2の結合混合物の結合量の減少が起こった場合、化合物がE−セレクチンにより媒介される細胞間付着を阻害しうるものである、E−セレクチンにより媒介される細胞間付着の阻害剤の同定方法を提供する。これらの方法を用いて、E−セレクチンをL−セレクチンに置き換えるとL−セレクチン阻害剤を探すこともできる。
図1は、コア2ありおよびなしで発現されたP−セレクチンリガンド蛋白の結合を比較したグラフである。
図2は、コア2ありおよびなしで発現されたP−セレクチンリガンド蛋白の免疫沈降のオートラジオグラフである。
図3は、P−セレクチンリガンド蛋白(コア2ありおよびなしで発現)のP−セレクチン/IgGキメラ(LEC−γ1)および抗P−セレクチンリガンド蛋白モノクローナル抗体(MAb275)への結合のフローサイトメトリー分析の結果を示す。
図4は、P−およびE−セレクチン/IgGキメラに結合する、P−セレクチンリガンド蛋白を含む蛋白のオートラジオグラフである。
図5は、配列番号:2の全長P−セレクチンリガンド蛋白の構造的特徴を図式的に示したものである。
図7は、P−セレクチンリガンド蛋白のセレクチン類への結合におけるN−結合糖鎖付加部位の役割を調べるための実験結果を示す。
図8は、P−セレクチンリガンド蛋白のセレクチン類への結合における硫酸化チロシン残基の役割を調べる目的で構築されたいくつかのP−セレクチンリガンド蛋白フラグメントを図式的に示す。
図9〜11は、P−セレクチンリガンド蛋白のセレクチン類への結合における硫酸化チロシン残基の役割を調べる実験の結果を示す。
図12は、P−セレクチンリガンド蛋白のセレクチン類への結合における種々の欠失の影響を調べる目的で構築されたいくつかのP−セレクチンリガンド蛋白フラグメントを図式的に示す。
図13は、実施例4(c)の定量的プレート結合アッセイを図式的に示す。
図18は、P−セレクチンリガンド蛋白のアニオン性領域のセレクチン類への結合におけるチロシン残基の変化の影響を調べる目的で構築されたいくつかのP−セレクチンリガンド蛋白フラグメントを図式的に示す。
図19〜21は、種々の欠失および変化したP−セレクチンリガンド蛋白のセレクチン類への結合を比較する実験の結果を示す。
図22は、P−セレクチンリガンド蛋白のP−およびE−セレクチンへの結合についての提案されたモデルを示す。
図23および24は、種々の欠失および変化したP−セレクチンリガンド蛋白のセレクチンへの結合を比較する実験の結果を示す。
PACE開裂部位を含んでいる。
A.HL60 cDNAライブラリーの構築
P−セレクチンリガンドの発現クローニングのためにHL60 cDNAライブラリーを構築した。Fast Track mRNA Isolation Kit (Invitrogen; San Diego, CA)を用いてヒトプロミエロサイト細胞系HL60(S. J. Collins, et al.,上記文献)からポリA+RNAを単離した。ポリA+RNAフラクションから2本鎖cDNAを合成し、平滑末端をEcoRIアダプター(5'-AATTCCGTCGACTCTAGAG-3', 配列番号:7; 5'-CTCTAGAGTCGACGG-3', 配列番号:8)に連結した。EcoRIエンドヌクレアーゼとともにインキュベーションされ、ついで、ウシ腸アルカリ性ホスファターゼとともにインキュベーションされ、その後精製された発現ベクターpMT21(R. Kaufman et al., J. Mol. Cell. Biol. 9, 946-958 (1989))中にcDNAを連結した。連結生成物から2μ取ってイー・コリ(E. coli) DH5α細胞中にエレクトロポレーションし、10mM MgCl2、10mM
MgSO4、および2%グリセロールを補足した1mlのSOB培地(J. Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual, New York, Cold Spring Harbor Press, p1.90 (1989))中、37℃で1時間増殖させた。ライブラリーを小さい部分に分けるために、細菌懸濁液1mlずつをアンピシリン存在下の寒天プレートに撒き、1mlあたりのコロニー数を計算した。各コロニーが1のcDNAクローンを有すると仮定すると、600000クローンが得られ、1プールあたり約16000クローンの部分に分かれた。38のプールそれぞれを、アンピシリン存在下のLブロス中で一晩増殖させ、CsClグラジエントによりプラスミドを精製した。
第1段階において、実施例4(A)のLEC−γ1結合アッセイを用いて、HL60 cDNAライブラリーをパンニングし、そのことにより目的プラスミドを豊富化させた。HL60 cDNAライブラリープール各6μgを2μgの3/4FT遺伝子(実施例2)とともにCHO細胞中に同時トランスフェクションした。トランスフェクションから約45時間後、1mM EGTA中、37℃で15分間細胞をインキュベーションし、ついで、セルリフターでかき取ることによりCOS細胞をプレートから取った。1mMカルシウムを含有するHanks緩衝化セイライン(HBSS)で細胞を2回洗浄した。細胞を4mlのHBSSに再懸濁した。懸濁された、トランスフェクションされたCOS細胞を、実施例4(A)において説明するLEC−γ1結合アッセイを用いてスクリーニングした。
ヒト全ゲノムDNA(Clontech Laboratories)からPCR手段を用いて1,3/1,4フコシルトランスフェラーゼ遺伝子(3/4FT)をクローン化した。センスオリゴヌクレオチドプライマーは遺伝子のXbaI部位および5'末端を含み(5'-TAGCATACGCTCTAGAGCATGGATCCCCTGGGTGCAGCCAAGC-3', 配列番号:9)、アンチセンスオリゴヌクレオチドプライマーは遺伝子のEcoRI部位および3'末端を含んでいた(5'-CCGGAATTCTCAGGTGAACCAAGCCGC-3', 配列番号:10)。PCR生成物をXbaI、ついでEcoRIで逐次消化し、標準的なゲル精製法により精製した。ついで、XbaI、ついでEcoRIで逐次消化され、標準的なゲル精製法により精製されたベクターpMT3Sv2ADA(R. Kaufman, Methods in Enzymology,上記)中にこの遺伝子を連結した。コンピテントHB101細胞(Biorad)をこの連結生成物でトランスフェクションし、ついで、アンピシリン存在下の寒天プレートに撒いた。アンピシリン耐性形質転換体のニトロセルロースフィルターリフトを、遺伝子の中央部の506〜530の領域に対して相捕的な放射性標識オリゴヌクレオチド(5'-AAGTATCTGTCCAGGGCTTCCAGGT-3', 配列番号:11)でプローブした(J. Sambrook et al., 上記)。
A.LEC11細胞におけるP−セレクチンリガンドの発現
以下のようにして、機能的P−セレクチンリガンドをSLex陽性チャイニーズハムスター卵巣(CHO)細胞系LEC11(Campbell, C. and Stanley, P. Cell 35:303-309 (1983))において発現させた。約8μgのP−セレクチンリガンド遺伝子含有プラスミド8pMT21:PL85、実施例1)をLEC11細胞中にトランスフェクションした。トランスフェクションから68時間後、細胞を2.5mMの酪酸ナトリウムで4時間処理した。6−CFD標識CHO:P−セレクチン細胞結合アッセイ(実施例4、セクションBにおいて説明)を用いて調べたところ、細胞はP−セレクチン付着を誘導することがわかった。対照的に、LEC11細胞単独および対照プラスミドでトランスフェクションされたLEC11細胞はいずれもP−セレクチン付着を誘導しなかった。
8μgのpED.sPSL.T7(実施例5C参照)および実施例2の4μgのpEA.3/4FTプラスミド、8μgのpED.sPSL.T7のみ、あるいは8μgのプラスミドベクター(pMT21)および4μgのpEA.3/4FT遺伝子を用いてCOS細胞をトランスフェクションした。トランスフェクションから45時間後、細胞をPBSで2回すすぎ、2mM L−グルタミン、100U/mlペニシリンおよび100μg/mlストレプトマイシンを補足した無血清DMEM(フェノールレッド不含)(JRH Biosciences)中、37℃で一晩インキュベーションした。フッ化フェニルメチルスルホニル、アプロチニンおよびNaN3を添加して最終濃度をそれぞれ1mM、2μg/mlおよび0.02%とし、ならし培地を遠心分離してすべての残渣を除去した。
COS細胞を実施例5(C)のpED.sPSL.T7プラスミド、実施例2のpEA.3/4FT cDNA、および配列番号:5のPACE cDNAを含むプラスミドで同時トランスフェクションした。pED.sPSL.T7プラスミドおよびpEA.3/4FTプラスミドのみを用いて対照同時トランスフェクションを並行して行った。45時間後、これらのトランスフェクションCOS細胞からのならし培地をプラスチックディッシュ上にコーティングし、CHO:P−セレクチン細胞への結合(実施例4)を調べた。PACEとともに同時発現されたP−セレクチンリガンドを含む培地でコーティングされたディッシュについては結合したCHO:P−セレクチン細胞の約20倍の増加が確認された(PACEとともに同時発現されなかったP−セレクチンリガンドを含む培地と比較)。
以下のようにして、全長形態(アミノ酸1〜402)のP−セレクチンリガンド蛋白をCHO(DUKX)細胞系(Urlaub & Chasin, Proc. natl. Acad. Sci. USA 77, 4216-4220 (1980))において発現させた。約25μgのpMT21:PL85プラスミドおよび約8μgのpED.3.4FT(pEA3/4FTをEcoRIおよびXbaIで制限的に消化し、得られたフラグメントをpEDプラスミドに挿入することにより得た)を、リン酸カルシウム法を用いてCHO(DUKX)細胞中に同時トランスフェクションした。トランスフェクション体をメトトレキセート耐性に関して選択した。2週間後、抗SLex抗体(CSLEX−1,米国特許第4752569号)およびヤギ赤血球(sRBC)の抱合体(クロミッククロリド法(Goding, J. W., J. Immunol. Methods 10:61-66 (1976))により調製)を用いることにより、下記のごとく個々のコロニーをSLex発現についてスクリーニングした。洗液が透明になるまで、sRBCを0.15M NaClで洗浄し、ついで、sRBC50%懸濁液を0.15M NaCl中に調製した。50μgのCSLEX−1を含有する0.2mlのsRBC懸濁液に1mlの0.01%クロミッククロリド溶液を滴下し、その間ボルテックスで撹拌した。37℃で30分インキュベーション後、10mlのリン酸塩緩衝化セイライン(PBS)溶液を反応物に添加した。抱合体を
PBSで1回洗浄し、ついで、10mlのPBSに懸濁した。トランスフェクションを入れたプレートをPBSで洗浄し、ついで、3mlのPBSおよび1mlのsRBC/CSLEX−1抱合体を各プレートに添加した。陽性コロニーはトランスルミネーターで赤色を呈し、これらを、10%ウシ胎児血清含有アルファ培地中に拾った。2週間後、コロニーをステップワイズ増幅(2、10、25、100、150nMの濃度のメトトレキセートを用いる)に供した。得られた安定な細胞系をCD−PSGL−1(R3.4)と命名した。実施例7(A)のポリクローナル抗P−セレクチンリガンド蛋白抗体を用いる免疫沈降研究によりP−セレクチンリガンド蛋白の発現を確認した。CD−PSGL−1(R3.4)細胞系により産生されるP−セレクチンリガンド蛋白の機能を、実施例4(A)のごとくLEC−γ1への結合についてトランスフェクション体をアッセイすることにより試験した。
A.LEC−γ1結合アッセイ
キメラ形態のヒトIgGγ1(LEC−γ1)のFc部分に抱合したP−セレクチンをコードするDNAを、既知方法(Aruffo et al. Cell 67, 35-44 (1991))を用いて構築し、高レベルのキメラLEC−γ1蛋白の発現に関してdhfr−CHO細胞中に安定にトランスフェクションし、下記結合アッセイに使用するためにキメラLEC−γ1蛋白を精製した。
当該アッセイには、P−セレクチンリガンド遺伝子および3/4FT遺伝子で同時トランスフェクションされたCOS細胞表面に結合し、クラスターを形成しうる蛍光標識CHO:P−セレクチン細胞系(Laesen et al., J. Biol. Chem., 267, 11104-11110 (1992))を用いた。CHO:P−セレクチン細胞を1%ウシ胎児血清含有DME中1.5x106個/mlとなるよう懸濁し、6−カルボキシフルオレセイン二酢酸(6−CFD)を最終濃度100μg/mlとなるよう添加することにより標識した。37℃で15分インキュベーション後、細胞を培地で洗浄し、1x105個/mlとなるよう再懸濁した。洗浄されたCOSトランスフェクション体の入ったアッセイすべき各プレートに標識細胞5mlを添加し、室温で10分間インキュベーションした。培地で4回洗浄することにより非付着細胞除去した。ついで、付着CHO:P−セレクチン細胞のロゼットを求めて蛍光顕微鏡でプレートをスキャンした。
スクリーニングの最初の段階に用いたのと同じ手順により、実施例1のpMT21:PL85プラスミドおよび実施例2のpEA.3/4FTプラスミドでCOS細胞を同時トランスフェクションした。対照として、COS細胞をpMT21:PL85のみ、あるいはpEA.3/4FTのみ、あるいはインサートを含まない同様のプラスミド(「模擬」)でトランスフェクションした。トランスフェクションから24時間後、トランスフェクション細胞をトリプシン処理し、Costar6ウェル組織培養プレート中に分配した。既知方法を用いてCHO:P−セレクチン細胞を3H−チミジンで16時間標識し、ついで、1% BSAを含有するα培地(対照);1% BSA、5mM EDTAおよび5mM EGTAを含有するα培地;1% BSAおよび10μg/mlの中和抗P−セレクチンモノクローナル抗体を含有するα培地;ならびに1% BSAおよび非中和抗P−セレクチンモノクローナル抗体を含有するα培地中、1x106/mlとして個4℃で30分プレインキュベーションした。ついで、プレインキュベーションした細胞をトランスフェクションしたCOS細胞を含むウェルに添加した。インキュベーションから10分後、培地を4回注入することにより未結合細胞を除去した。トリプシン処理により結合CHO:P−セレクチン細胞を遊離させ、シンチレーションカウンティングにより定量した。
実施例1においてHL60細部からのcDNAライブラリーの製造に用いた
EcoRIアダプターはXbaI制限部位(TCTAGA)を配列番号:1の開始5'側に有し、それはpMT21:PL85プラスミド中にも存在する。可溶性形態のPSLを得るために、pMT21:PL85プラスミドをXbaIおよびHincII(配列番号:1のヌクレオチド944の後ろを開裂)で制限消化した。かくして約950bpのフラグメントが得られ、それはバリン295のコドンを含め、バリン295までのコードされるリガンドの細胞外セグメント全体を含んでいた。これを単離し、下記セクションAからDまでに示すようにして、可溶性形態のP−セレクチンリガンド蛋白をコードするDNAを得るために使用した。
フラグメントを精製し、Asn296からCys310までのコドンが再生成され、Cys310の直後に新たなストップコドンを導入された2本鎖合成オリゴヌクレオチドDNAとともに、哺乳動物発現ベクターpEDのXbaIおよびEcoRI部位間に連結した。当該オリゴヌクレオチドの配列は以下のごとし:
5'-AACTACCCAGTGGGAGCACCAGACCACATCTCTGTGAAGCAGTGCTAG (配列番号:12)
5'-AATTCTAGCACTGCTTCACAGAGATGTGGTCTGGTGCTCCCACTGGGTAGTT (配列番号:13)
得られたプラスミドをpED.sPSL.QCと命名し、そのプラスミドから発現される蛋白をsPSL.QCと命名した。
フラグメントを精製し、Asn296からGln309までのコドンが再生成され、Gln309の直後に新たなストップコドンを導入された2本鎖合成オリゴヌクレオチドDNAとともに、pEDプラスミド(Kaufman et al., 1991)のXbaIおよびEcoRI部位間に連結した。オリゴヌクレオチドの配列は以下のごとし:
5'-AACTACCCAGTGGGAGCACCAGACCACATCTCTGTGAAGCAGTAG (配列番号:14)
5'-AATTCTACTGCTTCACAGAGATGTGGTCTGGTGCTCCCACTGGGTAGTT (配列番号:15)
得られたプラスミドをpED.sPSL.Qと命名し、そのプラスミドから発現される蛋白をsPSL.Qと命名した。
ファージT7大カプシド蛋白由来のエピトープを含む14個のアミノ酸をコードするオリゴヌクレオチドを合成し、さらにベクター配列由来の32個のアミノ酸を用いてエピトープ「タグ」をC末端に融合させた。2つのオリゴヌクレオチドは下記配列:
5'-CTAGACCCGGGATGGCATCCATGACAGGAGGACAACAAATGGTAGGCCGTAG (配列番号:16) および
5'-AATTCTACGGCCTACCCATTTGTTGTCCTCCTGTCATGGATGCCATCCCGGGT (配列番号:17)
を有し、それらを2本鎖化し、哺乳動物発現プラスミドpEDの大XbaI−EcoRIフラグメントと連結した。得られたプラスミドpED.T7をXbaIおよびSmaIで制限消化し、上記950bpのXbaI−HincIIフラグメントに連結し、プラスミドpED.sPSL.T7を得た。
ヒト免疫グロブリンIgG1のFc部分に融合した可溶性の細胞外形態のP−セレクチンリガンド蛋白をコードするプラスミドDNAを以下のようにして構築した。哺乳動物発現ベクターpED.Fcは、ヒトIgG1のFc領域をコードする配列を含み、該配列はユニークなXbaI制限部位を介してヒンジ領域へのコーディング配列のアミノ末端の融合を可能にする新規リンカー配列を伴っている。3つのフラグメントの連結を行った。pED.FcをXbaIで制限消化し、直鎖状にしてゲル精製した。上記pMT21:PL85由来の950bpのフラグメントは第2のフラグメントを含んでいた。第3のフラグメントは、以下の配列を有するアニーリングされた合成オリゴヌクレオチドDNAからなっていた。
5' - CTGCGGCCGCAGT (配列番号:18)
5' - CTAGACTGCGGCCGCAG (配列番号:19)
A.COS細胞上に発現された全長P−セレクチンリガンド蛋白の結合特性
実施例2のpEA.3/4FTプラスミドおよび実施例1のpMT21:PL85プラスミドでのCOS細胞の同時トランスフェクションにより、CHO:P−セレクチン細胞に特異的に結合するCOS細胞を得る。この結合は、pEA.3/4FTおよびpMT21:PL85で同時トランスフェクションした場合にのみ観察される。いずれかのプラスミドのみの使用はCHO:P−セレクチン細胞に結合しないCHO細胞を生じる。P−セレクチンを発現しない親のCHO(DUKX)細胞系およびpEA.3/4FTおよびpMT21:PL85で同時トランスフェクションされたCOS細胞の間には結合は観察されない。同時トランスフェクション細胞およびCHO:P−セレクチン細胞の間の結合は、EDTAおよびEGTAのごとき2価イオンのキレーターに対して感受性があり、P−セレクチンにより媒介される細胞付着のCa++依存性と矛盾しない。中和抗P−セレクチンモノクローナル抗体は、CHO:P−セレクチン細胞とpEA.3/4FTおよびpMT21:PL85で同時トランスフェクションされたCHO細胞との間の結合をブロックしたが、非中和抗P−セレクチンモノクローナル抗体は結合に影響しなかった。抗体の結果は、COS細胞表面に発現されるP−セレクチンリガンド蛋白への結合にはP−セレクチンの機能的ドメインが必要であることを示す。
同時トランスフェクションCOS細胞の界面活性剤抽出物を以下のようにして調製した。同時トランスフェクションから45時間後、約1.5x107個の細胞を5mlの溶解バッファー(10mMピペラジン−N,N'−ビス[2−エタンスルホン酸](PIPES)pH7.5、100mM KCl、3mM MgCl2、1mMベンズアミジン、0.5μg/mlロイペプチン、0.75μg/mlペプスタチン、1mMエチレンジアミン、および1μg/mlアプロチニン)に懸濁した。低速遠心分離(500xg、10分)により細胞残渣を除去し、超遠心(100000xg、60分)により膜フラクションを集めた。高速遠心分離により得た膜ペレットを抽出バッファー(10mM 3−[N−モルホリノ]プロパンスルホン酸(MOPS)pH7.5、0.1M NaCl、0.02% NaN3、1% Thesit(登録商標)(Sigma),1mMベンズアミジン、0.5μg/mlロイペプチン、0.75μg/mlペプスタチン、1mMエチレンジアミン、および1μg/mlアプロチニン)に再懸濁した。ついで、以下のようにして試料をSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、ニトロセルロースブロットに移した。界面活性剤抽出物の一部を1% SDSローディングバッファーに懸濁し、100℃で5分間加熱し、ついで、8〜16%ポリアクリルアミドゲル(還元的)または6%ゲル(非還元的)にロードし、Laemmliバッファー系中で泳動した。Immobilon-P(登録商標)トランスファー膜を用いてブロットを調製した。ブロットを10mM MOPS pH7.5、0.1M NaCl、0.02% NaN3、1mM MgCl2、1mM CaCl2、および10%脱脂乳に、4℃で一晩浸した。ブロットを上記バッファー(乳不含)で1回すすぎ、ブロティングバッファー(10mM MOPS pH7.5、0.1M NaCl、1% ウシ血清アルブミン、0.05% Thesit、1mM MgCl2、1mM CaCl2)中、室温で30分インキュベーションした。
組み換えP−セレクチンリガンド上に共有結合した炭水化物の存在およびP−セレクチンへの結合におけるその役割を以下のようにして調べた。実施例5(C)のpED.sPSL.T7および実施例2のpEA.3/4FTプラスミドでCOS細胞を同時トランスフェクションした。48時間後、細胞に35S−メチオニンのパルスを与えた。200μlの35Sメチオニン標識sPSL.T7ならし培地を5μgのLEC−γ1とともに、2mM CaCl2および1mg/mlウシ血清アルブミン(BSA)の存在下でインキュベーションした。4℃で2時間回転撹拌した後、プロテインA−Sepharoseビーズ(Pharmacia)を4℃において1時間かけて添加し、遠心分離によりペレット化させ、2mM CaCl2および1mg/mlBSAを含有するTris緩衝化セイライン(20mM Tris−HCl、150mM NaCl pH7.5、以下TBSという)で2回洗浄した。ついで、ペレットを再懸濁し、ノイラミニダーゼ(Streptococcus pneumoniae)、O−グリカナーゼ、およびN−グリカナーゼ(すべてGenzymeから得た)で以下のようにして処理した。すべてのグリコシダーゼ消化を37℃で一晩行った。ノイラミニダーゼ消化には、ペレットを50μlの2−(モルホリノ)−エタンスルホン酸(MES)バッファー,pH6.5(Calbiochem)および0.1% SDS中に再懸濁し、95℃で5分間加熱し、ついで、ペレット化させた。上清を、1.4% n−オクチルβ−D−グルコピラノシド(OGP)、10mM酢酸カルシウム、20mMカコジル酸ナトリウムおよび2.5mM PMSFを含むようにし、最終pH7.0とした。8μlのノイラミニダーゼを添加して最終濃度1ユニット/mlとした。ノイラミニダーゼ/O−グリカナーゼ消化には、試料をノイラミニダーゼとともに上記のごとく調製し、さらにO−グリカナーゼを添加して最終濃度0.1ユニット/mlとした。N−グリカナーゼ消化には、ペレットを54μlのMESバッファーおよび1% SDSに再懸濁し、95℃で5分間加熱し、ついでペレット化させた。上清を、0.2Mリン酸ナトリウム、3.5% OGP、および2.5mM PMSFを含むようにし、最終pHを8.5とした。N−グリカナーゼを添加して最終濃度12ユニット/mlとし、上記のごとくインキュベーションした。
A.ポリクローナルウサギ抗P−セレクチンリガンド蛋白/マルトース結合蛋白融合蛋白
イー・コリにおいて得られた融合蛋白でウサギを免疫することにより抗P−セレクチンリガンドポリクローナル抗体を得た。融合蛋白は、P−セレクチンリガンドのアミノ末端側1/3(配列番号:1のアミノ酸1から110まで)がイン・フレームでマルトース結合蛋白に融合している(Maina, C. V. et al., Gene 74, 365-373 (1988); Riggs, P., in Current Protocols in Molecular Biology, F. M. Ausbel et al., Eds., Greene Associates/Wiley Interscience (New York, 1990) chapter 16.6)。ここに用いた条件下において、融合蛋白抗体はP−セレクチンリガンド蛋白を認識する。
下記スキームに従って、可溶性形態の本発明蛋白(sPSL.T7;実施例5(C)参照)を見かけ上均一にまで精製した。COS細胞を3つのプラスミド(それぞれsPSL.T7(実施例5(C))、3/4FT(実施例2)および可溶性形態のPACE(配列番号:5に示す)をコードしている)でトランスフェクションした。72時間後、ならし培地を集め、組み換えsPSL.T7を以下のようにして精製した。
A.コア2GlcNAcトランスフェラーゼをコードするcDNAの単離
コア2GlcNAcトランスフェラーゼをコードしているcDNAを、標準的な生物学的方法により単離した。公表されているヒトコア2配列(Bierhuizen, M. F. A., Fukuda, M., Proc. natl. Acad. Sci. 89, 9326-9330 (1992))に基づいて5'および3'末端における2つのオリゴヌクレオチドを設計した。HL60 cDNAライブラリーのプール(Sako, D., Cell 75, 1179-1186 (1993))を鋳型として用いて、標準的PCRプロトコールによりコア2コーディング配列を増幅した。PCR増幅されたフラグメントを精製し、pEDベクター中にサブクローンした。cDNAを単離するために、PCR反応において陽性のシグナルを発したプールをイー・コリ中に形質転換し、プレートに撒いた。形質転換体をニトロセルロースフィルター上に移し、標準的プロトコールに従って32P放射性標識PCRフラグメントとハイブリダイゼーションさせた。溶液クローンを拾い、再度プレートに撒くことにより精製した。cDNAおよびPCRクローンの配列をジデオキシ配列決定により確認した。
実施例3に従って作成した、全長のP−セレクチンリガンド蛋白および3/4FTフコシルトランスフェラーゼを発現する細胞系を、リン酸カルシウム法により、コア2 cDNAおよびネオマイシン耐性遺伝子(pMT4Neo)で同時トランスフェクションした。約2週間後、安定なG418耐性トランスフェクション体を単一単離体としてあるいはプールとして拾った。これらのトランスフェクション体を、1mg/mlのG418含有完全DMEM培地中で増殖させ、コア2酵素活性につき分析した(Higgins, E. A., et al., J. Biol. Chem. 266, 6280-6290 (1991))。コア2活性に関して陽性のコロニーまたはプールを、種々の方法によりP−セレクチンへのP−セレクチンリガンド結合に関して分析した。同様の方法で、P−セレクチンリガンド蛋白を発現する、あるいは3/4フコシルトランスフェラーゼおよびPACE酵素の両方とともに可溶性P−セレクチンリガンド蛋白を発現する細胞系(実施例3参照)を用いて、上記のごとく安定なコア2の同時トランスフェクション体を単離した。
P−セレクチン結合活性に対するコア2の影響を、3つの異なる方法により評価した。
4℃において、50mM Tris pH9.5中の1μg/mlの抗ヒトFc抗体で48ウェルプレートをコーティングした。HBSSバッファーで2回洗浄後、P−セレクチン/IgGキメラ(濃度0.1〜1μg/ml、実施例5)を4℃で一晩HBSSバッファー中にプレーティングした。4℃で3ないし4時間プレートをBSAでブロックした。可溶性P−セレクチンリガンド蛋白の場合、同じバッファー中の蛋白を直接プレートにコーティングした。3H標識CHO細胞を2mM EGTAでリフトし、PBSで3回洗浄し、最終濃度106個/mlとして再懸濁した。この懸濁液の300μlの部分試料を各ウェルに添加した(300000個/ウェル)。室温で12時間インキュベーション後、ウェルを無血清DMEMで4回洗浄して未結合細胞を除去した。結合細胞を5mM EGTAでリフトし、シンチレーションカウンターでカウントした。無処理のP−セレクチンリガンド蛋白結合に関する陽性対照として使用するU937細胞をガンマグロブリン(5mg/ml)で前処理して内在性Fc受容体をブロックし、ついで、P−セレクチンIgGキメラに結合させた。比較結合データを図1に示す。
形質転換体から調製された組み換え全長または可溶性P−セレクチンリガンド蛋白(さらにコア2を伴うもの、あるいは伴わないもの)を35S−メチオニンで標識し、ついで、実施例7および5ならびにSako, D., Cell 175, 1179-1186 (1993)にすでに記載のごとく、抗P−セレクチンリガンド蛋白ポリクローナル抗体またはP−セレクチン/IgGキメラのいずれかと免疫沈降させた。データを図2に示す。
安定なネズミP−セレクチンリガンド蛋白トランスフェクション体(コア2を伴うもの、あるいは伴わないもの)を、P−セレクチン/IgGキメラ(LecY1)(実施例5)または抗P−セレクチンリガンド蛋白モノクローナル抗体(Mab275、配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸56までの配列を有するペプチドに対して生成)のいずれかを用いる標準的なFACS法により分析した。両方の試薬をFITC標識プロテインAに前以て抱合させた。2mM CaCl2存在下においてこの抱合体とともに4℃で30分インキュベーション後に、細胞を分析した。データを図3に示す。
Bevilacqua et al., Science, 243:1160 (1989)に報告されている配列のアミノ酸−21から536までを含むE−セレクチンをコードしているDNAを用いて、P−セレクチン/IgGキメラに関して実施例5で説明したようにしてE−セレクチン/IgGキメラを作成した。
A.DNA構築物の製造
以下のようにして、末端切断形態のP−セレクチンリガンド蛋白−IgGキメラを得た。プラスミドpED.PSL.FcをPstIおよびNotIで制限消化し、Fc部分を含む6kbのフラグメントおよびベクターpEDFc6kbをゲル精製した。プラスミド構築物pED.149.Fc、pED.47.FcおよびpED.19.Fcを、標準的なPCR法により、下記のオリゴヌクレオチドプライマーのペアーを用いて作成した。
すべての構築物用の「上流」プライマー:
5'-CCAGGTCCAACTGCAGGTCGACTCTAGAGGGCACTTCTTCTGGGCCCACG-3' (配列番号:20)
148Fc用の「下流」プライマー:
5'-TATTATCTGTGCGGCCGCCCTCCAGAACCCATGGCTGCTGGTTGCAGTGG-3' (配列番号:21)
47Fc用の「下流」プライマー:
5'-TATTATCTGTGCGGCCGCGCAGCAGGCTCCACAGTGGTAG-3' (配列番号:22)
19Fc用の「下流」プライマー:
5'-TATTATCTGTGCGGCCGCGGAGGCTCCGTTTCTGGCAG-3' (配列番号:23)
ΔY148用:5'-CGGAGACAGGCCACCGAATTCCTGCCAGAAACG-3' (配列番号:24)
H24用:5'-CCTCCAGAAATGCTGAGGCACAGCACTGACACCACTCCTC-3' (配列番号:25)
Q70用:5'-GAGCTGGCCAACATGGGGCAACTGTCCACGGATTCAGCAG-3' (配列番号:26)
5'-AATTCGAGTTCCTAGATTTTG-3' (配列番号:27) および
5'-AATTCAAAATCTAGGAACTCG-3' (配列番号:28).
pED.FYYD.19.Fc、pED.FFYD.19.FcおよびpED.FFFD.19.Fcの構築物を作成した。
5'-AATTCGAGTACCTAGATTATGATTTCCTGCCAGAAACTGAGCCTCCGC-3' (配列番号:29) および
5'-GGCCGCGGAGGCTCAGTTTCTGGCAGGAAATCATAATCTAGGTACTCG-3' (配列番号:30);
pED.FFYD.19.Fc用:
5'-AATTCGAGTTCCTAGATTATGATTTCCTGCCAGAAACTGAGCCTCCGC-3' (配列番号:31) および
5'-GGCCGCGGAGGCTCAGTTTCTGGCAGGAAATCATAATCTAGGAACTCG-3' (配列番号:32);
pED.FFFD.19.Fc用:
5'-AATTCGAGTTCCTAGATTTCGATTTCCTGCCAGAAACTGAGCCTCCGC-3' (配列番号:33) および
5'-GGCCGCGGAGGCTCAGTTTCTGGCAGGAAATCGAAATCTAGGAACTCG-3' (配列番号:34).
種々の変異形態の可溶性PSGL−1/Fcキメラをコードする個々のDNAを、実施例3(C)に記載のごとく、pEA.3/4FTおよびPACE cDNAとともにCOS細胞中に同時トランスフェクションした。約107個のCOS細胞からトランスフェクション40〜64時間後に集めた無血清培地50mlを、2mM CaCl2を捕捉したTBSで平衡化した0.25mlのプロテインAセファロース(Pharmacia)カラムにより精製した。20mlのTBS/CaCl2で洗浄後、0.5mlの0.1M酢酸、0.15M NaCl、2mM CaCl2で結合物質を溶離させた。溶離した物質を1/20倍体積の3M Tris pH9.0で中和した。280nmの吸光度を測定し、PAGE/SDS/Laemmliゲルのクーマシーブルー染色により溶離物質を定量した。
3種のP−セレクチンリガンド−IgGキメラを発現する構築物を構築して、セレクチン結合に対するN−結合糖鎖付加部位の影響を調べた。これらの構築物は下記配列を有する。
可溶性蛋白のアニオン性領域の変化によるP−セレクチンリガンド蛋白のセレクチンへの結合におけるチロシンの役割を調べるために構築物を作成した。下記構築物を作成した。
いくつかのさらなるC末端欠失構築物を下記のように作成した。
254.Fc 配列番号:2のアミノ酸42〜295。
47.Fc 配列番号:2のアミノ酸42〜88。
19.Fc 配列番号:2のアミノ酸42〜60。
これらの構築物を図式的に図12に示す。
実施例4(C)の定量的プレート結合アッセイを用いて、P−セレクチンおよびE−セレクチンを発現する細胞への上記の種々の構築物の結合を比較した(図13において図式的に説明する)。
これらのデータから、P−セレクチンリガンド蛋白によるP−セレクチン結合およびE−セレクチン結合の間の関係に関するいくつかの結論が導かれる。N−結合炭水化物はP−またはE−セレクチンへのP−セレクチンリガンド蛋白の結合には必要ない。配列番号:2のアミノ酸42〜60程度の小さいP−セレクチンリガンド蛋白はP−セレクチンへの結合能を有し、E−セレクチンには実質的にほとんど結合しない。
部位特異的突然変異法および/またはストップコドンを導入されたプライマーを用いるPCR増幅により一群のPSGL−1変異体を構築した。すべての変異体実験のための鋳型はpPL85.R16(ATCC 75577、出願人により寄託)であった。
1.トランスフェクションCOS細胞からの発現および分泌
2.モノマー形成対ダイマー形成
3.凝集形態の欠如
4.P−セレクチン結合(LEC−γ1キメラ)
材料. ヒトE−セレクチンの細胞外ドメインおよびヒトIgG1のFc部分を含むキメラ蛋白を、先に説明したP−セレクチンキメラ、LEC−γ1と同様にして構築した。バキュロウイルスに感染したトリコプルシア・ニ(Trichoplusia ni)ハイ・ファイブ(high five)細胞(Invitrogen)において可溶性E−セレクチンキメラを発現させ、プロテインAセファロースクロマトグラフィーにより均一に精製した。それぞれα(1,3/1,4)−フコシルトランスフェラーゼ(Fuc−TIII)、PSGL−1、CD43(ロイコシアリン)、および可溶性の対になったアミノ酸変換酵素(PACE)をCOSで発現させるためのプラスミドベクターpEQA.3/4FT、pPL85、pFCD43、およびpEA.sPACEは本明細書ならびに文献においても記載されている(Sako et al. (1993) Cell 75, 1179-1186; Rehemtulla, A. & Kaufman, R. J. (1992) Curr. Opin. Biotechnol. 3, 560-565; Wasley et al. (1993) J. Biol. Chem. 268, 8458-8465)。公表された配列(Natsuka et al. (1994) Journal of Biological Chemistry 269, 16789-16794; Sasaki et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 14730-14737)由来のオリゴヌクレオチドプローブを用いて、Fuc−TVII cDNA(プラスミドpMT.FT7)をHL60 cDNA発現ライブラリーからクローン化した。成熟(PACE開裂)PSGL−1のN末端の最初の15個のアミノ酸を含むペプチドに対してポリクローナル中和ウサギ抗体Rb3443を生成させた。モノクローナル抗CD43抗体(Becton DickinsonまたはBiodesign Internationalから得た)およびイソタイプ対照抗体を、アフィニティー精製されたヤギの抗体(マウスIgGに対するもの)(Cappel, Organon Teknik Corporation)が共有結合しているセファロースTM−4Bからなる固体支持体にカップリングさせた。セレクチンキメラおよびネズミ抗体の、プロテインAセファロース4ファストフロー(Pharmacia)および抗マウスIgG樹脂へのそれぞれのアフィニティーカップリングを、樹脂1mlあたり2mgの蛋白の割合で行った。抗血清Rb3443をプロテインAセファロースに、樹脂1mlに1mgの割合でカップリングさせた。反応後の上清についてのミクロ−BCAアッセイ(Pierce)により示されるカップリング効率は少なくとも95%であった。アプロチニンおよびペプスタチンはBoehringer Mannheimから得て、ベンズアミジン、ロイペプチン、およびフッ化フェニルメチルスルホニル(PMSF)はSigmaから得た。
対照ヒトIgG1と並行して、可溶性E−およびP−セレクチンキメラを用いて、下記の「方法」において説明するようにして3H−グルコサミン標識U937細胞の界面活性剤可溶化膜抽出物をプローブした。固定化セレクチンからの溶離物についてのSDS−PAGE/オートラジオグラフィーによる試験(図26)により、P−セレクチン溶離物およびE−セレクチン溶離物の両方における主要蛋白種の存在が明らかとなり、その電気泳動特性は下記のごとし。非還元的条件下では分子量200kDaであり、還元により分子量120kDaの種に変換される(図26、それぞれレーン2および3)。場合によっては、P−セレクチン溶離物およびE−セレクチン溶離物の両方においてさらなるバンドが観察され、おそらく、この主要バンドに対応するものであり、自然に還元された物質の存在(非還元試料中の120kDa種)および不完全な還元(還元試料中の200kDa)を反映していた。さらに、DTTでの還元により影響されないE−セレクチン溶離物中の分子量150kDaの痕跡バンドが場合によって観察された。固定化ヒトIgG1を用いた対照実験(図26、レーン1)、あるいはセレクチン樹脂の溶離をEDTAまたはSDSの不存在下で行った実験(データ示さず)においてはバンドは観察されなかった。HL60細胞を用いた場合にも本質的に同一の結果が得られた(データ示さず)。それゆえ、これらの認識の性質は、これらの蛋白と各セレクチンとのレクチンドメインを介する特異的な金属依存性相互作用であると解釈される(Lasky, L. A. (1992) Science 258, 964-969; Drickamer, K. (1988) J. Biol. Chem. 263, 9557)。
PSGL−1の配列(配列番号:2)由来の多くのペプチドを、P−セレクチン/PSGL−1結合を阻害する能力に関して試験した。試験したペプチドを図30に記載する。
可溶性形態のP−セレクチンリガンド蛋白の実質的な精製を下記プロトコールに従って行った。
異なるアミノ酸配列を有する、4種のP−セレクチンリガンド蛋白融合物を構築した。それらは47.Fc、47.AGP、47.BMPおよび47.IL11であった。
Claims (38)
- (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88までを含む第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)抗体のFc配列を含む第2のアミノ酸配列、ここで、Fc配列のアミノ酸Leu234およびGly237はアラニンに変化している;
を含む融合蛋白をコードする単離DNA。 - 該ヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列をさらに含む請求項1のDNA。
- 請求項2のDNAで形質転換された宿主細胞。
- (a)融合蛋白の発現に適した条件下で請求項3の宿主細胞を培養し;ついで、
(b)融合蛋白を培地から精製する
ことを含む、融合蛋白の製造方法。 - 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸402までを含むものである請求項1のDNA。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸310までを含むものである請求項1のDNA。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸189までを含むものである請求項1のDNA。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸118までを含むものである請求項1のDNA。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88までを含むものである請求項1のDNA。
- 該第2のアミノ酸配列が該第1のアミノ酸配列のC末端に連結されているものである請求項1のDNA。
- 該配列が連結配列により連結されているものである請求項10のDNA。
- 該第2のアミノ酸配列が該第1のアミノ酸配列のN末端に連結されているものである請求項1のDNA。
- 該配列が連結配列により連結されているものである請求項12のDNA。
- 配列番号:35のヌクレオチド123からヌクレオチド939までのヌクレオチド配列を含む請求項9のDNA。
- 配列番号:35のヌクレオチド配列を含む請求項14のDNA。
- 抗体のFc部分の配列がヒト抗体に由来するものである請求項1のDNA。
- 該ヒト抗体がアイソタイプIgG1である、請求項16のDNA。
- 該ヒト抗体がアイソタイプIgMである、請求項16のDNA。
- (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88までを含む第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)抗体のFc配列を含む第2のアミノ酸配列、ここで、Fc配列のアミノ酸Leu234およびGly237はアラニンに変化している;
を含む融合蛋白。 - 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸402までを含むものである請求項19の融合蛋白。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸310までを含むものである請求項19の融合蛋白。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88までを含むものである請求項19の融合蛋白。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸118までを含むものである請求項19の融合蛋白。
- 該第1のアミノ酸配列が配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸189までを含むものである請求項19の融合蛋白。
- 該第2のアミノ酸配列が該第1のアミノ酸配列のC末端に連結されているものである請求項19の融合蛋白。
- 該配列が連結配列により連結されているものである請求項25の融合蛋白。
- 該第2のアミノ酸配列が該第1のアミノ酸配列のN末端に連結されているものである請求項19の融合蛋白。
- 該配列が連結配列により連結されているものである請求項27の融合蛋白。
- 配列番号:36のアミノ酸42からアミノ酸313までのアミノ酸配列を含む請求項22の融合蛋白。
- 配列番号:36のアミノ酸配列を含む請求項29の融合蛋白。
- 抗体のFc部分の配列がヒト抗体に由来するものである、請求項19の融合蛋白。
- 該ヒト抗体がアイソタイプIgG1である、請求項31の融合蛋白。
- 該ヒト抗体がアイソタイプIgMである、請求項31の融合蛋白。
- 請求項4の方法により製造される融合蛋白。
- (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88からなる第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)P−セレクチンリガンド以外の蛋白の配列に由来する第2のアミノ酸配列;
を含む融合蛋白をコードする単離DNA。 - (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88からなる第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)P−セレクチンリガンド以外の蛋白の配列に由来する第2のアミノ酸配列;
を含む融合蛋白。 - (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88からなる第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)抗体のFc配列を含む第2のアミノ酸配列、ここで、Fc配列のアミノ酸Leu234およびGly237はアラニンに変化している;
を含む融合蛋白をコードする単離DNA。 - (a)配列番号:2のアミノ酸42からアミノ酸88からなる第1のアミノ酸配列、ここで、該第1のアミノ酸配列はP−セレクチンに結合するものであり;および
(b)抗体のFc配列を含む第2のアミノ酸配列、ここで、Fc配列のアミノ酸Leu234およびGly237はアラニンに変化している;
を含む融合蛋白。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/713,556 US6277975B1 (en) | 1992-10-23 | 1996-08-30 | Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007271396A Division JP2008099695A (ja) | 1996-08-30 | 2007-10-18 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012014311A Division JP2012110338A (ja) | 1996-08-30 | 2012-01-26 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009060914A true JP2009060914A (ja) | 2009-03-26 |
Family
ID=24866600
Family Applications (4)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51168298A Expired - Fee Related JP4145356B2 (ja) | 1996-08-30 | 1997-08-29 | P―セレクチンリガンド蛋白 |
JP2007271396A Withdrawn JP2008099695A (ja) | 1996-08-30 | 2007-10-18 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
JP2008266326A Ceased JP2009060914A (ja) | 1996-08-30 | 2008-10-15 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
JP2012014311A Withdrawn JP2012110338A (ja) | 1996-08-30 | 2012-01-26 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP51168298A Expired - Fee Related JP4145356B2 (ja) | 1996-08-30 | 1997-08-29 | P―セレクチンリガンド蛋白 |
JP2007271396A Withdrawn JP2008099695A (ja) | 1996-08-30 | 2007-10-18 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012014311A Withdrawn JP2012110338A (ja) | 1996-08-30 | 2012-01-26 | P−セレクチンリガンド蛋白 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US6277975B1 (ja) |
EP (1) | EP0929670A1 (ja) |
JP (4) | JP4145356B2 (ja) |
AU (1) | AU4149297A (ja) |
CA (1) | CA2263889C (ja) |
MX (1) | MXPA99001912A (ja) |
WO (1) | WO1998008949A1 (ja) |
Families Citing this family (63)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6277975B1 (en) * | 1992-10-23 | 2001-08-21 | Genetics Institute, Inc. | Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same |
WO1999043834A2 (en) * | 1998-02-27 | 1999-09-02 | Genetics Institute, Inc. | P-selectin ligand protein, including tetrameric fusion proteins |
MXPA01004310A (es) * | 1998-10-30 | 2003-06-06 | Cbr Lab Inc | Inhibicion de diferenciacion de celulas t citotoxicas mediante antagonistas de ligando de p-selectina (psgl). |
US6451969B1 (en) * | 1999-01-15 | 2002-09-17 | The Burnham Institute | Methods for inhibiting tumor metastasis, and peptides useful therfor |
GB0003092D0 (en) | 2000-02-10 | 2000-03-29 | Glaxo Group Ltd | Superficial zone protein-binding molecules and uses thereof |
AU2001249372A1 (en) * | 2000-03-23 | 2001-10-03 | Greenville Hospital System | Bi-functional cancer treatment agents |
DK1681298T3 (da) * | 2000-03-27 | 2010-06-14 | Genetics Inst Llc | Fremgangsmåder til oprensning af særdeles anioniske proteiner |
US20030166521A1 (en) * | 2000-03-31 | 2003-09-04 | Eppihimer Michael J. | Inhibition of thrombosis by treatment with P-selectin antagonists |
AR035779A1 (es) * | 2001-02-06 | 2004-07-14 | Genetics Inst Llc | Polipeptidos de fusion derivados de glicoproteina ib alfa de plaqueta y metodos de uso de los mismos |
JP2005500018A (ja) * | 2001-04-02 | 2005-01-06 | アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション | GnTIIIと同時発現する組換え抗体 |
NZ530025A (en) * | 2001-06-05 | 2005-06-24 | Inst Genetics Llc | Methods for purifying highly anionic proteins |
CA2483476A1 (en) * | 2002-04-22 | 2003-10-30 | Absorber, Ab | Fusion polypeptides and methods for inhibiting microbial adhesion |
JP5183010B2 (ja) | 2002-05-16 | 2013-04-17 | グリコミメティクス, インコーポレイテッド | セレクチンによって媒介される機能を阻害するための化合物および方法 |
CA2490703A1 (en) * | 2002-07-03 | 2004-01-15 | Glycomimetics, Inc. | Compositions and methods for diagnosis and therapy of medical conditions involving angiogenesis |
EP1553975B8 (en) * | 2002-09-27 | 2023-04-12 | Xencor, Inc. | Optimized fc variants and methods for their generation |
US20040219158A1 (en) * | 2003-05-02 | 2004-11-04 | Glycomimetics, Inc. | Compositions and methods for diagnosis and therapy of medical conditions involving infection with pseudomonas bacteria |
EP2522677A1 (en) * | 2003-06-11 | 2012-11-14 | Wyeth LLC | Platelet glycoprotein IB alpha variant fusion polypeptides and methods of use thereof |
US7459523B2 (en) * | 2003-11-12 | 2008-12-02 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Equine P-selectin glycoprotein ligand-1 and uses thereof |
JP2007524658A (ja) * | 2003-11-19 | 2007-08-30 | グリコミメティクス, インコーポレイテッド | E−およびp−セレクチンの両方のための糖模倣物アンタゴニスト |
ATE383367T1 (de) * | 2003-11-19 | 2008-01-15 | Glycomimetics Inc | Spezifischer antagonist sowohl für e- als auch p- selektine |
US8201377B2 (en) * | 2004-11-05 | 2012-06-19 | Faus Group, Inc. | Flooring system having multiple alignment points |
US7807636B1 (en) * | 2004-11-12 | 2010-10-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Bovine P-selectin glycorpotein ligand-1 |
WO2006127906A1 (en) * | 2005-05-25 | 2006-11-30 | Glycomimetics, Inc. | Heterobifunctional compounds for selectin inhibition |
ES2375979T3 (es) * | 2005-08-09 | 2012-03-07 | Glycomimetics, Inc. | Inhibidores glicomiméticos de la lectina pa-il, lectina pa-iil o ambas lectinas de pseudomonas. |
CN103626813B (zh) | 2005-09-02 | 2017-05-03 | 糖模拟物有限公司 | 异型双功能全选择素抑制剂 |
WO2007067983A2 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Wyeth | Sulfotyrosine specific antibodies and uses therefor |
WO2007067984A2 (en) * | 2005-12-09 | 2007-06-14 | Wyeth | Neutralizing antibodies against primate psgl-1 and uses therefor |
WO2007143052A1 (en) * | 2006-06-01 | 2007-12-13 | Glycomimetics, Inc. | Galactosides and thiodigalactosides as inhibitors of pa-il lectin from pseudomonas |
JP5298020B2 (ja) | 2006-10-12 | 2013-09-25 | グリコミメティクス, インコーポレイテッド | ヘキソースおよびn−アセチルヘキソサミンの糖模倣体置換 |
CA2677747A1 (en) * | 2007-02-09 | 2008-08-21 | Glycomimetics, Inc. | Methods of use of glycomimetics with replacements for hexoses and n-acetyl hexosamines |
US8039442B2 (en) * | 2007-07-18 | 2011-10-18 | Glycomimetics, Inc. | Compounds and methods for treatment of sickle cell disease or complications associated therewith |
WO2009126556A1 (en) | 2008-04-08 | 2009-10-15 | Glycomimetics, Inc. | Pan-selectin inhibitor with enhanced pharmacokinetic activity |
WO2009136298A2 (en) * | 2008-05-09 | 2009-11-12 | Recopharma Ab | Compositions and methods for inhibiting shiga toxin and shiga-like toxin |
EP2291536A4 (en) * | 2008-05-15 | 2013-02-27 | Selexys Pharmaceuticals Corp | ANTI-PSGL-1 ANTIBODIES AND METHODS OF IDENTIFICATION AND USE THEREOF |
EP2318015B1 (en) * | 2008-06-13 | 2013-08-07 | GlycoMimetics, Inc. | Treatment of cancers of the blood using selected glycomimetic compounds |
JP5726171B2 (ja) | 2009-05-01 | 2015-05-27 | グリコミメティックス インコーポレイテッド | E−セレクチンおよびcxcr4ケモカイン受容体のヘテロ二官能性阻害剤 |
US20120237000A1 (en) | 2009-09-17 | 2012-09-20 | Alara Group Pty. Ltd. | coverlet |
WO2011062786A2 (en) * | 2009-11-06 | 2011-05-26 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Compounds and methods for inhibiting the metastasis of cancer cells |
CN103140237A (zh) | 2010-07-09 | 2013-06-05 | 比奥根艾迪克依蒙菲利亚公司 | 因子ix多肽及其使用方法 |
WO2012037034A1 (en) | 2010-09-14 | 2012-03-22 | Glycomimetics, Inc. | E-selectin antagonists |
JP2012136503A (ja) | 2010-10-14 | 2012-07-19 | Sumitomo Chemical Co Ltd | 有害生物防除用組成物及び有害生物防除方法 |
WO2013082200A1 (en) * | 2011-11-28 | 2013-06-06 | Shaw Gray D | Novel enhanced selectin antagonists |
US9109002B2 (en) | 2011-12-22 | 2015-08-18 | Glycomimetics, Inc. | E-selectin antagonist compounds, compositions, and methods of use |
ES2668045T3 (es) | 2012-12-07 | 2018-05-16 | Glycomimetics, Inc. | Compuestos, composiciones y métodos que usan antagonistas de la E-selectina para la movilización de las células hematopoyéticas |
TWI621616B (zh) | 2013-01-31 | 2018-04-21 | 住友化學股份有限公司 | 有害生物防治組成物及有害生物之防治方法 |
TWI788044B (zh) | 2013-03-15 | 2022-12-21 | 美商百歐維拉提夫治療公司 | 因子ix多肽調配物 |
CA2953706A1 (en) | 2014-07-08 | 2016-01-14 | Sanford-Burnham Medical Research Institute | Psgl-1 modulators and uses thereof |
EP3227310B1 (en) | 2014-12-03 | 2019-07-31 | GlycoMimetics, Inc. | Heterobifunctional inhibitors of e-selectins and cxcr4 chemokine receptors |
US11208444B2 (en) * | 2015-03-05 | 2021-12-28 | Idea Seed, LLC. | BRCA2-mediated purification of recombinase protein |
WO2016141390A1 (en) * | 2015-03-05 | 2016-09-09 | Michael Longo | Recombinase purification |
US11045485B2 (en) | 2016-01-22 | 2021-06-29 | Glycomimetics, Inc. | Glycomimetic inhibitors of PA-IL and PA-IIL lectins |
KR20180104166A (ko) | 2016-02-09 | 2018-09-19 | 브라코 스위스 에스.에이. | 셀렉틴 표적화를 위한 재조합 키메라 단백질 |
US11291678B2 (en) | 2016-03-02 | 2022-04-05 | Glycomimetics, Inc | Methods for the treatment and/or prevention of cardiovascular disease by inhibition of E-selectin |
WO2018031445A1 (en) | 2016-08-08 | 2018-02-15 | Glycomimetics, Inc. | Combination of t-cell checkpoint inhibitors with inhibitors of e-selectin or cxcr4, or with heterobifunctional inhibitors of both e-selectin and cxcr4 |
JP7069136B2 (ja) | 2016-10-07 | 2022-05-17 | グリコミメティクス, インコーポレイテッド | 極めて強力な多量体e-セレクチンアンタゴニスト |
EP3568159A4 (en) | 2017-01-11 | 2020-08-05 | Bristol-Myers Squibb Company | PSGL-1 ANTAGONISTS AND USES THEREOF |
JP7065105B2 (ja) | 2017-02-09 | 2022-05-11 | ブラッコ・スイス・ソシエテ・アノニム | 可溶性psgl-1タンパク質変異体の精製のための方法 |
MY200609A (en) | 2017-03-14 | 2024-01-05 | Five Prime Therapeutics Inc | Antibodies binding to vista at acidic ph |
EP3596096A1 (en) | 2017-03-15 | 2020-01-22 | GlycoMimetics, Inc. | Galactopyranosyl-cyclohexyl derivatives as e-selectin antagonists |
US11712446B2 (en) | 2017-11-30 | 2023-08-01 | Glycomimetics, Inc. | Methods of mobilizing marrow infiltrating lymphocytes and uses thereof |
WO2019133878A1 (en) | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Glycomimetics, Inc. | Heterobifunctional inhibitors of e-selectin and galectin-3 |
AU2019230013A1 (en) | 2018-03-05 | 2020-09-10 | Glycomimetics, Inc. | Methods for treating acute myeloid leukemia and related conditions |
US11845771B2 (en) | 2018-12-27 | 2023-12-19 | Glycomimetics, Inc. | Heterobifunctional inhibitors of E-selectin and galectin-3 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08502886A (ja) * | 1992-10-23 | 1996-04-02 | ジェネティックス・インスティテュート・インコーポレイテッド | 新規p−セレクチンリガンド蛋白質 |
Family Cites Families (28)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4657853A (en) * | 1984-09-14 | 1987-04-14 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoassays utilizing covalent conjugates of polymerized enzyme and antibody |
US4675285A (en) * | 1984-09-19 | 1987-06-23 | Genetics Institute, Inc. | Method for identification and isolation of DNA encoding a desired protein |
JPS6175262A (ja) | 1984-09-21 | 1986-04-17 | Teijin Ltd | 免疫複合体測定用試薬及びそれを用いた免疫複合体の測定法 |
WO1990001546A1 (en) | 1988-08-05 | 1990-02-22 | Applied Biotechnology, Inc. | Equine herpesvirus-1 vaccine |
US5198424A (en) | 1989-03-08 | 1993-03-30 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Functionally active selectin-derived peptides |
US5464778A (en) * | 1989-03-08 | 1995-11-07 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Glycoprotein ligand for P-selectin and methods of use thereof |
US5378464A (en) | 1989-03-08 | 1995-01-03 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Modulation of inflammatory responses by administration of GMP-140 or antibody to GMP-140 |
US5118791A (en) * | 1989-05-25 | 1992-06-02 | Genentech, Inc. | Biologically active polypeptides based on transforming growth factor-β |
WO1991000868A1 (en) | 1989-07-07 | 1991-01-24 | National Research Development Corporation | Immobilised polynucleotides |
WO1991006632A1 (en) | 1989-10-20 | 1991-05-16 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Inhibition of padgem-mediated cell binding |
CA2086323C (en) | 1990-07-17 | 2002-05-14 | Rodger P. Mcever | Functionally active selectin-derived peptides and ligand for gmp-140 |
JP3011987B2 (ja) | 1990-10-11 | 2000-02-21 | 旭化成工業株式会社 | 固相化プライマーを用いる逆転写酵素の測定法 |
DK0574402T3 (da) * | 1990-11-26 | 1998-05-18 | Chiron Corp | Ekspression af PACE i værtsceller og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
WO1992016612A2 (en) | 1991-03-11 | 1992-10-01 | New England Medical Center Hospitals, Inc. | Method of inhibiting padgem-mediated interactions using an inhibitor comprising a 2,6 sialic acid component |
EP0584229B1 (en) | 1991-05-06 | 2003-07-23 | Genentech, Inc. | A selectin ligand |
US5318890A (en) | 1991-05-06 | 1994-06-07 | The Regents Of The University Of California | Assays for inhibitors of leukocyte adhesion |
US5437976A (en) | 1991-08-08 | 1995-08-01 | Arizona Board Of Regents, The University Of Arizona | Multi-domain DNA ligands bound to a solid matrix for protein and nucleic acid affinity chromatography and processing of solid-phase DNA |
WO1993004199A2 (en) | 1991-08-20 | 1993-03-04 | Scientific Generics Limited | Methods of detecting or quantitating nucleic acids and of producing labelled immobilised nucleic acids |
BR9206705A (pt) | 1991-11-01 | 1995-11-21 | Adelaide Children S Hospital | Processo de amplificação de fase sólida |
RU2186852C2 (ru) | 1991-12-24 | 2002-08-10 | Тепнел Медикал Лимитед | Способ выполнения манипуляции с последовательностью нуклеиновой кислоты, устройство для проведения манипуляций на последовательности нуклеиновой кислоты, проточный сосуд, твердый носитель для иммобилизации последовательности нуклеиновой кислоты, твердый носитель, способ получения носителя для иммобилизации последовательности нуклеиновой кислоты |
JPH08500722A (ja) | 1992-01-29 | 1996-01-30 | 日立化成工業株式会社 | ポリヌクレオチド固定化担体 |
US5360733A (en) | 1992-10-01 | 1994-11-01 | La Jolla Cancer Research Foundation | Human β1-6 n-acetylglucosaminyl transferase |
US6277975B1 (en) | 1992-10-23 | 2001-08-21 | Genetics Institute, Inc. | Fusions of P-selectin ligand protein and polynucleotides encoding same |
US5843707A (en) | 1992-10-23 | 1998-12-01 | Genetics Institute, Inc. | Nucleic acid encoding a novel P-selectin ligand protein |
WO1994011498A1 (en) | 1992-11-16 | 1994-05-26 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma | Glycoprotein ligand for p-selectin and methods of use thereof |
WO1995030001A2 (en) * | 1994-04-28 | 1995-11-09 | Genetics Institute, Inc. | Novel p-selectin ligand protein |
US5614615A (en) | 1995-03-21 | 1997-03-25 | The Scripps Research Institute | Sialyl Lewis X mimetics incorporating fucopeptides |
AU723262B2 (en) | 1995-08-03 | 2000-08-24 | Board Of Regents Of The University Of Oklahoma, The | Peptide and O-glycan inhibitors of selectin mediated inflammation |
-
1996
- 1996-08-30 US US08/713,556 patent/US6277975B1/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-08-29 JP JP51168298A patent/JP4145356B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-29 EP EP97939394A patent/EP0929670A1/en not_active Ceased
- 1997-08-29 WO PCT/US1997/014159 patent/WO1998008949A1/en not_active Application Discontinuation
- 1997-08-29 MX MXPA99001912A patent/MXPA99001912A/es not_active IP Right Cessation
- 1997-08-29 CA CA002263889A patent/CA2263889C/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-08-29 AU AU41492/97A patent/AU4149297A/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-08-21 US US09/935,144 patent/US7563760B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-10-18 JP JP2007271396A patent/JP2008099695A/ja not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-07-03 US US12/167,705 patent/US8232252B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-07-03 US US12/167,680 patent/US7927835B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2008-07-03 US US12/167,663 patent/US20090104180A1/en not_active Abandoned
- 2008-10-15 JP JP2008266326A patent/JP2009060914A/ja not_active Ceased
-
2012
- 2012-01-26 JP JP2012014311A patent/JP2012110338A/ja not_active Withdrawn
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH08502886A (ja) * | 1992-10-23 | 1996-04-02 | ジェネティックス・インスティテュート・インコーポレイテッド | 新規p−セレクチンリガンド蛋白質 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US6277975B1 (en) | 2001-08-21 |
JP4145356B2 (ja) | 2008-09-03 |
US20090104180A1 (en) | 2009-04-23 |
CA2263889A1 (en) | 1998-03-05 |
US7927835B2 (en) | 2011-04-19 |
US20030018181A1 (en) | 2003-01-23 |
US20080280327A1 (en) | 2008-11-13 |
JP2012110338A (ja) | 2012-06-14 |
MXPA99001912A (es) | 2003-07-21 |
US8232252B2 (en) | 2012-07-31 |
US7563760B2 (en) | 2009-07-21 |
EP0929670A1 (en) | 1999-07-21 |
US20090028883A1 (en) | 2009-01-29 |
WO1998008949A1 (en) | 1998-03-05 |
CA2263889C (en) | 2007-10-23 |
JP2001500370A (ja) | 2001-01-16 |
JP2008099695A (ja) | 2008-05-01 |
AU4149297A (en) | 1998-03-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4145356B2 (ja) | P―セレクチンリガンド蛋白 | |
US5840679A (en) | Method of inhibiting P-selectin ligand activity | |
JP4237711B2 (ja) | 新規p−セレクチンリガンド蛋白 | |
JP3691467B2 (ja) | セレクチンリガンド | |
AU710160B2 (en) | Cytokine designated Lerk-7 | |
US5652343A (en) | Method for purification of L-selectin ligands | |
JP3860605B2 (ja) | 補体活性化をブロックするキメラタンパク質 | |
IE83824B1 (en) | A selectin ligand | |
JP2002112796A (ja) | 水溶性ポリペプチドの製造方法 | |
NZ240646A (en) | Therapeutic interference between cell adhesion proteins and their | |
EA025962B1 (ru) | АНТИТЕЛА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ | |
WO1995030001A2 (en) | Novel p-selectin ligand protein | |
WO1995030001A9 (en) | Novel p-selectin ligand protein | |
US5728548A (en) | Retinoid receptor-1 (RR1) and DNA encoding RR1 | |
WO1999043834A2 (en) | P-selectin ligand protein, including tetrameric fusion proteins | |
CA2599944A1 (en) | P-selectin ligand proteins | |
KR19990022954A (ko) | P-셀렉틴 리간드 및 관련 분자 및 방법 | |
ES2362695T3 (es) | Nueva proteína del ligando de la p-selectina. | |
JP2009165489A (ja) | リガンド結合タンパク質および安定血漿タンパク質からなる融合タンパク質 | |
AU8933701A (en) | P-selectin ligand proteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20110726 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20111025 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111028 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20111122 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111128 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20111208 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20111213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120126 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120221 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20120309 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120516 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120521 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120621 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121225 |
|
A045 | Written measure of dismissal of application [lapsed due to lack of payment] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A045 Effective date: 20130423 |