JP2009050201A - 初期胚等用培養器具 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】未受精卵、受精卵又は初期胚を培養するための培養プレート(1)は、未受精卵、受精卵又は初期胚を収容可能な複数の窪み部(2)と、各窪み部を個別に特定する標識(3)とを備え、前記窪み部(2)はそれぞれ、平坦な底面(4)と当該底面の周縁(8)から起立した側壁面(5)とにより画定され、前記側壁面(5)は、前記底面(4)と前記側壁面(5)とがなす角度が75°以上105°以下となるように形成されていることを特徴とする。
【選択図】図1
Description
(i)未受精卵、受精卵又は初期胚を培養するための培養プレートであって、未受精卵、受精卵又は初期胚を収容可能な複数の窪み部と、各窪み部を個別に特定する標識とを備え、前記窪み部はそれぞれ、平坦な底面と当該底面の周縁から起立した側壁面とにより画定され、前記側壁面は、前記底面と前記側壁面とがなす角度が75°以上105°以下となるように形成されていることを特徴とする前記培養プレート。
本発明の培養プレート、培養容器又は培養器具により培養される対象物は、未受精卵、受精卵又は初期胚である。ここで初期胚とは未卵割の段階からハッチングした胚盤胞期までの胚を指す。初期胚はクローン胚、およびこれらに類する初期胚、例えば遺伝子工学的に改変されたものであってよい。本願明細書ではこれらの培養対象物を「初期胚等」と総称することがある。
本発明の培養プレートの形状について説明する。図面中の符号を引用して説明するが、本発明の実施形態の範囲は図面に記載されたものには限定されない。
本発明はまた、上述の培養プレートを少なくとも一部に含むことを特徴とする、初期胚等を培養するための培養容器に関する。
本発明はまた、上述の培養プレートを少なくとも一部に含む培養容器と、少なくとも前記培養プレートの窪み部を含む領域を開閉可能に覆う蓋とを備えることを特徴とする、初期胚等を培養するための培養器具に関する。
本発明の培養器具を用いた初期胚等の培養方法について、図6の模式図を用いて説明する。図6では底面に隔壁部(64)が設けられ窪み部(65)が形成されたペトリ皿状の培養容器(62)と、該容器を覆う蓋(63)とからなる培養器具(61)を用いる培養例を示す。初期胚(66)は窪み部(65)に一つずつ配置される。そして窪み部全体を覆うように培養液(67)が載せられる。更に培養液(67)の乾燥を防ぐために培養液の層はオイル(68)により覆われる。この状態で初期胚の培養を行うことができる。
縦横1センチメートル平均厚み200マイクロメートルの透明シリコーン樹脂シートを作製した。これに直径約500マイクロメートルの円形の貫通孔をピッチ1ミリメートルで5行5列合計25個形成した。
市販の直径35ミリメートルのガラスボトムディッシュを用意し、器部の裏面に1番から25番まで、ピッチ1ミリメートル間隔で5行5列の番号を、孔版印刷の手法で付与した。
実体顕微鏡観察下、手作業によって番号の位置と隔壁の位置が合うようにアライメントをとりながら、上記ガラスボトムディッシュの器部のガラス内底面に、上記隔壁部を貼り付けた。本実施例では接着剤を使わず、シリコーン樹脂隔壁をディッシュのガラス内底面に密着させた。これにより、本発明の培養容器が完成した。
一般的なドライエッチング工程により、次の加工が8インチシリコンウェハに施された。すなわち、直径400マイクロメートル高さ約100マイクロメートルのマイクロピラーをピッチ1ミリメートルで7行7列に形成され、且つ、1行1列目のピラーの横に1a、1行2列目のピラーの横に1b、といった様式で7行7列目のピラーの横に7gまでマイクロ文字凹部が形成された。この7行7列からなる要素は、ピッチ2センチメートルでウェハ全面に形成された。この加工されたウェハには、さらにフッ素加工が施され樹脂剥離性が付与された。これによりシリコンマスターが完成した。
器部の底に直径14ミリメートルの貫通孔を有する35ミリメートルプラスチックディッシュを用意した。このディッシュ器部の貫通孔に蓋をする要領で、上記縦横2センチメートルのシリコーン樹脂シートを平坦な面が外側にくるようにディッシュ器部の裏面に配置し、接着剤で固定した。これにより、本発明の培養容器が完成した。
常法により、直径31ミリメートルの丸カバーガラスを触媒量のトリエチルアミンを含むエポキシシランのトルエン溶液に一晩浸した。その後、洗浄を経てエポキシ化カバーガラスを得た。このカバーガラスを触媒量の硫酸を含むテトラエチレングリコールに浸し、80℃で1時間反応させた。その後、洗浄を経て細胞接着阻害能を有する丸カバーガラスを得た。
器部の底に直径27ミリメートルの貫通孔を有する35ミリメートルディッシュを用意した。接着剤を用いて、上記ディッシュの底部に上記丸カバーガラスを貼り付け容器の底とした。実施例1と同様にして、器部の底の裏面に1番から25番まで、ピッチ1ミリメートル間隔で5行5列の番号を、孔版印刷の手法で付与した。次いで、実施例1で作製した隔壁部を、実施例1と同様にして実体顕微鏡観察下、手作業によって番号の位置と隔壁の位置が合うようにアライメントをとりながら、上記ガラスボトムディッシュの器部の内面に貼り付けた。この工程では接着剤を使わず、シリコーン樹脂隔壁をディッシュのタンパク質接着阻害性ガラス底面に密着させた。これにより、本発明の培養容器が完成した。
カバーガラスに1番から25番まで、ピッチ1ミリメートル間隔で5行5列の番号を蒸着法を用いて付与した。市販の35ミリメートルディッシュの底の中央付近に直径500マイクロメートルでピッチ1ミリメートルの間隔で5行5列の貫通孔を機械加工により形成した。実体顕微鏡下、手作業によって番号の位置と孔の位置が合うようにアライメントをとりながら、接着剤を使ってディッシュの底の外側とカバーガラスの蒸着面と反対の面を接着した。これにより、本発明の培養容器が完成した。
2、12、32、65・・・窪み部
3、13、33・・・窪み部を個別に特定する標識
4、14・・・窪み部の底面
5、15・・・窪み部の側壁面
6、16、64・・・隔壁部
7、17・・・窪み部の開放口の周縁
8、18・・・窪み部の底面の周縁
41、51、61・・・培養器具
42、62・・・培養容器
44、53、63・・・蓋
66・・・初期胚
67・・・培養液
68・・・オイル
Claims (5)
- 未受精卵、受精卵又は初期胚を培養するための培養プレートであって、未受精卵、受精卵又は初期胚を収容可能な複数の窪み部と、各窪み部を個別に特定する標識とを備え、前記窪み部はそれぞれ、平坦な底面と当該底面の周縁から起立した側壁面とにより画定され、前記側壁面は、前記底面と前記側壁面とがなす角度が75°以上105°以下となるように形成されていることを特徴とする前記培養プレート。
- 各窪み部を個別に特定する標識がそれぞれ、当該標識により特定される窪み部に未受精卵、受精卵又は初期胚を収容して顕微鏡で観察する場合に、当該未受精卵、受精卵又は初期胚と同一視野内で観察可能に表示されているか、或いは当該未受精卵、受精卵又は初期胚を観察する前後で顕微鏡の焦点位置を高さ方向に移動させることにより観察可能に表示されていることを特徴とする、請求項1記載の培養プレート。
- 前記窪み部の底面にタンパク質接着阻害能が付与されていることを特徴とする、請求項1又は2記載の培養プレート。
- 請求項1又は2記載の培養プレートを少なくとも一部に含むことを特徴とする、未受精卵、受精卵又は初期胚を培養するための培養容器。
- 請求項1又は2記載の培養プレートを少なくとも一部に含む培養容器と、少なくとも前記培養プレートの窪み部を含む領域を開閉可能に覆う蓋とを備えることを特徴とする、未受精卵、受精卵又は初期胚を培養するための培養器具。
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