JP2008533155A - アルファへリックス模倣剤および線維症の治療に関する方法 - Google Patents

Abstract

本発明は生物活性ペプチドおよびタンパク質のαへリックス領域の二次構造を模倣する配座を制限された化合物と、肺線維症などの線維症を治療するためのその使用を対象としている。本発明は、かかる化合物を含むライブラリ、およびその合成とスクリーニングも開示する。本発明は、説明に記載されるＡ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｗ、Ｒ^１、およびＲ^２の定義を有する式（Ｉ）のαへリックス模倣構造、およびそれに関連する化学ライブラリを提供する。化合物、前記化合物を備える薬剤組成物、および前記化合物を使用する本発明の方法は、肺線維症などの線維症を含む疾患の治療に関する。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２００５年３月１８日出願の米国仮出願第６０／６６３，４９９号から優先権を主張する。上記出願の内容は、参照により全体として本文書に組み込まれる。

本発明は、一般にαへリックス模倣構造およびそれに関連する化学ライブラリに関する。本発明は、疾患の治療およびこれを備える薬剤組成物における応用にも関する。

（連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載）
本発明は、国立衛生研究所により与えられるグラントＲ０１ ＨＬ０７３７２２のもとで、政府の支援により成された。政府は本発明においてある権利を有する。

（発明の背景）
線維症は、肺、肝臓、腎臓、眼、心臓、および身体の他の主要組織に発生する可能性がある。線維症は、肺に対する喫煙や、肝臓のウイルス性肝炎感染など、毒性または感染性障害に起因することがある。線維性疾患の原因には未知のものもあり、これは突発性肺線維症に関する事例である。

突発性肺線維症（ＩＰＦ）は、診断から５年以内に犠牲者を死に至らしめる肺の慢性かつ潜行性の炎症性疾患である。ＩＰＦは、８３，０００人の米国人を苦しめ、毎年新しく３１，０００件以上が発生している。ＩＰＦに起因する死は、かなり過小報告されており、ＩＰＦによるかなりの死亡率は、認識されていない。ＩＰＦは、慢性炎症の結果として起こる数多くの線維性疾患の１つを代表するに過ぎない。米国政府により、米国における全死亡の４５％は、繊維性疾患に起因すると推定しており、この症状、特に肺の線維性疾患を治療するための治療薬が必要とされている。

肺線維症は、進行性瘢痕および肺破壊に繋がる。現在、世界で５百万人が肺線維症を患い、診断後５年での死亡率は５０％となっている（Ｋａｔｚｅｎｓｔｅｉｎ ＡおよびＭｅｙｅｒｓ、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．１９９８年、１５７、１３０−１−１５、および米国胸部学会、Ａｍ．Ｊ，Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃａｒｅ Ｍｅｄ、２０００年、１６１、６４６、６６４）。肺線維症は、肺実質への障害（急性あるいは慢性）により開始され、その損傷を有効に癒すことができない患者において進行する（Ｇｒｏｓｓ Ｔ．Ｊ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ Ｍｅｄ ３４５、５１７、２００１年）。線維症は、コルチコステロイドに対して抵抗性であり、現在のところ有効な療法は存在しない。

治療薬としての可能な活性についての分子のランダムスクリーニングは、長年おこなわれてきており、数多くの重要な創薬をもたらしてきた。分子生物学および計算化学の進歩が「合理的薬物設計」と呼ばれてきたものへの高い関心を導いてきた一方、かかる手法は、当初予測されていたほど迅速、あるいは信頼性のあるものであると立証されていない。そのため近年、ランダム薬物スクリーニングへの新たな関心と復帰が見られる。この目的を達成するために、組み合わせ化学ライブラリの発達に基づく新しい技術、そして生物活性要を探索するためのかかるライブラリのスクリーニングで特に前進してきた。

一般に、組み合わせ化学ライブラリは、単に分子の集まりである。かかるライブラリは、ライブラリ内の化学種、またライブラリ要素を生成し、かつどの要素が対象となる生物学的標的と相互作用するかを特定するために採用される方法により異なる。この分野はまだ新しいが、ライブラリを生成し、スクリーニングするための方法は、すでにかなり多様性があり、高度となっている。例えば、近年のさまざまな組み合わせ化学ライブラリの検討により、数多くのかかる手法を特定してきた（Ｄｏｌｌｅ、Ｊ．Ｃｏｍ．Ｃｈｅｍ．、２（３）：３８３−４３３、２０００年）。これには、標識の付いた、また標識が付いていないライブラリ要素の双方の使用が含まれる（Ｊａｎｄａ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９１：１０７７９−１０７８５、１９９４年）。

当初、組み合わせ化学ライブラリは、ペプチドまたはヌクレオチド由来の要素に限定されていた。そのために、Ｈｏｕｇｈｔｅｎらによる手法は、「デュアルデファイン（ｄｕａｌ−ｄｅｆｉｎｅｄ）反復」法と呼ばれる、スプリット合成によって可溶性組み合わせペプチドライブラリを集める方法の例を明らかにしている（Ｎａｔｕｒｅ（ロンドン）３５４：８４−８６、１９９１年、およびＢｉｏｔｅｃｈｎｉｑｍｓ １３：４１２−４２１、１９９２年、およびＢｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３：４０５−４１２、１９９３年）。この手法により、数千万の要素を含む可溶性ペプチドライブラリが得られてきた。かかるライブラリは、メチオニンおよびロイシンエンケファリン（ＤｏｌｌｅｙおよびＨｏｕｇｈｔｅｎ、Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５２、１５０９−１５１７、１９９３年）などのオピオイドペプチドの特定に有効であると示されてきており、Ｎ−アシル化ペプチドライブラリは強力なオピオイド拮抗薬であるアセタリンを特定するために使用されてきた（Ｄｏｏｌｅｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０８１１−１０８１５、１９９３年）。さらに最近では、全Ｄ−アミノ酸オピオイドペプチドライブラリが構築され、ミュー（「μ」）オピオイド受容体に対し鎮痛作用がスクリーニングされてきた（Ｄｏｏｌｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：２０１９−２０２２、１９９４年）。

ペプチドおよびヌクレオチド由来の要素を含む組み合わせライブラリは非常に重要であるが、当技術分野では、異なる由来の要素を含むライブラリがまだ必要とされている。例えば、従来のペプチドライブラリは、多くの場合、ライブラリ要素を生成するためのアミノ酸配列を変更するだけである。ペプチドの二次構造が生物活性に重要であることはよく知られているが、かかるペプチドライブラリは、そのライブラリ要素に制限された二次構造を与えない。

このため、より制限された二次構造を提供するために、ジスルフィド架橋でペプチドを環化してきた研究者もいる（非特許文献１、および非特許文献２）。しかしながら、かかる環化ペプチドは、一般にまだかなり柔軟であり、生物利用性が低く、そのため限られた成功しか収めていない。

さらに最近では、生物活性タンパク質またはペプチドに見られるリバースターンの二次構造をさらによく模倣する非ペプチド化合物が開発されてきた。例えば、Ｋａｈｎによる特許文献１、Ｋａｈｎによる公開された特許文献２、特許文献３、および特許文献４は、リバースターンの三次元構造を模倣する配座を制限された非ペプチド性化合物を開示している。

配座を制限されたリバースターン模倣剤の合成と特定において重大な進歩が成されてきたが、当技術分野では、ペプチドの二次構造を模倣する小分子が依然として必要である。当技術分野では、かかる要素を含むライブラリだけでなく、対象標的、特に生物学的標的に対し、ライブラリ要素を合成、スクリーニングし、生物活性ライブラリ要素を特定する手法も必要とされている。例えば、Ｋａｈｎによる、特許文献５およびその一部継続特許文献６も、生物活性ペプチドおよびタンパク質のリバースターン領域の二次構造を模倣する、配座を制限された化合物を開示している。配座を制限されたαへリックス模倣剤の合成および特定、またその疾患への応用は、非特許文献３、および非特許文献４に記載されている。

肺線維症の多数のモデルが発現してきたが、初期損傷の性質に関わらず、進行の段階は非常に類似していると思われる。一般に認められているモデルは、間質浮腫、Ｉ型上皮細胞欠損部位における肺胞への繊維性物質の蓄積が後続する、内皮およびタイプＩ肺胞上皮細胞への損傷を伴う。ＩＩ型細胞の有限増殖、また続くＩ型およびクララ細胞への分化は、正常なガス交換の回復に不可欠である。

肺線維症を治療するための抗炎症療法（コルチコステロイド、インターフェロンγなど）は、限られた有効性と深刻な有害副作用のため、今日まで期待を裏切ってきた。肺線維性疾患の発現と進行に伴う重要な分子経路を特定し、進行を防ぎ、疾患の経過を逆転させるための新しい治療薬を開発するというまだ満たされていない重大な必要性が存在する。米国では、いかなる線維性疾患の治療のための薬物も認可されていない。線維増殖性疾患に悩む患者に治療を提供するための研究開発が切実に求められている。本発明は、これらの必要性を満たし、生物活性ペプチドおよびタンパク質のαへリックス領域の二次構造を模倣する、配座を制限された化合物を提供することにより、さらに関連する利益を提供する。
米国特許第５，４４０，０１３号明細書 国際公開第９４／０３４９４号パンフレット 国際公開第０１／００２１０号パンフレット 国際公開第０１／１６１３５号パンフレット 米国特許第５，９２９，２３７号明細書 米国特許第６，０１３，４５８号明細書 Ｔｕｍｅｌｔｙら、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６７−６８、１９９４年 Ｅｉｃｈｌｅｒら、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｒｅｓ．７：３００−３０６、１９９４年 Ｗａｌｅｎｓｋｙ，Ｌ．Ｄ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０５，１４６６、２００４年 Ｋｌｅｉｎ、Ｃ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ．９１：１４１５、２００４年

（発明の要旨）
端的には、本発明は生物活性ペプチドおよびタンパク質のαへリックス領域の二次構造を模倣する配座を制限された化合物と、肺線維症などの線維症を治療するためのその使用を対象としている。本発明は、かかる化合物を含むライブラリ、およびその合成とスクリーニングも開示する。

本発明の化合物は、以下の一般式（Ｉ）を有する。

式中、Ａは、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨＲ^３）−であり、Ｂは、Ｎ−Ｒ_４−であり、Ｄは、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨＲ_５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ_６）−または（Ｃ＝Ｏ）であり、Ｇは、−（ＸＲ_７）_ｎ−、−（ＣＨＲ_７）−（ＮＲ_８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ_９）−、または−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｗは、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ_２）−、または存在せず、Ｙは、酸素または硫黄であり、ＸおよびＺは、独立して窒素またはＣＨでｎ＝０または１であり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、およびＲ_９は、同じまたは異なり、アミノ酸側鎖部またはその誘導体、分子の残部、リンカーおよび固体支持体、およびその立体異性体から独立して選択される。

Ａが−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨＲ^３−、Ｂが−（ＮＲ_４）−、Ｄが−（Ｃ＝Ｏ）−、Ｅが−（ＺＲ_６）−、Ｇが−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ_９）−である実施例では、本発明の化合物は、以下の式（ＩＩＩ）を有する。

式中、Ｗ、Ｙおよびｎは、上記のとおり定義され、Ｚは窒素またはＣＨ（ＺがＣＨのとき、Ｘは窒素）、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_６、およびＲ_９は、以下の詳細な説明に定義されるとおりである。

Ａが−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨＲ_３）であり、Ｂが−（ＣＨＲ_４）−であり、Ｄが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが−（ＺＲ_６）−であり、Ｇが（ＸＲ_７）_ｎ−である実施例では、本発明の化合物は、以下の式（ＩＶ）を有する。

式中、Ｗ、Ｙおよびｎは、上記のとおり定義され、Ｚは窒素またはＣＨ（Ｚが窒素のときｎはゼロであり、ＺがＣＨのときＸは窒素であって、ｎはゼロではない）、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、Ｒ_６、およびＲ_７は、以下の詳細な説明に定義されるとおりである。

本発明は、上記の式（Ｉ）の化合物を含有するライブラリ、またかかる化合物を合成する方法、およびこれをスクリーニングして、生物活性化合物を特定する方法も対象としている。薬剤として許容される担体または希釈剤との組み合わせでの本発明の化合物を含有する組成物も、開示される。

特に、本発明は、肺の線維症を含む障害を治療するための式（Ｉ）の化合物を含有する薬剤組成物に関する。さらに本発明は、ＴＧＦ−βシグナル経路に関連する肺の線維症を含む障害を治療する方法にも関する。

化合物Ｖ（ＩＣＧ−００１）は、例１に記載するように、線維症を治療するために有用である。

本発明のこれらの、またその他の側面は、添付の図と以下の詳細な説明を参照することにより明らかとなる。この目的で、より詳しい特定の手順、化合物、および／または組成物を記説明するさまざまな参考文献がここに記載されるが、これらは参照により全体として本開示に含まれる。

（発明の詳細な説明）
線維症の発現の主要なメディエータである形質転換成長因子β（ＴＧＦβ）は、細胞の増殖および分化、アポトーシス、細胞外基質（ＥＣＭ）の沈着に重要である。ＴＧＦβシグナル伝達は、ＳｍａｄおよびＡＰ−１の転写経路双方を活性化させる。肺線維症（ＰＦ）患者の気道におけるＴＧＦβは、最初に初期気道炎症の縮小と組織修復に関わる「治癒分子」として機能してよい。しかし、ＰＦに発生する可能性があるもののような持続性の炎症反応を有する場合は、均衡が過剰なＥＣＭ沈着、および気道線維症の発現に移行することがある。

線維増殖性疾患は、一般に、ほとんどの臓器に見られる常在星細胞の活性化により引き起こされる。この星細胞の活性化は、その筋細胞および非筋細胞の特長を表す筋線維芽細胞への変換を引き起こす。活性化星細胞は、主にＴＧＦ−βにより媒介される炎症シグナルを開始する。ＴＧＦ−βに加え炎症性サイトカインおよびメディエータは、筋線維芽細胞の増殖を引き起こす。星細胞由来の筋線維芽細胞が増殖し、筋肉および結合組織特性を示す細胞外基質で正常で機能的な臓器細胞を置換する。最終的には、非機能の繊維性蜂巣状基質が重大な数の正常細胞を置換すると、臓器不全が起きる。

線維症の最初の原因は、臓器組織への障害または損傷の結果であると考えられている。この臓器組織への細胞障害は、しばしば毒性または感染物質に由来する。肺線維症または間質性肺疾患は、しばしば喫煙、慢性ぜんそく、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、または肺炎の結果である。

肺線維症は、酸素およびその他の気体を血液内にまた血液外に輸送する肺の能力を損なう。この疾患は、肺の精巧な弾性組織を変更し、組織を厚く、硬い繊維性組織に変えてしまう。この原組織の変化または置換は、他の損傷組織に発生することがある永久的な瘢痕に類似している。肺の瘢痕は、血液中にあるいは血液外に気体を通過させる肺の能力を低下させる（すなわち酸素、二酸化炭素）。次第に、肺の空気嚢は、線維化組織に置換される。瘢痕が形成すると、組織が肥厚し、酸素を血流中に運ぶ組織の能力の不可逆的損失を引き起こす。症状には、特に労作時における息切れ、慢性の頻発性空咳、疲労と脱力、胸部不快感、食欲不振、および急激な体重の減少が含まれる。

肺線維症にはいくつかの原因が知られているが、それには職業および環境暴露が含まれる。多くの仕事、特に採鉱関わるもの、または労働者をアスベストまたは金属塵に暴露されるものは、肺線維症を引き起こす可能性がある。このような種類の仕事に関わる労働者は、小粒子（シリカ粉塵やアスベスト繊維など）を吸入する可能性があるが、これは肺の特に末梢気道および空気嚢に損傷を与え、線維症に関連する瘢痕を引き起こすことがある。農業労働者も、影響を受けることがある。有機物質の中には、黴の生えた干草など、肺のアレルギー反応を引き起こすものがある。この反応は、農夫肺と呼ばれ、肺線維症の原因となる。農場で見られるその他のガスは、肺に対して直接的な毒性がある。

他の原因には、サルコイドーシスがあるが、これは肉芽腫の形成（炎症細胞部分）を特徴とする疾患であり、身体のどの部分にも発病する可能性があるが、最も高い頻度で肺を冒す。一部の医薬は、乳癌の治療などの放射線と同じく、肺線維症を引き起こす望ましくない副作用を有する可能性がある。関節リウマチおよび全身性硬化などの結合組織病または膠原病も、肺線維症に関連している。遺伝因子およびが関わっている可能性もあるが、この原因は上述の原因ほど一般的ではない。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）では、結合組織増殖および線維症は、重度のＣＯＰＤを特徴付けることがある。ＣＯＰＤは、喫煙や慢性ぜんそくの結果として発現する可能性がある。

間質性肺疾患の知られている原因全てが除外された場合、その症状は（原因不明の）「突発性」肺線維症（ＩＰＦ）と呼ばれる。８３，０００人を超える米国人がＩＰＦを抱えて生活しており、３１，０００を上回る新しい症例が毎年発現している。この消耗性症状は、肺の瘢痕を伴う。肺の空気嚢は、瘢痕または線維化組織を発現し、これは徐々に血流中に酸素を運ぶ身体能力を妨害し、重要臓器および組織が十分な酸素を得て正常に機能するのを妨げる。

ＩＰＦを引き起こす可能性がある原因については、いくつかの学説があるが、これにはウイルス性疾患、およびアレルギーまたは環境暴露（喫煙を含む）が含まれる。これらの学説は、まだ研究中である。バクテリアおよびその他の微生物は、ＩＰＦの原因となると考えられていない。家族性突発性肺線維症として知られる家族型の疾患も存在する。この疾患を発現する遺伝的傾向が存在するかどうかを究明し、またＩＰＦの他の原因を究明するための、さらなる研究がおこなわれている。

ＩＰＦ患者は、肺が血流中に酸素を運ぶ能力を失うと、肺線維症のものと類似の症状を経験する。これらの症状には、特に身体的活動中あるいは後の息切れ、発作性空咳、意図しない緩やかな体重減少、疲労と脱力、胸部不快感、組織の蓄積による指先の湾曲または腫脹（または足指の場合もある）が含まれる。これらの症状は、ＩＰＦ患者の生活の質を著しく損ねる可能性がある。肺リハビリテーションおよび酸素療法は、ＩＰＦの生活様式を変える影響を減少させるが、治癒はもたらさない。

本発明による治療の可能性があるその他の哺乳類の線維性疾患には、腎臓疾患、多発性嚢胞腎、腎臓繊維症、糸球体腎炎、肝硬変、全身性狼瘡を伴う腎炎、腹膜線維症、肝線維症、多嚢胞性卵巣症候群、心筋線維症、グレーヴス眼症、緑内障、瘢痕、皮膚病変、糖尿病性網膜症、強皮症、およびアルツハイマー病が含まれる。

線維性疾患の治療を展開するために、疾患の各段階が共有する最終的な病態への共通の経路に焦点を置くことが、原因に関わらず、また症状が現れる組織に関わらず、重要である。β−カテニンが線維症の発現に関与し、またこの経路を調節する化合物が線維症治療に有用である。

Ｗｎｔシグナル伝達は、脳、腸、皮膚および肺を含め、複数の臓器系の発育および維持の両方に重要な役割を果たす。Ｗｎｔ２、Ｗｎｔ５ａ、Ｗｎｔ７ｂ、Ｗｎｔｌ１およびＷｎｔｌ３を含み、多くのＷｎｔ遺伝子が、発育中および成人の肺の両方に発現する。（Ｍｏｒｒｉｓｅｙ Ｅ．２００３、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ、１６２，１３９３−７）。上皮の（タイプ２肺細胞）および間葉（筋線維芽）細胞の両方において、活性Ｗｎｔシグナル伝達の顕著な特徴である核β−カテニンの蓄積が観察されてきた（Ｃｈｉｌｏｓｉら２００３、ＡｍＪ．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ１６２，１４９５−１５０２）。重要なことには、ＩＰＦにおけるタイプ２の細胞のさらなる増殖が観察されてきたことである（Ｋａｗａｎａｍｉ Ｏら、ＬａｂＩｎｖｅｓｔ１９８２、４６，３９−５３およびＫａｓｐｅｒ Ｍら、Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ１９９６、１１，４６３−８３）。その上、隣接間充組織におけるＷｎｔシグナル伝達の活性化は、肺胞上皮の適切な分化をさらに阻止する場合がある。

遺伝子組み換えのＢａｔ−Ｇａｌマウスにおける肺線維症の定着したブレオマイシン誘発モデルを、肺におけるＷｎｔシグナル伝達の異常活性化が、発作の後誘発されたことを明示するために本明細書で使用する。さらに、Ｗｎｔ／β−カテニン／ＣＢＰのよって促進された転写（ＩＣＧ−００１、５ｍｇ／Ｋｇ／日ｓ．ｃ．）の特定の抑制剤を使用して、Ｗｎｔ／β−カテニンは、β−ガラクトシダーゼ活性化によって判断されるように、＞９５％抑制された。ＩＣＧ−００１は、以下に詳細を説明する構造の１つである。

Ｗｎｔ／β−カテニン経路は、肺を含む多くの臓器系の正常な発育において重大なシグナル伝達系を開始する（Ｍｏｒｒｉｓｅｙ Ｅ、２００３ＡｍＪＰａｔｈｏｌｏｇｙ、１６２，１３９３−７）。この経路の顕著な特徴は、それが多機能タンパク質β−カテニンの転写の役割を活性化することである。標準的なＷｎｔシグナル伝達は、ＧＳＫ−３βを不活性化し、β−カテニンリン酸化反応を阻止する。これは、細胞質におけるβ−カテニンの蓄積および細胞核に対する次の転座につながる（Ｂｅｈｒｅｎｓ Ｊ、２０００、Ａｎｎ．ＮＹＡｃａｄ．Ｓｃｉ．９１０，２１−３３．）。標的遺伝子の活性化における重要なステップは、β−カテニンと転写因子のＴ−細胞因子（ＴＣＦ）／リンパ球エンハンサー因子（ＬＥＦ−Ｉ）科のメンバーとの間の錯体の形成である。転写活性のある錯体を生成するために、β−カテニンは、基底転写機械の他の成分と同様に、転写コアクチベータ、転写調節因子結合のタンパク質（ＣＢＰ）または密接にかかわるその同族体、ｐ３００を補充する。

これまでは、核β−カテニン免疫活性の増加および２つのＴＣＦ／β−カテニン調節遺伝子、すなわちサイクリンＤｌおよびマトリリシン（ＭＭＰ７）の発現の増大を有する、突発性肺線維症（ＩＰＦ）（Ｃｈｉｌｏｓｉ Ｍら、２００３Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１６２，１４９５−１５０２）を患う患者からの肺のサンプルにおいて、異常なＷｎｔ／β−カテニンシグナル伝達を明示してきた。ＭＭＰ７（−／−）マウスをブレオマイシンに誘発される肺線維症から保護することから、肺の線維性疾患におけるＭＭＰ７活性化の増加に対する重要な役割が期待される（Ｚｕｏ Ｆら、ＰＮＡＳ９９，６２９２，２００２）。

ＣＢＰに従属した形で、ＴＣＦ／β−カテニン転写を選択的に抑制する小分子（ＦＷ５４８）であるＩＣＧ−００１が最近確認された（Ｅｍａｍｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃｉＵＳＡ２００４、１０１，１２６８２−７ならびにＭｃＭｉｌｌａｎおよびＫａｈｎＤｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ２００５、１０，１４６７−７４）。ＩＣＧ−００１は、高度の相同性を示すβ−カテニン／ｐ３００相互作用を妨害することなく、β−カテニン／ＣＢＰ相互作用を選択的に阻止する。遺伝子組み換えのＢａｔ−Ｇａｌマウスにおける肺線維症の定着したマウスモデルを使用して、我々は、ＩＣＧ−００１（５ｍｇ／Ｋｇ／日）が、ブレオマイシンにより誘発されるＴＣＦ／β−カテニン転写を＞９５％阻止することを今から明示する。さらに、この服用量でのＩＣＧ−００１は、死亡率の低下、組織病理学および内因性遺伝子の発現によって判断されるように、疾患の進行を止めるだけではなく、回復に向かわせる。肺の線維性疾患に対して現在有効な治療が存在しない事実をかんがみて、本発明によるＷｎｔ／β−カテニン／ＣＢＰ従属転写の抑制は、新しい種類の治療的なアプローチを提示するように見え、また産業上の利用性を提供する。

標準的なＷｎｔシグナル伝達は、ニューロンの幹細胞および造血幹細胞を含む、様々な組織幹細胞において自己再生を促進することを示してきた。しかしながら、標準的なＷｎｔ経路の活性化は、実験環境に応じて分化を促進または抑制することができる。

したがって、本発明は、生物学的ペプチドおよびタンパク質のαへリックス領域の二次構造を模倣する配座固定された化合物（本明細書では「αへリックス模倣剤」とも称される）、およびそれに関連する化学ライブラリに方向付けられる。かかる化合物は、肺線維症を含む線維症を治療する際に使用を見出す。

本発明のαへリックス模倣構造は、診断用薬、予防薬および／または治療薬としての使用を含む（がこれらに限定されない）生物活性剤として有用である。本発明のαへリックス模倣構造ライブラリは、かかる生物活性剤の識別において有用である。本発明の実践では、ライブラリは、数十、数百、数千（またはそれより大きい）の個別のαへリックス構造（本明細書では「員」とも称される）を含む可能性がある。

本発明の1つの側面では、以下の式（Ｉ）を有するαへリックス模倣構造を開示する。

式（Ｉ）において、Ａは−（Ｃ＝Ｏ）−（ＣＨＲ_３）−であり、Ｂは−Ｎ−Ｒ_４−であり、Ｄは−（ＣＨＲ_５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは−（ＺＲ_６）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇは−（ＸＲ_７）_ｎ−、−（ＣＨＲ_７）−（ＮＲ_８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ_９）−、または−（Ｃ−Ｏ）−、Ｗは−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ_２）−または存在せず、Ｙは酸素または硫黄であり、ＸおよびＺは独立して窒素またはＣＨで、ｎ＝０または１であり、；Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、同じまたは異なり、アミノ酸側鎖部またはその誘導体、分子の残部、リンカーおよび固体支持体、およびその立体異性体から独立して選択される。

より具体的には、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、アミノＣ_２−５アルキル、グアニジンＣ_２−_５アルキル、Ｃ_１−４アルキルグアニジノＣ_２−５アルキル、ジＣ_１−４アルキルグアニジノ−Ｃ_２−_５アルキル、アミジノＣ_２−_５アルキル、Ｃ_１−４アルキルアミジノＣ_２−５アルキル、ジＣ_１−４アルキルアミジノＣ_２−５アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、フェニル、置換フェニル（前記置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ベンジル、置換ベンジル（ベンジル上の前記置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルキル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルののうち１つ以上から独立して選択される）、ナフチル、置換ナフチル（前記置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ビスフェニルメチル、置換ビス−フェニルメチル（前記置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリジル、置換ピリジル、（前記置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリジルＣ_１−４アルキル、置換ピリジルＣ_１−４アルキル（前記ピリジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリミジルＣ_１−４アルキル、置換ピリミジルＣ_１−４アルキル（前記ピリミジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、トリアジン−２−イル−Ｃ_１−４アルキル、置換トリアジン−２−イル−Ｃ_１−４アルキル（前記トリアジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、イミダゾＣ_１−４アルキル、置換イミダゾールＣ_１−４アルキル（前記イミダゾール置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ_１−４アルキルアミノ、Ｃ_１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ_１−４アルキル、Ｃ_１−４アルキル、Ｃ_１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、イミダゾリニルＣアルキル、Ｎ−アミジノピペラジニル−Ｎ−Ｃ_０−４アルキル、ヒドロキシＣ_２−５アルキル、Ｃ_１−５アルキルアミノＣ_２−５アルキル、ヒドロキシＣ_２−５アルキル、Ｃ_１−５アルキルアミノＣ_２−５アルキル、Ｃ_１−５ジアルキルアミノＣ_２−５アルキル、Ｎ−アミジノピペリジニルＣ_１−４アルキルおよび４−アミノシクロヘキシルＣ_０−２アルキルから成る群から独立して選択される。

一実施形態では、ＥのＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_６およびＧのＲ_７、Ｒ_８およびＲ_９は、同じまたは異なり、化合物の残部を表し、またＲ_３またはＡ、ＢのＲ_４またはＤのＲ_５は、アミノ酸側鎖部またはその誘導体から選択される。本明細書で使用するように、用語「化合物の残部」は、任意の構成成分、薬剤、化合物、支持体、分子、リンカー、アミノ酸、ペプチドまたはＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８および／またはＲ_９位のαへリックス模倣構造と共有結合しているタンパク質を意味する。この用語はまた、アミノ酸側鎖部およびその誘導体を含む。

本明細書で使用するように、用語「アミノ酸側鎖部」は、表１に特定される自然発生型アミノ酸側鎖部を含む（がそれに限定されない）自然発生型タンパク質に存在する任意のアミノ酸側鎖部を表す。本発明の他の自然発生型アミノ酸側鎖部は、３，５−ジブロモチロシン、３，５−ジヨードチロシン、ヒドロキシリジン、γ−カルボキシグルタミン酸塩、ホスホチロシンおよびホスホセリンの側鎖部を含む（がそれに限定されない）。さらに、グリコシル化アミノ酸側鎖はまた、グリコシル化トレオニン、セリンおよびアスパラギンを含む（がそれらに限定されない）本発明の実践において使用してもよい。

自然発生型アミノ酸側鎖部に加えて、本発明のアミノ酸側鎖部はまた、様々なその誘導体を含む。本明細書で使用するように、アミノ酸側鎖部の「誘導体」は、自然発生型アミノ酸側鎖部に対する修飾および／または変化を含む。例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシンおよびフェニルアラニンのアミノ酸側鎖部は、比較的低鎖のアルキル、アリールまたはアリールアルキル部として大まかに分類してもよい。アミノ酸側鎖部の誘導体は、他の直鎖または分鎖、循環または非循環、置換または非置換、飽和または不飽和の比較的低鎖のアルキル、アリールまたはアリールアルキル部を含む。

本明細書で使用するように、「比較的低鎖のアルキル部」は１〜１２炭素原子を含み、「比較的低鎖のアリール部」は６〜１２炭素原子を含み、また「比較的低鎖のアラルキル部」は７〜１２炭素原子を含む。このようにして、一実施態様では、アミノ酸側鎖誘導体は、Ｃ_１−２アルキル、Ｃ_６−１２アリールおよびＣ_７−１２アリールアルキルから選択され、より好ましい実施態様では、Ｃ_１−７アルキル、Ｃ_６−１０アリールおよびＣ_７−１１アリールアルキルから選択される。

本発明のアミノ側鎖誘導体は、比較的低鎖のアルキル、アリール、およびアリールアルキル部の置換誘導体をさらに含み、そこでは置換基は、以下の化学構成成分、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ_２、−ＮＨ_２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＨ、−ＳＲ、−ＳＯ_２Ｒ、−ＳＯ_２Ｈ、−ＳＯＲおよびハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、ＢｒおよびＩを含む）のうち１つ以上（しかし限定されない）から選択され、またＲのそれぞれの発生は、直鎖または分鎖、循環または非循環、置換または非置換、飽和または不飽和の比較的低鎖のアルキル、アリール、およびアラルキル部から独立して選択される。さらに、本発明の循環の比較的低鎖のアルキル、アリールおよびアリールアルキル部は、チオフェン、ピロール、フラン、イミダゾール、オキサゾール、チアゾール、ピラゾール、３−ピロリン、ピロリジン、ピリジン、ピリミジン、プリン、キノリン、イソキノリンおよびカルバゾールなどの複素環式化合物と同様にナフタレンを含む。アミノ酸側鎖誘導体は、アルキルおよびアラルキルホスホン酸塩およびシランを含む（がそれらに限定されない）比較的低鎖のアルキルおよびアラルキル構成成分のアルキル部のヘテロアルキル誘導体をさらに含む。

代表的なＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９の構成成分は特に、−ＯＨ、−ＯＲ、−ＣＯＲ、−ＣＯＯＲ、−ＣＯＮＨ_２、−ＣＯＮＲ、−ＣＯＮＲＲ、−ＮＨ_２、−ＮＨＲ、−ＮＲＲ、−ＳＯ_２Ｒおよび-ＣＯＳＲを含み（がそれらに限定されない）、ここでＲのそれぞれの発生は上記に定義したとおりである。

さらなる実施態様では、アミノ酸側鎖部またはその誘導体（またはＲ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８およびＲ_９の場合は、化合物の残部）であることに加えて、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８またはＲ_９は、別の構成成分または化合物に対する化合物の連鎖を促進するリンカーとなる可能性がある。例えば、本発明の化合物は、診断用またはスクリーニング検定において使用するため、ビオチンなどの、１つ以上の既知の化合物に連鎖してもよい。さらに、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８またはＲ_９は、化合物を固体支持体（固相ペプチド合成で使用される支持体などの）に結合するリンカーであってもよく、あるいは、支持体自体であってもよい。この実施態様では、別の構成成分もしくは化合物、または固体支持体への連鎖は、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_７またはＲ_８位であり、より好ましくはＲ_１またはＲ_２位である。

Ａは−（Ｃ＝Ｏ）−ＣＨＲ_３−であり、Ｂは−Ｎ−Ｒ_４であり、Ｄは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは−（ＺＲ_６）−であり、Ｇは−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ_９）−である場合の実施態様では、本発明のαへリックス模倣化合物は、以下の一般式を有する（ＩＩＩ）。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、Ｒ_６、Ｒ_９、ＷおよびＸは上記に定義したとおりであり、Ｚは窒素またはＣＨ（ＺはＣＨのとき、その結果Ｘは窒素である）である。好ましい実施態様では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_６、およびＲ_９は、化合物の残部を表し、またＲ_４はアミノ酸側鎖部から選択される。Ａは−０−ＣＨＲ_３−であり、Ｂは−ＮＲ_４−であり、Ｄは−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは−（ＺＲ_６）−であり、Ｇｉは（ＸＲ_７）_ｎ−であるより具体的な実施態様では、本発明のαへリックス模倣化合物は以下の式（ＩＶ）を有する。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｗ、Ｘおよびｎは上記に定義したとおりであり、またＺは窒素またはＣＨ（Ｚは窒素であるとき、その結果ｎはゼロであり、またＺがＣＨのとき、その結果Ｘは窒素であって、ｎがゼロではない）である。好ましい実施態様では、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_６、およびＲ_７は、化合物の残部を表し、またＲ_４はアミノ酸側鎖部から選択される。この場合は、Ｒ_６またはＲ_７は、ＺおよびＸがＣＨの場合、それぞれアミノ酸側鎖部から選択してもよい。

本発明のαへリックス模倣構造は、適切な開始成分分子（以後「成分要素」と称する）を使用することによって調製してもよい。手短に言えば、式（ＩＩ）を有するαへリックス模倣構造の合成では、第１および第２の成分要素は、複合第１−第２中間体を形成するよう結合され、必要であれば、第３および／または第４の成分要素は、複合第３−第４中間体を形成するよう結合され（または市販されていれば、単一の第３中間体を使用してもよい）、その後複合第１−第２中間体および第３−第４中間体（または第３中間体）は、本発明のαへリックス模倣構造を産出するよう環化される、第１−第２−第３−第４中間体（または第１−第２−第３中間体）を提供するよう結合される。あるいは、式（ＩＩ）のαへリックス模倣構造は、段階的な液剤中または固相ペプチド合成において一般に実践される固相合成のどちらかの個別の成分要素を順次結合することによって調製してもよい。

本発明の状況内では、「第１の成分要素」は以下の式Ｓｌを有する。

式中、Ｒ_２は上記に定義したとおりであり、またＲはペプチド合成における使用に適切な保護基である。適切なＲ基はアルキル基を含み、好ましい実施態様では、Ｒはメチル基である。かかる第１の成分要素は、還元的アミノ化またはＣＨ（ＯＲ）_２−ＣＨＯまたはＣＨ（ＯＲ）_２−ＣＨ_２−Ｈａｌ（ここではＨａｌはハロゲン原子を意味する）からのＨ_２Ｎ−Ｒ_２の置換による置換反応によって容易に合成してもよい。

本発明の「第2の成分要素」は以下の式 S２を有する。

式中、Ｌ_１は、ハロゲン原子などのカルボキシル−活性化基であり、Ｒ_３、Ｒ_４は上記に定義したとおりであり、Ｐは、ペプチド合成における使用に適切なアミノ保護基である。好ましい保護基は、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、メチルオキシカルボニル（ＭＯＣ）、９Ｈ−フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）、およびアリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）を含む。Ｌが−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲのとき、−ＮＨＲはカルボキシル保護基であってもよい。Ｎ−ヒドラジノアミノ酸は、Ｖｉｄａｌらの手順に従って容易に調製することができる（ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒｓ３９：８８４５−８８４８、１９９８）。これらの化合物の本発明の第２の成分要素への変換は、Ｎ−保護ヒドラジン−アミノ酸のカルボン酸基の活性化によって容易に達成してもよい。適切な活性カルボン酸基は、Ｘが塩化物または臭化物などのハロゲン化物である酸ハロゲン化物、Ｘがアセチルなどのアシル基である酸無水物、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルおよびペンタフルオロフェニルエステルなどの反応エステル、ならびにジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）などのカルボジイミドを使用して結合反応において形成される活性中間体などの他の活性中間体を含む。

本発明の「第３の成分要素」を以下の式Ｓ３を有する。

式中Ｇ、Ｅ、およびＬ_１は上記に定義したとおりである。適切な第３の成分要素は、様々な関係筋から市販されており、有機化学における既知の方法によって調製することができる。

より具体的には、本発明の式（ＩＩ）のαへリックス模倣構造は、第１の成分要素と第２の成分要素を反応させることによって合成して複合第１−第２中間体を産出し、または続いて順次複合第１−第２中間体を第３の成分要素と反応させて複合第１−第２−第３−第４中間体を提供し、この中間体を環化してαへリックス模倣構造を産出する。
構造Ｉ’を有するαへリックスの一般的な合成は、以下の技術によって合成される。第１の成分要素１は、ホスゲンなどの結合試薬を使用することによって第２の成分要素２と結合し、以下に示すように、Ｎ−脱保護の後、複合第１−第２中間体１−２を産出する。

式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、Ｒ_７、Ｆｍｏｃ、ＭｏｃおよびＸは上記に定義したとおりであり、またＰｏｌは高分子支持体を表す。

本発明の代表的な成分要素の合成は、調製例および実施例にて説明する。

式（ＩＩＩ）および（ＩＶ）のαへリックス模倣構造は、上記に開示した補給剤成分合成に類似している技術によって作ってもよいが、成分要素に対して適当な修正を必要とする。

上述のように、Ｋａｈｎらによる米国特許６，０１３，４５８号のリバースターン模倣剤は、診断用、予防薬、および治療薬などの生物活性剤として有用である。代表的なリバースターン模倣剤の活性化を結合するアヘン剤受容体は、前記米国特許６，０１３，４５８号の実施例９で提示されているが、ここでは本発明のリバースターン模倣剤は、δおよびμアヘン剤受容体に対する放射性標識エンケファリン誘導体の結合を効率的に抑制することが分かっており、そのデータは受容体作用薬および潜在的な鎮痛薬としてのこれらのリバースターン模倣剤の効用を明示している。

本発明のαへリックス模倣構造は、診断用、予防薬、および治療薬などの生物活性剤として有用となるであろう。

したがって、本発明に従う化合物は、αへリックス模倣構造から成るので、式（Ｉ）の有効な量の化合物を温血動物に投与することは、前記動物においる細胞シグナル伝達転写因子に関連するペプチドを修飾するために有用である場合がある。

ＩＣＧ−００ｌと称される、特殊な化合物を化合物Ｖとして以下に示す。

さらに、本発明のαへリックス模倣構造はまた、転写因子／コアクチベータおよび転写因子抑制補体相互作用を抑制するのに有効である場合がある。

したがって、一般式（ＶＩ）を有する安全で有効な量の化合物を含む薬剤組成物、およびＴＧＦ−βシグナル伝達経路によって調節される線維症の治療に使用することができる、薬剤として許容される担体を提供することが、本発明の目的である。

本発明の別の側面では、本発明のαへリックス模倣構造を含むライブラリを開示する。一旦作り上げられると、本発明のライブラリは、生物活性を有する個別のメンバーを特定するよう選別してもよい。生物活性員のためにライブラリのかかる選別は、例えば、ライブラリのメンバーの結合活性の評価、またはライブラリのメンバーが機能分析において有する効力の評価に関与してもよい。選別は一般に、当該の標的、例えば、抗体、酵素、受容体または細胞系でライブラリのメンバー（またはライブラリのメンバーのサブセット）に接触することにより達成する。当該の標的と相互作用できるライブラリのメンバーは、本明細書では「生物活性ライブラリのメンバー」または「生物活性模倣剤」と称される。例えば、生物活性模倣剤は、抗体または受容体に結合することができる、酵素を抑制することができる、または、例えば、細胞系に関連する機能的反応を引き出す、もしくは無効にすることができる、ライブラリのメンバーであってもよい。言い換えれば、本発明のライブラリの選別は、どのライブラリのメンバーが、１つ以上の当該の生物学的標的と相互作用できるかを決定する。さらに、相互作用が実際に発生するときは、その結果生物活性模倣剤（または複数の模倣剤）は、ライブラリのメンバーから識別してもよい。ライブラリからの単一（または限定された数）の模倣剤の識別は、それら自体が生物活性のあり、従って、診断用、予防薬または治療薬として有用であるαへリックス模倣構造を産出し、またこれらの分野において鉛化合物の識別を著しく進歩させるのに使用してもよい。

本発明の別の側面では、ライブラリを構築するための方法を開示する。従来の組み合わせ化学技術（例えば、Ｇａｌｌｏｐら、Ｊ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３７：１２３３−１２５１、１９９４を参照）は、基本的な分子足場に対する試薬の連続的な組み合わせによって迅速な膨大な数の化合物の調製を可能にする。組み合わせ技術は、自然発生型アミノ酸から誘導されるペプチドライブラリを構築するために使用されてきた。例えば、２０の適切に保護された、異なるアミノ酸の２０の混合物を選び、またそれぞれを２０のアミノ酸のうちの１つと結合することによって、４００（すなわち、２０の２乗の）ライブラリのジペプチドが作成される。前記手順を７回繰り返すことは、約２６０億（すなわち２０の８乗）のオクタペプチドから成るペプチドライブラリの調製をもたらす。

具体的には、本発明のライブラリのペプチド模倣剤の合成は、既知のペプチド合成技術、例えば、以下のＧｅｎｅｒａｌ Ｓｃｈｅｍｅの［４、４、０］αへリックス模倣剤ライブラリを使用して達成してもよい。

本発明のライブラリのペプチド模倣剤の合成は、既知の技術による９６のウェルプレートを有するＦｌｅｘＣｈｅｍ Ｒｅａｃｔｏｒ Ｂｌｏｃｋを使用して達成した。上記のスキーム「Ｐｏｌ」は、ブロモアセタール樹脂（Ａｄｖａｎｃｅｄ ＣｈｅｍＴｅｃｈ）を表し、また手順の詳細を以下に示す。

ステップｌ
ブロモアセタール樹脂（３７ｍｇ、０．９８ｍｍｏｌ／ｇ）およびＤＭＳＯ（１．４ｍＬ）中のＲ_２−アミンの液剤を、９６のウェルプレートを有するＲｏｂｂｉｎｓブロック（ＦｌｅｘＣｈｅｍ）に置いた。反応混合物を、回転炉（Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、６０℃で１２時間振盪した。樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、その後ＤＣＭで洗浄した。

ステップ２
ＤＭＦ中の利用可能なＦｍｏｃヒドラジンアミノ酸（４当量）、ＰｙＢｏｐ（４当量）、ＨＯＡｔ（４当量当）、およびＤＩＥＡ（１２当量）の液剤を樹脂に添加した。反応混合物を室温で１２時間振盪した後、樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ５その後ＤＣＭで洗浄した。

ステップ３
反応前にＤＭＦにより膨張させた樹脂に、２５％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、反応混合物を室温で３０分間振盪した。この脱保護ステップを再び繰り返し、樹脂をＤＭＦ、メタノール、続いてＤＣＭで洗浄した。ヒドラジン酸（４当量）、ＨＯＢｔ（４当量）、およびＤＩＣ（４当量）を含むＤＭＦ溶液を樹脂に加え、反応混合物を室温で１２時間振盪した。樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、続いてＤＣＭで洗浄した。

ステップ４ａ（ヒドラジン酸がＭＯＣカルバメートである場合）
ステップ３で得られた樹脂を、ギ酸（１ウェル当り１．２ｍＬ）により室温で１８時間処理した。濾過により樹脂を除去したあと、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下で濾液を濃縮し、油として生成物を得た。生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、冷凍後凍結乾燥した。

ステップ４ｂ（Ｆｍｏｃヒドラジン酸を使用して、イソシネートにより尿素を生成する場合）
反応前にＤＭＦにより膨張させた樹脂に、２５％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、反応混合物を室温で３０分間振盪した。この脱保護ステップを再び繰り返し、樹脂をＤＭＦ、メタノール、続いてＤＣＭで洗浄した。反応前にＤＣＭにより膨張させた樹脂に、イソシネート（５当量）溶液を加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪したあと、樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、続いてＤＣＭで洗浄した。樹脂をギ酸（１ウェル当り１．２ｍＬ）により室温で１８時間処理した。濾過により樹脂を除去したあと、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下で濾液を濃縮し、油として生成物を得た。生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、冷凍後凍結乾燥した。

ステップ４ｃ（Ｆｍｏｃヒドラジン酸を使用して、活性カルバメートにより尿素を生成する場合）
反応前にＤＭＦにより膨張させた樹脂に、２５％ピペリジンＤＭＦ溶液を加え、反応混合物を室温で３０分間振盪した。この脱保護ステップを再び繰り返し、樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、続いてＤＣＭで洗浄した。反応前にＤＣＭにより膨張させた樹脂に、クロロギ酸ｐ−ニトロフェニル（５当量）とジイソプロピルエチルアミン（５当量）のＤＣＭ溶液を加えた。反応混合物を室温で１２時間振盪したあと、樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、続いてＤＣＭで洗浄した。樹脂に１級アミンＤＣＭ溶液を加え、１２時間後に樹脂をＤＭＦ、ＭｅＯＨ、続いてＤＣＭで洗浄した。反応後、樹脂をギ酸（１ウェル当り１.２ｍＬ）により、室温で１８時間処理した。濾過により樹脂を除去したあと、ＳｐｅｅｄＶａｃ［ＳＡＶＡＮＴ］を使用して、減圧下で濾液を濃縮し、油として生成物を得た。生成物を５０％水／アセトニトリルで希釈し、冷凍後凍結乾燥した。

ここに記載される例および実施例は、説明目的に過ぎず、それを踏まえてのさまざまな修正または変更が、当業者に対し示唆され、また本出願の精神と範囲に含まれることを理解されたい。

例１
ＩＣＧ−００１の肺線維症に対する効果
ブレオマイシン誘発線維症のマウスモデルは、線維性疾患の進行を研究するために開発されている。ブレオマイシン誘発マウス線維症は、明らかにＩ型の表現型を正確に区別しない化生肺胞細胞の増加を伴う、異常肺胞上皮修復の原因となることが示されてきた（ＡｄａｍｓｏｎおよびＢｏｗｄｅｎ、１９７９ Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ、１９７９年８月、９６（２）：５３１−４４）。このモデルを使用して、本例では、Ｗｎｔ／β−カテニン経路が肺線維症に重大な影響を及ぼすことを実証し、またＩＣＧ−００１によるこの経路の阻害が、肺線維性疾患の治療のための療法を示すことを検証する。

トランスジェニックＢａｔ−Ｇａｌマウスにおける、この肺線維症のマウスモデルを使用して、ＩＣＧ−００１（５ｍｇ／Ｋｇ／１日）は、＞９５％のブレオマイシン誘発ＴＣＦ／β−カテニン転写を阻害した。さらに、この用量のＩＣＧ−００１は、疾患の進行を停止させただけでなく、逆転させたことが、死亡率、組織病理、および内在性遺伝子発現の減少により判断された。図１は、Ｂａｔ−Ｇａｌトランスジェニックマウスから切除した肺断面を示す。これらのマウスは、ＴＣＦ／カテニン活性プロモータにより活性化されるベータガラクトシダーゼトランス遺伝子を有する（活性化Ｗｎｔ／カテニンシグナル伝達用の読み出し）。マウスは、生理食塩水またはブレオマイシンを気管内投与され、ＩＣＧ−００１（５ｍｇ／Ｋｇ／１日、皮下）、または溶媒対照としての生理食塩水のいずれかで処置された。マウスを致死させ、肺を切断され、Ｘ−ＧａＩ（青色）で染色された。Ａ）気管内ブレオマイシン＋生理食塩水。Ｂ）気管内ブレオマイシン＋ＩＣＧ−００１Ｃ。Ｃ）生理食塩水＋生理食塩水。

この用量が選択された理由は、ＩＣＧ−００１が、５ｍｇ／Ｋｇ／１日で、ＴＣＦ／β−カテニン活性β−ガラクトシダーゼ発現を＞９５％減少させるからである。

図２は、気管内ブレオマイシン（左下）、または生理食塩水（左上）により５日間処置され、コラーゲンを染色するために、トリクロム（赤色）で染色したＣ５７／Ｂ１６マウスから切除した肺断面を示す。左上と比較すると、左下には気道上皮がかけており（矢印参照）、広範囲にわたるコラーゲン沈着（左下）が存在する。６日目には、生理食塩水（右上）またはＩＣＧ−００ｌ（５ｍｇ／Ｋｇ／１日）のいずれかを１０日間投与し、その後マウスを致死させて切開した。正常な気道上皮形成の欠如、広範囲にわたるコラーゲン沈着、および気道内細胞過多（線維芽細胞および炎症性流入）を示す右上（生理食塩水処置）が興味深い。ＩＣＧ−００１による処置のあと、気道は基本的に正常と見られ（左上）（未処置（生理食塩水）対照と比較して）、正常なコラーゲンレベルを有する。マウスはまた、正常な体重を取り戻し、生き残った（未処理の対照は生き残らなかった）。

図３は、Ｓ１００Ａ４およびコラーゲン１Ａ２のＲＴ−ＰＣＲデータを示すが、これはブレオマイシン処置マウスで増加される（生理食塩水対照とともに処置）。メッセージは、ＩＣＧ−００１処置（５ｍｇ／Ｋｇ／１日、皮下注射）により、基本的にネガティブコントロール（生理食塩水／生理食塩水マウス）のレベルまで減少される。

図４に示されるように、ＩＰＦ患者の線維芽細胞は、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳで２日間培養され、ＩＣＧ−００１で処置された。Ｓ１００Ａ４（ＦＳＰ−１または線維芽細胞特異タンパク質−１としても知られる）およびＥ−カドヘリンに対するウエスタンブロット法が、全細胞溶解液で実施された。ＩＣＧ−００１は、Ｓ１００Ａ４発現を減少させ、Ｅ−カドヘリン発現を増加させた（ｍＲＮＡレベルにも当てはまる）。これらのデータは、ＩＣＧ−００１が、正常な治癒、再上皮形成、および線維症の回復に不可欠な間葉から上皮への移行を媒介することを示す。

全ての図および表を含む、ここで言及あるいは引用される全ての特許、特許出願、仮出願、および広報は、本明細書の明白な教示に矛盾しない限り、参照により全体として本開示に含まれる。

図１は、生理食塩水またはブレオマイシンを気管内投与され、ＩＣＧ−００１（５ｍｇ／Ｋｇ／１日、皮下）または溶媒対照としての生理食塩水のいずれかで処置されたＢａｔ−Ｇａｌトランスジェニックマウスから切除された肺の断面を示す。この肺は、切除後Ｘ−Ｇａｌ（青色）で染色された。図１A)は気管内ブレオマイシン＋生理食塩水、図１B)は気管内ブレオマイシン＋ＩＣＧ−００１、図１Cは生理食塩水＋生理食塩水である。 図２は、気管内ブレオマイシン（左下）、または生理食塩水（左上）で５日間処置され、コラーゲンを染色するためにトリクロム（赤色）で染色されたＣ５７／Ｂ１６マウスから切除された肺の断面を示す。 図３は、Ｓ１００Ａ４およびコラーゲン１Ａ２に対するデータを示すが、これはブレオマイシン処置マウス（生理食塩水対照とともに処置）において増加される。メッセージは、ＩＣＧ−００１処置（５ｍｇ／Ｋｇ／１日、皮下注射）により、基本的にネガティブコントロール（生理食塩水／生理食塩水マウス）のレベルまで減少される。 図４は、ＲＰＭＩ１６４０＋１０％ＦＢＳでの２日間の培養、およびＩＣＧ−００１による処置後のＩＰＦ患者の線維芽細胞の結果を示す。Ｓ１００Ａ４（ＦＳＰ−１または線維芽細胞特異タンパク質−１としても知られる）およびＥ−カドヘリンに対するウエスタンブロット法が、全細胞溶解液で実施された。ＩＣＧ−００１は、Ｓ１００Ａ４発現を減少させ、Ｅ−カドヘリン発現を増加させた。

Claims (22)

1. 以下の一般式（Ｉ）を有する化合物であって、
   

   

   Ａは、−（ＣＨＲ_３）−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂは、−（ＮＲ_４）−であり、Ｄは、−（ＣＨＲ_５）−または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ_６）−、−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｇは、−（ＸＲ_７）_ｎ−、−（ＣＨＲ_７）−（ＮＲ_８）−、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ_９）−、または−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｗは、−Ｙ（Ｃ＝Ｏ）−、−（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＳＯ_２）−、または存在せず、Ｙは、酸素または硫黄であり、ＸおよびＺは、独立して窒素またはＣＨでｎ＝０または１であり、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_４、Ｒ_５、Ｒ_６、Ｒ_７、Ｒ_８、およびＲ_９は、同じまたは異なり、アミノ酸側鎖、アミノ酸側鎖の誘導体、前記化合物の別の部分または化合物への連結を促進するリンカー、前記化合物を固体支持体に結合するリンカー、および固体支持体、およびその立体異性体から独立して選択される、一般式（Ｉ）を有する化合物。
2. Ｒｌ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、およびＲ９は、アミノＣ２−５アルキル、グアニジノＣ２−５アルキル、Ｃ１−４アルキルグアニジノＣ２−５アルキル、ジＣ１−４アルキルグアニジノ−Ｃ２−５アルキル、アミジノＣ２−５アルキル、Ｃ１−４アルキルアミジノＣ２−５アルキル、ジＣ１−４アルキルアミジノＣ２−５アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、フェニル、置換フェニル（置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ベンジル、置換ベンジル（ベンジル上の置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ナフチル、置換ナフチル（置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ビス−フェニルメチル、置換ビス−フェニルメチル（置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリジル、置換ピリジル、（置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリジルＣ１−４アルキル、置換ピリジルＣ１−４アルキル（ピリジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、ピリミジルＣ１−４アルキル、置換ピリミジルＣ１−４アルキル（ピリミジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシルあるいはニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、トリアジン−２−イル−Ｃ１−４アルキル、置換トリアジン−２−イル−Ｃ１−４アルキル（トリアジン置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリル、またはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、イミダゾＣ１−４アルキル、置換イミダゾールＣ１−４アルキル（イミダゾール置換基は、アミノ、アミジノ、グアニジノ、ヒドラジノ、アミドラゾニル、Ｃ１−４アルキルアミノ、Ｃ１−４ジアルキルアミノ、ハロゲン、ペルフルオロＣ１−４アルキル、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−３アルコキシル、ニトロ、カルボキシ、シアノ、スルフリルまたはヒドロキシルのうち１つ以上から独立して選択される）、イミダゾリニルＣ１−４アルキル、Ｎ−アミジノピペラジニル−Ｎ−Ｃ０−４アルキル、ヒドロキシＣ２−５アルキル、Ｃ１−５アルキルアミノＣ２−５アルキル、ヒドロキシＣ２−５アルキル、Ｃ１−５アルキルアミノＣ２−５アルキル、Ｃ１−５ジアルキルアミノＣ２−５アルキル、Ｎ−アミジノピペリジニルＣ１−４アルキル、および４−アミノシクロヘキシルＣ０−２アルキルから成るグループから独立して選択される、請求項１の化合物。
3. Ａは、−（ＣＨＲ３）−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｂは、−（ＮＲ４）−であり、Ｄは、（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅは、−（ＺＲ６）−であり、Ｇは、−（Ｃ＝Ｏ）−（ＸＲ９）−であり、また前記化合物は以下の一般式（ＩＩＩ）を有し、
   

   
4. 式中、Ｒ_１、Ｒ_２、Ｒ_４、Ｒ_６、Ｒ_９、Ｗ、およびＸは、請求項１に定義されるとおりであり、Ｚは窒素またはＣＨである（ＺがＣＨのとき、前記Ｘは窒素）、請求項１の化合物。
5. Ａが−Ｏ−ＣＨＲ３−であり、Ｂが−ＮＲ４−であり、Ｄが−（Ｃ＝Ｏ）−であり、Ｅが−（ＺＲ６）−であり、Ｇが（ＸＲ７）ｎ−のとき、αへリックス模倣化合物は、式（ＩＶ）を有し、
   

   

   式中、Ｚは窒素またはＣＨであり、Ｚが窒素のときｎはゼロであり、ＺがＣＨのときＸは窒素であって、ｎがゼロではない、またはＸ_（ｎ）がゼロである、請求項２の化合物。
6. Ｒ４はアミノ酸側鎖部から選択され、Ｒ６またはＲ７は、ＺおよびＸがそれぞれＣＨであるときにアミノ酸側鎖部から選択されてよい、請求項４の化合物。
7. 請求項１の少なくとも１つの化合物を備える、ペプチド模倣化合物のライブラリ。
8. 請求項１の化合物および薬剤として許容される担体を備える薬剤組成物。
9. 組成物が安全かつ有効な量の化合物と、薬剤として許容される担体とを備える、請求項７に記載の薬剤組成物。
10. 前記化合物は、線維性疾患においてシグナルを伝達するＷｎｔ／カテニンを抑制する、請求項１の化合物。
11. 前記化合物は抗線維化および／または抗増殖剤である、請求項１に記載の化合物。
12. 前記抗線維化剤は、肺線維症におけるコラーゲンの病的重合の修復または防止からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する、請求項１０の化合物。
13. 前記抗線維化剤は、既存の病的線維化組織の修復および正常化からなる群より選択される少なくとも１つの活性を有する、請求項１０の化合物。
14. 治療が必要な哺乳類に、請求項１の少なくとも１つの化合物を投与するステップを含む、線維性疾患の治療方法。
15. 前記疾患は、放射線誘発肺線維症、化学療法誘発肺線維症、閉塞性細気管支炎、および珪肺症からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１３に記載の方法。
16. 前記疾患は、腎臓疾患、多発性嚢胞腎、腎臓繊維症、糸球体腎炎、肝硬変、全身性狼瘡を伴う腎炎、腹膜線維症、肝線維症、多嚢胞性卵巣症候群、心筋線維症、グレーヴス眼症、緑内障、瘢痕、皮膚病変、糖尿病性網膜症、強皮症、およびアルツハイマー病のうち少なくとも１つである請求項１３に記載の方法。
17. 前記疾患は、間質性肺疾患、繊維性肺疾患、および肺線維症からなる群より選択される少なくとも１つである、請求項１３に記載の方法。
18. 前記化合物は、経口的、経皮的、静脈内、外用的、吸入により、または直腸的に対象に供給される、請求項１３に記載の方法。
19. 前記化合物は、経口的に供給される、請求項１７の方法。
20. 前記化合物は、徐放により対象に投与される、請求項１７の方法。
21. 前記薬剤組成物は、カプセル、錠剤、粉剤、顆粒シロップ、注射用液、クリーム、軟膏、親水軟膏、吸入用液、点眼剤、および坐薬からなる群より選択される方法により投与される、請求項１７の方法。
22. 前記化合物はＩＣＧ−００１（化合物Ｖ）である、請求項１３の方法。
    

    

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