JP2008516970A - 癌および免疫障害の処置および予防のための抗ｃｄ７０抗体ならびにその使用 - Google Patents

癌および免疫障害の処置および予防のための抗ｃｄ７０抗体ならびにその使用 Download PDF

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Abstract

治療剤と結合体化することなく細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用を誘導する抗ＣＤ７０抗体および誘導体等のＣＤ７０結合剤、ならびに抗体または誘導体を含む医薬組成物およびキットが開示される。被験体にＣＤ７０結合剤を投与する工程を包含する、ＣＤ７０を発現する癌および免疫障害の処置のための方法および予防のための方法も開示される。本発明により、被験体内のＣＤ７０を発現する癌を処置するための方法が提供され、この方法は、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域およびこの被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを有する結合剤を効果的な量でこの被験体に投与する工程を包含する。

Description

（関連出願の引用）
本出願は、米国仮特許出願第６０／６１９，０１８号（２００４年１０月１５日出願）、および米国仮特許出願第６０／６４５，３５５号（２００５年１月１９日出願）の優先権を主張する。これらの各々は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
（発明の背景）
ＣＤ７０は、各種の正常および悪性の細胞型により発現される細胞膜結合／分泌分子の腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーの一員である。ＣＤ７０の一次アミノ酸（ＡＡ）配列により、カルボキシ末端が細胞外に曝され、アミノ酸末端が形質膜の細胞質ゾル側に見られる膜貫通タイプＩＩのタンパク質が予測される（非特許文献１；非特許文献２）。ヒトＣＤ７０は、２０ＡＡ細胞質ドメイン、１８ＡＡ膜貫通ドメイン、および２つの潜在的Ｎ結合グリコシル化部位を有する１５５ＡＡ細胞質外ドメインから構成される（非特許文献１；非特許文献２）。放射性同位元素で標識されたＣＤ７０発現細胞の抗ＣＤ７０抗体による特異的免疫沈澱は、２９および５０ｋＤａのポリペプチドを生じる（非特許文献２；非特許文献３）。特に、構造鎖Ｃ、Ｄ、ＨおよびＩ中では、ＴＮＦ−アルファおよびＴＮＦ−ベータに対する相同性に基づいて、ＣＤ７０についての三量体構造が予測される（非特許文献４）。
初期の免疫組織学的研究において、ＣＤ７０が、扁桃腺、皮膚および消化器官中の胚中心Ｂ細胞と稀なＴ細胞上で発現することが明らかになった（非特許文献５）。その後、最近抗原活性化されたＴおよびＢリンパ球の細胞表面上でＣＤ７０が発現することが報告されており、その発現は抗原刺激を取り除くと弱まる（非特許文献６；非特許文献７）。リンパ系内では、活性化されたナチュラルキラー細胞（非特許文献８）およびマウスの成熟末梢樹状細胞（非特許文献９）もＣＤ７０を発現する。非リンパ由来細胞では、胸腺髄質上皮細胞上でＣＤ７０が検出されている（非特許文献５；非特許文献１０）。
正常細胞上での発現に加え、リンパ腫、癌腫および神経性腫瘍を始めとする異なる種類の癌におけるＣＤ７０の発現が報告されている。悪性Ｂ細胞では、散在性大Ｂ細胞リンパ腫の７１％、濾胞中心リンパ腫の３３％、マントルリンパ腫の２５％、およびＢ−ＣＬＬの５０％がＣＤ７０を発現することが報告されている（非特許文献１１）。ＣＤ７０は、ホジキン病の悪性ホジキン細胞およびリード・シュテルンベルク細胞上で、他のリンパ活性化マーカーとともに発現することが多い（非特許文献１２）。ある報告では、胸腺癌腫の８８％（８例のうち７例）および異型性胸腺腫の２０％（５例のうち１例）においてＣＤ７０が発現したと報じている（非特許文献１０）。ＣＤ７０が検出された第２タイプの癌腫は上咽頭癌腫である。ある研究では、非分化上咽頭癌腫から得られた急速凍結腫瘍生検の８０％（２０例のうち１６例）においてＣＤ７０が存在すると報告している（非特許文献１３）。ＣＤ７０は、脳腫瘍細胞、特にグリオーマ細胞系、固体ヒトグリオーマおよび髄膜腫上でも検出されている（非特許文献１４；非特許文献１５）。
ＣＤ７０の受容体は、約５５ｋＤａのグリコシル化されたタイプＩの膜貫通タンパク質であるＣＤ２７である（非特許文献２；非特許文献５）。ＣＤ７０はＣＤ２７Ｌと称される場合もある。細胞表面上でホモダイマーとして存在するＣＤ２７（非特許文献１６）は、細胞外ドメインの約４０個のアミノ酸からなるシステインが豊富な繰返し単位により定められるＴＮＦ受容体・スーパーファミリーの一員である（非特許文献１７；非特許文献１８）。ＣＤ２７は、胸腺細胞、ＮＫ、ＴおよびＢ細胞により発現される（非特許文献１９；非特許文献２０）。休止Ｔ細胞上では、ＣＤ２７は構成的に発現するが、抗原誘発により、ＣＤ２７の発現はさらにアップレギュレートされる（非特許文献２１；非特許文献２２）。さらに、Ｔ細胞抗原受容体複合体単独で、または付属分子ＣＤ２８と組み合わせてＴ細胞を誘発することにより、活性化Ｔ細胞から可溶性ＣＤ２７が放出される（非特許文献２３）。ナイーブＢ細胞はＣＤ２７を発現しないが、発現が誘導され、ＣＤ７０とは対照的に、Ｂ細胞の抗原誘発後も維持される（非特許文献２４；非特許文献２５）。
正常なＢ系統細胞においてＣＤ２７およびＣＤ７０の発現が制限されていたこととは著しく対照的に、多くのＢ細胞非ホジキンリンパ腫および白血病では、ＣＤ２７およびＣＤ７０はともに共発現することが多い。これにより、これらの細胞上において、オートクラインループの形態をした機能的なＣＤ２７／ＣＤ７０の相互作用が潜在的に導かれ、ＣＤ２７シグナル伝達およびＣＤ７０誘導増殖をもたらすことにより悪性細胞の成長にとって有利になる（非特許文献１１）。
細胞により仲介される自己免疫病におけるＣＤ７０／ＣＤ２７共刺激の役割は、実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルで調査されている（非特許文献２６）。抗マウスＣＤ７０ｍＡｂ（クローンＦＲ−７０）をインビボ投与した場合、ＢおよびＴ細胞数、Ｔ細胞プライミング、Ｉｇ産生またはＴＨ１／ＴＨ２細胞バランスに影響を与えることなく、抗原誘導ＴＮＦ−アルファ産生を阻害することによりＥＡＥの発症が抑制された。しかしながら、そのような処置は確立した病気にはほとんど有効性を持たなかった。
移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、骨髄ドナーと移植片の受容者との間で組織適合性抗原が異なる場合に、同種間骨髄移植（ＢＭＴ）療法の結果生じることが多く、致命的となることが多い、主要なＴＨ１により仲介される免疫応答である（非特許文献２７）。ＧＶＨＤは、移植されたドナー骨髄に存在する成熟Ｔ細胞によって惹起される、宿主組織に対する免疫反応である（非特許文献２８）。重症複合免疫不全症患者における母性Ｔ細胞移植の場合のように、同種間反応を特徴とする条件下において、インビボでＣＤ４＋細胞上でＣＤ７０が検出されたことは注目すべきことである（非特許文献２９）。ＧＶＨＤの予防は、シクロスポリン、コルチコステロイドまたはメトトレキセート等の汎Ｔ細胞免疫抑制剤により行なわれる。しかしながら、これらの物質は特異的ではなく、重大な副作用を起こす。
上記のように、ＣＤ７０は、正常な非造血細胞上では発現されない。ＣＤ７０の発現は、生理学的条件下では、多くの場合、最近抗原活性化されたＴおよびＢ細胞に限定され、その発現は、抗原刺激が終わるとダウンレギュレートされる。ＣＤ７０が、例えば、関節リウマチ（非特許文献２９）、乾癬性関節炎（非特許文献２９）、および狼瘡（非特許文献３０）等の免疫障害に寄与し得ることは、動物モデルによる検証により示されている。炎症反応における潜在的な役割に加えて、ＣＤ７０は、リンパ腫Ｂ細胞、ホジキン／リード・シュテルンベルク細胞、神経性悪性細胞、および多くの癌腫を含む各種の形質転換細胞上でも発現する。
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従って、ＣＤ７０を発現しない細胞に対しては特に望ましくない作用を及ぼすことなく、ＣＤ７０を発現する細胞に対して臨床的に有用な細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用を及ぼすことが可能な抗ＣＤ７０抗体および他のＣＤ７０結合剤が必要とされる。そのような結合剤は、ＣＤ７０を発現する癌、またはＣＤ７０を発現する細胞により仲介される免疫障害に対して有用である。
（発明の簡単な説明）
本発明は、ＣＤ７０抗体および他のＣＤ７０結合剤を提供し、さらに、そのような結合剤を、ＣＤ７０を発現する細胞が存在するＣＤ７０を発現する癌および免疫障害の予防または処置のために使用することに関する方法を提供する。抗体または他の結合剤は、ＣＤ７０に結合し、治療剤と結合体化しない場合に、ＣＤ７０を発現する細胞に対して細胞毒性作用、細胞静止作用および／または免疫抑制作用を示す。
１つの局面では、被験体内のＣＤ７０を発現する癌を処置する方法が提供される。この方法は、一般に、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および上記被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを有する結合剤を効果的な量で上記被験体に投与する工程を含み、上記結合剤は、治療剤と結合体化しない場合、細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼす。このＣＤ７０結合剤は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体等の抗体とすることができる。この抗体は、例えば、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含むようにすることができる。上記ＩｇＧ抗体は、例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプとすることができる。いくつかの実施形態では、上記抗体はヒトの定常領域を含む。
いくつかの実施形態では、上記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する。他の実施形態では、上記抗体は、ヒト化１Ｆ６もしくは２Ｆ２またはキメラ１Ｆ６もしくは２Ｆ２抗体である。上記抗体は、例えば、一価、二価または多価とすることができる。
上記ＣＤ７０を発現する癌は、例えば、腎腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、結腸癌腫、ホジキン病、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、鼻咽頭癌腫、脳腫瘍または胸腺癌腫とすることができる。腎腫瘍は、例えば、腎細胞癌腫とすることができる。脳腫瘍は、例えば、神経膠腫、グリア芽腫、または髄膜腫とすることができる。上記被験体は、例えば、ヒト等の哺乳動物とすることができる。
他の局面では、免疫障害を処置するための方法が提供される。この方法は、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および上記被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを有する結合剤を効果的な量で上記被験体に投与する工程を含み、上記結合剤は、治療剤と結合体化しない場合、細胞静止作用、細胞毒性作用、または免疫抑制作用を及ぼす。このＣＤ７０結合剤は、例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体等の抗体とすることができる。この抗体は、例えば、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含むようにすることができる。上記ＩｇＧ抗体は、例えば、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプとすることができる。いくつかの実施形態では、上記抗体はヒトの定常領域を含む。
いくつかの実施形態では、上記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する。他の実施形態では、上記抗体は、ヒト化１Ｆ６もしくは２Ｆ２またはキメラ１Ｆ６もしくは２Ｆ２抗体である。上記抗体は、例えば、一価、二価または多価とすることができる。
上記免疫障害は、例えば、Ｔ細胞仲介免疫障害とすることができる。いくつかの実施形態では、上記Ｔ細胞仲介免疫障害は、ＣＤ７０を発現する活性化Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、休止Ｔ細胞は、抗体／医薬結合体の投与により大きく低減しない。上記Ｔ細胞仲介免疫障害はまた、例えば、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、タイプＩ糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、血小板減少紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、ハシモト甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、または移植片対宿主病とすることもできる。他の実施形態では、上記免疫障害は活性化Ｂリンパ球障害である。上記被験体は、例えば、ヒト等の哺乳動物とすることができる。
他の局面では、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域を含む抗体が提供される。この抗体は、被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する癌に対して細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼし、この細胞静止作用または細胞毒性作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、上記抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２ではない。上記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６および２Ｆ２と競合し得る。
他の局面では、上記抗体は、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する免疫障害に対して免疫抑制作用を及ぼし、この免疫抑制作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、上記抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２ではない。上記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６および２Ｆ２と競合し得る。
関連する局面では、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害を処置するための医薬組成物も提供される。この組成物は、ＣＤ７０結合抗体、および少なくとも１つの薬学的に適合性のある成分を含む。さらに、凍結乾燥されたＣＤ７０結合抗体を含む容器、および薬学的に許容される希釈液を含む第２の容器を含む医薬キットが提供される。
本発明は、下記の発明の詳細な説明、発明の特定の実施形態の非限定的な例および添付の図面を参照することにより、さらに十分に理解することができる。
（発明の詳細な説明）
本発明は、ＣＤ７０結合剤を提供し、さらには、そのような結合剤を、ＣＤ７０を発現する癌および免疫障害の予防または処置のために使用する方法を提供する。ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０に結合するドメイン（例えば、細胞外ドメイン）およびエフェクタードメインを含む。本発明者らは、治療剤と結合体化しない場合、エフェクタードメインを有するＣＤ７０結合剤がＣＤ７０を発現する細胞に対する細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用を誘導することができることを見出した。例えば、細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用は、細胞毒性白血球細胞、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、食作用細胞（例えば、マクロファージ）および／または血清補体成分を漸増ならびに活性化することにより誘導することができる。
１つの局面では、上記方法および組成物は、ＣＤ７０に結合する抗体および抗体誘導体に関する。例示的な実施形態では、この抗体またはその誘導体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する。細胞毒性作用、細胞静止作用および／または免疫抑制作用は、ＣＤ７０抗体または誘導体、およびその抗体のエフェクタードメイン（例えば、Ｆｃ領域）と相互作用するエフェクター細胞または補体成分によって仲介される。細胞毒性作用、細胞静止作用および／または免疫抑制作用は、ＣＤ７０を発現する細胞の増殖を低減または阻害する。ＣＤ７０抗体は、モノクローナル、キメラ、ヒト化およびヒト抗体とすることができる。いくつかの実施形態では、抗体定常領域は、ＩｇＧサブタイプである。いくつかの実施形態では、上記抗体は、マウスモノクローナル抗体ではない。
他の局面では、上記方法および組成物は、ＣＤ７０に結合する他のＣＤ７０結合剤に関する。ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０の細胞外ドメインに結合する。細胞毒性作用、細胞静止作用および／または免疫抑制作用は、ＣＤ７０結合剤、およびエフェクタードメイン（例えば、Ｆｃ領域）と相互作用するエフェクター細胞または補体成分により仲介される。細胞毒性作用、細胞静止作用および／または免疫抑制作用は、ＣＤ７０を発現する細胞の増殖を低減または阻害する。ＣＤ７０結合剤は、例えば、ＣＤ２７およびその誘導体とすることができる。
（Ｉ．定義および略号）
他に定義されない限り、本明細書中において用いるすべての技術的および科学的用語は、記載の方法および組成物に関連する当業者によって一般的に理解されるものを意味する。本明細書中において用いる下記の用語および語句は、他に明記しない限り、それらに与えられた意味を有する。
本明細書中において用いる「阻害する」または「阻害」という用語は、測定可能な量だけ減少させること、または完全に妨げることを意味する。
本明細書中において用いる「ＣＤ７０結合剤」という用語は、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７０抗体の誘導体、またはＣＤ７０の細胞外ドメインもしくはその一部等に結合する他の物質を意味する。
「治療剤」とは、癌細胞または活性化免疫細胞に細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用を及ぼす物質である。
「細胞毒性作用」とは、標的細胞の低減、除去および／または殺傷を指す。「細胞毒性剤」とは、細胞に対する細胞毒性作用を有する物質を指す。
「細胞静止作用」とは、細胞増殖の阻害を指す。「細胞静止剤」とは、細胞（または細胞の特定の部分集合）に対して細胞静止作用を有することにより、細胞（または細胞の特定の部分集合）の成長および／または拡大を阻害する物質を指す。
ＣＤ７０結合剤のＣＤ７０を発現する細胞に対する作用に関連する場合、「低減する」という用語は、ＣＤ７０発現細胞の減少または除去を指す。
本明細書中において用いる「免疫抑制剤」という用語は、免疫応答の発達または維持を阻害する物質を指す。そのような阻害は、例えば、免疫細胞（例えば、ＴまたはＢリンパ球）の除去；他の細胞の機能的能力を調節（例えば、ダウンレギュレート）することができる免疫細胞の誘導または発生；免疫細胞における非応答状態の誘導（例えば、アネルギー）；または免疫細胞により発現されたタンパク質のパターンの改変等、それら細胞の活性または機能の向上、低下または変更（例えば、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、転写因子、キナーゼ、共刺激分子または他の細胞表面受容体等のあるクラスの分子の産生および／または分泌の改変）により行うことができる。典型的な実施形態では、免疫抑制剤は、免疫応答を促進する免疫細胞に対する細胞毒性作用または細胞静止作用を有する。
本明細書中において用いる「免疫細胞」とは、免疫応答の制御に関わる造血系の細胞を指す。典型的な実施形態では、免疫細胞は、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、単球／マクロファージ、または樹状細胞である。
「ポリペプチド」という用語は、アミノ酸のポリマーまたはその等価物を指し、特定の長さの産物を意味しない；よって、「ペプチド」および「タンパク質」は、ポリペプチドの定義に含まれる。また、本明細書中において定義する「抗体」もポリペプチドの定義に含まれる。「ポリペプチド領域」とは、ポリペプチドのセグメントを指し、このセグメントは、例えば、１つ以上のドメインまたはモチーフを含んでもよい（例えば、抗体のポリペプチド領域は、例えば、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含んでもよい）。「フラグメント」という用語は、典型的にポリペプチドの少なくとも連続する２０個、または少なくとも連続する５０個のアミノ酸を有する部分を指す。「誘導体」とは、第２のポリペプチドに対して１つ以上の非保存的または保存的アミノ酸置換を有するポリペプチドもしくはそのフラグメント；または、例えば、異種ポリペプチドの結合もしくはグリコシル化、アセチル化、リン酸化等、第２の分子の共有結合により改変されるポリペプチドもしくはそのフラグメントである。例えば、「誘導体」の定義には、アミノ酸（例えば、非天然アミノ酸等）の１つ以上の類似体を有するポリペプチド、非置換の結合を有するポリペプチド、ならびに天然および非天然のものを含む当該分野で公知の他の改変も含まれる。
本明細書中において用いる「抗体」という用語は、（ａ）免疫グロブリンポリペプチドおよび免疫グロブリンの免疫活性部分（すなわち、特定の抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む免疫グロブリンファミリーのポリペプチドもしくはそのフラグメント）、または（ｂ）抗原（例えば、ＣＤ７０）に免疫特異的に結合するそのような免疫グロブリンポリペプチドもしくはフラグメントの保存的に置換された誘導体を指す。抗体は、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９８８）において一般に記載されている。
上記で定義した免疫グロブリンポリペプチドまたはそのフラグメントに関連する場合、「保存的に置換」とは、免疫グロブリンポリペプチドまたはそのフラグメントの抗原に対する（例えばＫＤにより測定される）特異的結合を実質的に減少させない１つ以上のアミノ酸の置換（すなわち、ＥＬＩＳＡ等の標準的な結合アッセイによる判定で結合を増加させる置換、結合を顕著に変化させない置換、または約４０％以下、典型的には約３０％以下、より典型的には約２０％以下、さらにより典型的には約１０％以下、または最も典型的には約５％以下だけ結合を減少させる置換）を意味する。
本明細書中において用いる「抗体誘導体」とは、例えば、上記で定義したように、異種ポリペプチドの結合、または通常は抗体に関連しないグリコシル化、アシル化もしくはリン酸化等、異種分子の共有結合により改変される抗体を指す。いくつかの実施形態では、異種分子は治療剤ではない。いくつかの実施形態では、異種分子は、それ自身では細胞静止作用または細胞毒性作用を示さない。
「モノクローナル抗体」という用語は、真核もしくは原核細胞クローン、またはファージクローンを含む単一の細胞クローンに由来する抗体を指し、それを生成した方法を意味するものではない。よって、本明細書中において用いる「モノクローナル抗体」という用語は、ハイブリドーマ技術により生成される抗体に限定されない。
ポリペプチドに関連する場合、「異種」という用語は、他のポリペプチドとは起源（例えば、細胞、組織、生物または種）が異なるため、それら２つのポリペプチドが異なることを意味する。典型的には、異種ポリペプチドは、種が異なるものである。
ＣＤ７０結合剤に関連する場合、本明細書中において用いられる「機能的」という用語は、結合剤が（１）ＣＤ７０に結合可能であり、かつ（２）細胞毒性もしくは細胞静止剤と結合体化することなく、ＣＤ７０を発現する細胞の増殖を低減もしくは阻害するか、または免疫抑制剤と結合体化することなく、免疫細胞に対する免疫抑制効果を有することを示す。
本明細書中において用いられる「抗体エフェクター機能」またはＡＥＣは、ＩｇのＦｃエフェクタードメイン（例えば、免疫グロブリンのＦｃ領域)によって導かれる機能を指す。このような機能は、例えば、Ｆｃエフェクタードメインを、食作用または溶解活性を有する免疫細胞上のＦｃ受容体に結合するか、またはＦｃエフェクタードメインを、補体系の成分に結合することにより行なうことができる。典型的には、Ｆｃ結合細胞または補体成分により仲介される作用により、ＣＤ７０の標的となる細胞が阻害および／または低減する。
「抗体依存性細胞障害作用」またはＡＤＣＣとは、抗体で覆われた標的細胞（すなわち、抗体が結合した細胞)と溶解活性を有する免疫細胞（エフェクター細胞とも呼ばれる）との相互作用に依存する細胞死を誘導するメカニズムである。このようなエフェクター細胞としては、ナチュラルキラー細胞、単球／マクロファージおよび好中球が挙げられる。ＡＤＣＣは、腫瘍細胞に結合した抗体のＦｃ領域と、好中球、マクロファージおよびナチュラルキラー細胞等の免疫エフェクター細胞上のＦｃγ受容体、特に、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩとの相互作用により誘発される。腫瘍細胞は、仲介するエフェクター細胞の種類に応じて、食作用または溶解により除去される。抗体で覆われた標的細胞の死は、エフェクター細胞活性の結果生じる。
「抗体依存性細胞食作用」またはＡＤＣＰとは、抗体で覆われた細胞の全体または一部が免疫グロブリンＦｃ領域に結合する食作用免疫細胞（例えば、マクロファージ、好中球および樹状細胞）により吸収されるプロセスを指す。
「補体依存性細胞毒性作用」またはＣＤＣとは、細胞死を誘導するメカニズムであって、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが一連の酵素反応を活性させ、結果的に標的細胞膜に穴を形成するメカニズムを指す。典型的には、抗原／抗体複合体、例えば、抗体で覆われた標的細胞上の抗原／抗体複合体は補体成分Ｃ１ｑを結合しそして活性化させ、それにより補体カスケードを活性化することで標的細胞死をもたらす。また、補体の活性化により、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）を結合することでＡＤＣＣを促進する補体成分を標的細胞表面上に堆積し得る。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列に関連する場合、「同一」または「同一性パーセント」という用語は、比較し、そして最大対応のために配置したときに同じであるか、または同じヌクレオチドまたはアミノ酸残基を特定の割合で有する２つ以上の配列または副配列を指す。同一性パーセントを決定するために、配列を最適な比較目的のために配置する（例えば、第１のアミノ酸または核酸配列と第２のアミノ酸または核酸配列とを最適に配置した配列にギャップを導入することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドを比較する。第１の配列における位置に、第２の配列において対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドがある場合、当該位置の両分子は同一である。これら２つの配列間の同一性パーセントは、配列が共有する同一である位置の数の関数である（すなわち、同一％＝同一位置の数／位置（例えば、重複する位置）の総数×１００）。いくつかの実施形態では、これら２つの配列は同じ長さである。
２つの核酸またはポリペプチドに関連する場合、「実質的に同一」という用語は、（例えば、下記の方法のうちの１つを用いて判定したときに）少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、または少なくとも６５％の同一性；典型的には少なくとも７０％または少なくとも７５％の同一性；より典型的には少なくとも８０％または少なくとも８５％の同一性；およびさらにより典型的には少なくとも９０％、少なくとも９５％または少なくとも９８％の同一性を有する２つ以上の配列または副配列を指す。
２つ以上のポリペプチド配列に関連する場合、「類似性」または「類似性パーセント」とは、比較し、そして最大対応のために配置し、下記の方法のうちの１つを用いて測定したときに、同じであるか、または保存的に置換されたアミノ酸残基を特定の割合で有する２つ以上の配列または副配列を指す。例えば、第１のアミノ酸配列に含まれるアミノ酸の数と同数のアミノ酸を比較した場合、または、例えば、下記の方法のうちの１つによって配置したポリペプチドの配置と比較した場合、第１のアミノ酸配列が第２のアミノ酸配列と少なくとも５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％または９５％同一であるか、または保存的に置換されているときに、第１のアミノ酸配列が第２のアミノ酸配列と類似すると考えることができる。
ポリペプチド配列に関連する場合、「実質的な類似性」または「実質的に類似する」という用語は、参照配列に対して、ポリペプチド領域が少なくとも７０％、典型的には少なくとも８０％、より典型的には少なくとも８５％、または少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％の配列類似性を有する配列を持つことを示す。例えば、あるポリペプチドは、第２のポリペプチドとは、例えば、それら２つのペプチドが１つ以上の保存的な置換により異なる場合に実質的に類似する。
抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体に関連する場合、抗ＣＤ７０抗体の１つ以上の抗原結合領域（例えば、重鎖もしくは軽鎖可変領域、または重鎖もしくは軽鎖ＣＤＲ）と実質的に同一または実質的に類似する１つ以上のポリペプチド領域を有するタンパク質は、当該分野で公知または本明細書中において言及する各種の標準的なイムノアッセイのいずれかを用いて判定したときに、抗ＣＤ７０抗体により認識されるＣＤ７０のエピトープに対する特異的結合を保持する。
２つの配列間の同一性パーセントまたは類似性パーセントの判定は、数学的アルゴリズムを用いて達成することができる。２つの配列の比較に利用することが好ましく、かつ非限定的な数学的アルゴリズムの例としては、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５８７７において改変されたＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４−２２６８のアルゴリズムがある。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。ＢＬＡＳＴによるヌクレオチド検索では、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長＝１２を用いて当該タンパク質をコードする核酸と相同性を有するヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴによるタンパク質検索では、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて当該タンパク質と相同性を有するアミノ酸配列を得ることができる。比較目的でギャップアライメントを得るために、Ａｌｔｓｃｈｕｌら，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載のとおりにギャップＢＬＡＳＴを利用することができる。あるいは、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを用いて、分子間の距離関係を検出する反復検索を行なうことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、ギャップＢＬＡＳＴ、およびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、各プログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）の初期値パラメーターを用いることができる。配列の比較に利用することが好ましく、かつ非限定的な数学的アルゴリズムの他の例として、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムがある。このようなアルゴリズムは、ＧＣＧ配列アライメントソソフトウエアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれる。ＡＬＩＧＮプログラムをアミノ酸配列の比較に利用する場合、ＰＡＭ１２０重量残基表、ギャップ長ペナルティー１２、およびギャップペナルティー４を用いることができる。配列分析のためのさらなるアルゴリズムは当該分野で公知であり、ＴｏｒｅｌｌｉｓおよびＲｏｂｏｔｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３−５に記載のＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ；ならびにＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５：２４４４−８に記載のＦＡＳＴＡが挙げられる。ＦＡＳＴＡでは、ｋｔｕｐが検索の感度と速度を設定するコントロールオプションである。ｋｔｕｐ＝２の場合、比較している２つの配列内の類似する領域は、並べた残基対を見ることにより見つけることができ；ｋｔｕｐ＝１の場合には、一列に並べたアミノ酸を調べる。ｋｔｕｐは、タンパク配列については２もしくは１に、またはＤＮＡ配列については１〜６に設定することができる。ｋｔｕｐを特定しない場合、初期値は、タンパク質については２であり、ＤＮＡについては６である。
あるいは、タンパク質配列アライメントは、Ｈｉｇｇｉｎｓら，１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３−４０２に記載のＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを用いて実施してもよい。
本明細書中において用いる「予防」または「予防する」という用語は、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の臨床的または診断的症状が発症する前に、抗ＣＤ７０抗体もしくは誘導体または他の結合剤を被験体に投与（例えば、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害を患う素因があるか、またはその危険性が高い人に投与）し、（ａ）ＣＤ７０を発現する癌もしくは免疫障害の発病もしくは発症、またはそれらの１つ以上の臨床的または診断的症状を阻止するため、（ｂ）ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の発症の程度を抑制するため、または（ｃ）ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の発症の可能性を低くくすることを指す。
本明細書中において用いる「処置」または「処置する」という用語は、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の臨床的または診断的症状の発症後のいずれかの臨床病期に、抗ＣＤ７０抗体もしくはその誘導体または他の結合剤を被験体に投与することにより、病気の臨床または診断的症状が明らかに減少するか、またはなくなるような、被験体におけるＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の進行を遅延、停止または後退させることを指す。処置としては、例えば、症状の重症度、症状の数または再発頻度の減少が挙げられる。
本明細書中において用いる「薬学的に許容される」という用語は、米国連邦政府または州政府の規制機関により承認されているか、または米国薬局方もしくは動物、より特定的にはヒトへの使用に関して一般に認識されている他の薬局方に挙げられていることを意味する。「薬学的に適合性のある成分」とは、抗ＣＤ７０結合剤とともに投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤または基剤を指す。
「効果的な量」という用語は、被験体における発病の阻害またはＣＤ７０を発現する癌もしくは免疫障害の１つ以上の臨床的もしくは診断的症状の改善に十分な抗体まもしくは誘導体または他の結合剤の量を指す。効果的な量の物質は、本明細書中に記載の方法に従って「効果的な投薬計画」で投与される。「効果的な投薬計画」という用語は、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の処置または予防の達成に十分な薬量および投与頻度の組合せを指す。
（ＩＩ．抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体）
本明細書中に記載の方法および組成物は、ＣＤ７０に特異的に結合し、ＣＤ７０を発現する癌細胞または活性化免疫細胞に細胞毒性作用、細胞静止作用または免疫抑制作用を及ぼすＣＤ７０結合剤の使用を含む。ＣＤ７０結合剤は、例えば、抗ＣＤ７０抗体、抗ＣＤ７０抗体の抗原結合フラグメント、その誘導体、または他のＣＤ７０結合剤とすることができる。ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０を発現する標的細胞に対するＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣ応答を仲介または刺激する抗体エフェクタードメイン機能を含む。エフェクタードメインは、例えば、Ｉｇ分子のＦｃ領域とすることができる。ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０を発現する癌細胞に細胞毒性作用もしくは細胞静止作用を及ぼすか、または活性化リンパ球もしくは樹状細胞に細胞毒性作用、細胞静止作用、または免疫抑制作用を及ぼして、それぞれ、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害を処置する。典型的には、ＣＤ７０結合剤は、細胞毒性白血球細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、食作用細胞（例えば、マクロファージ）、および／または血清補体成分)を補充および／または活性化する。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）１Ｆ６もしくは２Ｆ２またはその誘導体である。他の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体は、ＣＤ７０に対する結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０に結合する際に、作動的（ａｇｏｎｉｓｔｉｃ）シグナルまたは非作動的（ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ）シグナルを誘導しない。
抗ＣＤ７０抗体は、典型的には、モノクローナル抗体であるかまたはモノクローナル抗体に由来するものであり、例えば、キメラ（例えば、ヒト定常領域またはマウス可変領域を有する）、ヒト化もしくは完全なヒト抗体；単鎖抗体；マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）、ミニボディ（ｍｉｎｉｂｏｄｙ）、抗原結合領域等を含むようにすることができる。抗体分子は、細胞毒性白血球細胞および／または血清補体成分と機能的に相互作用を行ない、それらを活性化することが可能な少なくとも１つのエフェクタードメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０抗原結合領域は、例えば、免疫グロブリンのヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメイン等の１つもしくは複数のエフェクタードメイン、またはエフェクター機能を有するエフェクタードメインの一部もしくはフラグメントと連結することができる。例えば、単鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を、エフェクタードメインの全体または一部（例えば、ＣＨ２および／またはＣＨ３ドメインのみ、またはＣＨ１、ヒンジおよび／またはＣＬドメインとの組み合わせ)と組み合わせて含むようにすることができる。また、抗原結合フラグメントは、エフェクタードメインのいずれの組み合わせも含むようにすることができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３ドメインと連結したＣＤ７０結合可変領域を含む単鎖抗体とすることができる。
典型的には、抗体は、エフェクター機能を仲介することができる特異的なＩｇイソタイプのヒトまたはヒト以外（例えば、げっ歯類（マウスまたはラット等））、ロバ、ヒツジ、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマまたはニワトリ）を起源とする。本明細書中において用いる「ヒトの」抗体としては、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体が挙げられ、さらに、下記および、例えば、米国特許第５，９３９，５９８号および６，１１１，１６６号に記載のように、ヒト免疫グロブリンライブラリーから、ヒトＢ細胞から、または１つ以上のヒト免疫グロブリンについてのトランスジェニック動物から単離された抗体が挙げられる。
抗体のエフェクタードメインは、あらゆる適切な脊椎動物種およびイソタイプに由来するようにすることができる。異なる動物種からのイソタイプは、エフェクター機能を仲介する能力が異なる。例えば、ヒト免疫グロブリンのＣＤＣおよびＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを仲介する能力は、一般に、それぞれ、ＩｇＭ＝ＩｇＧ１＝ＩｇＧ３＞ＩｇＧ２＞ＩｇＧ４およびＩｇＧ１＝ＩｇＧ３＞ＩｇＧ２／ＩｇＭ／ＩｇＧ４の順である。マウス免疫グロブリンは、ＣＤＣおよびＡＤＣＣ／ＡＤＣＰを、一般に、それぞれ、マウスＩｇＭ＝ＩｇＧ３＞＞ＩｇＧ２ｂ＞ＩｇＧ２ａ＞＞ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ｂ＞ＩｇＧａ＞ＩｇＧ１＞＞ＩｇＧ３の順に仲介する。他の例では、マウスＩｇＧ２ａがＡＤＣＣを仲介する一方、マウスＩｇＧ２ａおよびＩｇＭはともにＣＤＣを仲介する。いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、抗体の可変ドメインおよびエフェクタードメインからなる。他の実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、本質的に、抗体の可変ドメインおよびエフェクタードメインからなり、治療剤ではない付加的な化合物をさらに含むようにすることができる。ＣＤ７０結合ポリペプチドも、適切な定常ドメインからなる組換え融合タンパク質として発現し、所望のエフェクター機能を生じることができる。
標的細胞に結合すると、抗体または誘導体は、エフェクタードメイン（例えば、Ｆｃドメイン)により仲介されたエフェクター機能を介して、インビトロおよびインビボで、標的細胞破壊を誘発し得る。特定の理論に限定することを意図しないが、抗体のＦｃ領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する細胞を補充し、それらを抗体で覆われた標的細胞と並置し得る。ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ６４）を含むＩｇＧについて表面ＦｃＲを発現する細胞は、ＩｇＧで覆われた細胞の破壊のためにエフェクター細胞として作用し得る。このようなエフェクター細胞としては、単球、マクロファージ、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球および好酸球が挙げられる。ＩｇＧによるＦｃγＲの関与は、抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）または抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を活性化する。ＡＤＣＣが膜孔形成タンパク質およびプロテアーゼの分泌を介してＣＤ１６＋エフェクター細胞により仲介される一方、食作用はＣＤ３２＋およびＣＤ６４＋エフェクター細胞により仲介される（Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ ｅｄ．，Ｐａｕｌ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｎ．Ｙ．，１９９７，Ｃｈａｐｔｅｒｓ ３，１７および３０；Ｕｃｈｉｄａら，２００４，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９：１６５９−６９；Ａｋｅｗａｎｌｏｐら，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：４０６１−６５；Ｗａｔａｎａｂｅら，１９９９，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．５３：１９９−２０７参照）。ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰに加えて、細胞結合抗体のＦｃ領域はまた、補体古典経路を活性化し、補体依存性細胞毒性作用（ＣＤＣ）を引き出し得る。補体系のＣ１ｑは、抗原と複合体化した抗体のＦｃ領域に結合する。Ｃ１ｑの細胞結合抗体との結合により、Ｃ４およびＣ２のタンパク質分解活性を伴う順次的な事象が開始され、Ｃ３転換酵素が発生し得る。Ｃ３転換酵素によるＣ３のＣ３ｂへの分裂により、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８およびＣ９を含む末端補体成分の活性化が可能になる。これらのタンパク質は、集合的に、抗体で覆われた細胞上に細胞膜障害複合体孔を形成する。これらの孔は細胞膜の完全性を破壊し、標的細胞を殺傷する（Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｊａｎｅｗａｙら，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．，２００５，Ｃｈａｐｔｅｒ ２参照）。
抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはそれ以上の多重特異性とすることができる。多重特異性抗体は、ＣＤ７０の異なるエピトープに対して特異的、かつ／またはＣＤ７０および異種タンパク質の両方に特異的であってもよい（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９３／１７７１５、ＷＯ９２／０８８０２、ＷＯ９１／００３６０およびＷＯ９２／０５７９３；Ｔｕｔｔら，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０−６９；米国特許第４，４７４，８９３号；同第４，７１４，６８１号；同第４，９２５，６４８号；同第５，５７３，９２０号；および同第５，６０１，８１９号；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３参照。）本明細書中に記載の方法を実施するために有用な二重特異性および三重特異性抗体を含む多重特異性抗体は、ＣＤ７０（モノクローナル抗体２Ｆ２および１Ｆ６のＣＤＲを有する抗体を含むがそれらに限定されない）、ならびにＣＤ１６／ＦｃｇＲＩＩＩ、ＣＤ６４／ＦｃｇＲＩ、キラー阻害もしくは活性受容体、または補体コントロールタンパク質ＣＤ５９などのＡＤＣＣ、食作用および／またはＣＤＣを仲介する第２の細胞表面受容体もしくは受容体複合体の両方に免疫特異的に結合する抗体である。典型的な実施形態では、多重特異性抗体の部分と、第２の細胞表面分子または受容体複合体との結合により、抗ＣＤ７０抗体または他のＣＤ７０結合剤のエフェクター機能が向上する。
１つの局面では、抗ＣＤ７０抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）と実質的に同一または実質的に類似する１つ以上のＣＤＲを含む（表１参照）。例えば、抗体は、ｍＡｂ １Ｆ６の対応する重鎖ＣＤＲ（Ｈ１領域、Ｈ２領域もしくはＨ３領域）または対応する軽鎖ＣＤＲ（Ｌ１領域、Ｌ２領域もしくはＬ３領域）（それぞれ配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０）と実質的に同一または実質的に類似する重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲを含むようにすることができる。典型的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、ｍＡｂ １Ｆ６の対応する重鎖および／または軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する２つもしくは３つの重鎖ＣＤＲおよび／または２つもしくは３つの軽鎖ＣＤＲを有する。特定の実施形態では、１Ｆ６の重鎖または軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似するＣＤＲは、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１８または配列番号２０に示すアミノ酸配列を有する。
例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体がｍＡｂ １Ｆ６の重鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを有する場合、この抗体またはその誘導体は、ｍＡｂ １Ｆ６の軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲをさらに含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、（ａ）ｍＡｂ １Ｆ６の対応するＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する３つのＣＤＲを１組と、（ｂ）４つのフレームワーク領域を１組有する重鎖または軽鎖可変ドメインを含む。例えば、抗ＣＤ７０抗体は、（ａ）モノクローナル抗体１Ｆ６に由来する３つのＣＤＲを１組と、（ｂ）ＩｇＧタイプの４つのフレームワーク領域を１組有する重鎖または軽鎖可変ドメインを含むようにすることができる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体はキメラ抗体である。キメラ抗体は、例えば、マウスのモノクローナル抗体に由来する可変領域およびヒトＩｇＧ免疫グロブリン定常領域を有する抗体等、抗体の異なる部分が異なる動物種に由来する分子である。キメラ抗体を作る方法は当該分野で公知である。（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８５，２２９：１２０２；Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；Ｇｉｌｌｉｅｓら，１９８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １２５：１９１−２０２；米国特許第５，８０７，７１５号、同４，８１６，５６７号および同第４，８１６，３９７号参照。）
例示的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、ｍＡｂ １Ｆ６の重鎖可変領域と実質的に同一または実質的に類似する（すなわち、配列番号２に示すアミノ酸配列と実質的に同一または実質的に類似する、表１参照）重鎖可変領域、および／またはｍＡｂ １Ｆ６の軽鎖可変領域と実質的に同一または実質的に類似する（すなわち、配列番号１２に示すアミノ酸配列と実質的に同一または実質的に類似する、表１参照）軽鎖可変領域を含むキメラ抗体である。例えば、この抗体は、配列番号２に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むようにすることができ、任意に、配列番号１２に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むようにすることができる。重鎖および軽鎖抗体定常領域は、ＩｇＧタイプである。例示的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、キメラＩｇＧ ｍＡｂ １Ｆ６である。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、モノクローナル抗体２Ｆ２の１つ以上のＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する１つ以上のＣＤＲを含むキメラ抗体である（表１参照）。例えば、この抗体は、対応する重鎖ＣＤＲ（Ｈ１領域、Ｈ２領域もしくはＨ３領域）またはｍＡｂ ２Ｆ２の対応する軽鎖ＣＤＲ（Ｌ１領域、Ｌ２領域もしくはＬ３領域）と実質的に同一または実質的に類似する重鎖ＣＤＲおよび／または軽鎖ＣＤＲ（配列番号２６、配列番号２８；配列番号３０；配列番号３６、配列番号３８または配列番号４０）を含むようにすることができる。典型的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、ｍＡｂ ２Ｆ２の対応する重鎖および／または軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する２つもしくは３つの重鎖ＣＤＲおよび／または２つもしくは３つの軽鎖ＣＤＲを有する。特定の実施形態では、２Ｆ２の重鎖または軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似するＣＤＲは、配列番号２６、配列番号２８、配列番号３０；配列番号３６、配列番号３８、または配列番号４０に示すアミノ酸配列を有する。
例えば、いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体がｍＡｂ ２Ｆ２の重鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する少なくとも１つの重鎖ＣＤＲを有する場合、この抗体またはその誘導体は、ｍＡｂ ２Ｆ２の軽鎖ＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する少なくとも１つの軽鎖ＣＤＲをさらに含む。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、（ａ）ｍＡｂ ２Ｆ２の対応するＣＤＲと実質的に同一または実質的に類似する３つのＣＤＲを１組と、（ｂ）４つのフレームワーク領域を１組有する重鎖または軽鎖可変ドメインを含む。例えば、抗ＣＤ７０抗体は、（ａ）モノクローナル抗体２Ｆ２に由来する３つのＣＤＲを１組と、（ｂ）ＩｇＧタイプの４つのフレームワーク領域を１組有する重鎖または軽鎖の可変ドメインを含むようにすることができる。例示的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、キメラＩｇＧ ｍＡｂ ２Ｆ２である。
１つの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体は、ｍＡｂ ２Ｆ２の重鎖可変領域と実質的に同一または実質的に類似する（すなわち、配列番号２２に示すアミノ酸配列と実質的に同一または実質的に類似する、表１参照）重鎖可変領域、および／またはｍＡｂ ２Ｆ２の軽鎖可変領域と実質的に同一または実質的に類似する（すなわち、配列番号３２に示すアミノ酸配列と実質的に同一または実質的に類似する、表１参照）軽鎖可変領域を含む。例えば、この抗体は、配列番号２２に示すアミノ酸配列を有する重鎖可変領域を含むようにすることができ、任意に、配列番号３２に示すアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域をさらに含むようにすることができる。１つの例示的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体はｍＡｂ ２Ｆ２である。
いくつかの実施形態では、上記抗体は、１Ｆ６ ＶＨおよび２Ｆ２ ＶＬ、または１Ｆ６ ＶＨおよび２Ｆ２ ＶＬを含む。
以下の表は、各配列番号が対応する１Ｆ６または２Ｆ２の領域を示す。
（表１）
Figure 2008516970
Figure 2008516970
Figure 2008516970
Figure 2008516970
 抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体、ならびに他の結合剤は、ＣＤ７０に対する結合親和性に関して記載または特定してもよい。典型的な結合親和性としては、５×１０−２Ｍ、１０−２Ｍ、５×１０−３Ｍ、１０−３Ｍ、５×１０−４Ｍ、１０−４Ｍ、５×１０−５Ｍ、１０−５Ｍ、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍまたは１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄを有するものが挙げられる。
上記抗体は、当該分野で公知の方法により生成することができる。例えば、モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ技術、組換え技術およびファージディスプレイ技術の使用またはそれらの組合せを含む多種多様な技術を用いて調製することができる。ハイブリドーマ技術は、例えば、Ｈａｒｌｏｗら，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．，１９８８）；およびＨａｍｍｅｒｌｉｎｇら，Ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ，ｐｐ．５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）において一般に議論されている。抗ＣＤ７０抗体を作るために用いることができるファージディスプレイ技術の例としては、例えば、（ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１；ＱｕａｎおよびＣａｒｔｅｒ，２００２，Ｔｈｅ ｒｉｓｅ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｓ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｉｎ Ａｎｔｉ−ＩｇＥ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＪａｒｄｉｅｕおよびＦｉｃｋ Ｊｒ．編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，Ｃｈａｐｔｅｒ ２０，ｐｐ．４２７−４６９；Ｂｒｉｎｋｍａｎら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８２：４１−５０；Ａｍｅｓら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １８４：１７７−１８６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：９５２−９５８；Ｐｅｒｓｉｃら，１９９７，Ｇｅｎｅ １８７：９−１８；Ｂｕｒｔｏｎら，１９９４，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５７：１９１−２８０；ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＧＢ９１／０１１３４；ＰＣＴ公開公報ＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、および米国特許第５，６９８，４２６号、同第５，２２３，４０９号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５８０，７１７号、同第５，４２７，９０８号、同第５，７５０，７５３号、同第５，８２１，０４７号、同第５，５７１，６９８号、同第５，４２７，９０８号、同第５，５１６，６３７号、同第５，７８０，２２５号、同第５，６５８，７２７号、同第５，７３３，７４３号および同第５，９６９，１０８号（これらの開示内容は本明細書中において参考として援用する）に開示されたものが挙げられる。
単鎖抗体を作るために用いることができる技術の例としては、米国特許第４，９４６，７７８号および同第５，２５８，４９８号；Ｈｕｓｔｏｎら，１９９１，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２０３：４６−８８；Ｓｈｕら，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：７９９５−７９９９；およびＳｋｅｒｒａら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０３８−１０４０が挙げられる。
二重特異性抗体を作製する方法は当該分野で公知である。二重特異性抗体の全長は、伝統的には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいて作られる（例えば、Ｍｉｌｓｔｅｉｎら，１９８３，Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７−３９参照)。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の任意組み合わせにより、これらのハイブリドーマ（クアドローマ)は、１０個の異なる抗体分子の潜在的混合物を作り、それらのうち１つだけが正しい二重特異性構造を有する。同様の手順が国際公開公報ＷＯ９３／０８８２９、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，１９９１、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−５９に開示されている。
異なるアプローチに従って、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）を免疫グロブリン定常ドメイン配列と融合させる。ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合が好ましい。いくつかの実施形態では、上記融合物は、少なくとも１つの融合物に存在する、軽鎖結合に必要な部位を有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を含む。免疫グロブリン重鎖融合物および、所望であれば、免疫グロブリン軽鎖をコードする配列を有する核酸を、個別の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時トランスフェクションする。これによって、構成物内で用いる割合が不均一な３つのポリペプチド鎖により最適収量が得られる場合、実施形態における３つのポリペプチドフラグメントの相互比率の調整が著しく柔軟になる。しかしながら、同じ割合の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現により高収量になる場合、またはその割合が特に重要でない場合、３つのポリペプチド鎖のうち２つまたはそれら全てをコードする配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
このアプローチの１つの実施形態では、二重特異性抗体は、１つの腕に第１の結合特異性を有し、他方の腕に（第２の結合特異性をもたらす）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖を有する。この非対称構造により、所望の二重特異性化合物を不要な免疫グロブリン鎖の組み合わせから分離することが容易となるが、これは二重特異性分子の半分にしか存在しない免疫グロブリン軽鎖が分離を容易にするためである（例えば、本明細書中においてその全てを参考として援用する国際公開公報ＷＯ９４／０４６９０参照）。
二重特異性抗体についてのさらなる考察に関しては、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら，１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０；Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら，１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５１：６９５４−６１；Ｃａｒｔｅｒら，１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３−６７；Ｃａｒｔｅｒら，１９９５，Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒａｐｙ ４：４６３−７０；Ｍｅｒｃｈａｎｔら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：６７７−８１を参照されたい。このような技術を用いることにより、本明細書中において定義するような病気の処置または予防に使用する二重特異性抗体を調製することができる。
欧州特許公報ＥＰＡ ０ １０５ ３６０号には二官能性抗体も記載されている。この参考文献に開示されているように、ハイブリッドまたは二官能性抗体は、生物学的に、すなわち、細胞融合技術によって、または化学的に、特に架橋剤もしくはジスルフィド架橋形成剤を用いることによって導出することができ、抗体全体またはそのフラグメントを含み得る。このようなハイブリッド抗体を得る方法は、例えば、国際公開公報ＷＯ８３／０３６７９および欧州特許公報ＥＰＡ ０ ２１７ ５７７に開示されており、これらの両方を本明細書中において参考として援用する。
抗ＣＤ７０抗体はまた、ヒト化抗体とすることもできる。ヒト化抗体は、所望の抗原を結合し、非ヒト種に由来する１つ以上のＣＤＲ、ならびにヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワークおよび定常領域を有する抗体分子である。ヒトのフレームワーク領域内のフレームワーク残基は、抗原結合を変更、好ましくは改善するために、ＣＤＲドナー抗体の対応する残基と置換されることが多い。これらフレームワーク置換は、当該分野で周知の方法、例えば、ＣＤＲとフレームワーク残基の相互作用の設計により、特定の位置の異常なフレームワーク残基を同定する抗原結合および配列の比較に重要なフレームワーク残基を同定することにより同定される（例えば、Ｑｕｅｅｎら，米国特許第５，５８５，０８９号；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３参照）。例えば、ＣＤＲグラフト化（ＣＤＲ ｇｒａｆｔｉｎｇ）（例えば、ＥＰ ０ ２３９ ４００；ＰＣＴ公開公報ＷＯ９１／０９９６７；米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５３０，１０１号；および同第５，５８５，０８９号参照）、上張り（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または表面の変更（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（ＥＰ ０ ５９２ １０６；ＥＰ ０ ５１９ ５９６；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１，２８（４／５）：４８９−４９８；Ｓｔｕｄｎｉｃｋａら，１９９４，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ７（６）：８０５−８１４；Ｒｏｇｕｓｋａら，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９１：９６９−９７３）およびチェインシャッフリング（ｃｈａｉｎ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号参照）（これら参考文献の全てを本明細書中において参考として援用する）を含む当該分野で公知の各種の技術を用いて抗体をヒト化することができる。
例えば、国際公開公報ＷＯ８７／０２６７１；欧州特許公報第０ １８４ １８７号；欧州特許公報第０ １７１ ４９６号；欧州特許公報第０ １７３ ４９４号；国際公開公報ＷＯ８６／０１５３３；米国特許第４，８１６，５６７号；欧州特許公報第０ ０１２ ０２３号；Ｂｅｒｔｅｒら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１０４１−４３；Ｌｉｕら，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：３４３９−４３；Ｌｉｕら，１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−２６；Ｓｕｎら，１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：２１４−１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら，１９８７，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら，１９８５，Ｎａｔｕｒｅ ３１４：４４６−４４９；ならびにＳｈａｗら，１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−０７；Ｏｉら，１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ４：２１４；米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５５２−２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−６０（これら各々の全てを本明細書中において参考として援用する）に記載される方法を用いて、当該分野で公知の組換えＤＮＡ技術によりヒト化モノクローナル抗体を作ることができる。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体はヒトＩｇＧ抗体である。ヒト抗体は、例えば、ヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体ライブラリーを用いたファージディスプレイ法（上記参照）を含む当該分野で公知の各種方法により作ることができる。例えば、米国特許第４，４４４，８８７号および４，７１６，１１１号；ならびにＰＣＴ公開公報ＷＯ９８／４６６４５、ＷＯ９８／５０４３３、ＷＯ９８／２４８９３、ＷＯ９８／１６６５４、ＷＯ９６／３４０９６、ＷＯ９６／３３７３５、およびＷＯ９１／１０７４１（これらの開示内容は本明細書中において参考として援用する）も参照されたい。また、選択したエピトープを認識するヒト抗体は、選択した非ヒトモノクローナル抗体、例えば、マウス抗体を用いて同じエピトープを認識する完全なヒト抗体の選択を誘導する「誘導選択（ｇｕｉｄｅｄ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）」と称される技術を用いて生成することができる（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら，１９９４，Ｂｉｏ／ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：８９９−９０３参照）。ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子を発現するトランスジェニックマウスを用いて作ることもできる。抗原に対するモノクローナル抗体は、慣用ハイブリドーマ技術を用いて、免疫化されたトランスジェニックマウスから得ることができる。このヒト抗体を作る技術の概略については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３を参照されたい。このヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を作る技術、ならびにそのような抗体を作るための手順の詳細な考察については、例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ９８／２４８９３；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９６／３４０９６；ＷＯ９６／３３７３５；欧州特許第０ ５９８ ８７７号；米国特許第５，４１３，９２３号、同第５，６２５，１２６号、同５，６３３，４２５号、同第５，５６９，８２５号、同第５，６６１，０１６号、同第５，５４５，８０６号、同第５，８１４，３１８号、同第５，８８５，７９３号、同第５，９１６，７７１号および同第５，９３９，５９８号（これらの開示内容は本明細書中において参考として援用する）を参照されたい。
また、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａ）、Ｇｅｎｐｈａｒｍ（Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）、およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）等の企業は、上記の技術と同様の技術を用いて、選択した抗原に対するヒト抗体を提供するように契約ことができる。内因性免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないが、ヒトの重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができるトランスジェニックマウスを用いて完全なヒト抗体を作ることができる。トランスジェニックマウスは、選択した抗原、例えば、本発明のポリペプチドの全てまたは一部を用いて通常の方法で免疫化される。抗原に対するモノクローナル抗体は、慣用ハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウスが保有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子は、Ｂ細胞の分化中に再構成され、その後、クラスの変更（ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ）および体細胞変異が行なわれる。よって、このような技術を用いることにより、治療上有用なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を作ることができる。このヒト抗体を作る技術の概要については、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ（１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３）を参照されたい。このヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を作る技術、ならびにそのような抗体を作る手順のより詳細な考察については、例えば、米国特許第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５；同第５，５６９，８２５；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号（これら各々の全てを本明細書中において参考として援用する）参照。
上記のように、ＣＤ７０結合剤は、抗ＣＤ７０抗体の誘導体とすることができる。一般に、抗ＣＤ７０誘導体は、抗ＣＤ７０抗体（抗原結合フラグメントまたは保存的に置換されたポリペプチドを含む）、および抗ＣＤ７０抗体とは異種の少なくとも１つのポリペプチド領域または他の部分を含む。例えば、抗体誘導体が抗原結合領域もしくはそれに由来する領域を介してＣＤ７０に特異的に結合すること、またはエフェクタードメインがＦｃ受容体を特異的に結合することを妨げないように、例えば、任意の種の分子の共有結合により、抗ＣＤ７０抗体を改変することができる。典型的な改変としては、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、公知の保護基／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質との結合等が挙げられる。特異的化学切断、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシンの代謝的合成等を含むがこれらに限定されない公知技術により、多数の化学的改変のうちのいずれかを行ってもよい。
いくつかの実施形態では、上記抗体誘導体は、ＣＤ７０に特異的に結合する多量体（例えば、ホモダイマー）を形成するように、例えば、各々が（ｉ）抗ＣＤ７０抗体の抗原結合領域、またはそれに由来するポリペプチド領域（例えば、１つ以上のアミノ酸の保存的置換によるもの等）、および（ｉｉ）多量体化（例えば二量体化）ポリペプチド領域を有する１つ以上のモノマーを含む二量体等の多量体である。典型的な実施形態では、抗ＣＤ７０抗体の抗原結合領域またはそれに由来するポリペプチド領域は、二量体化または多量体化ドメインを含む異種タンパク質と、組換えによってまたは化学的に融合する。免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌を処置または予防する目的で被験体に抗体誘導体を投与する前に、当該誘導体をホモダイマーまたはヘテロダイマーの形成を可能とする条件に供する。本明細書中において用いるヘテロダイマーは、同一の二量体化ドメインおよび異なるＣＤ７０抗原結合領域、同一のＣＤ７０抗原結合領域および異なる二量体化ドメイン、または異なるＣＤ７０抗原結合領域および異なる二量体化ドメインを含んでもよい。
典型的な二量体化ドメインは、転写因子から生じる二量体化ドメインである。１つの実施形態では、二量体化ドメインは、塩基性領域ロイシンジッパー（「ｂＺＩＰ」）の二量体化ドメインである（Ｖｉｎｓｏｎら，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：９１１−９１６参照）。有用なロイシンジッパードメインとしては、例えば、酵母転写因子ＧＣＮ４、哺乳類転写因子ＣＣＡＡＴ／エンハンサー結合タンパク質Ｃ／ＥＢＰ、ならびに癌遺伝子産物ＦｏｓおよびＪｕｎ中の核形質転換のロイシンジッパードメインが挙げられる。（Ｌａｎｄｓｃｈｕｌｔｚら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４０：１７５９−６４；ＢａｘｅｖａｎｉｓおよびＶｉｎｓｏｎ，１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｇｅｎ．Ｄｅｖｅｌ．３：２７８−２８５；Ｏ’Ｓｈｅａら，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：５３８−５４２参照。）他の実施形態では、二量体化ドメインは、塩基性領域ヘリックス−ループ−ヘリックス（「ｂＨＬＨ」）タンパク質の二量体化ドメインである。（Ｍｕｒｒｅら，１９８９，Ｃｅｌｌ ５６：７７７−７８３を参照されたい。また、Ｄａｖｉｓら，１９９０，Ｃｅｌｌ ６０：７３３−７４６；ＶｏｒｏｎｏｖａおよびＢａｌｔｉｍｏｒｅ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４７２２−４７２６も参照されたい。）特に有用なｈＨＬＨタンパク質は、ｍｙｃ、ｍａｘおよびｍａｃである。
さらに他の実施形態では、二量体化ドメインは、例えば、重鎖定常領域（例えば、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメインおよび／またはＣＨ３ドメイン）等の免疫グロブリン定常領域またはそのドメインである。（例えば、米国特許第５，１５５，０２７号、同第５，３３６，６０３号、同第５，３５９，０４６号および同第５，３４９，０５３号；ＥＰ ０ ３６７ １６６；ＷＯ９６／０４３８８参照。）
ヘテロダイマーは、ＦｏｓとＪｕｎとの間（Ｂｏｈｍａｎｎら，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１３８６−１３９２）、ＡＴＦ／ＣＲＥＢファミリーのメンバー間（Ｈａｉら，１９８９，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．３：２０８３−２０９０）、Ｃ／ＥＢＰファミリーのメンバー間（Ｃａｏら，１９９１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．５：１５３８−５２；Ｗｉｌｌｉａｍｓら，１９９１，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．５：１５５３−６７；Ｒｏｍａｎら，１９９０，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ．４：１４０４−１５）、およびＡＴＦ／ＣＲＥＢファミリーのメンバーとＦｏｓ／Ｊｕｎファミリーのメンバーとの間（ＨａｉおよびＣｕｒｒａｎ，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：３７２０−２４）に形成されることが知られている。それゆえ、ＣＤ７０結合タンパク質を、異なる二量体化ドメインを含むヘテロダイマーとして被験体に投与する場合、前記のいかなる組合せを用いてもよい。
他の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体誘導体は、第２の抗体と結合体化した抗ＣＤ７０抗体（「抗体ヘテロ結合体」）である（米国特許第４，６７６，９８０号参照）。本方法を実施するために有用なヘテロ結合体は、ＣＤ７０に結合する抗体（例えば、モノクローナル抗体２Ｆ２または１Ｆ６のＣＤＲおよび／または重鎖を有する抗体）、およびＣＤ１６／ＦｃｇＲＩＩＩ、ＣＤ６４／ＦｃｇＲＩ、キラー細胞活性化受容体もしくは阻害受容体、または補体コントロールタンパク質ＣＤ５９等の表面受容体もしくは受容体複合体に結合する抗体を含む。典型的な実施形態では、多重特異性抗体の部分と第２の細胞表面分子または受容体複合体との結合により、抗ＣＤ７０抗体のエフェクター機能が向上する。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体は、競合結合の判定に関して当該分野で公知のいずれかの方法（例えば、本明細書中に記載のイムノアッセイ等）により判定されるように、ｍＡｂ １Ｆ６または２Ｆ２とＣＤ７０との結合を競合的に阻害する。典型的な実施形態では、上記抗体は、１Ｆ６または２Ｆ２とＣＤ７０との結合を、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％または少なくとも７５％だけ競合的に阻害する。他の実施形態では、上記抗体は、１Ｆ６または２Ｆ２とＣＤ７０との結合を、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％だけ競合的に阻害する。
抗体は、ＣＤ７０との特異的な結合について、各種の公知の方法のうちのいずれかにより分析することができる。使用可能なイムノアッセイとしては、例えば、ウエスタンブロット、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合イムノソルベントアッセイ）、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体固定アッセイ、免疫放射測定アッセイ、蛍光イムノアッセイ、およびプロテインＡイムノアッセイ等の技術を用いた競合または非競合アッセイ系が挙げられる。このようなアッセイは、当該分野では慣習的に行なわれており、周知である。（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４ｔｈ ｅｄ．１９９９）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９９９参照。）
さらに、抗体のＣＤ７０との結合親和性および抗体ＣＤ７０相互作用のオフレート（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）は、競合結合アッセイにより判定することができる。競合結合アッセイの一例としては、増量した非標識ＣＤ７０の存在下で、標識ＣＤ７０（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と、着目する抗体とをインキュベートすること、および標識ＣＤ７０に結合した抗体を検出することを含むラジオイムノアッセイが挙げられる。次いで、ＣＤ７０に対する抗体の親和性および結合オフレートを、スカッチャードプロット分析によるデータから判定することができる。また、二次抗体（例えば、ｍＡｂ １Ｆ６または２Ｆ２等）との競合を、ラジオイムノアッセイを用いて判定することもできる。例えば、増量した非標識の二次抗体が存在する中で、ＣＤ７０と、標識化合物（例えば、３Ｈまたは１２５Ｉ）と結合体化させた着目抗体とをインキュベートする。あるいは、ＣＤ７０に対する抗体の結合親和性、ならびに抗体−ＣＤ７０相互作用のオンレート（ｏｎ−ｒａｔｅ）およびオフレートを、表面プラスモン共鳴により判定することができる。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体を標的とし、ＣＤ７０を発現する細胞の膜上に蓄積することができる。
本方法に有用な抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体は、タンパク質の合成について当該分野で公知の方法、典型的には、例えば、組換え体発現技術により作ることができる。ＣＤ７０に結合し、ＣＤ７０を発現する細胞の増殖を低下または阻害する抗体またはその誘導体の組換え体発現は、当該抗体またはその誘導体をコードする核酸を含む発現ベクターの構築を必要とする。タンパク質分子産生用ベクターを、当該分野で公知の技術を用いた組換えＤＮＡ技術により作ってもよい。例えば、組換え核酸法、核酸合成、細胞培養、トランスジーンの組み込み、および組換えタンパク質の発現のために、ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，３ｒｄ ｅｄ．，２００１）；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，２ｎｄ ｅｄ．，１９８９）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，４ｔｈ ｅｄ．，１９９９）；ならびにＧｌｉｃｋおよびＰａｓｔｅｒｎａｋ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ（ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，２ｎｄ ｅｄ．，１９９８）に記載された技術等、標準的な技術を用いることができる。
例えば、抗ＣＤ７０抗体の組換え発現のために、発現ベクターは、プロモーターに作動可能に結合させた重鎖もしくは軽鎖または重鎖もしくは軽鎖可変ドメインをコードしてもよい。例えば、発現ベクターは、抗体分子の定常領域をコードするヌクレオチド配列（例えば、ＰＣＴ公開公報ＷＯ８６／０５８０７；ＰＣＴ公開公報ＷＯ８９／０１０３６；および米国特許第５，１２２，４６４号参照）を含んでもよく、抗体の可変ドメインは、全重鎖または軽鎖の発現用ベクターにクローン化してもよい。発現ベクターを、慣用技術により宿主細胞に移入し、次いで、導入した細胞を慣用技術により培養して抗ＣＤ７０抗体を産生する。典型的な実施形態では、二本鎖抗体の発現のために、重鎖および軽鎖をともにコードするベクターを、全免疫グロブリン分子の発現用宿主細胞中で共発現させることができる。
各種の原核および真核宿主発現ベクター系を利用して抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体を発現させることができる。典型的には、特に、組換え抗ＣＤ７０抗体分子全体について、組換えタンパク質の発現のために真核細胞が用いられる。例えば、ヒトのサイトメガロウイルスに由来する主要中間初期遺伝子プロモーターエレメント等のベクターと組み合わせたチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）等の哺乳類細胞は、抗ＣＤ７０抗体およびその誘導体の産生のための効果的な発現系である（例えば、Ｆｏｅｃｋｉｎｇら，１９８６，Ｇｅｎｅ ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔら，１９９０，Ｂｉｏ／Ｔｃｃｈｎｏｌｏｇｙ ８：２参照）。
例えば、他の宿主発現系としては、細菌細胞におけるプラスミドに基づいた発現系（例えば、Ｒｕｔｈｅｒら，１９８３，ＥＭＢＯ １，２：１７９１；ＩｎｏｕｙｅおよびＩｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ ＨｅｅｋｅおよびＳｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９参照）；Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞におけるＡｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）発現ベクターの使用等の昆虫系；および、例えば、アデノウイルスに基づいた系等の哺乳類細胞におけるウイルスに基づいた発現系（例えば、ＬｏｇａｎおよびＳｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：３５５−３５９；Ｂｉｔｔｎｅｒら，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４参照）が挙げられる。
また、挿入した配列の発現を調節するか、または遺伝子産物を所望の特定の様式で改変およびプロセシングする宿主細胞株を選択することができる。適切な細胞系または宿主系を選択して、発現したタンパク質の正確な改変およびプロセシング（例えば、グリコシル化、リン酸化および切断）を確実に行なうことができる。この目的のために、一次転写物および遺伝子産物の適切なプロセシングのための細胞装置を有する真核宿主細胞を用いることができる。そのような哺乳類宿主細胞としては、例えば、ＣＨＯ、ＶＥＲＯ、ＢＨＫ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、３Ｔ３およびＷ１３８が挙げられる。
安定した発現系は、典型的には、組換え抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体の長期的、高収率の産生に用いられる。例えば、抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体を安定して発現する細胞系は、適切な発現制御エレメント（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写ターミネーター、ポリアデニル化部位）および選択マーカーにより制御されるＤＮＡを用いて宿主細胞を形質転換し、その後、形質転換細胞を選択培地で成長させることにより操作することができる。選択マーカーは、選択に対する耐性を付与し、細胞がそれらの染色体にＤＮＡを安定して組み込み、増殖して細胞増殖巣（ｆｏｃｕｓ）を形成することを可能にし、次に、その細胞増殖巣をクローン化し、細胞系へと発展させることができる。例えば、それぞれ、ｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞において用いることができる単純ヘルペスウイルスチミジンキナーゼ、ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼおよびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ遺伝子を含む多くの選択系を用いることができる。また、メトトレキセートに対する耐性を付与するｄｈｆｒ；ミコフェノール酸に対する耐性を付与するｇｐｔ；アミノグリコシドＧ−４１８に対する耐性を付与するｎｅｏ；およびハイグロマイシンに対する耐性を付与するｈｙｇｒｏ等の遺伝子の選択の基準として代謝拮抗物質耐性を用いることができる。組換えＤＮＡ技術の分野で一般に知られる方法を通常通りに用いて所望の組換えクローンを選択することができ、そのような方法は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｕｓｕｂｅｌら編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，１９９３）；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９９０）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ（Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら編，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．，１９９４，Ｃｈａｐｔｅｒｓ １２および１３）；ならびにＣｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１に記載されている。
抗体または誘導体の発現量は、ベクター増幅により高めることができる。（例えば、一般に、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ Ｕｓｅ ｏｆ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｇｅｎｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｌｏｎｅｄ Ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照されたい。）抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体を発現するベクター系におけるマーカーが増幅可能な場合、宿主細胞培養培地に存在する阻害剤の量を増加させることで、該阻害剤に対する耐性を付与するマーカー遺伝子のコピー数が増加した宿主細胞が選択される。関連抗体遺伝子のコピー数も増加し、それにより抗体またはその誘導体の発現が増加する（Ｃｒｏｕｓｅら，１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７参照。）
抗ＣＤ７０抗体が重鎖および軽鎖の両方またはその誘導体を含む場合、重鎖タンパク質をコードする第１のベクター、および軽鎖タンパク質をコードする第２のベクターの２つの発現ベクターで宿主細胞を同時遺伝子導入してもよい。これら２つのベクターは、重鎖および軽鎖タンパク質を等しく発現することができる同一の選択マーカーを含んでもよい。あるいは、重鎖および軽鎖タンパク質の両方をコードし、発現することが可能な単一のベクターを用いてもよい。そのような場合、典型的には、軽鎖は、毒性を有する遊離重鎖が過剰になることを避けるために重鎖の前に配置される（Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：５２；Ｋｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：２１９７参照）。重鎖および軽鎖のコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含んでもよい。
（例えば、動物、化学合成または組換え体発現により）抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体が作られると、例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換またはアフィニティークロマトグラフィー（例えば、インタクトなＦｃ領域を有する抗体の精製用プロテインＡクロマトグラフィー等））、遠心分離、溶解度差、またはタンパク質精製のための任意の他の標準的技術等、タンパク質精製のための任意の適切な方法により、当該抗ＣＤ７０抗体または誘導体を精製することができる。抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体は、例えば、ペプチド等のマーカー配列と融合させることにより、アフィニティークロマトグラフィーによる精製を容易にすることができる。適切なマーカーアミノ酸配列としては、例えば、ｐＱＥベクター（ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ，ＣＡ，９１３１１）に設けられたタグ、およびインフルエンザヘマグルチニンタンパク質に由来するエピトープに対応する「ＨＡ」タグ（Ｗｉｌｓｏｎら，１９８４，Ｃｅｌｌ ３７：７６７）および「ｆｌａｇ」タグ等のヘキサ−ヒスチジンペプチドが挙げられる。
抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体が作られると、ＣＤ７０を発現する癌細胞に対する細胞静止もしくは細胞毒性作用またはＣＤ７０を発現する免疫細胞に対する免疫抑制作用を及ぼす能力を下記または当該分野で公知の方法により判定する。
活性化免疫細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞外において抗ＣＤ７０抗体の活性を最小化するために、細胞膜結合ＣＤ７０に特異的に結合するが、可溶性ＣＤ７０には結合しない抗体を用いて、抗ＣＤ７０抗体が活性化免疫細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞の細胞表面に濃縮されるようにすることができる。
典型的には、抗ＣＤ７０抗体または誘導体は実質的に精製されている（例えば、その効果を限定するか、または望ましくない副作用を生じる物質を実質的に含まない）。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体または誘導体は、少なくとも約４０％純粋、少なくとも約５０％純粋、または少なくとも約６０％純粋である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体または誘導体は、少なくとも約６０〜６５％、６５〜７０％、７０〜７５％、７５〜８０％、８０〜８５％、８５〜９０％、９０〜９５％、または９５〜９８％純粋である。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７０抗体または誘導体は概ね９９％純粋である。
（ＩＩＩ．他のＣＤ７０結合剤）
さらに、ＣＤ７０結合剤は、融合タンパク質（典型的には少なくとも１０個、２０個、３０個、４０個、５０個、６０個、７０個、８０個、９０個または少なくとも１００個のアミノ酸の異種タンパク質に組換え融合または化学的に結合体化（すなわち、共有結合および非共有結合の両方の結合体化を含む）させたタンパク質）が挙げられる。このようなＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０および免疫グロブリンエフェクタードメインもしくはその機能的等価物に結合する部分を含む。本明細書中において用いられるように、免疫グロブリンエフェクタードメインの機能的等価物は、食作用もしくは溶解活性またはＦｃエフェクタードメインと補体系成分との結合により、免疫細胞上のＦｃ受容体に結合する。融合タンパク質は、必ずしも直接的である必要はなく、リンカー配列を介して発生してもよい。
例えば、ＣＤ７０結合剤は、インフレームの抗ＣＤ７０抗体の１つ以上のＣＤＲのコード領域と、異種タンパク質をコードする配列とを融合させて組換えにより作ることができる。異種タンパク質は、エフェクタードメインまたはその機能的等価物を含んでおり、以下の特徴のうち１つ以上を提供し得る：安定した発現の促進；高収率の組換え発現を容易にする手段の提供；および／または多量体ドメインの提供。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０に結合し、細胞毒性剤との結合体化を伴わない、ＣＤ７０を発現する細胞単独での増殖を低減または阻害する抗体に由来する１つ以上のＣＤＲを含むようにすることができる。
１つの局面では、ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ２７、およびＣＤ７０に結合する改変体またはそのフラグメントを含むようにすることができる。ＣＤ７０結合剤は、ＣＤ７０に特異的に結合するペプチド、リガンドおよび他の分子をさらに含むようにすることができる。
ＣＤ７０結合剤は、タンパク質−タンパク質相互作用のスクリーニングに適した任意の方法を用いて同定することができる。典型的には、まず、ＣＤ７０に特異的に結合する能力でタンパク質を同定する。そのような結合タンパク質については、細胞毒性白血球細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞）、食作用細胞（例えば、マクロファージ）、および血清補体成分を、細胞毒性または細胞静止剤と結合体化することなく補充および活性化することにより活性化リンパ球またはＣＤ７０を発現する癌細胞に細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼす能力、または免疫抑制剤と結合体化することなく、それら自体により、免疫細胞に免疫抑制作用を及ぼす能力を判定することができる。使用可能な伝統的方法としては、λｇｔ１１ライブラリーの抗体検査技術と類似する方法で、標識ＣＤ７０を用いた発現ライブラリーの検査を伴う「相互作用クローニング」技術がある。例示のためで限定するものではないが、これは以下のように達成することができる：ＣＤ７０（またはその１Ｆ６もしくは２Ｆ２結合ドメイン）をコードするｃＤＮＡクローンのＣ末端を心臓筋肉キナーゼ（ＨＭＫ）用のリン酸化部位に挿入することにより改変する（例えば、Ｂｌａｎａｒ およびＲｕｔｔｅｒ，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１０１４−１０１８参照）。この組換えタンパク質を大腸菌で発現し、ＧＤＰアフィニティーカラムで均一になるまで精製し（Ｅｄｅｒｙら，１９８８，Ｇｅｎｅ ７４：５１７−５２５）、γ３２Ｐ−ＡＴＰおよびウシ心臓筋肉キナーゼ（Ｓｉｇｍａ）を用いて、１×１０８ｃｐｍ／μｇの比活性まで標識し、これを用いて「ファーウェスタンアッセイ」（ＢｌａｎａｒおよびＲｕｔｔｅｒ，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１０１４−１０１８）によりヒト胎盤λｇｔ１１ ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングする。ＣＤ７０プローブと相互作用するプラークを単離する。陽性λプラークのｃＤＮＡ挿入物を遊離し、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＫＳ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ，ＣＡ）等、配列決定に適したベクターにサブクローニングする。
タンパク質相互作用をインビボで検出する方法の１つが２ハイブリッドシステムである。このシステムの１つに関しては、説明がなされており（Ｃｈｉｅｎら，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：９５７８−８２）、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から市販されている。
ＣＤ７０結合タンパク質が同定されると、（単独で、または多量体化させた場合もしくは二量体化または多量体化ドメインと融合させた場合に）ＣＤ７０を発現する癌細胞に対する細胞静止または細胞毒性作用、またはＣＤ７０を発現する免疫細胞に対する免疫抑制作用を及ぼす能力について下記の方法により判定することができる。
（ＩＶ．抗ＣＤ７０標的化剤のエフェクター機能を改善する方法）
いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤のエフェクター機能は、当該分野で公知の１つ以上の抗体操作アプローチを用いてエフェクター機能を改善することにより増大することができる。このようなアプローチについて、非限定的な例を下記に例示する。
ＡＤＣＣおよびＡＤＣＰは、細胞結合抗体と、エフェクター細胞上で発現したＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）の相互作用を介して仲介される。ＩｇＧ Ｆｃ領域のグリコシル化状態および一次アミノ酸配列はともに、Ｆｃγ−ＦｃγＲ相互作用について機能的な効果を有する。より強力なＦｃγ−ＦｃγＲ相互作用は、エフェクター細胞によるより良好な標的細胞の殺傷と関連する。
保存的Ａｓｎ２９７と共有結合したオリゴ糖は、ＩｇＧのＦｃ領域がＦｃγＲに結合するために必要である（Ｌｕｎｄら，１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５７：４９６３−６９；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ、１９９７，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：２６−３１）。このＩｇＧ上の糖形態を操作することにより、ＩｇＧ仲介ＡＤＣＣを大幅に改善することができる。二分Ｎ−アセチルグルコサミン改変をこの糖形態に付加すること（Ｕｍａｎａら，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：１７６−１８０；Ｄａｖｉｅｓら，２００１，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．７４：２８８−９４）、またはフコースをこの糖形態から除去すること（Ｓｈｉｅｌｄｓら，２００２，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３−４０；Ｓｈｉｎｋａｗａら，２００３，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：６５９１−６０４；Ｎｉｗａら，２００４，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６４：２１２７−３３）は、ＩｇＧ ＦｃとＦｃγＲとの間の結合を改善することにより、Ｉｇ仲介ＡＤＣＣ活性を向上させるＩｇＧ Ｆｃ操作の２つの例である。
ヒトのＩｇＧ１ Ｆｃ領域において、溶媒に曝されたアミノ酸を体系的に置換することにより、ＦｃγＲ結合親和性が変化したＩｇＧ改変体が生成された（Ｓｈｉｅｌｄｓら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４）。親ＩｇＧ１と比較して、Ｔｈｒ２５６／Ｓｅｒ２９８、Ｓｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３、Ｓｅｒ２９８／Ｌｙｓ３３４、またはＳｅｒ２９８／Ｇｌｕ３３３／Ｌｙｓ３３４からＡｌａが置換されたこれら改変体の部分集合は、ＦｃγＲに対する結合親和性およびＡＤＣＣ活性の両方において増加を示した（Ｓｈｉｅｌｄｓら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４；Ｏｋａｚａｋｉら，２００４，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−４９）。
抗体仲介ＣＤＣは、Ｃｌｑと細胞結合ＩｇＧ分子との結合により開始される。Ｃｌｑ結合およびＣｌｑ結合の種特異的差異の原因となるヒトＩｇＧ１上の特定のアミノ酸残基が報告されている（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４）。抗体の補体固定活性は、Ｌｙｓ３２６およびＧｌｕ３３３の置換により改善されており；これは、例えば、このような置換が、ヒトＩｇＧ１抗体リツキシマブのＣｌｑ結合およびＣＤＣ活性の両方を改善することができるためである（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１−２５７５）。ヒトＩｇＧ２骨格上で同じ置換を行なうことにより、Ｃｌｑにうまく結合しておらず、補体活性化活性が著しく不足した抗体イソタイプを、Ｃｌｑに結合するとともにＣＤＣを仲介することができる抗体に変換することができる（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２５７１−７５）。他にもいくつかの方法が抗体の補体固定活性を改善するために適用されている。例えば、ＩｇＭの１８−アミノ酸カルボキシル末端尾部をＩｇＧのカルボキシル末端にグラフティングすることにより、それらのＣＤＣ活性が大きく向上する。これは、通常は検出可能なＣＤＣ活性を有さないＩｇＧ４でも観察される（Ｓｍｉｔｈら，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５４：２２２６−３６）。また、ＩｇＧ１重鎖のカルボキシ末端付近に位置するＳｅｒ４４４をＣｙｓと置換することにより、ＩｇＧ１の尾部と尾部との二量化を誘導し、単量体ＩｇＧ１に対して、ＣＤＣ活性が２００倍に増加した（Ｓｈｏｐｅｓら，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２２）。また、Ｃｌｑに対する特異性を有する二重特異性抗体構築物もまたＣＤＣ活性を与える（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎら，１９９７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６２９−３１）。
抗体のインビボ半減期もまた、そのエフェクター機能に影響を与えることがある。いくつかの実施形態では、抗体の半減期を増減し、その治療活性を変更することが望ましい。ＦｃＲｎは、β２−ミクログロブリンと非共有結合するＭＨＣクラスＩ抗原と同様の構造をした受容体である。ＦｃＲｎは、ＩｇＧの異化作用およびそれらの組織間のトランスサイトーシスを調節する（ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ，２０００，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９−７６６；ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７−１１３）。ＩｇＧ−ＦｃＲｎ相互作用は、ｐＨ６．０（細胞内小胞のｐＨ)で発生するが、ｐＨ７．４（血液のｐＨ）では発生しない；この相互作用により、ＩｇＧを血液循環に再循環させることが可能になる（ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ，２０００，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：７３９−７６６；ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．２５：９７−１１３）。ＦｃＲｎ結合に関与するヒトＩｇＧ１上の領域がマッピングされている（Ｓｈｉｅｌｄｓら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４）。ヒトＩｇＧ１のＰｒｏ２３８、Ｔｈｒ２５６、Ｔｈｒ３０７、Ｇｌｎ３１１、Ａｓｐ３１２、Ｇｌｕ３８０、Ｇｌｕ３８２、またはＡｓｎ４３４の位置でのアラニン置換により、ＦｃＲｎ結合が向上する（Ｓｈｉｅｌｄｓら，２００１，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６０４）。これらの置換を保有するＩｇＧ１分子は、血清半減期がより長いものと予測される。結果、これらの改変ＩｇＧ１分子は、それらのエフェクター機能を実行することが可能であるため、改変されていないＩｇＧ１と比較して、より長い期間治療効果を及ぼすことができる。
（Ｖ．細胞毒性、細胞静止および免疫抑制活性に関するアッセイ）
抗体が標的細胞に対するエフェクター機能を仲介するか否かを判定する方法は公知である。このような方法について下記に例示する。
抗ＣＤ７０抗体または誘導体が活性化免疫細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞に対する抗体依存性細胞障害作用を仲介するか否かを判定するために、抗体およびエフェクター免疫細胞の存在下で標的細胞死を測定するアッセイを用いてもよい。このタイプの細胞毒性を測定するために用いられるアッセイは、エフェクター細胞および標的特異的抗体の存在下での培養後、代謝的に標識された標的細胞からの５１Ｃｒ放出の判定に基づくようにすることができる（例えば、ＰｅｒｕｓｓｉａおよびＬｏｚａ，２０００，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １２１：１７９−９２、ならびにＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙにおける「５１Ｃｒ Ｒｅｌｅａｓｅ Ａｓｓａｙ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｙ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）」、Ｃｏｌｉｇａｎら編，Ｗｉｌｅｙａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９３参照）。例えば、Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４で標識され、５，０００細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに入れられた活性化免疫細胞（例えば、活性化リンパ球）またはＣＤ７０を発現する癌細胞は、異なる濃度の抗ＣＤ７０抗体を用いて３０分間処理し、次に、正常なヒトの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と４時間混合することができる。標的細胞死を伴う膜破壊により、５１Ｃｒを培養上清中に放出するが、これを回収し、その放射能を細胞毒性活性の測定値として評価してもよい。ＡＤＣＣを測定する他のアッセイは、非放射性標識を用いるか、または特定の酵素の放出の誘導に基づいてもよい。例えば、時間分解蛍光測定に基づく非放射性アッセイが市販されている（Ｄｅｌｐｈｉａ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）。このアッセイでは、細胞膜に浸透し、次いで、加水分解して膜不透過親水性リガンド（ＴＤＡ）を形成する蛍光増感リガンド（ＢＡＴＤＡ）のアセトキシメチルエステルを標的細胞に組み込む。ＴＤＡは、標的特異的抗体およびＰＢＭＣエフェクター細胞と混合されると溶解細胞から放出され、ユーロピウムと混合された場合には高蛍光性キレートを形成することが可能である。時間分解蛍光光度計で測定したシグナルは、細胞溶解量と相関関係にある。
抗ＣＤ７０抗体または誘導体が活性化免疫細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞に対する抗体依存性細胞食作用を仲介するか否かを判定するために、エフェクター免疫細胞による標的細胞内在化を測定するアッセイ（例えば、新たに培養されたマクロファージまたは確立されたマクロファージ様細胞系）を用いてもよい（例えば、ＭｕｎｎおよびＣｈｅｕｎｇ，１９９０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：２３１−３７；Ｋｅｌｅｒら，２０００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：５７４６−５２；Ａｋｅｗａｎｌｏｐら，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：４０６１−６５参照）。例えば、標的細胞を、ＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ）等の脂溶性膜染料で標識し、標的特異的抗体で覆い、エフェクター免疫細胞と４〜２４時間混合してもよい。次いで、エフェクター細胞を、食作用細胞表面マーカー（例えば、ＣＤ１４）に特異的な蛍光色素で標識した抗体で対比染色することにより同定し、当該細胞を２色フローサイメトリーまたは蛍光顕微鏡検査法により分析してもよい。二重陽性細胞は、標的細胞を内在化したエフェクター細胞を表す。これらのアッセイについては、エフェクター細胞は、５〜１０日間、Ｍ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを用いて培養してマクロファージに分化したＰＢＭＣ由来の単球であってもよい（例えば、ＭｕｎｎおよびＣｈｅｕｎｇ，同上参照)。ＡＴＣＣから利用可能なヒトのマクロファージ様細胞系Ｕ９３７（Ｌａｒｒｉｃｋら，１９８０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２５：６−１２）またはＴＨＰ−１（Ｔｓｕｃｈｉｙａら，１９８０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ２６：１７１−７６）は、代替的な食作用細胞源として用いてもよい。
標的細胞との結合時に抗体が補体依存性細胞毒性作用を仲介するか否かを判定する方法も公知である。ＣＤ７０結合剤がＣＤＣ活性化免疫細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞を仲介するか否かを判定するために同じ方法を適用することができる。そのような方法を以下において例示的に説明する。
活性補体の源は、正常なヒトの血清であるか、またはウサギを始めとする実験動物から精製することができる。標準的なアッセイでは、補体の存在下で、ＣＤ７０を発現する活性化免疫細胞（例えば、活性化リンパ球）またはＣＤ７０を発現する癌細胞を用いてＣＤ７０結合剤を培養する。そのようなＣＤ７０結合剤の細胞溶解仲介能力は、いくつかの計測値によって判定することができる。１つの例では、Ｎａ５１ＣｒＯ４放出アッセイが用いられる。このアッセイでは、標的細胞はＮａ５１ＣｒＯ４で標識される。組み込まれていないＮａ５１ＣｒＯ４を洗い落とし、９６ウェルプレートに適切な密度、典型的には、５，０００〜５０，０００細胞／ウェルで細胞を入れる。正常な血清または精製された補体の存在下でＣＤ７０結合剤を用いた培養を、典型的には、５％のＣＯ２雰囲気中において３７℃で２〜６時間継続する。細胞溶解を示す放出された放射能を、γ線計測により一定分量の培養上清において判定する。組み込まれたＮａ５１ＣｒＯ４を洗剤（０．５〜１％のＮＰ−４０またはＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１００）で処理して放出することにより最大細胞溶解を判定する。自然発生的な背景細胞溶解を、ＣＤ７０結合剤がなく補体のみが存在するウェルで判定する。細胞溶解率を、（ＣＤ７０結合剤により誘導された溶解−自然発生的な溶解）／最大細胞溶解により算出する。第２の計測値は、代謝染料（例えば、Ａｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ）の生存細胞分の減少である。このアッセイでは、補体を有し、上記のように培養したＣＤ７０結合剤を用いて標的細胞を培養する。培養の最後に、１／１０の用量のＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅ（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ）を加える。５％のＣＯ２雰囲気中において３７℃で最大１６時間培養を継続する。５３０ｎｍの励起波長および５９０ｎｍの発光波長を用いた蛍光分析により、代謝的に活性な生存細胞を示すＡｌａｍａｒ Ｂｌｕｅの減少を判定する。第３の計測値は、ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）に対する細胞膜浸透力である。補体活性化の結果として原形質膜に孔が形成されることにより、ＰＩが細胞内に侵入し、細胞核内に拡散してＤＮＡに結合することが容易になる。ＤＮＡとの結合時に、６００ｎｍのＰＩ蛍光が大きく増加する。上記のように、ＣＤ７０結合剤および補体を用いて標的細胞の処理を行なう。培養の最後に、最終濃度が５μｇ／ｍｌになるまでＰＩを加える。次いで、励起用の４８８ｎｍアルゴンレーザーを用いたフローサイメトリーにより、細胞懸濁液を検査する。溶解細胞は、６００ｎｍの蛍光発光で検出される。
（ＶＩ．免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌の動物モデル）
抗ＣＤ７０抗体または誘導体は、免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌の動物モデルにおいてテストまたは検証することができる。免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌について確立された多くの動物モデルが当業者に知られており、そのいずれについても抗ＣＤ７０抗体または誘導体の有効性を検査するために用いることができる。そのようなモデルの非限定的な例を以下に示す。
糖尿病、狼瘡、全身性硬化症、シェーグレン症候群、実験的自己免疫脳脊髄炎（多発性硬化症）、甲状腺炎、重症筋無力症、関節炎、ブドウ膜炎、炎症性腸疾患を含む全身性および器官特異的な自己免疫病の動物モデルの例が、Ｔｈｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ＤｉｓｅａｓｅｓにおけるＢｉｇａｚｚｉ，「Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ ａｎｄ Ｉｎｄｕｃｅｄ」（ＲｏｓｅおよびＭａｃｋａｙ編，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９８）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙにおける「Ａｎｉｍａｌ Ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ｄｉｓｅａｓｅ」（Ｃｏｌｉｇａｎら編，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，１９９７）、およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．１０２．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ＰｒｏｔｏｃｏｌｓにおけるＰｅｎｇ，「Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｕｓｅ ｏｆ Ｍｕｒｉｎｅ Ｌｕｐｕｓ Ｍｏｄｅｌｓ」（Ｐｅｒｌ編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．）に記載されている。
アレルギー性症状、例えば、喘息および皮膚炎も、げっ歯類においてモデル化することができる。気道過敏症は、オボアルブミンにより（Ｔｏｍｋｉｎｓｏｎら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：５７９２−８００）またはＳｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ卵抗原（Ｔｅｓｃｉｕｂａら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：１９９６−２００３）によってマウス中に誘導することができる。マウスのＮｃ／Ｎｇａ系は、血清ＩｇＥの顕著な増加を示し、アトピー性皮膚炎様病変を自然発生させる（Ｖｅｓｔｅｒｇａａｒｄら，２０００，Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ ６：２０９−１０；Ｗａｔａｎａｂｅら，１９９７，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４６１−６６；Ｓａｓｋａｗａら，２００１，Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２６：２３９−４７）。
免疫適格ドナーのリンパ球を致死照射組織非適合宿主に注射することは、マウスでＧＶＨＤを誘導するための古典的なアプローチである。あるいは、親Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスモデルは、急性および慢性ＧＶＨＤの両方を誘導するシステムを提供する。このモデルでは、Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスは、Ｃ５７ＢＬ／６およびＤＢＡ／２マウスの親系統間交配のＦ１子孫である。ＤＢＡ／２リンパ系細胞を非照射Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスに移入することにより、慢性ＧＶＨＤが引き起こされる一方、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／１０またはＢ１０．Ｄ２リンパ系細胞の移入では、急性ＧＶＨＤが引き起こされる（Ｓｌａｙｂａｃｋら，２０００，Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌ．２６：９３１−９３８；Ｋａｔａｏｋａら，２００１，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １０３：３１０−３１８）。
さらに、ヒト造血幹細胞および成熟末梢血液リンパ系細胞はともに、ＳＣＩＤマウスに植え付けることができ、これらのヒトリンパ−造血細胞は、ＳＣＩＤマウス中で機能を持ち続ける（ＭｃＣｕｎｅら，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：１６３２−１６３９；Ｋａｍｅｌ−ＲｅｉｄおよびＤｉｃｋ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：１７０６−１７０９；Ｍｏｓｉｅｒら，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３５：２５６−２５９）。これは、ヒトリンパ系細胞に対して潜在的な治療剤を直接テストするための小動物モデルシステムを提供している（例えば、Ｔｏｕｒｎｏｙら，２００１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：６９８２−６９９１参照）。
さらに、ＣＤ７０を発現するヒト腫瘍細胞系を、適切な免疫欠損げっ歯類系、例えば、胸腺欠損ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスに移植することにより、体内における抗ＣＤ７０抗体または誘導体の有効性を調べる小動物モデルを作ることができる。ＣＤ７０を発現するヒトリンパ腫細胞系の例としては、例えば、Ｄａｕｄｉ（Ｇｈｅｔｉｅら，１９９４，Ｂｌｏｏｄ ８３：１３２９−３６；Ｇｈｅｔｉｅら，１９９０，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １５：４８１−８５；ｄｅ Ｍｏｎｔら，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：７６５４−５９），Ｒａｍｏｓ（Ｍａら，２００２，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １６：６０−６；Ｐｒｅｓｓら，２００１，Ｂｌｏｏｄ ９８：２５３５−４３），ＨＳ−Ｓｕｌｔａｎ（ＣａｔｔａｎおよびＭａｕｎｇ，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８：５４８−５２；ＣａｔｔａｎおよびＤｏｕｇｌａｓ，１９９４，Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：５１３−２２），Ｒａｊｉ（Ｏｃｈａｋｏｖｓｋａｙａら，２００１，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７：１５０５−１０；Ｂｒｅｉｓｔｏら，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２９４４−４９），およびＣＡ４６（Ｋｒｅｉｔｍａｎら，１９９９，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８１：１４８−５５）が挙げられる。ＣＤ７０を発現するホジキンリンパ腫系の非限定的な例としては、Ｌ５４０ｃｙ（Ｂａｒｔｈら，２０００，Ｂｌｏｏｄ ９５：３９０９−１４；Ｗａｈｌら，２００２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６２：３７３６−４２）が挙げられる。ＣＤ７０を発現するヒト腎臓細胞癌腫細胞系の非限定的な例としては、７８６−Ｏ（Ａｎａｎｔｈら，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５９：２２１０−６；Ｄａｔｔａら，２００１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１：１７６８−７５）、ＡＣＨＮ（Ｈａｒａら，２００１，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６６：２４９１−４；Ｍｉｙａｋｅら，２００２，Ｊ．Ｕｒｏｌ．１６７：２２０３−８）、Ｃａｋｉ−１（Ｐｒｅｗｅｔｔら，１９９８，Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４：２９５７−６６；ＳｈｉおよびＳｉｅｍａｎｎ，２００２，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８７：１１９−２６）ならびにＣａｋｉ−２（Ｚｅｌｌｗｅｇｅｒら，２００１，Ｎｅｏｐｌａｓｉａ ３：３６０−６７）が挙げられる。ＣＤ７０を発現する上咽頭癌腫細胞系の非限定的な例としては、Ｃ１５およびＣ１７（Ｂｕｓｓｏｎら，１９８８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４２：５９９−６０６；Ｂｅｒｎｈｅｉｍら，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔ．Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ．６６：１１−５）が挙げられる。ＣＤ７０を発現するヒトグリオーマ細胞系の非限定的な例としては、Ｕ３７３（Ｐａｌｍａら，２０００，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ８２：４８０−７）およびＵ８７ＭＧ（Ｊｏｈｎｓら，２００２，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ９８：３９８−４０８）が挙げられる。これらの腫瘍細胞系は、皮下注射による固体腫瘍または静脈内注射による散在性腫瘍のいずれかとして、免疫欠損げっ歯動物宿主中で確立することができる。宿主内で確立されると，これらの腫瘍モデルを適用して、インビボ腫瘍成長の調節について、本明細書中に記載の抗ＣＤ７０抗体または誘導体の治療有効性を評価することができる。
（ＶＩＩ．免疫障害およびＣＤ７０を発現する癌）
本明細書中に記載の抗ＣＤ７０抗体および誘導体は、免疫細胞（例えば、リンパ球または樹状細胞）の不適切な活性化によるＣＤ７０の発現を特徴とするＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の処置または予防に有用である。このようなＣＤ７０の発現は、例えば、細胞表面上のＣＤ７０タンパク質の増加量および／または発現したＣＤ７０の抗原性の変化が原因となり得る。効果的な量の抗ＣＤ７０抗体または誘導体をその処置または予防を必要とする被験体に投与することにより、当該抗体または誘導体が、（ｉ）ＣＤ７０を発現し、その病状に関連する活性化免疫細胞に結合し、（ｉｉ）その活性化免疫細胞に対して、細胞毒性、細胞静止または免疫抑制剤と結合体化することなく、細胞毒性、細胞静止または免疫抑制効果を及ぼすことにより本明細書中に記載の方法による免疫障害の処置または予防が達成される。
免疫細胞の不適切な活性化を特徴とし、本明細書中に記載の方法により処置または予防することができる免疫学的疾患は、例えば、その障害の背後にある過敏性反応のタイプにより分類することができる。これらの反応は、典型的には、アナフィラキシー反応、細胞毒性（細胞分解）反応、免疫複合体反応、または細胞仲介免疫（ＣＭＩ）反応（遅延タイプの過敏性（ＤＴＨ）反応ともいう）の４種類に分類される。（例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｌｉａｍ Ｅ．Ｐａｕｌ編，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，３ｒｄ ｅｄ．１９９３）参照。）
そのような免疫障害の具体的な例としては、以下のものが挙げられる：関節リウマチ、自己免疫脱髄疾患（例えば、多発性硬化症、アレルギー性脳髄膜炎）、内分泌眼病、ブドウ膜網膜炎、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、グレーブス病、糸球体腎炎、自己免疫肝臓病，炎症性腸疾患（例えば、クローン病）、アナフィラキシー、アレルギー性反応、シェーグレン症候群、タイプＩ糖尿病、原発性胆汁肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、繊維筋肉痛、多発性筋炎、皮膚筋炎、多発性内分泌不全、シュミッツ症候群、自己免疫ブドウ膜炎、アジソン病、副腎炎、甲状腺炎、ハシモト甲状腺炎、自己免疫甲状腺病、悪性貧血、胃萎縮症、慢性肝炎、狼瘡性肝炎、アテローム性動脈硬化、亜急性皮膚エリテマトーデス、副甲状腺機能低下症、ドレッスラー症候群、自己免疫血小板減少症、突発性血小板減少紫斑病、溶血性貧血、尋常性天疱瘡、天疱瘡、疱疹状皮膚炎、円形脱毛症、ペンフィゴイド、強皮症、進行性全身性硬化症、ＣＲＥＳＴ症候群（石灰症、レイノー現象、食道不良運動、手指硬化および末梢血管拡張症）、雄性および雌性の自己免疫不妊症、強着性脊椎炎、潰瘍性大腸炎、混合結合組織病、多発関節炎ネドーサ、全身性壊死化脈管炎、アトピー性皮膚炎、アトピー性鼻炎、グッドパスチャー症候群、チャガス病、サルコイドーシス、リューマチ熱、喘息、再発性流産、抗リン脂質症候群、農夫肺、多形紅斑、心臓切開後症候群、カッシング症候群、自己免疫慢性活性肝炎、愛鳥家肺、毒性上皮性壊死溶解、アルポート症候群、歯槽炎、アレルギー性肺胞炎、繊維化性肺胞炎、間質性肺病、紅斑ノドースン、壊疽性膿皮症、輸血反応、タカヤス動脈炎、リュウマチ性多筋肉痛、側頭動脈炎、住血吸虫症、巨大細胞動脈炎、回虫症、アスペルギルス症、サムプター症候群、湿疹、リンパ肉芽腫症、ベーチェット病、キャプラン症候群、川崎病、デング熱、脳脊髄炎、心内膜炎、心筋内繊維症、眼内炎、持久性隆起性紅斑、乾癬、胎児赤芽球症、好酸球性筋膜炎、シュルマン症候群、フェルティ症候群、フィラリア症、毛様体炎、慢性毛様体炎、異虹彩色性毛様体炎、フックの毛様体炎、ＩｇＡ腎症、ヘノック・ショーンレイン紫斑病、移植片対宿主病、移植拒絶、心筋症、イートン・ランバート症候群、再発性多発性軟骨炎、低温性グロブリン血症、ワルデンストレームマクログロブリン血症、エバンス症候群、および自己免疫生殖腺不全。
よって、本明細書中に記載の方法は、Ｂリンパ球の障害（例えば、全身性エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、関節リウマチ、およびタイプＩ糖尿病）、Ｔｈ１リンパ球の障害（例えば、関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、ハシモト甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核または急性移植片対宿主病）、またはＴｈ２リンパ球の障害（例えば、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、アトピー性喘息、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、オーメン症候群、全身性硬化症、または慢性移植片対宿主病）の処置を含む。一般に、樹状細胞に関連する障害は、Ｔｈ１リンパ球またはＴｈ２リンパ球の障害を伴う。
いくつかの実施形態では、免疫障害は、その障害に関連する活性化Ｔ細胞がＣＤ７０を発現するＴ細胞障害等のＴ細胞仲介免疫障害である。そのようなＣＤ７０を発現する活性化Ｔ細胞を低減するために抗ＣＤ７０抗体または誘導体を投与することができる。特定の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与により、ＣＤ７０を発現する活性化Ｔ細胞を低減することができる一方、休止Ｔ細胞は、抗ＣＤ７０抗体または誘導体によって実質的に低減されることはない。この文脈において、「実質的に低減されない」とは、約６０％未満、または約７０％未満、または約８０％未満の休止Ｔ細胞が低減されないことを意味する。
本明細書中に記載の抗ＣＤ７０抗体および誘導体は、ＣＤ７０を発現する癌の処置または予防にも有用である。本明細書中に記載の方法によるＣＤ７０を発現する癌の処置または予防は、効果的な量の抗ＣＤ７０抗体または誘導体をその処置または予防を必要とする被験体に投与することにより、当該抗体または誘導体が（ｉ）ＣＤ７０を発現する癌細胞に結合し、（ｉｉ）単独でＣＤ７０を発現する癌細胞の増殖を低減または阻害する細胞毒性または細胞静止効果を及ぼすことにより達成される。
本明細書中に記載の方法により処置または予防できるＣＤ７０を発現する癌としては、例えば、異なるサブタイプの無痛性非ホジキンリンパ腫（無痛性ＮＨＬ）（例えば、小胞ＮＨＬ、小リンパ球リンパ腫、リンパ形質細胞ＮＨＬまたは辺縁帯ＮＨＬ）；非ホジキンリンパ腫、例えば、バーキットリンパ腫および慢性リンパ球白血病を含むＢ細胞系の癌；多発性骨髄腫、腎臓細胞癌腫；上咽頭癌腫；胸腺癌腫；グリオーマ；グリア芽腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症；髄膜腫；ならびに結腸、胃および直腸の癌腫が挙げられる。
（ＶＩＩＩ．抗ＣＤ７０抗体および誘導体を含む医薬組成物およびその投与）
抗ＣＤ７０結合剤を含有する組成物（例えば、抗ＣＤ７０抗体および誘導体）を、免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌を有するか、またはその危険性のある被験体に投与することが可能である。本発明は、さらに、ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害の予防または処置のための物質の製造における、ＣＤ７０結合剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体)の使用にも対応する。本明細書中において用いる「被験体」という用語は、例えば、霊長類、げっ歯類およびイヌ等のヒトおよび非ヒト哺乳類を含む、ＣＤ７０結合ＣＤ７０結合剤を投与可能なあらゆる哺乳類患者を意味する。特に本明細書中に記載の方法を用いる処置の対象となる被験体は、ヒトを含む。抗体または誘導体は、免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌の予防または処置において、単独または他の組成物と組み合わせて投与することができる。
ＣＤ７０結合剤の投与に使用可能な公知の供給システムが各種存在する。導入方法としては、皮膚内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下内、鼻内、硬膜外および経口経路が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＤ７０結合剤は、例えば、点滴もしくはボーラス注射、上皮もしくは皮膚粘膜内層（例えば、口粘膜、直腸または腸粘膜等）による吸収により投与することができ、化学療法剤等の生物活性剤とともに投与することができる。投与は、全身または局所であってよい。
特定の実施形態では、ＣＤ７０結合剤組成物は、注射により、カテーテルにより、坐剤により、または移植物により投与され、この移植物は、例えば、シアラスティック膜（ｓｉａｌａｓｔｉｃ ｍｅｍｂｒａｎｅ）等の膜、または繊維を含む多孔性、非多孔性またはゼラチン状物質、である。典型的には、この組成物を投与する場合、抗ＣＤ７０抗体または誘導体を吸収しない材料が用いられる。
他の実施形態では、抗ＣＤ７０抗体または誘導体は、調節除放システムで供給される。１つの実施形態では、ポンプを用いてもよい（Ｌａｎｇｅｒ，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３；Ｓｅｆｔｏｎ，１９８９，ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．１４：２０１；Ｂｕｃｈｗａｌｄら，１９８０，Ｓｕｒｇｅｒｙ ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら，１９８９，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４参照。）他の実施形態では、高分子物質を用いることができる（Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ（ＬａｎｇｅｒおよびＷｉｓｅ編，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ，１９７４）；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ，Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ（ＳｍｏｌｅｎおよびＢａｌｌ編，Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８４）；ＲａｎｇｅｒおよびＰｅｐｐａｓ，１９８３，Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２３：６１を参照されたい。また、Ｌｅｖｙら，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２８：１９０；Ｄｕｒｉｎｇら，１９８９，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．２５：３５１；Ｈｏｗａｒｄら，１９８９，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０５も参照されたい。）他の調節除放システムは、例えば、上記のＬａｎｇｅｒで考察されている。
ＣＤ７０結合剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体）は、治療有効量の結合剤および１つ以上の薬学的に適合性のある成分を含む医薬組成物として投与することできる。例えば、この医薬組成物は、典型的には、１つ以上の医薬キャリア（例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱油、ゴマ油等、石油、動物、植物または合成を起源とする、水および油等の滅菌液体）を含む。医薬組成物を静脈内投与する場合の典型的なキャリアは水である。塩溶液ならびにデキトロースおよびグリセロール水溶液も液体キャリアとして、特に、注射可能な溶液に用いることができる。適切な医薬賦形剤としては、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥脱脂乳、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。上記組成物は、所望であれば、少量の湿潤剤もしくは乳化剤、またはｐＨ緩衝剤も含むことができる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸剤、カプセル、粉剤、除放処方物等の形態を取ることができる。上記組成物は、トリグリセリド等の伝統的な結合剤およびキャリアとともに坐剤として処方することができる。経口処方物としては、薬学グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム等の標準的なキャリアを含むことができる。適切な医薬キャリアの例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。そのような組成物は、治療効果のある量の核酸またはタンパク質を、典型的には、精製した形態で、患者に適切な投与形式で提供できるように適切な量のキャリアとともに含む。剤形は、投与方法に対応する。
典型的な実施形態では、上記医薬組成物は、所定の手順に従ってヒトへの静脈内投与に適合した医薬組成物として処方される。典型的には、静脈内投与用の組成物は、滅菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要であれば、上記医薬は、可溶化剤、および注射部位の痛みを和らげるリグノカイン等の局所麻酔剤を含むようにすることもできる。一般に、それらの成分は、個別に、または単位投与の形態で混合して、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたはプラスチック袋等の密封容器に凍結乾燥粉末または無水濃縮物として供給される。上記医薬を点滴により投与する場合、滅菌医薬グレードの水または塩溶液を含む点滴ビンで調合することができる。上記医薬を注射により投与する場合、注射用滅菌水または塩溶液のアンプルを提供し、投与前に成分を混合することができる。
さらに、上記医薬組成物は、（ａ）凍結乾燥形態のＣＤ７０結合剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体）を含む容器、および（ｂ）注射用の薬学的に許容される希釈剤（例えば、滅菌水）を含む第２の容器を含む薬学キットとして提供することができる。薬学的に許容される希釈剤は、凍結乾燥した抗ＣＤ７０抗体または誘導体の再構築または希釈に用いることができる。そのような容器に任意に付属させることができるものとしては、医薬または生物学製品の製造、使用または販売を統制する政府機関により規定された形態の注意書きがあり、この注意書きは、ヒトへの投与のための製造、使用または販売に関する当局の承認を反映するものである。
免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌の処置または予防に効果的なＣＤ７０結合剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体）の量は、標準的な臨床技術により決定することができる。さらに、最適な投与量範囲の特定に役立てるために、任意に、インビトロアッセイを用いてもよい。処方物に用いられる正確な投与量は、投与経路および免疫障害もしくはＣＤ７０を発現する癌の段階にも依存し、実施者の判断および各患者の状況に応じて決定すべきである。効果的な投与量は、インビトロまたは動物モデルテストシステムから得られる投与量／応答曲線から外挿してもよい。
例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の毒性および治療有効性は、細胞培養物もしくは実験動物にて、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死となる投与量）およびＥＤ５０（集団の５０％に対して治療効果のある投与量）を決定する標準的な薬学手順によって判定することができる。毒性効果と治療効果の投与量比は治療指標であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比で表わすことができる。高い治療指標を示すＣＤ７０結合剤（例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体）が好ましい。ＣＤ７０結合剤が毒性のある副作用を示す場合、そのＣＤ７０結合剤を侵された組織部位に向ける送達システムを用いて、ＣＤ７０を発現しない細胞に対する潜在的な損傷を最小化することにより、副作用を低減させることができる。
細胞培養物アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用のために投与量範囲を決定するために用いることができる。ＣＤ７０結合剤の投与量は、典型的には、ＥＤ５０を含み、かつ毒性がほとんど無いかまたは全く無い循環濃度の範囲にある。投与量は、この範囲内において、使用する投与形態および利用する投与経路に応じて変更してもよい。本方法で用いるあらゆるＣＤ７０結合剤に関して、最初に、治療効果のある投与量を細胞培養物アッセイにより予測することができる。投与量は、動物モデルにおいて、細胞培養物中で決定されたＩＣ５０（すなわち、症状の阻害を最大値の半分だけ達成する試験化合物の濃度）を含む循環血漿濃度範囲を達成するように決定することができる。そのような情報を用いて、ヒトにおいて有用な投与量をより正確に決定することができる。血漿中の量は、例えば、高速液体クロマトグラフィーで測定することができる。
一般に、免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌を有する患者に投与する抗ＣＤ７０抗体または誘導体の量は、典型的には、０．１ｍｇ／（被験体の体重）ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇである。被験体に投与する量は、０．１ｍｇ／（被験体の体重）ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ、または１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇである。一般に、ヒトの抗体は、人体では、外来タンパク質に対する免疫応答のために、他の種からの抗体よりも長い半減期を有する。よって、ヒト化、キメラまたはヒトの抗体を含む抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与量を減少させ、投与の頻度を低くすることが可能な場合が多い。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７０結合剤を含む医薬組成物は、治療剤（すなわち、非結合体化細胞毒性または免疫抑制剤（例えば、本明細書中に記載したもののいずれか））をさらに含むようにすることができる。抗ＣＤ７０結合剤はまた、免疫障害またはＣＤ７０を発現する癌の処置または予防のために１つ以上の治療剤と組み合わせて同時に投与することもできる。例えば、組合せ治療は、治療剤（例えば、細胞静止、細胞毒性または細胞抑制剤（癌または免疫障害の処置に慣用的に用いられているような結合体化していない細胞静止、細胞毒性または細胞抑制剤等））を含むようにすることができる。また、組合せ治療は、例えば、活性化リンパ球、樹状細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞の表面上のＣＤ７０以外の受容体または受容体複合体を標的とする物質の投与を含むようにすることができる。そのような物質の例としては、活性化リンパ球、樹状細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞の表面にある分子に結合する第２の非ＣＤ７０抗体が挙げられる。他の例としては、そのような受容体または受容体複合体を標的とするリガンドが挙げられる。典型的には、そのような抗体またはリガンドは、活性化リンパ球、樹状細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞上の細胞表面受容体に結合し、細胞静止または細胞毒性シグナルを活性化リンパ球、樹状細胞またはＣＤ７０を発現する癌細胞に届けることにより、抗ＣＤ７０抗体の細胞毒性または細胞静止作用を向上させる。このような組合せ投与は、病気のパラメーター（例えば、症状の程度、症状の数、または再発の頻度）に対して加法的または相乗的効果を有し得る。
組合せ投与の治療計画に関して、特定の実施形態では、抗ＣＤ７０結合剤は、治療剤と同時に投与される。他の特定の実施形態では、上記治療剤は、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与前または投与後少なくとも１時間から数ヶ月までの期間、例えば、抗ＣＤ７０抗体または誘導体の投与前または投与後少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヶ月または３ヶ月の期間に投与される。いくつかの実施形態では、被験体は、抗ＣＤ７０結合剤の投与後、および任意で治療剤の投与後に監視される。
上記治療剤は、例えば、癌細胞または活性化免疫細胞に治療作用を及ぼす任意の物質とすることができる。典型的には、上記治療剤は、細胞毒性または免疫抑制剤である。
有用な種類の細胞毒性または免疫抑制剤としては、例えば、抗チュブリン剤、オーリスタチン、ＤＮＡ副溝結合剤、ＤＮＡ複製阻害剤、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、モノ（プラチナ）、ビス（プラチナ）および三核プラチナ複合体およびカルボプラチン等のプラチナ複合体）、アントラサイクリン、抗生物質、抗葉酸剤、代謝拮抗物質、化学療法増感剤、デュオカルマイシン、エトポシド、フッ素化ピリミジン、イオノホア、レキシトロプシン、ニトロソウレア、プラチノール、前形成化合物（ｐｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ）、プリン代謝拮抗物質、ピューロマイシン、照射増感剤、ステロイド、タキサン、トポイソメラーゼ阻害剤、ビンカアルカロイド等が挙げられる。
個々の細胞毒性または免疫抑制剤としては、例えば、アンドロゲン、アントラマイシン（ＡＭＣ）、アスパラギナーゼ、５−アザシチジン、アザチオプリン、ブレオマイシン、ブスルファン、ブチオニンスルホキシミン、カンプトテシン、カルボプラチン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ＣＣ−１０６５、クロラムブシル、シスプラチン、コルヒチン、シクロホスファミド、シタラビン、シチジンアラビノシド、サイトカラシンＢ、デカルバジン、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ダウノルビシン、デカルバジン、ドセタキセル、ドキソルビシン、エストロゲン、５−フルオロデオキシウリジン、５−フルオロウラシル、グラミシジンＤ、ヒドロキシウレア、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミン、メルファラン、６−メルカプトプリン、メトトレキセート、ミトラマイシン、ミトマイシンＣ、ミトキサントロン、ニトロイミダゾール、パクリタキセル、プリカミシン、プロカルビジン、ストレプトゾトシン、テノポシド、６−チオグアニン、チオＴＥＰＡ、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ＶＰ−１６およびＶＭ−２６が挙げられる。
いくつかの典型的な実施形態では、上記治療剤は細胞毒性剤である。適切な細胞毒性剤としては、例えば、ドラスタチン（例えば、オーリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ）、ＤＮＡ副溝結合剤（例えば、エネジインおよびレキシトロプシン）、デュオカルマイシン、タキサン（例えば、パクリタキセルおよびドセタキセル）、ピューロマイシン、ビンカアルカロイド、ＣＣ−１０６５、ＳＮ−３８、トポテカン、モルホリノ−ドキソルビシン、リゾキシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、エキノマイシン、コンブレタスタチン、ネトロプシン、エポチロンＡおよびＢ、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、メイタンシノイド、ジスコデルモリド、エロイテロビン、およびミトキサントロンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、上記細胞毒性剤は、例えば、ドキソルビシン、パクリタキセル、メルファラン、ビンカアルカロイド、メトトレキセート、ミトマイシンＣまたはエトポシド等、慣用の化学療法剤である。また、例えば、ＣＣ−１０６５類似体、カリケミアミシン、メイタンシン、ドラスタチン１０の類似体、リゾキシンおよびパリトキシン等の強力な物質を、抗ＣＤ７０抗体またはその誘導体に結合させることができる。
特定の実施形態では、上記細胞毒性または細胞静止剤は、オーリスタチンＥ（当該分野ではドラスタチン−１０としても知られる）またはその誘導体である。典型的には、オーリスタチンＥ誘導体は、例えば、オーリスタチンＥとケト酸との間で形成されたエステルである。例えば、オーリスタチンＥは、パラアセチル安息香酸またはベンゾイル吉草酸と反応させて、それぞれ、ＡＥＢおよびＡＥＶＢを作ることができる。他の典型的なオーリスタチン誘導体としては、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、およびＭＭＡＥが挙げられる。オーリスタチンＥおよびその誘導体の合成と構造は、米国特許出願第０９／８４５，７８６号（米国特許出願公開第２００３００８３２６３号）および同第１０／００１，１９１号；国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０３／２４２０９、国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ０２／１３４３５、および米国特許第６，３２３，３１５号；同第６，２３９，１０４号；同第６，０３４，０６５号；同第５，７８０，５８８号；同第５，６６５，８６０号；同第５，６６３，１４９号；同第５，６３５，４８３号；同第５，５９９，９０２号；同第５，５５４，７２５号；同第５，５３０，０９７号；同第５，５２１，２８４号；同第５，５０４，１９１号；同第５，４１０，０２４号；同第５，１３８，０３６号；同第５，０７６，９７３号；同第４，９８６，９８８号；同第４，９７８，７４４号；同第４，８７９，２７８号；同第４，８１６，４４４号；および同第４，４８６，４１４号に記載されている。
特定の実施形態では、上記細胞毒性剤はＤＮＡ副溝結合剤である。（例えば、米国特許第６，１３０，２３７号を参照されたい。）例えば、いくつかの実施形態では、上記副溝結合剤はＣＢＩ化合物である。他の実施形態では、上記副溝結合剤はエネジイン（例えば、カリケアミシン）である。
抗チュブリン剤の例としては、タキサン類（例えばＴａｘｏｌ（商標登録）（パクリタキセル）、Ｔａｘｏｔｅｒｅ（商標登録）（ドセタキセル））、Ｔ６７（チュラリク）、ビンカアルキロイド類（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン）、およびドラスタチン類（例えば、オーリスタチンＥ、ＡＦＰ、ＭＭＡＦ、ＭＭＡＥ、ＡＥＢ、ＡＥＶＢ）が挙げられるが、これらに限定されない。他の抗チュブリンとしては、例えば、バッカチン誘導体、タキサン類似体（例えば、エポチロンＡおよびＢ）、ノコダゾール、コルヒチンおよびコルシミド、エストラムスチン、クリプトフィシン、セマドチン、メイタンシノイド、コンブレタスタチン、ジスコデルモリド、およびエロイテロビンが挙げられる。
いくつかの実施形態では、上記細胞毒性剤は、抗チュブリン剤の他の群であるメイタンシノイドである。例えば、特定の実施形態では、メイタンシノイドは、メイタンシンまたはＤＭ−１である（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｃｈａｒｉら，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１も参照されたい）。
いくつかの実施形態では、上記治療剤は放射同位元素ではない。
いくつかの実施形態では、上記細胞毒性または免疫抑制剤は代謝拮抗物質である。代謝拮抗物質は、例えば、プリン拮抗薬（例えば、アゾチオプリンまたはミコフェノール酸モフェチル）、デヒドロフォレートレダクターゼ阻害剤（例えば、メトトレキセート）、アシクロビル、ガングシクロビル、ジドブジン、ビダラビン、リババリン、アジドチミジン、シチジンアラビノシド、アマンタジン、ジデオキシウリジン、ヨードデオキシウリジン、ポスカーネットまたはトリフルリジンとすることができる。
他の実施形態では、上記細胞毒性または免疫抑制剤は、タクロリムス、シクロスポリンまたはラパマイシンである。さらなる実施形態では、上記細胞毒性剤は、アルデスロイキン、アレンツズマブ、アリトレチノイン、アロプリノール、アルトレタミン、アミフォスチン、アナストロゾール、三酸化ヒ素、ベキサロテン、ベキサロテン、カルステロン、カペシタビン、セレコキシブ、クラドリビン、ダーベポエチンアルファ、デニロイキンジフチトクス、デクスラゾキサン、ドロモスタノロンプロピオネート、エピルビシン、エポエチンアルファ、エストラムスチン、エキセメスタン、フィルグラスチン、フロキシウリジン、フルダラビン、フルベストラント、ゲンシタビン、ゲンツズマブオゾガミシン、ゴセレリン、イダルビシン、イホスファミド、イマチニブメシレート、インターフェロンアルファ−２ａ、イリノテカン、レトロゾール、ロイコボリン、レバミソール、メクロレタミンもしくはナイトロジェンマスタード、メゲストロール、メスナ、メトトレキセート、メトキサレン、マイトマイシンＣ、ミトタン、ナンドロロンフェンプロピオネート、オプレルベキン、オキサリプラチン、パミドロネート、ペガデマーゼ、ペガスパルガーゼ、ペグフィルグラスチン、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、ポルフィマーナトリウム、プロカルバジン、キナクリン、ラスブリカーゼ、サルグラモスチン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、テモゾロミド、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、トレミフェン、トシツモマブ、トラスツズマブ、トレチノイン、ウラシルマスタード、バルルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンおよびゾレドロネートである。
さらなる実施形態では、上記医薬は、ヒト化された抗ＨＥＲ２モノクローナル抗体、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ；キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体）；ＯＶＡＲＥＸ（ＡｌｔａＲｅｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＭＡ）；ＰＡＮＯＲＥＸ（Ｇｌａｘｏ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，ＮＣ；マウスＩｇＧ２ａ抗体）；セツキシマブエルビタクス（Ｉｍｃｌｏｎｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｉｎｃ．，ＮＹ；抗ＥＧＦＲ ＩｇＧキメラ抗体）；ビタキシン（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．ＭＤ；キャンパスＩ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ，ＭＡ；ヒト化ＩｇＧ１抗体）；スマートＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ；ヒト化抗ＣＤ３３ ＩｇＧ抗体；リンホサイド（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ；ヒト化抗ＣＤ２２ ＩｇＧ抗体）；スマートＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ；ヒト化抗ＨＬＡ−ＤＲ抗体）；オンコリン（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ；放射能標識マウス抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体）；アロミュン（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，ＣＡ；ヒト化抗ＣＤ２ ｍＡｂ）；アバスチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，ＣＡ；抗ＶＥＧＦヒト化抗体）；エプラツザマブ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪおよびＡｍｇｅｎ，ＣＡ；抗ＣＤ２２抗体）；およびＣＥＡｃｉｄｅ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＮＪ；ヒト化抗ＣＥＡ抗体）などの抗体である。
他の適切な抗体としては、以下の抗原に対する抗体が挙げられるが、それらに限定されない：ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３、ＣＡ１９−９、Ｌ６、Ｌｅｗｉｓ Ｙ、Ｌｅｗｉｓ Ｘ、アルファフェトタンパク質、ＣＡ２４２、胎盤アルカリホスファターゼ、前立腺特異的膜抗原、前立腺酸性ホスファターゼ、上皮成長因子、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、抗トランスフェリン受容体、ｐ９７、ＭＵＣ１−ＫＬＨ、ＣＥＡ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ１、前立腺特異的抗原、ＩＬ−２受容体、ＣＤ２０、ＣＤ５２、ＣＤ３３、ＣＤ２２、ヒト絨毛性腺刺激ホルモン、ＣＤ３８、ＣＤ４０、ムチン、Ｐ２１、ＭＰＧ、およびＮｅｕ癌遺伝子産物。
いくつかの実施形態では、上記医薬は免疫抑制剤である。免疫抑制剤は、例えば、ガンシクロビル、エタネルセプト、タクロリムス、シクロスポリン、ラパマイシン、シクロホスファミド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチルまたはメトトレキセートとすることができる。あるいは、免疫抑制剤は、例えば、グルココルチコイド（例えば、コルチゾールまたはアルドステロン）またはグルココルチコイド類似体（例えば、プレドニゾンまたはデキサメタゾン）とすることができる。
いくつかの典型的な実施形態では、免疫抑制剤は、アリールカルボン酸誘導体、ピラゾール含有誘導体、オキシカム誘導体およびニコチン酸誘導体等の抗炎症剤である。抗炎症剤の種類としては、例えば、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、およびロイコトリエン受容体拮抗薬が挙げられる。
適切なシクロオキシゲナーゼ阻害剤としては、メクロフェナミン酸、メフェナミン酸、カルプロフェン、ジクロフェナク、ジフルニザル、フェンブフェン、フェノプロフェン、イブプロフェン、インドメタシン、ケトプロフェン、ナブメトン、ナプロキセン、スリンダク、テノキシカン、トルメチンおよびアセチルサリチル酸が挙げられる。
適切なリポキシゲナーゼ阻害剤としては、レドックス阻害剤（例えば、カテコールブタン誘導体、ノルジヒドログアイアレチン酸（ＮＤＧＡ）、マソプロコール、フェニドン、イアノパレン、インダゾリノン、ナファザトローム、ベンゾフラノール、アルキルヒドロキシルアミン）、および非レドックス阻害剤（例えば、ヒドロキチアゾール、メトキシアルキルチアゾール、ベンゾピランおよびその誘導体、メトキシテトラヒドロピラン、ボスウェリン酸およびボスウェリン酸のアセチル化誘導体、およびシクロアルキル基で置換されたキノリンメトキシフェニル酢酸）およびレドックス阻害剤の前駆体が挙げられる。
他の適切なリポゲキシゲナーゼ阻害剤としては、酸化防止剤（例えば、フェノール、没食子酸プロピル、フラボノイドおよび／またはフラボノイドを含有する天然の基質、フラボンのヒドロキシル化誘導体、フラボノール、ジヒドロクエルセチン、ルテオリン、ガランギン、オロボール、カルコンの誘導体、４，２’，４’−トリヒドロキシカルコン、オルト−アミノフェノール、Ｎ−ヒドロキシウレア、ベンゾフラノール、エブセレン、および還元セレノ酵素の活性を増加させる種）、イオンキレート剤（例えば、ヒドロキサム酸およびその誘導体、Ｎ−ヒドロキシウレア、２−ベンジル−１−ナフトール、カテコール、ヒドロキシルアミン、カルノソールトロロクスＣ、カテコール、ナフトール、スルファサラジン、ジロイトン、５−ヒドロキシアントラニル酸、および４−（オメガ−アリールアルキル）フェニルアルカン酸）、イミダゾール含有化合物（例えば、ケトコナゾールおよびイトラコナゾール）、フェノチアジン、およびベンゾピラン誘導体が挙げられる。
さらに他の適切なリポシキゲナーゼ阻害剤としては、エイコサノイドの阻害剤（例えば、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、ドコサペンタエン酸、エイコサヘキサエン酸、ドコサヘキサエン酸およびそれらのエステル、ＰＧＥ１（プロスタグランジンＥ１）、ＰＧＡ２（プロスタグランジンＡ２）、ビプロストール、１５−モノヒドロキシエイコサテトラエン酸、１５−モノヒドロキシ−エイコサトリエン酸、１５−モノヒドロキシエイコサペンタエン酸、ならびにロイコトリエンＢ５、Ｃ５およびＤ５）、カルシウム流に干渉する化合物、フェノチアジン、ジフェニルブチルアミン、ベラパミル、フスコシド、クルクミン、クロロゲン酸、カフェー酸、５，８，１１，１４−エイコサテトラエン酸（ＥＴＹＡ）、ヒドロキシフェニルレチナミド、イオナパレン、エスクリン、ジエチルカルバマジン、フェナントロリン、バイカレイン、プロキシクロミル、チオエーテル、ジアリルスルフィド、およびジ−（１−プロペニル）スルフィドが挙げられる。
ロイコトリエン受容体拮抗薬としては、カルシトリオール、オンタゾラスト、Ｂａｙｅｒ Ｂａｙ−ｘ−１００５、Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ ＣＧＳ−２５０１９Ｃ、ｅｂｓｅｌｅｎ、Ｌｅｏ Ｄｅｎｍａｒｋ ＥＴＨ−６１５、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ−２９３１１１、Ｏｎｏ ＯＮＯ−４０５７、Ｔｅｒｕｍｏ ＴＭＫ−６８８、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｌｅｈｅｉｍ ＢＩ−ＲＭ−２７０、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ ２１３０２４、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ ２６４０８６、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ ２９２７２８、Ｏｎｏ ＯＮＯ ＬＢ４５７、Ｐｆｉｚｅｒ １０５６９６、Ｐｅｒｄｕｅ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ ＰＦ １００４２、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ ＲＰ ６６１５３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ＳＢ−２０１１４６、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ＳＢ−２０１９９３、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ＳＢ−２０９２４７、Ｓｅａｒｌｅ ＳＣ−５３２２８、Ｓｕｍｉｔｏｍｏ ＳＭ １５１７８、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｏｍｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ＷＡＹ １２１００６、Ｂａｙｅｒ Ｂａｙ−ｏ−８２７６、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ ＣＩ−９８７、Ｗａｒｎｅｒ−Ｌａｍｂｅｒｔ ＣＩ−９８７ＢＰＣ−１５ＬＹ ２２３９８２、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ ２３３５６９、Ｌｉｌｌｙ ＬＹ−２５５２８３、ＭａｃｒｏＮｅｘ ＭＮＸ−１６０、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．ＭＫ−５９１、Ｍｅｒｃｋ ａｎｄ Ｃｏ．ＭＫ−８８６、Ｏｎｅ ＯＮＯ−ＬＢ−４４８、Ｐｕｒｄｕｅ Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ ＰＦ−５９０１、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ ＲＧ １４８９３、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ ＲＰ ６６３６４、Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ ＲＰ ６９６９８、Ｓｉｏｎｏｏｇｉ Ｓ−２４７４、Ｓｅａｒｌｅ ＳＣ−４１９３０、Ｓｅａｒｌｅ ＳＣ−５０５０５、Ｓｅａｒｌｅ ＳＣ−５１１４６、Ｓｅａｒｌｅ ＳＣ−５２７９８、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍ ＳＫａｎｄＦ−１０４４９３、Ｌｅｏ Ｄｅｎｍａｒｋ ＳＲ−２５６６、Ｔａｎａｂｅ Ｔ−７５７、およびＴｅｉｊｉｎ ＴＥＩ−１３３８が挙げられる。
本発明を下記の実施例においてさらに説明するが、これらの実施例は本発明の範囲を限定するものではない。下記の実施例に記載の細胞系は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）またはＤｅｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ ＧｍｂＨ，Ｂｒａｕｎｓｃｈｗｅｉｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ（ＤＭＳＺ）に規定された条件に従った培養で維持した。細胞培養試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得た。
（実施例１．キメラ抗ＣＤ７０抗体の構築）
１Ｆ６および２Ｆ２ ｍＡｂの軽鎖（ＶＬ）および重鎖（ＶＨ）可変領域をコードするｃＤＮＡ配列を決定するために、ＴＲＩｚｏｌ（商標登録）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を製造者の使用説明書に従って用いて、１Ｆ６および２Ｆ２ハイブリドーマから全ＲＮＡを単離した。遺伝子に特異的なプライマーｍＩｇｃＫ１：５’−ＣＴＴ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＡＣ ＡＴＴ ＧＡＴ ＧＴＣ ＴＴＴ Ｇ−３’（配列番号４１）およびプライマーｍＩｇＧ１：５’−ＣＡＧ ＧＴＣ ＡＣＴ ＧＴＣ ＡＣＴ ＧＧＣ ＴＣＡ Ｇ−３’（配列番号４２）を適用して、両ＲＮＡ調製物からの軽鎖可変（ＶＬ）および重鎖可変（ＶＨ）の第一鎖ｃＤＮＡをそれぞれ逆転写した。第一鎖ｃＤＮＡ反応は、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（商標登録）Ｆｉｓｔ Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｈｔｅｓｉｓ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ＲＴ−ＰＣＲを用いて実施した。次いで、末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）および供給されたＴｄＴ緩衝液を製造者（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）により規定された条件に従って用いて、ＶＬおよびＶＨｃＤＮＡをｐｏｌｙ−Ｇ末端付加した。次いで、Ｐｏｌｙ−Ｇ末端付加ＶＬおよびＶＨ第一鎖ｃＤＮＡをＰＣＲ増幅に供した。ＶＬおよびＶＨの両方のＰＣＲ用のフォワードプライマーは、ＡＮＣＴＡＩＬ：５’ＧＴＣ ＧＡＴ ＧＡＧ ＣＴＣ ＴＡＧ ＡＡＴ ＴＣＧ ＴＧＣ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＣＣ ＣＣＣ Ｃ−３’（配列番号４３）であった。ＶＬを増幅するためのリバースプライマーは、ＨＢＳ−ｍｃｋ：５’−ＣＧＴ ＣＡＴ ＧＴＣ ＧＡＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＡＡＧ ＣＴＴ ＣＡＡ ＧＡＡ ＧＣＡ ＣＡＣ ＧＡＣ ＴＧＡ ＧＧＣ ＡＣ−３’（配列番号４４）であった。ＶＨを増幅するためのリバースプライマーは、ＨＢＳ−ｍＧ１：５’−ＣＧＴ ＣＡＴ ＧＴＣ ＧＡＣ ＧＧＡ ＴＣＣ ＡＡＧ ＣＴＴ ＧＴＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＴＴＡ ＧＴＴ ＴＧＧ ＧＣ−３’（配列番号４５）であった。Ｅｘ Ｔａｑおよび提供された反応緩衝液を製造者（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）により指定された条件で用いて、ＰＣＲを実施した。次いで、ＶＬおよびＶＨＰＣＲ産物をＨｉｎｄＩＩＩおよびＥｃｏＲＩにより切断し、ＨｉｎｄＩＩＩ／ＥｃｏＲＩ切断ｐＵＣ１９にクローニングした。組換えプラスミドクローンを同定し、１Ｆ６と２Ｆ２ハイブリドーマのヌクレオチド配列を決定した。
１Ｆ６および２Ｆ２ ｍＡｂの重鎖および軽鎖中の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、Ｋａｂａｔら，１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ ＤＣ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−１７（図１および図２）に記載の基準に従って決定した。ｃＤＮＡおよびアミノ酸の両方のレベルの配列アライメントでは、密接に関係する軽鎖遺伝子がおそらく両ハイブリドーマで利用されていることが明らかになった。アミノ酸レベルでは１Ｆ６ＶＬと２Ｆ２ＶＬの間に９２％の配列同一性がある。ＣＤＲの配列比較では、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｌ１が２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｌ１と同一であり、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｌ２と２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｌ２の間では非保存的（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）置換わずかに１つによってだけ異なり、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｌ３と２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｌ３の間では保存的置換わずかに２つだけによって異なることが示されている（図３）。一方、１Ｆ６ ＶＨと２Ｆ２ ＶＨの間には高度の配列多様性が存在し；これら２つのＶＨ間では、１３７個のアミノ酸残基のうち約６６個が異なる。ＣＤＲの配列比較において、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｈ１と２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｈ１の間では、１０個のアミノ残基のうち５個が異なり（５個の置換のうち３個が非保存的（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）置換である）、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｈ２と２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｈ２の間では、１７個の残基のうち１２個が異なり（１２個の置換のうち９個が非保存的（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）置換である）、１Ｆ６ ＣＤＲ−Ｈ３と２Ｆ２ ＣＤＲ−Ｈ３の間では、９個の残基のうち５個が異なる（５個の置換のうち４個が非保存的（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）置換である）ことが示されている（図３）。
キメラ１Ｆ６重鎖および軽鎖の両方を含有する発現ベクターが、下記に記載のとおり構築された。このベクターでは、各ポリペプチド鎖が、関連するＣＨＥＦ１イントロン配列および免疫グロブリンポリＡ領域とともに、ＣＨＥＦ１プロモータのコピーの制御下にある。この大きなベクターの構築のために、各々が最終構築物の一部をコードする個別の「キメラ化」プラスミドにおいてキメラ化重鎖および軽鎖配列を作製する必要があった。次いで、最終的な発現構築物を、必要な制御領域の残りをコードする第３のベクターとの３方向連結反応により作製した。このプラスミドを用いてＤＧ４４ ＣＨＯ細胞を形質転換し、良好に産生を行なうクローン系を単離した。
（重鎖キメラ化ベクターの構築）
ＣＨＥＦ１ベクターのＮｏｔＩ−ＸｈｏＩフラグメント６ｋｂをＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターにクローニングすることにより、キメラ化ベクター（ｐＳＧ８５０）を予め構築した。このフラグメントは、ＣＨＥＦ１ ５’イントロンの一部、キメラＩｇＧ１抗体重鎖、およびポリＡシグナルを含むヒトのＩｇＧ４定常領域のすぐ下流側の領域のゲノム配列の一部を含む。重鎖可変領域と１Ｆ６とを置換することにより、キメラ１Ｆ６配列を有するプラスミドが生じた。この構築物を調製するために、１Ｆ６重鎖可変領域配列全体を、シークエンシングベクターからのＰＣＲを介して増幅した。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、コンセンサスＫｏｚａｃ配列５’から重鎖リーダーのコード配列、およびリーダー配列と相同な配列をコードするフォワードオリゴヌクレオチドプライマー５’−ＡＴＡ ＡＡＴ ＡＡＧ ＣＴＴ ＡＣＣ ＧＣＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＣＴ ＴＧＧ ＧＴＧ ＴＧＧ ＡＣＣ ＴＴＧ−３’（配列番号４６）を用いた。リバースプライマー５’−ＡＴＡ ＡＡＧ ＧＣＴ ＡＧＣ ＴＧＡ ＧＧＡ ＧＡＣ ＧＧＴ ＧＡＣ ＴＧＡ ＧＧＴ−３’（配列番号４７）は、可変領域の３’末端と相同な配列およびＮｈｅＩ制限部位をコードした。ＰＣＲ産物をＨｉｎｄＩＩＩおよびＮｈｅＩで消化した。ｐＳＧ８５０ベクターを同じ酵素で消化して既存の可変領域を除去し、大きいほうのベクターフラグメントを単離した。１Ｆ６ ＶＨおよびｐＳＧ８５０ベクターフラグメントを連結反応させて、キメラ１Ｆ６重鎖を含むｐＪＣ１４０を構築した。
（軽鎖キメラ化ベクターの構築）
ＣＨＥＦ１ベクターのＸｈｏＩ−ＸｂａＩフラグメント４ｋｂをＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔベクターにクローニングすることにより、キメラ化ベクター（ｐＳＧ８５５）を予め構築した。このフラグメントは、ヒトＩｇＧ４の下流領域の一部、ＣＨＥＦ１プロモータ領域、ＣＨＥＦ１ ５’イントロン、キメラ抗体カッパ軽鎖、およびポリＡシグナルを含むヒトカッパ下流領域を含む。既存の軽鎖可変領域と１Ｆ６とを置換することにより、キメラ１Ｆ６カッパ配列を有するプラスミドが生じた。この構築物を調製するために、１Ｆ６軽鎖可変領域配列全体を、シークエンシングベクターからのＰＣＲを介して増幅した。ＨｉｎｄＩＩＩ制限部位、コンセンサスＫｏｚａｃ配列５’から軽鎖リーダーのコード配列、およびリーダー配列と相同な配列をコードするフォワードオリゴヌクレオチドプライマー５’−ＡＴＡ ＡＡＧ ＡＡＧ ＣＴＴ ＡＣＣ ＧＣＣ ＡＣＣ ＡＴＧ ＧＡＧ ＡＣＡ ＧＡＣ ＡＣＡ ＣＴＣ ＣＴＧ−３’（配列番号４８）を用いた。リバースプライマー５’−ＡＴＡ ＡＡＧ ＧＡＡ ＧＡＣ ＡＧＡ ＴＧＧ ＴＧＣ ＡＧＣ ＣＡＣ ＡＧＴ ＣＣＧ ＴＴＴ ＧＡＴ ＴＴＣ ＣＡＧ ＣＴＴ ＧＧＴ ＧＣＣ−３’（配列番号４９）は、ＢｂｓＩ制限部位を含む、軽鎖可変領域の最後の２４塩基対およびカッパ定常領域の最初の２４塩基対と相補的な配列をコードした。ＰＣＲ産物を、ＨｉｎｄＩＩＩおよびＢｂｓＩで消化した。ｐＳＧ８５５ベクターを同じ酵素で消化して既存の可変領域を切り取り、大きいほうのベクターフラグメントを単離した。１Ｆ６ ＶＨおよびｐＳＧ８５５ベクターフラグメントを連結反応させて、キメラ１Ｆ６軽鎖を含むｐＪＣ１６０を構築した。
（ｃ１Ｆ６発現ベクターのアセンブリ）
キメラ１Ｆ６抗体の両方の鎖を有する発現ベクターを３方向連結反応によりアセンブリした。ＣＨＥＦ１発現ベクターｐＤＥＦ１４をＮｏｔＩおよびＸｂａＩで消化し、１９．７ｋｂのベクターフラグメントを単離した。ｐＪＣ１４０をＮｏｔＩおよびＸｈｏＩで消化し、６キロベースのフラグメントを単離した。ｐＪＣ１６０をＸｈｏＩおよびＸｂａＩで消化し、４キロベースのフラグメントを単離した。これら３つのフラグメントを連結反応において１：１：１のモル比で混合し、その連結反応産物を用いてＸＬ１０−Ｇｏｌｄ細胞を形質転換した。制限マッピングによりクローンをスクリーニングし、重鎖および軽鎖コード領域のシークエンシングにより正確なクローンを確認した。図４は、最終産物のプラスミドマップを示す。
（ｐＤＥＦ１４−１Ｆ６を用いたＤＧ４４細胞のトランスフェクション）
２００μｇのｐＤＥＦ１４−１Ｆ６プラスミドＤＮＡをＰｖｕＩを用いて３７℃で一晩線状化し、次いで、超音波分解した鮭の精子ＤＮＡ（Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ Ｍｅｄｉａ ｃａｔ＃Ｓ−００５−Ｇ Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ、ＮＪ）を１００μｇ加えたのちエタノール析出した。そのＤＮＡを、３５０μｌの滅菌ｄＨ２Ｏおよび４５０のμｌの２Ｘ ＨｅＢＳ（４０ｍＭのＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ ｐＨ ７．０、２７４ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのＫＣｌ、１．４ｍＭのＮａ２ＨＰＯ４、および１２ｍＭのブドウ糖）中で再懸濁した。
ＤＧ４４チャイニーズハムスター卵巣細胞を、予め無血清懸濁に適合させた一層の細胞から得た。振盪フラスコ内で、非選択性培地（組み換えヒトインスリン、Ｌ−グルタミン、ヒポキサンチンおよびチミジンを補った無血清Ｅｘｃｅｌｌ３２５（ＪＲＨ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｎｅｘａ，ＫＳ）においておよそ１×１０６細胞／ｍｌの密度になるまでＤＧ４４を培養した。１５ｍｌの滅菌チューブ内で遠心分離により２×１０７個の細胞を集め、ＣＭＦ−ＰＢＳで洗浄して再ペレット化した。洗浄したＤＧ４４細胞をＤＮＡ溶液で再懸濁し、ＢｉｏＲａｄ ＧｅｎｅＰｕｌｓｅｒ ＩＩエレクトロポレーター（９６０μＦ、２９０ボルト、時定数９〜１１ミリ秒）（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）で一度パルスを印加した。これらの細胞は、８〜１０分間室温で回収できた。次いで、上記非選択性無血清培地１０ｍｌに細胞を加え、固定したＴ７５フラスコに移し、２日間、３７℃、５％ＣＯ２で回収できた。次いで、トランスフェクションプールを低速で遠心分離し、選択性培地（ヒポキサンチンおよびチミジンを含まないこと以外は上記の培地と同じ；Ｅｘｃｅｌｌ３２５ＳＥＬを示す）で再懸濁し、培養物の生存率が＞９０％になるまで継代した。このトランスフェクションプールをフェッドバッチ培養することにより、マウス１Ｆ６ Ａｂと同程度の特異性を有するｃＡｂを生じた。
（ｃ１Ｆ６トランスフェクションプールのサブクローニング）
フィーダー細胞法を用いて、ｃ１Ｆ６トランスフェクションプール細胞を、（ヒポキサンチンまたはチミジンを含まない）Ｅｘｃｅｌｌ３２５ＳＥＬ中において１：２０００の割合でＤＧ４４細胞と混合し、１０００細胞／ウェルの密度で４つの９６ウェルプレートに入れた。これにより、１ウェル当たり１０００個のＤＧ４４フィーダー細胞とともに、１ウェル当たり０．５個という効果的な密度でｃ１Ｆ６細胞を得た。ＤＧ４４細胞は、それらのＨＴに対する要件のために、２、３日後に絶滅した。同じ条件下において１０，０００細胞／ウェルでプレートに入れたＤＧ４４細胞は、生存が確認されなかった。これら２つのプレートにより、単一コロニーが増殖した３４個のウェルを生じた。この３４個のクローンウェルを２４のウェルプレートまで拡大し、それらのウェルで絶滅した培養上清のｃＡｂ滴定濃度について、標準的な抗キメラ抗体ＥＬＩＳＡでスクリーニングした。振盪フラスコフェッドバッチ培養を介したさらなるスクリーニングのために、滴定濃度および成長度に基づいて６個のサブクローンを選択した。これらのクローンのうちの１つは、最終的なフェッドバッチ滴定濃度が１．１ｇ／ｌで、１日につき細胞１つあたりおよそ２０ピコグラムの細胞特異的生産性を示した。
（実施例２：キメラ１Ｆ６は、ＣＤ７０＋腫瘍細胞系に対してＡＤＣＣを仲介する。）
ＣＤ７０＋細胞系ＷＩＬ２−Ｓ、Ｃａｋｉ−１および７８６−Ｏに対するｃ１Ｆ６のＡＤＣＣ仲介能力を、標準的な５１Ｃｒ放出アッセイを用いて測定した。腫瘍細胞を１００μＣｉ Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４を用いて１時間標識し、完全に洗浄して、組み込まれていない放射性同位元素を除去し、次いで、５，０００細胞／ウェルの濃度で９６ウェルプレートに入れた。抗体ｃ１Ｆ６、ｍ１Ｆ６またはヒトＩｇを、エフェクターＰＢＭＣを加える前に、１μｇ／ｍｌの最終濃度で適切なウェルに０．５時間加えた。ＰＢＭＣを調整して、３０個のＣＤ１６＋細胞：１個の標的細胞というエフェクター細胞と標的細胞の割合を反映させた。４時間の培養後、溶解細胞から放出された５１Ｃｒを測定し、｛（テストサンプルｃｐｍ−自然発生的なｃｐｍ）÷（総ｃｐｍ−自然発生的なｃｐｍ）｝×１００で特異的溶解率を算出した。同位元素の自然発生的な放出について、培地のみで培養した標的細胞の浮遊物から判定した。２％ｔｒｉｔｏｎ−Ｘで溶解した標的細胞から総数を判定した。図５に示すように、ｃ１Ｆ６が各腫瘍標的の溶解を効果的に誘導する一方、ＣＤ７０結合マウス１Ｆ６（ｍ１Ｆ６）または非結合コントロールヒトＩｇ（ｈＩｇ）で処理した腫瘍細胞への影響は少なかった。抗体がない場合のＮＫ感受性標的Ｋ５６２の溶解では、ＰＢＭＣ内に細胞傷害能を有するエフェクター細胞が存在することが確認された。
（実施例３：複数のドナーのＰＢＭＣにより認識されたキメラ１Ｆ６被覆標的細胞）
Ｃａｋｉ−１腎細胞癌腫細胞をＮａ２ ５１ＣｒＯ４で標識し、段階的な量のｃ１Ｆ６で処理し、次いで、２人の正常なドナーのエフェクターＰＢＭＣで培養した。特異的溶解を、実施例２で説明したように４時間の培養後に評価した。ドナー２０５１６６１およびＮＤ０１６は、１または０．１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理したＣａｋｉ−１標的細胞を効率よく溶解した（図６）。その後、特異的溶解が抗体用量に依存して減少し、標的細胞を０．００１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理したときにはごく少量でしかなかった。非結合コントロールＩｇ（ｈＩｇ）と混合した標的細胞は、いずれのドナーのＰＢＭＣでも溶解しなかった。
（実施例４：キメラ１Ｆ６被覆リンパ細胞系はＰＢＭＣによる溶解の影響を受けやすい。）
ＢおよびＴ細胞系の形質転換細胞もｃ１Ｆ６仲介ＡＤＣＣ活性の影響を受けやすいか否かを判定するために、上記のように、ＣＤ７０＋Ｂリンパ芽球様細胞（ＷＩＬ２−Ｓ）および皮膚Ｔ細胞性リンパ腫細胞（ＨＨ）をＮａ２ ５１ＣｒＯ４で標識し、次いで、種々の濃度でｃ１Ｆ６またはヒトＩｇと混合した。ＰＢＭＣを１８：１（ＣＤ１６＋細胞：標的）の割合で標的細胞に加え、実施例２で説明したように４時間の培養後に溶解率を判定した。図７は、ｃ１Ｆ６の存在下でＷＩＬ２−ＳおよびＨＨの両方がＰＢＭＣエフェクター細胞により認識および溶解されることを示す。標的細胞を非結合コントロール抗体で処理することにより生じる細胞溶解は少なかったが、ＷＩＬ２−ＳおよびＨＨ細胞を１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理した場合、それぞれ４３．５％および３７．５％の標的細胞が死んだ。
多発性骨髄腫細胞系Ｌ−３６３、ＪＪＮ−３、ＬＰ−１およびＵ−２６６のＣＤ７０の発現について、フローサイメトリーでテストした。図８Ａに示すように、それぞれのＣＤ７０については、容易に検出された。これら多発性骨髄腫細胞系のキメラ１Ｆ６仲介ＡＤＣＣに対する感受性を実施例２で説明したように判定した。１または０．１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理した標的細胞を効率よく溶解した（図８Ｂ）。その後、特異的溶解が抗体用量に依存して減少し、標的細胞を０．００１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理したときにはごく少量でしかなかった。非結合コントロールＩｇ（ｈＩｇ）と混合した標的細胞は溶解しなかった。エフェクター細胞を抗ＣＤ１６抗体で前培養してＦｃγＲＩＩＩをブロックすることによりＡＤＣＣ活性がなくなり、溶解活性がＦｃＲを有するエフェクター細胞と抗体の相互作用に依存することが確認された。ＣＤ７０＋ホジキン病細胞系を標的として用いた場合にも同様の用量依存キメラ１Ｆ６仲介ＡＤＣＣが観察された（図９）。
（実施例５：抗原特異的インビトロ免疫応答時の活性化Ｔ細胞上でのＣＤ７０の発現）
インフルエンザウイルスマトリックスタンパク質に由来する９アミノ酸ペプチド（ＧＩＬＧＦＶＦＴＬ、Ｍ１ペプチド（配列番号５０））は、ＨＬＡ−Ａ０２０１分子のペプチド結合溝に結合する。ＨＬＡ−Ａ０２０１を発現する抗原提示細胞によりＭ１ペプチドを同原Ｔ細胞に提示することで、Ｔ細胞受容体Ｖβ１７鎖を発現するＣＤ８＋細胞毒性Ｔ細胞の活性化および拡大を特異的に促進させ（Ｌｅｈｎｅｒら，１９９５，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８１：７９−９１）、抗原に特異的なＴ細胞の活性化および拡大について、それらの母性抗原まで追跡する有用なインビトロ実験系を構築する。
活性化抗原特異的Ｔ細胞上でのＣＤ７０の発現を調べるために、ＨＬＡ−Ａ０２０１を発現する正常なドナーのＰＢＭＣを、Ｍ１ペプチドを用いて刺激した。２×１０６細胞／ｍｌにて、５μｇ／ｍｌのＭ１ペプチドとともに、５％のヒトＡＢ血清を補ったＡＩＭＶ培地にＰＢＭＣを播種した。ＩＬ−２（Ｐｒｏｌｅｕｋｉｎ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）およびＩＬ−１５（Ｒ ａｎｄ Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を、それぞれ、２０ＩＵ／ｍｌおよび５ｎｇ／ｍｌの最終濃度で、培養の開始後２日目から２日に１回の割合で添加した。ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋Ｔ細胞の拡大およびＣＤ８＋／Ｖβ１７＋上でのＣＤ７０の誘導に続いて、三色フローサイトメトリーを行った。Ｖβ１７＋Ｔ細胞を、抗ＴＣＲＶβ１７ ｍＡｂクローンＥ１７．５Ｆ３（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｍｉａｍｉ，ＦＬ）により同定した。培養開始の２日後には、ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋は、リンパ球集団内の細胞のうちわずか０．９％でしかないという結果が示された。Ｔ細胞の拡大は、ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋集団内でのみ顕著であった。ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋の割合は、５日目に１．９％、７日目に１４％、１１日目に２３％というように漸進的に増加した。ＣＤ７０の拡大は、抗原刺激の３日後に検出可能になり、７日目には、拡大ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋細胞のおよそ６０％に増加した（図１０Ａ）。また、平均蛍光強度（ＭＦＩ）により示されるＣＤ７０の最大発現量も７日目に検出された（図１０Ｂ）。その後、ＣＤ７０＋／ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋細胞の割合およびＣＤ８＋／Ｖβ１７＋上でのＣＤ７０発現のＭＦＩは減少し始めた。ＣＤ７０は、ＣＤ８＋／Ｖβ１７＋細胞上で明らかに発現した一方、ＣＤ８＋／Ｖβ１７−細胞上ではＣＤ７０を検出することはできなかった。これらの結果から、ＣＤ７０は、抗原刺激に応答する活性化Ｔ細胞上で誘導され、バイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）である抗原非特異的なＴ細胞上では誘導されないことが確認された。
（実施例６：ｃ１Ｆ６によるＣＤ７０＋抗原特異的Ｔ細胞のインビトロ欠失）
抗原特異的活性化Ｔ細胞を低減させる能力についてｃ１Ｆ６をテストするために、抗ＣＤ７０抗体が存在または存在しない状態で、ＨＬＡ−Ａ０２０１を発現する正常なドナーのＰＢＭＣをＭ１ペプチドを用いて刺激した。上述したように、２４ウェルプレート内において、０．５×１０６細胞／ｍｌの濃度で、５μｇ／ｍｌのＭ１ペプチドとともに、ＩＬ−２およびＩＬ−１５を補った２ｍｌの培地にＰＢＭＣを播種した。培養の開始時、および培養の開始後２日目および５日目に、非結合免疫グロブリン、マウス１Ｆ６（ｍ１Ｆ６）またはキメラ１Ｆ６（ｃ１Ｆ６）抗体を１μｇ／ｍｌの濃度で加えた。５日目に、使用した培養上清の半分を新鮮なサイトカイン含有培地と取り替えた。９日目に、ＦＩＴＣ結合体化抗Ｖβｌ７抗体およびＰＥ−Ｃｙ５結合体化抗ＣＤ８抗体で染色した細胞のフローサイトメトリー分析により、抗原反応性細胞（ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋集団）の割合を判定した。０日目および５日目に、さらに、０．２５×１０６のＣＤ１６＋細胞濃縮ＰＢＭＣを細胞培養のいくつかに加えた。ＣＤ１６＋細胞の濃縮のために、ＰＢＭＣを抗ＣＤ８、抗ＣＤ４、抗ＣＤ２０、および抗ＣＤ１４抗体で標識することにより、Ｔ細胞、Ｂ細胞および単球を低減させ、その後に免疫遺伝ビーズ選択を行なった。観察期間中、抗原特異的ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞は、抗体がない培養物中の全ての生存細胞の４７．２％を占めるまで拡大した。同様に、ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞は、それぞれ、非結合抗体およびマウス抗ＣＤ７０抗体で処理した培養物に存在する全ての細胞の４８．３％および３８．５％に相当した。対照的に、キメラ抗ＣＤ７０抗体で処理した培養物では、ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋の拡大が実質的に阻害されていることが観察された（１２．５％）。抗原反応性細胞の低減は、ＣＤ１６＋エフェクター細胞が培養物に加えられた場合にはより顕著であった。ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞は、未処理の培養物中では３２．６％、無関係な抗体およびｍ１Ｆ６抗体で処理した細胞内では、それぞれ、２２．４％または２２．９％であったのに対して、ｃ１Ｆ６で処理した培養物中では、全ての細胞のわずか１．５％でしかなかった。これらの結果により、ｃ１Ｆ６は、抗原活性化Ｔ細胞を選択的に標的にし、その拡大を防ぐことが分かる。
（実施例７：抗原特異的ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞の低下に関する抗ＣＤ７０の用量応答比較）
ｃ１Ｆ６が抗原活性化Ｔ細胞の拡大を妨げる能力を確認し、さらにこの応答の抗体依存性を評価するために、第２の観察として、段階的な量のｃ１Ｆ６の存在下で、Ｍ１ペプチドで刺激したＰＢＭＣを発生させた（図１１）。９日目に未処理の培養物から回収した抗原特異的ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞は、全ての生存細胞の５６％に相当した。対照的に、０日目に培養物にｃ１Ｆ６を加えた場合、用量依存的に抗原反応性集団の拡大を著しく制限した。ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞は、１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌおよび０．０１μｇ／ｍｌのｃ１Ｆ６で処理した培養物中の全ての細胞において、それぞれ、７．８％、５．８％、および１６．９％を占めた。０．００１μｇ／ｍｌの濃度で加えたｃ１Ｆ６抗体は、ＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞の拡大を妨げなかった。
（実施例８．キメラ１Ｆ６はＣＤ７０＋ＢおよびＴ細胞において補体依存性細胞毒性作用を仲介する。）
ｃ１Ｆ６が補体依存性細胞毒性作用を仲介する能力を、ＣＤ７０＋ＢおよびＴ細胞を用いて調べた。これらの実験では、熱活性化していない正常なヒトの血清を補体源として用いた。正常なヒト血清の存在下で、段階的な量のｃ１Ｆ６または非結合ヒトＩｇＧコントロールを用いて標的細胞を処理した。３７℃で２時間培養した後、ヨウ化プロピジウムを５μｇ／ｍｌの最終濃度まで加えた。次いで、細胞調製物をフローサイメトリーによって調べた。ヨウ化プロピジウムで染色した細胞は、抗体が仲介した補体活性化および膜付着複合体の形成の結果、原形質膜完全性を失った（細胞溶解）と見なした。自然発生的な背景溶解を、抗体が仲介した細胞溶解から取り除き、特異的細胞溶解を生じた。このアッセイを用いた場合、ｃ１Ｆ６は、いくつかのＣＤ７０＋Ｂ細胞標的の用量依存的溶解を仲介した（図１２）。これらの標的は、リンパ芽球性非ホジキンリンパ腫系（ＭＨＨ−ＰＲＥＢ−１）、ＥＢＶバーキット性リンパ腫系（ＭＣ１１６）、およびＥＢＶ＋リンパ芽球様Ｂ細胞系（ＷＩＬ２−Ｓ）を含んでいた。ＭＨＨ−ＰＲＥＢ−１およびＷＩＬ２−Ｓの両方について、最大特異的溶解は＞５０％であった。ＭＣ１１６の特異的溶解は、用いたｃ１Ｆ６の最大濃度で概ね１５％であった。
２つのＣＤ７０＋Ｔ細胞標的の感度についても調べた。ＨＨは、ＣＤ７０を構成的に発現する皮膚Ｔ細胞性リンパ腫細胞系である。Ｃ９Ｄは、培養において維持、増殖される正常なＴ細胞系である。１：１のＣＥＳＳ：Ｔ細胞比で、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ、２μｇ／ｍｌ）、ＩＬ−２（１００ＩＵ／ｍｌのＰｒｏｌｅｕｋｉｎ（登録商標）（アルデスロイキン）Ｃｈｉｒｏｎ，Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ，ＣＡ）、および照射ＣＥＳＳ細胞（ＡＴＣＣ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）を用いて休止Ｃ９Ｄを刺激することにより、誘導可能なＣＤ７０の表面発現を伴う細胞活性化／拡大周期を開始する。上述したように、正常なヒトの血清の存在下で、ｃ１Ｆ６またはコントロールＩｇＧを用いてＨＨおよびＣＤ７０＋Ｃ９Ｄ細胞を培養した。ヨウ化プロピジウム浸透性およびフローサイメトリーにより細胞溶解を評価した（図１３）。両方の標的において用量依存的に細胞溶解が検出され、ｃ１Ｆ６がＣＤ７０＋Ｔ細胞標的上のＣＤＣも仲介することが示された。
（実施例９：キメラ１Ｆ６はＣＤ７０＋腫瘍細胞系に対するＡＤＣＰを仲介する。）
ＣＤ７０＋ＷＩＬ２−Ｓ細胞および単球由来のマクロファージを食作用細胞源として用いて、ｃ１Ｆ６が抗体依存性細胞食作用を仲介する能力について調べた。マクロファージを生成するために、ＰＢＭＣの単球を、１％のヒト血清を含有する培地において、組織培養フラスコにおよそ１時間付着させた。非付着性細胞をデカントし、残りの付着性細胞を、５００ユニット／ｍＬのｒｈＧＭ−ＣＳＦを補った無血清Ｘ−ＶＩＶＯ培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）で１１〜１４日間培養させた。マクロファージは、＞７５％の生存率であり、ＣＤ３−／ＣＤ１４＋／ＣＤ１１ｂ＋であり、ＦｃγＲＩ、ＩＩおよびＩＩＩを発現した。ｃ１Ｆ６仲介ＡＤＣＰを検出するために、８×１０５個のＷＩＬ２−Ｓ標的細胞を、製造者の取り決めに従って、緑色蛍光細胞膜染料ＰＫＨ６７（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏｒｐ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で染色した。次いで、これらの細胞を、ＰＢＳ中の２ｕｇ／ｍＬのｃ１Ｆ６を用いて３０分間氷上で前培養し、ＰＢＳを用いて一度洗浄して余分な抗体を取り除いた。１０％のＵｌｔｒａ Ｌｏｗ ＩｇＧ ＦＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｃｏｒｐ．）を補ったＲＰＭＩ１６４０培地中で１個のマクロファージ細胞につき４個の標的細胞の最終比で、９６ウェルＵ底マイクロタイタープレートの２×１０５個のマクロファージと標的細胞を組み合わせた。５％ＣＯ２加湿インキュベータにおいて、３７℃で２時間培養した後、細胞混合物をＰＥ結合体化マウス抗ＣＤ１１ｂ抗体で標識してマクロファージを表面標識した。これらの細胞をＰＢＳで一度洗浄し、ＰＢＳ中の１％パラホルムアルデヒドで固定し、フローサイメトリーにより分析することにより二重蛍光を食作用活性の測定値として検出した。蛍光顕微鏡検査法のために、ＣＤ１１ｂ＋細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）でさらに標識し、赤色蛍光シグナルを増強させた。図１４Ａに示すように、標的がｃ１Ｆ６で被覆された場合には、７９％のマクロファージがＷＩＬ２−Ｓ標的細胞を貪食した。対照的に、非結合Ｉｇコントロール抗体で処理したＷＩＬ２−Ｓ細胞と混合したマクロファージでは、食作用の制限が観察された（１２．８％）。食作用を示す二重蛍光染色は、標的細胞の摂取によるものであり、蛍光顕微鏡検査により判定されるような結合形成によるものではなかった。緑色ＷＩＬ２−Ｓ細胞物質については、膜が赤色に染色されたマクロファージ内に局在することが明らかに示された。非結合Ｉｇで処理したＷＩＬ２−Ｓ細胞については、赤色に染色されたマクロファージとは個別に離れて存在することが分かった。食作用活性は、抗体に用量特異的に依存していた（図１４Ｂ）。さらなる検査により、異なる癌種に由来するＣＤ７０＋形質転換細胞系は全てキメラ１Ｆ６仲介ＡＤＣＰに対して敏感であることが明らかになった（図１５）。
（実施例１０：ｃ１Ｆ６のインビボ抗腫瘍活性）
ＣＤ７０陽性バーキット性リンパ腫系ＲａｊｉおよびＥＢＶ形質転換リンパ芽球様細胞系ＩＭ−９をＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ）から得た。ＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）中で細胞を成長させ、１０％ウシ胎仔血清を補った。播種性疾患を確立するために、０．２ｍｌ ＰＢＳで洗浄し、再懸濁した１×１０６個のＲａｊｉまたはＩＭ−９細胞をＣ．Ｂ．−１７ ＳＣＩＤマウス（Ｈａｒｌａｎ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ）の尾側静脈に注射した。注射後、全てのマウスをプールし、次いで、ランダムに各種の処置群に入れた。尾側静脈への静脈注射による細胞移植の１日後に、１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇのｃ１Ｆ６、または４ｍｇ／ｋｇのコントロールＩｇＧを単一用量与えた。マウスの重量を測定し、少なくとも週に１度病気の徴候について評価した。マウスが以下のうち１つ以上を特徴とする発病発症の徴候を示したときに、実験装置から取り除き、屠殺した：０日目の体重から１５〜２０％の体重減少、猫背、昏睡、頭蓋腫脹、または脱水症。Ｒａｊｉモデルでは、未処置およびコントロールＩｇＧで処置した群の平均生存期間は、それぞれ、２１日および２４日であった。キメラ１Ｆ６は用量依存的に生存期間を延長し、１ｍｇ／ｋｇおよび４ｍｇ／ｋｇのキメラ１Ｆ６で処置した群の平均生存期間は、それぞれ、３１日および７２日であった（図１６）。ＩＭ−９モデルでも同様の生存期間の増加が観察された。未処置またはコントロールＩｇＧを用いて処置しない場合の平均生存期間は、それぞれ、３５日および２８日であった。１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇのｃ１Ｆ６を用いて処置することにより、平均生存期間が、それぞれ、５３日および＞１００日増加した（図１６）。両方のモデルでは、図１６に示すようなログランクテストに基づいて、生存期間の増加が統計的に有意であることが分かった。
（実施例１１：抗ＣＤ７０抗体の投与による実験的アレルギー性脳脊髄炎の処置）
例えば、自己免疫脱髄疾病を含む細胞仲介自己免疫病におけるＴｈ１仲介免疫応答を増強する際のＣＤ７０／ＣＤ２７仲介Ｔ細胞−Ｔ細胞相互作用の役割を研究で示す。この実施例では、実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）（脱髄病多発性硬化症（ＭＳ）の動物モデル）を、ヒトＣＤ７０の１Ｆ６エピトープに対応するマウスＣＤ７０のエピトープを認識するキメラまたはヒト化抗ＣＤ７０抗体で処置する。
実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の誘発および臨床的評価：２００μｇの結核菌Ｈ３７Ｒａおよび４０μｇのプロテオリピドタンパク質の免疫優先エピトープＰＬＰ１３９−１５１を含む１００μｌの完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）エマルジョンによる皮下免疫により、６〜７週齢のメスＳＪＬマウスにＲ−ＥＡＥ（再発性ＥＡＥ）を誘発させる。ＥＡＥの徴候は下記のように０〜５段階で採点する：（０）正常；（１）弱々しい尾または後肢の虚弱；（２）弱々しい尾および後肢の虚弱（よたよた歩き）；（３）部分的な後肢の麻痺；（４）完全な後肢の麻痺；および（５）死にかけている。再発とは、動物が既に少なくとも全体的な臨床スコアを改善しており、少なくとも２日間安定化した後、臨床スコアの評点を少なくとも１つ上げて、それを（２日より多く）維持することであると定義される。このデータを、特定の処置群における全動物の平均臨床スコアまたは再発率（ある群における再発の総数をその群のマウスの総数で割ったもの）としてプロットする。
抗ＣＤ７０投与計画：抗ＣＤ７０抗体（０．１〜３ｍｇ／ｋｇ体重）を合計体積１００μｌで腹腔内投与する。マウスを３週連続で、１週につき３回処置する（合計９回の処置）。疾患の発症前（７日目）または急性疾患のピーク時（１４日目）に処置を開始する。対照として、１つのＥＡＥ誘導マウス群を未処置のままにしておく。
ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γ誘導の阻害：ＥＡＥを患ったマウスの脳内のＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの存在を実証することにより、ＥＡＥ病の進行を示す炎症性疾患の過程を示す。抗ＣＤ７０抗体で処置したＳＪＬマウスの脳内でのこれらサイトカインの誘発を阻害することにより、ＥＡＥの予防または処置における抗ＣＤ７０抗体治療の有用性を示す。臨床前（１３日目（３回の処置後）および２６日目（９回の処置後））および急性疾患のピーク時（２０日目（３回の処置後）および３３日目（９回の処置後））に処置した少なくとも３匹の動物からから脳を集める。脳を固定し（１０％緩衝化ホルマリン）、組織をパラフィンに包埋し、切片化する。次に、各サイトカインに特異的な一次抗体を用いたインキュベート、およびそれに続くＦＩＴＣと結合体化させた二次抗体を用いたインキュベートにより、ＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−γについて切片を個々に染色する。次いで、組織切片を標本用培地中で標本とし、免疫蛍光顕微鏡検査により分析する。抗ＣＤ７０抗体処置マウス対未処置ＥＡＥ誘導マウスにおけるＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−γ染色の減少量は、抗ＣＤ７０抗体治療を用いた炎症サイトカイン誘導の阻害を示す。
病気の症状の抑制または再発率：抗ＣＤ７０抗体処置群内のＥＡＥ誘導ＳＪＬマウスを未処置ＥＡＥ誘導マウスと比較して、病気の発症の予防または確立した病気の処置における抗ＣＤ７０抗体治療の有効性を評価する。前臨床的に処置したマウスに関しては、未処置の対照群と比較した場合のＥＡＥ疾患の平均スコアの減少は、病気の予防における抗ＣＤ７０抗体治療の有効性を示す。急性疾患のピークで処置したマウスに関しては、未処置の対照群と比較した場合の（ａ）再発率の低下または（ｂ）ＥＡＥの処置後の平均スコアの減少は、確立した疾患の処置における抗ＣＤ７０抗体処置の有効性を示す。
（実施例１２：抗ＣＤ７０抗体の投与による移植片対宿主病の処置）
ｈｕ−ＳＣＩＤモデルがヒトの免疫疾患を調べるための効果的なシステムであることが分かった。この移植片対宿主病のモデルでは、ヒトのＰＢＬおよび／またはＰＢＭＣに対する抗ＣＤ７０抗体および抗体／医薬結合体の作用を検証する。
免疫不全症マウスにおけるヒトの免疫細胞の確立：ヒトのＰＢＬまたはＰＢＭＣを注射する前に、以下のエフェクター細胞について、ここに示す試薬を用いてマウス内で低下させた：ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞については、例えば、抗アシアロＧＭ１またはＴＭＢ−１抗体；マクロファージ／単球については、例えば、クロドロネートカプセル化リポソーム；好中球については、例えば、抗Ｇｒ−１抗体；補体については、例えば、コブラ毒因子。ヒトのＰＢＬまたはＰＢＭＣ（１〜３０×１０７）を、ＳＣＩＤマウス（メスのＣＢ．１７−ＳＣＩＤ、ＳＣＩＤ−ＮＯＤ、またはＣＢ．１７−ＳＣＩＤ／ベージュマウス、８〜１２週齢）に移植し、そのマウス内において、機能的ヒト免疫系を長期的に安定して再構築した。
実験中にヒト免疫グロブリンの存在について血清を分析することにより、ＳＣＥＤマウスにおけるヒト細胞の移植を評価する。研究を通して麻酔または安楽死動物の血液、腹腔浸出液および脾臓におけるヒト細胞の数により移植効率も測定する。ヒト細胞の移植が成功すると、抗ＣＤ７０抗体または抗ＣＤ７０抗体／医薬結合体（１−１０ｍｇ／ｋｇ体重、腹腔内または静脈内に４〜７日毎に４〜７回投与）でマウスを処置する。ヒト細胞に対する抗体または抗体結合体処置の作用について、処置後異なる日数（１日、４日、７日、１４日、および２８日）で採取したマウスの血中および／または脾臓内のヒト細胞の数を調べることにより調査を行なう。
組織の収集：注射後の特定の時点および実験の最後に、以下の組織を収集し、疾患の進行および安楽死させたマウスの細胞浸潤について分析する：脾臓、リンパ節、胸腺、肝臓、骨髄、肺、脳、腸、結腸、皮膚、膵臓、腹腔浸出液、および血液。
（実施例１３：抗ＣＤ７０抗体の投与による喘息の処置）
喘息のマウスモデルにおいて抗ＣＤ７０抗体の有効性を調べた。０日目、７日目および１４日目に、感作のために、Ｂａｌｂ／ｃマウスを１０ｍｇのＯＶＡ／Ａｌｕｍにより処置した。１０ｍｇ／ｋｇ体重の抗マウスＣＤ７０抗体（クローン３Ｂ９）を、０日目から７日ごとに４回腹腔内に投与した。次いで、２１日目、２２日目、および２３日目に、５％噴霧状オボアルブミンを用いてマウスの免疫性をテストした。２６日目に、マウスを処理して、気管支肺胞洗浄液、血液、排出リンパ節、脾臓、および肺を収集した。得られた結果から、対照群と比較して、３Ｂ９で処置した群では、肺への細胞浸潤がより軽度であることが示された。
本発明は、本明細書中に記載の特定の実施形態によってその範囲が限定されるものではない。実際、本明細書中に記載したものを含む本発明の各種改変に関しては、上述した説明および添付した図面から当業者には明らかとなるであろう。そのような改変は、添付した請求の範囲に含まれるものとする。
本明細書中において、特許出願、特許および科学に関する出版物を含む各種の参考文献を挙げたが、それら各々の開示内容のすべてを本明細書中において参考として援用する。
１Ｆ６のＶＬおよびＶＨｃＤＮＡおよびアミノ酸配列。１Ｆ６の軽鎖（ＶＬ、上側の２つのパネル；配列番号１１および１２）および重鎖（ＶＨ、下側の２つのパネル；配列番号１および２）可変領域のコード配列およびアミノ酸配列を決定した。ＶＬおよびＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、Ｋａｂａｔら（１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ，ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）に記載の基準に基づいて同定した。ＣＤＲに対応するアミノ酸残基には下線を引いている。ＶＬおよびＶＨのシグナルペプチドは、それぞれ、アミノ残基−２０〜０および−１９〜０であると同定している。 ２Ｆ２のＶＬおよびＶＨｃＤＮＡおよびアミノ酸配列。２Ｆ２の軽鎖（ＶＬ、上側の２つのパネル；配列番号３１および３２）および重鎖（ＶＨ、下側の２つのパネル；配列番号２１および２２）可変領域のコード配列およびアミノ酸配列を決定した。ＶＬおよびＶＨの相補性決定領域（ＣＤＲ）を、Ｋａｂａｔら（同上）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ（同上）に記載の基準に基づいて同定した。ＣＤＲに対応するアミノ酸残基には下線を引いている。ＶＬおよびＶＨのシグナルペプチドは、それぞれ、アミノ残基−２０〜０および−１９〜０であると同定している。 １Ｆ６のＣＤＲと２Ｆ２のＣＤＲ間のアミノ酸配列の比較（各配列番号１６、３６、１８、３８、２０、４０、６、２６、８、２８、１０および３０）。１Ｆ６のＣＤＲおよび２Ｆ２のＣＤＲのアミノ酸配列を並べている。下線の残基は保存的置換を表わし、枠内にイタリックで示した残基は非保存的（ｄｉｖｅｒｇｅｎｔ）置換を表わす。 キメラ１Ｆ６発現ベクターｐＤＥＦ１４−１Ｆ６。抗体の発現のための発現ベクターの構造を示している。 キメラ１Ｆ６抗ＣＤ７０抗体は、抗体依存性細胞障害作用（ＡＤＣＣ）を仲介する。Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４で標識した標的細胞（ＷＩＬ２−Ｓ Ｂリンパ芽球様細胞、Ｃａｋｉ−１腎細胞癌腫細胞、および７８６−０腎細胞癌腫細胞）をキメラ１Ｆ６（ｃ１Ｆ６）、マウス１Ｆ６（ｍ１Ｆ６）、またはヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）で被覆し、エフェクターと標的の割合を１個の標的細胞につきＣＤ１６＋細胞が３０個となるように、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）と混合した。４時間後、溶解細胞からの上清をシンチレーションカウンタで測定した。特異的溶解率を、｛（試験サンプルｃｐｍ−自然発生的なｃｐｍ）÷（総ｃｐｍ−自然発生的なｃｐｍ）｝×１００により算出した。点は、３つのサンプルの平均±標準的偏差を表す。 複数のドナーのＰＢＭＣにより認識されたキメラ１Ｆ６被覆標的細胞。Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４で標識したＣａｋｉ−１腎細胞癌腫細胞を濃度が異なるキメラ１Ｆ６または非結合コントロールヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）で被覆し、エフェクターと標的の割合を１個の標的細胞につきＣＤ１６＋細胞が１７個となるように、２人の正常なドナー（２０５１６６１およびＮＤ０１６）からのＰＢＭＣと混合した。図５に示すように、４時間後に培養上清中のクロム５１活性を測定して特異的溶解を評価した。 キメラ１Ｆ６は、リンパ細胞系に対するＡＤＣＣを仲介する。ＣＤ７０＋Ｂリンパ芽球様細胞（ＷＩＬ２−Ｓ）および皮膚Ｔ細胞性リンパ腫細胞（ＨＨ）を、Ｎａ２ ５１ＣｒＯ４で標識し、次いで、図示するような各種の濃度でキメラ１Ｆ６またはヒトＩｇ（ｈＩｇＧ）と混合した。ＰＢＭＣ含有ＣＤ１６＋細胞を１８：１（ＣＤ１６＋細胞：標的）の割合で標的細胞に加え、４時間の培養後、図５に示すように溶解率を判定した。 キメラ１Ｆ６は、ＣＤ７０＋多発性骨髄腫細胞系に対するＡＤＣＣを仲介する。（Ａ）多発性骨髄腫細胞系によるＣＤ７０の発現。Ｌ−３６３、ＪＪＮ−３、ＬＰ−１およびＵ−２６６細胞を、マウス抗ＣＤ７０抗体（白抜きのヒストグラム）または非結合マウスＩｇＧコントロール抗体（黒塗りのヒストグラム)で染色した。抗体結合をＦＩＴＣ結合体化抗マウスＩｇＧにより検出し、フローサイメトリーで細胞を分析した。（Ｂ）ｃ１Ｆ６のＡＤＣＣ 活性。ＣＤ３８＋／ＣＤ１３８＋／ＣＤ７０＋多発性骨髄腫細胞系をＮａ２ ５１ＣｒＯ４で標識し、次いで、図示するような各種の濃度でキメラ１Ｆ６（黒塗りの四角）またはヒトＩｇ（ｈＩｇＧ）（黒塗りの三角）と混合した。ＰＢＭＣから濃縮されたＣＤ１６＋細胞を１５：１（ＣＤ１６＋細胞：標的）の割合で標的細胞に加え、４時間の培養後、図５に示すように溶解率を判定した。ＣＤ１６＋エフェクター細胞を抗体で前培養してＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６、白抜きの四角）にすることによりブロックすることによりＡＤＣＣ活性をブロックした。各グラフ内の数字は、ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）を用いて測定した各細胞系が発現したＣＤ７０分子の数を示す。 キメラ１Ｆ６は、ホジキン病（ＨＤ）細胞系に対するＡＤＣＣを仲介する。ＣＤ７０＋ＨＤ細胞系Ｈｓ４４５およびＬ４２８をＮａ２ ５１ＣｒＯ４で標識し、次いで、図示するような濃度でキメラ１Ｆ６またはヒトＩｇ（ｈＩｇＧ）と混合した。ＰＢＭＣ含有ＣＤ１６＋細胞を１８：１（ＣＤ１６＋細胞：標的）の割合で標的細胞に加え、４時間の培養後、図５に示すように溶解率を判定した。各グラフ内の数字は、ＱＩＦＩＫＩＴ（登録商標）（ＤａｋｏＣｙｔｏｍａｔｉｏｎ，Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）を用いて測定した各細胞系が発現したＣＤ７０分子の数を示す。 抗原に特異的なＴ細胞拡大中に誘導されたＣＤ７０。正常なＨＬＡ−Ａ０２０１ドナーからのＰＢＭＣを、インフルエンザウイルスマトリックスタンパク質に由来するＭ１ペプチドで刺激した。（Ａ）およびＢは、Ｍ１ペプチドで５日間刺激した後拡大するＣＤ８＋／Ｖβ１７＋上の特異的なＣＤ７０の誘導の代表例を示す。ＣＤ８＋／Ｖβ１７−細胞またはＣＤ８＋／Ｖβ１７＋細胞上でのコントロールＩｇＧ（白抜きの曲線）と抗ＣＤ７０ ｍＡｂ（黒塗りの曲線）の結合を示す。 抗原に特異的なＣＤ８＋／Ｖβｌ７＋細胞の低減に関するｃ１Ｆ６の用量応答比較。図１０に示したように、正常なＨＬＡ−Ａ０２０１ドナーからのＰＢＭＣをＭ１ペプチドで刺激した。ペプチドで刺激した培養物を未処理のままにしておくか、または図示するように、無関係なコントロールｍＡｂ、マウス抗ＣＤ７０抗体（ｍ１Ｆ６）もしくは段階的な量のキメラ抗ＣＤ７０抗体（ｃ１Ｆ６）を加えると同時に培養を開始した。９日後のＣＤ８＋／Ｖβ１７＋細胞の割合をフローサイメトリーで判定した。 キメラ１Ｆ６は、ＣＤ７０＋Ｂ細胞における補体依存性細胞毒性作用を仲介する。ＣＤ７０＋リンパ芽球性ＮＨＬ系（ＭＨＨ−ＰＲＥＢ−１）、ＥＢＶ−バーキット性リンパ腫系（ＭＣ１１６）、リンパ芽球様Ｂ細胞系（ＷＩＬ２−Ｓ）、および多発性骨髄腫細胞系（ＬＰ−１）を、１０％の正常なヒト血清の存在下で、図示した段階的な量の抗体により培養した。ＭＨＨ−ＰＲＥＢ−１、ＭＣ１１６およびＷＩＬ２−Ｓに関しては、５０μｇ／ｍＬ、５μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、および０．０５μｇ／ｍＬで抗体を用いる一方、ＬＰ−１に関しては、５０μｇ／ｍＬ、１０μｇ／ｍＬ、２μｇ／ｍＬ、および０．４μｇ／ｍＬで抗体を用いた。ヒトＩｇＧ（ｈＩｇＧ）を非結合陰性コントロール抗体として用いた。細胞溶解をフローサイメトリーで検出したＤＮＡ染料（ヨウ化プロピジウム）に対する細胞膜浸透力により評価した。培地のみの背景細胞溶解を減算して特異的細胞溶解を得た。 キメラ１Ｆ６は、ＣＤ７０＋Ｔ細胞中の補体依存性細胞毒性作用を仲介する。ＣＤ７０＋皮膚Ｔ細胞性リンパ腫系ＨＨおよびＣＤ７０＋活性化正常Ｔ細胞系（Ｃ９Ｄ）のｃ１Ｆ６仲介ＣＤＣを図１２に示すように評価した。 キメラ１Ｆ６は、ＣＤ７０＋細胞に対する抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）を仲介する。ＣＤ７０＋リンパ芽球様細胞（ＷＩＬ２−Ｓ）を緑色蛍光細胞膜染料（ＰＫＨ６７）で標識し、段階的な量のｃ１Ｆ６で処理し、次いで、単球由来のマクロファージと混合した。２時間後、混合物をＰＥ結合体化抗ＣＤ１１ｂ抗体と共に培養し、マクロファージ表面を標識した。マクロファージによる抗体被覆標的細胞の取り込みを、緑色および赤色二重蛍光細胞のフローサイトメトリー分析により判定した。蛍光顕微鏡検査のためらに、ＣＤ１１ｂ＋細胞をＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ（登録商標）５６８ヤギ抗マウスＩｇＧでさらに染色し、赤色シグナルを増強させた。（Ａ）ＷＩＬ２−Ｓ細胞をコントロール抗体（ｈＩｇＧ１）またはｃ１Ｆ６で処理し、マクロファージと混合した。抗体で覆われた標的細胞を摂取した（マクロファージ全体の）食作用細胞の割合を右上の象限に示す。（Ｂ）ＷＩＬ２−Ｓ細胞を、段階的な量のｃ１Ｆ６（三角）または非結合コントロールＩｇ（ｈＩｇＧ１、円）で処理し、標的細胞を摂取した食作用細胞の割合をフローサイメトリーにより判定した。 キメラ１Ｆ６は、複数のＣＤ７０＋細胞標的に対するＡＤＣＰを仲介する。図１５に示すように、図示したＣＤ７０＋リンパ腫、多発性骨髄腫、および腎細胞癌腫細胞系を、キメラ１Ｆ６仲介ＡＤＣＰアッセイの標的として用いた。キメラ１Ｆ６の濃度が飽和時の特異的ＡＤＣＰ活性率を一覧にしている。 ＣＤ７０＋異種移植リンパ腫モデルにおけるｃ１Ｆ６のインビボ抗腫瘍活性。薬物処置の一日前に、ＳＣＩＤマウス（ｎ＝１０／群）の静脈内に１×１０６Ｒａｍｏｓ細胞またはＩＭ−９細胞を接種した。キメラ１Ｆ６の単回投与を１ｍｇ／ｋｇまたは４ｍｇ／ｋｇで行ない、非結合コントロール抗体（ＩｇＧ）の単回投与を４ｍｇ／ｋｇで行なった。生存状況を監視し、Ｐ値で示すように、処置群間の相違をログランクテストを用いて比較した。

Claims (68)

  1. 被験体内のＣＤ７０を発現する癌を処置するための方法であって、
    ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および該被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを有する結合剤を効果的な量で該被験体に投与する工程を包含し、該結合剤は、治療剤と結合体化しない場合、細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼし、該結合剤は治療剤と結合体化しない、方法。
  2. 前記結合剤は抗体である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記抗体はヒト化抗体である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記ヒト化抗体は、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含む、請求項４に記載の方法。
  6. 前記ＩｇＧ抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項５に記載の方法。
  7. 前記抗体はキメラ抗体である、請求項３に記載の方法。
  8. 前記キメラ抗体は、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含む、請求項７に記載の方法。
  9. 前記ＩｇＧ抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項８に記載の方法。
  10. 前記抗体はヒトの定常領域を含む、請求項３に記載の方法。
  11. 前記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する、請求項１に記載の方法。
  12. 前記抗体は、以下：
    （ａ）配列番号６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ１領域；
    （ｂ）配列番号８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ２領域；
    （ｃ）配列番号１０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ３領域；
    （ｄ）配列番号１６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ１領域；
    （ｅ）配列番号１８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ２領域；
    （ｆ）配列番号２０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ３領域；
    （ｇ）配列番号２６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ１領域；
    （ｈ）配列番号２８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ２領域；
    （ｉ）配列番号３０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ３領域；
    （ｊ）配列番号３６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ１領域；
    （ｋ）配列番号３８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ２領域；および
    （ｌ）配列番号４０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ３領域
    からなる群から選択される少なくとも１つのポリペプチド領域を含む、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記抗体は、前記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域；または前記（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む、請求項１２に記載の方法。
  14. 前記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のポリペプチド領域は、それぞれ、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０に示すアミノ酸配列を有する、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む抗体は、前記（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のＬ１領域、Ｌ２領域およびＬ３領域をさらに含むか；または
    前記（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む抗体は、前記（ｊ）、（ｋ）および（ｌ）のＬ１領域、Ｌ２領域およびＬ３領域をさらに含む、請求項１３に記載の方法。
  16. 前記抗体は、配列番号２または配列番号２２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項１３に記載の方法。
  17. 前記重鎖可変領域は、配列番号２または配列番号２２に示すアミノ酸配列を有する、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記配列番号２または配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む前記抗体は、それぞれ、配列番号１２または配列番号３２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記軽鎖可変領域は、配列番号１２または配列番号３２に示すアミノ酸配列を有する、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記抗体は、ヒト化１Ｆ６またはヒト化２Ｆ２である、請求項４に記載の方法。
  21. 前記抗体は、キメラ１Ｆ６またはキメラ２Ｆ２である、請求項７に記載の方法。
  22. 前記抗体は多価である、請求項１に記載の方法。
  23. 前記ＣＤ７０を発現する癌は、多発性骨髄腫、腎腫瘍、Ｂ細胞リンパ腫、結腸癌腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、鼻咽頭癌腫、脳腫瘍または胸腺癌腫からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  24. 前記腎腫瘍は腎細胞癌腫である、請求項２３に記載の方法。
  25. 前記脳腫瘍は、神経膠腫、グリア芽腫、または髄膜腫である、請求項２３に記載の方法。
  26. 前記被験体はヒトである、請求項１に記載の方法。
  27. 被験体内の免疫障害を処置するための方法であって、
    ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および該被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを有する結合剤を効果的な量で該被験体に投与する工程を包含し、該結合剤は、治療剤と結合体化しない場合、細胞静止作用、細胞毒性作用、または免疫抑制作用を及ぼし、該結合剤は治療剤と結合体化しない、方法。
  28. 前記結合剤は抗体である、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記抗体はヒト化抗体である、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記ヒト化抗体は、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含む、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記ＩｇＧ抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記抗体はキメラ抗体である、請求項２８に記載の方法。
  34. 前記キメラ抗体は、ヒトＩｇＭまたはＩｇＧ抗体のエフェクタードメインを含む、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記ＩｇＧ抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記抗体はヒトの定常領域を含む、請求項２８に記載の方法。
  37. 前記抗体は、ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６または２Ｆ２と競合する、請求項２７に記載の方法。
  38. 前記抗体は、以下：
    （ａ）配列番号６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ１領域；
    （ｂ）配列番号８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ２領域；
    （ｃ）配列番号１０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ３領域；
    （ｄ）配列番号１６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ１領域；
    （ｅ）配列番号１８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ２領域；
    （ｆ）配列番号２０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ３領域；
    （ｇ）配列番号２６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ１領域；
    （ｈ）配列番号２８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ２領域；
    （ｉ）配列番号３０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＨ３領域；
    （ｊ）配列番号３６に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ１領域；
    （ｋ）配列番号３８に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ２領域；および
    （ｌ）配列番号４０に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＬ３領域
    からなる群から選択される少なくとも１つのポリペプチド領域を含む、請求項３７に記載の方法。
  39. 前記抗体は、前記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域；または前記（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のポリペプチド領域は、それぞれ、配列番号６、配列番号８、配列番号１０、配列番号１６、配列番号１８および配列番号２０に示すアミノ酸配列を有する、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む抗体は、前記（ｄ）、（ｅ）および（ｆ）のＬ１領域、Ｌ２領域およびＬ３領域をさらに含むか；または
    前記（ｇ）、（ｈ）および（ｉ）のＨ１領域、Ｈ２領域およびＨ３領域を含む抗体は、前記（ｊ）、（ｋ）および（ｌ）のＬ１領域、Ｌ２領域およびＬ３領域をさらに含む、請求項３９に記載の方法。
  42. 前記抗体は、配列番号２または配列番号２２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む、請求項３９に記載の方法。
  43. 前記重鎖可変領域は、配列番号２または配列番号２２に示すアミノ酸配列を有する、請求項４２に記載の方法。
  44. 前記配列番号２または配列番号２２に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する重鎖可変領域を含む前記抗体は、それぞれ、配列番号１２または配列番号３２に示すアミノ酸配列に対して少なくとも８０％の配列同一性を有する軽鎖可変領域をさらに含む、請求項４２に記載の方法。
  45. 前記軽鎖可変領域は、配列番号１２または配列番号３２に示すアミノ酸配列を有する、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記抗体は、キメラ抗体１Ｆ６またはキメラ抗体２Ｆ２あるいはヒト化抗体１Ｆ６またはヒト化抗体２Ｆ２である、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記抗体は、ヒト化抗体１Ｆ６またはヒト化抗体２Ｆ２である、請求項２７に記載の方法。
  48. 前記抗体は多価である、請求項２７に記載の方法。
  49. 前記免疫障害はＴ細胞仲介免疫障害である、請求項２７に記載の方法。
  50. 前記Ｔ細胞仲介免疫障害は、ＣＤ７０を発現する活性化Ｔ細胞を含む、請求項４９に記載の方法。
  51. 休止Ｔ細胞は、前記抗体／医薬結合体の投与により大きく低減しない、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記Ｔ細胞仲介免疫障害は、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、タイプＩ糖尿病、喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎、免疫性血小板減少紫斑病、多発性硬化症、乾癬、シェーグレン症候群、ハシモト甲状腺炎、グレーブス病、原発性胆汁肝硬変、ウェゲナー肉芽腫症、結核、ワルデンストレームマクログロブリン血症、または移植片対宿主病である、請求項４９に記載の方法。
  53. 前記免疫障害は活性化Ｂリンパ球障害である、請求項２７に記載の方法。
  54. 前記被験体はヒトである、請求項２７に記載の方法。
  55. ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する癌に対して細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼす抗体であって、該細胞静止作用または細胞毒性作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６またはモノクローナル抗体２Ｆ２ではない、抗体。
  56. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項５５に記載の抗体。
  57. 前記抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項５６に記載の抗体。
  58. ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６およびモノクローナル抗体２Ｆ２と競合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する癌に対して細胞静止作用または細胞毒性作用を及ぼす抗体であって、該細胞静止作用または細胞毒性作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６またはモノクローナル抗体２Ｆ２ではない、抗体。
  59. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項５８に記載の抗体。
  60. 前記抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項５９に記載の抗体。
  61. ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する免疫障害に対して免疫抑制作用を及ぼす抗体であって、該免疫抑制作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６またはモノクローナル抗体２Ｆ２ではない、抗体。
  62. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項６１に記載の抗体。
  63. 前記抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項６２に記載の抗体。
  64. ＣＤ７０との結合に関して、モノクローナル抗体１Ｆ６およびモノクローナル抗体２Ｆ２と競合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含み、ＣＤ７０を発現する免疫障害に対して免疫抑制作用を及ぼす抗体であって、該免疫抑制作用は、細胞静止剤または細胞毒性剤と結合体化しない場合にもたらされ、該抗体は、モノクローナル抗体１Ｆ６またはモノクローナル抗体２Ｆ２ではない、抗体。
  65. 前記抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体、または完全なヒト抗体である、請求項６４に記載の抗体。
  66. 前記抗体は、ヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ３サブタイプである、請求項６５に記載の抗体。
  67. ＣＤ７０を発現する癌または免疫障害を処置するための医薬組成物であって、該組成物は、ＣＤ７０に結合する抗原結合領域および被験体において少なくともＡＤＣ、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰまたはＣＤＣ応答を仲介する少なくとも１つのエフェクタードメインを含む抗体を含有し、該抗体は、治療剤および少なくとも１つの薬学的に適合性のある成分と結合体化しない、組成物。
  68. 請求項５５〜６４のうちいずれか１つに記載の抗体を含む容器であって、該抗体は凍結乾燥されている、容器と、
    薬学的に許容される希釈液を含む第２の容器と、
    を含む、医薬キット。
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