JP2008209403A - 要素上での複数の免疫化学アッセイ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】この方法は、基層、ストレプトアビジンを含む層、および拡散層を有する要素を用意するステップと、拡散層内に含めるかまたはサンプルと組み合わせることができる標識免疫反応物および免疫構成要素を用意するステップと、サンプルを拡散層の3つ以上の領域に分配するステップであって、3つ以上の領域の各中心が、3つ以上の領域によって形成される中心から等距離であり、あらゆる方向に流れる洗浄液がサンプルに接触するように各領域が隣接する領域に接触している、ステップと、洗浄液を、3つ以上の領域によって形成された中心に導き、洗浄液が3つ以上の各領域に均等に流れるようにして、サンプルおよび標識を洗浄するステップと、3つ以上の各領域で測定を行って、1つまたは複数の分析物の存在または濃度を測定するステップとを含む。
【選択図】図1
Description
本発明は、1つの要素上での複数の免疫化学アッセイに関する。詳細には、本発明は、診断分析器に用いられる複数のアッセイを含むドライスライドに関する。
既知の診断分析装置には、オーソ・クリニカル・ダイアグノスティックス社(Ortho-Clinical Diagnostics, Inc.)が販売するVitros(登録商標)5.1FSなどの臨床化学分析装置が含まれる。このような全ての分析装置は、総称して診断分析装置と呼ばれる。このような診断分析装置は、参照して開示内容の全てを本明細書に組み入れる米国特許第4,258,001号、同第4,670,381号、および同第4,997,772号に開示されているようなドライスライドを用いることができる。
本発明は、2つ以上のアッセイを支持できるイムノアッセイ試験要素、具体的にはドライスライドにおける当該の試験要素の要望に応えることに関する。
本発明は、1つの要素上で複数のアッセイの実施を可能にするイムノアッセイ要素に関する。このような形態の1つの利点は、異なる分析物の「メニュー」が同じ要素上で測定されるのを可能にする点である。例えば、供血者スクリーニングに一般的に用いられる感染スクリーニングメニューは、通常は、HIV、A型肝炎、B型肝炎、およびC型肝炎について試験する。本発明の前は、供血者スクリーニングには、全ての穴で同じ分析物を測定する、例えば96穴の大きい微量定量プレートが必要であった。したがって、これら4種の疾患の簡易なスクリーニングには、4つの微量定量プレートが必要であった。プレートの一部の穴しか使用されない場合は、相当の無駄になり、費用がかかる。本発明では、多数の微量定量プレートを用いるのではなく、1人の供血者を1つの要素上で試験することができる。
(1)ポリエステルまたはマイラー(Mylar)などの透明な材料からなる基層を用意する。
(2)次に、バッファー層を基層の上に設ける。
(3)白色染料を含む、ゼラチンまたはポリマーからなる支持/吸収層を設ける。この染料に抗酸化剤を混合して、染料の白色から有色への自然な経時変化を遅らせる。
(4)水溶性ラテックス接着剤と共に保持されたポリスチレンビーズを含む拡散層を設ける。
(5)ストレプトアビジン被覆ビーズを、拡散層に含めるかまたは拡散層の下の別の層として設ける。
1.各N個のアッセイに対する全ての免疫構成要素および標識免疫反応物を、製造の際に拡散層に均一にコーティングする。次に、サンプルを、要素上(例えば、ドライスライドの拡散層)にスポットする。
2.上記したN個の免疫構成要素および標識免疫反応物を、Z方向はともかくX/Y方向に均一となるように各N個のアッセイに対してN個の異なる層にコーティングする。次に、N個のサンプルを、要素上(例えば、ドライスライドの拡散層)にスポットする。
3.全ての構成要素を別個にコーティングしてN個の異なるアッセイを形成する。次に、N個の異なるアッセイを、製造工程の際に試験要素に接合する。この接合工程は、別個の構成要素を互いにスプライシング(splicing)して行ってもよい。次に、サンプルを、要素上(例えば、ドライスライドの拡散層)にスポットする。
4.N個のアッセイに対する全ての免疫構成要素をサンプルと混合して、このサンプルをN個のアリコット(aliquot)に分割する。各分析物に対するHRP標識などの標識免疫反応物を、N個の各アリコットに添加する。次に、これらのサンプルと標識免疫反応物の混合物のそれぞれを、スライドのN個の位置にスポットする。
5.サンプルをN個の容器内に等分し、N個の各アッセイのための免疫構成要素およびHRPなどの標識免疫反応物と別個に混合する。この混合物を、要素(例えば、ドライスライドの拡散層)のN個の異なる位置にスポットする。これが、最も好ましい実施形態である。
6.実施形態1と5の組合せ。N個の異なるアッセイのためのN個全ての免疫構成要素を、拡散層内に均一にコーティングする。サンプルをN個の容器に等分してから、サンプルをN個の各アッセイのための標識免疫反応物と混合し、要素の少なくともN個の別個の位置にスポットする。この実施形態の問題点は、サンドイッチの両端部が、測定すべき分析物の一部に結合するわけではないことにより、アッセイの特異性が失われる可能性がある点である。
・スループットの改善
・試験当たりのコスト削減
・安定に関連した問題を軽減して、本質的に低価の分析装置および質の低めの製造工程により、許容範囲の処理が行えるようにする、内部基準を用いたリラクタント分析(reluctant analysis)の能力
(1)1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
基層、ストレプトアビジンを含む層、および拡散層を有する要素を用意するステップであって、前記ストレプトアビジンは前記拡散層内に存在し得る(may or may not be)、ステップと、
前記拡散層内に含めるかまたは前記サンプルと組み合わせることができる標識免疫反応物および免疫構成要素を用意するステップと、
前記サンプル、およびオプションの前記免疫構成要素および前記標識免疫反応物を前記拡散層の3つ以上の領域に分配するステップであって、前記3つ以上の領域の各中心が、前記3つ以上の領域によって形成される中心から等距離であり、あらゆる方向に流れる洗浄液が前記サンプルに接触するように前記各領域が隣接する領域に接触している、ステップと、
前記洗浄液を、前記3つ以上の領域によって形成された前記中心に導き、前記洗浄液が前記3つ以上の各領域に均等に流れるようにして、前記サンプルおよび標識を洗浄するステップと、
前記3つ以上の各領域で測定を行って、前記1つまたは複数の分析物の存在または濃度を測定するステップと、
を含む、方法。
(2)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、結合抗体または抗原のキャプチャを含む、方法。
(3)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記要素は、診断分析装置に用いられるドライスライドを含む、方法。
(4)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、およびヒト免疫不全ウィルスのアッセイの1つを有する4つの領域である、方法。
(5)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、トロポニン、CKMB、ミオグロビン、およびproBNPを含む心臓パネルを含む、方法。
前記3つ以上の領域は、HCG、FSH、およびLHを含む生殖パネルを含む、方法。
(7)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、4つの領域であり、
前記洗浄ステップの前にインキュベーション期間をさらに含む、方法。
(8)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素および標識免疫反応物は、前記サンプルが供給される前に、前記拡散層内に導入される、方法。
(9)実施態様(8)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、前記キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
(10)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素は、異なる層内に含められている、方法。
前記免疫構成要素は、前記キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
(12)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各アッセイに対する前記免疫構成要素を前記サンプルと混合し、次に、この混合したサンプルを、3つ以上のアリコットに分割し、検出/測定される各分析物に対する標識免疫反応物を前記アリコットの1つに添加する、方法。
(13)実施態様(12)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
(14)実施態様(1)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記サンプルは、異なるアリコットに分割され、異なる各アッセイに対する前記免疫構成要素および前記標識免疫反応物を異なるアリコット中の前記サンプルと混合する、方法。
(15)実施態様(14)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素は、前記サンプルおよび標識免疫反応物が添加される前に、前記拡散層内に導入される、方法。
(17)実施態様(16)に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
Claims (17)
- 1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
基層、ストレプトアビジンを含む層、および拡散層を有する要素を用意するステップであって、前記ストレプトアビジンは前記拡散層内に存在し得る、ステップと、
前記拡散層内に含めるかまたは前記サンプルと組み合わせることができる標識免疫反応物および免疫構成要素を用意するステップと、
前記サンプル、およびオプションの前記免疫構成要素および前記標識免疫反応物を前記拡散層の3つ以上の領域に分配するステップであって、前記3つ以上の領域の各中心が、前記3つ以上の領域によって形成される中心から等距離であり、あらゆる方向に流れる洗浄液が前記サンプルに接触するように前記各領域が隣接する領域に接触している、ステップと、
前記洗浄液を、前記3つ以上の領域によって形成された前記中心に導き、前記洗浄液が前記3つ以上の各領域に均等に流れるようにして、前記サンプルおよび標識を洗浄するステップと、
前記3つ以上の各領域で測定を行って、前記1つまたは複数の分析物の存在または濃度を測定するステップと、
を含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、結合抗体または抗原のキャプチャを含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記要素は、診断分析装置に用いられるドライスライドを含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、A型肝炎、B型肝炎、C型肝炎、およびヒト免疫不全ウィルスのアッセイの1つを有する4つの領域である、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、トロポニン、CKMB、ミオグロビン、およびproBNPを含む心臓パネルを含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、HCG、FSH、およびLHを含む生殖パネルを含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記3つ以上の領域は、4つの領域であり、
前記洗浄ステップの前にインキュベーション期間をさらに含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素および標識免疫反応物は、前記サンプルが供給される前に、前記拡散層内に導入される、方法。 - 請求項8に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、前記キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素は、異なる層内に含められている、方法。 - 請求項10に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、前記キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各アッセイに対する前記免疫構成要素を前記サンプルと混合し、次に、この混合したサンプルを、3つ以上のアリコットに分割し、検出/測定される各分析物に対する標識免疫反応物を前記アリコットの1つに添加する、方法。 - 請求項12に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記サンプルは、異なるアリコットに分割され、異なる各アッセイに対する前記免疫構成要素および前記標識免疫反応物を異なるアリコット中の前記サンプルと混合する、方法。 - 請求項14に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。 - 請求項1に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
異なる各分析物に対する前記免疫構成要素は、前記サンプルおよび標識免疫反応物が添加される前に、前記拡散層内に導入される、方法。 - 請求項16に記載の1つまたは複数の目的の分析物についてサンプルを分析する方法において、
前記免疫構成要素は、キャプチャすなわち結合抗体/抗原を含む、方法。
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