CN101512342B - 用于测量分析物浓度的测定的稳定剂和捕获配体 - Google Patents
用于测量分析物浓度的测定的稳定剂和捕获配体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101512342B CN101512342B CN200780032399.XA CN200780032399A CN101512342B CN 101512342 B CN101512342 B CN 101512342B CN 200780032399 A CN200780032399 A CN 200780032399A CN 101512342 B CN101512342 B CN 101512342B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stabilizer
- analyte
- application
- alkyl
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及可用于测量液体中游离的或未结合的分析物浓度的组合物。本发明包括捕获配体和稳定剂的应用,以提高分析物浓度测定法的准确度。本发明还公开了应用本发明的方法和工具。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求申请日为2006年7月28日的美国临时申请60/833,786的优先权,在此将其全部内容并入本文。
技术领域
本发明涉及新的并且有用的用于测量液体中游离的或未结合的分析物的浓度的组合物。本发明包括捕获配体和稳定剂的应用,以提高分析物浓度测定法的准确度。本发明还公开了应用本发明的方法和工具。
背景技术
人们已经开发出多种测定法来测量溶液中分析物的浓度。例如,测定包括:将含有分析物的溶液与捕获配体混合,洗去任何杂质,然后测量与捕获配体相联接的分析物。这些检测方法存在数个技术难点。在一些情况中,发生不希望有的杂质与捕获配体的结合。另外,在有些情况下,分析物与捕获配体的结合是不稳定的,并且分析物可以从配体上分离。在一些情况下,溶液中的分析物可以以被结合的形式(例如,结合于蛋白质上)和未结合的形式存在,并且仅测量未结合的形式的浓度或许是所期望的。因此,在有些情况下,必须稳定化在结合形式和未结合形式之间的平衡,以便得到精确的和可再现的分析物浓度测量。
为阐明这些该问题,贝克曼考尔特公司(Beckman Coulter,Incorporated)(BCI,富勒敦市,加利福尼亚州)在BCI的多种分析物浓度测定法中通常使用烷基胺含氟表面活性剂(FC100,3M公司制造,圣保罗市,明尼苏达州)。FC100是一种胺类含氟表面活性剂的复合混合物,其显示出在其精确的化学成分上基本的批次间的变化性。根据3M公司的材料安全数据表(MSDS,2000年2月8日公开,文件编号10-3799-3),FC100含有水、二甘醇丁基醚、氟烷基磺酸酯钠盐、以及作为商业秘密的残留有机含氟化合物的混合物。不受理论限制,本发明人相信,通过稳定化平衡,烷基胺含氟表面活性剂可以促进游离的未结合的分析物含量对比存在于样品溶液中被结合的分析物的精确测定,并且因此允许用于分析物浓度的精确测量。
数年前,美国环境保护局表示出对某些碳氟化合物比如碳氟辛酸及其衍生物作为潜在有害化合物的关注。因此,需要一种替换物,用于代替具有不同的可以在确定分析物浓度中起作用的测定成分的烷基胺含氟表面活性剂。
本发明提供了新颖的组合物以及用于在测定中使用那些组合物的方法和试剂盒,从而精确地测量来自个体的样品中游离的未结合的分析物。
发明内容
本发明阐明了如上所述需要和现用技术遭遇的问题。
本发明的目的在于提供测定游离分析物浓度的方法,该方法包括:(a)将捕获配体加入容器;(b)将稳定剂加入容器;(c)将包含游离分析物的样品加入容器;(d)将检测体系加入容器;以及(e)通过使用检测体系,测量样品中游离分析物的浓度。
本发明的目的还在于提供用于测量游离分析物浓度的测定的组合物,该组合物包含用于游离分析物的捕获配体以及稳定剂,其附带条件是稳定剂不包含烷基胺含氟表面活性剂。
本发明的目的还在于提供用于估计游离分析物浓度的试剂盒,该试剂盒包含:(a)用于分析物的捕获配体;(b)稳定剂;以及(c)检测体系。
在一些实施方式中,试剂盒可以进一步包含(d)参考标准。
本发明的目的还在于提供稳定剂,该稳定剂包含通式RX。其中,R和X是共价结合,并且其中R是饱和或不饱和烃基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷基氨基烷基、烷基氨基氧基烷基、烷氧基氨基烷基、膦酰基烷基、羧基烷基、羧基烷氧基烷基、羧基烷基氨基烷基、羧基烷基酰氨基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、硅氧烷、或碳硅烷(carbosilane)。其中任何一种可以任选地用一个以上氧、氮、磷、或硅原子间断,并且其中R取代物中的任何一种可以用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。并且其中,X是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、亚硫酸酯、牛磺酸盐、磺基丁二酸酯、磺化甜菜碱、氨磺酰(sulfonamide)、甲氧基甲酰胺(methoxymethanilamide)、氨磺酰、次磺酰(sulfeno)、亚氯酸盐、氯化物、碘化物、碘酸盐、溴化物、溴酸盐、氟化物、氟酸盐、硝酸酯、亚硝酸酯、硝胺、氨基、亚氨基、异氰酸基(isocyanoto)、异硫氰基、乙酰胺基、乙酰亚胺基、叠氮基、重氮基、氰基、氰酰基、磷酸酯、磷酸基、膦酰基、磷酰基、膦基、羧酸酯、丙烯酸酯、癸二酸酯、邻苯二甲酸酯、醋酸酯、氧化物、硼酸盐、过氧化硼酸盐、四硼酸盐、硼烷酸酯(boranate)、硅烷、正硅酸酯(orthosilcate)、硅酸盐、或硅酸金属盐,附带条件是RX不能为烷基胺含氟表面活性剂。图1和图2描述了包含通式RX的稳定剂。
在一些实施方式中,R可以是烷基、亚烷基、炔、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷基氨基烷基、烷基氨基氧基烷基、烷氧基氨基烷基、膦酰基烷基、羧基烷基、羧基烷氧基烷基,其中的任何一种用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。
在一些实施方式中,R可以是丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、2-甲基丁基、2-乙基丁基、2-丙基丁基、3-甲基丁基、3-乙基丁基、3-丙基戊基、2-甲基戊基、2-乙基戊基、2-丙基戊基、3-甲基戊基、3-乙基戊基、3-丙基戊基、4-甲基戊基、4-乙基戊基、4-丙基戊基、2-甲基己基、2-乙基己基、2-丙基己基、3-甲基己基、3-乙基己基、3-丙基己基、4-甲基己基、4-乙基己基、4-丙基己基、5-甲基己基、5-乙基己基、5-丙基己基、2-甲基庚基、2-乙基庚基、2-丙基庚基、3-甲基庚基、3-乙基庚基、3-丙基庚基、4-甲基庚基、4-乙基庚基、4-丙基庚基、5-甲基庚基、5-乙基庚基、5-丙基庚基、6-甲基庚基、6-乙基庚基、6-丙基庚基、2-甲基辛基、2-乙基辛基、2-丙基辛基、3-甲基辛基、3-乙基辛基、3-丙基辛基、4-甲基辛基、4-乙基辛基、4-丙基辛基、5-甲基辛基、5-乙基辛基、5-丙基辛基、6-甲基辛基、6-乙基辛基、6-丙基辛基,其中任何一种可以用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。
在一些实施方式中,X可以是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、亚硫酸酯、牛磺酸盐、磺基丁二酸酯、磺化甜菜碱、氨磺酰、甲氧基甲酰胺、氨磺酰、或次磺酰,优选是硫酸酯、磺酸、磺基丁二酸酯、或牛磺酸盐。
在一些实施方式中,R是C6-18烷基并且X是硫酸酯、磺酸酯或者磺酸。在一些实施方式中,稳定剂选自下组:2-乙基-己基硫酸酯;1-己烷磺酸或其盐;1-庚烷磺酸或其盐;1-辛烷磺酸或其盐;1-癸烷磺酸或其盐;C14-16烯烃磺酸钠;十二烷基硫酸钠;二辛磺基琥珀酸钠;N-油基-N-甲基牛磺酸钠;聚氧化乙烯月桂烷硫酸钠;胺的烷基苯甲基磺酸酯;乙基-己基硫酸钠;以及其组合。在一些实施方式中,稳定剂是2-乙基-己基硫酸酯。在一些实施方式中,组合物包含稳定剂的盐。
在一些实施方式中,分析物是激素、药物、或维生素。在一些实施方式中,分析物包含分析物的单一对映体或去碘化的形式。
在一些实施方式中,捕获配体和稳定剂以保持在待分析样品中游离的分析物和被结合的分析物之间平衡的方式而被组合。
在一些实施方式中,稳定剂的体积分数是约0.0001至约0.1体积百分数。
在一些实施方式中,稳定剂的浓度是约5至约750微摩尔。
在一些实施方式中,2-乙基-己基硫酸酯的体积分数是约0.004至约0.015体积百分数。
在一些实施方式中,2-乙基-己基硫酸酯的浓度是约75至约650微摩尔。
在一些实施方式中,捕获配体选自下组:抗体,抗体片段,抗体仿制品,或分析物特异性结合蛋白质比如内因子或者叶酸酯结合蛋白。在一些实施方式中,捕获配体被固定在固相上。在一些实施方式中,捕获配体是分析物特异性结合蛋白质。在一些实施方式中,捕获配体是抗体。
在一些实施方式中,分析物是甲状腺激素。
在一些实施方式中,本发明还包括免疫测定体系。在一些实施方式中,免疫测定体系包含涂敷有特异性结合生物素的分子、生物素化的分析物特异性捕获蛋白质、或其组合的顺磁性颗粒。
在一些实施方式中,免疫测定体系包含可检测的标签。
附图说明
图1是显示多种用于形成本发明中公开的稳定剂的R基团(I至VIII)的图表。
图2是显示多种用于形成本发明中公开的稳定剂的X基团(I至VIII)的图表。
图3是显示多种作为本发明中公开的稳定剂而被评价的RX化合物的图表。“工作浓度V/V%”指的是可溶解的受测稳定剂的浓度。
图4是显示多种作为本发明中公开的稳定剂而被评价的EHS同系物的图表。“工作浓度V/V%”指的是可溶解的受测稳定剂的浓度。
具体实施方式
本发明的目的在于提供一种用于测量游离分析物浓度的测定的组合物,该组合物包含用于游离分析物的捕获配体以及稳定剂,其附带条件是稳定剂不包含烷基胺含氟表面活性剂。
应理解,当在本说明书和附后的权利要求书中使用时,单数形式的“一”、“一种(个)”和“该”包括单个和多个参照,除非上下文清楚地指出。因此,例如“稳定剂”包括单个稳定剂以及两个以上不同稳定剂的组合。
术语“选择性衍生的”指的是主体分子或者分子部分被选择性地取代、选择性地间断、或两者皆有。术语“选择性地取代”指的是用原子或者原子团置换在主体分子或者分子部分上的氢或碳原子。在此描述的术语“选择性地间断”指的是碳链或硅氧烷链骨架中插入Si、O、N、S、或P。在一些实施方式中,术语“选择性地衍生”指的是用一个以上氧、氮、卤素、或含有氧、氮、或卤素的部分置换或间断。
本发明的组合物可以在测量游离分析物浓度的测定中使用。该组合物可以包含:(i)用于游离分析物的捕获配体;以及(ii)稳定剂,其中,稳定剂包含通式RX或其盐,其中R是饱和或者不饱和烃基、芳基、或硅基聚合物,其中任何一种用一个以上含有氧、氮、卤素、或其组合的部分选择性地衍生。并且其中,X是硫或磷的氧代阴离子或氧化物、氮的氧代阴离子或羰基衍生物、羧酸酯、硼酸盐、硅酸酯、或卤素,附带条件是稳定剂不包含烷基胺含氟表面活性剂。
在一些实施方式中,稳定剂包含通式RX或其盐,其中,R是饱和或不饱和烃基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷基氨基烷基、烷基氨基氧基烷基、烷氧基氨基烷基、膦酰基烷基、羧基烷基、羧基烷氧基烷基、羧基烷基氨基烷基、羧基烷基酰氨基烷基、环烷基、环烷基烷基、杂环烷基烷基、杂环基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、硅氧烷、硅酮、或碳硅烷,其中任何一种可以被一个以上氧、氮、磷、或硅原子选择性地间断,并且其中R取代物中的任何一种可以用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代;并且其中,X是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、亚硫酸酯、牛磺酸盐、磺基丁二酸酯、磺化甜菜碱、氨磺酰、甲氧基甲酰胺、氨磺酰、次磺酰、亚氯酸盐、氯化物、碘化物、碘酸盐、溴化物、溴酸盐、氟化物、氟酸盐、硝酸酯、亚硝酸酯、硝胺、氨基、亚氨基、异氰酸基、异硫氰基、乙酰胺基、乙酰亚胺基、叠氮基、重氮基、氰基、氰酰基、磷酸酯、磷酸基、膦酰基、磷酰基、膦基、羧酸酯、丙烯酸酯、癸二酸酯、邻苯二甲酸酯、醋酸酯、氧化物、硼酸盐、过氧化硼酸盐、四硼酸盐、硼烷酸酯、硅烷、正硅酸酯、硅酸盐、或硅酸金属盐,附带条件是RX不是烷基胺含氟表面活性剂,即,R不是氟代烷基胺。
图1和图2概述了本发明的稳定剂中的多种R和X基团。在一些实施方式中,稳定剂可以由分子式RX表示。在其他实施方式中,稳定剂可以由分子式比如RXR′、XRX′和RXR′X表示。本发明中,当稳定剂由分子式RXR′、XRX′和RXR′X表示时,R和R′、或X和X′可以是相同的主体分子或分子部分,或者任选地,它们可以是不同的主体分子或分子部分。
在一些实施方式中,R选自下组:直链或支链硅氧烷、直链或支链碳硅烷、直链或支链烷基、环烷基、杂环基、芳基烷基、杂芳基、及其组合。在一些实施方式中,R是用一个以上羟基、酮基、羰基、羧基、或其组合选择性地取代的烷基、芳基、或硅基聚合物。在一些实施方式中,R是醚、酯、或其组合。在一些实施方式中,R包含聚氧化丙烯或聚氧化乙烯。
在一些实施方式中,R是用一个以上包含胺、氨基、亚胺、亚氨基、酰胺、铵、或其组合的含氮部分选择性地取代的烷基、芳基、或硅基聚合物。
在一些实施方式中,R可以是烷基、亚烷基、炔、烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、烷基氨基烷基、烷基氨基氧基烷基、烷氧基氨基烷基、膦酰基烷基、羧基烷基、羧基烷氧基烷基,其中的任何一种用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。
在一些实施方式中,在此限定的R可以用羟基、羧基、胺、氧化胺、磷酸酯、醋酸酯、羧酸酯、烷基或芳基的铵衍生物、或其组合选择性地取代。在一些实施方式中,R用一个以上羟基、氧、醋酸酯、铵、羧基、氨基、或氧化胺选择性地取代。
在一些实施方式中,R是烷基或芳基,其中的任何一种用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。本发明的实施方式包括:其中R是烷基,并且烷基是C1-30烷基、C1-22烷基、C1-16烷基、C1-12烷基、C1-10烷基、或C1-8烷基。在一些实施方式中,烷基部分是C4-30烷基、C4-22烷基、C4-18烷基、C4-16烷基、C4-14烷基、或C4-12烷基。在一些实施方式中,烷基部分是C6-30烷基、C6-22烷基、C6-18烷基、C6-16烷基、C6-14烷基、或C6-12烷基。在一些实施方式中,烷基是用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代的C7-30烷基、C7-22烷基、C7-18烷基、C7-14烷基、C7-12烷基、或C7-9烷基。
烷基取代基可以包括乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、庚基、辛基、2-甲基丁基、2-乙基丁基、2-丙基丁基、3-甲基丁基、3-乙基丁基、3-丙基戊基、2-甲基戊基、2-乙基戊基、2-丙基戊基、3-甲基戊基、3-乙基戊基、3-丙基戊基、4-甲基戊基、4-乙基戊基、4-丙基戊基、2-甲基己基、2-乙基己基、2-丙基己基、3-甲基己基、3-乙基己基、3-丙基己基、4-甲基己基、4-乙基己基、4-丙基己基、5-甲基己基、5-乙基己基、5-丙基己基、2-甲基庚基、2-乙基庚基、2-丙基庚基、3-甲基庚基、3-乙基庚基、3-丙基庚基、4-甲基庚基、4-乙基庚基、4-丙基庚基、5-甲基庚基、5-乙基庚基、5-丙基庚基、6-甲基庚基、6-乙基庚基、6-丙基庚基、2-甲基辛基、2-乙基辛基、2-丙基辛基、3-甲基辛基、3-乙基辛基、3-丙基辛基、4-甲基辛基、4-乙基辛基、4-丙基辛基、5-甲基辛基、5-乙基辛基、5-丙基辛基、6-甲基辛基、6-乙基辛基、以及6-丙基辛基,其中任何一种可以用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。
在一些实施方式中,R可以是烷基的烯烃同系物,具有一个以上不饱和的碳-碳键。即,在一些实施方式中,在此描述的R的取代物中任何一个可以是不饱和的。R的不饱和取代物的例子包括但不限于:烯基、链烯氧基、链烯氧基烷基、链烯氧基烷氧基烷基、烯基氨基烷基、烯基氨基氧基烷基、烯基氧基氨基烷基、膦酰基烯基、羧基烯基、羧基烯基氧基烷基、羧基烯基氨基烷基、羧基烯基酰氨基烷基。该术语“烯基”指的是C2-22烯基基团,优选C4-18烯基,更优选C6-18烯基或者C7-14烯基。术语烯基包括所有的立体异构体,即,顺反异构体以及E-型和Z-型异构体。在一些实施方式中,不饱和的烃基可以包含炔。该术语“炔”指的是C2-22炔基团,优选C4-18炔,更优选C6-18炔或者C7-14炔,其中烃基链中可以存在一个以上三键。
在一些实施方式中,在此限定的R的取代物中任何一个可以是饱和的。
在一些实施方式中,R可以是烷基或芳基的环状、多环、或杂环衍生物,即,R是环烷基、杂环基、芳基、或杂芳基。在一些实施方式中,环烷基、杂环基、芳基或杂芳基可以用一个以上羟基、羰基、卤素、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代。在一些实施方式中,术语环烷基、杂环基、芳基或杂芳基可以是指双环、或三环。
术语“环烷基”指的是饱和的或者部分不饱和的环化烃基。环烷基基团可以包括C3-8环烷基。典型的环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。
术语“杂环基”或“杂环”指的是被Si、O、N、P、或其组合所间断的环烷基衍生物。更具体地讲,在此使用的术语“杂环基”或者“杂环”指的是饱和的或部分不饱和的3-7元单环的、或3-14元双环的环系,该环系由碳原子和一个到四个独立地选自由Si、O、N、P或其组合所构成的组的杂原子组成。其例子包括但不限于:四氢呋喃基、四氢吡喃基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吡唑烷基、二氢呋喃基、吗啉基、二氢咪唑基、二氢吡喃基、二氢噁唑基、四氢噁唑基、2-氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮双环[2.2.1]庚基、噁嗪基、异噁嗪基、氧硫杂嗪基(oxathiazinyl)等。杂环基可以用一个以上甲基、乙基、氧、卤代基、羟基、氨基、烷氨基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、甲氧甲基、羧基、或其组合选择性地取代。在一些实施方式中,术语“杂环基”指的是在环中含有氧的环烷基,即,环醚比如四氢呋喃或四氢吡喃。在一些实施方式中,术语“杂环基”指的是在环中含有氮和氧的环烷基。
术语“芳基”指的是任何芳香碳环结构、或任何具有芳香性的碳环结构。优选的芳基包括C6-14芳基,尤其优选C6-10芳基,例如苯基或萘基,并且最优选六碳芳基。芳基基团用一个以上甲基、乙基、羟基、烷氧基、氨基、烷氨基、卤代基、羟甲基、羟乙基、羟丙基、甲氧甲基、或羧基选择性地取代。优选芳基用一个以上甲基、乙基、卤代基、羟甲基、羟乙基、或羧基选择性地取代。
术语“杂芳基”指的是芳基衍生物,其中芳环被一个以上Si、O、N、P、或其组合所间断。更具体地讲,术语“杂芳基”指的是5-14元杂芳环系,并且最优选五或六元杂芳环系,其中在环状结构中有一个到四个原子是独立地选自于由Si、O、N、P或其组合所构成的组的杂原子。其例子包括但不限于:四唑基,吡啶基,咪唑基,异恶唑基,呋喃基,恶唑基,噻唑基,吡咯基,噻吩基,吡唑基,三唑基例如1,2,3-三唑基和1,2,4-三唑基,异噻唑基,噁二唑基例如1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基和1,3,4-噁二唑基,噁三唑基,哒嗪基,嘧啶基,吡嗪基,三嗪基例如1,2,3-三嗪基和1,2,4-三唑基,喹啉基,异喹啉基,吲哚基,苯并呋喃基,苯并噻吩基,苯并咪唑基,以及吲唑基。在一些实施方式中,术语“杂芳基”指的是在环中含有氧、氮或两者的芳基。
在一些实施方式中,R是脂肪酸、或脂肪酸的同系物。术语“脂肪酸”指的是用羟基、C1-4烷基、卤代基、或烷氧基选择性地取代的饱和或不饱和的羧基烷基、羧基烷氧基烷基、羧基烷基氨基烷基、羧基烷基酰氨基烷基、或其盐或者酯。在一些实施方式中,羧基烷基是用一个以上Si、O、N、P、或其组合选择性地间断的饱和或不饱和的C2-30的羧基烷基、C2-20的羧基烷基、C2-18的羧基烷基、C2-16的羧基烷基、C2-14的羧基烷基、C2-10的羧基烷基、或C2-8的羧基烷基。在一些实施方式中,羧基烷基是用一个以上Si、O、N、P、或其组合选择性地取代的C6-30的羧基烷基、C6-20的羧基烷基、C6-18的羧基烷基、C6-16的羧基烷基、C6-14的羧基烷基、C6-10的羧基烷基、或C6-8的羧基烷基。在一些实施方式中,羧基烷基是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、十四酸、十六酸、硬脂酸、二十烷酸、或二十二烷酸。
在一些实施方式中,R是脂肪酸酯,即,R是用酯选择性地间断的羧基烷基。用酯间断的羧基烷基的例子包括,但不限于,羧基烷氧基烷基或羧基烷氧基烷氧基烷基。在一些实施方式中,R是脂肪酸的链烷酰胺衍生物,即,R是用酰胺基间断的羧基烷基。例如,在一些实施方式中,R是羧基烷基酰氨基或羧基烷基酰氨基烷基。在一些实施方式中,R是乙氧基化的脂肪酸。
在本发明中,R可以是用Si、O、N、P、或其组合选择性地间断的脂肪酸衍生物,即,在一些实施方式中,R是用Si、O、N、P、或其组合选择性地间断的羧基烷基。在一些实施方式中,R是用卤素选择性地取代的羧基烷基。在一些实施方式中,R是荷电的羧基烷基,即,R是脂肪酸的阴离子或阳离子衍生物。
在一些实施方式中,R是醇类或醇类衍生物。例如,R可以是烷基酚、或醇类的酯。在一些实施方式中,R是用Si、O、N、P、或其组合选择性地间断、用卤素选择性地取代、或两者的醇类或酚类。
在一些实施方式中,R是烷基的酯或聚酯衍生物。例如,在一些实施方式中,R是饱和或不饱和的烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、或烷氧基烷氧基烷氧基烷基,优选C2-20的烷氧基烷基、C2-20的烷氧基烷氧基烷基、或C2-20的烷氧基烷氧基烷氧基烷基;C5-16的烷基、C5-16的烷氧基烷基、C5-16的烷氧基烷氧基烷基、C5-16的烷氧基烷氧基烷氧基烷基;或C7-14的烷氧基烷基、C7-14的烷氧基烷氧基烷基、或C7-14的烷氧基烷氧基烷氧基烷基;其中的任何一种可以用一个以上羟基选择性取代。在一些实施方式中,术语“聚酯”是一种具有通式[(CHq)nCO2Xp]m的化合物,其中,X是C1-10烷基、C1-10烯基、或C1-10烷氧基烷基;p是0或1;q是1或2;n是1-10;而m是1-100,优选1-20或1-10。在一些实施方式中,烷基的酯或聚酯衍生物用一个以上羟基选择性地取代。
在一些实施方式中,R是聚氧化烯。术语“聚氧化烯”指的是被两个以上氧原子间断的亚烷基主体分子或分子部分。在一些实施方式中,术语“聚氧化烯”指的是C1-21、O1-14的聚氧化烯或者C1-14、O1-7的聚氧化烯。适合本发明的聚氧化烯的例子包括,但不限于:聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、聚氧化丁烯、聚氧化戊烯、聚氧化己烯、聚氧化庚烯、或聚氧化辛烯。在一些实施方式中,R是两种以上下述基团的共聚物:聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、聚氧化丁烯、聚氧化戊烯、聚氧化己烯、聚氧化庚烯、或聚氧化辛烯基团。在一些实施方式中,R是具有其他有机或无机部分的乙氧基化的共聚物。
在一些实施方式中,R可以是烷基的聚胺、氧化胺、胺类乙氧基化物及其他胺的衍生物。术语“聚胺衍生物”指的是其中烷基链上两个以上碳原子用氮替换的烷基链。该术语还包括单烷基胺和二烷基胺。术语“氧化胺衍生物”指的是其中烷基链上两个以上碳原子用氮和氧(即,-N-O-)替换的烷基链。例如,R可以是烷基氨基氧基烷基、羧基烷基氨基氧基烷基、烷基氨基氧基烷基、或烷氧基氨基烷基。在一些实施方式中,聚胺衍生物或者氧化胺衍生物用乙氧基化物选择性地取代。
在一些实施方式中,R是硅基聚合物。术语“硅基聚合物”指的是被连接的单体,各个单体含有至少一个硅原子。例如,术语“硅基聚合物”可以包括,但不限于:硅氧烷、硅酮、或碳硅烷。在一些实施方式中,硅基聚合物可以是用不含硅的末端基团进行末端封闭的聚合物。
在一些实施方式中,R是直链、支链、或环状硅氧烷。在一些实施方式中,R是用一个以上羟基、羰基、烷基、卤素、卤代烷基、羟基烷基、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性地取代的硅氧烷。在一些实施方式中,R是Si1-21、O1-21的硅氧烷、Si3-14、O3-14的硅氧烷、或Si5-10、O5-10的硅氧烷。在其他实施方式中,R是碳硅烷。术语“碳硅烷”指的是一种在其骨架上具有碳和硅的聚合物。在一些实施方式中,R是用一个以上羟基、羰基、烷基、卤素、卤代烷基、羟烷基、磷酸酯、乙酰基、铵、或其组合选择性取代的碳硅烷。在一些实施方式中、R是Si1-21、C1-21的碳硅烷;Si3-14、C1-14的碳硅烷;或Si5-10、C5-10的碳硅烷。在一些实施方式中,硅氧烷或碳硅烷是末端封闭的,例如,用乙烯基或硅烷酮末端封闭。在一些实施方式中,R是用一个以上烷基、卤素、卤代烷基、羟基烷基、或其组合选择性取代的硅氧烷或碳硅烷。例如,在一些实施方式中,硅氧烷或者碳硅烷可以是甲基、乙基、丙基、丁基、或戊基取代物,或者是它们的组合物。
在一些实施方式中,R包含具有聚醚、聚酯、多元醇、聚胺、聚氨酯、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、以及其他聚合部分的硅酮共聚物。例如,在一些实施方式中,R是用一个以上聚酯、多元醇、聚胺、聚氨酯、聚氧化乙烯、聚氧化丙烯、或其组合选择性取代的硅氧烷或者碳硅烷。本发明的硅氧烷或碳硅烷可以包括它们的盐、醚、以及酯。在一些实施方式中,R是荷电的硅氧烷或碳硅烷,例如,硅氧烷的阳离子衍生物或阴离子衍生物。在一些实施方式中,R是硅氧烷或碳硅烷的盐,例如,铵盐。在一些实施方式中,R包含用长链酯、长链醇、长链胺、或其组合衍生的硅酮。
通过本发明可以提供多种X官能团。在一些实施方式中,X是硫或磷的氧代阴离子或氧化物、氮的氧代阴离子或羰基衍生物、羧酸酯、硼酸盐、或硅酸酯。在一些实施方式中,X是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、亚硫酸酯、亚砜、牛磺酸盐、磺基丁二酸酯、磺化甜菜碱、硫酸甜菜碱、氨磺酰、磷酸酯、磷酸基、膦酰基、磷酰基、硝酸酯、亚硝酸酯、氨基、亚氨基、异氰基、异硫氰基、乙酰胺基、乙酰亚胺基、叠氮基、重氮基、氰基、氰酰基、烷基羧酸酯、丙烯酸酯、癸二酸酯、邻苯二甲酸酯、硼酸盐、四硼酸盐、正硅酸酯、硅酸盐、硅酸金属盐、亚氯酸盐、氯化物、碘化物、碘酸盐、溴化物、溴酸盐、氟化物、或氟酸盐。在一些实施方式中,X是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、磺基丁二酸酯、或牛磺酸盐。
在一些实施方式中,X是含有硫原子的官能团。其例子包括,但不限于,任何含有硫酸酯、磺酸酯或磺酸的官能团。术语“硫的氧代阴离子或氧化物”指的是硫酸酯、磺酸、磺酸酯、亚硫酸酯、牛磺酸盐、磺基丁二酸酯、磺化甜菜碱、氨磺酰、甲氧基甲酰胺、氨磺酰、或次磺酰。
在本发明的一些实施方式中,X可以是任何含有卤素的官能团。其例子包括,但不限于,任何含有氯、氟、溴、碘基团、或其组合的官能团。在一些实施方式中,X可以是亚氯酸盐、氯化物、碘化物、碘酸盐、溴化物、溴酸盐、氟化物或氟酸盐。
在本发明的一些实施方式中,X可以是任何含有氮的官能团。其例子包括,但不限于,任何含有硝酸酯、亚硝酸酯、硝胺、氨基、亚氨基、异氰酸基、异硫氰基、乙酰胺基、乙酰亚胺基、叠氮基、重氮基、氰基、氰酰基、亚硝基、亚硝基亚氨基、硝氨基、硝基、或其组合的官能团。
在一些实施方式中,X可以是任何含有磷的官能团。术语“磷的氧代阴离子或氧化物”指的是磷酸酯、磷酸基、膦酰基、磷酰基、或膦基。
在一些实施方式中、X是羧酸酯、丙烯酸酯、癸二酸酯、邻苯二甲酸酯、醋酸酯、或氧化物。在一些实施方式中,X可以是任何含有硼的官能团。其例子包括,但不限于,硼酸盐、过氧化硼酸盐、四硼酸盐、或硼烷酸酯。
在本发明中,X可以是任何含有硅原子的官能团。其例子包括,但不限于,硅烷、正硅酸酯、硅酸盐、或硅酸金属盐。
筛选出许多稳定剂以确定其(视需要)可以代替烷基胺含氟表面活性剂,并且对测定准确度也没有负面影响。不受理论限制,我们假定稳定剂可以保持样品中游离的分析物和被结合的分析物之间的比率,从而抑制在主体的生物流体中或体外体系中发现的游离的未结合的分析物相对被结合的分析物平衡的失调。
在一种实施方式中,稳定剂包含通式RX,其中,R包括含有烷基、芳基、脂肪酸、醇类、酯、醚、氧基烷基化物、或硅氧烷的化学基团,而X包括含有硫的化学基团。当RX包含卤素时,卤素部分可以是任何卤素,例如,F、Cl、Br、或I,附带条件是本发明不包含烷基胺含氟表面活性剂比如FC100。
在一种实施方式中,本发明将稳定剂识别为烷基醇类衍生物化合物,例如2-乙基-己基硫酸酯(EHS)。这样的烷基醇类衍生物化合物的一般化学结构是CnH2n+1X,其中,n为约6至约18;而X是硫酸酯衍生物,例如,对于2-乙基-己基硫酸钠盐的SO4-Na+,其具有化学结构:CH3(CH2)3CH(C2H5)CH2OSO3 -Na+。X也可以是任何图2中基团X栏公开的含硫基团。
适用于本发明的其他稳定剂包括:1-己烷磺酸或其盐(例如,Na+盐);1-庚烷磺酸或其盐(例如,Na+盐);1-辛烷磺酸或其盐(例如,Na+盐);1-癸烷磺酸或其盐(例如,Na+盐);C14-16烯烃磺酸钠(CAS#68439-57-6);十二烷基硫酸钠;二辛磺基琥珀酸钠;N-油基-N-甲基牛磺酸钠;聚氧化乙烯月桂烷硫酸钠(分子量:346);烷基苯甲基磺酸胺盐(分子量:385);以及乙基-己基硫酸钠。
本发明提供了新的并且有用的组合物,用于液体中游离的或未结合的分析物的浓度的诊断测量。在一些实施方式中,分析物存在于生物流体中。生物流体可以是血浆或者血清。其也可以由精液、唾液、尿液、粪便液、脑脊髓液、或胃液组成。然而,一般来讲,生物流体是血浆或血清。本发明的组合物也可以在包括细胞培养上清液或滤液的体外体系中使用。术语“生物流体”包括来自生物学有机体的液体,以及衍生于生物学有机体的液体,例如,已经被分级、稀释、化学方法改变、或其组合的液体。
分析物可以是任何小分子,例如,但不限于,激素、药物、或维生素。在一些实施方式中,分析物以在游离的未结合状况与结合状况(例如被蛋白质结合)之间的平衡状态存在。例如,分析物可以是甲状腺激素或维生素B12。适用于本发明的其他分析物包括下述种类的脊椎动物激素:·胺类激素:a.酪氨酸衍生物(简单的芳香环)-儿茶酚胺(例如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺)。-甲状腺激素(例如,T4,或者T3、T2、以及T1的异构体)。b.色氨酸衍生物(多环和杂环的芳香化合物)-褪黑素、5-羟色胺。·肽类激素:a.小肽,例如-具有6个氨基酸残基的血管紧张素IV、分别具有7个和8个氨基酸的血管紧张素III和血管紧张素II。由于小分子的大小,这些肽可能会与血浆载体分子比如蛋白质结合起来。-大脑利钠剂的肽(BNP),有32个氨基酸。其他利钠剂的肽类激素包括心房的利钠剂的肽(ANP)和C型利钠剂的肽(CNP)。-降血钙素,是32个氨基酸的肽,来源于前体--前降血钙素(procalcitonin)。-促肾上腺皮质激素(ACTH),具有39个氨基酸。-胰岛素,是51个氨基酸的肽。-甲状旁腺激素(PTH),有84个氨基酸。PTH还可以以具有不同临床应用的数种不同的片段出现:完整的PTH;N-末端PTH;中等分子PTH、以及C-末端PTH。b.大肽(大肽在蛋白质多聚体分解后或者分裂以后可以产生较小蛋白质分子。这些较小分子可以在与载体分子的平衡中循环),例如:-促卵泡激素(FSH)。-促黄体生成激素(LH)。-促甲状腺激素(TSH)。-绒毛膜促性腺激素(例如hCG)。-促甲状腺激素释放激素(TRH)。-催乳激素(PRL)。-促红细胞生成素(EPO)。·甾族化合物或固醇类激素:本发明可用于具有与结合于血浆转运分子比如蛋白质的形式相平衡的游离形式的那些甾族化合物或固醇类激素。游离形式是生物学活性的并且具有临床应用性。a.甾体激素,例如:-皮质醇:约4%的循环性皮质醇是游离的,因此对受体有用。剩余的皮质醇结合于包括皮质类固醇结合球蛋白(CBG)和白蛋白在内的蛋白质上。-睾丸激素:约2-3%的循环性睾丸激素是游离的;其余的睾丸激素结合于包括性激素结合蛋白(SHBG,约44%)和皮质醇结合球蛋白(CBG,约3.5%)在内的睾丸酮结合蛋白上,以及结合于白蛋白(约50%)上。-脱氢表雄甾酮(DHEA)。较小百分比的DHEA以游离形式存在,虽然大多数DHEA被较强地结合于性类固醇结合球蛋白上并且被较弱地结合于皮质类固醇结合球蛋白和白蛋白上。-黄体酮:较小百分比的黄体酮以游离形式存在,虽然大多数黄体酮被结合于皮质醇结合球蛋白和白蛋白上。-雌三醇:雌三醇以游离形式或者与性激素结合蛋白结合的形式存在。-雌二醇:约1-3%的循环性雌二醇是游离的,而其余的雌二醇较强地结合于雌激素结合球蛋白上。b.固醇类激素:-维生素D衍生物。-钙三醇。
术语“甲状腺激素”指的是甲状腺素(T4)、三碘甲腺原氨酸(T3)、二碘甲状腺原氨酸(T2)、一碘甲腺原氨酸(T1)、及其组合物。应理解,甲状腺激素可以由它们的盐、它们的L-型或D-型对映体、或它们的去碘化形式和同分异构形式组成。
为本发明的目的,应理解,术语“分析物”包含特定分析物的所有对映体和异构体,其或在混合物中、或在均一的环境中。对于生物流体中的分析物,分析物可以外源地或内源地产生。在一些实施方式中,分析物可以是在生物流体中,该生物流体来自灵长类动物比如猿、猴子、猩猩、狒狒、长臂猿、以及黑猩猩;犬科动物比如狗和狼;猫科动物比如猫、狮子、以及老虎;马科动物比如马、驴、以及斑马;食用动物比如牛、猪、以及绵羊;以及兔子、小鼠、大鼠、豚鼠、以及白鼬。分析物还可以是在液体中,该液体来自模型动物,例如,疾病模型动物比如小鼠、大鼠、或其他的实验动物;有经济价值的动物,例如,经济性重要的种畜、竞赛动物、展示动物、古老性动物、稀有动物或者濒于灭绝的动物、或伴生动物。特别地,分析物存在于来自人类的生物流体。在此使用的术语“主体”指的是包括人类和非人类在内的任何哺乳动物,例如,但不限于,驯养的动物和家畜、动物园动物、体育动物、以及宠物。
稳定剂可以被并入试剂缓冲液、或洗涤缓冲液、或两者中。还可以将其与捕获配体混合。在其他的实施方式中,其可以是单独的溶液。
在一种实施方式中,本发明的目的在于提供一种用于测量分析物浓度的测定的组合物。在一些游离分析物的实施方式中,组合物包括捕获配体和稳定剂。
捕获配体是对分析物特异的,并且可以包含任何能够选择性地结合所研究的游离分析物的物质。捕获配体的例子包括,但不限于:抗体,抗体片段,抗体仿制品,或分析物特异性结合蛋白质比如内因子或叶酸(folate)结合蛋白、及其组合物。
在此使用的术语“抗体”应包括所有的形式,例如,但不限于:多克隆、单克隆、纯化的IgG、纯化的IgM、纯化的IgA、或其组合物;单链抗体(美国专利No.4,946,778)、嵌合或人源化抗体(Morrison et al.,1984,Proc.Nat′l Acad.Sci.USA 81:6851;Neuberger etal.,1984,Nature 81:6851)和互补确定的区域(CDR;参见Verhoeyen和Windust,分子免疫学(第二版),B.D.Hames和D.M.Glover,IRL出版社,奥克斯福德大学出版社,1996,第283-325页)。术语“抗体片段”包括,但不限于:片段比如Fv、单链Fv(scFv)、F(ab′)2,以及Fab片段(Harlow和Leon,1988,抗体,冷泉港(Cold Spring Harbor))。本发明的抗体和抗体片段可以通过任何惯常的方法得到,例如,但不限于,《抗体》:实验手册(E.Harlow,D.Lane,ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的方法。将其全部内容引入本发明作为参考。
术语“抗体仿制品”指的是模仿抗体功能的化合物。抗体仿制品通常尺寸较小,使其避免引起免疫原性响应。有数种方法可获得这些抗体仿制品的如下结构和制品,比如可选的蛋白质骨架;包括RNA的结构;非天然的低聚体比如苯二氮、β-转角仿制品、蛋白酶抑制剂和嘌呤衍生物;非天然的生物高聚物比如寡聚氨基甲酸盐、寡聚尿和低聚砜;以及如Hsieh-Wilson等((1996)Ace.Chem Res.29:164-170)和美国专利No.5,770,380所述的多种取代物与架构比如氧杂蒽和立方烷的连接体
术语“内因子”指的是为吸收维生素B12所必需的糖蛋白。在一些实施方式中,术语“内因子”指的是人类内因子。
术语“分析物特异性结合蛋白质”可以包括任何特异性地结合分析物的非抗体的蛋白质。分析物与它们的分析物特异性结合蛋白质的例子包括,但不限于:甲状腺素/甲状腺素结合球蛋白;酶抑制剂、辅酶或辅助因子/酶;皮质醇/皮质醇结合蛋白;维生素B12/内因子;以及叶酸/叶酸盐结合蛋白。在一些实施方式中,分析物特异性结合蛋白质是捕获配体。在一些实施方式中,分析物特异性结合蛋白质是叶酸盐结合蛋白或内因子。
在一种实施方式中,本发明的组合物可以包含捕获配体、稳定剂,并且可以进一步包含盐比如铵盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、锌盐、氯化物盐、羧酸盐、磷酸盐、无机的硫酸盐、或其组合物。
在一种实施方式中,本发明的目的在于提供一种用于测量分析物浓度的测定的组合物。在一些实施方式中,分析物作为游离的分析物和被结合的分析物存在,并且本发明的目的在于提供一种测量游离分析物浓度的测定方法。术语“游离分析物”指的是未被或者特异性地或者非特异性地结合于除捕获配体之外的其它分子种类比如蛋白质上的分析物。因此,在液体中游离的分析物未与其它分子种类相连接。术语“被结合的分析物”指的是或者特异性地或者非特异性地与除捕获配体之外的其它分子种类比如蛋白质相联接的分析物。在一些实施方式中,为稳定游离分析物与被结合的分析物的比率,本发明使用一种以上包含通式RX的稳定剂。
稳定剂可以以各种浓度存在。在此当描述稳定剂的浓度时,术语“体积百分数”指的是每单位体积最终组合物中稳定剂的体积。术语“最终组合物”指的是包含捕获配体和稳定剂的组合物。因此,例如,如果将1mL的稳定剂加入49mL的洗涤缓冲液中,并且将稳定剂/洗涤缓冲液置于50mL含有分析物和捕获配体的溶液中,那么体积百分数将为1%的稳定剂(即,在100mL最终组合物中有1mL稳定剂)。在最终组合物中稳定剂的合适的体积百分数包括,但不限于,约0.00001至约0.5体积百分数、约0.00005至约0.4体积百分数、约0.00009至约0.3体积百分数、约0.0001至约0.1体积百分数、约0.0002至约0.2体积百分数、或约0.00015至约0.15体积百分数,其中,上述体积百分数是以最终组合物的总体积为基础的。因为分析物对于其分析物特异性结合蛋白质的结合亲合力确定了在游离分析物和被结合的分析物形式之间的平衡,故本领域的技术人员可以以逐次情形为基础优化用于特定分析物的稳定剂的百分比。
还可以以每升最终组合物中稳定剂摩尔的形式测量稳定剂的浓度。在最终组合物中稳定剂的浓度通常可以是约1至约900微摩尔、约5至约850微摩尔、约25至约800微摩尔、约40至约800微摩尔、约5至约750微摩尔、约30至约700微摩尔、或约25至约600微摩尔。
在稳定剂是EHS的实施方式中,在最终组合物中EHS的体积分数通常是约0.0001至约0.05体积百分数、约0.0005至约0.04、约0.0009至约0.03、约0.001至约0.02、约0.002至约0.019、约0.004至约0.015、或约0.005至约0.01体积百分数,其中,上述体积百分数是以最终组合物的总体积为基础的。
在稳定剂是EHS的实施方式中,在最终组合物中EHS的浓度通常可以是约50至约800微摩尔、约100至约750微摩尔、约150至约700微摩尔、约150至约650微摩尔、约200至约600微摩尔、约250至约550微摩尔、或约300至约500微摩尔。
就本发明的方法而言,应理解,稳定剂可以或者当样品刚一与对分析物特异的捕获配体混合时就存在、或者此后立即存在。例如,可以将稳定剂依序加入下述样品与对分析物特异的捕获配体的组合物,该捕获配体作为试剂缓冲液、洗涤缓冲液、或两者的成分。
在某些实施方式中,本发明的目的还在于提供一种测定游离分析物浓度的方法,该方法包含:(a)将用于游离分析物的捕获配体加入容器;(b)将稳定剂加入容器;(c)将包含游离分析物的样品加入容器;(d)将检测体系加入容器;以及(e)通过使用检测体系,测量样品中游离分析物的浓度。
应当承认,用于测量游离分析物浓度的方法的步骤可以以各种依序的顺序进行,附带条件是步骤(e)必须是最后的步骤。因此,例如,步骤(b)可以先于步骤(a)、步骤(c)可以先于步骤(b)、或两者皆有。
在一些实施方式中,容器可以包括小瓶、试管、反应混合容器、微孔板孔、横向流动体系薄膜、或其他的液体流动系统中的稳定环节。
在此使用的术语“检测体系”指的是一种以上已知的直接或间接地检测分析物的体系中的成分。
在一些实施方式中,检测体系包含放射免疫测定、酶联免疫吸附测定、酶免疫测定、化学发光免疫测定法、生物发光免疫测定法、或荧光免疫测定法中的成分。这样的检测体系在文献中众所周知。在一些实施方式中,检测体系包含涂敷有捕获配体特异性结合分子、可检测的标签、或其组合的顺磁性颗粒。在一些实施方式中,捕获配体特异性结合分子具有半抗原特异性,并且捕获配体是半抗原化物。例如,在一些实施方式中,半抗原是生物素。在一些实施方式中,捕获配体特异性结合分子选自下组:链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素特异性抗体、生物素特异性抗体片段、以及生物素特异性抗体仿制品。
在一些实施方式中,检测体系包含可检测的标签。这里使用的术语“可检测的标签”具有本技术领域普通的意思,并且指的是原子(例如,放射性核)、分子(例如,荧光素)、或复合物,该复合物或者可以被用于检测(例如,基于物理或化学性质)或者可以被用于指示分子的存在、或者被用于显示另一个分子对其的结合,所述结合是共价结合或其他方式的联接。术语“标签”还指被共价结合或以其他方式联接的作用于底物上以产生可检测的原子、分子或者复合物的分子(例如,生物分子比如酶)。适用于本发明的可检测的标签包括任何可通过光谱的、光化学的、放射性的、生物化学的、免疫化学的、电的、光学的或者化学的方法检测的组合物。
在本发明中有用的标签包括荧光染料(例如,荧光素、德克萨斯红、若丹明、绿色荧光蛋白、增强绿色荧光蛋白、丽丝胺、藻红蛋白、Cy2、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、氟X、SyBR绿I和II[分子探针]等)、放射性同位素示踪(例如,3H、125I、35S、14C、或32P)、酶(例如,水解酶,特别是磷酸酯酶比如碱性磷酸酶;酯酶和糖苷酶;或氧化还原酶,特别是过氧化物酶例如辣根过氧化酶;以及其它在ELISA中常用的酶)、底物、辅助因子、抑制剂、化学发光基团、显色剂、以及比色标签例如胶态金或者有色玻璃或塑料(例如,聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶等)珠。用于检测这些标签的技术在本领域中是众所周知的。
因此,例如,通过使用闪烁计数器可以检测出放射性同位素示踪;通过使用光检测器来检测发射光可以检测出化学发光标签和荧光标记(例如,在荧光激活细胞分类术中使用)。典型地,通过向酶提供底物并且检测通过酶作用于底物而产生的反应产物,可检测酶催化标签。并且通过简单地显像有色标签可检测比色标签。
因此,标签可以是任何可通过光谱的、光化学的、放射性的、生物化学的、免疫化学的、电的、光学的或者化学的方法检测的组合物。该标签可以被直接或间接地偶联于根据本技术领域众所周知的方法的测定中的期望成分。非放射性标签经常是通过间接手段而被附接。在一些实施方式中,可检测的标签或者是原有地可检测,或者共价结合于信号产生体系比如可检测的酶、荧光化合物、或化学发光化合物(例如,用于游离T4的竞争性免疫测定中的T4-ALP或T3-ALP),该标签与分析物(例如,液体样品中的游离T4)相竞争,用于结合捕获配体(例如,T4-特异性的单克隆抗体)。在一些实施方式中,捕获配体可以被直接地固定在固相上。在一些实施方式中,捕获配体可以被生物素化,其用于通过与捕获配体特异性结合分子比如链霉抗生物素蛋白或生物素特异性的单克隆抗体相结合而间接地固定在固相上。
如果分析物具有天然的分析物特异性结合分子,那么在检测体系中,这样的分析物可以通过使用分析物或分析物类似物的被标记的形式、或者分析物特异性结合分子的形式而被检测或者被测量。在一些实施方式中,捕获配体(例如,内因子(IF)特异性的单克隆抗体)与分析物(例如,维生素B12)相竞争,用于结合天然的、对分析物特异的可检测的标签(例如,用于维生素B12的竞争性免疫测定中的IF-ALP)。在一些实施方式中,捕获配体可以被直接地固定在固相上。在一些实施方式中,捕获配体可以被生物素化,其用于通过与捕获配体特异性结合分子比如链霉抗生物素蛋白或生物素特异性的单克隆抗体相结合而间接地固定在固相上。该可检测的标签或者是原有地可检测,或者共价结合于信号产生体系比如可检测的酶、荧光性化合物、或化学发光化合物上。这样的可检测的标签可以被直接地接合于信号产生化合物上,例如,与酶或荧光团相接合。用于检测标签的技术在本领域是众所周知的,并且包括,但不限于化学发光试剂、比色试剂、能量转移剂、酶、酶反应底物、荧光剂或放射性同位素的使用。酶可以选自含有下述酶的组:碱性磷酸酶、淀粉酶、荧光素酶、过氧化氢酶、β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖-6-脱氢酶、己糖激酶、辣根过氧化物酶、内酰胺酶、尿素酶和苹果酸脱氢酶。底物包含在先标签已知对其会起作用的那些分子基团。
在本发明的一些实施方式中,捕获配体被固定在固相上。固相可以由蛋白质偶联表面组成,包括:例如,微孔板、胶态金属颗粒、氧化铁颗粒、聚合物小球、纳米颗粒或微粒。另外,固相可以由在分离系统(例如分馏、沉淀、或离心)中起固相作用的化合物或分子聚集物组成。
在某些实施方式中,本发明的目的还在于提供一种用于估计游离分析物浓度的试剂盒,该试剂盒包含:(a)用于游离分析物的捕获配体;(b)稳定剂;以及(c)检测体系。
在一些实施方式中,试剂盒还包含(d)参考标准。取决于所研究的分析物,可以使用各种参考标准。一般来讲,参考标准包含具有已知浓度并且被用于估计特定待测分析物浓度的分析物或其类似物。该参考标准可以包含纯化的分析物、重组体、天然的或合成的分析物、药物、激素或维生素。参考标准基质的基质部分包含可以近似于待测样品中分析物的环境的生物流体或合成液体。
在一个特定的实施方式中,通过使用2-乙基-己基硫酸酯(EHS)和/或相关化合物作为稳定剂,本发明提高了测量游离的非蛋白质结合的甲状腺激素浓度的测定精度。本发明进一步提高了测量存在于主体体液的甲状腺激素中有生物利用价值的部分或游离部分的诊断精度。通过稳定化体液比如血清或血浆中固有的游离的非蛋白质结合的激素与蛋白质结合的激素的平衡性,带来浓度精度测量的提高。
在本实施方式中,本发明使用磺化或硫酸酯化小分子作为稳定剂的阴离子盐成分。通常,硫酸酯或者磺酸酯比如8-苯胺基萘-1-磺酸酯(ANS)被用于替换被蛋白质结合的分析物,以便测量全部(结合的+游离的)激素。因此,可预料到具有磺酸酯或硫酸酯基团的分子作为稳定剂而包含入组合物会导致在游离激素组分或者过量样品诊断误差方面的人为的增加。因此,本发明是料想不到的。
在本实施方式中,通过作为稳定剂而被加入至测定反应,具有磺酸酯或硫酸酯基团的表面活性剂或者非表面活性剂提高了免疫测定的一致性。不受理论限制,假定用于能够使游离的甲状腺激素浓度测量精确化的机制是:通过在反应早期添加EHS、或其他小链(6至18个碳)阴离子硫酸酯或者磺酸酯,稳定了游离激素与被结合激素间的平衡性。在各种硫酸酯化或者磺化化合物中,具有空间利用性的硫酸酯或磺酸酯的那些化合物作为合适的稳定剂而起作用。在一些实施方式中,其他对于合适的稳定剂重要的因素通过通式RX进行描述,其中,R包含短链碳氢化合物(使分子一端具有疏水性);并且其中X包含较小的亲水基,例如,含有一个以上氧原子的较小的化学基团。并非限制性的图1和图2显示了一些可以被组合从而形成本发明稳定剂的不同的R基团和X基团。
在本发明的一种实施方式中,分析物是甲状腺激素。下面是关于甲状腺激素应注意的兴趣点。1.甲状腺素(T4)是由甲状腺产生的必需激素。在甲状腺中三碘甲腺原氨酸(T3)可以直接地从甲状腺球蛋白中释放,但是大多数T3是在身体其他部分中通过甲状腺素脱碘而制造出来的。2.经过与酶-甲状腺过氧化酶(thyroperoxidase)反应,碘被共价结合于甲状腺球蛋白分子中的酪氨酸残基,形成一碘酪氨酸(MIT)和二碘酪氨酸(DIT)。通过连接DIT的两个部分,甲状腺素被制造出来。一分子MIT和一分子DIT的组合产生了三碘甲腺原氨酸。在甲状腺球蛋白上MIT和DIT被原位形成,作为T4和T3激素的无活性的前体。在溶酶体消化液中蛋白酶碘化了甲状腺球蛋白,释放T3和T4。MIT和DIT还是蛋白水解作用的产物,但是它们被碘化酪氨酸脱卤素酶原位降解。3.除T4和T3之外的甲状腺的其他组成包括二碘甲腺原氨酸(T2)和一碘甲腺原氨酸(T1)。4.甲碘安(Thyronamine)是甲状腺激素--甲状腺素(T4)和3,5,3′-三碘甲腺原氨酸(T3)的脱去羧基和去碘酸化的代谢产物。5.在甲状腺中的滤泡细胞合成含有碘的甲状腺激素、T4和T3;甲状腺中的甲状滤泡旁细胞产生降钙素,其为由较大的多肽前降血钙素裂解来的32个氨基酸的肽类激素。
血液中的甲状腺素(T4)、三碘甲腺原氨酸(T3)、二碘甲腺原氨酸(T2)、以及一碘甲腺原氨酸(T1)可以被结合于血清蛋白,因此仅一小部分可以以游离的无蛋白质结合的形式、或者称为有生物利用价值的部分而被分配。该游离物的含量在主体甲状腺疾病状态下或增或减。例如,在甲状腺机能减退症中,血液中游离的无蛋白质结合的小部分被减小;反之,在甲亢中,无蛋白质结合的小部分被提高。
游离甲状腺素(FT4)测试被用作甲状腺功能的直接测量法,并且通常被内科医师要求作为继续的、或与促甲状腺激素(TSH)测试同时使用,以便确定主体的甲状腺状态是否是甲状腺机能正常(健康的甲状腺功能)、甲状腺功能减退或者甲状腺功能亢进。然而,与误导性的TSH测量法相比较,其更普遍地会遭遇误导性的FT4测试。这是因为结合蛋白固有地依赖于所有游离的无蛋白质结合的甲状腺激素及其它可以改变游离与被结合间平衡性的干扰因子。因此,当为适当的甲状腺功能测试来自个体的样品时,重要的是要包括稳定剂以稳定化FT4。
在本发明的一种实施方式中,在加入含有分析物的样品之前,将稳定剂加入测定物中。在其他实施方式中,可以在加入含有分析物的样品后,将稳定剂加入测定物中,例如,作为试剂缓冲液的一部分加入。在一些实施方式中,稳定剂是含有捕获配体(例如,对分析物特异的抗体)的试剂盒的一部分。在一些实施方式中,可以以多种方式将本发明的稳定剂加入到对分析物特异的测定物例如FT4测定物中。例如,可以利用小瓶体系、缓冲系统、或包装体系将稳定剂加入。在小瓶体系中,将稳定剂例如一种以上磺化化合物从小瓶加入到反应混合物中。在缓冲系统中,稳定剂,例如,一种以上磺化化合物是加入到反应混合物中的洗涤缓冲溶液的一部分。在包装体系中,将稳定剂例如一种以上磺化化合物从含有对分析物特异的抗体的试剂包装的孔中取出,并且加入到含有反应混合物的容器中。
BCI公司的Access FT4测定系统(BCI,富勒敦市,加利福尼亚州)被用于测量主体血清或血浆中的游离的无蛋白质结合的甲状腺素浓度。通过在洗液中使用烷基胺含氟表面活性剂,该测定法被第一次开发。该洗液在测定反应物释放后被用作探针清除剂(probepurge),并且还被用作洗涤溶液。为了用更多对环境无害的碳氢化合物表面活性剂取代洗液表面活性剂,开发了本发明。本发明的组合物可以含有,但是不局限于:蛋白质、表面活性剂、缓冲液离子、以及不会显著地扰乱血清或血浆中甲状腺素游离的无蛋白质结合的部分与被蛋白质结合的部分之间平衡性的盐类组合物。甲状腺素结合蛋白由白蛋白、甲状腺素结合球蛋白、以及转甲状腺素蛋白(transthyretin)组成。
在本发明的一种实施方式中,EHS是稳定剂并且在优化的浓度范围内被滴定,对于FT4而言在最终的反应组合物中为约0.002%体积/体积至约0.015%体积/体积,优选0.004%体积/体积(或181微摩尔),以便有助于保持游离与被结合间的平衡性。
下述实施例阐明了使用本发明的操作方式,例举了一种以上实施例,但并非所有的示例性的本发明实施方式皆可被本发明人所预料,因此,无论如何它们都不是对本发明和权利要求范围的限制。实施例
Access Free T4测定(BCI公司)是两步酶免疫测定法。将偶联于生物素的单克隆抗甲状腺素(T4)抗体(BCI公司)、含有T4的生物样品、含有稳定剂的蛋白质缓冲溶液、以及涂敷链霉抗生物素蛋白的固相加入反应容器。在该第一次孵育期间,偶联于生物素的抗T4抗体结合于样品中的固相的游离T4上。在反应容器中孵育后,被结合于固相上的材料被磁场保持,同时未结合的材料被洗去。接着,将蛋白质缓冲液和三碘甲腺原氨酸(T3)-碱性磷酸酶结合物加入反应容器。
T3-碱性磷酸酶结合物结合于空的抗T4抗体结合位点。在反应容器中孵育后,被结合于固相上的材料被磁场保持,同时未结合的材料被洗去。然后,将化学发光底物Lumi-Phos530(Lumigen公司,萨斯菲尔德市,密歇根州)加入容器,并且用光度计测量反应产生的光。产光量与样品中游离T4的浓度成反比。样品中的分析物含量通过累积的多点标准曲线确定。血清和血浆(肝素)是推荐的样品。
BCI公司的Access Free T4A33070A测定试剂盒包括Access Free T4试剂包产品目录号No.33880:每个包包括100个测定数据、2个包装、50项测试。该试剂盒提供得即可使用。该试剂包含下述试剂A至E:
试剂A:在具有蛋白质(家禽)、表面活性剂、0.125%NaN3、以及0.125%ProClin300(购自罗门哈斯公司,费城,宾夕法尼亚州)的TRIS缓冲液中的涂敷有链霉抗生物素蛋白的Dynabeads顺磁性颗粒。
试剂B:具有蛋白质(家禽的)、表面活性剂、<0.1%NaN3、以及0.1%ProClin300的TRIS缓冲盐水。
试剂C:具有蛋白质(家禽的)、表面活性剂、0.125%NaN3、以及0.125%ProClin300的TRIS缓冲盐水。
试剂D:在具有蛋白质(牛的)、表面活性剂、<0.1%NaN3、以及0.1%ProClin300的TRIS缓冲盐水中的三碘甲腺原氨酸-碱性磷酸酶(牛的)结合物。
试剂E:在具有蛋白质(家禽的和鼠科的)、表面活性剂和稳定剂、0.125%NaN3、以及0.125%ProClin300的TRIS缓冲液中的偶联于生物素上的小鼠单克隆抗甲状腺素(T4)。
一种附加的试剂,其并非试剂包本身的一部分,并且用于方便地筛选许多稳定剂,其被称为小瓶试剂F。小瓶试剂F是含有至少一种稳定剂的缓冲液(例如,作为图3或图4中参照的磺化表面活性剂)。
实施例1
稳定剂仅在试剂包的试剂E中
第一反应包含下述向反应容器的依序添加:1)50μL试剂E(含有稳定剂,例如,0.016%EHS);2)30μL含有分析物的样品;3)30μL系统洗涤缓冲液(不包含稳定剂);4)30μL试剂B(不包含稳定剂);5)50μL试剂A。在孵育和洗涤反应容器后,第二反应包含下述向反应容器的依序添加:6)220μL试剂C;7)50μL试剂D;8)80μL系统洗涤缓冲液(不包含稳定剂)。在孵育和洗涤反应容器后,通过使用检测体系测量样品中游离分析物的浓度。
实施例2
稳定剂仅在试剂包的试剂B中
第一反应包含下述向反应容器的依序添加:1)50μL试剂E(不包含稳定剂);2)30μL含有分析物的样品;3)30μL系统洗涤缓冲液(不包含稳定剂);4)30μL试剂B(含有稳定剂,例如,0.016%EHS);5)50μL试剂A。在孵育和洗涤反应容器后,第二反应包含下述向反应容器的依序添加:6)220μL试剂C;7)50μL试剂D;8)80μL系统洗涤缓冲液(不包含稳定剂)。在孵育和洗涤反应容器后,通过使用检测体系测量样品中游离分析物的浓度。
实施例3
稳定剂仅在小瓶系统的小瓶试剂F中
第一反应包含下述向反应容器的依序添加:1)50μL试剂E(不包含稳定剂);2)30μL含有分析物的样品;3)30μL小瓶试剂F(含有具有至少一种在图3或图4中作为参照的稳定剂的洗涤缓冲液);4)30μL试剂B(不包含稳定剂);5)50μL试剂A。在孵育和洗涤反应容器后,第二反应包含下述向反应容器的依序添加:6)220μL试剂C;7)50μL试剂D;8)80μL小瓶试剂F(含有具有至少一种在图3或图4中作为参照的稳定剂的洗涤缓冲液);在孵育和洗涤反应容器后,通过使用检测体系测量样品中游离分析物的浓度。
实施例4
稳定剂仅在系统洗涤缓冲液中
第一反应包含下述向反应容器的依序添加:1)50μL试剂E(不包含稳定剂);2)30μL含有分析物的样品;3)30μL在盐基质中的系统洗涤缓冲液,所述盐基质比如是20mM TRIS、0.15MNaCl、0.1%Proclin300、0.1%NaN3、pH 8.0,该系统洗涤缓冲液含有至少一种稳定剂比如在图3或图4中作为参照的EHS或其他磺化表面活性剂;4)30μL试剂B(不包含稳定剂);5)50μL试剂A。在孵育和洗涤反应容器后,第二反应包含下述向反应容器的依序添加:6)220μL试剂C;7)50μL试剂D;8)80μL在盐基质中的系统洗涤缓冲液,所述盐基质比如是20mMTRIS、0.15MNaCl、0.1%Proclin300、0.1%NaN3、pH 8.0,该系统洗涤缓冲液含有至少一种稳定剂比如在图3或图4中作为参照的EHS或其他磺化表面活性剂;在孵育和洗涤反应容器后,通过使用检测体系测量样品中游离分析物的浓度。
这些实施例显示了本发明实施方式的可行性。同时参考一些实施方式,本发明已经得到具体体现和描述。应当理解,这些实施方式仅用于举例,而并非用于限制。在不背离本发明精神和范围的情况下,可以对本发明作出各种形式和细节上的改变。因此,本发明的保护范围和宽度将不会被任何上述示例性的实施方式所限制,而是仅根据随附的权利要求书及其等价形式而限定。
在此引用的所有文件,包括杂志文章或者摘要、公开的或者相应的美国或国外专利申请、出版物或者国外专利、或者任何其他的文件,其全部内容在此都被作为参考文献,包括所有的数据、表、图、以及引用文件中的正文。
Claims (12)
1.稳定剂或其盐在制备用于测量样品中游离甲状腺激素浓度的试剂盒中的应用,其中,所述稳定剂包含通式RX,R是C6-18烷基,X是硫酸酯,磺酸、或磺酸酯;
其中,在该样品中甲状腺激素以游离形式与被结合形式之间的平衡存在,所述测量样品中游离甲状腺激素浓度包括以下步骤:
(a)将用于游离形式的甲状腺激素的捕获配体加入容器;
(b)将稳定剂或其盐加入容器以形成1至900微摩尔的浓度,其中该稳定剂保持样品中游离形式和被结合形式的甲状腺激素之间的平衡;
(c)将包含甲状腺激素的样品加入容器;
(d)将检测体系加入容器;以及
(e)使用检测体系测量样品中游离甲状腺激素的浓度。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述稳定剂是2-乙基-己基硫酸酯、或其盐。
3.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述捕获配体是对甲状腺激素特异的,并且选自于由抗体、抗体片段、甲状腺素结合球蛋白、及其组合物所构成的组。
4.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述检测体系包含涂敷有捕获配体特异性结合分子、可检测的标签、或其组合物的固相。
5.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述固相是顺磁性颗粒。
6.如权利要求4所述的应用,其特征在于,所述捕获配体特异性结合分子
(a)具有半抗原特异性,其中所述捕获配体被半抗原化,其中所述半抗原是生物素;或者
(b)选自下组:链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白、生物素特异性抗体和生物素特异性抗体片段。
7.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述捕获配体被固定在固相上。
8.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述甲状腺激素是甲状腺素T4。
9.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述样品是血清样品或血浆样品。
10.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述稳定剂存在的浓度是0.00001-0.5体积百分数。
11.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述2-乙基-己基硫酸酯或其盐存在的浓度是50-800微摩尔。
12.如权利要求1所述的应用,其特征在于,所述稳定剂是2-乙基-己基硫酸酯或其盐,所述稳定剂存在的浓度是0.0001-0.05体积百分数。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US83378606P | 2006-07-28 | 2006-07-28 | |
US60/833,786 | 2006-07-28 | ||
PCT/US2007/016420 WO2008039266A2 (en) | 2006-07-28 | 2007-07-20 | Stabilizing agents and capture ligands for use in assays measuring analyte concentrations |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101512342A CN101512342A (zh) | 2009-08-19 |
CN101512342B true CN101512342B (zh) | 2017-07-14 |
Family
ID=39230736
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN200780032399.XA Expired - Fee Related CN101512342B (zh) | 2006-07-28 | 2007-07-20 | 用于测量分析物浓度的测定的稳定剂和捕获配体 |
Country Status (9)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7897352B2 (zh) |
EP (1) | EP2047270B1 (zh) |
KR (1) | KR101395954B1 (zh) |
CN (1) | CN101512342B (zh) |
CA (1) | CA2659387C (zh) |
ES (1) | ES2427997T3 (zh) |
HK (1) | HK1127642A1 (zh) |
PT (1) | PT2047270E (zh) |
WO (1) | WO2008039266A2 (zh) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7816090B2 (en) * | 2007-01-10 | 2010-10-19 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Multiple immunochemistry assays on an element |
US20120015350A1 (en) * | 2009-03-10 | 2012-01-19 | Northwestern University | Lateral flow strip and uses thereof |
EP2372365A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-05 | Future Diagnostics B.V. | Direct immunoassay for vitamin D |
JP6138053B2 (ja) | 2010-12-28 | 2017-05-31 | フューチャー・ダイアグノスティックス・ベーフェー | ビタミンdのための放出試薬 |
AU2017209523A1 (en) | 2016-01-22 | 2018-08-09 | Affimedix, Inc. | Device for detection of vitamin D metabolites |
WO2018074467A1 (ja) * | 2016-10-19 | 2018-04-26 | 栄研化学株式会社 | 免疫学的測定方法および測定試薬 |
WO2019060607A1 (en) * | 2017-09-20 | 2019-03-28 | Quanterix Corporation | METHODS AND SYSTEMS FOR DETECTING MOLECULES OF ANALYTES |
CN110988367B (zh) * | 2019-11-18 | 2024-02-09 | 迈克生物股份有限公司 | 一种贮存剂、用于检测lh的校准品及检测试剂盒 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1263267A (zh) * | 1999-02-08 | 2000-08-16 | 刘剑雄 | 抗TORCH-IgM型ELISA检测试剂盒 |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0061541A1 (en) * | 1981-03-27 | 1982-10-06 | Biospecia Limited | Immunological analysis and a biochemical agent therefor |
US4751190A (en) * | 1985-07-22 | 1988-06-14 | Abbott Laboratories | Fluorescence polarization immunoassay and reagents for use therein |
US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
AU670108B2 (en) * | 1992-09-11 | 1996-07-04 | Becton Dickinson & Company | Improved antibodies to plasmodium falciparum |
US5627080A (en) | 1994-07-29 | 1997-05-06 | Beckman Instruments, Inc. | Detergent-facilitated immunoassay for the rapid and quantitative assay of pharmacological agents |
US6342389B1 (en) * | 1995-04-10 | 2002-01-29 | Roger S. Cubicciotti | Modified phycobilisomes and uses therefore |
JP3169383B2 (ja) * | 1996-01-16 | 2001-05-21 | ルミゲン インク | ホスファターゼ酵素で化学発光を生成させるための化合物、組成物および方法 |
US5770380A (en) * | 1996-09-13 | 1998-06-23 | University Of Pittsburgh | Synthetic antibody mimics--multiple peptide loops attached to a molecular scaffold |
JP2001041958A (ja) * | 1999-07-28 | 2001-02-16 | Takeda Chem Ind Ltd | 環境汚染物質の免疫学的測定分析法 |
WO2003062824A1 (en) * | 2002-01-23 | 2003-07-31 | Boditech Inc. | Lateral flow quantitative assay method and strip and laser-induced fluoerescence detection device therefor |
WO2003087783A1 (en) * | 2002-04-05 | 2003-10-23 | Powerzyme, Inc. | Analyte sensor |
CN1731982A (zh) * | 2002-10-25 | 2006-02-08 | 西摩·J·库尔茨 | 治疗胰岛素耐受性、成人发作型糖尿病以及代谢综合症x的方法 |
US7713440B2 (en) * | 2003-10-08 | 2010-05-11 | Lyotropic Therapeutics, Inc. | Stabilized uncoated particles of reversed liquid crystalline phase materials |
WO2005052644A2 (en) * | 2003-11-21 | 2005-06-09 | Perkinelmer Las, Inc. | Optical device integrated with well |
-
2007
- 2007-07-20 EP EP07861331.2A patent/EP2047270B1/en not_active Not-in-force
- 2007-07-20 WO PCT/US2007/016420 patent/WO2008039266A2/en active Application Filing
- 2007-07-20 ES ES07861331T patent/ES2427997T3/es active Active
- 2007-07-20 PT PT78613312T patent/PT2047270E/pt unknown
- 2007-07-20 KR KR1020097004131A patent/KR101395954B1/ko active IP Right Grant
- 2007-07-20 CN CN200780032399.XA patent/CN101512342B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-20 CA CA2659387A patent/CA2659387C/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-07-20 US US11/878,121 patent/US7897352B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-08-20 HK HK09107678.5A patent/HK1127642A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-12-10 US US12/964,940 patent/US8450073B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1263267A (zh) * | 1999-02-08 | 2000-08-16 | 刘剑雄 | 抗TORCH-IgM型ELISA检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
CdTe纳米晶标记抗体荧光免疫分析方法的研究;李晓舟 等;《分析实验室》;20051031;第24卷;第107页 * |
磁珠分离酶联免疫测定法在检测人血清肌红蛋白中的应用;郑佐娅 等;《检验医学》;20051231;第20卷(第1期);第17-19页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
PT2047270E (pt) | 2013-10-17 |
US8450073B2 (en) | 2013-05-28 |
US20080182341A1 (en) | 2008-07-31 |
EP2047270A4 (en) | 2009-09-02 |
WO2008039266A2 (en) | 2008-04-03 |
EP2047270A2 (en) | 2009-04-15 |
US20110091909A1 (en) | 2011-04-21 |
EP2047270B1 (en) | 2013-09-04 |
ES2427997T3 (es) | 2013-11-05 |
US7897352B2 (en) | 2011-03-01 |
WO2008039266A3 (en) | 2008-06-19 |
CA2659387C (en) | 2015-06-16 |
CA2659387A1 (en) | 2008-04-03 |
HK1127642A1 (en) | 2009-10-02 |
CN101512342A (zh) | 2009-08-19 |
KR20090035025A (ko) | 2009-04-08 |
KR101395954B1 (ko) | 2014-05-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101512342B (zh) | 用于测量分析物浓度的测定的稳定剂和捕获配体 | |
US9383354B2 (en) | Anti-antibody reagent | |
US10197581B2 (en) | Vitamin D assays | |
US20160103141A1 (en) | Compositions and methods for detecting vitamin d | |
JP2010518369A (ja) | 血清あるいは血漿中のビタミンdの直接決定 | |
JPH06507021A (ja) | 多重リガンドを同時検出する新規接合体及び検定法 | |
BRPI1008760B1 (pt) | método de ensaio e kit para um analito em uma amostra e sistema para realizar o método de ensaio | |
JP2021119355A (ja) | ビタミンdをアッセイするための方法および組成物 | |
CN102998467A (zh) | β人绒毛膜促性腺激素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法 | |
CN111175494A (zh) | 一种甲状腺球蛋白抗体检测试剂盒及其使用方法 | |
Lam et al. | Apparent hyperthyroidism caused by biotin-like interference from IgM anti-streptavidin antibodies | |
JPWO1999050663A6 (ja) | IgA腎症の検査法 | |
EP3234104B1 (en) | Accurate assay measurement of hydrophobic haptenic analytes | |
WO2017039574A1 (en) | Vitamin d assays | |
CN102628871B (zh) | 甲状腺激素固定载体的液体试剂及其用途 | |
EP2742352B1 (en) | Detection of sex steroids | |
JP4455688B2 (ja) | 分析物遊離段階を可能にするアッセイ用表面 | |
JPH07121235B2 (ja) | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット | |
JPH0889291A (ja) | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット | |
JPH06324036A (ja) | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット | |
Mills-Shafer | Development of an immunoassay to detect insulin in serum and buffer matrices using ORIGEN® electrochemiluminescent technology | |
JP2001330611A (ja) | 免疫測定試薬 | |
JPH06284900A (ja) | 過酸化物分解性物質測定用指示薬および試薬キット | |
JP2002005936A (ja) | 酵素免疫測定法による測定試薬及び測定方法 | |
JPS6071958A (ja) | 酵素免疫測定法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170714 Termination date: 20200720 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |